專利名稱：預(yù)防或治療陰道炎的復(fù)合乳酸菌潔陰護(hù)理液及工藝的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種預(yù)防或治療陰道炎的復(fù)合乳酸菌潔陰護(hù)理液劑，種用于婦女陰 道保健及調(diào)整陰道菌群失調(diào)的陰道微生態(tài)調(diào)節(jié)劑(消毒劑)，并涉及制備這種制劑的 工藝。
背景技術(shù)：
健康婦女，陰道由于解剖組織的特點(diǎn)對(duì)病原體的侵入有自然防御功能。如陰道 口的閉合，陰道前后壁緊貼，陰道上皮細(xì)胞在雌激素的影響下的增生，和表層細(xì)胞 角化，陰道pH值保持在pH4-5,使適應(yīng)堿性的病原體的繁殖受到抑制，而宮頸管粘 液呈堿性，使適應(yīng)酸性環(huán)境的病原體的繁殖受到抑制等，當(dāng)陰道的自然防御功能受 到破壞時(shí)，病原體易于侵入，導(dǎo)致發(fā)生陰道感染性疾病。幼女及絕經(jīng)后婦女由于陰 道上皮非常薄更易受到感染。寄生于健康婦女陰道中的細(xì)菌包括革蘭氏陽性需氧菌， 如乳酸桿菌、棒狀桿菌、非溶血性鏈球菌、腸球菌、表皮葡萄糖球菌，革蘭氏陰性 需氧菌有大腸桿菌、加德納菌。厭氧菌包括梭狀芽胞桿菌、消化鏈球菌、類桿菌及 梭形桿菌等，此外尚有Mobiluncns菌、支原體及念珠菌等。在這些正常陰道菌群中， 以乳酸桿菌占優(yōu)勢(shì)，陰道乳酸桿菌對(duì)維持陰道正常菌群起著關(guān)鍵作用。陰道上皮的 糖原經(jīng)乳酸桿菌的作用分解成乳酸，使陰道局部呈弱酸環(huán)境，抑制其他寄生菌過度 生長。此外部分乳酸桿菌尚能合成過氧化氬，這些過氧化氫陽性乳酸桿菌通過與其 他氧化物聯(lián)合作用可抑制其他細(xì)菌。另一方面乳酸桿菌造成的酸性環(huán)境又有利于減 少細(xì)胞表面負(fù)電荷和去除覆蓋于受體表面的糖基，暴露受體而有助于細(xì)菌粘附。因 此乳酸桿菌是通過正反兩方面調(diào)節(jié)正常陰道的菌群。但正如前述，當(dāng)應(yīng)用某些藥物 如廣語抗菌素、抗癌藥物及免疫抑制劑，或受到某些感染如淋病、梅毒、艾滋病， 或性激素等影響，都會(huì)導(dǎo)致陰道生態(tài)系統(tǒng)的平衡破壞。從微生態(tài)學(xué)的角度出發(fā)，通 過生態(tài)制劑調(diào)整療法，扶正和調(diào)節(jié)陰道內(nèi)的正常菌群的組成和比例，恢復(fù)其自然的 抵抗外來菌侵?jǐn)_的能力，促進(jìn)其本身的生物自凈作用是治療此類疾病的一種必然趨 勢(shì)。本發(fā)明在已調(diào)查大量健康婦女和患病婦女陰道菌群變化以及與婦女陰道保健的 關(guān)系的基礎(chǔ)上、開發(fā)出 一種用于婦女陰道保健及調(diào)整陰道菌群失調(diào)的陰道微生態(tài)調(diào) 節(jié)劑(消毒劑)目前國內(nèi)只有一種乳桿菌活菌陰道制劑應(yīng)用于臨床，對(duì)治療各種陰道菌群失調(diào) 性陰道炎、陰道霉菌感染及陰道滴蟲病，均有較好的療效，而且復(fù)發(fā)率低，無抗生 素固有的耐藥性、引起菌群失調(diào)及毒性反應(yīng)等副作用。但作為活菌制劑本身存在許 多缺點(diǎn)，如細(xì)菌存活期短，難于長時(shí)間保存，作為固體膠嚢制劑，把本來應(yīng)發(fā)揮自 用的乳桿菌代謝產(chǎn)物如乳酸、醋酸、過氧化氫、細(xì)菌素及其他揮發(fā)性脂肪酸、 一些 有用的酶、多肽等活性物質(zhì)全部扔掉。缺少乳桿菌代謝產(chǎn)物的微生態(tài)制劑是不完善 的。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的就是為了解決已有技術(shù)中實(shí)用，活菌制劑細(xì)菌存活期短，難于長 時(shí)間保存，固體膠嚢制劑把本來應(yīng)發(fā)揮自用的乳桿菌代謝產(chǎn)物全部扔掉的許多缺點(diǎn)， 提供一種通過生態(tài)制劑調(diào)整療法，扶正和調(diào)節(jié)陰道內(nèi)的正常菌群的組成和比例，恢 復(fù)其自然的抵抗外來菌侵?jǐn)_的能力，促進(jìn)其本身的生物自凈作用的陰道保健或預(yù)防 細(xì)菌炎的復(fù)合乳酸菌潔陰護(hù)理液及工藝。
本發(fā)明的陰道保健或預(yù)防細(xì)菌炎的復(fù)合乳酸菌潔陰護(hù)理液，含有德氏乳桿菌乳 酸亞種DM8909 (Lactobacillus debrueckii subsp. lactis)(本菌種由中科院孩i生 物研究所鑒定)發(fā)酵離心液20-40°/。；赤蘚糖醇1-3%;乳酸1-3%;過氧化氫1-3%; 水片0.2-0.5 °/。；薄荷油1-3%;其余為去離子水。充分混合后分裝。
本發(fā)明涉及對(duì)德氏乳桿菌的微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)、微生態(tài)學(xué)實(shí)驗(yàn)及生產(chǎn)工藝研究實(shí)驗(yàn)。 微生物實(shí)驗(yàn)包括菌種分離、鑒定、生物特性、代謝產(chǎn)物、耐藥性、代謝物、H202產(chǎn) 生及質(zhì)粒檢測(cè)等。生態(tài)效應(yīng)試驗(yàn)包括正常值調(diào)查、粘附、定植、生物拮抗、模型試 驗(yàn)、安全試驗(yàn)、穩(wěn)定試驗(yàn)和刺激試驗(yàn)等。生產(chǎn)工藝研究包括種子、發(fā)酵和制劑產(chǎn)品 穩(wěn)定性及工藝穩(wěn)定性等方面的研究?；A(chǔ)研究還包括作用機(jī)制的研究。
本發(fā)明涉及的的德氏乳桿菌制備工藝如下 德氏乳桿菌上清液的制備將德氏乳桿菌菌抹種子液接入已經(jīng)滅菌后的含有重量 1-3%葡萄糖、0. 5-1. 5%大豆蛋白胨、0. 5-1°/。酵母浸膏、0. 2-0. 5°/ 乙酸鈉、0.2-0.5% 檸檬酸三銨的培養(yǎng)基中，經(jīng)36。C-39。C厭氧發(fā)酵24-48小時(shí)后，離心分離，獲得上清 液，即發(fā)酵離心液。還可以加入0. 2-0. 5°/。乙酸鈉。
本發(fā)明涉及的一種用于調(diào)整菌群預(yù)防或治療細(xì)菌性陰道炎的復(fù)合乳酸菌潔陰護(hù) 理液制備工藝將德氏乳桿菌菌林種子液接入已經(jīng)滅菌后的含有重量1-3%葡萄糖、 0. 5-1. 5%大豆蛋白胨、0. 5-1%酵母浸膏、0. 5-1%魚蛋白胨、0. 2-0. 5°/。檸檬酸三銨的培養(yǎng)基中，經(jīng)36-39。C厭氧發(fā)酵后，離心分離獲得離心上清液；將前面所述離心上清 液按重量配比20-40%,赤蘚糖醇1-3°/。，乳酸1-3%,過氧化氫1-3%,冰片0. 2-0. 5 °/。， 薄荷油1-3%,其余為去離子水進(jìn)行混合。
其中，德氏乳桿菌制備的最佳過程如下 德氏乳桿菌上清液的制備將德氏乳桿菌菌抹種子液接入已經(jīng)滅菌后的含有重量2% 葡萄糖、1%大豆蛋白胨、0. 5%酵母浸膏、0. 2%乙酸鈉、0. 2%檸檬酸三銨的培養(yǎng)基中， 經(jīng)37。C厭氧發(fā)酵48小時(shí)后，離心分離，獲得上清液。 本發(fā)明相關(guān)研究如下
(1 )本復(fù)合乳酸菌潔陰護(hù)理液的微生物殺滅試驗(yàn) 依據(jù)《消毒與滅菌效果的評(píng)價(jià)方法與標(biāo)準(zhǔn)》(GB15981-19950，參照《消毒技術(shù)規(guī)范》。 檢驗(yàn)本復(fù)合乳酸菌潔陰護(hù)理液對(duì)大腸埃希菌(ATCC25922 )、金黃色葡萄球菌 (ATCC25923 )、白色念珠菌(ATCC10231 )、德氏乳桿菌(DM8909)、干酪乳桿菌(DM8121 ) 殺滅效果。結(jié)果表明，本復(fù)合乳酸菌潔陰護(hù)理液對(duì)大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、 白色念^^菌的殺滅率大于99. 9%,對(duì)德氏乳桿菌殺滅率為54. 4%、對(duì)干酪乳桿菌殺滅 率為67. 4%。
在37°C90天保藏后，對(duì)大腸桿菌的殺滅率大于99. 9%。 (2)皮膚刺激試驗(yàn)
依據(jù)《消毒技術(shù)規(guī)范》第三版第一分冊(cè)3. 6皮膚刺激試驗(yàn)方法進(jìn)行試驗(yàn)，結(jié)果表明， 本復(fù)合乳酸菌潔陰護(hù)理液對(duì)受試動(dòng)物大白兔皮膚刺激試驗(yàn)按刺激輕度分級(jí)屬輕刺激性。
(3) 陰道黏膜刺激試驗(yàn)
依據(jù)《消毒技術(shù)規(guī)范》第三版第一分冊(cè)刺激試驗(yàn)方法進(jìn)行試驗(yàn)結(jié)果表明，本復(fù)合 乳酸菌潔陰護(hù)理液對(duì)受試動(dòng)物大白鼠陰道黏膜刺激試驗(yàn)按皮膚刺激強(qiáng)度評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)和 分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)判定為無刺激性。
(4) 對(duì)細(xì)菌性陰道炎的臨床療效觀察
對(duì)患有細(xì)菌性陰道炎的24例患者采用復(fù)合乳酸菌潔陰護(hù)理液進(jìn)行治療，每晚睡 前取本品10ml力。5 10倍量溫水稀釋后清洗陰道或外陰。炎癥傳染期，可將本品加 量到20ml清洗， 一個(gè)療程10天，用藥后3天返回門診，了解病情變化情況，停藥 后3d復(fù)查臨床癥狀、實(shí)驗(yàn)室檢查等，與自身對(duì)照比較療效及安全性。對(duì)照組12例患者在沖洗外陰及陰道后，置陰道后官窿部曱硝唑栓一枚，每晚一次，同時(shí)口服曱 硝唑片0. 2g Tid，共7 10天。治療效果如下表1。對(duì)照組及治療組治療前后均出 現(xiàn)好轉(zhuǎn)現(xiàn)象，兩組之間有效率比較，無顯著差異(P〉0. 05)。治療前后陰道分泌物情 況見表2。
表1對(duì)24例BV患者治療結(jié)果(例數(shù))
類別BV病組(12例)對(duì)照組(12例)治療前治療后總有效率(％)治療前治療后總有效率(％)線索細(xì)胞24 387.512 191.7
騷癢23 291.712 283.3
A帶多24 291.712 191.7
表2使用本制劑對(duì)BV患者陰道分泌物的治療效果比較類別BV病組(12例)對(duì)照組(12例)治療前治療后治療前治療后
乳酸桿菌檢出率《)33. 310033. 366. 7
PH4. 87±0. 664. 35±0. 384. 87±0. 664. 51±0. 55
陰道清潔度ir nrI ° II °ir nrI ° 11°
治療前治療后
病例號(hào)分泌物PH乳桿菌分泌物乳桿菌
12+5.0++3.03+
2+5. 5——3. 53+
32+5.0一—4. 03+
4+4. 5++3. 53+
5+6,0一—3. 04+
62+5. 0_+3. 04+
7+5. 5_+3. 54+
8+5. 5++3. 52+
9+5.0++4. 03+
10+5,0—4. 0
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1將德氏乳桿菌菌抹種子液接入已經(jīng)滅菌后的含有重量比為3°/。葡萄糖、 1°/ 大豆蛋白胨、0. 8酵母浸膏、0. 8%魚蛋白胨、0. 4%檸檬酸三銨的培養(yǎng)基中，經(jīng)36-39 'C厭氧發(fā)酵后，離心分離，獲得離心上清液，即發(fā)酵離心液。取400g發(fā)酵離心液， 用去離子水加至1000ml,形成復(fù)合乳酸菌潔陰護(hù)理液。
實(shí)施例2德氏乳桿菌發(fā)酵離心液300g;赤蘚糖醇20g;乳酸20g;過氧化氫30g; 冰片3g;薄荷油2 g;去離子水加至670ml。充分混合后分裝，制得復(fù)合乳酸菌潔陰 護(hù)理液。其中德氏乳桿菌發(fā)酵理性也制備方法如下將德氏乳桿菌菌林種子液按重量 3%接種量接入已經(jīng)滅菌后的含有重量3%葡萄糖、0. 5°/。大豆蛋白胨，0. 5%魚蛋白胨、 0. 8%酵母浸膏、0. 35%檸檬酸三銨培養(yǎng)基中，經(jīng)37。C厭氧發(fā)酵后，離心分離出菌體獲 得發(fā)酵離心液。
實(shí)施例3 —種本發(fā)明的陰道保健或預(yù)防細(xì)菌炎的復(fù)合乳酸菌潔陰護(hù)理液及制備 工藝如下
將德氏乳桿菌菌林種子液接入已經(jīng)滅菌后的含有重量2%葡萄糖、r/。大豆蛋白胨、 0. 5%酵母浸膏、0. 2%乙酸鈉、0. 2。/。檸檬酸三銨的培養(yǎng)基中，經(jīng)37。C厭氧發(fā)酵48小時(shí) 后，離心分離，獲得的上清液即為發(fā)酵離心液。取發(fā)酵離心液400g;赤蘚糖醇20g; 乳酸20g;甘油50g;冰片2g;薄荷油3 g;去離子水加至1000ml。充分混合后分 裝。對(duì)患有細(xì)菌性陰道炎的患者采用實(shí)施例2方法制得的復(fù)合乳酸菌潔陰護(hù)理液進(jìn)行 治療，每晚睡前取本品10ml加5-10倍量溫水稀釋后清洗陰道或外陰。炎癥傳染期， 可將本品加量到20ml清洗， 一個(gè)療程10天。
實(shí)施例4按重量比取實(shí)施例1的發(fā)酵離心液250g;赤蘚糖醇10g;乳酸10g;甘 油50g;水片lg;薄荷油1.2g;;去離子水加至1000ml。充分混合后分裝，制得復(fù) 合乳酸菌潔陰護(hù)理液。
患者李某某，42歲，患有細(xì)菌性陰道炎。陰道分泌物呈灰色均質(zhì)，粘度低，粘附 于陰道壁偶成泡沫狀，魚腥樣臭味；陰道pH值5. 0-5. 5;陰道分泌物濕涂片檢出線 索細(xì)胞。該患者采用實(shí)施例2方法制得的復(fù)合乳酸菌潔陰護(hù)理液進(jìn)行治療，每晚睡前 取本品10ml加5~10倍量溫水稀釋后清洗陰道或外陰。使用一個(gè)療程10天后，患 者陰道騷癢、白帶多癥狀消失；陰道線索細(xì)胞轉(zhuǎn)為陰性，pH〈4. 5, 10°/ KOH實(shí)驗(yàn)陰性。 患者痊愈。
實(shí)施例5按重量比取實(shí)施例1的發(fā)酵離心液350g;赤蘚糖醇30g;乳酸26g;甘油20g;冰片1.6g;薄荷油3. 2g;;去離子水加至lOOOml。充分混合后分裝，制得 復(fù)合乳酸菌潔陰護(hù)理液?；颊邚埬衬?，37歲，患有霉菌性陰道炎，主要癥狀外陰瘙 癢并伴有灼痛，白帶增多，可見陰道粘膜上有一層白色粘稠或豆腐渣樣分泌物覆蓋， 粘膜充血紅腫，表淺潰瘍。陰道鏡檢發(fā)現(xiàn)霉菌。該患者采用實(shí)施例2方法制得的復(fù)合 乳酸菌潔陰護(hù)理液進(jìn)行治療，每晚睡前取本品10ml加5 ~ 10倍量溫水稀釋后清洗陰 道或外陰。使用2個(gè)療程20天后，患者陰道騷癢、白帶多癥狀消失；陰道分泌物鏡 檢未見念珠菌孢子和菌絲?；颊呷?。
權(quán)利要求
1、一種用于調(diào)整菌群預(yù)防或治療細(xì)菌性陰道炎的復(fù)合乳酸菌潔陰護(hù)理液，其特征在于按重量比含有德氏乳桿菌乳酸亞種發(fā)酵離心液20-40％。
2、 如權(quán)利要求l所說的復(fù)合乳酸菌潔陰護(hù)理液，其特征在于按重 量比還含有赤蘚糖醇1-3%;乳酸1-3%;過氧化氫1-3%;冰片0.2-0.5%; 薄荷油1-3°/。；其余為去離子水。
3、 一種用于調(diào)整菌群預(yù)防或治療細(xì)菌性陰道炎的復(fù)合乳酸菌潔陰護(hù) 理液制備工藝將德氏乳桿菌菌林種子液接入已經(jīng)滅菌后的含有重量 1-3%葡萄糖、0.5-1. 5%大豆蛋白胨、0. 5-1%酵母浸膏、0. 5-1%魚蛋白胨、 0. 3-0. 5%檸檬酸三銨的培養(yǎng)基中，經(jīng)36-39。C厭氧發(fā)酵后，離心分離獲得 離心上清液；將前面所述離心上清液按重量配比20-40°/ ，赤蘚糖醇1-3%, 乳酸1-3°/。，過氧化氬1-3°/。，冰片0.2-0.5%,薄荷油1-3%,其余為去離 子水進(jìn)行混合。
4、 如權(quán)利要求3所說的復(fù)合乳酸菌潔陰護(hù)理液制備工藝，加入 0. 2-0. 5°/。乙酸鈉。
5、 如權(quán)利要求3所說的復(fù)合乳酸菌潔陰護(hù)理液制備工藝，將德氏乳 桿菌菌株種子液接入已經(jīng)滅菌后的含有重量2%葡萄糖、1%大豆蛋白胨、 0. 5%酵母浸膏、0. 2%乙酸鈉、0. 2%檸檬酸三銨的培養(yǎng)基中，經(jīng)3丌C厭氧 發(fā)酵48小時(shí)。
全文摘要
預(yù)防或治療細(xì)菌性陰道炎的復(fù)合乳酸菌潔陰護(hù)理液及工藝，將德氏乳桿菌菌株種子液接入含有重量1-3％葡萄糖、0.5-1.5％大豆蛋白胨、0.5-1％酵母浸膏、0.5-1％魚蛋白胨、0.3-0.5％檸檬酸三銨的培養(yǎng)基中，經(jīng)36-39℃厭氧發(fā)酵后，按重量取離心分離液20-40％，還可取赤蘚糖醇1-3％、乳酸1-3％、過氧化氫1-3％、冰片0.2-0.5％、薄荷油1-3％，其余為去離子水，充分混合。利用乳桿菌代謝產(chǎn)物如乳酸、醋酸、過氧化氫、細(xì)菌素及其他揮發(fā)性脂肪酸、有用的酶、多肽等活性物質(zhì)調(diào)節(jié)陰道菌群失調(diào)，有效抑制外襲菌和過盛繁殖的陰道菌群中的少數(shù)種群，恢復(fù)其自然的抵抗外來菌侵?jǐn)_的能力，促進(jìn)其本身的生物自凈作用來預(yù)防和治療細(xì)菌性陰道炎。
文檔編號(hào)A61K33/40GK101543514SQ20091001147
公開日2009年9月30日 申請(qǐng)日期2009年5月6日 優(yōu)先權(quán)日2009年5月6日
發(fā)明者左振軍, 袁杰力 申請(qǐng)人:大連潤生堂生物科技工程有限公司;大連震旦微生態(tài)學(xué)研究所