專利名稱：含有脫硫生物素及其衍生物的局部組合物和治療皮膚的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及含有脫硫生物素及其衍生物和異構(gòu)體的局部組合物，以及該組合物用 于治療、逆轉(zhuǎn)和/或預(yù)防皮膚衰老跡象(包括皮膚中的細(xì)紋和皺紋)的方法。
背景技術(shù)：
面部皺紋(不管是細(xì)的表面紋還是深的皺褶)的逐漸產(chǎn)生是積累的皮膚損傷和衰 老的典型早期跡象。由于過量暴露于陽光和其他因素、過度活動的面部表情肌、煙草制品的 頻繁使用、營養(yǎng)差或皮膚病癥，可能加速了皮膚過早衰老和產(chǎn)生皺紋。細(xì)的表面紋逐漸變成 較深的皺、由于重復(fù)的皮膚折疊加深了面部表情和隨著成熟產(chǎn)生的深的褶是明顯的變化， 這些可能結(jié)合起來而呈現(xiàn)出不太理想的外觀?？梢岳脦追N入侵性的技術(shù)，其中將物質(zhì)注 入或植入肌肉暫時變?nèi)醯钠つw區(qū)域中或作為皮膚體積填充劑，然而，非入侵性的治療在歷 史上只有很少的成功。與面部皺或褶的成因無關(guān)，用于減少或消除這些問題的安全而有效 的治療非常難以實現(xiàn)。皮膚彈性對于改善損傷(如下垂、降低的皮膚緊致性和年輕外觀)以及改善細(xì)紋 和皺紋的外觀是至關(guān)重要的。所有這些都是由彈性蛋白促成的，彈性蛋白是一種像橡皮圈 那樣作用的蛋白聚合物，其重復(fù)拉伸和收縮，而沒有遭遇任何損傷。通過彈性蛋白原單體的交聯(lián)形成彈性蛋白聚合物。盡管存在多如五種可以催化 該過程的酶，但尚未確切地知道該交聯(lián)是怎樣得到調(diào)控的。Li和同事們報道了這些酶中 的一種，賴氨酰氧化酶樣I(LOXLl)是彈性蛋白纖維重新塑造所必需的。Liu和同事們預(yù) 測通過胞外基質(zhì)蛋白纖蛋白_5將這種酶募集至彈性蛋白的部位。然后，LOXLl裝填彈性 蛋白原單體(TE)，用于結(jié)合成較大的聚合物。Liu發(fā)現(xiàn)了 LOXLl是防止組織(如動脈和 肺)中年齡相關(guān)的彈性喪失必需的(Liu等(2004)Elastic fiber homeostasis requires lysyl oxidase-likel protein (彈性纖維體內(nèi)平衡需要賴氨酰氧化酶樣1蛋白)。 NatGenet. 36 (2) 178-82)。Noblesse等表明了 L0XL1存在于正常皮膚和皮膚等價模型(SE)中的真皮和表皮 中。LOXL的超結(jié)構(gòu)定位表示其與彈性蛋白陽性物質(zhì)相連。研究者假設(shè)了 LOXL在彈性纖 維形成中具有作用(Noblesse E 等(2004)Lysyl oxidase-like and lysyl oxidase are present in thedermis and epidermis of a skin equivalent and in human skin andare associated to elastic fibers (賴氨酰氧化酶樣和賴氨酰氧化酶存在于皮膚等價物和人 皮膚的真皮和表皮中并且與彈性纖維相連)。J Invest Dermatol. 122(3) :621_30)。Pasciml和同事們表明了彈性蛋白合成標(biāo)記(包括L0XL1)的水平隨著年齡降 至明 H 白勺禾呈度(Pascual 等(2008) Down-regulation of lysyl oxydase-like in aging and venous insufficiency (賴氨酰氧化酶樣在衰老過程中的下調(diào)和靜脈不足)。Histol Histopathol. 23(2) 179-86)。Li和Liu的美國專利公開No. 2005/0188427公開了治療患有與彈性纖維喪失相關(guān) 病癥(如松弛或有皺紋的皮膚)的患者的方法，其包括將治療有效量的L0XL1增強(qiáng)劑給藥于患者。據(jù)說LOXLl增強(qiáng)劑是LOXLl多肽或其活性片段，或編碼LOXLl多肽或其活性片段 的核酸。據(jù)說LOXLl增強(qiáng)劑還包括通過該公開文本中公開的篩選方法鑒定的小分子或其他 治療化合物。從19世紀(jì)40年代中期開始就已知脫硫生物素是細(xì)菌和霉菌中的生物素前體(參 JAL Leonian and Lilly (1945)Conversion ofDesthiobiotin Into Biotin or Biotinlike Substances by SomeMicroorganisms (脫硫生物素通過一些微生物轉(zhuǎn)化成生物素或生物素 樣物質(zhì))。J Bacteriol. 49 (3) :291_297)。通過除脫硫原子從生物素衍生了脫硫生物素。 其可以替代一些微生物中的生物素，但對于其他微生物的生長沒有作用或具有抑制作用。 該化合物具有以下結(jié)構(gòu) 美國專利US 4，243，665描述了低濃度的某些生物素衍生物在牙齒護(hù)理中的用 途。該專利是基于這樣的想法如脫硫生物素這樣的化合物可以耗盡引起齲齒的微生物的 生物素。Lever Brothers Corp.的美國專利US4，529，587描述了某些生物素拮抗劑用于降
低皮脂合成的用途。這些化合物具有如下的通式結(jié)構(gòu) 并且被描述為阻斷涉及脂質(zhì)合成的生物素依賴性酶，特別是它們對抗乙酰 基-SCoA-羧化酶的作用。據(jù)說該組合物可用于減少表面的“油脂”而不使皮膚脫脂。對減輕衰老跡象(包括下垂、降低的彈性、細(xì)紋和皺紋，特別是臉部、頸部、手部等 皮膚上的)的化妝品組合物仍然存在需求。因此，本發(fā)明的目的是提供改良的組合物和用于改善皮膚外觀的方法，包括通過 減少細(xì)紋和皺紋的外觀。發(fā)明概述已經(jīng)令人驚訝地發(fā)現(xiàn)脫硫生物素能有效減少、逆轉(zhuǎn)、改善和/或防止由降低的皮 膚彈性引起的皮膚衰老跡象，包括細(xì)紋和/或皺紋、皮膚下垂和相關(guān)的皮膚衰老跡象的外 觀、深度或嚴(yán)重程度。通常，組合物和方法可用于治療與彈性纖維喪失相關(guān)的任何皮膚狀況。認(rèn)為這些 益處至少部分地是由于化合物刺激L0XL-1產(chǎn)生的能力所引起的。換句話說，本發(fā)明的化合 物是L0XL-1增強(qiáng)劑。在本發(fā)明的一個方面中，提供了治療與降低的皮膚彈性相關(guān)的皮膚狀況(如細(xì) 紋、皺紋和下垂皮膚的外觀)的方法，其包括將包含有效量的通式I的化合物及其局部可接 受的鹽和前藥的化妝品組合物局部施用于需要的皮膚上
其中η是1至22的整數(shù)，通常為1至3至18，并且優(yōu)選5至12 ；X。、U、XjPX4各自獨(dú)立地選自0、S和NRn，其中Rn表示氫、低級烷基(例如，甲 基、乙基、丙基、丁基等)、⑶R3、CO2R3、SO2R3、PO3 (R3)2和CH(OR3)2 ；其中R3在每次出現(xiàn)時獨(dú)立 地選自H、烷基、烯基、炔基、芳基、雜芳基及其組合；Χ2和X3優(yōu)選是NRn，并且更優(yōu)選是NH ；并 且X0、X1和X4優(yōu)選是0 ；R1選自H、烷基、環(huán)烷基、鏈烯基、炔基、芳基、雜芳基、烷基芳基(例如，芐基)、烷氧 基烷基、羧基氨基烷基及其組合；R2選自H、烷基、鏈烯基、炔基、芳基、烷基芳基、雜芳基、烷氧基、芳氧基、硫代烷氧 基及其組合。通式I的化合物優(yōu)選能夠提高LOXLl活性(“L0XL1增強(qiáng)劑”)，并且在某些實施方 案中，進(jìn)一步能夠刺激肌原纖維蛋白-1。在本發(fā)明的相關(guān)方面中，提供了治療與降低的皮膚彈性相關(guān)的皮膚狀況的方法， 這些皮膚狀況如細(xì)紋或皺紋的外觀、皮膚下垂或萎縮、擴(kuò)大的毛孔、失去皮膚彈性或飽滿性 或喪失皮膚顏色或色調(diào)，該方法包括將有效量的包含具有以下結(jié)構(gòu)的化合物(或其局部可 接受的鹽或酯)的組合物局部施用于需要的皮膚上 通過參考以下的本發(fā)明詳述將更好地理解本發(fā)明的這些和其他方面。詳述已經(jīng)驚訝地發(fā)現(xiàn)脫硫生物素能夠刺激LOXLl酶的產(chǎn)生或提高LOXLl酶的活性。 LOXLl是皮膚中彈性蛋白維持和重新塑造中必需的酶。鑒于該發(fā)現(xiàn)以及其他的，預(yù)期脫硫生 物素及其某些衍生物可用于抵抗皮膚衰老跡象，包括減少細(xì)紋和皺紋、下垂和相關(guān)的皮膚 衰老跡象。如在此所用的，“ ％重量”或“ ％ wt”指的是相對于組合物(即，包括在施用于皮膚 之前加入的任何載體、介質(zhì)、溶劑、潤膚劑、填充劑或其他成分)總重的成分的重量百分比， 除非另外指出。無論何時參照范圍來確定術(shù)語，該范圍都將被理解為明確地公開了其中的每個要素。作為非限制性實例，C1^4烷基將被理解為表示并公開了 Cp C2、C3或C4烷基。在兩個或多個取代基稱為“獨(dú)立地選自，，一組列舉的可替換物的情況中，意味著每 個取代基可以是該組中的任何要素，與其他取代基的特性無關(guān)。本發(fā)明提供了用于局部施用的組合物，其包含有效量的LOXLl增強(qiáng)劑，如脫硫生 物素及其結(jié)構(gòu)上相關(guān)的化合物或其鹽，用于治療、逆轉(zhuǎn)、改善和/或防止皮膚衰老跡象。這 樣的皮膚衰老跡象包括但不限于以下的(a)治療、減少和/或預(yù)防細(xì)紋或皺紋；(b)縮小皮膚毛孔大小；(c)改善皮膚厚度、豐滿度和/或緊實度；(d)改善皮膚柔順度和/或柔軟度；(e)改善膚色、光亮度和/或透明度；(f)改善前膠原和/或膠原產(chǎn)生；(g)改善彈性蛋白的保持和重塑；(h)改善皮膚紋理和/或促進(jìn)恢復(fù)原有紋理；(i)改善皮膚屏障修復(fù)和/或機(jī)能；(j)改善皮膚輪廓的外觀；(k)恢復(fù)皮膚光澤和/或亮度；(1)補(bǔ)充皮膚中必需的營養(yǎng)素和/或成分；(m)改善因衰老和/或絕經(jīng)而減退的皮膚外觀；(η)改善皮膚潤濕性；和/或(ο)增強(qiáng)皮膚彈性和/或回彈性。在實踐中，將本發(fā)明的組合物施用于需要治療的皮膚上。即，遭受任何上述屬性的 缺陷或喪失的皮膚，或者將受益于任何上述皮膚屬性改善的皮膚。在某些優(yōu)選實施方案中，本發(fā)明的組合物和方法針對預(yù)防、治療和/或改善皮膚 中的細(xì)紋和/或皺紋。在這種情況下，將組合物施用于需要治療的皮膚上，即具有皺紋和/ 或細(xì)紋的皮膚。優(yōu)選地，將組合物直接施用于細(xì)紋和/或皺紋上。這些組合物和方法適于 治療任何皮膚，包括但不限于，臉部、頸部和/或手部的皮膚表面上的細(xì)紋和/或皺紋。LOXLl增強(qiáng)化合物通常具有通式I的結(jié)構(gòu)及其局部可接受的鹽和前藥 其中η是1至22的整數(shù)，通常為1至3至18，并且優(yōu)選為5至12 ；X。、XpX2、X3和X4各自獨(dú)立地選自0、S和NRn，其中Rn表示氫、低級烷基(例如，甲 基、乙基、丙基、丁基等)、COR3、CO2R3、SO2R3、PO3(R3)2和CH(OR3)2 ；其中R3選自H、烷基、烯基、 炔基、芳基、雜芳基及其組合；Χ2和X3優(yōu)選地是NRn，并且更優(yōu)選地是NH ；并且Xc^X1和X4優(yōu)選是0;R1選自H、烷基、環(huán)烷基、鏈烯基、炔基、芳基、雜芳基、烷基芳基(例如，芐基)、烷氧 基烷基、羧基氨基烷基及其組合；并且在Xtl和X1都是ο的情況中，R1優(yōu)選是H(以由此來限 定羧酸)或烷基(以由此來限定酯)；R2選自H、烷基、鏈烯基、炔基、芳基、烷基芳基、雜芳基、烷氧基、芳氧基、硫代烷氧 基及其組合；優(yōu)選地R2是H或低級烷基，如甲基、乙基、丙基等。在此所用的術(shù)語“烷基”，除非另外指出，包括直鏈、支鏈或環(huán)狀(也鑒定為環(huán)烷 基)的，伯、仲或叔烴，包括但不限于(^至(18的那些，更特別地是Cm。烷基的說明性實例 是甲基、乙基、丙基、異丙基、環(huán)丙基、丁基、仲丁基、異丁基、叔丁基、環(huán)丁基、1-甲基丁基、1， 1-二甲基丙基、戊基、環(huán)戊基、異戊基、新戊基、環(huán)戊基、己基、異己基和環(huán)己基。除非另外指 出，烷基可以是未取代的或由一個或多個雜原子或部分取代的，這些雜原子或部分選自鹵 素、羥基、羧基、酰基、酰氧基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、芳基氨基、酰氨基、酯、脲、烷氧 基、芳氧基、硝基、氰基、氧、氧雜、硫代、磺酰、酯、酰胺、膦?；?、氧膦基、硫酯、肟或任何其他 沒有抑制該化合物藥物活性的官能團(tuán)。優(yōu)選的取代包括鹵素(氟、氯、溴和碘)、氧、氧雜、氨 基、燒基氨基禾口二燒基氨基。芳基取代基包括但不限于苯基、聯(lián)苯、萘基等，每個任選由如上所述的雜原子或官 能團(tuán)來取代。雜環(huán)基團(tuán)可以是在環(huán)中含有一個或多個雜原子(例如，N、0或S)的芳族或非 芳族烴環(huán)。優(yōu)選的雜芳環(huán)將是5-元或6-元環(huán)，每個任選地包含連接環(huán)的其他雜原子或官 能團(tuán)，如上所述。五元雜環(huán)的非限制性實例包括但不限于吡咯啶、四氫呋喃、四氫噻吩、噁唑 啶、噻唑啶、1，3- 二噁烷、1，3-氧硫雜環(huán)戊烷、1，3- 二硫雜環(huán)戊烷、咪唑啶、吡唑啶、吡咯、呋 喃、噻吩、噁唑、異噁唑、噻唑、異噻唑、咪唑、吡唑、1,3,4-噁二唑、1,2,4-噁二唑、1，3，4-噻 二唑、1，2，4-噻二唑、1，3，4-三唑、1，2，3-三唑等。六元雜環(huán)的非限制性實例包括但不限于 2H-呋喃、四氫呋喃、哌啶、1，4- 二噁烷、瑪琳、哌嗪、1，4- 二噻烷、硫嗎啉、吡啶、吡嗪、噠嗪、 嘧啶、1，2，3-三嗪、1，2，4-三嗪、1，3，5-三嗪、1，2，3，4-四嗪和五嗪，這些僅僅是一些實例。在禮和&可以是指定基團(tuán)(例如，烷基、鏈烯基、炔基、芳基、雜芳基等)的“組合” 的情況中，明確地包括包含兩個或多個所示基團(tuán)的取代基，如例如，烷基_芳基、芳基_烷基寸。通式I的五元環(huán)具有至少一個立構(gòu)中心，由連接X2的碳原子上的星號表示，并且 在R2不是氫的情況下，可以具有另外的立構(gòu)中心，也是用星號表示的。每個立構(gòu)中心可以獨(dú) 立地是R或S構(gòu)型。因此，R2不是氫時，通式I的化合物將呈現(xiàn)為(R，R)、(S，S)、(R，S)或 (S，R)非對映異構(gòu)體，將每一個都認(rèn)為是本發(fā)明分開的實施方案，連同這些立體異構(gòu)體的混 合物。在R2為氫的情況下，通式I的化合物將是R或S，其中每一個都是本發(fā)明分開的實施 方案，連同R和S的外消旋混合物。在一個實施方案中，X2和X3各自表示NRn，并且X4是氧，如通式I-a所表示的 其中11、禮、1 2、『、\和&如上所述。在該實施方案中，在每次出現(xiàn)時，RM尤選是氫 或低級烷基。在本發(fā)明的優(yōu)選實施方案中，在每次出現(xiàn)時，Rn是氫，并且R2是低級烷基，優(yōu) 選甲基。在本發(fā)明的優(yōu)選實施方案中，Xtl和X1各自表示氧。在另一個實施方案中，Xtl是氧、 硫或NRn，優(yōu)選氧，并且X1是基團(tuán)NRN。在優(yōu)選的實施方案中，Xtl和X1各自表示氧，并且該化合物具有通式I_b的結(jié)構(gòu) 其中n、R2、X2、X3*X4如上所定義。在該實施方案中，化合物是羧酸(R1是氫)或 酯。盡管R1優(yōu)選是氫，但也預(yù)期了根據(jù)本發(fā)明的酯將是有利的。例如，可以選擇R1來改變 化合物的親油性，預(yù)期高級酯(例如，禮是^吣烷基)更親油。在R1是氫的情況下，將理解 可以通過選擇合適的羧基保護(hù)劑而將化合物作為前藥來傳送，羧基保護(hù)劑在體內(nèi)被水解， 以提供羧酸。 在某些實施方案中，根據(jù)通式I_b，X4是0或S，優(yōu)選0 ;X2和/或X3是NRn，更常見 為NH。在一個實施方案中，X4是0，并且X2和X3各自為NH。在某些實施方案中，X2和X3是 NH，而 X4 是 0。在根據(jù)通式I、I_a和I-b的某些實施方案中，“η”至3、4、5、6、7、8、9或10。在通 式I、I-a和I-b中，本發(fā)明優(yōu)選η是5。在通式I、I-a和I-b中，R2最常見為直鏈或支鏈烷基，特別是C1,烷基，任選地 包含一個或多個雜原子。在某些實施方案中，R2是CV16、(V14、C1X1^12,C1,、(V8、C1I C1^4或 CV2。通常，R2將是CpCyC3、C4或C5烷基，直鏈或支鏈。在某些特定的實施方案中，R2是甲
基或乙基。R1和R2通常(獨(dú)立地)是氫或直鏈或支鏈烷基，特別是Ch8烷基。在某些實施方
案中,Rl 疋。1-16、。1-15、。1-14、。1-13、。1-12、。1-11、。1-10、。1-9、。1-8、。1-7、。1-6、。1-5 或更低'如。1、。2、。3、
C4或C5烷基，直鏈或支鏈。在某些特定的實施方案中，R1和/或R2是甲基或乙基。在其他 特定的實施方案中，R1和/或R2是氫。R1或R2可以包含形式-(CH2)a-R*的線性烷基部分，其中“a”是1至6的整數(shù)，包 括,例如，-CH2-R*, -CH2CH2-R*, -CH2CH2CH2-R* 或-CH2CH2CH2CH2-R* ；通式-O(CH2)a-R* 的線性烷氧基部分，其中“a”是1至6的整數(shù)，包括例如，-OCH2-R^-OCH2CH2-R*或-OCH2CH2CH2-R* ；形 式-O(CH2)aO-R* 的基團(tuán)，其中 “a” 如上所定義；-(CH2CH2O)a-R* 或-(CH2)bO(CH2)。-R*、-(CH2) bS (CH2) C-R*或-(CH2)13NRn (CH2) c-R*形式的部分，其中“b”和“C”獨(dú)立地是0 (零)到6的整 數(shù)，并且『如上所定義。在每個情況中，R*是低級烷基(例如，甲基、乙基、丙基、丁基等)、 氫、羥基、巰基、-(CHO)-、羧基、氨基、烷基氨基或二烷基氨基。R1和R2還可以獨(dú)立地選自碳環(huán)或雜環(huán)。碳環(huán)可以獨(dú)立地是飽和、不飽和的或是芳 環(huán)。碳環(huán)通常為3至8個碳，更常見為3至7個碳，最常見為5至6個碳(例如，環(huán)戊基或 環(huán)己基)，各自任選地是取代的。雜環(huán)還獨(dú)立地是飽和的、不飽和的或芳環(huán)的。雜環(huán)通常為 3至8元環(huán)，更常見為3至7元環(huán)，并優(yōu)選5或6元環(huán)。雜環(huán)可以在環(huán)中含有一個或多個選 自氮、硫或氧原子的雜原子。本發(fā)明優(yōu)選的化合物具有根據(jù)通式Ic的結(jié)構(gòu) 其中η是4至6(優(yōu)選5) ;R2是甲基、乙基、丙基或丁基，或苯基(優(yōu)選甲基)；和 R1是氫、甲基、乙基、丙基、丁基、戊基、己基、苯基或芐基(優(yōu)選氫)。在特定的實施方案中，化合物是脫硫生物素，其具有如下結(jié)構(gòu) 化合物可以作為(R，R)、(R，S)、(S，R)或(S，S)立體異構(gòu)體存在，或作為這些立體 異構(gòu)體中的兩種或多種存在。通式II包括化合物L(fēng)-脫硫生物素、D-脫硫生物素和DL-脫 硫生物素。優(yōu)選地，甲基連接的立體中心是S構(gòu)型的，而另一個立體中心是R構(gòu)型的，如下
所示 通式II的化合物是D-脫硫生物素(CAS注冊號No. 533-48-2)，也稱為(+)-脫硫生物素或d-脫硫生物素。 在此所述的化合物可以以局部可接受的(例如，無毒和/或無刺激性)仍然保持 化合物生物活性的鹽或復(fù)合物的形式存在。鹽可以是無機(jī)或有機(jī)酸或堿加成鹽。合適的 酸式鹽包括但不限于乙酸鹽、己二酸鹽、海藻酸鹽、檸檬酸鹽、天冬氨酸鹽、苯甲酸鹽、苯磺 酸鹽、硫酸氫鹽、丁酸鹽、樟腦酸鹽、樟腦磺酸鹽、二葡萄糖酸鹽、環(huán)戊丙酸鹽、十二烷基硫酸 鹽、乙烷硫酸鹽、葡庚糖酸鹽、甘油磷酸鹽、半硫酸鹽、庚酸鹽、己酸鹽、富馬酸鹽、鹽酸鹽、氫 溴酸鹽、氫碘酸鹽、2-羥基-乙烷硫酸鹽、乳酸鹽、馬來酸鹽、甲磺酸鹽、煙酸鹽、2-萘磺酸 鹽、草酸鹽、雙羥萘酸鹽、果膠酸鹽、過硫酸鹽、3-苯基丙酸鹽、苦味酸鹽、特戊酸鹽、丙酸鹽、 琥珀酸鹽、酒石酸鹽、硫氰酸鹽、甲苯磺酸鹽和十一烷酸鹽。尤其可提及鹽酸鹽。堿加成鹽 包括與諸如鋅、鈣、鉍、鋇、鎂、錳、鋰、鋁、銅、鈷、鎳、鎘、鈉、鉀等的金屬陽離子 形成的那些，或與從氨、N，N-二芐基乙二胺、D-葡萄糖胺、四乙銨或乙二胺等形成 的陽離子形成的那些。任何含氮基團(tuán)可以使用低級烷基鹵化物來四級化，這些低級烷基鹵 化物如甲基、乙基、丙基和丁基氯化物、溴化物和碘化物；硫酸二烷基酯，例如硫酸二甲酯、 硫酸二乙酯、硫酸二丁酯和硫酸二戊酯；長鏈商化物，如癸基、月桂基、肉豆蔻基和硬脂酰基 氯化物、溴化物和碘化物；芳烷基鹵化物，如芐基和苯乙基溴化物，這些僅僅為一些實例。脫硫生物素及其類似物(例如，通式I的化合物)的合適前藥包括具有通式IIIa 或IIIb結(jié)構(gòu)的那些在結(jié)構(gòu)IIIa中，X3是N，并且X4是OR1或NRnR1 ；其中Rn、R1、R2和X2如上所定義。 在結(jié)構(gòu)IIIb中，X2是N，并且X4是OR1或NRnR1 ；其中RN、Ri、R2和X3如上所定義。前藥在體 內(nèi)水解成通式I的化合物。根據(jù)本發(fā)明的局部組合物可以配制成用于局部施用的各種形式并將包含約 0.0001%重量至約10%重量的化合物。在某些實施方案中，組合物包含約0.001%重量至 約5%重量，或約0. 01%重量至約2. 5%重量的化合物。在某些實施方案中，組合物包含 0. 001%至約1. 5%重量或約0. 01%至約0. 5%重量的化合物。通常將組合物配制成乳劑(包括油包水或水包油乳劑)、洗液、霜劑、精華、噴霧、 氣溶膠、餅狀物、高級、香精、凝膠、糊劑、貼劑、筆狀物、濕紙巾、面膜、棒狀物或其他適于局 部施用的形式。組合物可以包括化妝品上可接受的載體。合適的載體可以采用本領(lǐng)域已知的適 于施用于皮膚上的任何形式并可以包括水；植物油；礦物油；酯類，如棕櫚酸辛酯、肉豆蔻 酸異丙酯和棕櫚酸異丙酯；醚類，如二辛醚和二甲基異山梨醇；醇類，如乙醇和異丙醇；脂 肪醇類，如鯨蠟醇、十六/十八醇、硬脂醇和二苯基醇；異鏈烷烴，如異辛烷、異十二烷和異 十六烷；硅酮油，如環(huán)聚甲基硅氧烷、聚二甲基硅氧烷、聚二甲基硅氧烷交聯(lián)聚合物、聚硅氧烷及其衍生物，優(yōu)選有機(jī)修飾的衍生物；烴油，如礦物油、礦脂、異二十烷和聚異丁烯；多元 醇，如丙二醇、甘油、丁二醇、戊二醇和己二醇；蠟，如蜂蠟和植物蠟；或前述的任意組合物 或混合物。在一個實施方案中，載體包含脂質(zhì)體。組合物可以任選地包含其他化妝品活性物質(zhì)和賦形劑，包括，但不限于，填充劑、 乳化劑、抗氧化劑、表面活性劑、成膜劑、螯合劑、膠凝劑、增稠劑、潤膚劑、潤濕劑、保濕齊U、 維生素、礦物質(zhì)、粘度和/或流變性改良劑、防曬劑、角質(zhì)軟化劑、脫色劑、類維生素A、激素 化合物、α-羥酸、α-酮酸、抗分枝桿菌劑、抗真菌劑、抗微生物劑、抗病毒劑、鎮(zhèn)痛劑、脂質(zhì) 化合物、抗過敏劑、Hl或Η2抗組胺劑、抗炎劑、抗刺激劑、抗腫瘤劑、免疫系統(tǒng)加強(qiáng)劑、免疫 系統(tǒng)抑制劑、抗痤瘡劑、麻醉劑、防腐劑、驅(qū)蟲劑、冷膚化合物、護(hù)膚劑、皮膚滲透增強(qiáng)劑、磨 砂劑(exfollient)、潤滑劑、芳香劑、著色劑、脫色劑、色素淡化劑、防腐劑、穩(wěn)定劑、藥劑、光 穩(wěn)定劑、防曬劑及其混合物。除了上述物質(zhì)之外，本發(fā)明的化妝品組合物還可以含有用于治 療皮膚病征的任何其他化合物。組合物可以包含其他具有抗衰老益處的活性成分。包括一種或多種其他LOXLl增 強(qiáng)劑是理想的，因為預(yù)期使用這樣的組合可以獲得協(xié)同的改善作用。其他合適的抗衰老成 分包括，但不限于，某些植物制劑，如Butea Frondosa提取物、硫代二丙酸(TDPA)、類維生 素Α、α-含氧酸和乙醇酸，這些僅僅為一些實例。提供了治療皮膚彈性下降癥狀的方法，其包括將有效量的在此所述的任一種化合 物或其鹽局部施用于需要的個體皮膚上。通常，以包含化妝品上可接受載體(其表示與施 用于人皮膚相適的載體(例如，安全的))的組合物形式來提供本發(fā)明的化合物。組合物理想地提高了皮膚中的LOXLl活性。優(yōu)選地，本發(fā)明的組合物具有刺激肌 原纖維蛋白-1的附加活性。在某些實施方案中，沒有給予毛囊(如，頭皮的毛囊)。在某些 實施方案中，宿主未患有皮脂產(chǎn)生增加。在某些實施方案中，皮膚未患有皮脂產(chǎn)生增加。用 本發(fā)明的化合物可以改善或治療的皮膚損傷包括皮膚彈性下降的任何跡象，如細(xì)紋和/或 皺紋、脆弱或變薄的皮膚、下垂的皮膚、缺乏光澤的皮膚、疲乏的皮膚、干燥的皮膚、皮膚敏 感、黑眼圈、飽滿性的皮膚、不規(guī)則的皮膚色素沉著和黃褐斑。將本發(fā)明的組合物局部施用于皮膚上可以增強(qiáng)和改善皮膚的美學(xué)外觀。該方法對 于治療皮膚的光老化和內(nèi)在老化的跡象特別有用，包括細(xì)紋和皺紋、皮膚色調(diào)和色彩、皮膚 下垂和萎縮、變大的毛孔、皮膚變薄、降低的回彈性和飽滿性。本發(fā)明還提供了通過將包含本發(fā)明組合物的組合物局部施用于受影響的部位來 治療衰老皮膚的方法，持續(xù)足以減輕、改善皮膚彈性下降的皮膚學(xué)跡象的時間段。通常將組 合物每24小時施用于皮膚1至3次，持續(xù)獲得所需結(jié)果需要的時間。治療方案可以包括每 日施用，持續(xù)至少一周、至少兩周、至少四周、至少八周或至少十二周。該方法包括治療與年 齡和內(nèi)在皮膚衰老相關(guān)的皮膚變化。預(yù)期該方法對于UV損傷皮膚的治療特別有用。在一個實施方案中，治療皮膚皺紋(例如，在頸、臉、手上)的方法包括將有效量的 包含脫硫生物素或其鹽和/或酯的化妝品組合物局部施用于皺紋上并持續(xù)足以減輕皺紋 嚴(yán)重程度或深度的時間。在另一個實施方案中，治療皮膚下垂(例如，在臉或頸上)的方法包括將有效量的 包含脫硫生物素或其鹽和/或酯的化妝品組合物局部施用于下垂皮膚上并持續(xù)足以減輕 下垂程度的時間。
在另一個實施方案中，治療變薄皮膚的方法包括將有效量的包含脫硫生物素或其 鹽和/或酯的化妝品組合物局部施用于變薄皮膚上并持續(xù)足以減輕下垂程度的時間。在另一個實施方案中，治療變大毛孔的方法包括將有效量的包含脫硫生物素或其 鹽和/或酯的化妝品組合物局部施用于變大的毛孔上并持續(xù)足以減輕下垂程度的時間。1.實施例
_4] L 1 ^MM 1 誦i寸DL-脫疏牛物素刺激LOXLl碰已經(jīng)發(fā)現(xiàn)酶賴氨酰氧化酶樣-1 (“L0XL1”)為彈性蛋白聚合物更新的重要調(diào)控劑， 該彈性蛋白聚合物是使結(jié)締組織(包括皮膚)具有彈性特性的胞外基質(zhì)組分。認(rèn)為青春期 后不再產(chǎn)生彈性蛋白，青春期后彈性蛋白纖維的保持是與抗彈性蛋白酶-彈性蛋白酶活性 競爭的結(jié)果。隨著年齡增長，注意到競爭活性不平衡，導(dǎo)致含有彈性蛋白的組織喪失彈性。 就皮膚而言，該彈性喪失最常見地是作為皺紋被觀察到。盡管并不了解更新/降解(即，抗彈性蛋白酶/彈性蛋白酶活性)的準(zhǔn)確機(jī)制， 但已經(jīng)確定LOXLl為“抗彈性蛋白酶”因子，其通過彈性蛋白原單體聚合而介導(dǎo)彈性蛋白纖 維的更新(參見，例如，Kaganet 等，2003，J. Cell. Biochem. ,88 :660_672 ；和 Li 等，2004， Nat. Genet. 36 :178_182，在此將每篇的全部內(nèi)容引入作為參考)。因此，能夠增強(qiáng)LOXLl轉(zhuǎn) 錄和/或翻譯或LOXLl活性的物質(zhì)將增強(qiáng)“抗彈性蛋白酶”活性，促進(jìn)彈性蛋白纖維更新并 實現(xiàn)含彈性蛋白組織的彈性改善。使用熒光素酶報告基因系統(tǒng)測試了 DL-脫硫生物素誘導(dǎo) LOXLl表達(dá)的能力。發(fā)現(xiàn)了向包含LOXLl調(diào)控元件的培養(yǎng)物中添加DL-脫硫生物素可誘導(dǎo) 明顯超過對照的報告基因表達(dá)。1. 1. 1材料和方法載體構(gòu)建、轉(zhuǎn)染和表達(dá)通過本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的標(biāo)準(zhǔn)方法和根據(jù)制造商的說明將LOXLl基因的啟動 子片段分離并克隆至PGL3熒光素酶報告基因質(zhì)粒(Promega)中。使用LipofectAMINE LTX試劑(Invitrogen)按照制造商的指示將L0XLl/pGL3載體和不含有調(diào)控元件的對照載 體pRL-NULL(Promega)共轉(zhuǎn)染至人纖維肉瘤系HT1080中。使經(jīng)轉(zhuǎn)染的細(xì)胞恢復(fù)24h。隨后用含有各種濃度的DL-脫硫生物素的新鮮培養(yǎng)基 代替該培養(yǎng)基，并將經(jīng)轉(zhuǎn)染的細(xì)胞再培養(yǎng)24小時。隨后用PBS洗滌培養(yǎng)物并將其暴露于100 μ 1細(xì)胞裂解緩沖液/25cm2培養(yǎng)區(qū)域中 并在室溫下輕輕振蕩30分鐘。隨后立即將含有細(xì)胞裂解物的培養(yǎng)燒瓶置于-80°C。報告基因活性的測定
tons] 按照制造商的說明(雙熒光素酶(Dual-Luciferase 報告基因分析系統(tǒng)， Promega)測定報告基因螢火蟲熒光素酶的活性。簡而言之，相對于編碼來自海腎(Renilla reniformis)的第二熒光素酶基因的對照載體的活性來測定該報告基因的活性。比較來自 測試和對照培養(yǎng)物的基因的相對活性以測定調(diào)控序列活性的百分比改變。1. 1. 2 結(jié)果因為pGL3載體缺少調(diào)控?zé)晒馑孛富蛩匦璧膯幼悠危虼嗽摶虻谋?達(dá)是通過克隆的調(diào)控元件來控制的，在該情形中為LOXLl基因的調(diào)控元件。在重復(fù)三次 的測試中，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)添加0.001% DL-脫硫生物素可以使得報告基因的表達(dá)增強(qiáng)90% (ρ < 0. 05，與載體對照相比較)。因此表明DL-脫硫生物素是LOXLl表達(dá)的陽性調(diào)控劑，表明對彈性蛋白更新具有次級效應(yīng)。L 2. 實施例2 通過DL-脫硫生物素刺激肌原纖維蛋白-1肌原纖維蛋白-1是340kDa的蛋白，其是皮膚中微纖維的成分。肌原纖維蛋白微 纖維廣泛分布于微纖維中，并且它們給予了結(jié)締組織長距離的彈性。它們指導(dǎo)彈性微纖維 形成過程中的彈性蛋白原沉積并形成用于成熟彈性纖維的外層覆蓋物。肌原纖維蛋白-ι 的成熟引起馬方氏綜合癥，這是一種與嚴(yán)重的大動脈、眼睛和其他由于缺乏彈性纖維引起 的異常相關(guān)的遺傳病(Kielty 等，Adv. in Protein Chemistry, vol 70，p. 405，2004)。提 高肌原纖維蛋白-ι表達(dá)的活性劑將進(jìn)一步提高“抗彈性蛋白酶”活性，促進(jìn)彈性蛋白纖維 的更新和實現(xiàn)含彈性蛋白組織彈性的改善。通過定量RT-PCR來測試DL-脫硫生物素誘導(dǎo) 肌原纖維蛋白-1表達(dá)的能力。發(fā)現(xiàn)了將DL-脫硫生物素加入人成纖維細(xì)胞培養(yǎng)物中能誘 導(dǎo)明顯超過對照的肌原纖維蛋白-ImRNA表達(dá)。1.2. 1方法和材料細(xì)胞處理將正常的人真皮成纖維細(xì)胞以IO6細(xì)胞/IOOmm涂布于培養(yǎng)平板中的IOml標(biāo)準(zhǔn)生 長培養(yǎng)基中，并在37°C和10% CO2下進(jìn)行培養(yǎng)。大約24小時后，將稀釋于新鮮生長培養(yǎng)基中的測試活性物質(zhì)和溶劑對照給予細(xì) 胞并在37°C下培養(yǎng)48小時。48小時培養(yǎng)后，除去細(xì)胞培養(yǎng)基，并加入Iml TRIzoI 試劑 來裂解每個平板中的細(xì)胞。將每個平板中細(xì)胞刮出，通過移液管吸放幾次并收集于1.5ml 離心管中。將細(xì)胞裂解物在15至30°C下培養(yǎng)5分鐘，使核蛋白復(fù)合物完全分裂，然后儲存 在-80°C下用于RNA分離。RNA 分離和 RT PCR:使用標(biāo)準(zhǔn)程序分離RNA并溶解于無RNase的水中并存儲于_80°C下。使用Agilent 2100 Bioanalyzer測定總RNA的濃度。RNA6000 Nano-芯片表明RNA樣品是完整的。按照Applied Biosystems, CA提供的制造商說明來進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄酶(RT)反應(yīng)。RT 步驟后，將反應(yīng)物存儲于-20°C下，用于QPCR分析。在20μ1的總體積下進(jìn)行QPCR。使 用了 Applied Biosystems (AB)Universal PCR主混合物。制備該混合物以含有10 μ 1 TaqmanUniversal PCR混合物、1 μ 1引物和探針混合物、2 μ 1 RT產(chǎn)物和7 μ 1去離子水。肌 原纖維蛋白-I和GAPDH引物以及探針購自AppliedBiosystems，并且肌原纖維蛋白-1的 ID為Hs00171191-ml，人GAPDH的ID為4352934E。用于QPCR的溫度特征為50°C 2分鐘， 950C 10分鐘，1個循環(huán)，然后95°C 15秒鐘，60°C 1分鐘，40個循環(huán)。1.2. 2 結(jié)果結(jié)果QPCR結(jié)果顯示了與溶劑對照相比較，用0. 001% DL-脫硫生物素的處理將肌原纖 維蛋白-I基因表達(dá)提高了 47. 55% (ρ < 0. 05)。在此引用的包括專利申請和公開的所有參考文獻(xiàn)都引入本文中作為參考并用于 所有目的，其引入程度就如同每一篇公開或?qū)＠驅(qū)＠暾埗际翘貏e地且單獨(dú)地指出其全 部內(nèi)容出于所有目的引入本文中作為參考一般。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)了解，可以對本發(fā)明進(jìn) 行多種修改和改變，而不脫離其精神和范圍。在此所述的特定實施方案僅以實施例的方式提 供，且本發(fā)明僅受限于所附的權(quán)利要求，連同這些權(quán)利要求所賦予權(quán)利的等效物的全部范圍。
權(quán)利要求
治療一種或多種與彈性蛋白喪失相關(guān)的皮膚衰老跡象的方法，其包括將包含以下物質(zhì)的組合物局部施用于皮膚上(i)有效量的通式I的化合物，或其局部可接受的鹽或前藥其中n是1至22的整數(shù)；X0、X1、X2、X3和X4各自獨(dú)立地選自O(shè)、S和NRN，其中RN表示氫、低級烷基、COR3、CO2R3、SO2R3、PO3(R3)2和CH(OR3)2；其中R3選自H、烷基、烯基、炔基、芳基、烷基芳基、雜芳基及其組合；R1選自H、烷基、環(huán)烷基、鏈烯基、炔基、芳基、雜芳基、烷基芳基、烷氧基烷基、羧基氨基烷基及其組合；和R2選自H、烷基、鏈烯基、炔基、芳基、烷基芳基、雜芳基、烷氧基、芳氧基、硫代烷氧基及其組合；和(ii)化妝品上可接受的載體。FPA00001160947000011.tif
2.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中η為5至12的整數(shù)。
3.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中η為5。
4.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中R2是Cp5烷基。
5.根據(jù)權(quán)利要求4的方法，其中R2是甲基。
6.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中X4和Xtl是0。
7.根據(jù)權(quán)利要求6的方法，其中X2和X3是NH。
8.根據(jù)權(quán)利要求7的方法，其中X1是0。
9.根據(jù)權(quán)利要求8的方法，其中R1是H。
10.根據(jù)權(quán)利要求8的方法，其中R1是Cp6烷基。
11.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中所述化合物是脫硫生物素。
12.根據(jù)權(quán)利要求11的方法，其中所述化合物是D-脫硫生物素。
13.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中所述一種或多種皮膚衰老跡象包括皺紋和/或細(xì)紋。
14.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中所述一種或多種皮膚衰老跡象包括皮膚下垂或萎縮。
15.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中所述一種或多種皮膚衰老跡象包括變薄的皮膚。
16.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中所述一種或多種皮膚衰老極性包括變大的毛孔。
17.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中所述一種或多種皮膚衰老跡象包括皮膚色調(diào)或色彩 喪失。
18.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中所述組合物構(gòu)成化妝品組合物的約0.001%重量至約5%重量。
19.治療一種或多種與彈性蛋白喪失相關(guān)的皮膚衰老跡象的方法，其包括將化妝品組 合物局部施用于需要的皮膚上，該化妝品組合物在化妝品可接受載體中包含有效量的具有合；以下結(jié)構(gòu)的化合物或其鹽或酯 其中所述一種或多種皮膚衰老跡象選自細(xì)紋或皺紋、皮膚下垂或萎縮、變薄的皮膚、變 大的毛孔和降低的皮膚回彈性或飽滿性，及其組合。
20.根據(jù)權(quán)利要求19的方法，其中所述化合物是D-脫硫生物素或其鹽或酯。
21.根據(jù)權(quán)利要求20的方法，其中所述一種或多種皮膚衰老跡象是皺紋或細(xì)紋。
22.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中所述局部施用于皮膚上的化合物是通式I的化合物的 前藥。
全文摘要
提供了用于治療皮膚彈性降低癥狀的局部組合物和方法，其包括脫硫生物素和某些脫硫生物素類似物。這些化合物能有效刺激LOXL-1活性并因此可以提高彈性蛋白重塑以及改善細(xì)紋、皺紋、皮膚下垂和其他彈性蛋白功能下降的癥狀。
文檔編號A61K38/00GK101903009SQ200880121698
公開日2010年12月1日 申請日期2008年11月19日 優(yōu)先權(quán)日2007年12月21日
發(fā)明者D·S·普特謝林特塞夫, S·W·陳, X·羅 申請人:雅芳產(chǎn)品公司