專利名稱：：榛子素b及其提取方法和其藥物用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及榛子素B及其提取方法，和其在制備治療高血脂癥藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：平榛(C07/船/zefera//2;;〃aFisch)是擦(C07/ws/z她ra//z少〃aFish,exBess.)屬中的一種植物。榛(Cb/y/wj/efera//^〃"Fish.exBess.)為樺木禾斗(&fw/"ceae)榛屬(OWw)植物，原產(chǎn)我國，據(jù)考證迄今已有6000多年的歷史。由于榛的野生資源豐富，多年來我國較多的是利用野生資源，隨著栽培學(xué)的迅速發(fā)展，市場的不斷開拓，近些年來在我國部分地區(qū)已有少量的栽培。目前，在我國栽培的榛有平榛(Cc^/us/2efmp/2_y〃<3Fisch)、毛榛(CW附,w<is/zi^/c<3Batal)、刺榛(Co^y/"s"6幼'caBatal)等12種，其中以平榛分布較多而且普遍，在遼寧、吉林、黑龍江、山西、山東、河南等地均有分布。榛是果材兼用的優(yōu)良樹種，不僅可生產(chǎn)十分珍貴的木材，而且能生產(chǎn)上等的堅果和以其種仁為原料的高檔食品。榛的木材堅硬，紋理、色澤美觀，可做小型細(xì)木工的材料，它的種仁油芳香可食，又是制作肥皂、蠟燭和化妝品的原料。榛的植物學(xué)特征及生長分布榛為多年生喬木或灌木，樹高一般為1.5-2m，樹皮灰褐色，有光澤，1年生枝褐色，密生茸毛；芽鱗暗褐色，邊緣有毛；葉互生，托葉小，早落；葉片圓形、廣卵形或倒卵形，尖端近截形或圓形，淺裂，中央裂片較長，漸尖，基部心形或截形，邊緣有不規(guī)則重鋸齒；頂端平截，中央有突出的葉尖；葉上面深綠色，下面淺綠色，側(cè)脈3-5對，多為羽狀葉脈；單性花，雌雄同株，無花瓣，先葉開放，雄花序為圓柱形，下垂的棻荑花序，具多數(shù)、覆瓦狀排列的苞片，每一苞片內(nèi)有叉狀的雄蕊4-8枚，花藥黃色，雌花著生于雄花序附近，包藏于一總苞內(nèi)，僅紅色柱頭突出，開放時露出芽頂；堅果l-6個，淺褐色，簇生或單生，較大，球形或卵圓形，徑約1.5cm，有總苞片2個，淺裂，鐘狀，外面密生短柔毛和刺毛狀腺體。花期4-5月，果熟期9月。榛生于向陽干燥的山坡、崗地、路邊荒地和林緣等處。分布于中國東北、華北。榛的主要成分榛樹的葉含鞣質(zhì)，并有黃酮反應(yīng),樹皮含有鞣質(zhì)；果仁含碳水化合物、蛋白質(zhì)、脂肪；果實含有淀粉；葉尚含有生物堿。油的脂肪酸組成有棕櫚酸、硬脂酸、油酸和亞麻油酸等。榛具有廣泛的藥用價值種仁可以益氣、開胃、明目。用于病后體虛，食少疲倦。水煎服，用量30-60g。榛的雄花具有消炎、消腫、止痛作用。可用于皮膚炎癥、凍傷等。目前國內(nèi)外學(xué)者對榛屬植物研究主要集中在高極性的鞣質(zhì)化合物，對榛屬植物中含有的較低極性的化學(xué)成分研究較少，主要化學(xué)成分為n山酮類化合物。鞣質(zhì)類化合物是該屬植物的主要成分之一。目前，針對該屬植物所含的鞣質(zhì)類化合物的研究較多，對該屬植物的其他化學(xué)成分研究較少。金哲雄,等從榛葉中分離提取出8個化合物，分別為quercetin-3-(9-々-D誦glucuronide;3,4,6一penta-0-galloyl一D一glucose;1，2,3,6國tetra-々畫D-glucose;casuarictin;rugosinC;degalloylrugosinF;heterophylliinA禾卩tellimagrandinII(金哲雄，張秀驟.榛子葉鞣質(zhì)類化學(xué)成分研究[J].中草藥，2001，32(3):193-195)。王力，等從榛葉中分離提取出4個化合物，分別為榛葉素B(heterophylliinB)，tellinagrandin,casuarictin禾卩casuarinin。其中棒葉素B為一種新的鞣花二聚體成分(王力，金哲雄.榛子葉鞣質(zhì)類化學(xué)成分研究(n)[J〗.中草藥，2004,35(6):606-608.)。張麗華,等發(fā)現(xiàn)榛屬中含有紫杉醇類物質(zhì)，含量為紫杉樹皮的1/10，同時在鞍山科技大學(xué)分離技術(shù)中心參照AngelaHoffman的實驗條件和榛樹中紫杉醇的圖譜，進(jìn)行了大量的實驗研究，確認(rèn)鞍山地區(qū)的山榛樹中也含有紫杉醇，并對其進(jìn)行了提取和純化，最終分離得到了目標(biāo)物，初步鑒定為紫杉醇(張麗華，高麗娟.鞍山地區(qū)山榛子樹皮中紫杉醇的提取[J].福建分析測試，2003,12(2):1765-1768.)。該植物中含有大量燦酮類化合物。簡單異戊烯基n山酮是指燦酮母核上僅含有一些結(jié)構(gòu)簡單的羥基、甲氧基及直鏈的異戊烯結(jié)構(gòu)單元取代基的化合物，該類化合物有260余種。目前未見到有關(guān)榛子素B的提取方法及化合物的報道，該化合物屬于新化合物，屬于首次分離得到；該化合物的新的藥物用途屬首次發(fā)現(xiàn)。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明提供榛子素B及其提取方法和藥物用途。一種如下式的榛子素B:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula>黃色針狀結(jié)晶(CHC13)，mp.185186°C。三氯化鐵-鐵氰化鉀反應(yīng)陽性，示有酚羥基存在。是從榛葉中分離得到的單體化合物，故命名為榛子素B，化學(xué)名稱為1，3-二羥基-5，8-二甲氧基-2，4-二(3-甲基-2-丁烯基)口山酮(l，3-dihydroxy-5，8-dimethoxy-2,4-bis(3-methylbut-2-enyl)-xanthen-9-one)。本發(fā)明榛子素B的制備方法是，包括下列步驟a、提取取干燥榛葉5.0kg，用35倍量的75%95%乙醇室溫浸泡24小時，濾過，回收溶劑，浸提3次，合并提取液，減壓回收溶劑至相對密度1.121.15，濾過，濾液依次用石油醚、三氯甲垸、乙酸乙酯、正丁醇萃取，減壓回收溶劑至干，得正丁醇部分25g30g;b、分離將得到的正丁醇部分進(jìn)行硅膠柱層析200300目，三氯甲烷-甲醇1:110洗脫，收集榛子素B部分洗脫液，回收溶劑得榛子素B粗產(chǎn)品，收率0.011%0.016°/0;C、榛子素B的純化取粗榛子素B用甲醇進(jìn)行重結(jié)晶，得純榛子素B:0.5g0.7g。本發(fā)明榛子素B在制備治療高血脂癥藥物中的應(yīng)用。當(dāng)本發(fā)明用于制備治療高血脂癥的藥物時，其口服或胃腸外給藥，均是安全的，在口服情況下，其可以任何常規(guī)形式給藥，如散劑、粒劑、片劑、膠囊劑、丸劑、溶液劑、懸浮液、糖漿、口腔含片、舌下含片等當(dāng)該藥物腸胃外給藥時，可采取任何常規(guī)形式，例如注射劑如靜脈內(nèi)注射、軟膏劑、栓劑、經(jīng)皮給藥、吸入劑等。本發(fā)明制備治療高血脂癥的藥物是由有效成分單體或有效成分與固體或液體的賦形劑一起構(gòu)成的，這里使用的固體或液體的賦形劑在本領(lǐng)域是眾所周知的，下面舉幾個具體例子，散劑是內(nèi)服的粉末劑，它的賦形劑有乳糖、淀粉、漿糊精、碳酸鈣、合成或天然硫酸鋁、氧化鎂、硬脂酸鎂，碳酸氫鈉、干燥酵母等；溶液劑的賦形劑有水、甘油、1，2-丙二醇、單糖槳、乙醇、乙二醇、聚乙二醇、山梨糖醇等；軟膏劑的賦形劑可以使用脂油，含水羊毛脂、凡士林、甘油、蜂臘、木臘、液體石臘、樹脂、高級臘等組合成的疏水劑或親水劑。本發(fā)明的有益效果在于，新化合物榛子素B可用于制備降血脂的藥物，具有療效顯著的特點。有效物質(zhì)的劑量可以根據(jù)服用方式，病人的年齡和體重及病情嚴(yán)重程度和其它類似的因素而改變，口服量為80240mg，每日二次服用；注射1030mg，每日一次。圖1是榛子素B的HMBC譜主要相關(guān)信號圖。圖2是榛子素B的lHNMR譜圖。圖3是榛子素B的13CNMR譜圖。圖4是榛子素B的HMBC譜圖。圖5是榛子素B的HR-ESI-MS譜圖。具體實施方式實施例1:a、提取取干燥榛葉5.0kg，用3倍量的85%乙醇室溫浸泡24小時，濾過，回收溶劑，浸提3次，合并提取液，減壓回收溶劑至相對密度1.12，濾過，濾液依次用石油醚、三氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇萃取，減壓回收溶劑至干，得正丁醇部分25g，b、分離將得到的正丁醇部分進(jìn)行硅膠柱層析200300目，三氯甲烷-甲醇1:1洗脫，收集洗脫液，回收溶劑得榛子素B粗產(chǎn)品，收率0.011%，C、榛子素B的純化取粗榛子素B用甲醇進(jìn)行重結(jié)晶，得純榛子素B:0.5g。鑒定采用波譜學(xué)方法進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定。HRMS譜給出分子量為423.1879[M-l]'1，結(jié)合DEPTQSP、iHNMR譜確定其分子式為C25H2806。在'HNMR(500MHz，CDC13)中，低場可見312.29(1H，s)、5.71(1H，s)兩個單峰的孤立質(zhì)子的信號其中^12.29(1H,s)為C-l位羥基質(zhì)子信號，》5.71(m，s)為C-3位羥基質(zhì)子信號；在37.17(1H，d，《/=9.0Hz)、6.61(1H，d，《/=9.0Hz)給出一個苯環(huán)上的AX自旋系統(tǒng)的質(zhì)子信號；分別在33.46(2H，d，J^6.5Hz)、5.17(1H，t，《/=6.5Hz)和3.40(2H，d，《/=7.0Hz)、5.20(1H，t,J=7.0Hz)處可見兩組A2X自旋系統(tǒng)質(zhì)子信號；另外'HNMR可見(53.77(3H，s)、3.75(3H，s)、1.79(6H，s)、1.72(3H，s)和1.69(3H，s)5組單峰甲基質(zhì)子信號，其中33.77(3H，s)和3.75(3H，s)為2個甲氧基質(zhì)子信號。在DEPTQSP(125.8MHz，CDC13)中，共給出25個碳信號，其中13個季碳信號，4個叔碳信號，6個伯碳信號和2個仲碳信號。結(jié)合iHNMR譜可知，化學(xué)位移3183.63的羰基碳信號，與3160.52-101.13之間給出的12個芳香碳信號一起構(gòu)成了n山酮母核；355.95和55.68為甲氧基碳信號；剩余4個烯烴碳信號((5119.87、135.16、121.77和132.86)、4個甲基信號"20.88、16.85、20.48、16.85)及2個亞甲基信號"24.76、24.57)。解析HMBC譜，發(fā)現(xiàn)&3,40(2H，d，H-ll)質(zhì)子信號分別與^108.34(C-2)、157.04(C-l)、160.52(C畫3)、135.16(C-13)和119.87(C-12)存在相關(guān)信號，推斷該質(zhì)子所在的仲碳與C-2和C-12相連，(^5.17(1H，t，H-12)質(zhì)子信號分別與&108.34(C-2)、24.76(011)、20.88(014)、16.85(C-15)和135.16(C-13)存在相關(guān)信號，確定該質(zhì)子所在的烯碳與C-ll相連，質(zhì)子信號&1.79(6H，s，H-14)和1.72(3H，s，H-15)與3C24.76(C-ll)、119.87(C-12)、135.16(C-13)存在相關(guān)信號，確定兩個甲基質(zhì)子信號所在的甲基與C-13相連，綜合'HNMR譜和DEPTQSP譜分析確定該分子中存在1個3-甲基-2-丁烯基的C-5結(jié)構(gòu)，并推斷其與C-2相連。另外在HMBC譜中，可見&3.46(2H，d，H-16)質(zhì)子信號分別與Jc106.08(C-4)、152.72(C-4a)、160.52(C-3)、132.86(C-18)和121.77(C-17)存在相關(guān)信號，確定該質(zhì)子所在的仲碳與C-4和C-17相連，(1H，t，H-17)質(zhì)子信號分別與&106.08(C-4)、24.57(C-16)、20.48(C-19)、16.85(C-20)禾Q132.86(C-18)存在相關(guān)信號，確定該質(zhì)子所在的雙鍵與C-16相連，質(zhì)子信號&1.79(6H，s，H-19)和(5//1.69(3H，s，H-20)與3C24.57(C-16)、132.86(C-18)、121.77(C-17)存在相關(guān)信號，確定兩個甲基質(zhì)子信號所在的甲基與C-18相連，綜合iHNMR譜和DEPTQSP譜分析確定了另1個3-甲基-2-丁烯基的C-5結(jié)構(gòu)，并推斷其與C-4相連。解析HMBC譜，可見位于低場的&12.29(1H，s，-OH)質(zhì)子信號與&101.13(C-la)、108.34(C-2)、157.04(C-l)存在相關(guān)信號，&5.71(1H，s，-OH)質(zhì)子信號與(5cl08.34(C-2)、160.52(C-3)、106.08(C-4)存在相關(guān)信號，推斷^12.29(1H，s，-OH)與C-1相連，(1H，s，-OH)與C-3相連。解析HMBC譜，可見(5//7.17(1H，d，H-6)質(zhì)子信號分別與^134.76(C-5)、141.75(C-5a)、108.65(C-7)和151.40(C-8)存在相關(guān)信號，(1H，d，H-7)質(zhì)子信號分別與(5cl34.76(C-5)、151,40(C-8)、120.72(C-6)和104.68(C-8a)存在相關(guān)信號，同時結(jié)合iHNMR譜中兩個質(zhì)子的化學(xué)位移和偶合常數(shù)，可知兩個質(zhì)子位于同一個苯環(huán)上的鄰位。在HMBCi普中，^3.77(3H，s，-OCH3)質(zhì)子信號與<5C120.72(C-6)、134.76(C-5)、141.75(C-5a)存在相關(guān)信號，可知該甲氧基與C-5相連；^/3.75(3H，s，-OCH3)質(zhì)子信號與^;108.65(C-7)、151.40(C-8)、104.68(C-8a)存在相關(guān)信號，可知該甲氧基與C-8相連。該化合物的HMBC譜主要相關(guān)信號見圖1。根據(jù)'HNMR、DEPTQSP和HMBC譜所提供的信息，對該化合物的碳?xì)浜舜艛?shù)據(jù)進(jìn)行了歸屬，結(jié)果見表l。'HNMR、DEPTQSP、HMBC、HRMS譜分別見圖2、圖3、圖4、圖5。表1榛子素B的NMR數(shù)據(jù)No.ljCNMR'HNMR畫BC1157.0412.29(1H,s,-OH)C-l,C-la，C-22108.34160.525.71(m,s,-OH)C-2,C-3，C-44106.084a152.7253141.75134.766120.727.17(1H,句C-5,C-5a,C-7，C-87跳656.61(1H,力C-5,C-6,C-8,C-8a8151.408a104.68la101.13955.953.77(3H,s,-OCH3)C-5,C-5a,C-61055.683.75(3H,s，-OCH3)C-7,C-8,C-8a1124.763.40(2H，力C-1,C-2,C-3,C-12，C扁1312119.875.17(lH，f)C-2,C-11，C-13,C-14,C-1513135.161420.881.79(6H,s)C-11,C-12,C-13,C-151516.851.72(3H,力C-11,C-12,C-13，C-141624.573.46(2H,司C-3,C-4,C-4a,C-17,C-1817121.775.20(1H,0C-4,C-16,C-18,C-19,C-2018132.861920.481.79(6H,s)C-16,C-17,C-18,C-202016.851.69(3H,s)C-16,C-17,C-18,C-19-CO-183.63將該化合物的波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)(LimzmaM,ItoT,TosaH,"a/.FivenewxanthonesfromGwr/"/flt^/c&[J].JNatProd,1996，59:472~475)J艮道的1，3，5，8-四羥基-2，4-二(3-甲基-2-丁烯基)口山酮化合物進(jìn)行比較，結(jié)果發(fā)現(xiàn)除5、8位連有的基團(tuán)有差異外，其余基本相同。12綜合分析，鑒定該化合物為1,3-二羥基-5，8-二甲氧基-2，4-二(3-甲基—2-丁烯基)n山酮(1，3-dihydroxy-5,8-dimethoxy國2，4-bis(3-methylbut畫2-enyl)-xanthen-9-one)，纟5ScienceFinder檢索未發(fā)J見有關(guān)該化合物的文獻(xiàn)報道，為一新化合物，命名為榛子素B。實施例2:a、提取取干燥榛葉5.0kg，用4倍量的75%乙醇室溫浸泡24小時，濾過，回收溶劑，浸提3次，合并提取液，減壓回收溶劑至相對密度1.15，濾過，濾液依次用石油醚、三氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇萃取，減壓回收溶劑至干，得正丁醇部分28g。b、分離將得到的正丁醇部分進(jìn)行硅膠柱層析200300目，三氯甲垸-甲醇l:5洗脫，收集榛子素B部分洗脫液，回收溶劑得榛子素A粗產(chǎn)品，收率0.013%。c、榛子素B的純化取粗榛子素B用甲醇進(jìn)行重結(jié)晶，得純榛子素A:0.64g。實施例3:a、提取取干燥榛葉5.0kg，用5倍量的95°/。乙醇室溫浸泡24小時，濾過，回收溶劑，浸提3次，合并提取液，減壓回收溶劑至相對密度1.14，濾過，濾液依次用石油醚、三氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇萃取，減壓回收溶劑至干，得正丁醇部分30g。b、分離將得到的正丁醇部分進(jìn)行硅膠柱層析200300目，三氯甲烷-甲醇l:10洗脫，收集榛子素B部分洗脫液，回收溶劑得榛子素B粗產(chǎn)品，收率0.016%。c、榛子素B的純化取粗榛子素A用甲醇進(jìn)行重結(jié)晶，得純榛子素A:0.7g。實驗例、榛子素B預(yù)防和治療高血脂癥的藥效試驗1、材料與方法1.1動物SD大鼠，60只，雄性，體重130g150g，購自本校實驗動物中心。1.2藥物榛子素B:自制；非諾貝特規(guī)格200mg/粒，批號89396，法國利博福尼制藥公司生產(chǎn)；膽固醇粉購自北京雙旋生物培養(yǎng)基制品廠，批號20050606。1.3高脂兔飼料及各種含藥物高脂飼料的配制高脂飼料配制基礎(chǔ)飼料100g中加入膽固醇0.4g，豬油2mL;在高脂詞料的基礎(chǔ)上加入不同含量的藥物配制成含藥物的高脂飼料供實驗喂養(yǎng)。2、對正常大鼠血脂水平的影響取大鼠60只，禁食給水12h，稱體重，隨機(jī)分為6組(每組各IO只):正常對照組、高脂模型組(生理鹽水，10ml/kg)、陽性對照組(非諾貝特20mg/kg)、榛子素B大劑量組(60mg/kg)、中劑量組(30mg/kg)和小劑量組(15mg/kg)。上述藥物均灌胃(ig)給藥，每日l次，共15d，實驗過程中每周稱體重1次，第16天摘除大鼠眼球，眼眶取血2-3ml，送血生化檢查，測血清中TG和TC含量。3、榛子素A降血脂試驗結(jié)果見表2。表2榛子素A降血脂試驗結(jié)果(S±&n=10)<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>*與正常對照組比較，p〈0.05;"與正常對照組比較，p<0.01。4、結(jié)論實驗結(jié)果表明榛子素B具有明顯的降血脂作用。制備藥劑的實施例h榛子素B20.0g，以l，2-丙二醇1000ml溶解，過濾后分裝于1000支安瓶中，每支lml，含榛子素B20mg。制備藥劑的實施例2:榛子素B200.0g，藥用淀粉適量，二者充分混合，裝膠囊，制成IOOO粒膠囊，每粒重0.25g，含榛子素B200mg。權(quán)利要求1、一種如下式的榛子素B其化學(xué)名稱為1，3-二羥基-5，8-二甲氧基-2，4-二(3-甲基-2-丁烯基)id="icf0002"file="A2009100669330002C2.tif"wi="5"he="5"top="118"left="22"img-content="drawing"img-format="tif"orientation="portrait"inline="yes"/>酮(1，3-dihydroxy-5，8-dimethoxy-2，4-bis(3-methylbut-2-enyl)-xanthen-9-one)。2、一種如權(quán)利要求1所述榛子素B的制備方法，其特征在于，包括下列步驟a、提取取干燥榛葉5.0kg，用3-5倍量的75%95%乙醇室溫浸泡24小時，濾過，回收溶劑，浸提3次，合并提取液，減壓回收溶劑至相對密度1.121.15，濾過，濾液依次用石油醚、三氯甲垸、乙酸乙酯、正丁醇萃取，減壓回收溶劑至干，得正丁醇部分2530g;b、分離將得到的正丁醇部分進(jìn)行硅膠柱層析200300目，三氯甲垸-甲醇1:110洗脫，收集榛子素B部分洗脫液，回收溶劑得榛子素B粗產(chǎn)品，收率0.011%0.016%;C、榛子素B的純化取粗榛子素B用甲醇進(jìn)行重結(jié)晶，得純榛子素B:0.5g0.7g。3、根據(jù)權(quán)利要求2所述的榛子素B的制備方法，其特征在于乙醇可用甲醇、水代替。4、根據(jù)權(quán)利要求2所述的榛子素B的制備方法，其特征在于分離柱層析填料還包括活性炭、硅藻土、大孔吸附樹脂或氧化鋁。5、如權(quán)利要求1所述的榛子素B在制備治療高血脂癥藥物中的應(yīng)用。全文摘要本發(fā)明涉及榛子素B及其提取方法和其藥物用途。屬于新化合物及其藥物用途。以平榛葉為原料，經(jīng)過醇提，有機(jī)溶劑萃取以及硅膠柱層析，重結(jié)晶方法，得到了一種新化合物，其化學(xué)名稱為化學(xué)名稱為1，3-二羥基-5，8-二甲氧基-2，4-二(3-甲基-2-丁烯基)酮(1，3-dihydroxy-5，8-dimethoxy-2，4-bis(3-methylbut-2-enyl)-xanthen-9-one)，簡稱榛子素B，產(chǎn)率達(dá)0.01％以上。榛子素B在制備治療高血脂癥藥物中有著廣泛的藥物用途。文檔編號A61K31/352GK101550125SQ20091006693公開日2009年10月7日申請日期2009年5月11日優(yōu)先權(quán)日2009年5月11日發(fā)明者劉金平,丹盧,李平亞,薛健飛申請人:吉林大學(xué)