專利名稱：一種穩(wěn)定的含有蒿屬花粉變應(yīng)原的藥物組合物及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物藥物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種穩(wěn)定的含有蒿屬花粉變應(yīng)原的液體 藥物組合物及其制備方法與應(yīng)用。
背景技術(shù)：
過敏性疾病是當(dāng)今世界上最常見、最頑固的疾患之一，是一種嚴(yán)重威脅人類健康 的疾病。過敏性疾病的發(fā)病率大約占人口的20%，從新生兒到中老年人各年齡段都有可能 發(fā)生，沒有明顯的性別傾向，但有明顯的遺傳性傾向。引起過敏的主要變應(yīng)原有塵螨、花粉、屋塵、霉菌、羽毛等，其中花粉是一類重要的 過敏原?；ǚ凼歉叩戎参锏男坌陨臣?xì)胞，在風(fēng)或蟲的作用下，在空氣中傳播，有些人在呼 吸過程中吸人花粉后，便會產(chǎn)生過敏反應(yīng)?；ǚ鄣娘h散具有明顯的季節(jié)性。春天的風(fēng)媒花 粉多來源于樹木；晚春和初夏的風(fēng)媒花粉多來源于牧草；夏末和秋初的風(fēng)媒花粉多來源于雜早。目前已知可以引起人類過敏的花粉主要有蒿屬花粉(Artemisia)、豚草屬花粉 (Ambrosia)、蓖麻屬花粉(Ricinus)、潷草屬花粉(Hummlus)、藜屬花粉(Chenlpldum)、莧屬 花粉(Amaranthus)、木麻黃屬花粉(Casuarina)、樺木屬花粉(Betula)、松屬花粉(Pinus)、 云杉屬花粉(Picea)、柳杉屬花粉(Cryptomeria)、懸鈴木屬花粉(Platanus)等。這些植物 的花粉因其病原性強(qiáng)，致敏率高，數(shù)量大，散播范圍廣；且植物自身分布的范圍廣，數(shù)量亦豐 富，對花粉污染的影響大，因而這些植物成為較重要的花粉污染源植物。由于花粉污染源植 物的分布受氣候、土壤、生物和地形等因素的影響，因而不同地區(qū)，其主要的花粉污染源植 物亦不相同。在美國和加拿大，花粉污染源以豚草最為重要；在英國、捷克、丹麥、法國、意大 利、西班牙和瑞士，以禾本科植物為主；在南非、巴勒斯坦、澳大利亞和新西蘭，除以禾本科 植物為主外，樹木類植物也較為重要；而在日本，引起花粉癥的主要是柳杉和雪松木。在我 國，因多數(shù)地區(qū)(如北京、新疆、山西、山東、武漢、沈陽、廣州、寧夏等地)的主要花粉均為蒿 屬植物花粉，因此我國的花粉污染源植物以蒿屬植物最為嚴(yán)重。關(guān)于過敏性疾病的治療國內(nèi)外都還不能完全解決，目前主要的預(yù)防和治療措施包 括避免接觸變應(yīng)原、對癥藥物治療和特異性免疫治療。特異性免疫治療是一種對因治療的 方法，它將不能避免的并經(jīng)皮膚點刺試驗或其他方法證實或懷疑的主要變應(yīng)原性物質(zhì)，制 成系列濃度的變應(yīng)原制劑，以逐漸遞增劑量及濃度的方法進(jìn)行給藥(一般為皮下注射或者 舌下含服)，促使體內(nèi)產(chǎn)生相應(yīng)的抗體。這類抗體屬于IgG4型，當(dāng)這些特異性抗體在體液 中提高之后，如再度接受外來特異性過敏原時，此類抗體首先與之結(jié)合，與體內(nèi)原有的slgE 抗體競爭。血清中的slgE在連續(xù)脫敏治療以后逐漸下降，到過敏反應(yīng)閾值以下時，即能防 止過敏反應(yīng)的發(fā)生，因而達(dá)到脫敏的目的。由于蒿屬花粉變應(yīng)原物質(zhì)本身的組成與結(jié)構(gòu)復(fù)雜，易受物理或化學(xué)因素的影響而 失去活性、降低效價，有時即使在低溫環(huán)境中也無法保證其變應(yīng)原活性的長期穩(wěn)定，這使該類藥物的“貨架壽命”都較短，不利于長期保存。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題即克服上述缺陷，提供一種能長期穩(wěn)定的蒿屬花粉變 應(yīng)原的液體藥物組合物。為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明第一方面提供了一種穩(wěn)定的液體藥物組合物，其特征在 于，它包含治療有效量或診斷有效量的蒿屬花粉變應(yīng)原、緩沖有效量的PH 5. 0 7. 0的緩 沖液、以及藥學(xué)上可接受的載體。在一個較佳的實施方案中，所述液體藥物組合物是由治療 有效量或診斷有效量的蒿屬花粉變應(yīng)原、緩沖有效量的PH 5. 0 7. 0的緩沖液、以及藥學(xué) 上可接受的載體組成的。在另一個較佳的實施方案中，所述蒿屬花粉變應(yīng)原為用以下方法制得的蒿屬花粉 變應(yīng)原浸提液以蒿屬花粉為原料，經(jīng)過花粉脫脂、干燥、浸提、濃縮而獲得。在一個優(yōu)選的實施方案中，所述液體藥物組合物的劑型選自口服劑、注射劑、氣霧 劑、鼻腔劑、皮膚點刺劑、或舌下含服劑等液體劑型。在另一個優(yōu)選的實施方案中，所述蒿屬花粉變應(yīng)原選自北艾花粉變應(yīng)原、黃花蒿 花粉變應(yīng)原、大籽蒿花粉變應(yīng)原或其組合。在還有一個優(yōu)選的實施方案中，所述PH 5. 0 7. 0的緩沖液選自磷酸氫二鈉-檸 檬酸緩沖液、檸檬酸_檸檬酸鈉緩沖液、磷酸氫二鈉_磷酸二氫鈉緩沖液、或乙酸_乙酸鈉 緩沖液。在一個更優(yōu)選的實施方案中，所述PH 5.0 7.0的緩沖液選自pH 5.0磷酸氫二 鈉_檸檬酸緩沖液、PH 6. 0磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖液、pH 6. 4磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖 液、pH 5. 0檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液、pH 6. 0檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液、pH 6. 4磷酸氫二 鈉_磷酸二氫鈉緩沖液、PH 7. 0磷酸氫二鈉-磷酸二氫鈉緩沖液、pH 5. 0乙酸-乙酸鈉緩 沖液、或PH 5. 4乙酸-乙酸鈉緩沖液。本發(fā)明另一方面提供了一種制備所述穩(wěn)定的液體藥物組合物的方法，其包括如下 步驟將治療有效量的蒿屬花粉變應(yīng)原、緩沖有效量的PH 5. 0 7. 0的緩沖液、以及藥學(xué)上 可接受的載體混合。在一個優(yōu)選的實施方案中，所述的方法包括如下步驟a)以蒿屬花粉為原料，將花粉脫脂、浸提、濃縮，制得蒿屬花粉變應(yīng)原浸提液；b)將步驟a)所得的蒿屬花粉變應(yīng)原浸提液用緩沖有效量的pH 5.0 7.0的緩沖 液稀釋成體積比1 1至1 100000000范圍內(nèi)的制劑；再加入藥學(xué)上可接受的載體，過濾 除菌。在一個更優(yōu)選的實施方案中，在所述步驟a)中，所述浸提過程中使用pH值為 7. 5 8. 9的緩沖液浸提；所述濃縮過程中使用緩沖有效量的pH 5. 0 7. 0的緩沖液替換 浸提緩沖液。本發(fā)明第三方面還涉及所述穩(wěn)定的液體藥物組合物在制備治療或診斷由蒿屬花 粉引起的過敏性疾病藥物中的應(yīng)用。在一個較佳的實施方案中，所述過敏性疾病選自由蒿屬花粉引起的花粉癥。在另 一個較佳的實施方案中，所述過敏性疾病選自由蒿屬花粉引起的過敏性哮喘、變應(yīng)性鼻炎、 過敏性結(jié)膜炎、或特應(yīng)性皮炎等I型變態(tài)反應(yīng)性疾病。
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從長期穩(wěn)定性試驗可以得知，本發(fā)明的蒿屬花粉變應(yīng)原液體藥物組合物具有很好 的穩(wěn)定性，在2 8°C條件下可以存放36個月。
具體實施方案具體而言，本發(fā)明首先提供了一種穩(wěn)定的液體藥物組合物，其特征在于，它包含治 療有效量或診斷有效量的蒿屬花粉變應(yīng)原、緩沖有效量的PH 5. 0 7. 0的緩沖液、以及藥 學(xué)上可接受的載體。此處的術(shù)語“包含……”指的是該藥物中還可以含有任何其它組分，這 些組分可以以任何含量存在，只要以該含量存在的該組分是人體可接受的，并對于本發(fā)明 藥物組合物中活性成分的生物活性沒有實質(zhì)性的影響即可。在一個優(yōu)選的實施方案中，所述液體藥物組合物是基本上由治療有效量或診斷有 效量的蒿屬花粉變應(yīng)原、緩沖有效量的PH 5. 0 7. 0的緩沖液、以及藥學(xué)上可接受的載體 組成的。在一個更優(yōu)選的實施方案中，所述液體藥物組合物是由治療有效量或診斷有效量 的蒿屬花粉變應(yīng)原、緩沖有效量的PH 5. 0 7. 0的緩沖液、以及藥學(xué)上可接受的載體組成 的。本發(fā)明所述蒿屬(Artemisia)花粉變應(yīng)原優(yōu)選北艾(Artemisia vulgaris Linn.)花粉變應(yīng)原、黃花蒿(Artemisia annua Linn.)花粉變應(yīng)原、大籽蒿(Artemisia sieversiana Ehrhart ex ffilld.)花粉變應(yīng)原、艾(Artemisia argyi Levi, et Van.)花 粉變應(yīng)原或其組合。本發(fā)明所述蒿屬花粉變應(yīng)原可以呈液體形式或固體形式；可以是從商 業(yè)途徑購買，也可以使用任何現(xiàn)有技術(shù)中不使變應(yīng)原降解或失活的方式從天然蒿屬花粉中 提取的方法獲得(即蒿屬花粉變應(yīng)原浸提液的形式)；可以是單一成分的蒿屬花粉變應(yīng)原 (例如北艾花粉Art ν 1重組變應(yīng)原)，也可以是來源相同(單一來源)的蒿屬花粉的變應(yīng) 原混合物(例如黃花蒿花粉變應(yīng)原混合物)，在不影響蒿屬花粉變應(yīng)原自身活性和效價的 前提下，也可以是多種蒿屬花粉變應(yīng)原來源的、以任何方式混合的蒿屬花粉變應(yīng)原組合物 (例如黃花蒿花粉變應(yīng)原與北艾花粉變應(yīng)原的組合物)。在一個較佳的實施方案中，所述蒿屬花粉變應(yīng)原為用以下方法制得的蒿屬花粉變 應(yīng)原浸提液以蒿屬花粉(宜使用干燥的蒿屬花粉)為原料，經(jīng)過花粉脫脂、干燥、浸提、濃 縮而獲得。術(shù)語“治療有效量”是指本發(fā)明的液體藥物組合物應(yīng)用于特異性免疫治療(脫敏 治療)時的濃度(劑量)。特異性免疫治療是一種對因治療的方法，它將不能避免的并經(jīng)皮 膚點刺試驗或其他方法證實或懷疑的主要變應(yīng)原性物質(zhì)，制成系列濃度的變應(yīng)原制劑，以 逐漸遞增劑量及濃度的方法進(jìn)行給藥(一般為皮下注射或者舌下含服)，通過反復(fù)使病人 接觸特異性變應(yīng)原，防止過敏反應(yīng)的發(fā)生，因而達(dá)到脫敏的目的。一般而言，“治療有效量” 的蒿屬花粉變應(yīng)原(浸提液)總蛋白濃度優(yōu)選為0.0148/1111 101^/1111，更優(yōu)選為0.1口8/ ml lmg/ml。根據(jù)給藥途徑的不同，一般舌下含服的濃度(劑量)是皮下注射的10倍 800 倍。術(shù)語“診斷有效量”是指本發(fā)明的液體藥物組合物應(yīng)用于皮膚點刺診斷時的濃度 (劑量)。一般而言，“診斷有效量”的蒿屬花粉變應(yīng)原(浸提液)總蛋白濃度優(yōu)選為ι μ g/ ml 10mg/ml,更優(yōu)選為 100 μ g/ml lmg/ml。本發(fā)明的液體藥物組合物可以制成各種醫(yī)學(xué)上可接受的劑型，并可由醫(yī)師根據(jù)患者年齡、體重和大致疾病狀況等因素確定對病人有益的劑量進(jìn)行施用。所述液體藥物組合 物的劑型選自口服劑、(皮下)注射劑、舌下含服劑、氣霧劑、鼻腔劑、或皮膚點刺劑等液體 劑型；優(yōu)選(皮下)注射劑、舌下含服劑、或皮膚點刺劑。其中，(皮下)注射劑、舌下含服 劑一般是作為特異性免疫治療時常用的劑型，而皮膚點刺劑是作為體內(nèi)變應(yīng)原檢測時常用 的劑型。本發(fā)明所述“緩沖液”是本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的，并可以安全用于藥學(xué)制劑中， 包括但不限于甘氨酸_鹽酸緩沖液，鄰苯二甲酸_鹽酸緩沖液，磷酸氫二鈉_檸檬酸緩沖 液，檸檬酸_氫氧化鈉_鹽酸緩沖液，檸檬酸_檸檬酸鈉緩沖液，乙酸_乙酸鈉緩沖液，磷酸 氫二鈉_磷酸二氫鈉緩沖液，磷酸氫二鈉_磷酸二氫鉀緩沖液，磷酸二氫鉀_氫氧化鈉緩沖 液，巴比妥鈉_鹽酸緩沖液，Tris-鹽酸緩沖液，硼酸-硼砂緩沖液，甘氨酸-氫氧化鈉緩沖 液，硼砂_氫氧化鈉緩沖液，碳酸鈉_碳酸氫鈉緩沖液，PBS緩沖液(磷酸氫二鈉-磷酸二 氫鈉-氯化鈉緩沖液)等。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以通過市售獲得以上緩沖液，也可根據(jù)需要 配制一定PH值的緩沖液。除非另有所述，本發(fā)明中所述的“pH值”都是在25°C條件下所測 的PH值。在本發(fā)明的液體藥物組合物中，優(yōu)選使用的是pH 5.0 7.0的緩沖液。在一個 更優(yōu)選的實施方案中，所述PH 5. 0 7. 0的緩沖液選自磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖液、檸檬 酸_檸檬酸鈉緩沖液、磷酸氫二鈉_磷酸二氫鈉緩沖液、或乙酸_乙酸鈉緩沖液。在一個還 要優(yōu)選的實施方案中，所述PH 5.0 7.0的緩沖液選自pH 5. 0磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖 液、pH 6. 0磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖液、pH 6. 4磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖液、pH 5. 0檸檬 酸_檸檬酸鈉緩沖液、PH 6. 0檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液、pH 6. 4磷酸氫二鈉-磷酸二氫鈉 緩沖液、PH 7. 0磷酸氫二鈉-磷酸二氫鈉緩沖液、pH 5. 0乙酸-乙酸鈉緩沖液、或pH 5. 4 乙酸-乙酸鈉緩沖液。術(shù)語“緩沖有效量”是指所述緩沖液的濃度足以使所述液體藥物組合物的PH值維 持在一個特定PH值(優(yōu)選pH 5. 0 7.0) 士 0.5 (更佳士 0.3，還要佳士 0.2，最佳士 0. 1)個 pH 單位內(nèi)。例如但不限于，pH6. 0士0. 2(即 ρΗ5· 8 6. 2)，pH5. 0士0. 3(即 ρΗ4· 7 5. 3) 等。具體所述緩沖液的濃度與緩沖液的種類、PH值、整個藥物組合物的具體組成等因素有 關(guān)，其可由本領(lǐng)域技術(shù)人員根據(jù)有限次的常規(guī)實驗來方便地確定。一般，所述酸性緩沖液的 濃度為5mM 500mM (優(yōu)選IOmM 400mM，更優(yōu)選30mM 300mM，還要優(yōu)選50mM 200mM)。術(shù)語“藥學(xué)上可接受的載體”應(yīng)當(dāng)與本發(fā)明藥物中的變應(yīng)原相容，即能與其共混而 不會在通常情況下大幅度降低藥物的生物活性(變應(yīng)原活性)。可作為藥學(xué)上可接受的載 體包括但不限于糖類，如乳糖、葡萄糖、蔗糖、海藻糖；淀粉，如玉米淀粉、土豆淀粉；纖維 素或其衍生物，如羧甲基纖維素鈉、乙基纖維素、甲基纖維素；西黃蓍膠粉末；明膠；滑石； 固體潤滑劑，如硬脂酸、硬脂酸鎂；硫酸鈣；植物油，如花生油、棉籽油、芝麻油、橄欖油、玉 米油、可可油；多元醇，如丙二醇、甘油、山梨糖醇、甘露糖醇、聚乙二醇；氨基己酸，海藻酸； 乳化劑，如吐溫；潤濕劑，如月桂基硫酸鈉；著色劑；調(diào)味劑；抗氧化劑；藥用防腐劑等，或其 組合。本發(fā)明優(yōu)選的藥學(xué)上可接受的載體是多元醇(較佳為甘油)與藥用防腐劑(較佳為 苯酚、或山梨酸鹽)的組合。多元醇的作用是賦予變應(yīng)原藥物適宜的滲透張力。多元醇包括但不限于，丙二 醇、甘油、山梨糖醇、甘露糖醇、聚乙二醇等。在整個液體藥物組合物中，多元醇的濃度優(yōu)選
620% 80% (ν/ν)，更優(yōu)選30% 70% (ν/ν)，還要優(yōu)選40% 60% (ν/ν)，最優(yōu)選45% 55% (ν/ν) ο藥用防腐劑是本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的，它的作用是防止或抑制病原微生物的生 長。藥用防腐劑包括，但不限于，苯酚、硫柳汞、苯甲酸、山梨酸或其鹽類、對羥基苯甲酸酯類 (尼泊金酯類)、苯甲醇、苯乙醇等，或其組合。藥用防腐劑的用量一般與防腐劑的種類，藥 物的種類、劑型、PH值等多種因素有關(guān)。在整個液體藥物組合物中，優(yōu)選藥用防腐劑的濃度 為 0. 01% 3. 0% (w/v)。因此，在一個優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明藥物組合物包含治療有效量或診斷有效 量的蒿屬花粉變應(yīng)原、緩沖有效量的PH 5.0 7.0的緩沖液、0.01% 3.0% (w/v)藥用 防腐劑、以及20% 80% (ν/ν)多元醇。在一個更優(yōu)選的實施方案中，所述藥物組合物是 基本上由治療有效量或診斷有效量的蒿屬花粉變應(yīng)原、緩沖有效量的PH 5. 0 7. 0的緩沖 液、0.01% 3.0% (w/v)藥用防腐劑、以及20% 80% (ν/ν)多元醇組成的。在一個還要 優(yōu)選的實施方案中，所述藥物組合物是由治療有效量或診斷有效量的蒿屬花粉變應(yīng)原、緩 沖有效量的PH 5.0 7.0的緩沖液、0.01% 3.0% (w/v)藥用防腐劑、以及20% 80% (ν/ν)多元醇組成的。在上述方案中，所述藥用防腐劑優(yōu)選0.2% 0.3% (w/v)苯酚、或0. 1 % 0. 2% (w/v)山梨酸鉀；所述多元醇優(yōu)選45% 55% (ν/ν)甘油。在本發(fā)明的具體實施方案中，長期穩(wěn)定性試驗主要是對蒿屬花粉變應(yīng)原的總變應(yīng) 原活性及主要變應(yīng)原含量等指標(biāo)作了考察。假設(shè)蒿屬花粉變應(yīng)原制劑最初的總變應(yīng)原活性 為100 %，在一定條件下經(jīng)過一段時間，使用同樣的檢測手段，其總變應(yīng)原活性改變?yōu)樽畛?活性的70%以上(優(yōu)選80%以上，更優(yōu)選90%以上)；并且主要變應(yīng)原含量在一定條件下 經(jīng)過一段時間，其含量改變也為最初含量的70%以上(優(yōu)選80 %以上，更優(yōu)選90 %以上) 時；就認(rèn)定該蒿屬花粉變應(yīng)原的生物活性是“穩(wěn)定”的，其用于變應(yīng)原特異性免疫治療或變 應(yīng)原皮膚點刺診斷也是可靠的。本發(fā)明另一方面提供了一種制備所述穩(wěn)定的液體藥物組合物的方法，其包括如下 步驟將治療有效量的蒿屬花粉變應(yīng)原、緩沖有效量的PH 5.0 7.0的緩沖液、以及藥學(xué)上 可接受的載體混合。在一個優(yōu)選的實施方案中，所述的方法包括如下步驟a)以蒿屬花粉為原料，將花粉脫脂、浸提、濃縮，制得蒿屬花粉變應(yīng)原浸提液；b)將步驟a)所得的蒿屬花粉變應(yīng)原浸提液用緩沖有效量的pH 5. 0 7. 0的緩沖 液稀釋成體積比1 1至1 100000000范圍內(nèi)的多個濃度的制劑；再加入藥學(xué)上可接受 的載體，過濾除菌。其中，所述蒿屬花粉變應(yīng)原優(yōu)選北艾(Artemisia vulgaris Linn.)花粉變應(yīng)原、 黃花蒿(Artemisia annua Linn.)花粉變應(yīng)原、大軒蒿(Artemisia sieversiana Ehrhart ex ffilld.)花粉變應(yīng)原、艾(Artemisia argyi Levi, et Van.)花粉變應(yīng)原或其組合。在上述方案中，所述花粉脫脂時所使用的脫脂劑是常規(guī)的，脫脂劑包括但不限于， 乙醚、丙酮等有機(jī)溶劑。在制備蒿屬花粉變應(yīng)原浸提液時，發(fā)明人嘗試了多種浸提液，并且比較了它們的 浸提效率。所使用的浸提液包括生理鹽水、pH5. 0的磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖液、pH6. 0的磷酸氫二鈉_檸檬酸緩沖液、PH7. 5的磷酸氫二鈉_磷酸二氫鈉緩沖液、pH8. 0的磷酸氫 二鈉-磷酸二氫鈉緩沖液、ρΗ8· 2的coca，s液、ρΗ8· 9的Tris-鹽酸緩沖液等。實驗結(jié)果 證實，使用PH 7. 5 8. 9的緩沖液的浸提效率較高，這可能與花粉類材料是偏酸性的有關(guān)。 在一個較佳的實施方案中，使用PH 8. 0的磷酸氫二鈉-磷酸二氫鈉緩沖液浸提蒿屬花粉變 應(yīng)原。與傳統(tǒng)的coca’ s液相比，pH8. 0的磷酸氫二鈉-磷酸二氫鈉緩沖液的浸提效率雖 然沒有顯著提高，但能使整個浸提液的PH值保持穩(wěn)定，該浸提液長時間存放亦不會產(chǎn)生沉 淀，克服了 coca’ s液的某些缺陷。在另一個優(yōu)選的方案中，在所述步驟a)中，所述濃縮過程中使用緩沖有效量的PH 5. 0 7. 0的緩沖液替換浸提緩沖液。需要指出的是，上述濃縮變應(yīng)原浸出液并同時替換緩沖液的方法是本領(lǐng)域技術(shù)人 員所熟知的，包括但不限于，超濾、透析等方法。所選用膜的截流孔徑可以根據(jù)需要確定，要 求在盡可能保留變應(yīng)原活性的前提下除去無活性的小分子色素等雜質(zhì)，優(yōu)選截流分子量為 3 10kD。在本發(fā)明的一個實施方案中，使用截流分子量3kD的超濾膜進(jìn)行超濾的方法濃 縮變應(yīng)原浸出液并同時替換緩沖液。在所述步驟a)的替換浸提緩沖液時所使用的pH 5. 0 7. 0的緩沖液，與在所述 步驟b)的稀釋過程中所使用的pH 5.0 7.0的緩沖液可以相同，也可以不同，只要兩者可 以互融，并且混合后的緩沖體系具有穩(wěn)定的緩沖能力，使整個藥物的PH值維持在一個特定 PH值(優(yōu)選pH 5. 0 7.0) 士0.5 (更佳士0.3，還要佳士0.2，最佳士0. 1)個pH單位內(nèi)即 可。一般優(yōu)選使用相同的緩沖有效量的PH 5.0 7.0的緩沖液，例如，在所述步驟a)的替 換浸提緩沖液時使用緩沖有效量的PH 6.0磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖液，在所述步驟b)的 稀釋過程中使用緩沖有效量的PH 6. 0磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖液。在一個較佳的實施方案中，所述pH 5. 0 7. 0的緩沖液選自磷酸氫二鈉-檸檬酸 緩沖液、檸檬酸_檸檬酸鈉緩沖液、磷酸氫二鈉_磷酸二氫鈉緩沖液、或乙酸_乙酸鈉緩沖 液。在一個更佳的實施方案中，所述PH 5.0 7.0的緩沖液選自pH 5.0磷酸氫二鈉-檸 檬酸緩沖液、PH 6. 0磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖液、pH 6. 4磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖液、pH 5. 0檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液、pH 6. 0檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液、pH 6. 4磷酸氫二鈉-磷 酸二氫鈉緩沖液、PH 7.0磷酸氫二鈉-磷酸二氫鈉緩沖液、pH 5.0乙酸-乙酸鈉緩沖液、或 PH 5. 4乙酸-乙酸鈉緩沖液。因此，在一個更加優(yōu)選的實施方案中，制備本發(fā)明所述穩(wěn)定的液體藥物組合物的 方法包括如下步驟步驟一蒿屬花粉變應(yīng)原浸提液的制備。(1)脫脂可連續(xù)用有機(jī)溶劑(例如丙酮)浸泡干燥的蒿屬花粉(每次按質(zhì)量體積 比1 2 1 10加入丙酮)，脫脂2 6次，每次0.1 24小時(優(yōu)選1 12小時)， 至脫脂后的丙酮為無色后，將脫脂后的固體物自然干燥至無丙酮味后稱重。實驗室操作應(yīng) 在通風(fēng)櫥內(nèi)完成，中試采用真空濃縮提取罐。(2)浸提使經(jīng)脫脂干燥后的蒿屬花粉與pH 7.5 8.9的緩沖液(優(yōu)選pH 8. 0的 磷酸氫二鈉-磷酸二氫鈉緩沖液)二者以1 10 1 50 W/V (即每1克脫脂干燥后的 蒿屬花粉用2 50毫升pH 7. 5 8. 9的緩沖液浸提)(較佳的為1 20 1 40 W/V, 更佳的為1 30 W/V)的比例提取，充分接觸浸提0.1 72小時(優(yōu)選進(jìn)行1 60小時，更優(yōu)選12 48小時)，離心或/并過濾，收集粗提液。其中，所述浸提操作宜在低溫(優(yōu)選 2 8°C)下進(jìn)行；為了防止或抑制病原微生物的生長，宜對浸提緩沖液事先進(jìn)行滅菌處理。(3)濃縮將上述得到的粗提液使用截流分子量為3 IOkD的超濾膜進(jìn)行超濾， 反復(fù)加入pH 5. 0 7. 0的緩沖液替換原來的浸提緩沖液(優(yōu)選超濾2 5次)，除去小分 子色素等雜質(zhì)，最終使粗提液體積濃縮2 10倍，得到蒿屬花粉變應(yīng)原浸提液。步驟二 液體藥物組合物的配制。(1)稀釋將步驟一制得的蒿屬花粉變應(yīng)原浸提液用緩沖有效量的pH 5. 0 7. 0 的緩沖液稀釋成體積比1 1至1 100000000范圍內(nèi)的制劑，加入藥學(xué)上可接受的載體 (優(yōu)選加入多元醇與藥用防腐劑，使多元醇的終濃度為20% 80% (ν/ν)、藥用防腐劑的終 濃度為 0.01% 3.0% (w/v)) ο(2)除菌使用孔徑不大于1 μ m(優(yōu)選0. 22 μ m)的無菌微孔濾膜進(jìn)行過濾除菌， 分裝、灌封，制得所述液體藥物組合物成品。值得注意的是，本發(fā)明在描述制備所述液體藥物組合物方法時，使用了“包括如下 步驟……”的句式。也就是說，本領(lǐng)域技術(shù)人員還可以根據(jù)需要，在制備所述液體藥物組 合物時，增加其它的技術(shù)步驟，例如但不限于，使用現(xiàn)有的常規(guī)技術(shù)將所述蒿屬花粉變應(yīng)原 浸提液進(jìn)行凍干，在配制制劑(藥物)時再使用適宜的緩沖液(優(yōu)選pH 5. 0 7. 0的緩沖 液)溶解；或者在浸提后先對粗提液調(diào)節(jié)PH值，再進(jìn)行超濾濃縮；還可以對于所述蒿屬花 粉變應(yīng)原浸提液進(jìn)行質(zhì)量檢測(如測定蛋白含量等)，方便后續(xù)的稀釋步驟。當(dāng)然，增加的 技術(shù)步驟必須確?；旧喜粫绊懰鲆后w藥物組合物的生物活性(變應(yīng)原活性)。本發(fā)明第三方面還涉及所述穩(wěn)定的液體藥物組合物在制備治療或診斷由蒿屬花 粉引起的過敏性疾病藥物中的應(yīng)用。在一個較佳的實施方案中，所述過敏性疾病選自由蒿屬花粉引起的花粉癥。在另 一個較佳的實施方案中，所述過敏性疾病選自由蒿屬花粉引起的過敏性哮喘、變應(yīng)性鼻炎、 過敏性結(jié)膜炎、或特應(yīng)性皮炎等I型變態(tài)反應(yīng)性疾病。在另一個較佳的實施方案中，所述蒿屬花粉選自北艾(Artemisia vulgaris Linn.)花粉、黃花蒿(Artemisia annua Linn.)花粉、大軒蒿(Artemisia sieversiana Ehrhart ex ffilld.)花粉、艾(Artemisia argyi Levi, et Van.)花粉或其組合。當(dāng)本發(fā)明液體藥物組合物應(yīng)用于診斷由蒿屬花粉引起的過敏性疾病時(即變應(yīng) 原皮膚點刺診斷試驗)，除了本發(fā)明液體藥物組合物外，一般還應(yīng)包括陰性對照液、陽性對 照液、以及點刺針。陰性對照液一般為對人體無過敏性反應(yīng)的液體(例如甘油與鹽溶液的 混合物等)，陽性對照液一般為1. 0 5. Omg/ml的磷酸組胺/鹽酸組胺溶液(例如1. 7mg/ ml磷酸組胺溶液)。此外，本發(fā)明液體藥物組合物也可以應(yīng)用于斑貼試驗中。其原理為將可疑致敏物 質(zhì)(變應(yīng)原)敷貼于患者皮膚上，通過皮膚或粘膜進(jìn)入機(jī)體后由抗原呈遞細(xì)胞將抗原呈遞 給T淋巴細(xì)胞，使特異性T淋巴細(xì)胞活化，誘發(fā)炎癥反應(yīng)。下面將結(jié)合實施例進(jìn)一步詳細(xì)地描述本發(fā)明。然而應(yīng)當(dāng)理解，列舉這些實施例只 是為了起到說明作用，而并不是用來限制本發(fā)明的范圍。實施例1黃花蒿花粉變應(yīng)原舌下含服劑的制備(1)脫脂準(zhǔn)確稱取干燥的黃花蒿花粉，按質(zhì)量體積比1 4加入丙酮，連續(xù)攪拌
9脫脂2小時，再靜置30分鐘，去掉上層丙酮，重復(fù)上述脫脂過程4次；將脫脂后的固體鋪平， 于通風(fēng)廚中干燥，至呈干粉狀，且沒有丙酮氣味。(2)浸提將步驟(1)得到的脫脂花粉與50mM pH8. 0的磷酸氫二鈉_磷酸二氫鈉 緩沖液二者以1 30 (W/V)比例，4°C連續(xù)攪拌浸提48小時；4°C，IOOOOr. p.m.離心30分 鐘，收集上清液；先后使用普通濾紙、0. 45 μ m微孔濾膜依次過濾，除去小顆粒物質(zhì)，得到粗 提液。(3)濃縮將步驟(2)得到的粗提液用截留孔徑為3kD的超濾膜進(jìn)行超濾，反復(fù)加 入50mM pH6. 0的磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖液替換浸提緩沖液(超濾3次)，除去小分子色 素等雜質(zhì)，最終使粗提液體積濃縮6倍，得到黃花蒿花粉變應(yīng)原浸提液。(4)蛋白濃度測定對步驟(3)得到的黃花蒿花粉變應(yīng)原浸提液進(jìn)行總蛋白濃度 測定(用Pierce公司的BCA蛋白測定試劑盒測定蛋白含量)，若總蛋白濃度不小于3mg/ml 時，即符合要求。(5)稀釋將步驟(4)制得的黃花蒿花粉變應(yīng)原浸提液用50mM pH6. 0的磷酸氫二 鈉-檸檬酸緩沖液稀釋成體積比1 1至1 100000000范圍內(nèi)的多個濃度的制劑，加入 體積比1 1的甘油(使其終濃度為50% (ν/ν))，再加入苯酚(使其終濃度為0.25% (w/ ν))。(6)除菌使用0. 22 μ m的無菌微孔濾膜進(jìn)行過濾除菌，分裝、灌封，制得黃花蒿花 粉變應(yīng)原舌下含服劑成品。分別命名黃花蒿花粉變應(yīng)原舌下含服劑6號 1號，總蛋白濃 度依次為 500μ g/ml、100y g/ml、20y g/ml、4y g/ml、0. 8μ g/ml、0. 16μ g/ml。實施例2黃花蒿花粉變應(yīng)原皮膚點刺液的制備步驟(1)-(4)同實施例1，但在超濾濃縮時使用150mM pH7. 0的磷酸氫二鈉-磷酸
二氫鈉緩沖液替換浸提緩沖液。(5)稀釋將步驟⑷制得的黃花蒿花粉變應(yīng)原浸提液用150mM pH7. 0的磷酸氫 二鈉-磷酸二氫鈉緩沖液稀釋成總蛋白濃度為1200yg/ml，加入體積比1 1的甘油(使 其終濃度為50% (ν/ν))，再加入苯酚(使其終濃度為0. 2% (w/v))0(6)除菌使用0. 22 μ m的無菌微孔濾膜進(jìn)行過濾除菌，分裝、灌封，制得黃花蒿花 粉變應(yīng)原皮膚點刺液成品，點刺液成品的總蛋白濃度為600 μ g/ml。實施例3大籽蒿花粉變應(yīng)原皮下注射劑的制備(1)脫脂準(zhǔn)確稱取干燥的大籽蒿花粉，按質(zhì)量體積比1 4加入丙酮，連續(xù)攪拌 脫脂2小時，再靜置30分鐘，去掉上層丙酮，重復(fù)上述脫脂過程4次；將脫脂后的固體鋪平， 于通風(fēng)廚中干燥，至呈干粉狀，且沒有丙酮氣味。(2)浸提將步驟(1)得到的脫脂花粉與50mM pH8. 0的磷酸氫二鈉_磷酸二氫鈉 緩沖液二者以1 30 (W/V)比例，4°C連續(xù)攪拌浸提48小時；4°C，IOOOOr. p.m.離心30分 鐘，收集上清液；先后使用普通濾紙、0. 45 μ m微孔濾膜依次過濾，除去小顆粒物質(zhì)，得到粗 提液。(3)濃縮將步驟(2)得到的粗提液用截留孔徑為3kD的超濾膜進(jìn)行超濾，反復(fù)加 入IOOmM pH5.0的檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液替換浸提緩沖液(超濾3次)，除去小分子色素 等雜質(zhì)，最終使粗提液體積濃縮6倍，得到大籽蒿花粉變應(yīng)原浸提液。(4)蛋白濃度測定對步驟(3)得到的大籽蒿花粉變應(yīng)原浸提液進(jìn)行總蛋白濃度
10測定(用Pierce公司的BCA蛋白測定試劑盒測定蛋白含量)，若總蛋白濃度不小于3mg/ml 時，即符合要求。(5)稀釋將步驟⑷制得的大籽蒿花粉變應(yīng)原浸提液用IOOmM pH5. 0的檸檬 酸-檸檬酸鈉緩沖液稀釋成體積比1 1至1 100000000范圍內(nèi)的多個濃度的制劑，加 入甘油(使其終濃度為45% (ν/ν))，再加入苯酚(使其終濃度為0.25% (w/v))。(6)除菌使用0. 22 μ m的無菌微孔濾膜進(jìn)行過濾除菌，分裝、灌封，制得大籽蒿花 粉變應(yīng)原皮下注射劑成品。分別命名大籽蒿花粉變應(yīng)原皮下注射劑4號 1號，總蛋白濃 度依次為 1000ng/ml、100ng/ml、10ng/ml、lng/ml。實施例4北艾花粉變應(yīng)原舌下含服劑的制備(1)脫脂準(zhǔn)確稱取干燥的北艾花粉，按質(zhì)量體積比1 4加入丙酮，連續(xù)攪拌脫 脂2小時，再靜置30分鐘，去掉上層丙酮，重復(fù)上述脫脂過程4次；將脫脂后的固體鋪平，于 通風(fēng)廚中干燥，至是干粉狀，且沒有丙酮氣味。(2)浸提將步驟(1)得到的脫脂花粉與50mM pH8. O的磷酸氫二鈉_磷酸二氫鈉 緩沖液二者以1 30 (W/V)比例，4°C連續(xù)攪拌浸提48小時；4°C，IOOOOr. p.m.離心30分 鐘，收集上清液；先后使用普通濾紙、0. 45 μ m微孔濾膜依次過濾，除去小顆粒物質(zhì)，得到粗 提液。(3)濃縮將步驟(2)得到的粗提液用截留孔徑為3kD的超濾膜進(jìn)行超濾，反復(fù)加 入200mM pH6. 4的磷酸氫二鈉-磷酸二氫鈉緩沖液替換浸提緩沖液(超濾3次)，除去小分 子色素等雜質(zhì)，最終使粗提液體積濃縮6倍，得到北艾花粉變應(yīng)原浸提液。(4)蛋白濃度測定對步驟(3)得到的北艾花粉變應(yīng)原浸提液進(jìn)行總蛋白濃度測 定(用Pierce公司的BCA蛋白測定試劑盒測定蛋白含量)，若總蛋白濃度不小于3mg/ml 時，即符合要求。(5)稀釋將步驟(4)制得的北艾花粉變應(yīng)原浸提液用200mM pH6. 4的磷酸氫二 鈉-磷酸二氫鈉緩沖液稀釋成體積比1 1至1 100000000范圍內(nèi)的多個濃度的制劑， 加入甘油(使其終濃度為55% (ν/ν))，再加入山梨酸鉀(使其終濃度為0.15% (w/v))。(6)除菌使用0. 22 μ m的無菌微孔濾膜進(jìn)行過濾除菌，分裝、灌封，制得北艾花粉 變應(yīng)原舌下含服劑成品。分別命名北艾花粉變應(yīng)原舌下含服劑5號 1號，總蛋白濃度依 次為 300μ g/ml、100y g/ml、10y g/ml、l μ g/ml、0. 1 μ g/ml。實施例5北艾花粉變應(yīng)原皮膚點刺液的制備步驟(1)-(4)同實施例4，但在超濾濃縮時使用200mM pH5. 4的乙酸-乙酸鈉緩沖 液替換浸提緩沖液。(5)稀釋將步驟(4)制得的北艾花粉變應(yīng)原浸提液用200mM pH5. 4的乙酸-乙酸 鈉緩沖液稀釋成總蛋白濃度為800yg/ml，加入體積比1 1的甘油(使其終濃度為50% (ν/ν))，再加入苯酚(使其終濃度為0. 3 % (w/v))。(6)除菌使用0. 22 μ m的無菌微孔濾膜進(jìn)行過濾除菌，分裝、灌封，制得北艾花粉 變應(yīng)原皮膚點刺液成品，點刺液成品的總蛋白濃度為400 μ g/ml。實施例6蒿屬花粉變應(yīng)原生物活性的測定(一)總變應(yīng)原活性的測定將待測蒿屬(如北艾)花粉變應(yīng)原制劑與蒿屬花粉標(biāo)準(zhǔn)血清庫(浙江我武生物科技有限公司提供)中的血清等體積混合(100μ1 + 100μ1)，同時用該標(biāo)準(zhǔn)血清庫中的血 清作為對照，在37°C溫箱溫育1小時，然后取出靜置于4°C冰箱中過夜(9 12小時)。將 4°C過夜后的樣品轉(zhuǎn)移至已滅菌的玻璃試管內(nèi)，用UnicaplOO儀器(瑞典法瑪西亞公司)測 定其slgE的相對含量(根據(jù)瑞典法瑪西亞公司的Immimo CAP診斷系統(tǒng)，Unicap自動體外 檢測過敏原系統(tǒng)說明書操作)。蒿屬花粉標(biāo)準(zhǔn)血清庫中血清測得的slgE相對含量為78. 29 KUA/L。標(biāo)準(zhǔn)血清庫中的血清含有針對變應(yīng)原的特異性IgE(SlgE)。待測品中的變應(yīng)原活 性成分會與血清中的slgE結(jié)合生成復(fù)合物，使血清中游離的slgE濃度降低，再用Unicap 系統(tǒng)檢測血清中slgE的含量。待測品中變應(yīng)原活性越高，血清與待測品作用后，其slgE濃 度就會降得越低。此時用Unicap系統(tǒng)檢測會發(fā)現(xiàn)血清中游離的slgE會相應(yīng)減少，通過比 較待測品加入前后血清中slgE濃度的變化就可以得到待測品中的總變應(yīng)原活性。在血清 中slgE未被待測品中變應(yīng)原完全結(jié)合的情況下，此過程中總變應(yīng)原活性與血清中slgE濃 度的降低程度是正相關(guān)的。根據(jù)slgE的抑制率可以得到待測品中的總變應(yīng)原活性，slgE的 抑制率越高，待測品中總變應(yīng)原活性越高。( 二)主要變應(yīng)原含量的測定使用蒿屬花粉主要變應(yīng)原蛋白1含量測定試劑盒(由中資漢脈(北京)生物技術(shù) 有限公司生產(chǎn))，按照其附帶的說明書操作。需要說明的是，蒿屬花粉主要變應(yīng)原蛋白1含 量測定試劑盒中的捕獲抗體是針對蒿屬花粉(包括黃花蒿、大籽蒿、北艾等)主要變應(yīng)原蛋 白1共同的抗原表位產(chǎn)生的單克隆抗體，因此，該試劑盒可以檢測蒿屬不同種花粉的主要 變應(yīng)原蛋白1的含量。實施例7長期穩(wěn)定性試驗考察考察樣品實施例1制備的黃花蒿花粉變應(yīng)原舌下含服劑6號(下表中記作樣品1-6)、1 號(下表中記作樣品1-1)；實施例2制備的黃花蒿花粉變應(yīng)原皮膚點刺液(下表中記作樣品2)；實施例3制備的大籽蒿花粉變應(yīng)原皮下注射劑4號(下表中記作樣品3-4)；實施例4制備的北艾花粉變應(yīng)原舌下含服劑5號(下表中記作樣品4-5)、1號 (下表中記作樣品4-1)；實施例5制備的北艾花粉變應(yīng)原皮膚點刺液(下表中記作樣品5)；對照1 用coca，s液(5. Og氯化鈉、2. 75g碳酸氫鈉，加純化水至1000ml)浸提后 得到黃花蒿花粉變應(yīng)原浸提液，加入體積比1 1的甘油(使其終濃度為50% (ν/ν))，再 加入苯酚(使其終濃度為0.25% (w/v))，并用0.22 μ m的無菌微孔濾膜進(jìn)行過濾除菌。該 制劑的總蛋白濃度為500μ g/ml ；對照2 步驟(1)_(4)同實施例4，但在超濾濃縮時使用生理鹽水替換浸提緩沖液。 再用生理鹽水稀釋上述得到的北艾花粉變應(yīng)原浸提液，加入甘油(使其終濃度為55% (ν/ ν))，再加入山梨酸鉀(使其終濃度為0.15% (w/v))，并用0. 22 μ m的無菌微孔濾膜進(jìn)行過 濾除菌。該制劑的總蛋白濃度為300 μ g/ml ；試驗條件2°C 8°C ；試驗抽樣時間點在試驗第3、6、9、12、18、24、36個月取樣檢測；
考察項目pH值(結(jié)果見表1)、總變應(yīng)原活性(結(jié)果見表2)、主要變應(yīng)原蛋白1含 量(結(jié)果見表3)，其中，“-”代表未檢出有意義的數(shù)值。表1 PH值的檢測結(jié)果 表2總變應(yīng)原活性的檢測結(jié)果 注以0天時的總變應(yīng)原活性為100%，其它時間測定的數(shù)值與0天時的數(shù)值對 比，進(jìn)行比值分析(百分?jǐn)?shù))，檢測不同時間點總變應(yīng)原活性的變化。表3蒿屬花粉主要變應(yīng)原蛋白1含量測定結(jié)果(yg/ml) 實施例8黃花蒿花粉變應(yīng)原舌下含服劑的臨床療效(一)黃花蒿花粉變應(yīng)原皮膚點刺試驗1.點刺試劑盒的組成1)黃花蒿花粉變應(yīng)原皮膚點刺液(實施例2制備得到)；2)陽性對照(1. 7mg/ml的磷酸組胺溶液，溶劑為甘油與150mM pH7. 0的磷酸氫二 鈉-磷酸二氫鈉緩沖液的等體積混合液，并加入終濃度0.2% (w/v)的苯酚)；3)陰性對照(甘油與150mM pH7. 0的磷酸氫二鈉-磷酸二氫鈉緩沖液的等體積混 合液，并加入終濃度0.2% (w/v)的苯酚)。2.點刺操作步驟1)診斷前先用酒精清潔前臂掌側(cè)皮膚；2)將黃花蒿花粉變應(yīng)原皮膚點刺液，陰性對照、陽性對照自上而下各滴一滴于清 潔后的皮膚上，兩液滴間距離3 5cm，以防止反應(yīng)紅暈相互融合；3)點刺時，繃緊皮膚，將點刺針透過液滴，垂直刺入皮膚，對每種試液用一個新的 點刺針；4)2 3分鐘后用棉簽拭去皮膚上的殘留液，注意不要混合相鄰液滴；5)點刺后10 20分鐘，觀察試驗結(jié)果。陽性反應(yīng)的皮膚會呈現(xiàn)風(fēng)團(tuán)和紅暈這2 種現(xiàn)象，用油性筆描繪風(fēng)團(tuán)及紅暈四周邊線。風(fēng)團(tuán)是指皮膚接觸過敏原后出現(xiàn)的高于皮膚 的扁平隆起，周圍有紅暈。若陽性結(jié)果風(fēng)團(tuán)明顯，就比較風(fēng)團(tuán)面積，如果風(fēng)團(tuán)不明顯，可以比 較紅暈面積；6)比較風(fēng)團(tuán)面積最簡便的方法是目測，以陰性對照風(fēng)團(tuán)或紅暈面積做校正，比較黃花蒿花粉變應(yīng)原皮膚點刺液與陽性對照風(fēng)團(tuán)或紅暈的面積，若黃花蒿花粉變應(yīng)原皮膚點 刺液風(fēng)團(tuán)和紅暈面積為陽性對照面積的25%以上，即可判斷該患者黃花蒿花粉變應(yīng)原點刺 試驗陽性，可以考慮使用特異性免疫治療(脫敏治療)；7)如需要比較精確的風(fēng)團(tuán)面積，可用透明膠帶將油性筆描繪的圈轉(zhuǎn)移到毫米心電 圖紙上，通過比較黃花蒿花粉變應(yīng)原皮膚點刺液與陽性對照的風(fēng)團(tuán)所占格子數(shù)來確定該患 者對黃花蒿變應(yīng)原過敏反應(yīng)強(qiáng)度，最后將檢測結(jié)果記錄到點刺試驗記錄本上。3.結(jié)果判斷如果點刺部位皮膚呈現(xiàn)風(fēng)團(tuán)或紅暈，即為陽性反應(yīng)；根據(jù)黃花蒿花粉變應(yīng)原皮膚 點刺液與陽性對照所致風(fēng)團(tuán)面積比判定反應(yīng)級別 比值為陽性對照風(fēng)團(tuán)0 25%或與陰性對照相同者為(一)； 比值為陽性對照風(fēng)團(tuán)26% 50%者為(+)； 比值為陽性對照風(fēng)團(tuán)51% 100%者為(++)； 比值為陽性對照風(fēng)團(tuán)101 200%者為(+++)； 比值為陽性對照風(fēng)團(tuán)200%以上者為(++++)。( 二 )黃花蒿花粉變應(yīng)原舌下含服劑的臨床療效1.病例挑選花粉癥病人共83例病程3年以上，且經(jīng)上述過敏原皮膚點刺試驗證明為對 黃花蒿花粉過敏(++以上)。其中，男39例，女44例，年齡最大54歲，最小8歲，平均年齡 35歲。2.藥物用法與用量治療藥物黃花蒿花粉變應(yīng)原舌下含服劑(實施例1制備得到)具體總蛋白濃度 依次為黃花蒿花粉變應(yīng)原舌下含服劑1號(0. 16yg/ml)、2號(0. 8 μ g/ml)、3號(4 μ g/ ml)、4 號(20 μ g/ml)、5 號(100 μ g/ml)、6 號(500 μ g/ml)。用法(舌下含服)滴于舌下，含1 2分鐘左右后吞服，每日1次。用量第1天舌下含服黃花蒿花粉變應(yīng)原舌下含服劑1號1滴，第2天1滴，第3 天2滴，第4天2滴，第5天3滴，第6天3滴，第7天4滴，第8天4滴，第9天5滴，第10 天5滴；第11天 第20天舌下含服黃花蒿花粉變應(yīng)原舌下含服劑2號，每天的劑量與黃花 蒿花粉變應(yīng)原舌下含服劑1號相同；第21天 第30天舌下含服黃花蒿花粉變應(yīng)原舌下含 服劑3號，每天的劑量與黃花蒿花粉變應(yīng)原舌下含服劑1號相同；第31天 第40天舌下含 服黃花蒿花粉變應(yīng)原舌下含服劑4號，每天的劑量與黃花蒿花粉變應(yīng)原舌下含服劑1號相 同；第41天 第50天舌下含服黃花蒿花粉變應(yīng)原舌下含服劑5號，每天的劑量與黃花蒿花 粉變應(yīng)原舌下含服劑1號相同；第51天開始舌下含服黃花蒿花粉變應(yīng)原舌下含服劑6號維 持至治療結(jié)束，每天舌下含服2滴。注意事項一般在過敏癥狀(花粉癥癥狀)輕微時開始治療。1號 5號是遞增劑 量，6號是維持劑量。若服用后24小時內(nèi)有癥狀加重反應(yīng)，次日劑量宜減少3級(如正用6 號者，改用3號；若仍在初始治療階段，則次日劑量減少至最小劑量，耐受后再逐漸遞增。)療程治療滿半年者共32例；治療滿1年者共27例；治療滿2年者共24例。3.療效判斷臨床控制與治療前比，花粉期(8 10月)花粉癥的鼻部、眼部癥狀或花粉過敏性哮喘明顯減輕達(dá)2個花粉季節(jié)以上。顯效與治療前比，花粉期(8 10月)花粉癥的鼻 部、眼部癥狀或花粉過敏性哮喘減輕達(dá)2個花粉季節(jié)以上；或者明顯減輕但經(jīng)歷時間不足2 個花粉季節(jié)。好轉(zhuǎn)與治療前比，花粉期(8 10月)花粉癥癥狀或花粉過敏性哮喘稍減輕。 無效與治療前比，花粉期(8 10月)花粉癥癥狀或花粉過敏性哮喘無變化或者加重。4.結(jié)果83例患者治療后臨床控制43例(占51. 8% )，顯效26例(占31. 3% )，好轉(zhuǎn)11 例(占13. 3% )，無效3例(占3. 6% )，總有效率(臨床控制+顯效)為83. 1 %。并且，結(jié) 果還顯示，脫敏治療時間越長，有效率越高。盡管本發(fā)明描述了具體的例子，但是有一點對于本領(lǐng)域技術(shù)人員來說是明顯的， 即在不脫離本發(fā)明的宗旨、要點和范圍的前提下可對本發(fā)明作各種變化和改動。因此，所附 權(quán)利要求覆蓋了所有這些在本發(fā)明范圍內(nèi)的變動。
權(quán)利要求
一種穩(wěn)定的液體藥物組合物，其特征在于，該液體藥物組合物包含治療有效量或診斷有效量的蒿屬花粉變應(yīng)原、緩沖有效量的pH 5.0～7.0的緩沖液、以及藥學(xué)上可接受的載體。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的液體藥物組合物，其特征在于，所述液體藥物組合物是由治 療有效量或診斷有效量的蒿屬花粉變應(yīng)原、緩沖有效量的PH 5. 0 7. 0的緩沖液、以及藥 學(xué)上可接受的載體組成的。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的液體藥物組合物，其特征在于，所述液體藥物組合物的劑 型選自口服劑、注射劑、舌下含服劑、氣霧劑、鼻腔劑、或皮膚點刺劑。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的液體藥物組合物，其特征在于，所述蒿屬花粉變應(yīng)原選自 北艾花粉變應(yīng)原、黃花蒿花粉變應(yīng)原、大籽蒿花粉變應(yīng)原或其組合。
5.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的液體藥物組合物，其特征在于，所述pH5. 0 7. 0的緩 沖液選自磷酸氫二鈉_檸檬酸緩沖液、檸檬酸_檸檬酸鈉緩沖液、磷酸氫二鈉_磷酸二氫鈉 緩沖液、或乙酸-乙酸鈉緩沖液。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的液體藥物組合物，其特征在于，所述pH5.0 7.0的緩沖液 選自pH 5. 0磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖液、pH 6. 0磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖液、pH 6. 4磷酸 氫二鈉_檸檬酸緩沖液、PH 5. 0檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液、pH 6. 0檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖 液、pH 6. 4磷酸氫二鈉-磷酸二氫鈉緩沖液、pH 7. 0磷酸氫二鈉-磷酸二氫鈉緩沖液、pH 5. 0乙酸-乙酸鈉緩沖液、或pH 5. 4乙酸-乙酸鈉緩沖液。
7.一種制備權(quán)利要求1所述穩(wěn)定的液體藥物組合物的方法，其特征在于，包括如下步 驟將治療有效量的蒿屬花粉變應(yīng)原、緩沖有效量的PH 5. 0 7. 0的緩沖液、以及藥學(xué)上可 接受的載體混合。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于，該方法包括如下步驟a)以蒿屬花粉為原料，將花粉脫脂、浸提、濃縮，制得蒿屬花粉變應(yīng)原浸提液；b)將步驟a)所得的蒿屬花粉變應(yīng)原浸提液用緩沖有效量的pH5. 0 7. 0的緩沖液 稀釋成體積比1 1至1 100000000范圍內(nèi)的制劑；再加入藥學(xué)上可接受的載體，過濾除 菌。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其特征在于，在所述步驟a)中，所述浸提過程中使用 PH值為7. 5 8. 9的緩沖液浸提；所述濃縮過程中使用緩沖有效量的 >pH5. 0 7. 0的緩沖 液替換浸提緩沖液。
10.權(quán)利要求1所述穩(wěn)定的液體藥物組合物在制備治療或診斷由蒿屬花粉引起的過敏 性疾病藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種穩(wěn)定的液體藥物組合物，它包含治療有效量或診斷有效量的的蒿屬花粉變應(yīng)原、緩沖有效量的pH 5.0～7.0的緩沖液、以及藥學(xué)上可接受的載體。所述液體藥物組合物的劑型優(yōu)選口服劑、注射劑、舌下含服劑、氣霧劑、鼻腔劑、或皮膚點刺劑。本發(fā)明還提供了制備該液體藥物組合物的方法。本發(fā)明提供的液體藥物組合物可以用來治療或診斷由蒿屬花粉引起的各類過敏性疾病，其在過敏性疾病診斷、治療領(lǐng)域有廣闊的應(yīng)用前景和臨床價值。
文檔編號A61P11/02GK101905022SQ200910147470
公開日2010年12月8日 申請日期2009年6月8日 優(yōu)先權(quán)日2009年6月8日
發(fā)明者李勤 申請人:浙江我武生物科技有限公司