專利名稱：：一種含溴吲哚生物堿的制備方法與應用的制作方法
技術領域：
：本發(fā)明涉及一種具有抗腫瘤活性的含溴吲哚生物堿化合物的制備方法與應用。
背景技術：
：瘤狀軟骨凹丁頁藻[Chondrophycuspapillous(C.Agardh)GarbaryetHarper]屬于紅藻門(Rhodophyta)，紅藻綱(Rhodophyceae)，仙菜目(Ceramiales)，松節(jié)藻科(Rhodomelaceae)，凹頂藻屬(Laurencia)中的亞屬。近年來的化學和藥理研究表明，凹頂藻中含有豐富的結構新穎的化合物，這些化合物具有獨特的生物活性，如抗腫瘤，抗病毒，抗炎或抗真菌等。含溴吲哚生物堿就是其中的一種，它的研究將會在醫(yī)藥及相關領域起到重大作用。
發(fā)明內容本發(fā)明的目的在于提供一種含溴吲哚生物堿的制備方法與其在制備抗腫瘤藥物中的應用，它能彌補現(xiàn)有技術的上述需求?！N含溴吲哚生物堿的制備方法，其特征在于將瘤狀軟骨凹頂藻用水清洗，粉碎，用乙醇水溶液浸提，再用氯仿與甲醇的混合液浸提，將所得的兩種浸提液混合，減壓濃縮，得到粗浸膏；將該粗浸膏用水稀釋，再用乙酸乙酯萃取，將所得萃取液減壓濃縮后，得乙酸乙酯相浸膏，進行硅膠柱減壓層析，經(jīng)反復硅膠柱常壓層析和S印hadexLH-20凝膠柱層析，得到含溴吲哚生物堿化合物。上述含溴吲哚生物堿在制備抗腫瘤藥物中的應用。本發(fā)明制備的含溴吲哚生物堿化合物對慢性髓原白血病細胞K562、人胃癌細胞SGC-7901和人肝癌細胞SMMC-7721具有較強的抑制活性，可用作抗腫瘤藥物。原料易得，應用前景廣闊。具體實施例方式制備本發(fā)明的化合物時，(1)將采自海南三亞梅山海域的瘤狀軟骨凹頂藻[Chondrophycusp即illous(C.Agardh)]用自來水清洗，除去泥沙，將該瘤狀軟骨凹頂藻樣品粉碎后，用95%(體積百分數(shù))的乙醇水溶液浸提3次，然后再用氯仿與甲醇的混合液浸提3次。合并兩種浸提液，減壓濃縮得粗浸膏。將該粗浸膏用500mL水稀釋后，再用等體積的乙酸乙酯萃取6次，將所得萃取液減壓濃縮得到乙酸乙酯相浸膏，所述的氯仿與甲醇的混合液中氯仿與甲醇的體積比為i:l-2，本實施例為i:i。密封保存于4t:冰箱中備用。(2)上述乙酸乙酯相浸膏(50.5g)經(jīng)過減壓硅膠柱層析(VLC)，石油醚-乙酸乙酯梯度(ioo:o，90:io，so:20，60:40，50:50，30:70，o:ioo)洗脫，將其按照極性大小分成7個組分(Fr.1Fr.7)。Fr.2(5.0g，石油醚-乙酸乙酯90:10)經(jīng)硅膠柱層析，用石油醚_乙酸乙酯梯度洗脫，得到4個組分(Fr.2-1Fr.2_4)，F(xiàn)r.2_2經(jīng)反復硅膠3柱層析和S印hadexLH-20凝膠柱層析得2，3，5，6_四溴+甲基吲哚(25.0mg)和2，3，5，6_四溴吲哚(90.Omg)。制得的化合物結構式為R式中R為CH3時，本化合物為2，3，5，6-四溴-l-甲基吲哚，R為H時，本化合物為2，3，5，6-四溴噴哚。上述制得的含溴吲哚生物堿的體外抗腫瘤活性篩選試驗及其結果(1)抗腫瘤活性測試采用四甲基偶氮唑鹽(MTT)微量酶反應比色法，對慢性髓原白血病細胞K562、人胃癌細胞SGC-7901和人肝癌細胞SMMC-7721細胞株的體外抗腫瘤活性進行測試。(2)活性測試方法實驗設陰性對照組(水)、匿SO溶劑對照組、陽性對照組(絲裂霉素C)和8個不同濃度(0.2，0.4，0.8，1.6，3.2，6.4，12.8，25.6)的待測樣品組，每個濃度設3個平行。選取對數(shù)生長期細胞，用RPMI1640完全培養(yǎng)基制成單細胞懸浮液，用血球計數(shù)板計數(shù)，按50000個/mL接種90iiL于96孔平底細胞培養(yǎng)板，置于體積分數(shù)為5%0)2、濕度90%以上、37"溫箱中培養(yǎng)。24h后取出，加入lmg待測樣品，繼續(xù)培養(yǎng)72h后取出，置于顯微鏡下觀察每孔細胞形態(tài)，記錄細胞形態(tài)變化情況。然后每孔加入5mg/mL的MTT溶液50yL，37。C反應4h后，吸棄上清液，再向各孔加入100LDMSO，充分溶解，將細胞培養(yǎng)板置于MK3酶標儀上，用570nm波長測量各孔的吸光度(A)，按下列公式求生長抑制率<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>陰性對照組平均A值根據(jù)樣品濃度與抑制率的關系，求出抑制率為50%時樣品的半數(shù)抑制濃度(ICJ，樣品活性結果即以IC5。表示。(3)活性測試結果試驗結果顯示，本發(fā)明制備的含溴吲哚生物堿能有效的抑制慢性髓原白血病細胞K562、人胃癌細胞SGC-7901和人肝癌細胞SMMC-7721的生長。含溴噴哚生物堿對抑制腫瘤細胞株的IC5。值g/mL)見表1。表1本發(fā)明制備的兩種化合物的體外抗腫瘤活性(IC5。，yg/mL)<table>tableseeoriginaldocumentpage4</column></row><table>注MitomycinC，為陽性對照藥。權利要求一種含溴吲哚生物堿的制備方法，其特征在于將瘤狀軟骨凹頂藻用水清洗，粉碎，用乙醇水溶液浸提，再用氯仿與甲醇的混合液浸提，將所得的兩種浸提液混合，減壓濃縮，得到粗浸膏；將該粗浸膏用水稀釋，再用乙酸乙酯萃取，將所得萃取液減壓濃縮后，得乙酸乙酯相浸膏，進行硅膠柱減壓層析，經(jīng)反復硅膠柱常壓層析和SephadexLH-20凝膠柱層析，得到含溴吲哚生物堿。2.權利要求1所述的含溴吲哚生物堿在制備抗腫瘤藥物中的應用。全文摘要本發(fā)明涉及一種含溴吲哚生物堿的制備方法與應用，制備時，將瘤狀軟骨凹頂藻用水清洗，粉碎，用乙醇水溶液浸提，再用氯仿與甲醇的混合液浸提，將所得的兩種浸提液混合，減壓濃縮，得到粗浸膏；將該粗浸膏用水稀釋，再用乙酸乙酯萃取，將所得萃取液減壓濃縮后，得乙酸乙酯相浸膏，進行硅膠柱減壓層析，經(jīng)反復硅膠柱常壓層析和SephadexLH-20凝膠柱層析，得到含溴吲哚生物堿。本發(fā)明制備的含溴吲哚生物堿對慢性髓原白血病細胞K562、人胃癌細胞SGC-7901和人肝癌細胞SMMC-7721具有較強的抑制活性，可用作抗腫瘤藥物。原料易得，應用前景廣闊。文檔編號A61P35/02GK101774959SQ20091025655公開日2010年7月14日申請日期2009年12月24日優(yōu)先權日2009年12月24日發(fā)明者孫玲玲,王長云,邵長倫申請人:中國海洋大學