專利名稱：：一種三七總皂苷膠囊及其制備方法和含量測定方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明屬于中藥領(lǐng)域，更具體地說，是涉及一種三七總皂苷膠嚢及其制備方法，同時(shí)還涉及該月交嚢的含量測定方法。
背景技術(shù)：
：三七總皂苷是從五加科人參屬植物三七中提取的，其中65%以上的皂苷成分為三七皂苷Ri、人參皂苷Rg!和人參皂苷Rbi。藥理學(xué)研究表明，三七總皂苷具有降低機(jī)體耗氧量，抑制血小板聚集并增加腦血流量，降血脂血糖，抗疲勞以及提高巨噬細(xì)胞功能等作用。在臨床應(yīng)用中，以三七總皂苷為藥物活性成分制備的三七總鬼苷制劑(商品名稱為血栓通制劑)已經(jīng)成為治療缺血性心腦血管疾病的一種理想新藥。三七總皂苷制劑形式有許多種如注射劑、膠嚢及片劑等。該類制劑中上述3種皂苷的含量是決定藥品質(zhì)量和療效的重要因素，因此，對不同劑型的三七總皂苷制劑來說，三七皂苷Rp人參皂苷Rgi和人參皂苷Rbi的含量均是需要嚴(yán)格檢測與控制的關(guān)鍵指標(biāo)。在血栓通膠嚢現(xiàn)執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)(WS-10696(ZD-0696)-2002)中，含量測定方法采用比色法，但該方法以生成有色化合物的顯色反應(yīng)為基礎(chǔ)，因此所得結(jié)果的精確度受顯色劑加入量、反應(yīng)時(shí)間等因素的影響較大，人為誤差大，重現(xiàn)性差。而高效液相法因靈敏度高、準(zhǔn)確度好，操作簡便，已成為藥品成分測定的主流方法。目前，已有一些采用高效液相色語法檢測三七總皂苷含量的文獻(xiàn)報(bào)道。例如，《中國藥典》2005年版第一部通過采用高效液相色i脊法測定人參藥材中三七急苷Ri、人參皂苷Rgi和人參皂苷Rbi三種成分含量來進(jìn)行質(zhì)量控制；再如，在編號(hào)為WS-10986(ZD-0986)-2002的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中也提供了一種三七總皂苷注射劑的高效液相色譜含量檢測方法。然而，我們知道，制劑的種類和劑型在一定程度上影響檢測方法的精確性，因此這些方法并不適用于三七總皂苷膠嚢的含量檢測。
發(fā)明內(nèi)容為了進(jìn)一步提高三七總皂苦制劑的療效，有必要開發(fā)一種三七皂苷&、人參皂苷Rgl和人參皂苷Rbi含量更為合理的三七總皂苷制劑，并探索更為高效準(zhǔn)確的含量檢測方法。有鑒于此，本發(fā)明的一個(gè)目的是提供一種三七皂苷Ri、人參皂苷Rgi和人參皂苷Rbi含量得到合理控制的、療效更高的三七總皂苷膠嚢。本發(fā)明的另一目的是提供一種用于制備上述三七總皂苷膠嚢的方法。本發(fā)明的又一目的是提供一種三七總皂苷膠嚢的含量檢測方法。為實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的，根據(jù)本發(fā)明的一方面，本發(fā)明提供了一種三七總皂苷膠嚢，其內(nèi)容物由三七總皂苷90110重量份，藥用輔料70~90重量份組成，其中三七皂苷不低于4重量份、人參皂苷Rgl不低于25重量份，人參皂苷Rb!不低于IO重量份，且三種皂苷的總量不低于40重量份。根據(jù)本發(fā)明的一種優(yōu)選實(shí)施方案，本發(fā)明提供的三七總皂苷膠嚢每粒含內(nèi)容物180mg,其中三七總急苷100mg,其余為藥用輔料，其中三七皂苷Ri4.0~10.0mg,人參皂苷Rgi25.0~35.0mg,人參皂苷Rb!10.0~30.0mg，且三種急苷的總量為40~75mg。根據(jù)本發(fā)明進(jìn)一步優(yōu)選的實(shí)施方案，本發(fā)明提供的三七總皂苷膠嚢每粒含內(nèi)容物180mg，其中三七總皂苷100mg，其余為藥用輔料，其中三七急苷Ri5.5~7.0mg,人參急苦Rgi27.0~33.0mg,人參急苷Rb!17.0~25.0mg，且三種皂苷的總量為50~65mg。根據(jù)本發(fā)明的又一種優(yōu)選實(shí)施方案，在本發(fā)明提供的三七總皂苷膠嚢中，所述藥用輔料為重量比為1:17~20的藥用滑石粉和淀粉。根據(jù)本發(fā)明的另一方面，本發(fā)明還提供了一種該三七總皂苷膠嚢的制備方法，主要包括如下所述的步驟a)取三七，適度粉碎，力。2.5倍量體積分?jǐn)?shù)為70%~90%的乙醇溶液，加熱回流提耳又濃縮8~10小時(shí)后，濃縮液減壓濃縮至無醇p木，藥渣直通蒸汽回收乙醇；b)濃縮膏加純化水稀釋至0.25g生藥/ml，水沉1224小時(shí)，用濾紙過濾，濾液經(jīng)D-101大孔吸附樹脂以1.2~1.4BV/h的流速過柱吸附，然后用樹脂1倍量的純化水沖洗樹脂柱，再用樹脂1倍量80%~85%的乙醇溶液浸泡樹脂30分鐘，再用樹脂3倍量80%~85%的乙醇溶液以1.0-1.2BV/h的流速洗脫；c)自D-101樹脂流出來的洗脫液直接以6.0~6.5BV/h的流速過D900脫色樹脂，待露出樹脂面時(shí)，加入樹脂1倍量85%的乙醇溶液以相同流速?zèng)_洗樹脂柱，合并初流液和洗脫液，回收乙醇；d)醇洗膏在70。C以下微波真空干燥1.5~2.0小時(shí)，將干品粉碎、過篩，得三七總急香，將其粉碎成細(xì)粉，加入藥用輔料，混勻，制成顆粒，干燥后裝入膠嚢，取三七總皂苷90~110重量份，向其中加入藥用輔料70~90重量份，混勻，制成顆粒，干燥后裝入膠嚢，即得。根據(jù)本發(fā)明的一種優(yōu)選實(shí)施方案，在本發(fā)明提供的制備方法中，所述藥用輔料為重量比為1:17~20的藥用滑石粉和淀粉。根據(jù)本發(fā)明的又一方面，本發(fā)明還提供了一種該三七總皂苷膠嚢的含量檢測方法，該方法使用高效液相色譜作為檢測系統(tǒng)，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，理論板數(shù)按人參皂普Rgi峰計(jì)算，不應(yīng)低于6000,以乙腈-水為流動(dòng)相，其中乙腈為流動(dòng)相A，水為流動(dòng)相B,檢測波長為203nm，其中包括柱平衡、上樣、洗脫步驟，在洗脫步驟中，先用體積百分比為19%的A相和81%的B相作為流動(dòng)相，洗脫2~6個(gè)柱體積；然后逐漸遞增流動(dòng)相A的體積百分比，洗脫1~3個(gè)柱體積，至流動(dòng)相A的體積百分比為29%和流動(dòng)相B的體積百分比為71%;4妄著用體積百分比為29%的A相和71%的B相作為流動(dòng)相，洗脫13個(gè)柱體積；再逐漸遞增流動(dòng)相A的體積百分比，洗脫2~5個(gè)柱體積，至流動(dòng)相A的體積百分比為40%和流動(dòng)相B的體積百分比為60%。在本發(fā)明的膠嚢中，三七總皂苷中的三七皂苷Ri、人參皂苷Rgl和人參皂苷Rbi成分含量合理，療效好；本發(fā)明的制備工藝簡單易行,提取效率高，操作成本低，藥粉流動(dòng)性好，膠嚢裝量穩(wěn)定；本發(fā)明的含量檢測方法是用高效液相色譜法對該三七總皂苷膠嚢中三七皂苷Ri、人參皂苷Rgi和人參皂苷Rb^三種主要成分的含量進(jìn)行檢測，專屬性強(qiáng)，檢測精度高，解決了用測定其他一些劑型中三七總急苷的色譜條件存在的基線漂移、色譜峰分離不完全等問題，從而提高了對該膠嚢劑的質(zhì)量控制水平。具體實(shí)施例方式下面結(jié)合具體實(shí)施例詳細(xì)說明本發(fā)明，但本領(lǐng)域的技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)明白，本發(fā)明并不限于以下實(shí)施例。實(shí)施例1取三七，適度粉碎，加2.5倍量體積分?jǐn)?shù)為85%的乙醇溶液，加熱回流提取濃縮10小時(shí)后，濃縮液減壓濃縮至無醇味。藥渣直通蒸汽回收乙醇。濃縮膏加純化水稀釋至0.25g生藥/ml，水沉18小時(shí)，用濾紙過濾，濾液經(jīng)D-lOl大孔吸附樹脂以1.3BV/h的流速過柱吸附，然后用樹脂1倍量的純化水沖洗樹脂柱，再用樹脂1倍量85%乙醇溶液浸泡樹脂30分鐘，再用樹脂3倍量的85%的乙醇溶液以1.0BV/h的流速洗脫。自D-101樹脂流出來的洗脫液直4妾以6.5BV/h的流速過D900脫色樹脂，待露出樹脂面時(shí)，加入樹脂1倍量85%乙醇溶液以相同流速?zèng)_洗樹脂柱，合并初流液和洗脫液，回收乙醇。醇洗膏在70°C以下微波真空干燥2.0小時(shí)，使用60目的濾篩，將干品進(jìn)行粉碎，混合均勻，得三七總皂苷，將其進(jìn)一步粉碎成細(xì)粉，加入淀粉，混勻，制成顆粒，加入滑石粉混和均勻后裝入膠嚢，即得。用上述工藝分別制備10批樣品(為實(shí)施例3中4企測的樣品1~10),這些樣品均采用以下配方膠嚢每粒含三七總皂苷100mg,藥用滑石粉4mg，淀粉76mg,其中三七鬼苷4.0~10.0mg，人參^普Rgi25.0~35.0mg,人參皂苦Rb^10.0~30.0mg,且三種鳥苷的總量為40~75mg。實(shí)施例2三七總皂苷中主要含有人參皂苷Rg!、人參皂苷Rl^和三七皂苷Ri,申請人參照編號(hào)為WS-10986(ZD-0986)-2002的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中提供的三七總皂香注射劑的含量測定方法(見表1),以及中國藥典2005年版一部中提供的人參藥材的含量測定方法(見表2)對本發(fā)明的三七總皂苷膠嚢進(jìn)行檢測，結(jié)果表明，前者不能將有效成分的色譜峰與雜質(zhì)峰有效分離，且基線發(fā)生嚴(yán)重漂移；后者人參皂苷Rbi色譜峰因采用不同的色語柱而出現(xiàn)峰面積有較大差異，這表明人參急普Rbi色譜峰的分離受色譜柱影響較大，該色謙條件耐用性不好。將色譜條件進(jìn)行調(diào)整后(見表3)，從圖鐠上看人參皂苷Rb!色諳峰為單峰，但用二級(jí)振裂管進(jìn)行檢測，發(fā)現(xiàn)人參皂苷Rbi色譜峰不純，表明人參皂苷R^色譜峰中包含了未知雜質(zhì)，檢測結(jié)果不能代表人參皂苷R^的真實(shí)含量。表1時(shí)間(分鐘)A。/o畫乙腈B。/o-水02080204060212080302080200910131109.8說明書第6/20頁表2時(shí)間(分鐘)乙腈(％)水(％)0~35198135~5519—2981—7155~70297170~10029—4071—60101~1158020115~1301981表3時(shí)間(分鐘)乙腈(％)水(％)02080303565318020458020462080602080實(shí)施例3以如下含量測定方法對實(shí)施例1中制備的1~10批樣品進(jìn)行4企測。照高效液相色譜法(中國藥典2005年版一部附VID)測定。色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，理論板數(shù)按人參皂苷Rgi峰計(jì)算，不應(yīng)低于6000，以乙腈-水為流動(dòng)相，其中乙腈為流動(dòng)相A,水為流動(dòng)相B,;險(xiǎn)測波長為203nm，其中包括柱平衡、上樣、洗脫步驟，在洗脫步驟中，先用體積百分比為19%的A相和81%的B相作為流動(dòng)相洗脫2~6個(gè)柱體積；然后逐漸遞增流動(dòng)相A的體積百分比，洗脫1~3個(gè)柱體積至流動(dòng)相A的體積百分比為29%和流動(dòng)相B的體積百分比為71%;接著用體積百分比為29%的A相和71%的B相作為流動(dòng)相洗脫1~3個(gè)柱體積；再逐漸遞增流動(dòng)相A的體積百分比，洗脫2~5個(gè)柱體積至流動(dòng)相A的體積百分比為40%和流動(dòng)相B的體積百分比為60%。對照品溶液的制備精密稱取三七皂苷Ri、人參皂苷Rgi和人參皂苷Rbi對照品，加甲醇制成每lml含三七皂苷0.2mg、人參皂苷Rgi0.9mg和人參皂香Rbi0.5mg的混合溶液，即得。供試品溶液的制備取實(shí)施例1中制備的1~10批膠嚢樣品各5粒，去掉膠嚢殼，每批樣品取內(nèi)容物0.6g,精密稱定，分別置100ml的量瓶中，加曱醇適量，超聲20分鐘，放置至室溫，用曱醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取過濾液，即得。測定法分別津t密吸取對照品溶液與供試品溶液各lO(il,注入液相色鐠儀，測定，即得。樣品的含量測定結(jié)果見表4。各圖譜基線平穩(wěn)、色譜峰分離完全，用二級(jí)振裂管檢測，均為單峰。表4樣品1~10的含量測定結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>實(shí)施例4分別用安捷倫1200型和島津LC2010A兩臺(tái)儀器，TC-C18、YMC-PackODS-A和Kromail100-5C18三根色譜柱對本發(fā)明的含量測定方法(見實(shí)施例3)進(jìn)行驗(yàn)證，結(jié)果表明人參皂苷Rgi、人參皂苷Rbi和三七皂苷Ri三種成分均能得到較好分離。具體方法學(xué)驗(yàn)證材料如下1)含量測定專屬性試驗(yàn)取配方比例的淀粉與滑石粉按實(shí)施例1公開的制備工藝制得空白膠嚢，取約0.27g，精密稱定，置100ml的量瓶中，加甲醇適量，超聲20分鐘，放置至室溫，用曱醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，得空白溶液，按實(shí)施例3公開的測定方法進(jìn)行測定。結(jié)果表明輔料及供試品制備過程不影響所測成份含量測定。2)色語條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，理論板數(shù)按人參皂苷Rgl峰計(jì)算，不應(yīng)低于6000,以乙腈-水為流動(dòng)相，其中乙腈為流動(dòng)相A，水為流動(dòng)相B，檢測波長為203nm,其中包括柱平衡、上樣、洗脫等步驟，在洗脫步驟中，先用體積百分比為19%的A相和81%的B相作為流動(dòng)相洗脫2~6個(gè)柱體積；然后逐漸遞增流動(dòng)相A的體積百分比，洗脫1~3個(gè)柱體積至流動(dòng)相A的體積百分比為29%和流動(dòng)相B的體積百分比為71%;接著用體積百分比為29%的A相和71%的B相作為流動(dòng)相洗脫1~3個(gè)柱體積；再逐漸遞增流動(dòng)相A的體積百分比，洗脫2~5個(gè)柱體積至流動(dòng)相A的體積百分比為40%和流動(dòng)相B的體積百分比為60%。3)線性關(guān)系考察精密稱取三七皂苷Ri、人參皂苷Rgi和人參皂苷Rbi對照品，加曱醇制成每lml含三七皂苷R4O.2mg、人參皂苷Rg!0.9mg和人參皂苷Rb^0.5mg的混合溶液，即得對照品溶液。分別精密吸取上述溶液各2pl、5jal、lOpl、15(^1、17nl、20pl注入液相色譜儀，記錄色譜圖。以進(jìn)樣量(嗎)為橫坐標(biāo)，以峰面積積分值為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，回歸方禾呈為三七急苷Rr.Y=291.85X-3.1149r=0.9999人參皂苷Rgi:Y=338.67X-11.5781r=0.9999人參皂苷RbfY=271.47X-8.8237r=0.9999測定結(jié)果見表5。表5線性關(guān)系考察結(jié)果進(jìn)樣量Ul)2510151720三七皂苷R!進(jìn)樣量Oig)0.52081.30202.60403.90604.42685.2080三七皂苷R!峰面積150.4379.1752.11134.91287.81520.9人參皂苷Rgl進(jìn)樣量(嗎)2.03365.084010.16815.25217.28620.336人參皂苷Rgt峰面積680.11712.13424.85154.05838.96881.3人參皂苷進(jìn)樣量(嗎)1.09202.73005.46008.19009.282010.920人參皂苷Rbi峰面積292.3734.41463.62210.82511.52962.0結(jié)果表明三七皂苷Ri含量在0.52085.208pig范圍內(nèi)、人參皂苷Rgi含量在2.0336~20.336嗎范圍內(nèi)、人參皂苷Rt^含量在1.0920~10.920ng范圍內(nèi)，呈良好的線性關(guān)系。4)精密度試驗(yàn)精密吸取每1ml含三七皂苷0.2mg、人參皂苷Rg!0.9mg和人參急苷0.5mg的混合對照品溶液10|il,連續(xù)進(jìn)樣6次，依法測定峰面積，考察進(jìn)樣精密度。測定結(jié)果見表6。表6進(jìn)樣精密度試驗(yàn)結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>5)重復(fù)性試驗(yàn)取40粒實(shí)施例1制備的樣品2，去掉膠嚢殼，將內(nèi)容物混勻，稱取0.6g，平行制備6份，精密稱定，每份分別置100ml量瓶中，加甲醇適量，超聲20分鐘，放置至室溫，用曱醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。另精密稱取三七皂苷Ri、人參皂苷Rgi和人參皂苷Rh對照品，加甲醇制成每lml含三七皂苷&0.2mg、人參皂苷Rgi0.9mg和人參皂苷Rbi0.5mg的混合溶液，作為對照品溶液。分別吸取供試品溶液和對照品溶液各lOpl,注入液相色語儀，記錄色譜圖，計(jì)算含量。測定結(jié)果見表7。表7重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果三七皂苷&含量人參皂苷Rgi含量人參皂苷Rh含量(mg/g)(mg/g)(mg/g)142.3170.0164.8242.1169.6165.0342.5170.2165.1442.5169.5164.4542.0168.1163.2642.0168.8164.1本品三七急苷Ri:平均含量為42.2mg/g,RSD=0.55%(N=6);人參皂苷Rgi:平均含量為169.4mg/g,RSD=0.46%(N=6);人參皂苷Rh:平均含量為164.4mg/g,RSD=0.65%(N=6)。表明該方法的重現(xiàn)性良好。6)溶液穩(wěn)定性考察取重復(fù)性試驗(yàn)的供試品溶液于室溫放置，在上述色譜條件下于O、2.5、5、10、15、25小時(shí)分別進(jìn)樣測定其峰面積，并計(jì)算相對標(biāo)準(zhǔn)偏差。結(jié)果見表8。表8溶液穩(wěn)定性考察結(jié)果峰面積0小時(shí)2.5小時(shí)5小時(shí)10小時(shí)15小時(shí)25小時(shí)二七鬼苦Ri746.7756.5772.9746.4755.6751.2人參皂苷Rg,3513.13524.13581.63502.53512.83514.5人參皂苷Rbt2631.22638.82683.52633.72631.22629.2本品三七皂香R1:平均峰面積為754.9，RSD=1.30%;人參皂苷Rgl:平均峰面積為3524.8，RSD=0.81%;人參皂苦Rt^:平均峰面積為2641.3，RSD=0.79%。表明該溶液在室溫下i文置25小時(shí)性質(zhì)穩(wěn)定。7)準(zhǔn)確度考察取4粒實(shí)施例1制備的樣品2，去掉膠嚢殼，將內(nèi)容物混勻，稱取0.06g，精密稱定，置于10ml量瓶中；再精密加入每lml含三七皂苷0.2mg、人參皂苷Rgi0.9mg和人參皂苷Rbi0.5mg的混合對照品溶液5ml，加甲醇適量，超聲20分鐘，放置至室溫，用曱醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，作為供試品溶液。平行制備六份，按實(shí)施例3公開的測定方法測定，計(jì)算回收率及結(jié)果的RSD。/。值。測定結(jié)果見表9、10和11。表9三七皂苷R"侏確度考察表樣品樣品總含量樣品理論加入對照測得對照回收率號(hào)量(嗎)品量(jig)品量((ig)(%)12496.51592.4914.0904.198.9222593.31668.5914.0924.8101.1832581.41662.1914.0919.3100.5842579.51674.0914.0905.599.072748.41821.4914.0927.0101.4262585.01663.8914.0921.2100.79.七皂苷平均回收率為100.3%,RSD=1.07%;結(jié)果表明該方法的回收率理想。表IO人參皂苷Rgl準(zhǔn)確度考察表樣品樣品總含量樣品理論力口入照品測得對照回收率號(hào)量(嗎)品量(|ig)品量(|ig)(%)110096.26385.23767.037111.0100.95210351.36690.13767.03661.299.60310290.36664.73767.03625.698.63410399.66712.13767.03687.5100.3110964.17303.23767.03660.999.59610317.26671.53767.03645.799.18人參皂苷平均回收率為99.7%，RSD=0.82%;結(jié)果表明該方法的回收率理想。表11人參皂苷Rbi準(zhǔn)確度考察表樣品樣品總含量樣品理論加入照品測得對照回收率號(hào)量(Pg)品量(pg)品量(jig)(%)17892.76010.11888.01882.699.7128148,76297.11888.01851.698.0738134.36273.21888.01861.198.5848234.16317.81888.01916.3101.5058739.26874.21888.01865.098.7868140.96279.61888.01861,398.59人參皂苷Rbt平均回收率為99.2°/。，RSD=1.26%;結(jié)果表明該方法的回收率理想。8)耐用性考察耐用性系指在測定條件有小的變動(dòng)時(shí)，測定結(jié)果不受影響的承受程度，為使方法用于常規(guī)檢驗(yàn)提供依據(jù)。采用不同的色譜柱，按實(shí)施例3公開的測定方法對實(shí)施例1中的樣品2進(jìn)行測定，供試品溶液的制備方法同實(shí)施例3。測定結(jié)果見表12。表12耐用性考察結(jié)果色"^瞽柱三七皂苷Ri人參皂苷Rgi人參皂苷Rbi含量/粒(mg)含量/粒(mg)含量/粒(mg)The畫0DS-27.8830.0130.34UltimateXB-C187.9030.1830.44AgilentTC畫C187.9530.0530.75平均值7.9130.0830.51RSD%0.030.070.17結(jié)果表明，系統(tǒng)耐用性良好。9)中間精密度考察在同一個(gè)實(shí)驗(yàn)室，不同時(shí)間由不同分析人員用不同設(shè)備測定結(jié)果之間的精密度稱為中間精密度。目的是為考察隨機(jī)變動(dòng)因素對精密度的影響。采用AGILENT1200和SHIMADZULC-2010A高效液相色譜儀和ThermoODS畫2、UltimateXB-C18和AgilentTC-C18色鐠柱，按實(shí)施例3^>開的測定方法對實(shí)施例1中的樣品2進(jìn)行測定，供試品溶液的制備方法同實(shí)施例3。測定結(jié)果見表13。表13中間精密度考察結(jié)果AGILENT1200二七急芬Ri含量/粒(mg)人參皂苷Rgi含量/粒(mg)人參急苷Rbt含量/粒(mg)The誦ODS-27.8830.0130.34UltimateXB-C187.9030.1830.44AgilentTC國C187.9530.0530.75SHIMADZU二七急香Ri人參皂苷Rg!人參鬼苷Rb!LC-2010A含量/粒(mg)含量/粒(mg)含量/粒(mg)The腸ODS-28.0430.0730.16UltimateXB-C188.0430.3430.44AgilentTC-C188.1130.2330.32六個(gè)平均4直mg/粒7.9930.1530.41RSD%0.080.110.18結(jié)果表明，小的變動(dòng)能通過設(shè)計(jì)的系統(tǒng)性試驗(yàn)，可以保證方法有效性。實(shí)施例5制劑穩(wěn)定性考察將樣品1~3各1000粒采用上市包裝(鋁塑包裝)，在25士2。C,相對濕度60±10%的條件下放置，分別于0、3、6、9、12、18、24、36個(gè)月按時(shí)取樣，按《藥物制劑穩(wěn)定性試驗(yàn)指導(dǎo)原則》中膠嚢劑重點(diǎn)考察項(xiàng)目進(jìn)行檢測。檢測樣品的性狀、崩解時(shí)限、水分、含量，在12個(gè)月、24個(gè)月進(jìn)行微生物限度檢查，并在0個(gè)月和第36個(gè)月對三批樣品進(jìn)行全才企。結(jié)果表明樣品性狀、崩解時(shí)限、水分及含量等各項(xiàng)指標(biāo)與0月樣品比較，均未發(fā)生明顯改變。第36個(gè)月檢查全項(xiàng)，檢驗(yàn)結(jié)果與0月比較，同樣也無顯著變化。且三批樣品之間檢驗(yàn)結(jié)果差異較小。長期試驗(yàn)考察結(jié)果表明，本制劑在規(guī)定的條件下貯存，三年內(nèi)質(zhì)量穩(wěn)定。考察結(jié)果見表14~16。<table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage0</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage21</column></row><table>本發(fā)明膠嚢制劑的有效性考察試驗(yàn)樣品樣品3(每粒含5.6mg,Rg丄33.0mg,Rbi21.4mg),用法為每次l粒，每日三次；對照品血塞通片(每片含Ri5.86mg,Rgi32.04mg,Rb!9.55mg),用法為每次1片，每日三次。1.治療冠心病心絞痛方面1)湖南中醫(yī)藥大學(xué)第二附屬醫(yī)院選擇冠心病心絞痛患者117例，隨機(jī)分為觀察組57例，采用本發(fā)明的月交嚢治療；對照組60例，采用血塞通片治療。4周一療程。結(jié)果本發(fā)明的膠嚢和血塞通片對冠心病心絞痛的總有效率分別為76.67%和70.35%;對改善心電圖的總有效率分別為50.88%和50.65%;兩組用藥一療程后硝酸甘油的減停率分別為64.29%和52.63%;對心、肝、腎功能及血液指標(biāo)無明顯不良影響。2)耒陽市中醫(yī)院選擇冠心病心絞痛患者120例，隨機(jī)分為觀察組60例，釆用本發(fā)明的膠嚢治療；對照組60例，采用血塞通片治療。4周一療程。結(jié)果本發(fā)明的膠嚢和血塞通片對冠心病心絞痛的總有效率分別為78.33%和72.56%;對改善心電圖的總有效率分別為85.0%和79.67%;兩組用藥一療程后硝酸甘油的減停率分別為66.67%和57.89%;對心、肝、腎功能及血液指標(biāo)無明顯不良影響。3)寧鄉(xiāng)縣中醫(yī)院選擇冠心病心絞痛患者120例，隨機(jī)分為觀察組60例，采用本發(fā)明的膠嚢治療；對照組60例，采用血塞通片治療。4周一療程。結(jié)果本發(fā)明的膠嚢和血塞通片對冠心病心絞痛的總有效率分別為73.33%和69.81%;對改善心電圖的總有效率分別為70.0%和67.25%;兩組用藥一療程后硝酸甘油的減停率分別為66.67%和57.89%;對心、肝、腎功能及血液指標(biāo)無明顯不良影響。上述試驗(yàn)結(jié)果表明，本發(fā)明的膠嚢在治療冠心病心絞痛(氣虛血痹證)方面好于血塞通片。2.治療中風(fēng)病方面1)湖南中醫(yī)藥大學(xué)第二附屬醫(yī)院選擇中風(fēng)病(氣虛血瘀證)患者116例，隨機(jī)分為觀察組59例，采用本發(fā)明的膠嚢治療；對照組57例，釆用血塞通片治療。4周一療程。結(jié)果本發(fā)明的膠嚢和血塞通片對中風(fēng)病的總有效率分別為91.5%和82.56%;對心、肝、腎功能及血液指標(biāo)無明顯不良影響。2)耒陽市中醫(yī)院選擇中風(fēng)病(氣虛血痹證)患者116例，隨機(jī)分為觀察組58例，釆用本發(fā)明的膠嚢治療；對照組58例，采用血塞通片治療。4周一療程。結(jié)果本發(fā)明的膠嚢和血塞通片對中風(fēng)病的總有效率分別為86.2%和79.50%;對心、肝、腎功能及血液指標(biāo)無明顯不良影響。3)寧鄉(xiāng)縣中醫(yī)院選擇中風(fēng)病(氣虛血瘀證)患者110例，隨機(jī)分為觀察組55例，采用本發(fā)明的膠嚢治療；對照組55例，采用血塞通片治療。4周一療程。結(jié)果本發(fā)明的膠嚢和血塞通片對中風(fēng)病的總有效率分別為75.9%和70.42%;對心、肝、腎功能及血液指標(biāo)無明顯不良影響。以上情況表明，本發(fā)明的膠嚢在治療中風(fēng)病(氣虛血痂證)方面好于血塞通片。權(quán)利要求1.一種三七總皂苷膠囊，其內(nèi)容物由三七總皂苷90～110重量份，藥用輔料70～90重量份組成，其中三七皂苷R1不低于4重量份，人參皂苷Rg1不低于25重量份，人參皂苷Rb1不低于10重量份，且三種皂苷的總量不低于40重量份。2.如權(quán)利要求1所述的三七總皂苷膠嚢，其特征在于，每粒含內(nèi)容物180mg,其中三七總皂苷100mg,其余為藥用輔料，其中三七皂苷4.0~10.0mg,人參急苷Rgi25.0~35.0mg,人參急香Rbi10.0~30.0mg，且三種皂苷的總量為40~75mg。3.如權(quán)利要求2所述的三七總皂苷膠嚢，其特征在于，每粒含內(nèi)容物180mg，其中三七總皂苷100mg,其余為藥用輔料，其中三七皂苷R^5.57.0mg,人參急苷Rgi27.0~33.0mg，人參皂苦Rb"7.025.0mg,且三種急苷的總量為50~65mg。4.如權(quán)利要求1~3任一項(xiàng)所述的三七總皂苷膠嚢，其特征在于，所述藥用輔料為重量比為1:17~20的藥用滑石粉和淀粉。5.—種制備如權(quán)利要求1所述三七總皂苷膠嚢的方法，其特征在于，主要包括如下所述的步驟a)取三七，適度粉碎，加2.5倍量體積分?jǐn)?shù)為70%~90%的乙醇溶液，加熱回流提取濃縮8~10小時(shí)后，濃縮液減壓濃縮至無醇味，藥渣直通蒸汽回收乙醇；b)濃縮膏加純化水稀釋至0.25g生藥/ml，水沉1224小時(shí)，用濾紙過濾，濾液經(jīng)D-101大孔吸附樹脂以1.2~1.4BV/h的流速過柱吸附，然后用樹脂1倍量的純化水沖洗樹脂柱，再用樹脂1倍量80%~85%乙醇溶液浸泡樹脂30分鐘，再用樹脂3倍量80%~85%的乙醇溶液以1.0~1.2BV/h的流速洗脫；c)自D-101樹脂流出來的洗脫液直接以6.0~6.5BV/h的流速過D900脫色樹脂，待露出樹脂面時(shí)，加入樹脂1倍量的85%的乙醇溶液以相同流速?zèng)_洗樹脂柱，合并初流液和洗脫液，回收乙醇；d)醇洗膏在70。C以下微波真空干燥1.5-2.0小時(shí)，將干品粉碎、過篩，得三七總皂苷，將其粉碎成細(xì)粉，取三七總皂苷90110重量份，向其中加入藥用輔料70~90重量份，混勻，制成顆粒，干燥后裝入膠嚢，即得。6.如權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，所述藥用輔料為重量比為1:17~20的藥用滑石粉和淀粉。7.—種檢測如權(quán)利要求1~4任一項(xiàng)所述三七總皂苷膠嚢含量的方法，其特征在于，使用高效液相色譜作為檢測系統(tǒng)，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，理論板數(shù)按人參皂苷Rgi峰計(jì)算，不應(yīng)低于6000,以乙腈-水為流動(dòng)相，其中乙腈為流動(dòng)相A,水為流動(dòng)相B，枱r測波長為203nm,其中包括柱平衡、上樣、洗脫等步驟，在洗脫步驟中，先用體積百分比為19%的A相和81%的B相作為流動(dòng)相洗脫26個(gè)柱體積；然后逐漸遞增流動(dòng)相A的體積百分比，洗脫1~3個(gè)柱體積至流動(dòng)相A的體積百分比為29%和流動(dòng)相B的體積百分比為71%;接著用體積百分比為29%的A相和71%的B相作為流動(dòng)相洗脫1~3個(gè)柱體積；再逐漸遞增流動(dòng)相A的體積百分比，洗脫2~5個(gè)柱體積至流動(dòng)相A的體積百分比為40%和流動(dòng)相B的體積百分比為60%。全文摘要本發(fā)明涉及一種三七總皂苷膠囊及其制備方法和含量測定方法。在本發(fā)明提供的三七總皂苷膠囊中，三七皂苷R₁、人參皂苷Rg₁和人參皂苷Rb₁成分含量合理，療效好；制備工藝簡單易行，提取效率高，操作成本低，藥粉流動(dòng)性好，膠囊裝量穩(wěn)定。本發(fā)明的含量檢測方法是用高效液相法對該三七總皂苷膠囊中的三七皂苷R₁、人參皂苷Rg₁和人參皂苷Rb₁三種主要成分的含量進(jìn)行檢測，專屬性強(qiáng)，檢測精度高，解決了用測定其他一些劑型中三七總皂苷的色譜條件存在的基線漂移、色譜峰分離不完全等問題，從而提高了對該膠囊劑的質(zhì)量控制水平。文檔編號(hào)A61P9/00GK101502549SQ200910131109公開日2009年8月12日申請日期2009年4月2日優(yōu)先權(quán)日2009年4月2日發(fā)明者代喜國,周廣紅,周雪峰,岳大彪,方同華,項(xiàng)彥華申請人:哈爾濱珍寶制藥有限公司