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5’核苷酸在制備緩解體力疲勞藥物、保健食品中的用途的制作方法

文檔序號:1299760閱讀:392來源:國知局

專利名稱::5’核苷酸在制備緩解體力疲勞藥物、保健食品中的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域
:本發(fā)明涉及一種5'核苷酸產(chǎn)品及其新用途,具體來說是以核糖核酸為原料經(jīng)酶法降解生產(chǎn)5'核苷酸在制備緩解體力疲勞藥物、保健食品屮的用途。屬醫(yī)藥、食品保健領(lǐng)域。
背景技術(shù)
:世界衛(wèi)生組織的一項全球性調(diào)査表明,健康的人僅占5%,患有疾病的人占20%,而75%的人則處于亞健康狀態(tài)。亞健康又稱第三狀態(tài),也稱灰色狀態(tài)、病前狀態(tài)、亞臨床期、潛伏期等,是介于健康與疾病之間的一種狀態(tài),無臨床癥狀或癥狀輕微、但己有潛在的病理信息,其最主要的表現(xiàn)形式為慢性疲勞綜合征(chronicfatiguesyndrome,CFS)。CFS是以疲勞、低熱(或自覺發(fā)熱)、咽喉痛、肌痛、關(guān)節(jié)痛、頭痛、注意力不易集中、記憶力下降、睡眠障礙和抑郁等非特異性表現(xiàn)為主的綜合征。由于人們在年齡、適應(yīng)能力、免疫力、社會文化層次等方面所存在的差異,CFS的表現(xiàn)也錯綜復(fù)雜。大量研究發(fā)現(xiàn),CFS的發(fā)生與社會環(huán)境、經(jīng)濟文化、生活方式和遺傳因素等密切相關(guān)。CFS嚴重影響人們的生活質(zhì)量,更重要的是在:當代快節(jié)奏、高壓力和多變的環(huán)境中,臨床上以慢性疲勞為主訴的患者閂益增多,CFS已成為21世紀影響人類健康的主要問題之一。疲勞是指由機體運動本身所引起的機體生理過程不能續(xù)持其功能在特定水平和/或不能維持預(yù)定的運動強度的機體運動能力下降的現(xiàn)象。疲勞包括體力疲勞和腦力疲勞兩個方面,是機體復(fù)雜的生理生化變化過梓.,其發(fā)生的機制涉及到許多方面能源物質(zhì)耗竭學說認為肌肉活動到疲勞時,能源物質(zhì)(如糖元、三磷酸腺苷、磷酸肌酸等)含量下降,而又得不到及時的補充,從而引發(fā)了運動性疲勞的產(chǎn)生;疲勞物質(zhì)蓄積學說認為肌肉或血液中乳酸及丙酮酸等酸性物質(zhì)隨疲勞程度的加深而增加;因此認為疲勞的產(chǎn)生是由于肌肉收縮時物質(zhì)代謝的產(chǎn)物堆積所致;大腦皮層保護性指令學說則認為無論腦力或體力勞動引起的疲勞,都是大腦皮層的保護性作用,疲勞是中樞神經(jīng)系統(tǒng)工作能力下降的指標,內(nèi)環(huán)境變化是促進大腦皮層發(fā)生保護性抑制的因素;還有機體內(nèi)環(huán)境(酸度、溫度、滲透壓、水分)失調(diào)學說認為運動中產(chǎn)生的酸性代謝產(chǎn)物使機體體液酸度下降,降低到某一數(shù)值吋,細胞內(nèi)外的水分以及離子的濃度就會發(fā)生變化,人體就不能繼續(xù)從事運動,W此認為疲勞是肌體內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定性的失調(diào)所致。核酸是生物體細胞中決定生物特性和蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)與功能的物質(zhì),控制著生物體的生長、3發(fā)育、繁殖和遺傳,它是體內(nèi)多種營養(yǎng)物質(zhì)的代謝調(diào)節(jié)因子,是各種營養(yǎng)因子的總協(xié)調(diào)者和指揮者。由于體內(nèi)存在核酸的"從頭合成"途徑,以前認為外源核酸不是人體的必需營養(yǎng)成分,但近些年來國內(nèi)外大量研究資料日趨表明外源核酸包括核苷酸和核苷在特定生理條件下是不可缺少的營養(yǎng)成分。外源性核酸被攝入人體后,需經(jīng)核酸酶的作用分解為核苷酸,部分核苷酸再通過堿性磷酸酶和核苷酸酶的作用繼續(xù)水解為核苷,以核苷酸和核苷的形式被胃腸粘膜細胞吸收。而在體外通過酶解方式將核酸降解成為核苷酸后可以省略體內(nèi)的分解過程,更加容易被人體消化吸收。因此,口服核苷酸的營養(yǎng)學作用一直是近年來在營養(yǎng)學研究領(lǐng)域中的熱點之一。核苷酸在細胞結(jié)構(gòu)、代謝、能量和調(diào)節(jié)功能等方面起著重要作用,已有大量研究證實口服核苷酸具有調(diào)節(jié)免疫、抗氧化、促進腸道成熟、保護肝臟功能、促進學習記憶、抗癌等作用。目前作為具有免疫調(diào)節(jié)作用的營養(yǎng)因子,包括中國在內(nèi)的許多國家已經(jīng)允許將核苷酸添加在嬰幼兒配方奶粉中,但目前對于核苷酸在緩解體力疲勞方面作用的研究還未見報道。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供一種5'核苷酸產(chǎn)品及其在制備緩解體力疲勞藥物、保健食品中的用途。本發(fā)明提供的5,核苷酸是核糖核酸為原料經(jīng)酶法降解生產(chǎn)的,純度在99M以上的5'AMP、5'CMP、5,GMPNa2、5'UMPNa2按照22.8:26.6:30.2:20.4配比而成的5'核苷酸混合物。其中所述的藥物、保健食品為粉劑、顆粒劑、膠囊、片劑、丸劑、口服液。具體實施方案下面結(jié)合具體實施方案對本發(fā)明作進一步的說明,這些實例應(yīng)被理解為僅是舉例說明,而非以任何方式限制本發(fā)明的范圍。實施例5'核苷酸緩解體力疲勞實驗研究一、材料與方法1.樣品.-5'核苷酸(5,AMP:5,CMP:5,GMPNa2:5,UMPNa2=22.8:26.6:30.2:20.4),生產(chǎn)流程純度為90%的核糖核酸(RNA)經(jīng)熱變性4核酸酶Pl酶解4超濾4吸附于陰樹脂—分歩洗脫4納濾脫鹽—薄膜濃縮—碳粉脫色4結(jié)晶—干燥制成。2.實驗動物健康清潔級ICR雄性小鼠160只,體重16-20g,由北京大學醫(yī)學部實驗動物中心提供,合格證號醫(yī)動字SCXK(京)-2006-0008,清潔級動物房飼養(yǎng),飼養(yǎng)環(huán)境溫度范圍25士rC,相對濕度50%60%RH。3主要儀器和試劑奧林巴斯AU400全自動生化分析儀(日本);血清尿素氮測定試劑盒(閂本第一化學株式會社提供)、蒽酮試劑(北京)。4.實驗方法4.1實驗動物分組雄性ICR小鼠160只,根據(jù)體重分為4組,每組40只。設(shè)立空白對照組、5'-核苷酸低、中、高劑量組,各組動物再分為4個亞組,每組10只。4.2劑量設(shè)計小鼠每口5'-核苷酸攝入量為低劑量組(0.04g/kg.bw)、中劑量組(0.16g/kg.bw)、高劑量組(0.64g/kg.bw),將受試物按照不同劑量添加到小鼠飼料中進行喂養(yǎng)實驗,小鼠每日進食量按照體重的10%計算,空白對照組給予未添加核苷酸的普通詞料。各組小鼠均自由進食、飲水。30天后對各亞組小鼠進行緩解體力疲勞功能檢驗。4.3負重游泳實驗各組第1亞組10只小鼠末次給予受試樣品30min后,于鼠尾根部負荷5%體重的鉛皮,然后置小鼠在游泳箱中游泳(水深230cm,水溫25°C±1.0°C),記錄小鼠自游泳開始至死亡的時間,作為小鼠負重游泳時間。4.4血清尿素氮測定各組第2亞組10只小鼠末次給予受試物30min后,在溫度為3(TC的水中不負重游泳90min,休息60min后采血分離血清,用奧林巴斯AU400全自動斗:化分析儀(閂本)測定血清尿素氮,試劑X用R本第一化學株式會社試劑。4.5肝糖原測定各組第3亞組10只小鼠末次給予受試物30min后,處死動物,取肝臟經(jīng)生理鹽水漂洗后用濾紙吸干,精確稱取肝臟100mg,加入8mLTCA,每管勻漿lmin,將勻漿液倒入離心管,以3000轉(zhuǎn)/min離心15min,將上清液轉(zhuǎn)移至另一試管內(nèi)。取lmL上清液放入10mL離心管中,每管加入95。/。的乙醇4mL,充分混勻至兩種液體間不留有界面。用封口膜將離心管口封住,室溫下豎立放置過夜。沉淀完全后,將試管于3000轉(zhuǎn)/min離心15min,小心倒掉上清液并使試管倒立放置10min。然后用2mL蒸餾水溶解糖原,用蒽酮法測定肝糖原含量。4.6血乳酸測定各組第4亞組10只小鼠末次灌胃30min后,采尾血20)al,然后小鼠不負重在溫度為30。C的水中游泳10min,于游泳后Omin和20min各分別釆血20pl,將三次采得的血樣分別加入0.48mLP/。NaF溶液中充分混勻至透明,然后加入1.5mL蛋白沉淀劑,振蕩混勻,于3000轉(zhuǎn)/min離心10min,取上清液測定乳酸含量。血乳酸曲線下面積二l/2x(游泳甜血乳酸值+游泳后0min的血乳酸值)x10+1/2(游泳后Omin的血乳酸值+游泳后休息20min的血乳酸值)x205.統(tǒng)計方法所有結(jié)果以均數(shù)士標準差表示,采用SPSS11.0軟件進行單因素方差分析,比較實驗結(jié)束時各受試物劑量組測定指標與空白對照組之間的差異,尸<0.05判斷為差異具有顯著性。二、結(jié)果1.5'核苷酸小鼠體重的影響動物體重增長情況見表1,5'-核苷酸各劑量組小鼠體重與空白對照組比較無明顯差異(P>0.05)。<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>2.5'核苷酸對小鼠負重游泳時間的影響喂養(yǎng)30天后,測定小鼠負重游泳時間,結(jié)果顯示與空白對照組比較,5'核苷酸低、中、高劑量組小鼠負重游泳時間均明顯延長,差異具有統(tǒng)計學意義(尸<0.05),見表2。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula>*表示與空G對照組比較差異有!i^性(PO.05)3.5'核苷酸對小鼠血清尿素氮的影響測定小鼠血清尿素氮,結(jié)果表明5'核苷酸各劑量組小鼠不負重游泳90min后,血清尿素氮水平與空白對照組比較均明顯下降,差異具有統(tǒng)計學意義(尸<0.05),見表3。4.5'核苷酸對肝糖原的影響5'核苷酸各劑量組小鼠靜息狀態(tài)下肝糖原水平與空白對照組比較,未見明顯差異(FX).05),見表3。表35,核苷酸對小鼠血清尿素氮和肝糖原的影響(Lbs)組別劑量(g/kgbw)動物數(shù)(只)尿素氮(mmol/L)肝糖原(mg/g肝組織)空白對照組0.001010.20±1.3217.30±7.34低劑量組0.04107.78±2.29*18.06±7.32中劑量組0.161017.30±8.48高劑量組0.64107.33土2.20'24.66±14.55*表示與空白對照組比較差異有顯著性()5.5'核苷酸對血乳酸的影響5'核苷酸屮劑量組小鼠游泳后Omin及中、高劑量組小鼠游泳后20min血乳酸水平顯著低于空白對照組(尸O.05);中、高劑量組小鼠三個時間點血乳酸曲線下面積均小于空A對照組,且差異具有顯著性(p<0.05),見表4。表45'核苷酸對小鼠血乳酸的影響(^hs)組別劑量動物數(shù)游泳前游泳后Omin游泳后20min曲線卜'面積(g/kgbw)(只)(mg/L)(mg/L)(mg/L)(mg/L)空ri對照組0.0010卯.66±95.05455.04±144.54341.03±146.1611跳19±3626.28低劑:ft絎0.040198.52±97.02370.02±120.77255,53±96.439098.28±2780.19中劑量組0.1610177.40±95.12334.64±敝50*214.74土89.15'肌54.05士2510.92'高劑S組0.6410196.07±106.95359.70±70.55208.84土81.12'8楊.37土1508.04**表示與空白對照組比較差異有-、^著性(P<0.05)上述結(jié)果表明5'核苷酸可降低延長小鼠負重游泳時間,減少運動后血乳酸產(chǎn)生,并降低運動后血清尿素氮水平,具有緩解體力疲勞的作用。權(quán)利要求1、5′核苷酸在制備緩解體力疲勞藥物、保健食品中的用途。2、如權(quán)利要求1,5'核苷酸是核糖核酸為原料經(jīng)酶法降解生產(chǎn)的,純度在99%以上的5'AMP、5,CMP、5,GMPNa2、5'UMPNa2按照22.8:26.6:30.2:20.4配比而成的5'核苷酸混合物。3、如權(quán)利要求l,其中所述的藥物、保健食品為粉劑、顆粒劑、膠囊、片劑、丸劑、口服液。全文摘要本發(fā)明涉及一種5’核苷酸產(chǎn)品及其在制備緩解體力疲勞藥物、保健食品或食品中的用途。本核苷酸是核糖核酸為原料經(jīng)酶法降解生產(chǎn)的,純度在99%以上的5’AMP、5’CMP、5’GMPNa<sub>2</sub>、5’UMPNa<sub>2</sub>按照22.8∶26.6∶30.2∶20.4配比而成的5’核苷酸混合物。5’核苷酸可降低延長小鼠負重游泳時間,減少運動后血乳酸產(chǎn)生,并降低運動后血清尿素氮水平,具有緩解體力疲勞的作用。文檔編號A61K31/708GK101559069SQ20091001172公開日2009年10月21日申請日期2009年5月27日優(yōu)先權(quán)日2009年5月27日發(fā)明者勇李,恕李,鋒董申請人:珍奧集團股份有限公司
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