專(zhuān)利名稱(chēng)：：生物型高交聯(lián)網(wǎng)狀緩釋ecmo涂層材料及其制備方法與應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種涂層材料及其制備方法與應(yīng)用，尤其是生物型高交聯(lián)網(wǎng)狀緩釋ECMO涂層材料及其制備方法與應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：心肺衰竭是一個(gè)嚴(yán)重的全球性公眾健康和臨床問(wèn)題，有著很高的病殘率和死亡率。終末期心肺疾病最有效的手段是心肺移植，但由于供體匱乏而限制心肺移植廣泛的開(kāi)展，許多患者在等待心臟移植或心肺移植中死去，而另一些可逆性的心肺衰竭者由于很難渡過(guò)短暫的危重關(guān)而喪生。隨著體外膜肺氧合(ECMO)技術(shù)的出現(xiàn)，極大的提高了危重心肺患者的救治率。體外膜肺氧合(ECMO)是運(yùn)用生物工程技術(shù)搶救垂?；颊呱男路椒ǎ珽CMO本質(zhì)是一種改良的人工心肺機(jī)，最核心的部分是肝素涂層的膜肺、血泵、管道及插管；膜肺和血泵分別起人工肺和人工心的作用。當(dāng)患者的心肺功能?chē)?yán)重受損，對(duì)常規(guī)治療無(wú)效時(shí)，ECMO可以較長(zhǎng)時(shí)間全部或部分代替心肺功能，使心臟、肺臟得以充分休息，以爭(zhēng)取心臟、肺臟病變治愈及功能恢復(fù)的時(shí)間。ECMO實(shí)施的關(guān)鍵是其管路的肝素涂層技術(shù)。肝素涂抹表面(HCS)技術(shù)是在管路內(nèi)壁結(jié)合肝素，肝素保留抗凝活性，通過(guò)在人工材料表面涂覆肝素可有效改善人工材料的血液生物相容性，減輕術(shù)后的全身炎性反應(yīng)。作為ECMO中肝素減量的唯一方法，肝素涂層技術(shù)的臨床應(yīng)用也越來(lái)越受到人們的重視。目前肝素涂層方法大體上可分為三類(lèi)(l)離子鍵結(jié)合方式離子鍵的結(jié)合方式是利用肝素本身含有大量負(fù)電荷的屬性，將高分子材料表面引入帶正電荷的季胺基團(tuán)偶聯(lián)劑、表面活性劑或含有陽(yáng)離子的聚合物，再與肝素作用，使材料表面靠離子鍵作用形成肝素化層，由于離子鍵結(jié)合的不穩(wěn)定性，具有親和力的白蛋白等血漿大分子物質(zhì)可以同肝素結(jié)合而導(dǎo)致肝素分子脫落，所以?xún)H能作為短期使用；(2)共價(jià)鍵結(jié)合方式此種結(jié)合方式一般利用高分子材料表面的-CNS基、-NH2基、-OH基等特異性活性基團(tuán)與肝素分子的-OH基作用來(lái)固定肝素，但由于肝素具有大量功能性基團(tuán)，往往與材料表面的結(jié)合過(guò)于牢固，導(dǎo)致肝素分子失去活性，因而往往不能得到預(yù)期的抗凝效果；(3)終點(diǎn)固定方式終點(diǎn)固定方式首先在生物材料表面制備一種約束性離子復(fù)合物，再通過(guò)一種控制的亞硝酸來(lái)活化肝素，將肝素以共價(jià)鍵方式固定于含氨基的材料表面，此種固定方式成本高、且脫落的涂層材料會(huì)對(duì)人體造成傷害。綜上所述，目前肝素涂層技術(shù)并不能達(dá)到理想的生物相容性，仍具有一定的局限性，因此研發(fā)一種新的ECMO涂層材料是現(xiàn)階段亟待解決的一個(gè)重要問(wèn)題。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題在于提供生物型高交聯(lián)網(wǎng)狀緩釋ECMO涂層材料。本發(fā)明所要解決的另一技術(shù)問(wèn)題在于提供上述生物型高交聯(lián)網(wǎng)狀緩釋ECMO涂層材料的制備方法。本發(fā)明所要解決的另一技術(shù)問(wèn)題在于提供上述生物型高交聯(lián)網(wǎng)狀緩釋ECM0涂層材料的應(yīng)用。本發(fā)明所要解決的另一技術(shù)問(wèn)題在于提供生物型高交聯(lián)網(wǎng)狀緩釋ECMO涂層管路。本發(fā)明所要解決的另一技術(shù)問(wèn)題在于提供生物型高交聯(lián)網(wǎng)狀緩釋ECMO涂層管路的制備方法。為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明的技術(shù)方案是生物型高交聯(lián)網(wǎng)狀緩釋ECMO涂層材料，主要由帶負(fù)電荷的天然生物多糖高分子與達(dá)到一定治療濃度的抗凝血物質(zhì)結(jié)合形成的復(fù)合物，其中帶負(fù)電荷的天然生物多糖高分子與抗凝血物質(zhì)的重量用量關(guān)系為90-99:1-10，即抗凝血物質(zhì)的重量百分比為1-10%，從而使抗凝血物質(zhì)濃度達(dá)到抗凝血性能，其結(jié)合方式為物理共混和物理吸附。優(yōu)選的，上述生物型高交聯(lián)網(wǎng)狀緩釋ECMO涂層材料，所述抗凝血物質(zhì)為肝素或低分子肝素等抗凝血藥物。優(yōu)選的，上述生物型高交聯(lián)網(wǎng)狀緩釋ECMO涂層材料，還包括與帶負(fù)電荷的天然生物多糖高分子進(jìn)行交聯(lián)的可提高強(qiáng)度的聚乙烯醇類(lèi)聚合物，其中聚乙烯醇類(lèi)聚合物與帶負(fù)電荷的天然生物多糖高分子、抗凝血物質(zhì)的重量用量關(guān)系為10-30:60-89:1-10，即抗凝血物質(zhì)的重量百分比為1-10%，從而有效增加所述涂層材料的彈性、柔韌性、含水率、延長(zhǎng)緩釋時(shí)間，使其達(dá)到臨床應(yīng)用要求。優(yōu)選的，上述生物型高交聯(lián)網(wǎng)狀緩釋ECMO涂層材料，還包括與帶負(fù)電荷的天然生物多糖高分子形成包囊材料的帶正電荷的天然生物多糖高分子，其中帶正電荷的天然生物多糖高分子與帶負(fù)電荷的天然生物多糖高分子、抗凝血物質(zhì)的重量用量關(guān)系為45.0-49.5:45.0-49.5:1-10，即抗凝血物質(zhì)的重量百分比為1-10%。上述生物型高交聯(lián)網(wǎng)狀緩釋ECMO涂層材料的制備方法帶負(fù)電荷的天然生物多糖高分子與抗凝血物質(zhì)以物理共混和物理吸附的形式結(jié)合，形成緩釋生物多糖高分子_抗凝血物質(zhì)復(fù)合物。優(yōu)選的，上述生物型高交聯(lián)網(wǎng)狀緩釋ECMO涂層材料的制備方法先將高強(qiáng)度的聚乙烯醇類(lèi)聚合物與帶負(fù)電荷的天然生物多糖高分子進(jìn)行交聯(lián)，再與抗凝血物質(zhì)以物理共混和物理吸附的形式結(jié)合，利用聚乙烯醇類(lèi)聚合物的高強(qiáng)度和天然生物多糖高分子的高含水率優(yōu)勢(shì)，制備具有彈性好、柔韌性大和含水率高、緩釋時(shí)間長(zhǎng)的緩釋生物多糖高分子_抗凝血物質(zhì)復(fù)合物。優(yōu)選的，上述生物型高交聯(lián)網(wǎng)狀緩釋ECMO涂層材料的制備方法先將帶正電荷的天然生物多糖高分子與帶負(fù)電荷的天然生物多糖高分子通過(guò)靜電自組裝形成包囊材料，再對(duì)抗凝血物質(zhì)進(jìn)行微膠囊化，以保證抗凝血物質(zhì)在體內(nèi)的穩(wěn)定性，調(diào)節(jié)抗凝血物質(zhì)的釋放時(shí)間，使其達(dá)到一種長(zhǎng)期平穩(wěn)緩釋的效果。上述三種緩釋生物多糖高分子_抗凝血物質(zhì)復(fù)合物交聯(lián)后肝素等抗凝血物質(zhì)有不同的釋放速率，可以根據(jù)臨床應(yīng)用的需要自由進(jìn)行選擇。上述生物型高交聯(lián)網(wǎng)狀緩釋ECM0涂層材料在制備膜肺、血泵、管道或插管方面的應(yīng)用。生物型高交聯(lián)網(wǎng)狀緩釋ECMO涂層管路，是在體外循環(huán)管路的高分子材料內(nèi)表面上通過(guò)能夠形成凝膠涂層的二價(jià)金屬離子交聯(lián)上述生物型高交聯(lián)網(wǎng)狀緩釋ECM0涂層材料的管路。上述生物型高交聯(lián)網(wǎng)狀緩釋ECMO涂層管路的制備方法1.體外循環(huán)管路的高分子材料內(nèi)表面離子修飾①體外循環(huán)高分子材料內(nèi)表面預(yù)處理預(yù)處理是對(duì)體外循環(huán)高分子材料管路內(nèi)表面進(jìn)行清洗等，方法是利用溶液浸泡和/或超聲處理等方式；②體外循環(huán)管路的高分子材料內(nèi)表面通過(guò)Ca2+、Fe2+、Zn2+等能夠形成凝膠涂層的二價(jià)金屬離子進(jìn)行修飾在預(yù)處理過(guò)的體外循環(huán)高分子材料內(nèi)表面吸附一層Ca2+、Fe2+、Zn2+等二價(jià)金屬離子化合物，經(jīng)過(guò)干燥和固化等步驟，完成體外循環(huán)管路的高分子材料內(nèi)表面離子修飾；2.體外循環(huán)修飾管道與上述生物型高交聯(lián)網(wǎng)狀緩釋ECMO涂層材料交聯(lián)①帶負(fù)電荷的天然生物多糖高分子與體外循環(huán)管路的高分子材料內(nèi)表面的二價(jià)金屬離子絡(luò)合形成離子交聯(lián)纖維狀聚合物，這種纖維狀聚合物具有很好的生物相容性和生物粘連性，經(jīng)二價(jià)陽(yáng)離子修飾的體外循環(huán)高分子材料內(nèi)表面，進(jìn)行化學(xué)交聯(lián)在體外循環(huán)管道內(nèi)壁形成網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，具有緩釋肝素等抗凝血物質(zhì)的抗凝血性能；②上述生物型高交聯(lián)網(wǎng)狀緩釋ECMO涂層材料的天然生物多糖高分子包埋物質(zhì)，即抗凝血物質(zhì)再經(jīng)離子交聯(lián)方法固定于體外循環(huán)管路的高分子材料內(nèi)表面，這樣不僅可以保持肝素等抗凝血物質(zhì)的活性，而且可以使肝素等抗凝血物質(zhì)達(dá)到緩慢釋放。本發(fā)明的有益效果是所述生物型高交聯(lián)網(wǎng)狀緩釋ECMO涂層材料，選擇天然生物多糖高分子復(fù)合載體材料包埋肝素等抗凝血物質(zhì)形成生物型高交聯(lián)網(wǎng)狀緩釋ECMO涂層材料，利用該天然生物多糖與二價(jià)金屬離子絡(luò)合形成多點(diǎn)位離子交聯(lián)纖維狀聚合物的特點(diǎn)，將體外循環(huán)管路的高分子材料內(nèi)表面用二價(jià)金屬離子修飾，再經(jīng)多點(diǎn)位高交聯(lián)結(jié)合緩釋生物多糖高分子-抗凝血物質(zhì)復(fù)合物，分別在體外循環(huán)管路的內(nèi)壁形成網(wǎng)狀復(fù)合物，使其具有緩釋肝素等抗凝血物質(zhì)的作用，達(dá)到抗凝血功能，所述涂層材料在提高涂層管道的血液相容性、提高肝素等抗凝血物質(zhì)的結(jié)合密度、增強(qiáng)安全性、降低醫(yī)療費(fèi)用等方面具有十分重要的意義。將本發(fā)明所述的生物型高交聯(lián)網(wǎng)狀緩釋ECMO涂層管路應(yīng)用到復(fù)雜、重癥心臟病手術(shù)患者體外循環(huán)中，可減少肝素等抗凝血物質(zhì)的用量，使血液在低ACT水平時(shí)不在管路產(chǎn)生血栓；并能減少炎癥反應(yīng)、保護(hù)血小板及凝血因子，且脫落的涂層材料不會(huì)對(duì)人體造成傷害；也可減少病人術(shù)后失血和庫(kù)血用量、縮短拔管時(shí)間、病人在ICU停留時(shí)間及住院時(shí)間、相應(yīng)減少住院費(fèi)用，從而抵消了使用肝素等涂層管道增加的費(fèi)用，并能部分緩解臨床血荒問(wèn)題。具體實(shí)施例方式為了使本領(lǐng)域的技術(shù)人員更好的理解本發(fā)明的技術(shù)方案，下面結(jié)合具體實(shí)施例方式對(duì)本發(fā)明所述技術(shù)方案作進(jìn)一步的詳細(xì)說(shuō)明。實(shí)施例1將濃度為18mM的FeCI2溶液50ml，注入一端封閉的25cm醫(yī)用聚氯乙烯體外循環(huán)管道中，37t:水浴30min后倒出剩余溶液，反復(fù)3次，真空常溫下干燥后備用。配制l.6X褐藻酸鈉溶液95ml，加入肝素后溶液濃度為0.5mg/ml，攪拌30分鐘，室溫放置過(guò)夜。將經(jīng)過(guò)18mM的FeCl2處理過(guò)的25cm長(zhǎng)的醫(yī)用聚氯乙烯管道一端封閉，另一端注入1.6%褐藻酸鈉與0.5%(pH=1)肝素溶液共100ml，37t:中水浴30min后倒出剩余溶液，反復(fù)3次，真空常溫下干燥；剩余溶液用于測(cè)定肝素濃度，計(jì)算出醫(yī)用聚氯乙烯管道內(nèi)涂層材料中肝素的含量。L(w/w%)=(CfQ/QXlOO式中L為醫(yī)用聚氯乙烯管道內(nèi)所含肝素的量；Q為混合體系中肝素的總濃度；C2為剩余溶液肝素的濃度；C3為褐藻酸鈉的濃度。最終得到醫(yī)用聚氯乙烯管道內(nèi)涂層材料中肝素的含量為220g/cm2。實(shí)施例2將濃度為16mM的CaCI2溶液50ml，注入一端封閉的25cm醫(yī)用聚氯乙烯體外循環(huán)管道中，37t:水浴30min后倒出剩余溶液，反復(fù)3次，真空常溫下干燥后備用。配制1.5%褐藻酸鈉溶液100ml，加入6X聚乙烯醇5ml，室溫?cái)嚢杞宦?lián)后靜置過(guò)夜，加入肝素后溶液濃度為0.8mg/ml，攪拌30分鐘，室溫放置過(guò)夜。將經(jīng)過(guò)16mM的CaCl2處理過(guò)的25cm長(zhǎng)的醫(yī)用聚氯乙烯管道一端封閉，另一端注入1.5%褐藻酸鈉-聚乙烯醇與1.2%(pH=1)肝素溶液共100ml，37t:中水浴30min后倒出剩余溶液，反復(fù)3次，真空常溫下干燥，剩余溶液用于測(cè)定肝素濃度，計(jì)算出醫(yī)用聚氯乙烯管道內(nèi)涂層材料中肝素的含量。最終得到醫(yī)用聚氯乙烯管道內(nèi)涂層材料中肝素的含量為460iig/cm2。實(shí)施例3將濃度為17mM的ZnCI2溶液50ml，注入一端封閉的25cm醫(yī)用聚氯乙烯體外循環(huán)管道中，37t:水浴30min后倒出剩余溶液，反復(fù)3次，真空常溫下干燥后備用。配制1.3X褐藻酸鈉溶液90ml，與2%HAC溶解的殼寡糖靜電交聯(lián)反應(yīng)過(guò)夜，加入肝素后溶液濃度為1.5mg/ml，攪拌30分鐘，室溫放置過(guò)夜。將經(jīng)過(guò)17mM的ZnCI2溶液處理過(guò)的25cm長(zhǎng)的醫(yī)用聚氯乙烯管道一端封閉，另一端注入1.3%褐藻酸鈉與2%說(shuō)(:溶解的殼寡糖靜電交聯(lián)溶液，加入1.8%(pH=1)肝素溶液共lOOml，37°C中水浴30min后倒出剩余溶液，反復(fù)3次，真空常溫下干燥，剩余溶液用于測(cè)定肝素濃度，計(jì)算出醫(yī)用聚氯乙烯管道內(nèi)涂層材料中肝素的含量。最終得到醫(yī)用聚氯乙烯管道內(nèi)涂層材料中肝素的含量為662i！g/cm2。實(shí)施例4將濃度為17mM的ZnCI2溶液50ml，注入一端封閉的25cm醫(yī)用聚氯乙烯體外循環(huán)管道中，37t:水浴30min后倒出剩余溶液，反復(fù)3次，真空常溫下干燥后備用。配制1.6%褐藻酸鈉溶液901111，與2%HAC溶解的殼寡糖靜電交聯(lián)反應(yīng)過(guò)夜，加入低分子肝素后溶液濃度為0.7mg/ml，攪拌30分鐘，室溫放置過(guò)夜。將經(jīng)過(guò)19mM的ZnCI2溶液處理過(guò)的25cm長(zhǎng)的醫(yī)用聚氯乙烯管道一端封閉，另一端注入1.6%褐藻酸鈉與2%說(shuō)(:溶解的殼寡糖靜電交聯(lián)溶液，加入0.9%(pH=1)低分子肝素溶液共lOOml，37°C中水浴30min后倒出剩余溶液，反復(fù)3次，真空常溫下干燥，剩余溶液用于測(cè)定低分子肝素濃度，計(jì)算出醫(yī)用聚氯乙烯管道內(nèi)涂層材料中低分子肝素的含量。最終得到醫(yī)用聚氯乙烯管道內(nèi)涂層材料中低分子肝素的含量為348g/cm2。實(shí)施例5生物型高交聯(lián)網(wǎng)狀緩釋ECMO涂層材料性能評(píng)定①實(shí)施例1-3所述涂層管路的三種生物型高交聯(lián)網(wǎng)狀緩釋ECMO涂層材料中肝素的含量測(cè)定甲苯胺藍(lán)與肝素呈顯色反應(yīng)，在600nm處有最大吸收，根據(jù)肝素含量對(duì)透光率所作的標(biāo)準(zhǔn)曲線可測(cè)定肝素從材料中的洗脫量，由此可計(jì)算肝素在復(fù)合緩釋涂層材料中的反應(yīng)量，肝素的反應(yīng)量=加人材料中反應(yīng)前肝素量_材料反應(yīng)后肝素洗脫量。a.標(biāo)準(zhǔn)曲線制作取10ml的肝素標(biāo)準(zhǔn)液，濃度分別為0.1、0.2、0.3.0.4、0.6mg/ml，加入濃度為35mg/L的甲苯胺藍(lán)溶液1.5ml，在722型光柵分光光度計(jì)上，波長(zhǎng)600nm，用0.5cm厚度的比色杯，以PBS洗液為空白，進(jìn)行比色，制作標(biāo)準(zhǔn)曲線；標(biāo)準(zhǔn)曲線方程C=52.69A-1.6722(r=0.9996)。b.制備好的三種生物型高交聯(lián)網(wǎng)狀緩釋ECMO涂層材料樣品分別用100mlPBS洗液浸泡，在振蕩器上室溫下振蕩，每24h換一次洗液，連續(xù)浸泡15d，收集每次浸泡液，用甲苯胺藍(lán)法根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線測(cè)定浸泡液中肝素的洗脫量，結(jié)果見(jiàn)表1。表1三種生物型高交聯(lián)網(wǎng)狀緩釋ECMO涂層材料樣品中肝素的洗脫量時(shí)間樣品實(shí)施例1樣品浸泡液實(shí)施例2樣品浸泡液實(shí)施例3樣品浸泡液24h0.96%0.83%0.22%48h0.77%1.03%0.57%72h0.81%0.64%0.43%96h1.02%0.77%0.42%120h0.62%0.95%0.31%144h0.99%0.79%0.55%168h1.03%1.00%0.26%192h0.59%0.71%0.36%216h0.71%0.98%0.34%240h0.66%0.69%0.50%8<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>洗脫量小于1%說(shuō)明三種生物型高交聯(lián)網(wǎng)狀緩釋ECMO材料涂層方法穩(wěn)定性良好，幾乎沒(méi)有肝素游離脫落，可滿足心臟外科體外循環(huán)手術(shù)的需求。肝素釋放速率的測(cè)定將已經(jīng)分別通過(guò)三種生物型高交聯(lián)網(wǎng)狀緩釋ECMO材料涂層處理的PVC管路在室溫下浸泡于生理鹽水中，制備浸提液。在不同的浸泡時(shí)間取樣，用甲苯胺藍(lán)法檢測(cè)浸提液中的游離肝素量，除以網(wǎng)狀緩釋ECMO材料中的肝素含量，即可計(jì)算肝素分子的釋放速率。實(shí)施例6生物型高交聯(lián)網(wǎng)狀緩釋ECMO涂層管路的血液相容性試驗(yàn)①溶血實(shí)驗(yàn)新采的人血20ml加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為2%草酸鉀lml，制成新鮮抗凝人血。取配好的抗凝人血8ml，加質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.9%氯化鈉溶液10ml稀釋備用.實(shí)施例1-3所述三種涂層管路樣品分別切成0.5cmX2.5cm小條，稱(chēng)樣3份，每份5g，用蒸餾水沖洗后再用雙蒸水搖洗2次，每次約5min，加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.9%的氯化鈉溶液50ml浸泡24h，傾去浸泡液，重新加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.9%的氯化鈉溶液10ml，置于37t:水浴中恒溫60min后放人750r/min的離心機(jī)上離心5min;吸取上清液移入比色杯中，用722型光柵分光光度計(jì)在545nm波長(zhǎng)處測(cè)定其吸收率。陽(yáng)性對(duì)照用雙蒸水10ml加稀釋人血0.2ml，陰性對(duì)照用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.9%NaCl溶液10ml加稀釋人血0.2ml，保溫條件和測(cè)定方法與樣品相同。樣品吸收度_陰性對(duì)照吸收度溶血程度％=-----------------------------------------x100%陽(yáng)性對(duì)照吸收度-陰性對(duì)照吸收度實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表2。表2三種生物型高交聯(lián)網(wǎng)狀緩釋ECMO涂層材料樣品的溶血程度<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>結(jié)果表明溶血程度為0.35-1.67%，符合ISO關(guān)于醫(yī)用材料溶血率小于5%的要求。②全血凝血實(shí)驗(yàn)取10cmX10cm的潔凈玻璃試管分為兩組，一組為空白，二組為樣品組，其中樣品組分別為實(shí)施例1-3所述樣品，每組3個(gè)平行樣，于37°。恒溫，順序沿壁加入lml人血于試管中，開(kāi)始計(jì)時(shí)，5min后，每隔半分鐘傾斜試管，至試管中血液不流動(dòng)即為凝血時(shí)間。結(jié)果各組涂層管道材料無(wú)溶血、無(wú)凝血，具有良好的血液相容性，說(shuō)明能夠滿足臨床對(duì)抗凝血體外循環(huán)涂層管路的需求。實(shí)施例7生物型高交聯(lián)網(wǎng)狀緩釋ECM0涂層管路的細(xì)胞毒性研究將實(shí)施例1-3所述三種生物型高交聯(lián)網(wǎng)狀緩釋ECM0涂層管路制備成0.7cmX0.7cm大小薄片，三蒸水漂洗3遍并接受鈷60照射后加入6孔細(xì)胞培養(yǎng)板中央；再將培養(yǎng)3d、生長(zhǎng)旺盛的L929細(xì)胞制備成濃度為3X104個(gè)/ml的細(xì)胞懸液，持續(xù)攪拌后吸取3ml注入6孔板中，搖床水平振蕩3min，使細(xì)胞均勻分散；將細(xì)胞在5%(V/V)C02、37。C恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h后，于倒置相差顯微鏡下觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)情況。結(jié)果細(xì)胞在生物型高交聯(lián)網(wǎng)狀緩釋ECMO涂層材料表面正常生長(zhǎng)，說(shuō)明三種生物型高交聯(lián)網(wǎng)狀緩釋ECMO涂層材料毒性輕微。實(shí)施例8生物型高交聯(lián)網(wǎng)狀緩釋ECMO涂層管路抗凝血性能分別向?qū)嵤├?-3所述三種生物型高交聯(lián)網(wǎng)狀緩釋ECMO涂層管路中加入新鮮全血3ml，密封兩端口，37。C恒溫振蕩箱中水浴10min，后將血液離心(2000r/min，2min)，2h內(nèi)進(jìn)行血漿凝血酶原時(shí)間(PT)及部分凝血活酶時(shí)間(APTT)檢測(cè)。應(yīng)用Modular體外循環(huán)機(jī)建立測(cè)試回路，將待測(cè)三種生物型高交聯(lián)網(wǎng)狀緩釋ECMO涂層管路分別連接于回路中，2000ml生理鹽水預(yù)充，以4L/min流量進(jìn)行轉(zhuǎn)流，于規(guī)定轉(zhuǎn)流時(shí)間將管道取出，自然干燥后加入新鮮全血3ml，37t:恒溫振蕩箱中水浴10min后進(jìn)行凝血酶原時(shí)間(PT)及部分凝血活酶時(shí)間(APTT)檢測(cè):實(shí)施例1所述三種生物型高交聯(lián)網(wǎng)狀緩釋ECMO涂層管路PT為205，APTT為299。實(shí)施例2所述三種生物型高交聯(lián)網(wǎng)狀緩釋ECMO涂層管路PT為235，APTT為312。實(shí)施例3所述三種生物型高交聯(lián)網(wǎng)狀緩釋ECMO涂層管路PT為241，APTT為327。結(jié)果PT>169不凝，APTT>249不凝。綜上實(shí)驗(yàn)表明，所述生物型高交聯(lián)網(wǎng)狀緩釋ECM0涂層管路具有良好的抗凝血性能，能夠滿足體外循環(huán)心臟手術(shù)中短期使用?？傊?，生物型高交聯(lián)網(wǎng)狀緩釋ECM0涂層材料本身無(wú)毒，與肝素結(jié)合的涂層材料細(xì)胞生長(zhǎng)好，同時(shí)具有優(yōu)異的抗凝血性能和穩(wěn)定性，能夠滿足體外循環(huán)心臟手術(shù)中短期使用，還可應(yīng)用于透析設(shè)備，臨床輸血器等方面，具有廣闊的應(yīng)用前景。上述參照具體實(shí)施方式對(duì)該生物型高交聯(lián)網(wǎng)狀緩釋ECM0涂層材料及其制備方法與應(yīng)用進(jìn)行的詳細(xì)描述，是說(shuō)明性的而不是限定性的，可按照所限定范圍列舉出若干個(gè)實(shí)施例，因此在不脫離本發(fā)明總體構(gòu)思下的變化和修改，應(yīng)屬本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。1權(quán)利要求生物型高交聯(lián)網(wǎng)狀緩釋ECMO涂層材料，其特征在于主要由帶負(fù)電荷的天然生物多糖高分子與達(dá)到一定治療濃度的抗凝血物質(zhì)以物理共混和物理吸附方式結(jié)合形成的復(fù)合物，其中帶負(fù)電荷的天然生物多糖高分子與抗凝血物質(zhì)的重量用量關(guān)系為90-99∶1-10。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的生物型高交聯(lián)網(wǎng)狀緩釋ECMO涂層材料，其特征在于所述抗凝血物質(zhì)為肝素或低分子肝素。3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的生物型高交聯(lián)網(wǎng)狀緩釋ECM0涂層材料，其特征在于還包括與帶負(fù)電荷的天然生物多糖高分子進(jìn)行交聯(lián)的可提高強(qiáng)度的聚乙烯醇類(lèi)聚合物，其中聚乙烯醇類(lèi)聚合物與帶負(fù)電荷的天然生物多糖高分子、抗凝血物質(zhì)的重量用量關(guān)系為10-30:60-89:1-10。4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的生物型高交聯(lián)網(wǎng)狀緩釋ECMO涂層材料，其特征在于還包括與帶負(fù)電荷的天然生物多糖高分子形成包囊材料的帶正電荷的天然生物多糖高分子，其中帶正電荷的天然生物多糖高分子與帶負(fù)電荷的天然生物多糖高分子、抗凝血物質(zhì)的重量用量關(guān)系為45.0-49.5:45.0-49.5:1-10。5.權(quán)利要求1-4所述的生物型高交聯(lián)網(wǎng)狀緩釋ECMO涂層材料的制備方法，其特征在于帶負(fù)電荷的天然生物多糖高分子與抗凝血物質(zhì)以物理共混和物理吸附的形式結(jié)合，形成緩釋生物多糖高分子_抗凝血物質(zhì)復(fù)合物。6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的生物型高交聯(lián)網(wǎng)狀緩釋ECM0涂層材料的制備方法，其特征在于先將高強(qiáng)度的聚乙烯醇類(lèi)聚合物與帶負(fù)電荷的天然生物多糖高分子進(jìn)行交聯(lián)，再與抗凝血物質(zhì)以物理共混和物理吸附的形式結(jié)合，制成緩釋生物多糖高分子-抗凝血物質(zhì)復(fù)合物。7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的生物型高交聯(lián)網(wǎng)狀緩釋ECMO涂層材料的制備方法，其特征在于先將帶正電荷的天然生物多糖高分子與帶負(fù)電荷的天然生物多糖高分子通過(guò)靜電自組裝形成包囊材料，再對(duì)抗凝血物質(zhì)進(jìn)行微膠囊化，制成緩釋生物多糖高分子_抗凝血物質(zhì)復(fù)合物。8.權(quán)利要求l-4所述的生物型高交聯(lián)網(wǎng)狀緩釋ECM0涂層材料在制備膜肺、血泵、管道或插管方面的應(yīng)用。9.生物型高交聯(lián)網(wǎng)狀緩釋ECMO涂層管路，其特征在于是在體外循環(huán)管路的高分子材料內(nèi)表面上通過(guò)能夠形成凝膠涂層的二價(jià)金屬離子交聯(lián)上述生物型高交聯(lián)網(wǎng)狀緩釋ECMO涂層材料的管路。10.權(quán)利要求9所述的生物型高交聯(lián)網(wǎng)狀緩釋ECMO涂層管路的制備方法，其特征在于(1)體外循環(huán)管路的高分子材料內(nèi)表面離子修飾①體外循環(huán)高分子材料內(nèi)表面預(yù)處理對(duì)體外循環(huán)高分子材料管路內(nèi)表面進(jìn)行清洗；②體外循環(huán)管路的高分子材料內(nèi)表面通過(guò)能夠形成凝膠涂層的二價(jià)金屬離子進(jìn)行修飾在預(yù)處理過(guò)的體外循環(huán)高分子材料內(nèi)表面吸附一層二價(jià)金屬離子化合物，經(jīng)過(guò)干燥、固化完成對(duì)體外循環(huán)管路的高分子材料內(nèi)表面離子的修飾；(2)體外循環(huán)修飾管道與上述生物型高交聯(lián)網(wǎng)狀緩釋ECMO涂層材料交聯(lián)①帶負(fù)電荷的天然生物多糖高分子與體外循環(huán)管路的高分子材料內(nèi)表面的二價(jià)金屬離子絡(luò)合形成離子交聯(lián)纖維狀聚合物；②上述生物型高交聯(lián)網(wǎng)狀緩釋ECMO涂層材料的天然生物多糖高分子包埋物質(zhì)，即抗凝血物質(zhì)再經(jīng)離子交聯(lián)方法固定于體外循環(huán)管路的高分子材料內(nèi)表面。全文摘要本發(fā)明涉及生物型高交聯(lián)網(wǎng)狀緩釋ECMO涂層材料及其制備方法與應(yīng)用，所述涂層材料主要由帶負(fù)電荷的天然生物多糖高分子與達(dá)到一定治療濃度的抗凝血物質(zhì)相結(jié)合形成的復(fù)合物，通過(guò)帶負(fù)電荷的天然生物多糖高分子與抗凝血物質(zhì)以物理共混和物理吸附的形式結(jié)合制備而成，在制備膜肺、血泵、管道或插管方面具有廣泛應(yīng)用前景，所述涂層材料在提高涂層管道的血液相容性、提高肝素等抗凝血物質(zhì)的結(jié)合密度、增強(qiáng)安全性、降低醫(yī)療費(fèi)用等方面具有十分重要的意義。文檔編號(hào)A61L33/00GK101732765SQ20091022905公開(kāi)日2010年6月16日申請(qǐng)日期2009年12月10日優(yōu)先權(quán)日2009年12月10日發(fā)明者于美麗,李彤申請(qǐng)人:李彤;于美麗