專利名稱：一種倒提壺提取物及其制備方法和應用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種倒提壺提取物及其制備方法和應用，屬于制藥技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
倒才是壺(Qy"og/o^w附Stop/"/>"附附)，紫草科琉璃草屬植物，多 年生草本，分布于我國云南、貴州、廣東、廣西、新疆等地。其地上部分又叫 狗屎花、狗舌花、藍布^"、藍花參、小綠連草等，其地下部分異名雞爪參、狗 屎花根、接骨草根等；倒提壺全草入藥，其味苦，性涼，有清熱利濕，散痹止 血，止咳，鎮(zhèn)痛支功效，是我國布依族常用治療瘧疾、肝炎、痢疾、咳嗽、風 濕性關(guān)節(jié)炎、支氣管炎、膀胱炎、尿道炎等癥的民族藥物，但倒提壺草藥的有 效化學成分至今尚未見有文獻報道，因此該草藥用于治療疾病僅停留在直接以 植物直接入藥的階段，既不能量化，也不能用其他方式合成，更不適于制備成 現(xiàn)代藥物的劑型。
本發(fā)明針對已有技術(shù)的不足，目的在于提供一種全新的、能夠?qū)⒌固釅厝?藥時量化、被現(xiàn)代藥物劑型所利用的倒提壺提取物。
本發(fā)明的另一目的是提供上述倒提壺提取物的制備方法。 本發(fā)明還有一個目的是提供上述倒提壺提取物在制藥領(lǐng)域中的應用。 本發(fā)明通過以下技術(shù)方案實現(xiàn)上述目的
一種倒提壺提取物，白色，熔點〉300'C,分子式C3oH44C)8,結(jié)構(gòu)如式I:

發(fā)明內(nèi)容
<formula>formula see original document page 3</formula>本發(fā)明還提供上述倒提壺提取物的制備方法，步驟為
倒提壺全草干燥粉碎，用水回流提??；提取液濃縮后用乙醇進行醇沉，濾 除沉淀，上清液回收乙醇，再加適量水稀釋，依次用氯仿、乙酸乙酯或正丁醇 萃取，回收溶劑，得到乙酸乙酯部位浸膏和正丁醇部位浸膏；所述兩種浸膏經(jīng) 純化得到倒提壺提取物，本發(fā)明稱之為倒提壺酸，是一種五環(huán)三辟化合物。
所述純化是取正丁醇部位浸膏，先用D101大孔樹脂吸附，再依次用體 積百分比10%、 30 % 、 50%、 70 %和90 %乙醇進行梯度洗脫；取上述50 %乙 醇的洗脫液濃縮成正丁醇部位濃縮浸膏；耳又正丁醇部位濃縮浸膏或乙酸乙酯部 位浸膏，以氯仿U):曱醇(B) (100: 0 — 100: 20 )梯度洗脫(優(yōu)選的梯度設(shè) 置見表1 ),洗脫液(優(yōu)選100: 8的洗脫液)經(jīng)過濃縮得到白色固態(tài)析出物， 該析出物再經(jīng)過反復重結(jié)晶，得到白色粉末狀的目標產(chǎn)物進行反復重結(jié)晶，得 白色粉末狀的目標產(chǎn)物。
表l洗脫梯度設(shè)置
洗脫梯 氯仿(A ):曱醇(B) 洗脫體積
度設(shè)置 (體積比)
1 100:0，100:1, 100: 2, 100: 3，每個梯度洗脫
100:4，100:5, 100: 6， 100: 7，劑用量為2BV
100:8，100:9， 100: 10
2 100:10,100:12, 100: 14， 100:每個一弟度洗脫
16，100:18,100: 20劑用量為1BV
本發(fā)明倒提壺酸的提取工藝更具體地可表示為將倒提壺全草干燥粉碎， 用水回流提取3次，每次2-3小時；合并提取液、濃縮，力口乙醇調(diào)至75%進 行醇沉，放置24小時后過濾去除沉淀，上清液回收乙醇至無醇味，加適量水 稀釋，依次以氯仿、乙酸乙酯、正丁醇梯度萃取，回收溶劑，分別得到乙酸乙 酯和正丁醇部位浸膏。得到的正丁醇部位浸膏用D101大孔樹脂、上述不同濃 度的乙醇進行梯度洗脫，取乙酸乙酯部位浸膏或正丁醇部位經(jīng)大孔樹脂吸附后 用50°/。乙醇洗脫下來的洗脫液，經(jīng)濃縮后得到的浸膏進行硅膠柱層析，以氯仿-曱醇(100: 0— 100: 20 )梯度洗脫，100: 8洗脫部位進行反復重結(jié)晶，得白 色粉末狀的目標產(chǎn)物一一倒提壺酸。
本發(fā)明倒提壺酸的在制藥領(lǐng)域中的應用是將倒提壺提取物應用于現(xiàn)代制 藥，制備成片劑，膠嚢，固體分散體，納米乳及其緩控釋制劑.與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下有益效果本發(fā)明倒提壺提取物屬于新 化學實體，屬于原始創(chuàng)新；該化合物是一種新的五環(huán)三^急苦，結(jié)構(gòu)新穎，從 構(gòu)效關(guān)系上分析，該化合物具有3個羧基，理論上比齊墩果酸結(jié)構(gòu)更理想，具 很強的生物學活性；本發(fā)明明確了倒提壺中的有效成分，使倒提壺可以被現(xiàn)代 藥物劑型所利用，進一步促進了傳統(tǒng)藥的現(xiàn)代化，有著廣闊的應用前景。


圖1是實施例1的HMBC譜圖。
具體實施例方式
以下通過具體的實施例進一步說明本發(fā)明的技術(shù)方案。 實施例1
倒提壺酸的制備本實施例所用藥材購自中藥材市場，由廣東藥學院中藥 學院劉基柱老師鑒定。薄層色譜和柱色譜硅膠為青島海洋化工廠產(chǎn)品，所用試 劑為分析純。
將倒提壺全草10Kg干燥粉碎，用水回流提取3次，每次2 - 3小時；合并 提取液、濃縮，力口乙醇調(diào)至75%進行醇沉，放置24小時后過濾去除沉淀，上 清液回收乙醇至無醇味，加適量水稀釋，分別以氯仿、乙酸乙酯、正丁醇梯度 萃取，回收溶劑，得浸膏。正丁醇部位浸膏用D101大孔樹脂、不同濃度的乙 醇進行粗分。取乙酸乙酯部位浸膏40g和正丁醇大孔樹脂50%乙醇洗脫部位浸 膏8. 5g分別進行硅膠柱層析，以氯仿-曱醇(100: 0 — 100: 20 )梯度洗脫， 100: 8洗脫部位進行反復重結(jié)晶，共得倒提壺酸500mg。
本發(fā)明的倒提壺酸結(jié)構(gòu)解析倒提壺酸，白色粉末，10%硫酸-乙醇IIO 。C下顯藍色，熔點〉300。C, HRESI-EI結(jié)合13CNMR確定化合物的分子式 C30H44C)8。
IR譜示有3523 (OH)， 1702 (羧酸。=0)。 iHNMR和13CNMR數(shù)據(jù)如表 2所示表2 !HNMR和13CNMR數(shù)據(jù)Position'麗MR13CNMRDEPT HMBC
J麗MR譜顯示5個與季碳相連的角曱基單峰質(zhì)子信號S 0.68、 0.92、 0.96、1.08、 1.10,提示可能為三萜類化合物；烯氫5 5.18和活潑氬信號5 12.04。
6
1 1.78 47.030.86
2 3.44 67.1
3 3.51 79.03
4 53.05
5 1.46 50.89
6 1.46 20.151.01
7 1.36 31.981.24
8 38.85
9 1.59 47.27
10 37.58
11 1.85 22.95
12 5.17 121.57
13 143.67
14 41.19
15 1.60 27.221.01
16 1.49 22.69
17 44.93
18 2.67 41.97
19 1.78,1.58 41.79
20 42.74
21 1.80 29.731.28
22 1.49 33.32
23 178.09
24 0.96 12.5
25 0.92 16.63
26 0.68 16.63
27 1.10 25.51
28 178.29
29 1.08 27.97
30 177.68
C2,3，5，9,10C25
C2，4，23，24C6,10
C5
C8，10，ll，25，26
C9，ll，14，18
C17
C12,13,14,17,19
C29
CI 7， 19,20C17
C3,4，5Cl，5,9,10C7,8，9,14C8,13，14，15
C20,21
2
H
c
H H 二 H H
c c c c a
2
c
CSC
2 T!H
H H 〔〕
sec
c
2
c
2 JH 2
H c S He
c c c c c
2
c
2
H c
c
3 3 3 3 3
H H H H c H c
c c c c c"CNMR譜和DEPT圖譜顯示有30個碳信號(結(jié)合HSQC譜得知，有一個重疊峰)5個曱基，9個亞曱基，6個次甲基，IO個季碳原子(包括3個羧基季碳原子)。S 178.29、 178.09、 177.68為三個羧羰基碳信號，S 143.69、 121.57為一對烯鍵碳原子信號，這是區(qū)分Urs-12-en和olean-12-en類似物的顯著特征，該值表明化合物為olean-12-en類似物。確定該化合物為具有olean-12-en基本骨架的三薛。
在EI-MS圖譜中，示有脫去HCOOH的m/z486，主要為RDA裂解m/z278，及其脫去-COOH等繼續(xù)生成的m/z233, m/z219。
HMBC譜顯示，角甲基氫信號0.96、 1.08分別與兩個羧羰基碳相關(guān)，確定3個羧基其中的2個是由C4、 C20上的角曱基氧化而來。4艮據(jù)這兩個角曱基碳信號化學位移值50.96( 12.5 )、 S1.08( 27.97 ),羧基位置在C23、 C30。由HMBC語相關(guān)，確定另一個羧基在C28,HMBC譜圖見圖1。
HSQC語驗證同碳上的質(zhì)子連接關(guān)系S67.10 (3.44, 1H， brs), S79.03(3.51， 1H， dd， J=9.5Hz), HMBC譜顯示H24與C ( S79.03 )、 H(S3.51)與C (567.10)相關(guān)，確定兩個羥基連接在C2 (567.10)、 C3 (579.03 )上，由H2的偶合常數(shù)確定H2、 H3為aa偶合，推斷出C2、 C3位置上連接的-OH的空間構(gòu)型為a、 P。
根據(jù)HMBC譜相關(guān)，參考文獻[6]，對iHNMR和BCNMR數(shù)據(jù)進行了全歸屬，確定該化合物為2a,3l3-齊墩果烷-12-烯-23,28，30-酸(2a,3(3-dihydroxyolean隱12-en-23，28,30-trioic acid),命名為倒提壺酸。實施例2
取昆明種小白鼠60只，稱重，隨機分為對照組、四氯化碳肝損傷模型組和給藥組，每組20只，常規(guī)飼養(yǎng)。對照組小鼠和模型組小鼠灌服0.1%吐溫80溶液，給藥組灌服倒提壺酸20mg/kg (用0.1%吐溫80配制成混懸液)，每天1次，連續(xù)給藥7d后，模型組和給藥組一次性均ip0.1。/。CCU(用花生油配置，0.1mL/10g), 12h后摘眼球取血，耳又血清測定相應指標。結(jié)果顯示，與四氯化碳肝損傷模型組相比，給藥組小鼠血清ALT和AST明顯下降(p<0.05和p<0.01 ), SOD活性升高和MDA顯著降低(p<0.05和p<0.01), i兌明倒^是壺酸對四氯化碳所致的脂質(zhì)過氧化肝損傷具有一定的保護作用。
權(quán)利要求
1. 一種倒提壺提取物，分子式C30H44O8，結(jié)構(gòu)如式I
2. 權(quán)利要求1所述倒提壺提取物的制備方法，步驟為 倒提壺全草干燥粉碎，用水回流；提取液濃縮后用乙醇進行醇沉，濾除沉淀，上清液回收乙醇，再加適量水稀釋，分別用氯仿、乙酸乙酯、正丁醇蓋取. 回收溶劑，得到乙酸乙酯部位浸膏和正丁醇部位浸膏；所述兩種浸膏經(jīng)純化得 到倒提壺提取物。
3. 如權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于所述純化是取正丁醇部 位浸膏先用D101大孔樹脂吸附，再依次用體積百分比10%、 30%、 50%、 70 %和90%乙醇進行梯度洗脫；取上述50%乙醇的洗脫液濃縮成正丁醇部位濃 縮浸膏；取正丁醇部位濃縮浸膏或乙酸乙酯部位浸膏，以氯仿曱醇(100: 0 —100: 20 )梯度洗脫，洗脫液濃縮得到析出物，所述析出物再經(jīng)過重結(jié)晶。
4. 如權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于所述醇沉是用乙醇調(diào)至質(zhì) 量百分比濃度50-75 %進行醇沉。
5. 權(quán)利要求1所述倒提壺提取物的在制藥中的應用，是應用于制備抗肝 損傷藥物制劑。
6. 如權(quán)利要求5所述的應用，其特征在于所述藥物制劑是口服制劑或注 射劑。
全文摘要
本發(fā)明一種倒提壺提取物，分子式C₃₀H₄₄O₈。本發(fā)明還提供上述倒提壺提取物的制備方法，步驟為倒提壺全草干燥粉碎，用水回流；提取液濃縮后用乙醇進行醇沉，濾除沉淀，上清液回收乙醇，再加適量水稀釋，分別用氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取，回收溶劑，得到浸膏；浸膏經(jīng)純化得到倒提壺提取物。本發(fā)明還提供了倒提壺酸的在制藥領(lǐng)域中的應用。本發(fā)明倒提壺提取物屬于新化學實體，屬于原始創(chuàng)新；該化合物結(jié)構(gòu)新穎，從構(gòu)效關(guān)系上分析，具有很強的生物學活性；本發(fā)明明確了倒提壺中的有效成分，使倒提壺可以被現(xiàn)代藥物劑型所利用，進一步促進了傳統(tǒng)藥的現(xiàn)代化，有著廣闊的應用前景。
文檔編號A61P1/16GK101503456SQ20091003775
公開日2009年8月12日 申請日期2009年3月10日 優(yōu)先權(quán)日2009年3月10日
發(fā)明者黨麗娟, 張德志, 徐慶軍, 李坤平 申請人:廣東藥學院