專利名稱：用于預防和治療病毒感染的組合物的制作方法
用于預防和治療病毒感染的組合物 本發(fā)明涉及用于預防和/或治療病毒感染的包含茶薦子(Ribes)屬提取物的組合物。大量人疾病由病毒導致，包括流行性感冒(influenza)、普通感冒(common cold)、 水痘(chickenpox)和感冒疫(cold sores)。疾病如AIDS、肝炎(hepatitis)、皰疹感染(herpes infections)、柯薩奇病毒感染(Coxsackie infections)、麻疫(measles)、 風疹(rubella)、巨細胞(cytomegaly)、流行性腮腺炎(mumps)、狂犬病(rabies)、腹瀉 (diarrhea)、SARS,埃博拉(Ebola)、黃熱病(Yellow fever)、西尼羅河熱(West-Nile fever)、漢坦熱(Hanta fever)、登革熱(Dengue fever)、馬爾堡熱(Marburg fever)、 拉沙熱(Lassa fever)、天花(smallpox)、人乳頭瘤病毒感染(human papi Ilomaviral infections)、傳染性單核細胞增多癥(infectious mononucleosis)、伯基特淋巴瘤 (Burkitt lymphoma)、脊髓灰質炎(polyomyelitis)、腦炎(enc印halitits)、咽扁桃體炎 (adenopharyngitis)也^；^胃^專Jf 白勺。然而，人中最常見病毒感染是流行性感冒和普通感冒病。每年世界人口的大約10 至20 %由于流行性感冒而患病，普通感冒病根本是人最常見的感染。通常成人每年受侵襲二至三次，兒童甚至更多。這導致重大經濟損失，由于人在感染過程中必須獲得治療并通常不能工作。另外，流行性感冒和普通感冒病的標準治療花費高并且顯示可能是嚴重的副作用。流行性感冒(influenza)，也叫作流感(flu)，是一種傳染性病毒感染，其以季節(jié)性流行性方式在世界范圍內傳播。有人區(qū)分了三種病毒類型，甲型、乙型和丙型。乙型和丙型局限于人，而甲型擴展到哺乳動物和鳥類。世界衛(wèi)生組織(World Health Organization)，WHO，警告全球性流行性感冒將在即將到來的幾年內廣泛流行。流行發(fā)作和廣泛流行主要由甲型流行性感冒病毒引起。流行性感冒病毒遺傳物質的主要遺傳改變已經在20世紀引起了三次廣泛流行，它們的傳染原 (infective agent)都是甲型。目前，禽流感，也是甲型病毒，代表廣泛流行的主要危險。最近幾年發(fā)生日益增加， 特別是在東南亞。它的傳播由野生鳥類輔助，所述鳥類作為所述疾病的抗性載體。專家們擔心禽流感病毒可能與人流感的傳染原交叉。原則上，當豬或人同時感染禽流感和人流感的傳染原時，這是可能的。這可能導致對人高感染性和致死性的病毒，其可以導致全球蔓延。 迄今為止，禽流感到人類的傳播只在局部地區(qū)發(fā)生。然而，還沒有觀察到在人類之間的禽流感傳播。接種疫苗代表預防病毒疾病的最重要的方式。然而，在預防情形中，接種依賴于抗某種病毒的疫苗的制備。這需要所述病毒必須已經存在。這一點，以及開發(fā)疫苗所需要的長時間(大約4個月)導致它在全球流行病中的應用的重大局限性。在這樣的情形中，疫苗應用只通過抗病毒劑的預先和伴隨應用來保障(WHO Guidelines on the Use of Vaccines and Antivirals during Influenza Pandemics (在流行性感冒廣泛流行期間關于使用疫苗和抗病毒劑的WHO方針)；World Health Organization (世界衛(wèi)生組織)2004)。
有效治療流行性感冒的抗病毒劑包括金剛烷胺(amantadine)、金剛乙胺(rimantadine)、扎那米韋(zanamivir)和奧塞米韋(oseltamivir)和利巴韋林 (ribavirin) 0所列出的藥物全都有副作用，其在某些情形中可能是嚴重的。例如，奧塞米韋，其以名稱Tamiflu 出售，表現(xiàn)出頻繁的反胃、嘔吐和胃痛的副作用。它的應用指示只在13歲以后，原因為在某些情形中，在低于所述年齡限制的年輕人中觀察到嚴重的副作用，如耳部感染、肺炎、鼻竇感染、支氣管炎、淋巴結腫脹和結膜炎(Red List,Catalogue of Medication for Germany (紅表，德國醫(yī)藥目錄)，2004)。 抗病毒藥物在病毒疾病的預防以及在其治療中有效。迄今為止病毒疾病的直接藥物治愈尚未成功。接骨木(elderberry)提取物因其在某些情形中縮短流行性感冒的持續(xù)時間的作用而為人所知，然而，其沒有表現(xiàn)出任何適當?shù)念A防作用(Zakay-Rones，Ζ. ；Varsano, N.； Zlotnik, Μ. ；Manor,0. ；Regev,L. ；Schlesinger, Μ. ；Mumcuoglu, Μ. J. Altern. Complement. Med (備選和互補醫(yī)學雜志)· 1995，1 (4)，361-9)。W0-A-99/44578描述了使用異槲皮素(isoquercetin)，一種天然類黃酮，在醫(yī)學制劑中作為光保護過濾器和抗病毒物質。具體而言，異槲皮素，其例如存在于黑茶薦子 (Ribes nigrum L.)中，被描述為顯示針對單純皰疹病毒I型的抗病毒活性。然而，尚未證明由黑茶薦子(Ribes nigrum L.)制備提取物，也未證明來自于黑茶薦子(Ribes nigrum L.)的此類提取物的抗病毒活性的特別效應。此外，JP-A-2001-328941公開了分離自黑茶薦子(Ribes nigrum L.)提取物的花色素苷。所述花色素苷被描述為顯示針對甲型流行性感冒或乙型流行性感冒的抗病毒活性。然而，僅對分離自黑茶薦子(Ribes nigrum L.)提取物的純的花色素苷對于它們抗人甲型流行性感冒的活性進行了研究，尚未檢查提取物本身的活性。作為用于可能由禽流感引起的即將到來的廣泛流行的情形的預防措施，世界范圍的國家依賴抗病毒藥物。例如，盡管擔心在緊急情況中藥物可能很快用光，但是一些國家仍以顯著量定購上文提及的藥物奧塞米韋(Tamiflu ;Hoffman La Roche(霍夫曼-拉羅奇))作為廣泛流行情形的儲備。另外，巨大的需要已經導致生產瓶頸。另外，(已知)抗病毒劑的應用受到這些抗病毒劑在畜牧業(yè)中用作廣譜藥物的事實的日益增加的危害。不顧國際禁令，例如在中國，這樣的實施已經引起一些禽流感毒株對這些藥劑的抗性。此外，這些藥劑的常見副作用，在某些情形中可能是嚴重的。此外，在一些情形中，這些藥物只指定某些年齡組，諸如例如奧塞米韋(Tamiflu , )，其只能在年齡大于13歲以后應用。除了流行性感冒以外，另一種典型的病毒感染是普通感冒病。典型的普通感冒病中包括的是呼吸道感染，諸如頭傷風(head cold)和扁桃腺炎和咽炎，以及咳嗽和支氣管炎。通常這些相繼發(fā)生，但是感冒還能夠保持僅限于鼻子、咽喉或支氣管。這種類型的普通感冒病也稱為“病毒性感冒”。這些不應該與由流行性感冒病毒產生的流行性感冒混淆，所述流行性感冒顯示出明顯更長和更嚴重的疾病進程，且通常與發(fā)燒相關。提及的普通感冒病也是由病毒引起的。因為，例如，存在著超過一百種不同類型的能夠引起頭傷風的病毒，所以幾乎不可能開發(fā)針對它的疫苗。因此，頭傷風或一般的感冒的治療以減輕癥狀為目標。在這些情形中，通常使用試驗證明效果良好的家庭治療法。例如，非常堵塞的鼻子能夠通過吸入熱蒸汽得到幫助。這容許鼻粘膜中腫脹的減小并促進粘液的流出。例如，通過向熱水中添加幾滴茶樹油或甘菊油能夠對其起到輔助作用。還已知用鹽溶液日常沖洗鼻子能夠降低對頭傷風的易感性。除自助式措施外，藥物能夠幫助收縮腫脹的鼻粘膜中的血管，從而引起對鼻粘膜的緩解作用。然而，用于減輕鼻粘膜腫脹的滴鼻試劑不應該使用長于2或3天。這段時間后，當停止所述滴劑后，鼻粘膜可能會更加腫脹，并且發(fā)展為“回彈腫脹”(藥物性鼻炎 (rhinitis medicamentosa))。與化學合成的鼻噴霧不同，植物藥物幾乎沒有副作用。即使在較長時期內使用，它們不損傷鼻粘膜，且不引起藥物性鼻炎。越早應用植物藥物，它們越有效。已經能夠將它們用于支持感冒的第一征兆。它們還抵制感染的傳播。

例如，松果菊屬(echinacea)制劑常常用于普通感冒病，由此市場上存在大量處于不同植物化學組合物中的多種藥物。然而，對這些植物治療劑功效的受控研究僅以有限的程度存在，并具有矛盾的結果。然而，最近，新研究揭示松果菊屬不具有假定的功效。該研究使用具有不同植物化學特征的三種松果菊屬制劑進行，其中這些制劑是通過用二氧化碳、60%乙醇或20%乙醇提取狹葉松果菊(E.-angustifolia)根獲得的。參加該研究的總共437名患有鼻病毒感染的志愿者在暴露于該病毒前7天時作為預防或在暴露時為了治療接受該藥物。該研究包括接受安慰劑的對照組。關于感染率、癥狀的嚴重性、鼻分泌物的體積、白細胞水平、鼻沖洗水中的白介素-8濃度或定量的病毒滴度，在這三種松果菊屬提取物和安慰劑之間不存在顯著差別(Deutsches Arzteblatt 102，來自2005年12月2 日第 48 期，第 A-3341/B-2822/C-2640 頁和新英格蘭醫(yī)學雜志(New England Journal of Medicine)，2005，353，341-348)?；谥参锏钠渌幬锸莵碜院扇~天竺葵(Pelargonium reniforme)或狹花天竺葵 (Pelargonium sidoides)的根的提取物，它們以名稱 Umckaloabo 出售。Umckaloabo ⑩ 傳統(tǒng)上不僅用于呼吸道疾病，還用于胃腸疾病。現(xiàn)認為決定功效的成分是許多抗菌和免疫調節(jié)成分，諸如香豆素和單寧(tannins)。假定該提取物產生抗菌、抗病毒和分泌物分解 (secretolytic)效應，由此懷孕或哺乳期女性或患有肝病或腎病或增加的出血傾向的患者不應該使用該藥物，因為在該領域中還不可能收集到足夠的經驗。而且，與其他植物藥物相比，Umckaloabo丨 非常昂貴。 反轉錄病毒導致其它嚴重疾病。反轉錄病毒是RNA病毒，其使用酶反轉錄酶從其RNA基因組產生DNA。反轉錄酶是 DNA聚合酶，其將單鏈RNA轉錄成單鏈DNA。此外，一旦RNA已經被反轉錄成單鏈DNA，反轉錄酶幫助雙螺旋DNA的形成。如此形成的病毒的DNA然后通過整合酶結合到宿主基因組中并以其進行復制。反轉錄病毒是有包膜病毒，屬于反轉錄病毒科(Retroviridae)，可分為內源性和外源性反轉錄病毒。內源性反轉錄病毒作為遺傳成分存在于染色體DNA中。其來源于人、哺乳動物和其它脊椎動物中的遠古病毒感染并傳遞到下一代并保留在基因組中。懷疑人內源性反轉錄病毒在一些自身免疫疾病(特別是多發(fā)性硬化(multiple sclerosis))中發(fā)揮作用。外源性反轉錄病毒是水平傳播的傳染性含有RNA的病毒，其從動物傳播至動物或人傳播至人。水平傳播幾乎專門地通過體液發(fā)生，通過污跡(smear)傳播極其少見，并且可排除空氣傳播。外源性反轉錄病毒誘導的或相關的疾病是，例如，貓白血病 (leukemia)或肉瘤(sarcomas)、雞白血病或肉瘤、小鼠白血病或肉瘤、馬傳染性貧血 (equine infectious anemia)、牛白血病(bovine leukemia)、羊關節(jié)炎腦炎(caprine arthritis-encephalitis) TIfiSifil^f (human adult T-cell leukemia)、入攣性輕截癱(human tropic spastic paraparesis)禾口 AIDS。然而，人中最嚴重的病毒感染之一是HIV (人免疫缺陷癥病毒)感染。人中HIV感染已經變成大流行的。大部分HIV感染的個體最終發(fā)展為AIDS，一種人的病癥，其中免疫系統(tǒng)開始破壞，導致威脅生命的機會性感染。自1981年AIDS第一次被認識以來，其已經殺死超過二千五百萬人。在2007年，認為三千零六十萬和三千六百一十萬之間的人與HIV —起生活，大約二百一十萬人死亡并且報道了二百五十萬新感染。在具有最高HIV流行的非洲， 平均預期壽命比沒有該疾病大約少6. 5年。這導致重大經濟損失和貧困增加。HIV感染可分為四個階段原發(fā)感染、臨床無癥狀階段、有癥狀HIV感染和從HIV 進展至AIDS。感染的第一階段，原發(fā)HIV感染，持續(xù)數(shù)周并可包括感冒(flue)樣癥狀。在這一階段，由于外周血中大量HIV，免疫系統(tǒng)開始產生HIV抗體和細胞毒性淋巴細胞。在階段2，臨床無癥狀階段或潛伏階段，外周血中的病毒顆粒的數(shù)目通過強烈的免疫防御(uimmime defense)而降低。所述階段持續(xù)大約10年并且沒有大的癥狀。然而，HIV 在淋巴結中是有活性的并且人保持傳染性。在感染的階段3，有癥狀HIV感染為該階段的特征，其中免疫系統(tǒng)被HIV高度損傷。 由于數(shù)年的活性，淋巴結和組織受損，HIV突變并變得更有致病性，導致更大數(shù)目的T輔助細胞破壞，受感染的身體不能跟上替換損失的T輔助細胞。由于T輔助細胞數(shù)目的降低，喪失了細胞介導的免疫性，出現(xiàn)多種機會性感染。這種階段最終導致感染的階段4，即從HIV 進展到AIDS。疫苗接種代表最重要的預防病毒病的方式。然而，目前不存在對于HIV感染的疫苗或治愈。一般而言，反轉錄病毒導致的感染用抗反轉錄病毒藥物治療。HIV感染目前通過高效抗反轉錄病毒療法(HAART)治療。所述療法是屬于至少兩類抗反轉錄病毒劑的至少三種不同藥物的組合。如果僅服用一種藥物，HIV將對所述藥物產生抗性。同時服用數(shù)種抗反轉錄病毒藥物降低抗性發(fā)展率，使得治療在長的時期中更有效。目前，可獲得分為5組的超過 20種批準的抗反轉錄病毒藥物。這些組中的每種以不同的方式攻擊HIV。第一組抗反轉錄病毒劑是核苷/核苷酸反轉錄酶抑制劑(NRTI)。所述抑制劑干擾病毒制造自身新拷貝需要的反轉錄 酶蛋白。第二組化合物是非_核苷反轉錄酶抑制劑(NNRTI)，其通過抑制反轉錄酶蛋白阻礙HIV復制。第三組抗反轉錄病毒劑是蛋白酶抑制劑(PI)。所述藥劑抑制蛋白酶， 該蛋白酶是HIV復制過程中必需的。第四類藥物是融合或進入抑制劑，其阻止HIV結合或進入人免疫細胞。所述藥物特別用于感染已經對普通療法具有抗性的病毒的患者。第五類抑制劑是干擾整合酶的整合酶抑制劑。病毒需要所述酶來將其遺傳物質插入人細胞中。高效抗反轉錄病毒療法不能治愈患者，但改善了 HIV感染患者的整體健康和生活質量。HIV感染者的平均預期壽命現(xiàn)在大約是從感染時32年。沒有HAART時，從HIV進展至AIDS通常發(fā)生在9至10年后，發(fā)展AIDS后的中值存活時間僅僅是9個月。開發(fā)HAART作為HIV感染的有效療法在該藥物廣泛可得的那些區(qū)域大量降低了死亡率。高效抗反轉錄病毒療法中最常見的藥物組合由兩種NRTI聯(lián)合NNRTI或者蛋白酶抑制劑組成。最常見地，利托那韋(ritonavir)用作蛋白酶抑制劑?？狗崔D錄病毒藥物組合的實例含有兩種NRTI，即齊多夫定(zidovudine)和拉米夫定(lamivudine)，聯(lián)合 NNRTI依法韋侖(efavirenz)。常用NRTI是拉米夫定(lamivudine)、阿巴卡韋(abacavir)、 齊多夫定(zidovudine)、司他夫定(stavudine)、扎西他濱(zalcitabine)、去羥肌苷 (didanosine)、恩曲他濱(emtricitabine)和替諾福韋(tenofovir)。典 型使用的 NNRTI 是地拉韋啶(delavirdine)、依法韋侖(efavirenz)、依曲韋林(etravirine)和奈韋拉平 (nevirapine)。標準蛋白酶抑制劑是安潑那韋(amprenavir)、福沙那韋(fosamprenavir)、 阿扎那韋(atazanavir)、達蘆那韋(darunavir)、茚地那韋(indinavir)、洛匹那韋 (Iopinavir)、利托那韋(ritonavir)、那非那韋(nelfinavir)、沙奎那韋(saquinavir)和替拉那韋(tipranavir)。作為融合或進入抑制劑，正常使用恩夫韋肽(enfuvirtide)和馬拉韋羅(maraviroc)。常用整合酶抑制劑是raltegravir。然而，有些患者顯示藥物耐受，高效抗反轉錄病毒療法在一些情形中導致嚴重副作用，在稀有情形中甚至可能是威脅生命的。此外，不堅持和不持續(xù)是療法失敗的主要原因。不堅持和不持續(xù)的原因是心理社會問題，例如，獲得藥學支持差、不足的社會支持、精神病和藥物濫用。此外，方案非常復雜，需要大量丸劑，特別的給藥頻率，膳食限制和其它問題。在該療法中發(fā)生的典型的副作用是脂肪營養(yǎng)障礙(lipodystrophy)、血脂障礙 (dyslipidemia)、胰島素抵抗(insulin resistance)、心血管風險和先天缺陷的增加。在用抗反轉錄病毒藥物治療過程中發(fā)生的進一步的副作用是腹瀉、惡心、嘔吐、皮疹、超敏反應、 食欲不振、中樞神經系統(tǒng)的影響，諸如頭暈、情緒變化、抑郁、焦慮和偏執(zhí)、疲勞、失眠、腎損傷、肝損傷、胰腺損傷、乳酸性酸中毒(lactic acidosis)和神經損傷。所述副作用對健康和生活治療可具有大的影響。另外，抗反轉錄病毒藥物昂貴，大部分受感染的個體沒有獲得對于HIV和AIDS的藥物和治療。例如，融合和進入抑制劑，以及整合酶抑制劑僅在資源豐富的國家可以獲得。因此，本發(fā)明的目的是提供用于預防和/或治療病毒感染的抗病毒組合物，該組合物能夠經濟地制備，并且當施用時，完全不引起副作用或僅引起微小的副作用。通過使用來自茶薦子屬(genus Ribes)植物的提取物用于預防和/或治療病毒感染達到該目的。附圖簡述

圖1顯示黑茶薦子(Ribes nigrum)椏枝和葉的提取物針對甲型流行性感冒病毒 A/波多黎各(Puerto-Rico)/8/34 (HlNl) (PR8)(人)的抗病毒活性的結果。圖2顯示黑茶薦子(Ribes nigrum)椏枝和葉的提取物和T20針對HIV-1的抗病
毒活性的結果。圖3顯示黑茶薦子(Ribes nigrum)椏枝和葉的提取物和T20的細胞毒性測定的結果。發(fā)明詳述本發(fā)明涉及用于預防和/或治療病毒感染的組合物，其中所述組合物包含來自于茶薦子屬植物的至少一個氣生部分的提取物，其中所述氣生部分選自由葉和椏枝組成的組。 在優(yōu)選的實施方案中，與上文或下文所列舉的任何一個實施方案組合，所述病毒感染包括普通感冒病。更優(yōu)選地，所述普通感冒病包括由鼻病毒、腺病毒或冠狀病毒導致的原發(fā)感染。在進一步優(yōu)選的實施方案中，與上文或下文所列舉的任何一個實施方案組合，所述組合物用于治療頭傷風。在另一個優(yōu)選的實施方案中，與上文或下文所列舉的任何一個實施方案組合，所述病毒感染包括流行性感冒。更優(yōu)選地，所述流行性感冒是禽流感。在進一步優(yōu)選的實施方案中，與上文或下文所列舉的任何一個實施方案組合，所述病毒感染是由反轉錄病毒導致的，更優(yōu)選由慢病毒(Ientiviruses)導致。特別地，所述病毒感染是由HIV-I和/或HIV-2導致的。在優(yōu)選的實施方案中，與上文或下文所列舉的任何一個實施方案組合，所述植物是黑茶薦子(Ribes nigrum L.)。在另一個優(yōu)選的實施方案中，與上文或下文所列舉的任何一個實施方案組合，所述植物是紅茶薦子(Ribes rubrum L.).在優(yōu)選的實施方案中，與上文或下文所列舉的任何一個實施方案組合，所述組合物還包含茶薦子屬植物果實的提取物。在優(yōu)選的實施方案中，與上文或下文所列舉的任何一個實施方案組合，所述組合物處于液體、干燥或半固體形式。在優(yōu)選的實施方案中，與上文或下文所列舉的任何一個實施方案組合，所述提取物是水提取物或醇提取物。在優(yōu)選的實施方案中，與上文或下文所列舉的任何一個實施方案組合，所述組合物口服、鼻內或局部施用。在備選的優(yōu)選實施方案中，所述組合物作為鼻試劑、吸入混合物、氣溶膠或房間噴霧劑存在。所述組合物還可以優(yōu)選地以片劑、包衣片劑、泡騰片劑、膠囊劑、粉劑、顆粒劑、糖衣片劑、軟膏劑、凝膠劑、霜劑、含漱液或植物汁的形式存在。本發(fā)明還涉及來自于茶薦子屬植物的至少一個氣生部分的提取物在制備用于預防和/或治療病毒感染的藥物中的用途，其中所述氣生部分選自由葉和椏枝組成的組。在本發(fā)明中，術語“植物的氣生部分(aerial parts) ”是指地面上的所有部分，包括葉、椏枝、花、果實和種子。為制備根據(jù)本發(fā)明使用的提取物，優(yōu)選地使用葉和椏枝。在本發(fā)明中，術語“椏枝(twig) ”是指具有直徑至多3cm的小的芽(shoot)或枝 (branch) 0優(yōu)選地，所述椏枝的直徑至多1cm。根據(jù)本發(fā)明，術語“提取物(extract) ”代表性地用于通過用溶劑提取的方式(如用浸漬(maceration)和滲濾(percolation)從草藥對象(herbal subject)中獲得的所有產物。在本發(fā)明中，術語“預防(prophylaxis)”是指防止疾病的程序。預防措施可分為初級預防(防止疾病的發(fā)生)和次級預防(當疾病已經發(fā)生時防止惡化)。流行性感冒傳染原是甲、乙和丙型病毒。在人類中季節(jié)性發(fā)生的流行性感冒是由具有HI、H2和H3亞型的甲型流行性感冒病毒以及由乙型流行性感冒病毒引起的。禽流感主要由H5、H7和H9亞型引起。 所述提取物特別適合預防和/或治療禽流感。特別地，所述提取物可以用于預防和/或治療由H5和H7亞型引起的禽流感。為了本發(fā)明的目的普通感冒病理解為是呼吸道，通常意指，鼻、咽、喉、氣管和支氣管的炎癥。在該情形中，術語“普通感冒病”和“病毒性感冒”同義使用。病毒性感冒區(qū)別于流行性感冒，因為后者是僅由流行性感冒病毒引起的。另一方面，病毒性感冒通常由腺病毒、冠形病毒和/或鼻病毒引起。腺病毒(腺病毒科(Adenoviridae))屬于無包膜立方DNA病毒家族，并具有 60-90nm的直徑。基因組由大約36kb長的線性雙鏈DNA組成。人們區(qū)分了大約50種免疫學上不同的腺病毒類型，在亞屬A-F中有大約35種人類致病類型。腺病毒科家族分為能夠感染哺乳動物的哺乳動物腺病毒屬(Mastadenoviruses)和局限于多種鳥類物種的禽腺病毒屬(Aviadenoviruses)。腺病毒的特征在于面對化學和物理作用時不尋常的穩(wěn)定性，并耐受最不利的PH水平，這容許它們在宿主體外具有相當長的生存時間。腺病毒主要引起呼吸道疾病。然而，依據(jù)具體的血清型，還能夠引起許多其他疾病，例如，腸胃炎(gastroenteritis)、結膜炎(conjunctivitis)、膀胱炎(cystitis)、咽炎(pharyngitis)或腹瀉(diarrhoeas)。由腺病毒引起的呼吸道疾病的癥狀在普通感冒到支氣管炎到肺炎的范圍內變化。在具有衰弱的免疫系統(tǒng)患者的情形中，存在著對來自腺病毒感染的嚴重并發(fā)癥的特殊易感性，諸如例如，ARDS(急性呼吸困難綜合征(Acute Respiratory Distress Syndrome)) 此外，懷疑病毒類型Ad_36和人類肥胖之間存在相關性。冠狀病毒，其屬于冠狀病毒科屬(genus Coronaviridae)，通常引起人類的輕度上呼吸道疾病，罕見引起腸胃炎和由與SARS-相關的冠狀病毒SARS-CoV引起的嚴重急性呼吸綜合征(Serious Acute Respiratory Syndrome, SARS)。冠狀病毒被分類在有包膜多晶RNA病毒家族中，且具有70-160nm的直徑。它們具有長度為20-30kb的單鏈正義RNA。冠狀病毒科屬(Coronaviridae genus)分為三個屬冠狀病毒屬(coronaviruses)、動脈炎病毒屬(arteriviruses)和環(huán)狀病毒屬 (toroviruses) 0其中，只有冠狀病毒包括人類致病病毒。病毒的傳播通過飛沫傳染(產氣的)發(fā)生，以污物或污跡感染(糞-口的)或甚至通過與被感染的人的簡單接觸(機械的) 發(fā)生。該情形中，較年輕的被感染生物體能夠變得比年長的生物體病得更重。冠狀病毒引起人類中15-30%的具有輕微發(fā)燒、頭傷風、咳嗽和喉嚨痛的普通感冒病。具有由傳染性、過敏和非過敏機制引起的發(fā)癢、打噴嚏、分泌物和堵塞癥狀的急性或慢性鼻粘膜炎癥稱為鼻炎、鼻粘膜炎(nasal catarrh)、鼻卡他(coryza)或俗稱頭傷風。 病原體通常是小RNA病毒屬-鼻病毒。鼻病毒的感染通過直接傳播，例如，通過污染的手或還通過飛沫傳染而發(fā)生。迄今，已經鑒定了該屬中超過115種血清型。鼻病毒具有長度為7. 2-8. 5kb的單鏈正義RNA(信使RNA)。這些是具有二十面結構且具有24-30nm的直徑的裸露病毒。包圍著該RNA的10-15nm厚的蛋白質包膜(衣殼)由60個對稱性排列的亞單位組成，所述亞單位稱為原聚體。每個原聚體由四種衣殼蛋白VP1、VP2、VP3和VP4組成。認為原聚體的多重數(shù)量是鼻病毒抗原多功能性的原因。如 經提及地，普通感冒病通常由腺病毒、冠狀病毒和/或鼻病毒引起。依賴于感染病毒的類型，能夠發(fā)生感冒病癥諸如頭傷風、咳嗽、嘶啞、喉嚨痛例如由扁桃腺和咽部炎癥引起的喉嚨痛、關節(jié)疼痛和頭痛、寒戰(zhàn)、輕微發(fā)燒和疲勞。為了本發(fā)明的目的，支氣管炎和支氣管肺炎也認為是普通感冒病。這些普通感冒病中，在冬季月份中頭傷風發(fā)生得最頻繁。這是由鼻病毒，或較少見地，腺病毒感染引起的。所述組合物或制劑優(yōu)選地用于預防和/或治療頭傷風，特別是用于預防和/或治療鼻病毒導致的頭傷風。此外，細菌感染，其“建立”在已經存在的病毒感染上，能夠伴隨普通感冒病發(fā)生。 這種類型的感染稱為繼發(fā)性細菌感染或細菌重復感染。本發(fā)明所述的組合物的用途還涉及預防和/或治療這些繼發(fā)性細菌感染。反轉錄病毒的病毒體由具有大約IOOnm直徑的顆粒的有包膜的顆粒組成，并且還含有兩個長度為7至IOkb的相同的單鏈RNA分子。反轉錄病毒的組要成分是 包膜，其由從宿主質膜獲得的脂雙層構成， 二聚體RNA，其具有5’端的帽和3’端的聚腺苷酸和 蛋白質，其含有作為病毒衣殼主要成分的gag蛋白，在病毒體成熟過程中的蛋白水解分裂中發(fā)揮功能的蛋白酶，負責合成病毒DNA和感染后整合進入宿主DNA的pol蛋白，和在病毒體結合和進入宿主細胞中發(fā)揮作用的env蛋白。HIV是屬于反轉錄病毒科(Retroviridae)家族和慢病毒屬(Ientivirus)的病毒。 其大體是球形的，具有大約120nm的直徑，由兩個拷貝的正單鏈RNA構成，該RNA結合核衣殼蛋白和病毒體發(fā)育所需的酶(例如反轉錄酶、蛋白酶、核糖核酸酶和整合酶)。所述衣殼被由病毒蛋白構成的基質包圍，所述病毒蛋白進一步被病毒包膜包圍，該包膜由兩層來自于人細胞膜的磷脂構成。在所述包膜中嵌入了來自于宿主細胞的其他蛋白和復雜HIV蛋白的拷貝。蛋白由帽和將該結構錨定到病毒包膜中的莖組成，所述帽由三個分子的糖蛋白構成。糖蛋白使病毒能夠與靶細胞附著和融合從而起始感染周期。HIV感染免疫系統(tǒng)和中樞神經系統(tǒng)的細胞。具體而言，HIV通過糖蛋白與靶細胞上的受體的吸附、病毒包膜與細胞膜的融合和釋放HIV衣殼到細胞中而進入巨噬細胞和T輔助細胞，特別是CD4+T細胞。穿透到細胞中后，HIV產生自身的新的拷貝，其繼續(xù)感染其它細胞。因此，HIV感染最終導致T輔助細胞數(shù)目的降低，這是通過三種主要機制通過直接病毒殺死受感染的細胞，增加受感染細胞中的凋亡率和通過識別受感染細胞的CD8細胞毒性淋巴細胞殺死受感染的CD4+T細胞。如果CD4+T細胞的水平降低到低于臨界水平，細胞介導的免疫性喪失，身體對機會性感染更易感。HIV可進一步分為HIV-I和HIV-2。對于HIV-1，存在亞型A至J，最常見亞型是 1A，1B，1C和ID0 HIV-2可分為亞型A至E。其比HIV-I致病性更低。除了 HIV以外，另一種人反轉錄病毒是人嗜T淋巴細胞病毒(human T-Iymphotropic virus)，特別是人嗜T淋巴細胞病毒1型(HTLV-1)。HTLV-1是人RNA反轉錄病毒，其導致T細胞白血病和T細胞淋巴瘤，并且也可參與脫髓鞘性疾病(demyelinating disease)，諸如熱帶痙攣性輕截癱。
其它反轉錄病毒包括禽白血病病毒(Avian leukosis virus)、勞斯肉瘤病毒 (Rous sarcome virus)、小鼠乳腺瘤病毒(Mouse mammary tumor virus)、鼠白血病病毒(Murin leukemia virus)、貓白血病病毒(Feline leukemia virus)、牛白血病病毒 (Bovine leukemia virus)、大目艮梭S盧皮膚肉瘤病毒(Walley dermal sarcoma virus) 和貓免疫缺陷病毒(Simian and Feline immunodef icency virus)、馬傳染性貧血病毒 (Equine infectious anemia virus)禾口猿泡沫病毒(Simian foamy virus)，它們導致疾病諸如貓白血病(leukemia)或肉瘤(sarcomas)，雞白血病或肉瘤，小鼠白血病或肉瘤，馬傳染性貧血，牛白血病和羊關節(jié)炎_腦炎(arthritis-encephalitis)。 按照本發(fā)明，使用茶薦子屬植物生產用于預防和/或治療病毒感染的組合物。茶薦子屬是包括大約150種開花植物的屬，其天然遍及北半球溫帶地區(qū)和中美洲和南美洲的山脈中。茶薦子屬包括醋栗(currants)和鵝莓(gooseberries)。本發(fā)明中特別感興趣的是黑茶薦子(Ribesnigrum L.) (R. nigrum L.)紅茶薦子(Ribes rubrum L. ) (R. rubrum L.)黑茶薦子(R. nigrum L.)和紅茶薦子(R. rubrum L.)含有不同濃度的類黃酮、萜類化合物和精油。例如，對于茶薦子屬植物的葉和果實濃度可不同。因此，在下文中，葉和果實分別進行考慮。科學術語“黑茶薦子葉(Ribes nigri folium(R. nigri folium)) ”是指黑茶薦子 (R. nigrum L.)的葉，而術語“黑茶薦子果實(Ribes nigri fructus (R. nigri fructus))" 是指黑茶薦子(R. nigrum L.)的果實。因此，紅茶薦子葉(Ribes rubri folium(R. rubri folium))是指紅茶薦子(R. rubrum L.)的葉，紅茶薦子果實(Ribes rubri fructus (R. rubri fructus))是指紅茶薦子(R. rubrum L.)的果實。類黃酮基本由兩個芳香的和一個氧化的雜環(huán)組成。利用0-雜環(huán)上的結構差別，可將類黃酮分為下列六組黃酮醇、黃烷醇、黃烷酮、黃酮、花色素苷和異類黃酮 (isoflavanoid)。黑茶薦子(R. nigrum L.)中檢測到一些成分是黃酮醇，諸如櫟精和楊梅黃酮和它們的糖苷，以及原花色素的二聚物或低聚物。黑茶薦子葉(R. nigri folium)包含痕量精油、黃酮醇苷(flavonolgylcoside) 和原花色素(proanthocyanidine)。黑茶薦子果實(R. nigri fructus)含有花色素 (anthocyanidins)禾口黃麗醇昔(flavonolglycosides)，特別是異搬皮素(isoquecitrin)， 楊梅黃酮-D-吡喃葡萄糖苷(myricetin-D-glucopyranosid)和rutosin。黑茶薦子果實(R. nigri fructus)的其它成分是果酸，諸如檸檬酸、異檸檬酸和蘋果酸，羥基肉桂酸 (hydroxycinammic acid)衍生物，維生素C和種子中的Y-亞油酸。紅茶薦子葉(R. rubri folium)含有黃酮醇苷，諸如紫云英苷(astragalin)和異槲皮素，原花色素(porcyanidines)和兒茶素(catechin)衍生物。紅茶薦子果實(R. rubri fructus)含有維生素C，果酸，果膠，原花色素和單寧。種子包含Y-亞油酸[Hager’ s Handbuch der pharmazeutischen Praxis, Drogen P-Z,5. , vollstandig neubearbeitete Auflage, Springer-Verlag, 1993, Seite 466-474]。按照本發(fā)明使用的組合物是從選自葉和椏枝的組的植物的至少一個氣生部分生產的。優(yōu)選地，使用在同一年中長回到原來狀態(tài)的植物氣生芽。通常，能夠使用植物氣生部分的所有元件，諸如葉、椏枝、花、果實和種子。優(yōu)選地，使用帶有葉和花的椏枝。在另一個優(yōu)選實施方案中，與上文或下文所列舉的任何一個實施方案組合，來自于果實的提取物被加入到由葉和椏枝產生的組合物中。可以在收獲后對植物的所述部分(包括葉、椏枝和果實)進行干燥或直接擠壓，意指處于自然狀態(tài)，當合適時，在打碎后，從而由擠壓產生汁。在進一步的實施方案中，與上文或下文所列舉的任何一個實施方案組合，所述植物部分在自然狀態(tài)下經歷使用溶劑的提取，諸如例如浸漬或滲濾。備選地，還可以對植物部分進行干燥和/或隨后在提取前，以適當?shù)姆绞酱蛩槌尚K，例如通過研磨或切斷它們的方法。在一個優(yōu)選的實施方案中，與上文或下文所列舉的任何一個實施方案組合，黑茶薦子葉(R.nigri folium)和/或紅茶薦子葉(R.rubri folium)用于制備本發(fā)明的提取物。在另一個優(yōu)選的實施方案中，與上文或下文所列舉的任何一個實施方案組合，黑茶薦子葉(R. nigri folium)和黑茶薦子果實(R. nigri fructus)用于制備提取物。在進一步優(yōu)選的實施方案中，與上文或下文所列舉的任何一個實施方案組合，使用紅茶薦子葉(R.rubri folium)和紅茶薦子果實(R.rubri fructus)。在另一個優(yōu)選實施方案中，與上文或下文所列舉的任何一個實施方案組合，黑茶薦子葉(R. nigri folium)和紅茶薦子果實(R.rubri fructus)用于制備提取物。在另一個優(yōu)選實施方案中，與上文或下文所列舉的任何一個實施方案組合，紅茶薦子葉(R. rubri folium)和黑茶薦子果實(R.nigri fructus)用于制備提取物。在一個實施方案中，與上文或下文所列舉的任何一個實施方案組合，所述組合物處于來自茶薦子屬植物的提取物形式。通常，進行利用合適溶劑對植物部分(包括葉、椏枝和果實)的提取。合適的溶劑是水，醇諸如甲醇、乙醇或異丙醇，或氯化了的溶劑諸如二氯甲烷，以及丙酮，乙酰丙酮，乙酸乙酯，氨水或冰醋酸，還有超臨界的二氧化碳。也能夠使用所提及的溶劑的混合物。在優(yōu)選實施方案中，與上文或下文所列舉的任何一個實施方案組合，使用水或水與甲醇或乙醇的混合物。提取通常在25°C到當合適時，高至所用溶劑的沸點的溫度下進行。優(yōu)選的是在 95-100°C下提取。提取通常進行2至8小時。優(yōu)選地，提取進行3至6小時，更優(yōu)選地進行4至5小時。此外，脂肪諸如豬肉脂肪，蠟諸如蜂蠟，或油諸如橄欖油和杏仁油可以用于提取。優(yōu)選地，使用杏仁油。為了獲得最高的可能產率，可以對植物材料提取許多次。優(yōu)選地，提取重復2至6 次，更優(yōu)選地3次。在該情形中，還可能在不同的提取步驟中使用不同的溶劑，或者在利用溶劑提取后可以進行利用脂肪、蠟或油的提取，或反之亦然。通過提取，獲得液體、半固體或固體初級產物，它們可以該形式用來生產用于預防和/或治療病毒感染的組合物。浸漬過程通常在室溫下，利用水和乙醇的混合物進行5-9天，優(yōu)選地，7天，該過程是通過將所述溶劑混合物倒在植物元件上，并容許其靜置所述的一段時間。按照本發(fā)明，植物部分的滲濾通常通過將該部分在95-100°C下，利用水處理4-5 小時獲得的，該過程是通過引導水流過植物部分實現(xiàn)的。
在使用前，還可以濃縮和/或干燥和/或進一步處理獲自利用溶劑提取，諸如浸漬或滲濾的粗制品。進一步的處理可以，例如，包括本領域技術人員已知的清洗步驟，諸如離心、過濾和傾析，從而從提取物中去除懸浮的物質。層析，諸如柱層析、氣相層析或HPLC或蒸汽蒸餾也可以用于純化。在優(yōu)選實施方案中，在不進行進一步的純化步驟的條件下，使用粗制品。隨后，可以將以該方法獲得的提取物進一步處理為干燥的提取物。為了生產干燥的提取物，可以通過例如噴霧干燥、冷凍干燥或真空干燥，從液體初級提取物、濃縮的提取物或清洗的提取物中去除溶劑。來自茶薦子屬植物的組合物能夠以上述各種形式用于預防和/或治療病毒感染。所述組合物優(yōu)選地用于預防和/或治療由鼻病毒、腺病毒或冠狀病毒引起的普通感冒病。在一個優(yōu)選實施方案中，與上文或下文所列舉的任何一個實施方案組合，黑茶薦子(R. nigrum L.)的提取物用于預防和/或治療由鼻病毒導致的感冒病。特別地，所述提取物是黑茶薦子葉(R.nigri folium)的提取物。在另一個優(yōu)選實施方案中，與上文或下文所列舉的任何一個實施方案組合，黑茶薦子(R. nigrum L.)的提取物用于預防和/或治療由腺病毒導致的感冒病。特別地，所述提取物是黑茶薦子葉(R.nigri folium)的提取物。在進一步優(yōu)選的實施方案中，與上文或下文所列舉的任何一個實施方案組合，黑茶薦子(R. nigrum L.)的提取物用于預防和/或治療由冠狀病毒導致的感冒病。更優(yōu)選的， 所述提取物是黑茶薦子葉(R.nigri folium)的提取物。所描述的提取物進一步用于預防和/或治療甲型和乙型流行性感冒。在一個優(yōu)選實施方案中，與上文或下文所列舉的任何一個實施方案組合，所述提取物適合用于預防和/ 或治療禽流感。特別地，所述提取物可用于預防和/或治療由亞型H7導致的禽流感。優(yōu)選地，黑茶薦子(R.nigrUm L.)的提取物用于預防和/或治療甲型和乙型流行性感冒，更優(yōu)選地使用黑茶薦子葉(R.nigri folium)的提取物。在另一個優(yōu)選實施方案中，來自于茶薦子屬植物的組合物可用于預防和/或治療由處于上文描述的每一種形式的反轉錄病毒導致的病毒感染。所述組合物優(yōu)選地用于預防和/或治療由慢病毒(lentiviruses)，特別是HIV-I和/或HIV-2導致的病毒感染。在進一步優(yōu)選的實施方案中，與上文或下文所列舉的任何一個實施方案組合，黑茶薦子(R. nigrum L.)的提取物用于預防和/或治療由反轉錄病毒導致的病毒感染。特別地，所述提取物是黑茶薦子葉(R.nigri folium)的提取物。特別地，所述提取物可用于預防和/或治療由HIV-I和/或HIV-2導致的病毒感染。因此本發(fā)明所述的組合物能夠作為藥物施用。除治療用途外，該組合物還適合于非_治療性的預防和/或治療普通感冒病。所述組合物可以以關于醫(yī)學和非-醫(yī)學應用領域中技術人員所熟悉的各種應用方式應用，例如，作為片劑、包衣片劑、泡騰片劑、膠囊劑、粉劑、顆粒劑、糖衣片劑、軟膏劑、 霜劑、凝膠劑、溶液劑或噴霧劑。優(yōu)選地，所述組合物作為鼻腔噴霧劑應用。在植物制劑和其他應 用形式中，可以用常規(guī)植物制劑輔助物，諸如片劑粘合劑、 填充劑、防腐劑、片劑打開劑、流量調節(jié)劑、軟化劑、潤濕劑、分散劑、乳化劑、溶劑、阻滯劑、抗-氧化劑、稠度調節(jié)劑、滲透性促進劑和/或推進氣體，處理所述組合物?？梢韵虬凑毡景l(fā)明使用的組合物中加入其他成分，諸如維生素和礦物。還能夠，例 如將該組合物添加到動物飼料或食料，諸如飲料中。以提取物的形式， 該組合物本身還可以作為茶進行沏泡。然而，對于茶制備，將熱水直接倒到所述植物部分， 例如茶薦子屬植物的葉上也是可能的。此外，所述組合物能夠是食物添加劑的成分，在冬季月份中對其的攝取能夠促進加強身體的防衛(wèi)，并從而防止例如，病毒感染。在進一步的實施方案中，與上文或下文列舉的任何一個實施方案組合，所述組合物能夠按照本發(fā)明作為溶液，特別是含漱液使用，從而預防和/或治療普通感冒病，特別是口和咽中的炎癥。所述組合物還能夠與其他植物的成分混合使用，在該情形中，所述成分優(yōu)選地處于植物提取物的形式。優(yōu)選地，使用具有相似或協(xié)同作用的植物或植物提取物的成分。實例是巖薔薇屬(genus Cistus)植物，尤其是灰毛巖薔薇(Cistus incanus)。處于應用形式的所述組合物的濃度依據(jù)應用的類型而變化。通常，對于固體應用形式，組合物的量總計0. 5-1，OOOmg/劑量單位。優(yōu)選地，組合物的量總計l_500mg/單位。 在液體應用形式中，組合物可以處于1μ g/ml-100mg/ml的濃度，優(yōu)選地，25 μ g/ml_50mg/ ml。在半固體應用形式的情形中，組合物的含量總計1-90重量％，優(yōu)選地5-75重量％。在優(yōu)選的實施方案中，與上文或下文列舉的任何一個實施方案組合，該組合物以片劑的形式施用。在該情形中，優(yōu)選地所述組合物處于提取物形式。最特別優(yōu)選地，所述組合物處于干燥提取物的形式。在進一步優(yōu)選的實施方案中，與上文或下文列舉的任何一個實施方案組合，為了局部的應用，以乳劑、軟膏劑、凝膠或霜劑的形式施用所述組合物。在該情形中，所述組合物優(yōu)選地以提取物的形式來使用，其中通過利用脂肪、蠟或油的提取方法從植物中抽出活性物質。此外優(yōu)選地，進一步將該提取物處理為干燥的提取物，隨后將其與脂肪、蠟或油混合或溶解于脂肪、蠟或油中。在優(yōu)選的實施方案中，與上文或下文列舉的任何一個實施方案組合，所述組合物處于氣溶膠或房間噴霧劑形式。優(yōu)選地，為此使用茶薦子屬的液體或固體提取物。除提取物外，氣溶膠或房間噴霧劑還能包含藥物無害物質、載體介質和助劑。氣溶膠或房間噴霧劑能夠用于消毒病毒接觸到的或能夠潛在接觸到的物體和房間，特別是，在其中運送人、動物和/或食料的所有類型的交通工具。例如，可以在起飛前，用本發(fā)明所述的氣溶膠或用按照本發(fā)明的房間噴霧劑噴灑飛機，從而防止病毒的傳播，并且從而最小化人群感染的風險。所述氣溶膠或房間噴霧劑還可以在人群面前，例如在等候室中噴灑，因為它無論如何不在人群中引起任何毒性作用。在進一步優(yōu)選的實施方案中，與上文或下文列舉的任何一個實施方案組合，所述組合物還能夠作為鼻試劑或作為吸入溶液施用。所述鼻試劑能夠作為鼻噴霧或作為鼻凝膠使用。為了施藥，可以使用多種施藥器和分散系統(tǒng)。按照本發(fā)明的茶薦子屬用途不僅限于人，而是對動物，特別是哺乳動物諸如寵物或家畜也是可能的。 下列實施例解釋本發(fā)明。 測試了茶薦子屬提取物的細胞毒性和細胞生存能力，及其針對鼻病毒的抗病毒活性，針對甲型和乙型流行性感冒的抗病毒活性和針對HIV的抗病毒活性。在測試針對鼻病毒的抗病毒活性的情形中，人類鼻病毒14型用作病毒分離群。 在測試針對流行性感冒的抗病毒活性的情形中，甲型流行性感冒病毒A/布拉迪斯拉發(fā)(Bratislava)/79 (H7N7) (FPV)(禽類)，甲型流行性感冒病毒A/野鴨(Mallard)/ 巴伐利亞(Bavarian)/1/2006 (H5N1)(禽類)以及甲型流行性感冒病毒A/波多黎各 (Puerto-Rico) /8/34 (HlNl) (PR8)(人)用作病毒分離群。Madin-Darby 犬腎(Madin-Darby canine kidney (MDCK))細胞和A549細胞用作宿主細胞系。為了確定提取物的特征，使用了下列檢查方法。另外，確定了提取物的毒物濃度。MDCK II犬腎上皮細胞用不同濃度的提取物(95至950 μ g/ml)處理30分鐘。然后，用同樣濃度的提取物處理細胞48小時。細胞病理學效應(CPE)的檢杳在第一試驗中，MDCK II犬腎上皮細胞用流行性感冒病毒株甲型流行性感冒病毒A/野鴨(Mallard) /巴伐利亞(Bavarian)/1/2006 (H5N1)和A/FPV/布拉迪斯拉發(fā) (Bratislava)/79 (H7N7)感染。受感染的細胞隨后用不同濃度的提取物(95，190，285，380， 475，570，665，760,855 和 950 μ g/ml)處理。在第二試驗中，細胞用不同濃度的提取物(95至950 μ g/ml)預處理30分鐘，隨后用流行性感冒病毒株甲型流行性感冒病毒A/野鴨(Mallard)/巴伐利亞 (Bavarian)/1/2006 (H5N1)和 A/FPV/布拉迪斯拉發(fā)(Bratislava)/79 (H7N7)感染。受感染的細胞隨后用不同濃度的提取物(95，190，285，380，475，570，665，760，855和950 μ g/ml)處理。在第三試驗中，含有病毒的感染溶液用不同濃度的提取物(95至950yg/ ml)預處理30分鐘。細胞用不同濃度的提取物(95至950 μ g/ml)預處理30分鐘，隨后用預處理的流行性感冒病毒株甲型流行性感冒病毒A/野鴨(Mallard)/巴伐利亞 (Bavarian)/1/2006 (H5N1)和 A/FPV/布拉迪斯拉發(fā)(Bratislava)/79 (H7N7)感染。受感染的細胞隨后用不同濃度的提取物(95，190，285，380，475，570，665，760，855和950 μ g/ml) 處理。確定CPE的50%的抑制的有效濃度(EC50)。 實施例制備來自黑茶薦子(Ribes nigrum L.)的提取物將椏枝和葉用于提取。將植物材料在室溫下在室外陰涼處干燥，直到降至最多 10%的殘留水含量。隨后，將植物部分切成< 8mm的大小。將切割的植物部分在95-100°C用10倍量的純水歐洲藥典(Ph. Eur.)進行滲濾 4-5小時。通過平板蒸發(fā)器，將得到的溶液在75-80°C的蒸汽溫度下濃縮到初始體積的 18-19%。干物質的含量總計約45%。使用帶有攪動器的蒸發(fā)器，通過將所述提取物在減壓(0.6巴(bar))下在 110-114°C加熱4小時的方式，而將干物質含量增加到50-51%。最后，在16毫巴(mbar)使用遞減的溫度梯度(140°C，120°C，90°C，20°C )進行真空傳送干燥(vacuum belt drying)。干物質的含量總計> 92 %，干燥的提取物總產率為 22-25%。然后將提取物碾碎。然后從這一提取物制備上文所述的儲液。50% 的 MDCK II 細胞死亡的濃度(TC50)是 8512士 11，40 μ g/ml。因此得出結論，所述提取物是無毒的?？共《净? 性的檢查人流行件感冒病毒為了研究抗病毒活性，A549肺上皮細胞用50 μ g/ml的提取物預處理30分鐘，隨后用已經用50 μ g/ml的提取物預處理30分鐘的流行性感冒病毒株A/PR8/34 (Hmi)感染。 感染后，細胞用50 μ g/ml的提取物再次處理30分鐘。分離培養(yǎng)基上清液并在噬菌斑測定中研究新形成的流行性感冒病毒。結果顯示于圖1中。從圖1中可知，觀察到大于一個數(shù)量級的病毒滴度的降低。在宿主細胞系中觀察到對不同流行性感冒病毒的病毒繁殖的強烈的抑制效應?！龊筥胃艤·_胞扁齡躺(CPE)白嫩*第一試驗(后處理細胞)顯示提取物的EC50值對于甲型流行性感冒病毒A/FPV/ 布拉迪斯拉發(fā)(Bratislava)/79 (H7N7)為390，93士85，5 μ g/ml，對于甲型流行性感冒病毒 A/野鴨(Mallard)/ 巴伐利亞(Bavarian)/1/2006 (H5m)為 165，3士8，55 μ g/ml。第二試驗(預處理和后處理細胞)顯示提取物的EC50值對于甲型流行性感冒病毒 A/FPV/ 布拉迪斯拉發(fā)(Bratislava)/79 (H7N7)為 278，35士48，45 μ g/ml，對于甲型流行性感冒病毒 A/野鴨(Mallard) / 巴伐利亞(Bavarian)/1/2006 (H5N1)為 83，6士2，85 μ g/ ml ο第三試驗(預處理和后處理細胞并且另外預處理病毒溶液)顯示提取物的EC50值對于甲型流行性感冒病毒A/FPV/布拉迪斯拉發(fā)(Bratislava) /79 (H7N7) 為46，55士6，65 μ g/ml,對于甲型流行性感冒病毒A/野鴨(Mallard) /巴伐利亞 (Bavarian)/1/2006(H5N1)為 13，3士1，9 μ g/ml。另外，沒有觀察到甲型流行性感冒病毒的神經氨酸酶的抑制。因此，可見茶薦子屬提取物能夠抑制由高致病性禽流行性感冒病毒導致的感染。 在所用的濃度，提取物對細胞沒有任何可檢測的損傷影響。這證明茶薦子屬提取物對流行感冒的傳染性的抑制效應。鼻病毒培養(yǎng)用人類鼻病毒14型(HRV)接種4個具有80 %匯合的HeLa細胞的T175培養(yǎng)瓶， 并在 33°C 培養(yǎng)一周。為此，在 16ml 感染培養(yǎng)基(DMEM (Dulbecco' s Modified Eagle Medium)，2 % FCS (胎牛血清)，10_20mM MgCl2)中混合 50 μ 1 HRV14 (病毒滴度 108/ml TCID(組織培養(yǎng)感染劑量))，并將4ml加入到每個T175中。然后向每個T175中填入IOml 感染培養(yǎng)基，因此每個T175中有14ml感染培養(yǎng)基。一旦溶解了 70%的貼壁細胞，就收獲病
ο鼻病毒的純化首先以3，OOOrpm離心病毒上清液30分鐘，從而去除細胞沉淀。在超速離心機中， 在蔗糖緩沖物(cushions) (1.5ml處于水中的蔗糖65%，300 μ 1 IOxPBS (磷酸鹽緩沖鹽水)，1.2ml水)上，以35，OOOrpm(轉子類型SW41 Ti，在貝克曼(Beckman)異質同晶聚合物管中)，4°C，離心病毒上清液3小時，并將沉淀引入到100 μ 1感染培養(yǎng)基中。用IOOkDa截留值的過濾器(Centricon YM 100)在3，300rpm，4°C，進行進一步的病毒濃縮1小時。保留物含有純化的病毒濃縮物；丟棄濾出液。

為了檢測茶薦子屬提取物對HRV14傳染性的效應，將茶薦子屬提取物加入到感染培養(yǎng)基中，或者用茶薦子屬提取物額外預處理病毒。在結果中可見茶薦子屬提取物能夠防止感染和由此在感染培養(yǎng)基中和在進行的所有批次中病毒的額外預處理后防止細胞層的破壞。茶薦子屬提取物對細胞沒有任何可檢測到的損害影響。這證明了茶薦子屬提取物對鼻病毒傳染性的抑制效應。在HeLa-P4測定中體外測試物質的抗病毒活性測定原理HeLa_P4 細胞(來自于 NIH AIDS 研究和參照規(guī)劃(NIH AIDS Research and Reference Program))是這樣的細胞系，其已經被人⑶4_和CCR5受體的基因轉染并且其因此可用HIV-I感染(CXCR4-受體在該細胞上表達)。為了定量HIV感染，該細胞攜帶報道基因，即半乳糖苷酶基因，其在HIV-I啟動子的控制下。感染后，HIV-I的Tat-蛋白反式激活報道基因，感染的程度可通過測量細胞裂解物中的酶活性來定量。關于沒有物質添加的病毒感染，HIV-I感染的抑制導致更低的半乳糖苷酶活性。背景通過測量沒有向其添加病毒的細胞中的酶活性來定義。由于原則上更低感染也可能是基于物質對細胞的毒性效應，所以除了所述測定以外，也進行了細胞毒性測定。麵測試物質如下制備添加Img的每種樣品在Eppendorf管中，在渦旋下于60°C在 Iml的磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)中溶解該樣品。溶液在無菌條件下過濾并置于新的Eppendorf 管中。作為陽性對照，使用T20-肽(已知的HIV-I進入抑制劑；Enfuvirtide)。制備測試化合物和T20在細胞培養(yǎng)基中的稀釋系列，其中樣品具有濃度78，15. 6，7. 8，3. 9,0. 8，
0.4 μ g/ml，陽性對照 T20 以濃度 39，19. 5，3. 9，1. 95，0. 78，0. 39，0. 039nM 使用。每種物質的濃度進行三次重復測試。第1天在96-孔微量滴定板中每孔100 μ 1培養(yǎng)基(DMEM，10% FCS, 2% L-谷氨酰胺，青霉素/鏈霉素，500 μ g/ml geniticinayg/ml嘌呤霉素(puromycin))中鋪板
1.5x 104HeLa-P4細胞，在37°C溫育過夜。第2天在L3實驗室，78 μ 1的每種物質的稀釋物(78，15. 6，7. 8，3. 9，0. 8，
0.4 μ g/ml)與 22 μ 1 的 HIV-1 Lai 病毒在 37°C 預溫育 30 分鐘，Τ20 稀釋物(39，19. 5，3. 9，
1.95，0. 78，0. 39，0. 039nM)以相同方式處理。培養(yǎng)基從HeLa_P4細胞中去除，細胞用100 μ 1 的PBS洗滌，將物質-病毒混合物添加到細胞中。細胞在37°C溫育2h，其后去除上清液，用 PBS洗滌，添加100 μ 1的新鮮培養(yǎng)基，細胞在37°C溫育2天。第4天去除上清液，細胞用ΙΟΟμΙ的PBS洗滌，在每孔50μ1的裂解緩沖液 (2. 5ml 甘油；1. 25ml MES-Tris, 25 μ 1 IM DTT,250y 1 Triton X100，H2O 加至(ad) 25ml) 中冰上裂解10分鐘并在_80°C移出。為從L3實驗室移出，板外部用Biguanid噴灑。在白色微量滴定板中，34 μ 1 的反應緩沖液(15 μ 1 IM MgCl2, 3ml 0. 5M NaH2P04/Na2HP04,150 μ 1 Galacton 100χ，加至15ml H2O)放入每孔中并添加20 μ 1的細胞裂解液。微量滴定板在暗中振蕩45至60分鐘，然后，在添加每孔25 μ 1的增強劑(80 μ 1 IOM NaOH, 400 μ 1 IOx Emerald (Applied Biosystems (應用生物系統(tǒng)))，加至 4ml H2O)后，在光度計(Lumistar Galaxy, BMG Labtechnologies (BMG 實驗室技術)，Offenburg (奧芬堡)；settings (設置)microplate (微板)Dynatech 96, number of intervals (間隔數(shù))50,measurement interval time (測量間隔時間):0· 2 秒，positioning delay (定位延遲):0· 5 秒，total measurement time/well (總測量時間 / 孑L) 10 秒，gain (±曾益)250, start interval (起始間隔)1, stop interval (終止間隔)50)上測量酶活性。細胞毒性測試測定原理 細胞毒性測定根據(jù)對細胞的毒性效應分析物質。HeLa-P4細胞用于細胞毒性測定。使用可商購試劑盒(ViaLight Plus試劑盒， Lonza(龍沙)，Rockland(羅克蘭)，美國)。試劑盒的原理是基于測量代謝活性(即活的) 細胞的細胞質中ATP的量。細胞生存能力的任何干擾導致ATP的量降低。ATP的量通過生物發(fā)光測量來確定，其中光通過來自于ATP的酶熒光素酶和底物熒光素在氧存在下形成。 發(fā)光強度與ATP濃度成比例，并在光度計(Lumistar Galaxy,BMG Labtechnologies (BMG實驗室技術)，Offenburg (奧芬堡))上確定。鐘測試物質根據(jù)在HeLa-P4測定中體外測試抗病毒活性如上文所述進行制備。每種物質的濃度重復四次測試。第1天在96-孔微量滴定板中每孔100 μ 1培養(yǎng)基(DMEM，10% FCS, 2% L-谷氨酰胺，青霉素/鏈霉素，SOOyg/ml geniticin，1 μ g/ml嘌呤霉素)中鋪板1.5x 104HeLa-P4細胞，在37°C溫育過夜。第2天去除培養(yǎng)基并用100 μ 1的PBS洗滌細胞。78 μ 1的每種物質稀釋物(78， 15. 6，7. 8，3. 9，0. 8，0. 4 μ g/ml)和22 μ 1的培養(yǎng)基置于96-孔微量滴定板的每個孔中，并在 37°C溫育 2h，T20 稀釋物(39，19. 5，3. 9，1.95，0.78，0.39，0.039nM)以相同的方式處理，細胞在37°C溫育2天。第4天細胞從保溫箱中取出，在室溫放置lOmin。去除上清液，細胞用每孔150 μ 1 的培養(yǎng)基洗滌三次，在50 μ 1的裂解緩沖液(2. 5ml甘油；1. 25ml MES-Tris, 25 μ 1 IM DTT， 250 μ 1 Triton X100，H2O加至25ml)中裂解。板在室溫放置10分鐘。在白色微量滴定板中，每孔中放置100 μ 1的AMR-Plus試劑并且添加40 μ 1的細胞裂解液(無氣泡)。微量滴定板在室溫溫育2分鐘，然后在光度計(Lumistar Galaxy, BMG Labtechnologies (BMG 實驗室技術)，Offenburg (奧芬堡)；settings (設置) microplate (微板)Dynatech 96, number of intervals (間隔數(shù))40, measurement interval time (測量間隔時間)0· 25 秒，positioning delay (定位延遲):0. 5 秒，total measurement time/well (總測量時間 / 孑L) 10 秒，gain (±曾益)190, start interval (起始間隔):l,stop interval (終止間隔):40，test type(測試類型):well mode(孔模式)， reading direction(讀數(shù)方向)horizontal ( 7ΚΨ ))上測量。在結果中可見茶薦子屬提取物能夠抑制由HIV導致的感染。在所用的濃度，提取物對細胞沒有任何可檢測到的損害影響。這證明了茶薦子屬提取物對HIV傳染性的抑制效應。
權利要求
1.用于預防和/或治療病毒感染的組合物，其中所述組合物包含來自于茶薦子屬植物的至少一個氣生部分的提取物，其中所述氣生部分選自由葉和椏枝組成的組。
2.根據(jù)權利要求1的組合物，其中所述病毒感染包括普通感冒病。
3.根據(jù)權利要求2的組合物，其中所述普通感冒病包括由鼻病毒、腺病毒和/或冠狀病毒導致的原發(fā)感染。
4.根據(jù)權利要求2或3的組合物，其用于治療頭傷風。
5.根據(jù)權利要求1的組合物，其中所述病毒感染包括流行性感冒。
6.根據(jù)權利要求5的組合物，其中所述流行性感冒是禽流感。
7.根據(jù)權利要求1的組合物，其中所述病毒感染包括由反轉錄病毒導致的病毒感染， 優(yōu)選由外源性反轉錄病毒導致的病毒感染。
8.根據(jù)權利要求7的組合物，其中所述病毒感染是由HIV-I或HIV-2導致的。
9.根據(jù)權利要求1至8中至少一項的組合物，其中所述植物是黑茶薦子(RibesnigrumL.)。
10.根據(jù)權利要求1至8中至少一項的組合物，其中所述植物是紅茶薦子(Ribes rubrum L.).
11.根據(jù)權利要求1至10中至少一項的組合物，其中所述組合物還包含茶薦子屬植物果實的提取物。
12.根據(jù)權利要求1至11中至少一項的組合物，其中所述組合物處于液體、干燥或半固體形式。
13.根據(jù)權利要求1至12中至少一項的組合物，其中所述提取物是水提取物或醇提取物。
14.根據(jù)權利要求1至13中至少一項的組合物，其中所述組合物口服、鼻內或局部施用。
15.根據(jù)權利要求1至14中至少一項的組合物，其中所述組合物作為鼻試劑、吸入混合物、氣溶膠或房間噴霧劑存在。
16.根據(jù)權利要求1至15中至少一項的組合物，其中所述組合物處于片劑、包衣片劑、 泡騰片劑、膠囊劑、粉劑、顆粒劑、糖衣片劑、軟膏劑、凝膠劑、霜劑、含漱液或植物汁的形式。
17.來自于茶薦子屬植物的至少一個氣生部分的提取物在制備用于預防和/或治療病毒感染的藥物中的用途，其中所述氣生部分選自由葉和椏枝組成的組。
全文摘要
本發(fā)明涉及用于預防和/或治療病毒感染的包含茶藨子(Ribes)屬提取物的組合物。具體而言，所述組合物可用于預防和/或治療由反轉錄病毒導致的流行性感冒、普通感冒病或病毒感染的癥狀。
文檔編號A61K36/185GK102245194SQ200980150085
公開日2011年11月16日 申請日期2009年11月27日 優(yōu)先權日2008年12月12日
發(fā)明者喬治斯·潘達利斯 申請人:喬治斯·潘達利斯