專利名稱：用于在治療中增加凋亡的有絲分裂抑制劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及用于向具有處于有絲分裂抑制劑誘導(dǎo)的有絲分裂停滯(mitotic arrest)狀態(tài)的病原細胞(pathogenic cells)的患者施用以增加所述細胞的凋亡的有絲分裂抑制劑。
背景技術(shù)：
有絲分裂抑制劑(inhibitor of mitosis)(也稱作有絲分裂抑制劑(mitotic inhibitor)或抗有絲分裂劑(anti-mitotics))對于疾病治療是重要的治療方法，且其用于治療癌癥，以及抗痛風(fēng)和抗真菌劑，并治療再狹窄。這些有絲分裂抑制劑治療干擾有絲分裂，從而使得細菌不再分裂。在癌癥中，有絲分裂抑制劑可停止癌性生長，并導(dǎo)致凋亡，或脫離有絲分裂繼以細胞死亡。已知許多有絲分裂抑制劑。一些有絲分裂抑制劑為抗微管蛋白劑?？刮⒐艿鞍讋┳饔糜谖⒐艿鞍祝錇橛薪z分裂所必需的蛋白。抗微管蛋白劑包括長春花生物堿類、紫杉烷類和埃坡霉素類(印othilones)。也調(diào)查了非微管蛋白靶向性有絲分裂抑制劑作為癌癥治療法。不同的有絲分裂抑制劑影響細胞周期的不同部分，并有時影響有絲分裂之外的其他功能。舉例而言，抗微管蛋白劑可在增殖細胞和在終末分化細胞中影響非有絲分裂的細胞骨架功能。已將外周神經(jīng)毒性與微管蛋白劑相關(guān)聯(lián)。因此不同的有絲分裂抑制劑可具有不同的毒性。長春花生物堿類抑制微管聚合，由此抑制有絲分裂。長春花生物堿類包括長春堿、長春新堿、長春地辛和長春瑞濱。長春堿已用于治療某些種類的癌癥，包括霍杰金淋巴瘤(Hodgkin’ s lymphoma)、非小細胞肺癌、乳腺癌和睪丸癌。長春新堿已用于治療某些種類的癌癥，包括淋巴瘤、乳腺癌、肺癌和急性淋巴母細胞性白血病(acute lymphoblastic leukemia)。長春堿和長春新堿還用于一些主要實體瘤的姑息治療方案 (參見 Wood, Kenneth W.等"Past and future of the mitotic spindle as an oncology treatment.，，Current Opinion in PharmacoloRY. Vol. 1, Issue 4 (August 1,2001) PP. 370-377)。長春地辛已用于治療某些種類的癌癥，包括白血病、淋巴瘤、黑素瘤、乳腺癌和肺癌。長春瑞濱已用于治療某些種類的癌癥，包括乳腺癌和非小細胞肺癌。紫杉烷類穩(wěn)定化微管，由此滅活細胞的微管功能，并抑制細胞分裂。紫杉烷類包括紫杉醇(包括Abmxane )和多西紫杉醇(docetaxel)。紫杉醇用于治療某些種類的癌癥，包括肺癌、卵巢癌、乳腺癌和晚期形式的卡波西肉瘤。多西紫杉醇用于治療某些種類的癌癥，包括乳腺癌、卵巢癌和非小細胞肺癌。還在開發(fā)新的紫杉烷類，例如BMS275183(參 JAL 2006EJC Poster :Broker, L. Ε.，et al. “The novel oral taxanes BMS275183 has a favorable activity and toxicity profile in a twice weekly schedule ；Preliminary findings from an extended phase I trial. ” EJC Supp1. 2006Abstract 644,p. 194)。
此外，秋水仙堿是作為抗微管蛋白劑起作用的有絲分裂抑制劑。秋水仙堿通過抑制微管聚合來抑制有絲分裂。秋水仙堿用于治療痛風(fēng)。埃坡霉素類為一類在紫杉醇抗性癌細胞系中有活性的微管穩(wěn)定化化療劑(參見 Denduluri, Neelima 等"Phase II trial of ixabepilone, an epothilones B analog, given daily for three days every three weeks, in metastatic breast cancer. ”Invest. New Drugs. 25 (August 25,2006) :pp. 63-67)。埃坡霉素類包括埃坡霉素 Α、埃坡霉素B、埃坡霉素D和埃坡霉素類似物伊沙匹隆(ixab印ilone)。伊沙匹隆已經(jīng)批準用于治療不再響應(yīng)現(xiàn)有的化療的攻擊性轉(zhuǎn)移性或局部晚期的乳腺癌。多拉司他汀(dolastatin)和多拉司他汀類似物為有絲分裂抑制劑。這些化合物包括多拉司他汀10、多拉司他汀15、synthadotin (或者SYN-D或ILX651 ；參見2004 ASCO Abstract No. 3068, Hammond,L. Α. ,et al. "Phase (Ph) I evaluation of the dolastatin analogue synthadotin(SYN-D ；ILX651) :Pooled data analysis of three alternate schedules in patients (pts)with advanced solid tumors.，，J. Clin. OncoloRY. 2004 Suppl. Abstract 3068 14s (2004))、LU103793 和西馬多丁(cemadotin)。Aurora激酶,包括Aurora A、Aurora B禾口 Aurora C,為在有絲分裂中起作用的絲氨酸/蘇氨酸激酶。已靶向Aurora激酶作為有絲分裂抑制劑。AuroraA在有絲分裂前期起作用，并為中心體正確起作用所需。Aurora B在有絲分裂紡錘體對中心體的附接中起作用。 Aurora激酶抑制劑包括似0-1152丄丫0116、45-703569(或1 -763) ,MLN-8054.PHA-739358, AT-9283、SNS-314、AZD-1152-HQPA、MLN-8237、KW-2449、PF-3814735、ENMD_2076(或 ENMD-981693)、PHA-739385、MK-0457 (或 VX-680)和 MK_5108(或 VX-689)。對于更多，參見 Gautschi, Oliver 等"Aurora Kinases as Anticancer Drug Targets.，，Clin· Cancer Res.14(6)(March 15,2008) :pp.1639-48。 Polo 樣激酶類(“Plk”)，包括 polo 樣激酶 1 ( "Plkl ”) ,polo 樣激酶 2 ( “Plk2”)、 polo樣激酶3( “Plk3”)和polo樣激酶4( “Plk4”)，參與有絲分裂過程中有絲分裂紡錘體的形成和變化以及CDK/細胞周期蛋白復(fù)合物的激活。已靶向polo樣激酶類作為有絲分裂抑制劑。polo樣激酶抑制劑包括0N-01910Na (或0N_1910Na或0nc_01910)、BI_2536 (參見 Steegmaier, Martin 等“Bi 2536, aPotent and Selective Inhibitor of Polo-like Kinase 1,Inhibits Tumor Growth In Vivo. ”Current Biology,17(Febrnary 20,2007) pp. 316-322)和 GSK-461364(或 GSK-461364A)。驅(qū)動蛋白為一類動力蛋白。有絲分裂驅(qū)動蛋白(mitotic kinesin)為有絲分裂紡錘體裝配和起作用所必需的酶。在有絲分裂的所有階段，有絲分裂驅(qū)動蛋白起至關(guān)重要的作用。在有絲分裂過程中，驅(qū)動蛋白將微管組織為雙極結(jié)構(gòu)，其為有絲分裂紡錘體。有絲分裂驅(qū)動蛋白的抑制導(dǎo)致有絲分裂紡錘體的畸形或功能障礙，經(jīng)常導(dǎo)致細胞周期停滯和凋亡 (細胞死亡)。經(jīng)鑒定的有絲分裂驅(qū)動蛋白包括驅(qū)動蛋白紡錘體蛋白(“KSP”)。在有絲分裂過程中，KSP與有絲分裂紡錘體的微管蛋白相聯(lián)系。KSP的抑制阻止了前中期過程中紡錘體極的分離，導(dǎo)致單極紡錘體，其造成有絲分裂停滯與程序性細胞死亡的誘導(dǎo)。人KSP也稱為 HsEg5。美國專利申請公開2006/0100161號描述了包括下述的化合物2_(3_氨基丙基)-5-(3-氟苯基)-N42-甲氧乙基)-N-甲基-2-苯基-1，3，4-噻二唑-3QH)-甲酉先胺(2-(3-aminopropyl)-5-(3-fIuoropheny1)-N-(2-methoxyethyl)-N-methyl-2-p henyl-1, 3,4-thiadiazole-3 (2H) -carboxamide)(下文中稱為“化合物 1”)、2-(3_ 氨基丙基)-5-(3-氟苯基)-N-甲氧基-N-甲基-2-苯基-1，3，4-噻二唑-3QH)-甲酉先胺(2- (3-aminopropyl)-5-(3-fIuorophenyl)-N-methoxy-N-methyl-2-phenyl-1,3,4-thia diazole-3 (2H) -carboxamide)(下文中稱為“化合物 2”)、2_(3_ 氨基丙基)-5- ，5-二氟苯基)-N-甲氧基-N-甲基-2-苯基-1，3，4-噻二唑-3QH)-甲酰胺(2-(3-aminopropyl)-5-(2,5-difIuoropheny1)-N-methoxy-N-methy1-2-pheny1-1, 3，4-thiadiazole-3 (2H) -carboxamide)(下文中稱為“化合物 3”)、(S) -2- (3-氨基丙基)-5- ，5-二氟苯基)-N-甲氧基-N-甲基-2-苯基-1，3，4-噻二唑-3QH)-甲酰胺((S)-2-(3-aminopropyl)-5-(2，5-difIuoropheny1)-N-methoxy-N-methyl-2-phenyl -1，3，4-thiadiazole-3 (2H) -carboxamide)(下文中稱為“化合物 4”)、(R) -2- (3-氨基丙基)-5- ，5-二氟苯基)-N-甲氧基-N-甲基-2-苯基-1，3，4-噻二唑-3QH)-甲酰胺((R)-2-(3-aminopropyl)-5-(2，5-difIuoropheny1)-N-methoxy-N-methy1-2-pheny 1-1, 3,4-thiadiazole-3 (2H) -carboxamide)(下文中稱為“化合物 5”)，和 2-(3-氨基丙基)-5-O，5- 二氟苯基)-N-羥基-N-甲基-2-苯基-1，3，4-噻二唑-3 -甲酰胺 (2-(3-aminopropyl)-5-(2,5-difIuoropheny1)-N-hydroxy-N-methyl-2-phenyl-l,3, 4-thiadiazole-3 (2H) -carboxamide)(下文中稱為“化合物 6”)?；衔?1、2、3、4、5 和 6 (統(tǒng)稱為“‘161KSP抑制劑”)為KSP抑制劑。KSP 抑制劑包括伊斯平斯(ispinesib)(或 SB-715992 或 CK-0238273 ；參見 2008 ASCO Poster :“A Phase I-II Open-Label Trial of Ispinesib on an Alternating Dosing Schedule in Chemotherapy- Naive Patients with Locally Advanced or Metastatic Breast Cancer (MBC). www, cytokinetics. com/pdf/ASC02008A. pdf)、 ‘161 KSP 抑制劑、AZD-4877、CRx-026、SB-743921 (SB-921)、MK-0731、EMD_534085 和 ARQ 621。已在廣泛范圍的腫瘤類型中測試了伊斯平斯，并正在人臨床試驗中進行測試。在其他在有絲分裂過程中起作用的動力蛋白中，還描述了中心體相關(guān)蛋白E( “CENP-E”)的小分子抑制劑。CENP-E是動力蛋白(參見Chan，G. K. Τ.等 "Characterization of the Kinetochore Binding Domain of CENP-E Reveals Interactions with the Kinetochore Proteins CENP-F and hBUBRl. ”J. Cell Biology. Vol. 143，No. 1 (October 5，1998) :pp. 49-6 ，并可歸類為一類有絲分裂驅(qū)動蛋白。CENP-E 抑制劑包括 GSK-295 (或 GSK-923^5)。已測試了許多有絲分裂抑制劑作為治療劑用于治療疾病。一些有絲分裂抑制劑以一日日程施用，為每周、每兩周(biweekly)、每月，并包括M小時輸注(infusion)。僅施用一劑，所述有絲分裂抑制劑可能無法保持細胞有絲分裂停滯足夠久以使細胞進入凋亡或脫離有絲分裂并進入細胞死亡。同樣，一些有絲分裂抑制劑每周施用兩次、每周施用三次或每月施用三次。在較長時間期間施用幾劑常常減少患者能夠耐受的劑量，且單獨劑量可能無法達到生物學(xué)上有效的水平
發(fā)明內(nèi)容
令人意想不到的是，發(fā)現(xiàn)在對具有病原細胞的哺乳動物施用第一劑有絲分裂抑制劑，所述細胞進入有絲分裂停滯之后，在所述第一劑之后一或兩日施用第二劑有絲分裂抑制劑增加凋亡或從有絲分裂脫離繼以細胞死亡。在一個方面，本發(fā)明涉及有絲分裂抑制劑，其用于向具有處于有絲分裂抑制劑誘導(dǎo)的有絲分裂停滯狀態(tài)的病原細胞的患者施用以增加所述細胞的凋亡。本發(fā)明的另一個方面提供‘161KSP抑制劑，其用于向具有處于‘161 KSP抑制劑誘導(dǎo)的有絲分裂停滯狀態(tài)的病原細胞的患者施用以增加所述細胞的凋亡。附圖簡述

圖1顯示凋亡清洗(washout)實驗。圖2顯示體外HT-29細胞中胱天蛋白酶3/7經(jīng)時活性(activity over time)。圖3顯示體外RPMI 8226細胞中胱天蛋白酶3/7經(jīng)時活性。圖4顯示對于兩個不同給藥方案的多個時間點裸鼠中皮下HT-四異種移植物中的單極紡錘體的量。圖5顯示對于兩個不同給藥方案的多個時間點裸鼠中皮下HT-四異種移植物中的單極紡錘體的量。圖6顯示對于兩個不同給藥方案的多個時間點裸鼠中皮下HT-四異種移植物中的凋亡細胞的百分比。圖7顯示對于兩個不同給藥方案的多個時間點裸鼠中皮下HT-四異種移植物中的凋亡細胞的百分比。圖8顯示對于多個給藥量在M小時和48小時裸鼠中皮下HT-四異種移植物中具有單極紡錘體和雙極紡錘體的細胞的百分比。圖9顯示對于多種給藥量在M小時和48小時裸鼠中皮下HT-四異種移植物中凋亡細胞的百分比。圖10顯示用皮下HT-四異種移植物在裸鼠中進行的腫瘤生長抑制(“TGI”)實驗。圖11顯示用皮下HT-四異種移植物在裸鼠中進行的TGI實驗。圖12顯示用皮下HT-四異種移植物在裸鼠中進行的TGI實驗
圖13顯示用皮下HT-四異種移植物在裸鼠中進行的TGI實驗。圖14顯示用皮下HT-四異種移植物在裸鼠中進行的TGI實驗。圖15顯示用皮下HT-四異種移植物在裸鼠中進行的TGI實驗。圖16顯示用皮下HT-四異種移植物在裸鼠中進行的TGI實驗。圖17顯示對于不同給藥方案在多個時間點在SCID-beige小鼠中皮下RPMI 8226 異種移植物中單極紡錘體的百分比。圖18顯示對于不同給藥方案在多個時間點在SCID-beige小鼠中皮下RPMI 8226 異種移植物中凋亡細胞的百分比。圖19顯示對于不同給藥方案在多個時間點在SCID-beige小鼠中皮下RPMI 8226 異種移植物中雙極紡錘體的百分比。發(fā)明詳述現(xiàn)在將詳細涉及本發(fā)明的某些實施方案。盡管本發(fā)明會與列舉的實施方案一同描
6述，應(yīng)理解的是其并非旨在將本發(fā)明限制為這些實施方案。相反，本發(fā)明旨在涵蓋所有的替代、修飾和等同物，其可如權(quán)利要求書所限定的包含于本發(fā)明的保護范圍內(nèi)。本領(lǐng)域技術(shù)人員會發(fā)現(xiàn)許多方法和物質(zhì)類似或等同于本文描述的那些，其可用于實踐本發(fā)明。本發(fā)明決不限于描述的方法和物質(zhì)。當(dāng)一篇或多篇并入的文獻和類似材料與本申請不同或相悖(包括但不限于定義的術(shù)語、術(shù)語使用、描述的技術(shù)等)時，以本申請為準。術(shù)語“癌”和“癌性的”指或描述哺乳動物中通常以不受調(diào)節(jié)的細胞生長為特征的生理狀態(tài)?！澳[瘤”包含一種或多種癌細胞。癌的實例包括但不限于癌瘤(carcinoma)、 淋巴瘤、母細胞瘤、肉瘤和白血病或淋巴惡性腫瘤。此類癌的更具體的實例包括鱗狀細胞癌 (例如，上皮鱗狀細胞癌)，肺癌包括小細胞肺癌、非小細胞肺癌(“NSCLC”)、肺腺癌和肺鱗狀細胞癌，腹膜癌，肝細胞癌(h印atocellular cancer)，胃癌包括胃腸癌，胰腺癌，膠質(zhì)母細胞瘤，宮頸癌，卵巢癌，肝癌(liver cancer)，膀胱癌，肝細胞瘤(hepatoma)，乳腺癌，結(jié)腸癌，直腸癌，結(jié)腸直腸癌，子宮內(nèi)膜或子宮癌，唾液腺癌，腎癌，前列腺癌，外陰癌，甲狀腺癌， 肝癌(h印atic carcinoma)，肛門癌，陰莖癌，皮膚癌包括黑素瘤，頭頸癌，多發(fā)性骨髓瘤和急性髓性白血病。術(shù)語“治療/ 處理(treat or treatment) ”指治療性、預(yù)防性(prophylactic)、姑息性或預(yù)防性(preventative)方法。就本發(fā)明而言，有益的或需要的臨床結(jié)果上包括但不限于癥狀的減輕、疾病程度的減少、疾病狀態(tài)的穩(wěn)定化(即不再惡化)、疾病進行的延遲和減慢、疾病狀態(tài)的緩和/或減輕以及緩解(無論部分或完全)，無論其是否能檢測。“治療/ 處理”還可意指與未接受治療/處理時預(yù)計的存活相比延長的存活。那些需要治療/處理的包括那些已經(jīng)罹患病狀或病癥的，以及那些易于罹患所述病狀或病癥的，或者那些需預(yù)防病狀或病癥的。在治療中用于增加凋亡的有絲分裂抑制劑本發(fā)明提供用于向具有處于有絲分裂抑制劑誘導(dǎo)的有絲分裂停滯狀態(tài)的病原細胞的患者施用以增加所述細胞的細胞凋亡的有絲分裂抑制劑。向細胞施用有絲分裂抑制劑將這些細胞置于有絲分裂停滯。然而，有絲分裂停滯并不必然導(dǎo)致細胞凋亡或?qū)е驴鼓[瘤效力(參見，例如Sii，Jue等“Cell Type Variation in Responses to Antimitotic Drugs that Target Microtubules and Kinesin-5.，，Cancer Research. 68(9) (May 1,2008) :pp. 3269—76 ；and 2002 AACR Poster "A Pharmacodynamic marker of mitosis demonstrates the anti-mitotic activity of SB-715992,an inhibitor of the mitotic kinesin KSP. "www. cytokinetics. com/pdf/AACR_2002_Poster_1336. pdf)。已發(fā)現(xiàn)細胞在細胞凋亡峰值之前必須維持停滯一段時間(參見圖1)。凋亡所需的這一段時間在不同細胞類型和腫瘤類型之間不同(參見圖2和幻。此外，施用兩劑而非一劑增加了生物學(xué)效果的持續(xù)時間(參見圖4和幻，其在有絲分裂抑制劑的情況下增加了凋亡的持續(xù)時間和程度(參見圖6和7)。因此，必需使用有絲分裂抑制劑有效地維持細胞處于停滯持續(xù)一段適當(dāng)?shù)臅r間以增加凋亡。向細胞施用有絲分裂抑制劑干擾有絲分裂。舉例而言，施用KSP抑制劑增加單極紡錘體的量。然而，必須施用至少一定量的抑制劑以獲得所需生物應(yīng)答(參見圖8)。因此， 有絲分裂抑制劑的施用必須達到抑制劑在生物學(xué)上的有效劑量才為有效的。KSP抑制劑的生物學(xué)上有效劑量為導(dǎo)致停滯的、單極紡錘體出現(xiàn)的抑制劑劑量。這可通過免疫組織化學(xué)技術(shù)觀察(參見圖4、5和8)。其他有絲分裂抑制劑的生物學(xué)上有效劑量會導(dǎo)致與其靶標分布一致的有絲分裂畸變。如果有絲分裂抑制劑的施用無法達到生物學(xué)上的有效劑量，則不會發(fā)生合適的生物應(yīng)答。同樣，如果所述抑制劑的施用無法使細胞維持停滯足夠久，所述細胞可能不會進入凋亡。因此，使用有絲分裂抑制劑有效地增加凋亡需要細胞凋亡抑制劑至少以生物學(xué)上的有效劑量施用以獲得所欲的生物學(xué)效果(即有絲分裂停滯)，以及，需要給藥足夠長的一段時間以保持細胞停滯并誘導(dǎo)凋亡(參見圖4-9和17-19)。已發(fā)現(xiàn)將有絲分裂抑制劑進行劑量分割分為兩日施用可比在一日中給予相同的總劑量更為有效(參見圖16)。對于其中細胞在有絲分裂阻斷之后迅速地進入凋亡的腫瘤(參見圖3)，有絲分裂停滯(參見圖17)或凋亡(參見圖18)可不直接與劑量分割方案中抑制腫瘤生長效力增強相關(guān)(參見圖16)。在此類情況下，觀察到較少細胞處于有絲分裂停滯和凋亡可反映迅速的細胞死亡，從而使得其在腫瘤中不再能檢測得到。然而，表明有絲分裂中處于正常細胞周期的具有雙極紡錘體的細胞量可與增強的效力負相關(guān)(參見圖19)。在此類情況下，具有雙極紡錘體的細胞較少表明更加完全的有絲分裂阻斷，其中更少細胞逃離阻斷并重新進入細胞周期。本發(fā)明的一個實施方案提供有絲分裂抑制劑，其用于向具有處于有絲分裂抑制劑誘導(dǎo)的有絲分裂停滯狀態(tài)的病原細胞的患者施用以增加所述細胞的凋亡。本發(fā)明的另一個實施方案提供‘161 KSP抑制劑，其用于向具有處于‘161 KSP抑制劑誘導(dǎo)的有絲分裂停滯狀態(tài)的病原細胞的患者施用以增加所述細胞的凋亡。本發(fā)明涉及施用與為了誘導(dǎo)有絲分裂停滯而施用的有絲分裂抑制劑相同的有絲分裂抑制劑以增加凋亡。本發(fā)明可用于治療由細胞分裂造成或通過抑制有絲分裂治療的病原細胞。有絲分裂抑制劑可用于治療多種疾病，包括過度增殖疾病和痛風(fēng)。過度增殖疾病包括癌、自身免疫病、關(guān)節(jié)炎、移植排斥、炎性腸病或醫(yī)療方法之后誘導(dǎo)的增殖。在某些實施方案中，本發(fā)明使得病原性癌細胞的凋亡增加。更具體而言，所述病原性癌細胞包括但不限于軟組織癌肉瘤(血管肉瘤、纖維肉瘤、橫紋肌肉瘤、脂肪肉瘤)、粘液瘤、橫紋肌瘤、纖維瘤、脂肪瘤和畸胎瘤；肺支氣管癌(鱗狀細胞、未分化的小細胞、未分化的大細胞、腺癌)、肺泡(細支氣管)癌、支氣管腺瘤、肉瘤、淋巴瘤、軟骨錯構(gòu)瘤(chondromatous hamartoma)、間皮瘤；胃腸食道(鱗狀細胞癌、腺癌、平滑肌肉瘤、 淋巴瘤)、胃(癌瘤、淋巴瘤、平滑肌肉瘤)、胰腺(導(dǎo)管腺癌、胰島素瘤、胰高血糖素瘤、 胃泌素瘤、類癌瘤、舒血管腸肽瘤(vipoma))、小腸(腺癌、淋巴瘤、類癌瘤、卡波西肉瘤 (Karposi' s sarcoma)、平滑肌瘤、血管瘤、脂肪瘤、神經(jīng)纖維瘤、纖維瘤)、大腸(腺癌、管狀腺瘤、絨毛狀腺瘤、錯構(gòu)瘤、平滑肌瘤)；泌尿生殖道腎(腺癌、維耳姆斯瘤(Wilm' s tumor)[腎胚細胞瘤]、淋巴瘤、白血病)、膀胱和尿道(鱗狀細胞癌、移行細胞癌、腺癌)、 前列腺(腺癌、肉瘤)、睪丸(精原細胞瘤、畸胎瘤、胚胎性癌、畸胎癌、絨毛膜癌、肉瘤、間質(zhì)細胞癌、纖維瘤、纖維腺瘤、腺瘤樣瘤、脂肪瘤)；肝臟肝癌(肝細胞癌)、膽管癌、肝母細胞瘤、血管肉瘤、肝細胞腺瘤、血管瘤；骨成骨肉瘤(骨肉瘤)、纖維肉瘤、惡性纖維組織細胞瘤、軟骨肉瘤、尤因肉瘤、惡性淋巴瘤(網(wǎng)狀細胞肉瘤)、多發(fā)性骨髓瘤、惡性巨細胞瘤、骨軟骨瘤(osteochronfroma)(骨軟骨性外生骨疣)、良性軟骨瘤、成軟骨細胞瘤、軟骨肌瘤樣纖維瘤、骨樣骨瘤和巨細胞瘤；神經(jīng)系統(tǒng)頭骨(骨瘤、血管瘤、肉芽腫、黃色瘤、畸形性骨炎)、 腦脊膜(腦脊膜瘤、腦脊膜肉瘤(meningiosarcoma)、神經(jīng)膠質(zhì)過多)、腦(星形細胞瘤、 成神經(jīng)管細胞瘤、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、室管膜瘤、生殖細胞瘤[松果體瘤]、多形性成膠質(zhì)細胞瘤 (glioblastoma multiform)、少突神經(jīng)膠質(zhì)瘤、神經(jīng)鞘瘤、視網(wǎng)膜母細胞瘤、先天性腫瘤)、 脊髓神經(jīng)纖維瘤、腦膜瘤、膠質(zhì)瘤、肉瘤)；婦科子宮(子宮內(nèi)膜癌)、宮頸(宮頸癌、腫瘤前宮頸非典型增生)、卵巢(卵巢癌[漿液性囊腺癌、粘液性囊腺癌、未分類癌]、粒層泡膜細胞瘤(granulosa—thecal cell tumor)、塞—萊細胞瘤(Sertoli-Leydig cell tumor)、無性細胞瘤、惡性畸胎瘤)、外陰(鱗狀細胞癌、上皮內(nèi)癌、腺癌、纖維肉瘤、黑素瘤)、陰道(透明細胞癌、鱗狀細胞癌、葡萄狀肉瘤(胚胎性橫紋肌肉瘤)、輸卵管(癌)；血液血液和骨髓(髓細胞性白血病[急性和慢性]、急性成淋巴細胞性白血病、慢性淋巴細胞性白血病、骨髓組織增生性疾病、多發(fā)性骨髓瘤、骨髓增生異常綜合征)、霍奇金病、非霍奇金淋巴瘤[惡性淋巴瘤]；皮膚惡性黑素瘤、基底細胞癌、鱗狀細胞癌、卡波西肉瘤、胎塊發(fā)育不良性痣 (moles dysplastic nevi)、脂肪瘤、血管瘤、皮膚纖維瘤、瘢痕疙瘩、銀屑?。缓湍I上腺成神經(jīng)細胞瘤。本文中提供的術(shù)語“癌細胞”包括遭受任一上述鑒定的病狀的細胞。在某些實施方案中，本發(fā)明可用于增加病原性癌細胞的凋亡，其中所述病原性癌細胞為實體瘤細胞。所述實體瘤細胞包括皮膚、乳房、腦、宮頸癌、睪丸癌細胞等的腫瘤細胞。在某些實施方案中，所述實體瘤選自乳腺癌、結(jié)腸直腸癌、非小細胞肺癌、胰腺癌、膀胱癌、唾液腺癌(腺樣囊性)、食道癌、間皮瘤癌和混合性小細胞肺癌/非小細胞肺癌。在某些實施方案中，本發(fā)明可用于增加病原性癌細胞的凋亡，其中所述病原性癌細胞為血液腫瘤細胞。所述血液腫瘤細胞包括淋巴瘤、白血病、多發(fā)性骨髓瘤細胞等。在某些實施方案中，本發(fā)明可用于增加病原性癌細胞的細胞凋亡，其中所述病原性癌細胞選自淋巴瘤、白血病和多發(fā)性骨髓瘤細胞。在另一個實施方案中，本發(fā)明可用于增加病原性癌細胞的凋亡，其中所述病原性癌細胞為晚期髓性白血病或復(fù)發(fā)的或頑固的多發(fā)性骨髓瘤細胞。在另一個實施方案中，本發(fā)明可用于增加病原性癌細胞的凋亡，其中所述病原性癌細胞為復(fù)發(fā)的或頑固的多發(fā)性骨髓瘤細胞。當(dāng)施用有絲分裂抑制劑尋求凋亡增加時，存在許多種變量。特別是對于有絲分裂抑制劑，其施用需要持續(xù)一段足夠長的時間以及以充足的暴露水平才在生物學(xué)上有效。為了在病原細胞中誘導(dǎo)有絲分裂停滯，施用有絲分裂抑制劑的第一次給藥。該第一次給藥認為在第一日進行。然后當(dāng)在第二日或第三日提供所述有絲分裂抑制劑的第二次給藥時，可發(fā)生凋亡的增加?；蛘?，第二劑在第一劑的M至48小時之內(nèi)進行。本發(fā)明方法的該方面允許病原細胞的凋亡增加，因為所述抑制劑以高至足夠達到其生物學(xué)上有效劑量的量給藥以獲得所欲的生物學(xué)效果，即，使所述細胞維持有絲分裂停滯，以及使所述有絲分裂停滯維持足夠久以促進凋亡或脫離有絲分裂，其導(dǎo)致細胞死亡。所述第二劑的時機無需精確到第一劑之后的M至48小時。這僅為稱第二劑應(yīng)在第一劑之后一日或兩日時施用的方便方式。因此，第二劑在第一劑之后大約M至48小時施用。該第二劑可在第一劑之后12至60小時施用。當(dāng)施用第二劑的有絲分裂抑制劑時，連續(xù)兩日(back to back days)施用對于患者更為便利。優(yōu)選使患者具有便利的給藥日程以增加患者對治療方法的順應(yīng)性。對于通過靜脈內(nèi)注射施用于患者的治療而言這尤其正確，因為額外的劑量可能需要對醫(yī)院或醫(yī)師的額外訪問以接受注射。已知許多類型的有絲分裂抑制劑，包括長春花生物堿類、紫杉烷類、埃坡霉素類、 多拉司他汀和多拉司他汀類似物、Aurora激酶、polo樣激酶和有絲分裂驅(qū)動蛋白抑制劑。所述有絲分裂抑制劑可選自下組長春花生物堿類、紫杉烷類、埃坡霉素類、多拉司他汀和多拉司他汀類似物、Aurora激酶抑制劑、polo樣激酶抑制劑和有絲分裂驅(qū)動蛋白抑制劑。所述有絲分裂抑制劑可為有絲分裂驅(qū)動蛋白抑制劑。所述有絲分裂驅(qū)動蛋白抑制劑可為CENP-E抑制劑或KSP抑制劑。所述有絲分裂抑制劑可為KSP抑制劑。所述有絲分裂抑制劑可選自下組GSK495、伊斯平斯、‘ 161 KSP抑制劑、 AZD-4877、CRx-026、SB-743921(SB-921)、MK-0731、EMD-534085 和 ARQ 621。所述有絲分裂抑制劑可選自下組伊斯平斯、‘161 KSP抑制劑、AZD-4877、 CRx-026、SB-743921 (SB-921)、MK-0731、EMD-534085 和 ARQ621。所述有絲分裂抑制劑可選自下組伊斯平斯、‘161 KSP抑制劑和AZD-4877。所述有絲分裂抑制劑可選自下組‘161 KSP抑制劑。所述有絲分裂抑制劑可為化合物1。所述有絲分裂抑制劑可為化合物2。所述有絲分裂抑制劑可為化合物3。所述有絲分裂抑制劑可為化合物4。所述有絲分裂抑制劑可為化合物5。所述有絲分裂抑制劑可為化合物6。所述有絲分裂抑制劑可選自下組SU-6668、AZD-1152, CYC-116, AS-703569、 MLN-8054、R763、PHA-739358、AT-9283、SNS-314、AZD-1152-HQPA、MLN-8237、KW-2449、 PF-3814735、ENMD-2076、PHA-739385、MK-0457、MK-5108、0N_01910Na、BI-2536、 GSK-461364、伊斯平斯、‘161 KSP 抑制劑、AZD-4877, CRx-026, SB-743921 (SB-921), MK-0731、EMD-534085、ARQ 621和 GSK-295。所述有絲分裂抑制劑可選自下組長春堿、長春新堿、長春地辛、長春瑞濱、紫杉醇、多西紫杉醇、Abmxane 、秋水仙堿、埃坡霉素A、埃坡霉素B、埃坡霉素D、伊沙匹隆、 多拉司他汀 10、多拉司他汀 15、synthadotin、LU103793、西馬多丁、SU-6668、AZD-1152、 CYC-116, AS-703569、MLN-8054、R763、PHA-739358、AT-9283、SNS-314、AZD-1152-HQPA、 MLN-8237、KW-2449、PF-3814735、ENMD-2076、PHA-739385、MK-0457、MK-5108、ON-019IONa, BI-2536、GSK-461364、GSK-295、伊斯平斯、‘161 KSP 抑制劑、AZD-4877、CRx-026、 SB-743921(SB-921)、MK-0731、EMD-534085、ARQ 621 和 GSK-295。所述有絲分裂抑制劑可為長春花生物堿。所述長春花生物堿可選自下組長春堿、 長春新堿、長春地辛和長春瑞濱。所述有絲分裂抑制劑可為紫杉烷。所述有絲分裂抑制劑可選自下組紫杉醇、 Abmxane 和多西紫杉醇。所述有絲分裂抑制劑可為秋水仙堿。所述有絲分裂抑制劑可為埃坡霉素。所述有絲分裂抑制劑可選自下組埃坡霉素 A、埃坡霉素B、埃坡霉素D和伊沙匹隆。
所述有絲分裂抑制劑可為多拉司他汀或多拉司他汀類似物。所述有絲分裂抑制劑可選自下組多拉司他汀10、多拉司他汀15、synthadotin、LU103793和西馬多丁。所述有絲分裂抑制劑可為Aurora激酶抑制劑。所述有絲分裂抑制劑可選自下組 SU-6668、AZD-1152、CYC-116、AS-703569、MLN-8054、R763、PHA-739358、AT-9283、SNS-314、 AZD-1152-HQPA、MLN-8237、KW-2449、PF-3814735、ENMD-2076、PHA-739385、MK-0457 和 MK-5108。所述有絲分裂抑制劑可為polo樣激酶抑制劑。所述有絲分裂抑制劑可選自下組 ON-O19IONa,BI-2536 和 GSK-461364。所述有絲分裂抑制劑可為CENP-E抑制劑。所述有絲分裂抑制劑可為GSK495.如上所討論，必須施用合適量的有絲分裂抑制劑以達到所需的生物學(xué)效果。因此， 為了通過施用有絲分裂抑制劑增加凋亡應(yīng)至少施用達到所需生物學(xué)效果的最小量，或生物學(xué)上的有效劑量。然而，該量不應(yīng)高至具有超過生物學(xué)效果的益處的不可接受的副作用。因此，通過施用有絲分裂抑制劑增加凋亡應(yīng)施用不多于最大耐受劑量(“MTD”)的量。每一次施用有絲分裂抑制劑應(yīng)介于生物學(xué)上的有效劑量和最大耐受劑量之間。最大耐受劑量定義為產(chǎn)生可接受的劑量限制性毒性(“DLT”)的發(fā)生率的最高劑量。導(dǎo)致不可接受的DLT率的劑量被認為是無法耐受的。通常，對于具體日程的MTD在I 期臨床試驗中確立。這通常是在患者中通過下述方式實施的以嚙齒類中嚴重毒性劑量的 1/10( “STD10”)的安全起始劑量(基于mg/m2)來起始，并以三個一組積累患者，根據(jù)修改的斐波那契數(shù)列提升劑量，其中提升步驟越高，相對增值越低(例如，劑量增加為100%、 65%,50%,40%以及之后30%至35% )。在三個一組的患者中提升劑量直至達到無法耐受的劑量。次低的產(chǎn)生可接受DLT率的劑量水平被視為所述MTD。同樣，有絲分裂抑制劑的MTD取決于抑制劑、物種、配制物(formulation)和給藥日程而變化。舉例而言，僅在七、十四、二十一或二十八日中的第一日，相對在此期間的第一和第二日，相對在此期間的第一至第三日，均可具有不同的MTD。然而，如上所討論，使用有絲分裂抑制劑增加凋亡需要將抑制劑以足夠高的量施用使其為生物學(xué)上有效的，還需要施用足夠久以使細胞維持有絲分裂停滯。僅在第一日施用雖然可達到生物學(xué)上的有效劑量， 但可能不夠久到足以在細胞中增加凋亡?；蛘?，在第一至第三日施用有絲分裂抑制劑可能足夠久，但可能該施用不足以達到生物學(xué)上的有效劑量，因而細胞凋亡不會增加。這可能是由于給藥三日的MTD比生物學(xué)上的有效劑量低。通常，當(dāng)治療病原細胞如癌時，將特定化合物的MTD施用于患者，從而使得可達到該治療中的最大益處。相應(yīng)地，本發(fā)明的一個實施方案提供有絲分裂抑制劑，其用于向具有處于有絲分裂抑制劑誘導(dǎo)的有絲分裂停滯狀態(tài)的病原細胞的患者施用以增加所述細胞的凋亡，其中所述有絲分裂抑制劑以最大耐受劑量施用。本發(fā)明的另一個實施方案提供‘161 KSP抑制劑，其用于向具有處于‘161 KSP抑制劑誘導(dǎo)的有絲分裂停滯狀態(tài)的病原細胞的患者施用以增加所述細胞的凋亡，其中所述 ‘ 161KSP抑制劑以最大耐受劑量施用。當(dāng)治療病原細胞如癌時，確立給藥周期，從而使得在完成第一個周期之后，可施用附加的周期直至此種治療不再必要或有效。決定周期長度的因素之一為允許恢復(fù)或消退副作用。在施用了藥物組合物或治療劑，特別是有絲分裂抑制劑之后，患者可能經(jīng)歷副作用。取決于副作用的類型，可能需要恢復(fù)或消退副作用。該恢復(fù)或消退副作用可能需要時間，其繼而可決定第二周期可起始之前該周期的長度。有絲分裂抑制劑，特別是KSP抑制劑的副作用之一是急性嗜中性粒細胞減少。嗜中性粒細胞減少是以異常低數(shù)量的嗜中性粒細胞(一種白細胞)為特征的血液病癥。一般而言，經(jīng)歷來自有絲分裂抑制劑(或KSP抑制劑)的此種副作用的患者在不接受附加劑量的所述抑制劑時隨著時間流逝恢復(fù)或該嗜中性粒細胞減少消退。在KSP抑制劑的單次施用之后，在周期的第14至21日許多患者從副作用恢復(fù)，或所述副作用消退。本發(fā)明提供有絲分裂抑制劑，其用于向具有處于有絲分裂抑制劑誘導(dǎo)的有絲分裂停滯狀態(tài)的病原細胞的患者施用以增加所述細胞的凋亡，其中達成允許恢復(fù)或消退副作用的周期。第一劑誘導(dǎo)有絲分裂停滯。本發(fā)明以在第一劑之后一或兩日施用的第二劑使得凋亡增加。本發(fā)明提供的包括第一和第二劑量施用的周期為14至21日。這是2或3周的方便說法，并不需要精確到14至21日。因此，所述周期大約為14至21日。所述周期可為11 至24日。所述周期可為14日，或11至17日。所述周期還可為21日，或18至M日。本發(fā)明的另一個實施方案提供‘161 KSP抑制劑，其用于向具有處于‘161 KSP抑制劑誘導(dǎo)的有絲分裂停滯狀態(tài)的病原細胞的患者施用以增加所述細胞的凋亡。在某些實施方案中，所述‘161 KSP抑制劑為化合物1。在某些實施方案中，所述‘161 KSP抑制劑為化合物2。在某些實施方案中，所述‘161 KSP抑制劑為化合物3。在某些實施方案中，所述 ‘161 KSP抑制劑為化合物4。在某些實施方案中，所述‘161 KSP抑制劑為化合物5。在某些實施方案中，所述‘161 KSP抑制劑為化合物6。在某些實施方案中，所述病原細胞是癌細胞。在某些實施方案中，所述病原細胞是血液腫瘤細胞。在某些實施方案中，所述病原細胞選自淋巴瘤、白血病和多發(fā)性骨髓瘤細胞。在某些實施方案中，所述病原細胞是實體瘤細胞。在某些實施方案中，所述病原細胞選自皮膚、乳房、腦、宮頸癌和睪丸癌細胞的腫瘤細胞。在某些實施方案中，所述實體瘤細胞選自乳腺癌、結(jié)腸直腸癌、非小細胞肺癌、胰腺癌、 膀胱癌、唾液腺癌(腺樣囊性)、食道癌、間皮瘤癌和混合性小細胞肺癌/非小細胞肺癌。在某些實施方案中，所述抑制劑以最大耐受劑量給藥。本發(fā)明的另一個實施方案提供‘161 KSP抑制劑，其用于向具有處于‘161 KSP抑制劑誘導(dǎo)的有絲分裂停滯狀態(tài)的病原細胞的患者施用以增加所述細胞的細胞凋亡，其中所述抑制劑以最大耐受劑量施用。在某些實施方案中，所述‘161 KSP抑制劑為化合物1。在某些實施方案中，所述‘161 KSP抑制劑為化合物2。在某些實施方案中，所述‘161 KSP抑制劑為化合物3。在某些實施方案中，所述‘161 KSP抑制劑為化合物4。在某些實施方案中，所述‘161 KSP抑制劑為化合物5。在某些實施方案中，所述‘161 KSP抑制劑為化合物 6。在某些實施方案中，所述病原細胞是癌細胞。在某些實施方案中，所述病原細胞是血液腫瘤細胞。在某些實施方案中，所述病原細胞選自淋巴瘤、白血病和多發(fā)性骨髓瘤細胞。在某些實施方案中，所述病原細胞是實體瘤細胞。在某些實施方案中，所述病原細胞選自皮膚、 乳房、腦、宮頸癌和睪丸癌的腫瘤細胞。在某些實施方案中，所述實體瘤細胞選自乳腺癌、結(jié)腸直腸癌、非小細胞肺癌、胰腺癌、膀胱癌、唾液腺癌(腺樣囊性)、食道癌、間皮瘤癌和混合性小細胞肺癌/非小細胞肺癌。實施例為了說明本發(fā)明，包括了下述實施例。然而，應(yīng)理解的是這些實施例并不限制本發(fā)明，且僅意為支持并表明實施本發(fā)明的一種方法。實施例1凋亡清洗將用媒介對照(DMSO)或IOnM化合物4處理的HT-四細胞接種在相同的96孔組織培養(yǎng)板中。在8或M小時之后，從HT-四細胞去除化合物4，并用新鮮的生長培養(yǎng)基取代以確定可否防止凋亡誘導(dǎo)。胱天蛋白酶3/7活性是使用CaspaseGlo 3/7試劑(ftOmega) 和發(fā)光計在所示時間作為反應(yīng)產(chǎn)物發(fā)光度測量的。報道經(jīng)化合物4處理的細胞的胱天蛋白酶3/7活性除以經(jīng)DMSO處理的細胞的胱天蛋白酶3/7活性的值。結(jié)果示于圖1。實施例2在用化合物4持續(xù)處理之后HT-29中的凋亡將用媒介對照(DMSO)或100nM、IOnM, InM或0. InM化合物4連續(xù)處理的HT-四細胞接種于相同的96孔組織培養(yǎng)板中。胱天蛋白酶3/7活性是使用CaspaseGlo 3/7試劑 (Promega)和發(fā)光計在所示時間作為發(fā)光的反應(yīng)產(chǎn)物測量的。報道經(jīng)化合物4處理的細胞的胱天蛋白酶3/7活性除以經(jīng)DMSO處理的細胞的胱天蛋白酶3/7活性的值。數(shù)據(jù)包括來自4個獨立實驗的平均值和標準偏差值。結(jié)果示于圖2。實施例3RPMI 8226 中的凋亡將用媒介對照(DMSO)、IOnM化合物4或IOnM長春新堿處理的RPMI82^細胞接種于相同的96孔組織培養(yǎng)板中。胱天蛋白酶3/7活性是使用CaspaseGlo 3/7試劑(ftOmega) 和發(fā)光計在所示時間作為發(fā)光的反應(yīng)產(chǎn)物測量的。報道經(jīng)藥物處理的細胞的胱天蛋白酶 3/7活性除以經(jīng)DMSO處理的細胞的胱天蛋白酶3/7活性的值。數(shù)據(jù)包括來自4個獨立實驗的平均值和標準偏差值。結(jié)果示于圖3。實施例4單極紡錘體的持續(xù)時間和凋亡的程度(HT19異種移植物)為雌性裸鼠皮下植入IOOyL PBS中的5X106個HT-四細胞。十日之后，測量腫瘤，并將小鼠隨機分為三個一組，其中每組的平均腫瘤體積大約為MOmm3。緊接著給藥之前，將化合物4溶解于生理鹽水。確定化合物4的MTD為20mg/kg。劑量體積為10mL/kg。 給藥為在第一日僅給予媒介；和在第一日給予20mg/kg ；和在第一和第三日給予20mg/kg的化合物4。在給藥之后的多個時間點O4、48、72、96、120和144小時)，通過CO2吸入處死小鼠，并收獲腫瘤，并將其立即置于福爾馬林中。在給藥之后M和72小時收集媒介對照組樣品。在給藥之后M、48、72和96小時收集第一日組樣品。在第一劑之后72、96、120和144 小時之后收集第一和第三日組樣品。通過標準步驟制備腫瘤組織的石蠟塊。單極紡錘體的顯影通過用小鼠抗人α-微管蛋白一抗(克隆B-7，Santa Cruz Biotechnology)然后用偶聯(lián)Alexafluor 488 (Invitrogen)的山羊抗小鼠二抗對切片染色來進行。將核用Hoechst 33342染色以供細胞計數(shù)。在每個樣品的三個40X區(qū)域使用熒光顯微鏡手動計數(shù)紡錘體結(jié)構(gòu)。凋亡通過也在每個樣品的三個40X區(qū)域手動計數(shù)TUNEL陽性細胞來量化(TUNEL染色使用來自 RocheWh Situ Cell Death Detection Kit，AP)。結(jié)果示于圖 4 和 6。實施例5mmmmmmmmmtimm (HT-29 ^mm)實施例5的方法與實施例4相同，但是給藥為在第一日僅給予媒介；和在第一日給予8mg/kg ；和第一和第三日給予8mg/kg的化合物4。在給藥之后M和72小時收集媒介對照組樣品。在給藥之后對、48、72和96小時收集第一日組樣品。在第一劑之后72、96、120 和144小時收集第一和第三日組樣品。結(jié)果示于圖5和圖7。實施例6有絲分裂阻斷和凋亡(HT-29)為雌性裸鼠皮下植入IOOyL PBS中的3X106個HT-29細胞。十四日之后，測量腫瘤，并將小鼠隨機分為三個一組，其中每個組平均腫瘤體積為大約300mm3。給藥為單獨的媒介，和5、10、20和30mg/kg的化合物4。在給藥之后M和48小時收集所有樣品。所有其他方法如實施例4所述。結(jié)果示于圖8和9。實施例7在不同給藥日稈中的腫瘤牛長抑制(HT-29)為雌性裸鼠皮下植入IOOyL PBS中的4X106個HT-四細胞。十三日之后，測量腫瘤，并將小鼠隨機分為八個一組，其中每組中平均腫瘤體積大約為210mm3。在臨給藥之前即刻將化合物4溶解于生理鹽水，并以每日％ig/kg、每兩日(every other day)8mg/kg和每四日(every fourth day) 16mg/kg的劑量將10mL/kg的體積腹膜內(nèi)施用12日。每周兩次測量動物重量和腫瘤體積(使用電子測徑器)。使用下述公式計算腫瘤體積體積=(寬度2X長度)/2。結(jié)果示于圖10。實施例8在不同給藥日程中的腫瘤生長抑制(HT-29)為雌性裸鼠皮下植入100 μ L PBS中的5Χ106個HT-四細胞。i^一至十四日之后， 測量腫瘤，并將小鼠隨機分為七個一組，其中每組中平均腫瘤體積大約為230mm3。在臨給藥之前即刻將化合物4溶解于生理鹽水，并以10mL/kg的體積腹膜內(nèi)施用。給藥為在第一和第二日僅給予媒介；和在第一日給予20mg/kg ；在第一和第二日給予20mg/kg ；在第一和第三日給予20mg/kg ；在第一、第二和第三日給予5mg/kg ；在第一、第二和第三日給予IOmg/ kg ；在第一、第二、第三、第四和第五日給予10mg/kg ；在第一和第二日給予10mg/kg ；和在第一和第三日給予10mg/kg的化合物4。每周兩次測量動物重量和腫瘤體積(使用電子測徑器)。使用下述公式計算腫瘤體積體積=(寬度2X長度)/2。在第一、第二、第三、第四和第五日以10mg/kg給藥是無法耐受的(大于20%的重量喪失和/或一些小鼠死亡)。結(jié)果示于圖11-15。實施例9在不同給藥日程中的腫瘤生長抑制(RPMI 8226) 為雌性SCID-beige小鼠皮下植入100 μ L含50 %基質(zhì)膠的PBS中的1 X IO7個RPMI 82 細胞。二十五日之后，測量腫瘤，并將小鼠隨機分為七個一組，其中每組中平均腫瘤體積大約為225mm3。在臨給藥之前即刻將化合物4溶解于生理鹽水，并以10mL/kg的體積腹膜內(nèi)施用。給藥為在第一日僅給予媒介；和在第1日給予20mg/kg;第一和第二日給予IOmg/kg ；第一和第三日給予10mg/kg ；和第一、第五和第九日給予20mg/kg的化合物4。每周兩次測量動物重量和腫瘤體積(使用電子測徑器)。使用下述公式計算腫瘤體積體積=(寬度2X長度)/2。結(jié)果示于圖16。實施例10單極紡錘體、雙極紡錘體的持續(xù)時間和凋亡稈度(RPMI 8226)為雌性SCID-beige小鼠皮下植入100 μ L含50%基質(zhì)膠的PBS中的IX IO7個RPMI 82 細胞。三十一日之后，測量腫瘤，并將小鼠隨機分為三個一組，其中每組中平均腫瘤體積大約為210mm3。在臨給藥之前即刻將化合物4溶解于生理鹽水。給藥體積為10mL/kg。給藥為在第一日僅給予媒介；和在第一日給予10mg/kg ；在第一日給予20mg/kg ；在第一和第二日給予10mg/kg ；在第一和第三日給予10mg/kg的化合物4。在給藥之后的多個時間04、 48,72和96小時)，通過(X)2吸入處死小鼠，并收獲腫瘤并將其立即置于福爾馬林中。在給藥之后48小時收集媒介對照組樣品。在給藥之后對和48小時收集第一日給予10mg/kg 的樣品。在給藥之后對、48和72小時收集在第一日給予20mg/kg的樣品。在第一劑之后 48和72小時收集在第一和第二日給予10mg/kg的樣品。在第一劑之后72和96小時收集在第一和第三日給予10mg/kg的樣品。通過標準步驟制備腫瘤組織的石蠟塊。單極紡錘體的顯影通過用小鼠抗人α-微管蛋白一抗(克隆B-7，Santa Cruz Biotechnology)然后用偶聯(lián)Alexafluor 488 (Invitrogen)的山羊抗小鼠二抗對切片染色來進行。將核用Hoechst 33342染色以供細胞計數(shù)。在每個樣品的三個40X區(qū)域使用熒光顯微鏡手動計數(shù)紡錘體結(jié)構(gòu)。凋亡通過同樣在每個樣品的三個40X區(qū)域手動計數(shù)TUNEL陽性細胞來量化(TUNEL染色使用來自 RocheWh Situ Cell Death Detection Kit,AP) 結(jié)果示于圖 17、18 和 19。實施例11在1期研究中確定MTD招收總共13位具有多種實體瘤和中位年齡66歲(范圍為40-79歲)的患者參加人 1 期臨床試驗(參見"Phase I Safety and Pharmacokinetic Study of ARRY-520 in Solid Tumors. “ http://clinicaltrials. gov/ct2/show/NCT00462358)。受處理的實體瘤為乳腺癌O)，結(jié)腸直腸癌O)，非小細胞肺癌0)，胰腺癌O)，膀胱癌，唾液腺癌(腺樣囊性)，食道癌，間皮瘤癌和混合性小細胞肺癌/非小細胞肺癌。提供化合物4作為包含于用于IV用途的1型透明玻璃小瓶中的凍干粉施用。施用的劑量水平為每兩周在第一和第二日 1. 25和1. 6mg/m2/日的化合物4。MTD確定為1. 25mg/m2/日(每周期的累積劑量為2. 5mg/ m2)，其中DLT為3級低鈉血癥，食欲缺乏，AST增加和發(fā)熱性嗜中性粒細胞減少。A Phase 1/2 Study of ARRY-520 in Patients With Relapsed or Refractory Multiple Myeloma. “ http://clinicaltrials.gov/ct2/show/NCT00821249。盡管本發(fā)明與列舉的實施方案一同描述，應(yīng)理解的是其并非旨在將本發(fā)明限制于這些實施方案。相反，本發(fā)明旨在涵蓋所有的替代、修飾和等同物，其可如權(quán)利要求書所定義包含于本發(fā)明的保護范圍內(nèi)。因此，前述描述僅視為本發(fā)明的原理。單詞“包括/ 包含(“comprise"、〃 comprising"、" include"、〃 includin g"和"includes")，當(dāng)用于本說明書及所附權(quán)利要求中時旨在明確說明所陳述的特征、 整數(shù)、組分或步驟的存在，但其并未排除一種或多種其他特征、整數(shù)、組分或其組的存在或附加。
權(quán)利要求
1.一種‘161 KSP抑制劑，其用于向具有處于‘161 KSP抑制劑誘導(dǎo)的有絲分裂停滯狀態(tài)的病原細胞的患者施用，以增加所述細胞的凋亡。
2.權(quán)利要求1的抑制劑，其為與誘導(dǎo)了有絲分裂停滯的抑制劑相同的抑制劑。
3.權(quán)利要求1或2的抑制劑，其中所述‘161KSP抑制劑為化合物1。
4.權(quán)利要求1或2的抑制劑，其中所述‘161KSP抑制劑為化合物2。
5.權(quán)利要求1或2的抑制劑，其中所述‘161KSP抑制劑為化合物3。
6.權(quán)利要求1或2的抑制劑，其中所述‘161KSP抑制劑為化合物4。
7.權(quán)利要求1或2的抑制劑，其中所述‘161KSP抑制劑為化合物5。
8.權(quán)利要求1或2的抑制劑，其中所述‘161KSP抑制劑為化合物6。
9.權(quán)利要求1-8任一項的抑制劑，其中所述病原細胞是癌細胞。
10.權(quán)利要求1-9任一項的抑制劑，其中所述病原細胞是血液腫瘤細胞。
11.權(quán)利要求1-10任一項的抑制劑，其中所述病原細胞選自淋巴瘤、白血病和多發(fā)性骨髓瘤細胞。
12.權(quán)利要求1-9任一項的抑制劑，其中所述病原細胞是實體瘤細胞。
13.權(quán)利要求1-9或12任一項的抑制劑，其中所述病原細胞選自皮膚、乳房、腦、宮頸癌和睪丸癌細胞的腫瘤細胞。
14.權(quán)利要求1-9或12任一項的抑制劑，其中所述病原細胞選自乳腺癌、結(jié)腸直腸癌、 非小細胞肺癌、胰腺癌、膀胱癌、唾液腺癌(腺樣囊性)、食道癌、間皮瘤癌和混合型小細胞肺癌/非小細胞肺癌。
15.權(quán)利要求1-14任一項的抑制劑，其中所述抑制劑用于以最大耐受劑量施用。
16.用于向具有處于化合物4誘導(dǎo)的有絲分裂停滯狀態(tài)的病原細胞的患者施用以增加所述細胞的凋亡的化合物4，其中化合物4以最大耐受劑量施用。
17.權(quán)利要求16的化合物4的施用，其中所述病原細胞是癌細胞。
18.權(quán)利要求16或17的化合物4的施用，其中所述病原細胞是血液腫瘤細胞。
19.權(quán)利要求16-18任一項的化合物4的施用，其中所述病原細胞選自淋巴瘤、白血病和多發(fā)性骨髓瘤細胞。
20.權(quán)利要求16-19任一項的化合物4的施用，其中所述病原細胞是實體瘤細胞。
21.權(quán)利要求16-18或20任一項的化合物4的施用，其中所述病原細胞選自皮膚、乳房、腦、宮頸癌和睪丸癌細胞的腫瘤細胞。
22.權(quán)利要求16-18或20任一項的化合物4的施用，其中所述病原細胞選自乳腺癌、結(jié)腸直腸癌、非小細胞肺癌、胰腺癌、膀胱癌、唾液腺癌(腺樣囊性)、食道癌、間皮瘤癌和混合性小細胞肺癌/非小細胞肺癌。
23.權(quán)利要求16-22任一項的化合物4的施用，其中所述最大耐受劑量為1.25mg/m2/曰。
全文摘要
一種有絲分裂抑制劑，用于向具有處于有絲分裂抑制劑誘導(dǎo)的有絲分裂停滯狀態(tài)的病原細胞的患者以增加所述細胞的凋亡。
文檔編號A61K31/433GK102256603SQ200980150472
公開日2011年11月23日 申請日期2009年10月16日 優(yōu)先權(quán)日2008年10月16日
發(fā)明者布賴恩.J.滕奎斯特, 理查德.D.沃斯納, 鄧肯.H.沃爾克 申請人:陣列生物制藥公司