專利名稱：：Ⅱ型抗CD20抗體與抗Bcl-2活性劑的聯(lián)合治療的制作方法II型抗CD20抗體與抗Be1-2活性劑的聯(lián)合治療本發(fā)明涉及II型抗CD20抗體在制備用于與抗Bcl-2活性劑聯(lián)合治療癌癥，尤其是表達(dá)CD20的癌癥的藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：⑶20分子(也稱為人B淋巴細(xì)胞限制性分化抗原或Bp35)是一種位于前B(pre_B)和成熟B淋巴細(xì)胞上的分子量約35kD的疏水跨膜蛋白(Valentine，M.A.等人，J.Biol.Chem.(生物化學(xué)雜志)264(19)(1989)11282-11287；和Einfield，D.A.等人，EMBOJ.(EMB0雜志)7(3)(1988)711-717)。⑶20見于90%以上的來自外周血或淋巴樣器官的B細(xì)胞的表面上，其在早期前B細(xì)胞發(fā)育期間表達(dá)并且一直存在直至漿細(xì)胞分化。CD20存在于正常B細(xì)胞以及惡性B細(xì)胞上。具體地，⑶20在90%以上的B細(xì)胞非霍奇金淋巴瘤(NHL)上表達(dá)(Anderson,K.C.等人，Blood(血液)63(6)(1984)1424-1433)，但不存在于造血干細(xì)胞、原B細(xì)胞(pro-Bcells)、正常漿細(xì)胞或其他正常組織中(Tedder,T.F.等人，J，Immunol.(免疫學(xué)雜志)135(2)(1985)973-979)。CD20蛋白的85個氨基酸羧基末端區(qū)位于胞質(zhì)中。此區(qū)的長度與其他B細(xì)胞特異的表面結(jié)構(gòu)相反，上述表面結(jié)構(gòu)諸如IgM、IgD和IgG重鏈或組織相容性抗原II類a或旦鏈，它們具有相對短的胞質(zhì)內(nèi)區(qū)域，分別具有3、3、28、15和16個氨基酸(Komaromy，M.等人，NAR(核酸研究)11(1983)6775-6785)。在最后61個羧基末端氨基酸中，21個是酸性殘基，而僅有2個是堿性殘基，表明該區(qū)具有很強(qiáng)的凈負(fù)電荷。GenBank登記號為NP-690605。CD20被認(rèn)為可能參與調(diào)節(jié)B細(xì)胞活化和分化過程中的(多個)早期步驟(Tedder，T.F.等人，Eur.J.Immunol.(歐洲免疫學(xué)雜志)16(1986)881-887)并且可具有鈣離子通道的功能(Tedder,T.F.等人，J.Cell.Biochem.(細(xì)胞生物化學(xué)雜志)14D(1990)195)。存在有兩種不同類型的抗CD20抗體，兩者在其CD20結(jié)合模式和生物學(xué)活性方面明顯不同(Cragg,M.S.等人，Blood(血液)103(2004)2738-2743；和Cragg，M.S.等人，Blood(血液)101(2003)1045-1052)。I型抗體，例如，利妥昔單抗(rituximab)，在補體介導(dǎo)的細(xì)胞毒性中發(fā)揮作用，而II型抗體，例如，托西莫單抗(Tositumomab)(Bl)、11B8、AT80或人源化B-Lyl抗體，能有效地經(jīng)胱天蛋白酶(caspase)非依賴性凋亡啟動靶細(xì)胞死亡并伴隨著磷脂酰絲氨酸的暴露。I型和II型抗⑶20抗體共有的通用特性總結(jié)在表1中。表1I型和II型抗⑶20抗體的特性<table>tableseeoriginaldocumentpage3</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage4</column></row><table>Bcl-2蛋白家族調(diào)節(jié)由發(fā)育信號以及響應(yīng)于多種脅迫信號觸發(fā)的程序性細(xì)胞死亡(Cory.S.和Adams，J.M.，NatureReviewsCancer(自然癌癥綜述)2(2002)647-656；Adams,GenesundDevelopment(基因與發(fā)育)17(2003)2481-2495；Danial,N.N.和Korsmeyer,S.J.，Cell(細(xì)胞)116(2004)205-219)。而Bcl_2本身和幾個近親(Bcl-xL、Bcl-W、Mcl-l和A1)促進(jìn)細(xì)胞存活，它們帶有三個或四個保守的Bcl-2同源(BH)區(qū)，凋亡由兩個其他的亞家族驅(qū)動。細(xì)胞死亡的啟動信號由一大類BH3-only蛋白傳輸，BH3-only蛋白包括Bad、Bid、Bim、Puma和Noxa，它們的共同之處僅為很小的BH3相互作用結(jié)構(gòu)域(Huang和Strasser，Cell(細(xì)胞)103(2000)839-842)。然而，Bax或Bak，含BH1-BH3的多結(jié)構(gòu)域蛋白是定型為細(xì)胞死亡所必需的(Cheng等人，MolecularCell(分子細(xì)胞)8(2001)705-711；Wei,M.C.等人，Science(科學(xué))292(2001)727-730;Zong，W.X.等人，GenesandDevelopment(基因與發(fā)育)15148(2001)1-1486)。當(dāng)活化時，它們可透過線粒體的外膜并釋放活化去除細(xì)胞的胱天蛋白酶所需要的促凋亡因子(pro-apoptogenicfactor)(例如，細(xì)胞色素C)(Wang，K.，GenesandDevelopment(基因與發(fā)育)15(2001)2922-2933；(Adams,2003見前)；Green,D.R.和Kroemer,G.，Science(科學(xué))305(2004)626-629)。Bcl-2家族的這三個小派系的成員之間的相互作用決定了細(xì)胞存活還是死亡。當(dāng)BH3-only蛋白已活化時，例如，響應(yīng)于DNA損害，它們可經(jīng)其BH3結(jié)構(gòu)域結(jié)合于其促生存親屬上的溝(Sattler等人，Science(科學(xué))275(1997)983-986)。然而，BH3_only和Bcl-2樣蛋白如何控制Bax和Bak的活化仍然知之甚少(Adams，2003見前)。大多數(shù)注意力已經(jīng)集中在Bax上。此可溶性單體蛋白(Hsu，Y.T.等人，JournalofBiologicalChemistry(生物化學(xué)雜志)272(1997)13289-13834；ffolter,K.G.等人，JournalofCellBiology(細(xì)胞生物學(xué)雜志)139(1997)1281-92)通常使其膜靶向結(jié)構(gòu)域插入至其溝中，這可能解釋其胞漿定位(Nechushtan，A.等人，EMBOJournal(EMB0雜志)18(1999)2330-2341；Suzuki等人，Cell(細(xì)胞)103(2000)645-654;Schinzel，A.等人，JCellBiol(細(xì)胞生物學(xué)雜志)164(2004)1021-1032)。在(Lucken-Ardjomande，S.，和Martinou，J.C.，JCellSci(細(xì)胞科學(xué)雜志)118(2005)473-483)中綜述中，已經(jīng)提議幾種無關(guān)的肽/蛋白調(diào)控Bax活性，但其生理學(xué)關(guān)聯(lián)性仍然需要建立?？蛇x地，Bax可經(jīng)某些BH3-only蛋白的直接結(jié)合而活化(Lucken-Ardjomande,S.和Martinou,J.C，2005，見前)，最充分記載的是Bid的截短形式，tBid(ffei,M.C.等人，GenesundDevelopment(基因與發(fā)育)14(2000)2060-2071；Kuwana,T.等人，Cell(細(xì)胞)111(2002)331-342;Roucou，X.等人，BiochemicalJournal(生物化學(xué)雜志)368(2002)915-921；Cartron，P.F.等人，MolCell(分子細(xì)胞)16(2004)807-818)。如他處所討論的(Adams2003見前)，最早的模型，其中Bcl-2直接連接Bax(01tvai，Z.N.等人，Cell(細(xì)胞)74(1993)609-619)，已經(jīng)出現(xiàn)了問題，因為Bcl-2是膜結(jié)合蛋白，而Bax是胞漿蛋白，并且它們的相互作用似乎高度依賴于用于細(xì)胞溶解的去污劑(Hsu，Y.T.和Youle，1997見前)。盡管如此，公認(rèn)的是Bax的BH3區(qū)可介導(dǎo)與Bcl-2的締合(Zha,H.和Reed，J.，JournalofBiologicalChemistry(生物學(xué)化學(xué)雜志)272(1997)31482-88;Wang，K.等人，MolecularundCellularBiology(分子和細(xì)胞生物學(xué))18(1998)6083-6089)，并且Bcl_2阻止Bax的寡聚化，即使檢測不到異二聚體(Mikhailov,V.等人，JournalofBiologicalChemistry(生物學(xué)化學(xué)雜志)276(2001)18361-18374)。因此，促生存蛋白是否直接或間接地限制Bax的活化仍然不清楚。盡管在大多數(shù)情況下Bax和Bak似乎在功能上是等效的(Lindsten，T.等人，MolecularCell(分子細(xì)胞)6(2000)1389-1399;Wei，M.C.等人，2001見前)，從其在健康細(xì)胞中的不同定位預(yù)測它們的調(diào)節(jié)有實質(zhì)的差異。不象Bax，其主要在胞漿中，Bak位于健康細(xì)胞的線粒體和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的外膜上的復(fù)合體中(Wei，M.C.等人，2000見前；Zong，W.X.等人，JournalofCellBiology(細(xì)胞生物學(xué)雜志)162(2003)59-69)。盡管如此，在接收到細(xì)胞毒性信號時，Bax和Bak兩者都改變構(gòu)象，并且Bax易位至細(xì)胞器膜上，然后在此Bax和Bax形成可締合的同型寡聚體，導(dǎo)致膜通透性(Hsu，Y.T.等人，PNAS(美國科學(xué)院院報)94(1997)3668-3672；ffolter,K.G.等人，1997見前；Antonsson，B.等人，JournalofBiologicalChemistry(生物學(xué)化學(xué)雜志)276(2001)11615-11623;Nechushtan，A.等人，JournalofCellBiology(細(xì)胞生物學(xué)雜志)153(2001)1265-1276;Wei，M.C.等人,2001見前；Mikhailov，V.等人，JournalofBiologicalChemistry(生物學(xué)化學(xué)雜志)278(2003)5367-5376)。有許多Bcl-2抑制劑，它們所有都具有抑制Bcl-2蛋白家族的促生存成員的相同特性并且因此是治療癌癥的很有前途的候選物。這些Bcl-2抑制劑是，例如，奧利美生(Oblimersen)、SPC-2996、RTA-402、棉酚(Gossypol)、AT-101、甲磺酸奧巴克拉(Obatoclaxmesylate)、A_371191、A-385358、A-438744、ABT-737、AT-101、BL-11、BL_193、GX-15-003、2-甲氧基抗霉素A3(2-MethoxyantimycinA3)、HA-14-1、KF-67544、紅桔酚(Purpurogallin)、TP-TW-37、YC-137和Z-24，并且它們描述在例如，Zhai，D.等人，CellDeathandDifferentiation(細(xì)胞死亡和分化)I3(2006)1419_1421中。Smith,M.R.等人，MolecularCancerTherapeutics(分子癌癥治療學(xué))3(12)(2004)1693-1699以及Ramanarayanan，J.等人，BritishJournalofHaematology(英國血液學(xué)雜志)127(5)(2004)519-530提到了I型抗CD20抗體(利妥昔單抗)與反義Bcl-2寡核苷酸(奧利美生)的組合。發(fā)明概述本發(fā)明包括II型抗⑶20抗體在制備用于與抗Bcl-2活性劑聯(lián)合治療表達(dá)⑶20的癌癥的藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明進(jìn)一步包括II型抗⑶20抗體在制備用于與抗Bcl-2活性劑聯(lián)合治療患有5表達(dá)⑶20的癌癥的患者的藥物中的應(yīng)用。優(yōu)選地，所述抗Bcl-2活性劑是抗Bcl-2抑制活性的IC50為5yM以下的Bcl_2抑制劑。優(yōu)選地，所述II型抗⑶20抗體具有的所述II型⑶20抗體與Raji細(xì)胞(ATCC編號CCL-86)上⑶20的結(jié)合力與利妥昔單抗相比較的比值為0.30.6，更優(yōu)選為0.350.55，并且還更優(yōu)選為0.40.5。優(yōu)選地，所述II型抗⑶20抗體是人源化B-Ly1抗體。優(yōu)選地，所述II型抗⑶20抗體具有提高的抗體依賴性細(xì)胞毒性(ADCC)。優(yōu)選地，所述抗Bcl-2活性劑選自奧利美生、SPC-2996、RTA-402、棉酚、AT-101、甲磺酸奧巴克拉、A-371191、A-385358、A-438744、ABT-737、AT-101、BL-11、BL-193、GX-15-003、2-甲氧基抗霉素A3、HA-14-1、KF-67544、紅桔酚、TP-TW-37、YC-137和Z-24，更優(yōu)選地選自ABT-263和ABT-737。優(yōu)選地，表達(dá)⑶20的癌癥是B-細(xì)胞非霍奇金淋巴瘤(NHL)。發(fā)明詳述術(shù)語“抗體”包涵各種形式的抗體，其包括但不限于全抗體、人抗體、人源化抗體和基因工程抗體如單克隆抗體、嵌合抗體或重組抗體，以及這些抗體的片段，只要保留了根據(jù)本發(fā)明的特征性。如在此使用的術(shù)語“單克隆抗體”或“單克隆抗體組合物”指具有單一氨基酸組成的抗體分子的制劑。因此，術(shù)語“人單克隆抗體”指顯示單一結(jié)合特異性的抗體，其具有來自人胚系免疫球蛋白序列的可變區(qū)和恒定區(qū)，在一個實施方案中，人單克隆抗體由雜交瘤產(chǎn)生，該雜交瘤包括與永生化細(xì)胞融合的從轉(zhuǎn)基因非人動物，例如，轉(zhuǎn)基因小鼠獲得的B細(xì)胞，其具有包括人重鏈轉(zhuǎn)基因和輕鏈轉(zhuǎn)基因的基因組。優(yōu)選地，所述II型抗⑶20抗體是單克隆抗體。術(shù)語“嵌合抗體”指通常通過重組DNA技術(shù)制備的包括來自一個來源或物種的可變區(qū)，即，結(jié)合區(qū)，和來自不同來源或物種的至少一部分恒定區(qū)的單克隆抗體。特別優(yōu)選包括鼠可變區(qū)和人恒定區(qū)的嵌合抗體。這些鼠/人嵌合抗體是包括編碼鼠免疫球蛋白可變區(qū)的DNA節(jié)段和編碼人免疫球蛋白恒定區(qū)的DNA節(jié)段的免疫球蛋白基因表達(dá)的產(chǎn)物。本發(fā)明包涵的其他形式的“嵌合抗體”是其中原始抗體的類別或亞類已經(jīng)被修飾或改變的那些抗體。此類“嵌合”抗體也稱為“類別轉(zhuǎn)換抗體(class-switchedantibody)”。用于產(chǎn)生嵌合抗體的方法涉及現(xiàn)在本領(lǐng)域公知的常規(guī)重組DNA和基因轉(zhuǎn)染技術(shù)。見，例如，Morrison,S.L.等人，Proc.Natl.AcadSci.USA(美國科學(xué)院學(xué)報)81(1984)6851-6855；US5，202，238和US5，204，244。術(shù)語“人源化抗體”指其中框架或“互補決定區(qū)”(⑶R)已經(jīng)被修飾從而包括特異性與親代免疫球蛋白不同的免疫球蛋白的CDR的抗體。在優(yōu)選的實施方案中，鼠CDR移植至人抗體的框架區(qū)以制備“人源化抗體”，見，例如，Riechmann,L.等人，Nature(自然)332(1988)323-327；和Neuberger，M.S.等人，Nature(自然)314(1985)268-270。對于嵌合和雙功能抗體，特別優(yōu)選CDR對應(yīng)于那些識別上述抗原的代表序列。在此使用的術(shù)語“人抗體”意在包括具有來源于人胚系免疫球蛋白序列的可變區(qū)和恒定區(qū)的抗體。人抗體在本領(lǐng)域中是公知的(vanDijk，M.A.和vandeffinkel,J.G.，6Curr.Opin.Pharmacol.(藥理學(xué)新見)5(2001)368-374)?；诖思夹g(shù)，可產(chǎn)生針對大量靶標(biāo)的人抗體。人抗體的例子，例如，描述在Kellermann，S.A.等人，CurrOpinBiotechnol.(生物技術(shù)新見)13(2002)593-59中。在此使用的術(shù)語“重組人抗體”意在包括通過重組方式制備、表達(dá)、構(gòu)建或分離的所有人抗體，諸如從諸如NS0或CH0細(xì)胞的宿主細(xì)胞分離的抗體或從人免疫球蛋白基因轉(zhuǎn)基因的動物(例如，鼠)分離的抗體或使用轉(zhuǎn)染進(jìn)宿主細(xì)胞的重組表達(dá)載體表達(dá)的抗體。這些重組人抗體具有重排形式的來源于人胚系免疫球蛋白序列的可變區(qū)和恒定區(qū)。根據(jù)本發(fā)明的重組人抗體已經(jīng)進(jìn)行了體內(nèi)體細(xì)胞高度突變。因此，重組抗體的VH和VL區(qū)的氨基酸序列是，盡管來源于人胚系VH和VL序列和并與兩者相關(guān)，但不可以天然地存在于體內(nèi)人抗體胚系所有成分之內(nèi)的序列。在此使用的“特異性結(jié)合”或“特異性地結(jié)合于”指抗體特異性地結(jié)合于⑶20抗原。優(yōu)選地，結(jié)合親和力是10_9mol/l或更低(例如，10-10mol/l)的KD值，優(yōu)選具有10_1(lmOl/1或更低(例如，10_12mOl/l)的KD值。結(jié)合親和力采用標(biāo)準(zhǔn)的結(jié)合測定法諸如斯卡恰特作圖分析(Scatchardplotanalysis)在CD20表達(dá)細(xì)胞上測定。在此使用的術(shù)語“核酸分子”意在包括DNA分子和RNA分子。核酸分子可以是單鏈或雙鏈的，但優(yōu)選是雙鏈DNA?！昂愣▍^(qū)”不直接參與抗體與抗原的結(jié)合，但參與效應(yīng)器功能(ADCC，補體結(jié)合以及CDC)。在此使用的“可變區(qū)”(輕鏈的可變區(qū)(VL)，重鏈的可變區(qū)(VH))是指直接參與抗體與抗原結(jié)合的一對輕鏈和重鏈中的每一個?？勺兊娜溯p鏈和重鏈的結(jié)構(gòu)域具有相同的通用結(jié)構(gòu)，并且各個結(jié)構(gòu)域包括由三個“超變區(qū)”(或互補決定區(qū)，⑶R)連接的四個框架(FR)區(qū)，框架區(qū)的序列是廣泛保守的?？蚣軈^(qū)采用b-折疊構(gòu)象，并且CDR可形成連接b-折疊結(jié)構(gòu)的環(huán)。各個鏈內(nèi)的⑶R通過框架區(qū)保持其三維結(jié)構(gòu)，并且與來自其他鏈的⑶R—起形成抗原結(jié)合位點?？贵w重鏈和輕鏈CDR3區(qū)在本發(fā)明所述的抗體的結(jié)合特異性/親和力中具有特別重要的作用，并且因此提供了本發(fā)明的進(jìn)一步的目的。術(shù)語“超變區(qū)”或“抗體的抗原結(jié)合部分”當(dāng)在此使用時指抗體負(fù)責(zé)抗原結(jié)合的氨基酸殘基。超變區(qū)包括來自“互補決定區(qū)”或“CDR”的氨基酸殘基?！翱蚣軈^(qū)”或“FR”區(qū)是如在此所定義的超變區(qū)之外的那些可變區(qū)結(jié)構(gòu)域。因此，抗體的輕鏈和重鏈從N末端至C末端包括結(jié)構(gòu)域FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3和FR4。尤其是，重鏈的CDR3是對抗原結(jié)合貢獻(xiàn)最多的區(qū)°根據(jù)Kabat等人，SequencesofProteinsofImmunologicalInterest(具有免疫學(xué)重要性的蛋白序列)，第五版，PublicHealthService(公共醫(yī)療)，NationalInstitutesofHealth(國立衛(wèi)生研究院)，Bethesda,MD.(1991)的標(biāo)準(zhǔn)定義和/或來自“超變環(huán)”的那些殘基來確定⑶R和FR區(qū)。術(shù)語“⑶20”和“⑶抗原”在此互換使用，并且包括由細(xì)胞天然表達(dá)的或用⑶20基因轉(zhuǎn)染的細(xì)胞上表達(dá)的人CD20的任何變異體、亞型和物種同源物。本發(fā)明的抗體與CD20抗原的結(jié)合通過使CD20失活來介導(dǎo)表達(dá)CD20的細(xì)胞(例如，腫瘤細(xì)胞)的殺傷。表達(dá)CD20的細(xì)胞的殺傷可通過下列機(jī)制的一種或多種來發(fā)生細(xì)胞死亡/凋亡誘導(dǎo)、ADCC和⑶C。如本領(lǐng)域中公認(rèn)的，⑶20的同義詞包括B淋巴細(xì)胞抗原⑶20、B淋巴細(xì)胞表面抗原Bl、Leu-16、Bp35、BM5和LF5。根據(jù)本發(fā)明術(shù)語“抗⑶20抗體”是與⑶20抗原特異性結(jié)合的抗體。取決于抗⑶20抗體與⑶20抗原的結(jié)合特性和生物活性，根據(jù)Cragg，M.S.等人，Blood(血液)103(2004)2738-2743；和Cragg,M.S.等人，Blood(血液)101(2003)1045-1052可區(qū)分為兩種類型的抗CD20抗體(I型和II型抗CD20抗體)，見表2。表2<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>在交聯(lián)時誘導(dǎo)凋亡在不交聯(lián)條件下的強(qiáng)的細(xì)胞死亡誘導(dǎo)作用I型和II型抗⑶20抗體的一個基本特性是其結(jié)合模式。因此，I型和II型抗⑶20抗體可通過所述抗⑶20抗體的與Raji細(xì)胞(ATCC編號CCL_86)上⑶20的結(jié)合力與利妥昔單抗相比較的比值來分類。II型抗CD20抗體具有的所述抗CD20抗體的與Raji細(xì)胞(ATCC編號CCL_86)上⑶20的結(jié)合力與利妥昔單抗的比值為0.30.6，優(yōu)選0.350.55，更優(yōu)選0.40.5。此類II型抗CD20抗體的例子包括，例如，托西莫單抗(BlIgG2a)，人源化B-Lyl抗體IgGl(如W02005/044859中所公開的嵌合人源化IgGl抗體)、11B8IgGl(如W02004/035607中所公開的)和ATSOIgGl。優(yōu)選地所述II型抗⑶20抗體是與人源化B-Lyl抗體(如W02005/044859中所公開的)結(jié)合相同的表位的單克隆抗體。與II型抗體相反，I型抗⑶20抗體具有的所述抗⑶20抗體的與Raji細(xì)胞(ATCC編號CCL-86)上⑶20的結(jié)合力與利妥昔單抗的比值為0.81.2，優(yōu)選0.91.1。此類I型抗CD20抗體的例子包括例如，利妥昔單抗、1F5IgG2a(ECACC,雜交瘤；Press等人，Blood(血液)69/2(1987)584-591)、HI47IgG3(ECACC,雜交瘤)、2C6IgGl(如TO2005/103081中所公開的)、2F2IgGl(如W02004/035607和W02005/103081中所公開的)以及2H7IgGl(如W02004/056312中所公開的)?！翱笴D20抗體的與Raji細(xì)胞(ATCC編號CCL_86)上CD20的結(jié)合力與利妥昔單抗的比值”通過直接免疫熒光測定法(測定平均熒光強(qiáng)度(MFI))使用與Cy5綴合的所述抗CD20抗體和與Cy5綴合的利妥昔單抗與Raji細(xì)胞(ATCC編號CCL-86)在FACSArray(BectonDickinson)中測定，如實施例2中所述，并且如下進(jìn)行計算與Raji細(xì)胞(ATCC編號CCL-86)上CD20的結(jié)合力的比值=MFI(Cy5-抗CD20抗體)Cy5-標(biāo)記比(Cy5-利妥昔單抗)MFI(Cy5-利妥昔單抗)Cy5-標(biāo)記比(Cy5-抗CD20抗體)MFI是平均熒光強(qiáng)度。在此使用的“Cy5_標(biāo)記比例”指每分子抗體的Cy5_標(biāo)記分子的數(shù)目。典型地，所述II型抗⑶20抗體具有的所述二級抗⑶20抗體與Raji細(xì)胞(ATCC編號CCL-86)上⑶20的結(jié)合力與利妥昔單抗相比較的比值為0.30.6，更優(yōu)選為0.350.55，更優(yōu)選為0.40.5。在優(yōu)選的實施方案中，所述II型抗CD20抗體，優(yōu)選人源化B-Lyl抗體具有增加的抗體依賴性細(xì)胞毒性(ADCC)?！熬哂性黾拥目贵w依賴性細(xì)胞毒性(ADCC)的抗體”是指如在此所定義的該術(shù)語一樣，具有根據(jù)本領(lǐng)域普通技術(shù)人員已知的任何適當(dāng)?shù)姆椒y定的增加的ADCC的抗體。一種公認(rèn)的體外ADCC測定法如下1)該測定法使用已知表達(dá)被抗體的抗原結(jié)合區(qū)識別的靶抗原的靶細(xì)胞；2)該測定法使用從隨機(jī)選擇的健康供體的血液分離的人外周血單核細(xì)胞(PBMCs)作為效應(yīng)細(xì)胞；3)該測定法根據(jù)下列的試驗方案進(jìn)行i)PBMC使用標(biāo)準(zhǔn)的密度離心步驟分離，并以5X106細(xì)胞/ml懸浮在RPMI細(xì)胞培養(yǎng)基中；ii)靶細(xì)胞通過標(biāo)準(zhǔn)的組織培養(yǎng)方法生長，從指數(shù)生長期收獲，活力大于90%，在RPMI細(xì)胞培養(yǎng)基中洗滌，用100微居里51Cr標(biāo)記，用細(xì)胞培養(yǎng)基洗滌兩次，并且以105細(xì)胞/ml的密度重新懸浮在細(xì)胞培養(yǎng)基中；iii)將100微升的上述最終靶細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至96孔微量滴定板的各孔中；iv)抗體在細(xì)胞培養(yǎng)基中從4000ng/ml連續(xù)稀釋至0.04ng/ml，并將50微升所得抗體溶液加入至96孔微量滴定板中的靶細(xì)胞中，將上面全部濃度范圍內(nèi)的各個抗體濃度檢測三次；v)對于最大釋放(MR)對照，含有標(biāo)記靶細(xì)胞的板中的另外3個孔加入50微升2%(VN)非離子型去污劑(Nonidet，Sigma，St.Louis)的水溶液代替抗體溶液(上面的iv占).vi)對于自發(fā)釋放(SR)對照，含有標(biāo)記靶細(xì)胞的板中的另外3個孔加入50微升RPMI細(xì)胞培養(yǎng)基代替抗體溶液(上面iv點)；vii)然后96孔微量滴定板以50Xg離心1分鐘，并在4°C下孵育1小時；viii)將50微升PBMC懸液(上面i點)加入至各孔中以產(chǎn)生251的效應(yīng)細(xì)胞靶細(xì)胞比例，并且將平板置于培養(yǎng)箱中在5%C02氣氛中37°C下4小時；ix)從各孔收獲不含細(xì)胞的上清液，并且使用、計數(shù)器定量實驗釋放的放射性(ER)；x)根據(jù)式(ER-MR)/(MR_SR)X100對各抗體濃度計算特異性溶解的百分?jǐn)?shù)，其中ER是對該抗體濃度定量的平均放射性(見上面的ix點)，MR為對MR對照(見上面的V點)定量的平均放射性(見上面的ix點)，以及SR是對SR對照(見上面的V點)定量的平均放射性(見上面的ix點)；4)“增加的ADCC”被規(guī)定為上面檢測的抗體濃度范圍內(nèi)觀察到的特異性溶解的最大百分?jǐn)?shù)，和/或達(dá)到上面檢測的抗體濃度范圍內(nèi)觀察到的特異性溶解的最大百分?jǐn)?shù)的一半所需的抗體濃度的減少。ADCC的增加是相對于采用上面測定法測定，使用本領(lǐng)域?qū)I(yè)技術(shù)人員公知的相同的標(biāo)準(zhǔn)生產(chǎn)方法、純化方法、配制和保存方法，由相同抗體介導(dǎo)的，由相同類型宿主細(xì)胞產(chǎn)生的，但不由被改造以過度表達(dá)GnTIII的宿主細(xì)胞產(chǎn)生的ADCC。所述“增加的ADCC”可通過所述抗體的糖基化改造來獲得，如Umana，P.等人，NatureBiotechnol.(自然生物技術(shù))17(1999)176-180和US6,602，684中所述，意味著通過改造其寡糖成分來增強(qiáng)單克隆抗體的所述天然的、細(xì)胞介導(dǎo)的效應(yīng)器功能。術(shù)語“補體依賴性細(xì)胞毒性(CDC)”指由本發(fā)明所述的抗體在補體的存在下對人腫瘤靶細(xì)胞的溶解。CDC優(yōu)選地通過用本發(fā)明所述的抗CD20抗體在補體的存在下處理表達(dá)CD20細(xì)胞的制劑來測定。如果4小時后抗體在lOOnM的濃度下誘發(fā)20%或更多的腫瘤細(xì)胞的溶解(細(xì)胞死亡)，則存在CDC。該測定優(yōu)選地用51Cr或Eu標(biāo)記的腫瘤細(xì)胞并測定釋放的51Cr或Eu來進(jìn)行。對照包括腫瘤靶細(xì)胞與補體但不與抗體的孵育。通常IgGl同種型的II型抗⑶20抗體顯示特征性的⑶C特性。II型抗⑶20抗體與IgGl同種型的I型抗體相比具有降低的⑶C(如果為IgGl同種型)。優(yōu)選地II型抗⑶20抗體為IgGl同種型抗體?！袄孜魡慰埂笨贵w(參考抗體；I型抗CD20抗體的例子)是基因工程化的針對人CD20抗原的嵌合含人Yl鼠恒定區(qū)結(jié)構(gòu)域的單克隆抗體。此嵌合抗體含有Yl人恒定區(qū)結(jié)構(gòu)域，并且在于1998年4月17日授權(quán)并轉(zhuǎn)讓給IDEC制藥公司(IDECPharmaceuticalsCorporation)的US5,736,137(Andersen,K.C.等人)中被鑒定為“C2B8”的名稱。利妥昔單抗被批準(zhǔn)用于治療患有復(fù)發(fā)的或難治性低度或濾泡性⑶20陽性的B細(xì)胞非霍奇金淋巴瘤。體外作用機(jī)制研究已經(jīng)顯示利妥昔單抗顯示人補體依賴性細(xì)胞毒性(CDC)(Reff等人，Blood(血液)83(2)(1994)435-445)。另外，其在測定抗體依賴性細(xì)胞毒性(ADCC)的測定中顯示明顯的活性。術(shù)語“人源化B-Lyl抗體”指如W02005/044859和W02007/031875中公開的人源化B-Lyl抗體，該抗體從鼠單克隆抗⑶20抗體B-Lyl(鼠重鏈的可變區(qū)(VH):SEQIDNO1；鼠輕鏈的可變區(qū)(VL):SEQIDNO:2_見Poppema，S.和Visser，L.，BiotestBulletin(生物實驗通報)3(1987)131-139；)通過與來自IgGl的人恒定區(qū)結(jié)構(gòu)域的嵌合以及下述人源化作用(見W02005/044859和W02007/031875)而獲得。這些“人源化B_Lyl抗體”的詳情公開在W02005/044859和W02007/031875中。優(yōu)選地，“人源化B-Lyl抗體”具有選自SEQIDNo.3SEQIDNo.20(W02005/044859和W02007/031875的B-HH2至B-HH9和B-HL8至B-HL17)的重鏈可變區(qū)(VH)。特別優(yōu)選Seq.IDNo.3、4、7、9、11、13和15(W02005/044859和W02007/031875的B-HH2、BHH-3、B-HH6、B-HH8、B-HL8、B-HL11和B-HL13)。優(yōu)選地，“人源化B-Lyl抗體”具有SEQIDNo.20(WO2005/044859和WO2007/031875的B-KV1)的輕鏈可變區(qū)(VL)。此外，人源化B-Lyl抗體優(yōu)選是IgGl抗體。優(yōu)選地，該人源化B-Lyl抗體根據(jù)W02005/044859、W02004/065540、W02007/031875,Umana,P.等人，NatureBiotechnol.(自然生物技術(shù))17(1999)176-180和W099/154342中所述的方法在Fc區(qū)被糖基化改造(GE)。該糖基化改造的人源化B-Lyl抗體在Fc區(qū)具有改變的糖基化模式，優(yōu)選具有降低水平的巖藻糖殘基。優(yōu)選地Fc區(qū)的寡糖的至少40%或更多(在一個實施方案中為40%60%，在另一個實施方案中為至少50%，并且還在另一個實施方案中為至少70%或更多)為非巖藻糖化的。此外，F(xiàn)c區(qū)的寡糖優(yōu)選地是對切的(bisected)。寡糖成分可顯著地影響與治療性糖蛋白的功效相關(guān)的特性，包括物理穩(wěn)定性，對蛋白酶攻擊的抗性，與免疫系統(tǒng)的相互作用，藥物代謝動力學(xué)，和特異的生物活性。這些特性可不僅取決于寡糖的存在與否，還取決于寡糖的特定結(jié)構(gòu)。可對寡糖結(jié)構(gòu)和糖蛋白功能之間做一些概括。例如，某些寡糖結(jié)構(gòu)通過與特定的糖結(jié)合蛋白的相互作用而介導(dǎo)糖蛋白從血流中的快速清除，而其他一些寡糖則可被抗體結(jié)合并觸發(fā)不需要的免疫反應(yīng)。(Jenkins,N.等人，NatureBiotechnol.(自然生物技術(shù))14(1996)975-981)。哺乳動物細(xì)胞是生產(chǎn)治療性糖蛋白的優(yōu)選宿主，因為其具有以對人類應(yīng)用最相容形式的糖基化蛋白的能力。(Cumming，D.A.等人，Glycobiology(糖生物學(xué))1(1991)115-130Jenkins，N.等人，NatureBiotechnol.(自然生物技術(shù))14(1996)975-981)。細(xì)菌對蛋白的糖基化很罕見，并且類似于其他類型的常用宿主，諸如酵母、絲狀真菌、昆蟲和植物細(xì)胞，其產(chǎn)生與從血流中快速清除、不需要的免疫相互作用相關(guān)的糖基化模式，并且在一些特定情況下，降低生物活性。在哺乳動物細(xì)胞中，在近二十年中最常使用中國倉鼠卵巢(CH0)細(xì)胞。除了產(chǎn)生適當(dāng)?shù)奶腔Ｊ揭酝猓@些細(xì)胞能夠不斷地產(chǎn)生遺傳穩(wěn)定的、高產(chǎn)的克隆細(xì)胞系。它們可在簡單的生物反應(yīng)器中使用無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)至高密度，并且允許安全可靠的發(fā)育和可重現(xiàn)的生物過程。其他常用的動物細(xì)胞包括幼倉鼠腎(BHK)細(xì)胞、NS0-和SP2/0-小鼠骨髓瘤細(xì)胞。近年來，還試驗了由轉(zhuǎn)基因動物的生產(chǎn)。(Jenkins,N.等人，NatureBiotechnol.(自然生物技術(shù))14(1996)975-981)。所有抗體在重鏈恒定區(qū)中的保守部位處都含有糖結(jié)構(gòu)，各個同種型擁有不同的N-連接糖結(jié)構(gòu)陣列，其不定地影響蛋白組裝、分泌或功能性活動。(Wright，A.和Monison，S.L.,TrendsBiotech.(生物技術(shù)趨勢)15(1997)26-32)。附著的N-連接糖的結(jié)構(gòu)變化相當(dāng)大，取決于加工程度，并且可包括高甘露糖、多分支以及雙天線的復(fù)雜型寡糖。(Wright，A.和Morrison，S.L.,TrendsBiotech.(生物技術(shù)趨勢)15(1997)26-32)。通常，存在附著在特定糖基化位點處的核心寡糖結(jié)構(gòu)的不均一加工，使得單克隆抗體甚至以多種糖型存在。同樣，已經(jīng)顯示細(xì)胞系之間存在抗體糖基化主要差別，并且甚至在不同培養(yǎng)條件下生長的指定細(xì)胞系也能見到較小的差異。(Lifely,M.R.等人，Glycobiology(糖生物學(xué))5(1995)813-822)。獲得大幅度增加的效力，同時保持簡單的生產(chǎn)工藝并潛在地避免明顯的不良副作用的一種方式是如Umana，P.等人，NatureBiotechnol.(自然生物技術(shù))17(1999)176-180和US6，602，684中所述，通過改造其寡糖成分來增強(qiáng)單克隆抗體的天然、細(xì)胞介導(dǎo)的效應(yīng)器功能。IgGl型抗體，是在癌癥免疫治療中最常使用的抗體，其是在各個CH2結(jié)構(gòu)域中11Asn297處具有保守N-連接糖基化位點的糖蛋白。附著在Asn297的兩個復(fù)雜型雙天線寡糖埋藏在CH2結(jié)構(gòu)域之間，形成與多肽主鏈的廣泛接觸，并且其存在對于抗體介導(dǎo)效應(yīng)器功能諸如抗體依賴性細(xì)胞毒性(ADCC)是很重要的(Lifely，M.R.等人，Glycobiology(糖生物學(xué))5(1995)813-822Jefferis,R.等人，Immunol.Rev.(免疫學(xué)綜述)163(1998)59-76；Wright,A.和Morrison,S.L.，TrendsBiotechnol.(生物技術(shù)趨勢)15(1997)26-32)。以前顯示0(1，4)-N_乙酰氨基葡萄糖轉(zhuǎn)移酶Ill(“GnTII17y”)(其是一種催化對切寡糖形成的糖基轉(zhuǎn)移酶)在中國倉鼠卵巢(CH0)細(xì)胞中的過度表達(dá)，顯著地增加了由工程化CH0細(xì)胞產(chǎn)生的抗神經(jīng)母細(xì)胞瘤嵌合單克隆抗體(chCE7)的體外ADCC活性。(見Umana，P.等人，NatureBiotechnol.(自然生物技術(shù))17(1999)176-180；和WO99/154342，其全部內(nèi)容以引用方式合并于此)?？贵wchCE7屬于一大類未綴合的單克隆抗體，該類抗體具有很高的腫瘤親和力和特異性，但當(dāng)在缺少GnTIII酶的標(biāo)準(zhǔn)工業(yè)細(xì)胞系中生產(chǎn)時效力太低而不能用于臨床(Umana，P.等人，NatureBiotechnol.(自然生物技術(shù))17(1999)176-180)。該研究首次顯示通過改造抗體生產(chǎn)細(xì)胞以表達(dá)GnTIII將獲得ADCC活性的大幅增加，還導(dǎo)致恒定區(qū)(Fc)相關(guān)的對切寡糖，包括對切的非巖藻糖化寡糖的比例高于天然抗體中存在的水平的增加。在此所使用的術(shù)語“Bcl-2”指Bcl-2蛋白(SwissProtID編號P10415)，其是Bcl-2蛋白家族成員(Cory，S.和Adams，J.M.，NatureReviewsCancer(自然癌癥綜述)2(2002)647-656；Adams,GenesundDevelopment(基因與發(fā)育)17(2003)2481-2495；Danial，N.N.，和Korsmeyer,S.J.，Cell(細(xì)胞)116(2004)205-219；Petros,A.M.，BiochimBiophysActa(生物化學(xué)和生物物理學(xué)學(xué)報)1644(2004)83-94)。術(shù)語“抗Bcl-2活性劑”包括“抗Bcl-2義核苷酸”和“Bcl_2抑制劑”?！翱笲cl_2反義核苷酸”下調(diào)Bcl-2mRNA水平并減少Bcl-2蛋白表達(dá)。此類抗Bcl-2反義核苷酸的例子包括奧利美生和SPC-2996。在此使用的“Bcl-2抑制劑”指通過抑制Bcl_2的磷酸化作用來抑制Bcl-2蛋白相互作用活性的藥劑(“Bcl-2蛋白磷酸化抑制劑”)，諸如例如，RTA-402，或通過結(jié)合Bcl-2蛋白并因此破壞Bad/Bcl-2復(fù)合體來抑制Bcl_2蛋白相互作用活性的藥劑(這些稱為“Bcl-2蛋白結(jié)合抑制劑”)。優(yōu)選地，所述Bcl-2抑制劑是Bcl-2蛋白結(jié)合抑制劑。經(jīng)此類Bcl-2蛋白結(jié)合抑制劑的直接結(jié)合產(chǎn)生的Bcl-2抑制活性可經(jīng)競爭結(jié)合測定法來測定。因此，抑制Bcl-2蛋白活性的IC50可以在實施例3所述的均相時間分辨熒光(HTRF)測定法中進(jìn)行測定。優(yōu)選地，抗Bcl-2抑制活性的IC50為5yM或更小，更優(yōu)選1PM或更小。此類Bcl-2蛋白結(jié)合抑制劑包括諸如棉酚，AT-101、甲磺酸奧巴克拉、A-371191、A-385358、A-438744、ABT-737、ABT-263、AT-101、BL-11、BL-193、GX-15_003、2-甲氧基抗霉素△3、擬-14-1、狀-67544、紅桔酚、了卩-1￥-37、丫(-137和Z-24的化合物，優(yōu)選ABT-263和ABT-737。奧利美生是抑制Bcl-2表達(dá)的一種反義寡核苷酸。該反義寡核苷酸的序列及其制備描述在例如，W095/08350、W01999/051259、W02002/017852、W02004/056971和US5，734，033中。在此使用的奧利美生(或其他同義詞Genansense、G-3139、奧利美生鈉(Oblimersensodium))是指18聚(18-mer)反義硫代磷酸寡聚脫氧核苷酸的十七鈉鹽，其序列為5‘-TCTCCCAGCGTGCGCCAT-3‘；來自人BCL2cDNA的片段32_49nt(起始密碼子區(qū))的反義寡核苷酸的十七鈉鹽；d(P-硫代)(T-C-T-C-C-C-A-G-C-G-T-G-C-G-C-C-A-T)DNA十七鈉鹽；P-硫代胸苷基-(3‘-5')-2'-脫氧-P-硫代胞苷酰_(3‘-5')-P-硫代胸苷基_(3‘-5')-2'-脫氧-P-硫代胞苷酰_(3‘-5')-2'-脫氧-P-硫代胞苷酰_(3‘-5')-2'-脫氧-P-硫代胞苷酰_(3‘-5')-2'-脫氧-P-硫代腺苷酰_(3‘-5')-2'-脫氧-P-硫代鳥苷酰_(3‘-5')-2'-脫氧-P-硫代胞苷酰_(3‘-5‘)-2‘-脫氧-P-硫代鳥苷酰_(3‘-5‘)-P_硫代胸苷基_(3'-5')-2'-脫氧-P-硫代鳥苷酰_(3‘-5')-2'-脫氧-P-硫代胞苷酰_(3'-5')-2'-脫氧-P-硫代鳥苷酰_(3‘-5')-2'-脫氧-P-硫代胞苷酰_(3'-5')-2'-脫氧-P-硫代胞苷酰_(3‘-5')-2'-脫氧-P-硫代腺苷酰_(3'-5')_胸腺嘧啶脫氧核苷十七鈉鹽。SPC-2996，一種反義寡核苷酸，其是16聚反義硫代磷酸寡聚脫氧核苷酸，其序列為5'-CTCCCAACGTGCGCCA-3'，并且其中核苷酸1、2、14和15是鎖定核酸(LNA)核苷酸，具有提高的核酸酶消化抗性。此反義LNA寡核苷酸靶向人Bcl-2的核苷酸33-48(編碼序列)。在此使用的RTA-402指⑶DO-Me，即其是C28-三萜類化合物的甲基酯，所述C28-三萜類化合物為齊墩果烷三萜類2-氰基-3，12-二氧代齊墩果(dioxoolearO-l，9-二烯-28-酸(CDDO)(見，例如Honda，Τ.，RoundsBVBore,L.，等人，JMedChem.(藥物化學(xué)雜志)43(2000)4233-4246)，其阻斷Bcl_2蛋白磷酸化(Konopleva，Μ.，等人，Blood(血液)99(2002)326-35)。在此使用的ABT-737指N-[4-[4-(4'-氯聯(lián)苯-2-基甲基)哌嗪基]苯甲?；鵠-3-[3-(二甲基氨基)-1(R)-(苯基硫烷基甲基)丙基氨基]-4-硝基苯磺酰胺；4-[4-(4'-氯聯(lián)苯-2-基甲基)哌嗪-1-基]-N-[3-[3-(二甲基氨基)-I(R)-(苯基硫烷基甲基)丙基氨基]-4-硝基苯基磺?；鵠苯甲酰胺，一種具有式I的Bcl-2抑制劑，其描述在WO2006/099667或Corey，S.等人，CancerCell(癌細(xì)胞)8(2005)5-6中，<formula>formulaseeoriginaldocumentpage13</formula>式I。在此使用的ABT-263指具有式II的Bcl_2抑制劑，其描述在US2007/027，135中，<formula>formulaseeoriginaldocumentpage14</formula>式II。在此使用的A-371191指具有式III的Bcl_2抑制劑，<formula>formulaseeoriginaldocumentpage14</formula>式III。在此使用的A-385358指[(R)_4_(3_二甲基氨基苯基硫烷基甲基-丙基氨基)-N-[4-(4，4-二甲基-哌啶-1-基)-苯甲?；鵠-3-硝基苯-磺酰胺(如，例如，公開在Shoemaker,A.R.等人，CancerResearch(癌癥研究)66(2006)8731-8739中)，一種具有式IV的Bcl-2抑制劑，<formula>formulaseeoriginaldocumentpage14</formula>式IV。在此使用的棉酚指(+)_棉酚或(-)_棉酚的外消旋混合物(一種具有式V的Bcl-2抑制劑)，或純的(+)_棉酚或(-)_棉酚，優(yōu)選地棉酚指純(-)_棉酚，<formula>formulaseeoriginaldocumentpage15</formula>式V。在此使用的AT-IOl指AscentaTherapeuticsAT-101的臨床先導(dǎo)化合物，一種Bcl-2抑制劑和R(-)_棉酚的衍生物。在此使用的甲磺酸奧巴克拉(或其他同義詞GX-015-070；或GX15-070)指2-[2-(3，5-二甲基-IH-吡咯-2-基甲叉)-3-甲氧基-2H-吡咯-5-基]-IH-吲哚甲磺酸鹽，一種Bcl-2抑制劑，其描述在，例如，W02004/106328、WO2006/089397和Walensky，L.D.，CellDeathandDifferentiation(細(xì)胞死亡和分化)，13(2006)1339-1350中。在此使用的TW-37指具有式VI的Bcl_2抑制劑，<formula>formulaseeoriginaldocumentpage15</formula>式VI。在此使用的BL-193指具有式VII的Bcl_2抑制劑，<formula>formulaseeoriginaldocumentpage15</formula>式VII。在此使用的NSC-719664指2-甲氧基-抗霉素A3，一種由抗霉素A3衍生的Bcl_2抑制劑。YC-137描述在例如，Walensky，L.D.，CellDeathandDifferentiation(細(xì)胞死亡和分化)13(2006)1339-1350中。紅桔酚描述在例如，ffalensky,L.D.，CellDeathandDifferentiation(細(xì)胞死亡和分化)13(2006)1339-1350中。HA-14-1描述在例如，ffalensky,L.D.，CellDeathandDifferentiation(細(xì)胞死亡和分化)13(2006)1339-1350中。在此使用的Z-24指3Ζ-3-[(1Η-吡咯_2_基)_亞甲基]_1-(1_哌啶基甲基)_1，3-2H-吲哚-2-酮，一種具有式VIII的Bcl-2抑制劑，<formula>formulaseeoriginaldocumentpage16</formula>式VIII。優(yōu)選地，抗Bcl-2活性劑選自奧利美生，SPC-2996、RTA-402、棉酚、AT-IOl、甲磺酸奧巴克拉、A-371191、A-385358、A-438744、ABT-737、AT-IOUBL-IUBL-193、GX-15-003、2-甲氧基抗霉素43、擬-14-1、狀-67544、紅桔酚、1-11-37、丫(-137和Z-24。優(yōu)選地，抗Bcl-2活性劑是Bcl-2蛋白結(jié)合抑制劑，其抗Bcl-2抑制活性的IC50為5μM或更少。此Bcl-2蛋白結(jié)合抑制劑優(yōu)選地選自棉酚、AT-IOl、甲磺酸奧巴克拉、ABT-263和ABT-737，更優(yōu)選地選自ABT-263或ABT-737。術(shù)語“CD20抗原的表達(dá)”意指CD20抗原在分別來自腫瘤或癌癥，優(yōu)選地非實體腫瘤的細(xì)胞，優(yōu)選地T細(xì)胞或B細(xì)胞、更優(yōu)選地B細(xì)胞的細(xì)胞表面上的顯著表達(dá)水平。患有“表達(dá)CD20的癌癥”的患者可通過本領(lǐng)域中已知的標(biāo)準(zhǔn)測定法來確定。例如，使用免疫組織化學(xué)(IHC)檢測、FACS或經(jīng)相應(yīng)mRNA的基于PCR的檢測來測定⑶20抗原表達(dá)。在此使用的術(shù)語“表達(dá)⑶20的癌癥”指其中癌細(xì)胞顯示表達(dá)⑶20抗原的所有癌癥。這些表達(dá)⑶20的癌癥可以是，例如，淋巴瘤(lymphomas)、淋巴細(xì)胞性白血病(lymphocyticleukemias)、肺癌(Iungcancer)、非小細(xì)胞肺(NSCL)癌(nonsmallcelllung(NSCL)cancer)、支氣管肺泡細(xì)胞肺癌(bronchioloalviolarcelllungcancer)、骨癌(bonecancer)、月夷■■(pancreaticcancer)、&月夫·(skincancer)、頭部或頸部癌癥(canceroftheheadorneck)、皮膚或眼內(nèi)黑色素瘤(cutaneousorintraocularmelanoma)、子宮癌(uterinecancer)、卵巢癌(ovariancancer)、直腸癌(rectalcancer)、月工區(qū)癌癥(canceroftheanalregion)、胃癌(stomachcancer)、胃癌(gastriccancer)、結(jié)腸癌(coloncancer)、季匕腺癌(breastcancer)、子宮癌(uterinecancer)、輸卵管癌(carcinomaofthefallopiantubes)、子宮內(nèi)膜癌(carcinomaoftheendometrium)、宮頸癌(carcinomaofthecervix)、陰道癌(carcinomaofthevagina)、夕卜陰癌(carcinomaofthevulva)、霍奇金病(Hodgkin'sDisease)、食管癌(canceroftheesophagus)、小腸癌(cancerofthesmallintestine)、內(nèi)分泌系統(tǒng)癌癥(canceroftheendocrinesystem)、甲狀腺癌(cancerofthethyroidgland)、甲狀豸—(canceroftheparathyroidgland)、(canceroftheadrenalgland)Λ且只肉罾(sarcomaofsofttissue)Λ^Μ(canceroftheurethra)Λ(cancerofthepenis)、前列腺癌(prostatecancer)、膀胱癌(cancerofthebladder)、腎癌或輸尿管癌(cancerofthekidneyorureter)、腎細(xì)胞癌(renalcellcarcinoma)、腎盂癌(carcinomaoftherenalpelvis)、間皮瘤(mesothelioma)、月干細(xì)胞癌(hepatocellularcancer)、膽囊癌(biliarycancer)、中樞神經(jīng)系統(tǒng)月中瘤(neoplasmsofthecentralnervoussystem(CNS))、脊軸月中瘤(spinalaxistumors)、腦干神經(jīng)膠質(zhì)瘤(brainstemglioma)、多形性成膠質(zhì)細(xì)胞瘤(glioblastomamultiforme)、星形細(xì)胞瘤(astrocytomas)、神經(jīng)鞘瘤(schwanomas)、室管膜瘤(印endymonas)、髓母細(xì)胞瘤(medulloblastomas)、腦膜瘤(meningiomas)、鱗狀細(xì)胞癌(squamouscellcarcinomas)、垂體腺瘤(pituitaryadenoma)，包括上述癌癥的任意一種的難治性癌癥，和上述癌癥的一種或多種的組合。優(yōu)選地，在此使用的表達(dá)⑶20的癌癥指淋巴瘤(優(yōu)選B細(xì)胞非霍奇金淋巴瘤(B-CellNon-Hodgkin’slymphomas)(NHL))和淋巴細(xì)胞性白血病。這些淋巴瘤和淋巴細(xì)胞性白血病包括，例如，a)濾泡性淋巴瘤(follicularlymphomashb)小而未裂細(xì)胞的淋巴瘤(SmallNon-CleavedCellLymphomas)/伯基特淋巴瘤(Burkitt‘slymphoma)(包括地方性伯基特淋巴瘤(endemicBurkitt'slymphoma))、散發(fā)性伯基特淋巴瘤(sporadicBurkitt'slymphoma)和非伯基特淋巴瘤(Non-Burkitt'slymphoma)，c)邊緣區(qū)淋巴瘤(marginalzonelymphomas)(包括結(jié)夕卜邊緣區(qū)B細(xì)胞淋巴瘤(extranodalmarginalzoneBcelllymphoma)(粘膜相關(guān)淋巴組織淋巴瘤(Mucosa-associatedlymphatictissuelymphomas)，MALT)、結(jié)性邊緣區(qū)B細(xì)胞淋巴瘤(nodalmarginalzoneBcelllymphoma)和脾邊緣區(qū)淋巴瘤(splenicmarginalzonelymphoma),d)外套細(xì)胞淋巴瘤(Mantlecelllymphoma)(MCL)，e)大細(xì)胞淋巴瘤(LargeCellLymphoma)(包括B細(xì)胞彌散性大細(xì)胞淋巴瘤(B-celldiffuselargecelllymphoma)(DLCL)、彌散性混合細(xì)胞淋巴瘤(DiffuseMixedCellLymphoma)、免疫母細(xì)胞性淋巴瘤(ImmunoblasticLymphoma)、原發(fā)性縱隔B細(xì)胞淋巴瘤(PrimaryMediastinalB-CellLymphoma)、血管中心性淋巴瘤-肺B細(xì)胞淋巴瘤(AngiocentricLymphoma-PulmonaryB-CellLymphoma),f)毛細(xì)胞性白血病(hairycellleukemia)，g)淋巴細(xì)胞性白血病、瓦爾登斯特倫巨球蛋白血癥(Waldenstrom’smacroglobulinemia)>h)ilE^fflIfitiθifil(acutelymphocyticleukemia)(ALL)>f#性淋巴細(xì)胞性白血病(chroniclymphocyticleukemia)(CLL)/小淋巴細(xì)胞性淋巴瘤(smalllymphocyticlymphoma)(SLL)、B細(xì)胞型幼淋巴細(xì)胞性白血病(B-cellprolymphocyticleukemia),i)菜細(xì)胞贅生物(plasmacellneoplasms)、菜細(xì)胞骨髓瘤(plasmacellmyeloma)、多發(fā)性骨髓瘤(multiplemyeloma)、漿細(xì)胞瘤(plasmacytoma)，j)霍奇金病(Hodgkin，sdisease)。更優(yōu)選地，表達(dá)⑶20的癌癥是B細(xì)胞非霍奇金淋巴瘤(NHL)。特別地，表達(dá)CD20的癌癥是外套細(xì)胞淋巴瘤(MCL)、急性淋巴細(xì)胞性白血病(ALL)、慢性淋巴細(xì)胞性白血病(CLL)、B細(xì)胞彌散性大細(xì)胞淋巴瘤(DLCL)、伯基特淋巴瘤、毛細(xì)胞性白血病、濾泡性淋巴瘤、多發(fā)性骨髓瘤、邊緣區(qū)淋巴瘤、移植后淋巴增生性疾病(posttransplantlymphoproliferativedisorder)(PTLD)、HIV相關(guān)淋巴瘤(HIVassociatedlymphoma)、瓦爾登斯特倫巨球蛋白血癥、或原發(fā)性中樞神經(jīng)系統(tǒng)淋巴瘤(primaryCNSlymphoma)0在此使用的術(shù)語“治療”，除非另外指明，意思是逆轉(zhuǎn)、減輕、抑制患者的腫瘤生長、腫瘤轉(zhuǎn)移，或其他致癌或腫瘤細(xì)胞的進(jìn)展，或，部分地或完全地阻止患者的腫瘤生長、腫瘤轉(zhuǎn)移，或其他致癌或腫瘤細(xì)胞。在此使用的術(shù)語“治療”，除非另外指明，還指治療的行動。術(shù)語“治療的方法”或其等效形式，當(dāng)應(yīng)用于，例如，癌癥時，指被設(shè)計成減少或消除患者的癌細(xì)胞的數(shù)目，或減輕癌癥的癥狀的操作步驟或過程。癌癥或另一種增生性疾病的“治療方法”不一定是指癌細(xì)胞或其他病癥實際上被消除，細(xì)胞的數(shù)目或病癥實質(zhì)上被減少，或癌癥或其他病癥的癥狀實際上被減輕。經(jīng)常進(jìn)行治療癌癥的方法，即使成功的可能性很低，但考慮到患者的醫(yī)學(xué)史和估計的預(yù)期生存期，該治療方法仍然被認(rèn)為引起了總體有益的行為過程。術(shù)語“共同施用”或“共施用”指所述II型抗CD20抗體和所述Bcl-2抑制劑作為一個單一制劑或作為兩個獨立制劑的施用。共同施用可以是同時的或以任何順序相繼的，其中優(yōu)選在兩種(或所有)活性劑同時發(fā)揮其生物活性時持續(xù)一定的時間段。所述II型抗⑶20抗體和所述Bcl-2抑制劑同時或相繼地共施用(例如，通過連續(xù)輸注經(jīng)靜脈內(nèi)(i.v.)(對于抗體輸注一次，最后對Bcl-2抑制劑輸注一次；或Bcl-2抑制劑口服給藥))。當(dāng)兩種治療劑相繼地共施用時，用藥量在同一天以兩次獨立的給藥來施用，或一種藥劑在第1天施用，第二種在第2第7天，優(yōu)選在第2第4天共施用。因此，術(shù)語“相繼地”是指在第一抗體的用藥后7天內(nèi)，優(yōu)選在第一抗體的用藥后4天內(nèi)；并且術(shù)語“同時地”是指在同一時刻。就II型CD20抗體和Bcl-2抑制劑的維持劑量而言，術(shù)語“共同施用”是指如果治療周期對兩種藥物都適合，維持劑量可例如，每周一次，同時地共施用?；駼cl-2抑制齊U，例如，每第1第3天施用一次，II型抗⑶20抗體每周施用一次。不言而喻，抗體以“治療有效量”(或簡單地說“有效量”)施用于患者，該治療有效量是將引起被研究者、獸醫(yī)、醫(yī)學(xué)博士或臨床醫(yī)生所探尋的組織、系統(tǒng)、動物或人的生物或醫(yī)療反應(yīng)的各化合物或組合的量。所述II型抗CD20抗體和所述Bcl-2抑制劑共同施用的量和共同施用的時間將取決于被治療的患者的類型(人種、性別、年齡、體重等)和狀況以及被治療的疾病或病癥的嚴(yán)重性。所述II型抗⑶20抗體和所述Bcl-2抑制劑被適當(dāng)?shù)匾淮位蚪?jīng)一系列治療共施用于患者。根據(jù)疾病的類型和嚴(yán)重性，約lyg/kg50mg/kg(例如，0.l-20mg/kg)的所述II型抗CD20抗體和lmg/kg200mg/kg(例如，10-150mg/kg)的所述Bcl_2抑制劑是用于將兩種藥物共同施用給患者的初次候選用藥量。如果施用為靜脈內(nèi)給藥，對于所述II型抗CD20抗體或所述Bcl-2抑制劑的初次輸注時間可以比隨后的輸注時間長，例如，對于初次輸注約90分鐘，對于隨后的輸注約30分鐘(如果良好地耐受初次輸注)。所述II型抗CD20抗體的優(yōu)選用藥量在約0.05mg/kg約30mg/kg的范圍內(nèi)。因此，約0.5mg/kg、2.0mg/kg、4.Omg/kg、10mg/kg或30mg/kg(或其任意組合)的一次或多次劑量可共施用于患者。所述Bcl-2抑制劑的優(yōu)選用藥量在20mg/kg約150mg/kg范圍之內(nèi)。根據(jù)患者的類型(人種、性別、年齡、體重等)和狀況以及抗⑶20抗體和Bcl-2抑制劑的類型，所述抗CD20抗體的用藥量和施用日程可不同于Bcl-2抑制劑的用藥量。例如，所述抗CD20抗體可例如，每1-3周施用一次，并且所述Bcl-2抑制劑可每天或每2_7天施用一次。也可施用較高的初次負(fù)荷劑量，緊接著一次或多次較低劑量。在一個優(yōu)選的實施方案中，藥物用于預(yù)防或減少患有表達(dá)⑶20的癌癥的患者的轉(zhuǎn)移或進(jìn)一步播散。通過測定生存期、無進(jìn)展生存期、反應(yīng)率或反應(yīng)持續(xù)時間，該藥物有效用于增加該患者的生存期，增加該患者無進(jìn)展生存期，增加反應(yīng)持續(xù)時間，引起被治療患者統(tǒng)計學(xué)顯著的和臨床意義的改善。在優(yōu)選的實施方案中，藥物用于增加一組患者中的反應(yīng)率。在本發(fā)明的上下文中，在II型抗⑶20抗體和Bcl-2抑制劑聯(lián)合治療表達(dá)⑶20的癌癥中，可使用附加的其他細(xì)胞毒性劑、化學(xué)治療劑或抗癌劑，或增強(qiáng)這些藥劑的效應(yīng)的化合物(例如，細(xì)胞因子)。這些分子適當(dāng)?shù)匾杂行У赜糜陬A(yù)期目的的量聯(lián)合存在。優(yōu)選地，II型抗CD20抗體和Bcl-2抑制劑聯(lián)合治療不使用這些附加的細(xì)胞毒性劑、化學(xué)治療劑或抗癌劑，或增強(qiáng)這些藥劑的效應(yīng)的化合物。這些藥劑包括，例如烷化劑或具有烷化作用的藥劑，諸如環(huán)磷酰胺(cyclophosphamide)(CTX；例如，Cytoxan)、苯丁酸氣芥(chlorambucil)(CHL；例如，leukeran)、順鉬(cisplatin)(CisP；例如，川鉬注射劑(platinol))、白消安(busulfan)(例如，馬利蘭(myleran))，美法侖(melphalan)、卡莫司汀(carmustine)(BCNU)、鏈脲霉素(sti^ptozotocin)、曲他胺((triethylenemelamine(TEM)、絲裂霉素C(CmitomycinC)等；抗代謝物，諸如甲氨蝶呤(methotrexate)(MTX)、依托泊苷(etoposide)(VP16；例如，凡必士(vepesid))、6_疏曙吟(6—mercaptopurine)(6MP)、6-硫鳥嘌呤(6-thiocguanine)(6TG)、阿糖胞苷(cytarabine)(Ara-C)、5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil)(5-FU)、卡培他濱(capecitabine)(例如，適羅達(dá)(Xeloda))、達(dá)卡巴嗪(dacarbazine)(DTIC)等；抗生素，諸如放線菌素D(actinomycinD)、多柔比星(doxorubicin)(DXR;例如，阿霄素(adriamycin))、柔紅霄素(daunorubicin)(道諾霉素(daunomycin))、博來霉素(bleomycin)、光輝霉素(mithramycin)等；生物堿類，諸如，長春生物堿諸如長春新堿(vincristine)(VCR)、長春堿(vinblastine)等；和其他抗腫瘤劑，諸如紫杉醇(paclitaxel)(例如，泰素(taxol))和紫杉醇衍生物、細(xì)胞生長抑制劑、糖皮質(zhì)激素類諸如地塞米松(dexamethasone)(DEX；例如decadron)以及皮質(zhì)類固醇諸如潑尼松(prednisone)、核苷酶抑制劑諸如羥基脲(hydroxyurea)、氨基酸消耗酶類(aminoaciddepletingenzyme)諸如天冬酉先胺酶(asparaginase)、亞葉酸(leucovorin)和其他葉酸衍生物和類似的多種抗腫瘤劑。下列的藥劑也可用作附加藥劑arnifostine(例如，ethyol)、放線菌素D(dactinomycin)、氮芥(mechlorethamine)(氮芥(nitrogenmustard))、鏈佐星(streptozocin)、環(huán)磷酉先胺、洛莫司汀(Iomustine)(CCNU)、多柔比星脂質(zhì)體(doxorubicinlipo)(例如，doxil)、吉西他濱(gemcitabine)(例如，健擇(gemzar))、柔紅霉素脂質(zhì)體(daunorubicinlipo)(例如，枸櫞算柔紅霉素脂質(zhì)體(daunoxome))、丙卡巴胼(procarbazine)、絲裂霉素(mitomycin)、多西紫杉醇(docetaxel)(例如，泰索帝(taxotere))、阿地白介素(aldesleukin)、+白(carboplatin)、胃夕少禾Ij白(oxaliplatin)、克立屈賓(cladribine)>喜樹堿(camptothecin)、CPT11(伊立替康)(irinotecan)、10-羥基-7-乙基-喜樹堿(10-hydroxy7-ethyl-camptothecin)(SN38)、氟尿苷(floxuridine)、氟達(dá)拉濱(fludarabine)、異環(huán)磷酰胺(ifosfamide)、伊達(dá)比星(idarubicin)、美司鈉(mesna)、β干擾素(interferonbeta)>α干擾素(interferonalpha)、米托惠酉昆(mitoxantrone)、托泊替康(topotecan)、亮丙立德(Ieuprolide)、甲地孕酮(megestrol)、美法侖(melphalan)、疏口票呤(mercaptopurine)、普卡霉素(plicamycin)、米托坦(mitotane)、培門冬酶(pegaspargase)、噴司他丁(pentostatin)、哌泊溴燒(pipobroman)、普卡霉素(plicamycin)、他莫昔芬(tamoxifen)、替尼泊昔(teniposide)、辜內(nèi)酉旨(testolactone)、硫鳥嘌呤(thioguanine)、塞替哌(thiot印a)、烏拉莫司汀(uracilmustard)、長春瑞濱(vinorelbine)、苯丁酸氮芥(chlorambucil)。優(yōu)選地II型抗CD20抗體和Bcl_2抑制劑的聯(lián)合治療不使用這些附加藥劑。在化療方案中上述的細(xì)胞毒性劑和抗癌劑以及抗增生靶特異性抗癌藥物樣蛋白激酶抑制劑的應(yīng)用在癌癥治療領(lǐng)域中通常是被充分表征的，并且在此其應(yīng)用同樣要基于監(jiān)測耐受性和療效、并且控制給藥途徑和用藥量的考慮，做一些調(diào)整。例如，細(xì)胞毒性劑的實際用藥量可根據(jù)通過組織培養(yǎng)方法測定的患者的培養(yǎng)細(xì)胞反應(yīng)而發(fā)生變化。一般來說，與缺少附加的其他藥劑時的用量相比，用藥量會減少。有效的細(xì)胞毒性劑的典型用藥量可以為供應(yīng)商所推薦的范圍，并且在由體外反應(yīng)或動物模型中的反應(yīng)來表示時，可以減少至多一個數(shù)量級的濃度或用量。因此，實際用藥量將取決于醫(yī)生的判斷，患者的情況，以及基于原代培養(yǎng)的惡性細(xì)胞或組織培養(yǎng)的組織樣品的體外反應(yīng)性、或在適當(dāng)?shù)膭游锬Ｐ椭杏^察到的反應(yīng)而判斷的治療方法的有效性。在本發(fā)明的上下文中，除了II型抗⑶20抗體和Bcl-2抑制劑聯(lián)合治療表達(dá)⑶20的癌癥以外可進(jìn)行有效量的電離輻射和/或可使用放射性藥物。輻射源可以在被治療的患者的外部或內(nèi)部。當(dāng)輻射源在患者的外部時，治療被稱為外光束放射療法(externalbeamradiationtherapy)(EBRT)。當(dāng)輻射源在患者的內(nèi)部時，則治療被稱為近程放射治療(BT)。用于本發(fā)明的情形中的放射性原子可選自包括但不限于鐳、銫-137、銥-192、镅-241、金-198、鈷-57、銅-67、锝-99、碘-123、碘-131和銦-111的組。有可能使用這些放射性同位素來標(biāo)記抗體。優(yōu)選II型抗CD20抗體和Bcl-2抑制劑的聯(lián)合治療不使用這些電離輻射。放射治療是用于控制不能切除或不能手術(shù)的腫瘤和/或腫瘤轉(zhuǎn)移的一種標(biāo)準(zhǔn)治療方法。當(dāng)放射治療與化療組合時已經(jīng)看到有改善的結(jié)果。放射治療基于下面的原理，即，遞送至靶區(qū)域的高劑量輻射將導(dǎo)致腫瘤和正常組織兩者中的繁殖細(xì)胞的死亡。放射給藥方案通常規(guī)定輻射吸收劑量(Gy)、時間和分級，并且必須由腫瘤學(xué)專家來小心地確定。患者接受的輻射量將取決于多種考慮事項，但兩個最重要的事項是腫瘤的位置與機(jī)體的其他重要結(jié)構(gòu)或器官的關(guān)系，以及腫瘤已經(jīng)擴(kuò)散的程度。經(jīng)受放射治療的患者的典型療程為在16周的治療日程中，施用于患者的總劑量為1080Gy，每天一次約1.82.OGy級分，每周5天。在本發(fā)明的優(yōu)選實施方案中，當(dāng)人類患者中的腫瘤采用本發(fā)明的聯(lián)合治療和放射來治療時有協(xié)同作用。換句話說，當(dāng)與放射、任選地與附加的化療劑或抗癌劑聯(lián)合使用時，通過包括本發(fā)明的組合的藥劑對腫瘤生長的抑制作用得以增強(qiáng)。輔助放射治療的參數(shù)，例如，見W099/60023。II型抗CD20抗體根據(jù)已知方法，通過靜脈推注給藥或在一段時間內(nèi)連續(xù)輸注，通過肌內(nèi)、腹膜內(nèi)、腦脊液內(nèi)、皮下、關(guān)節(jié)內(nèi)、滑膜內(nèi)或鞘內(nèi)途徑而施用于患者。優(yōu)選抗體的靜脈內(nèi)或皮下給藥。Bcl-2抑制劑根據(jù)已知方法，例如，通過靜脈推注給藥或在一段時間內(nèi)連續(xù)輸注，通過肌內(nèi)、腹膜內(nèi)、腦脊液內(nèi)、皮下、關(guān)節(jié)內(nèi)、滑膜內(nèi)、鞘內(nèi)或經(jīng)口途徑而施用于患者。優(yōu)選Bcl-2抑制劑的靜脈內(nèi)、皮下或口服給藥。本發(fā)明進(jìn)一步包括一種試劑盒，其包括用于聯(lián)合治療患有表達(dá)CD20的癌癥的患者的II型抗CD20抗體和抗Bcl-2活性劑。在一個優(yōu)選的實施方案中，該試劑盒容器可進(jìn)一步包括藥用載體。該試劑盒可進(jìn)一步包括無菌稀釋劑，其優(yōu)選地保存在獨立的附加容器中。該試劑盒可進(jìn)一步包括包裝插頁，該插頁包括指導(dǎo)使用該聯(lián)合治療作為表達(dá)CD20的癌癥疾病、優(yōu)選B細(xì)胞非霍奇金淋巴瘤(NHL)的治療方法的印刷說明書。術(shù)語“包裝插頁”指習(xí)慣上包括在治療產(chǎn)品的市售包裝中的說明書，其可包括與關(guān)于這些治療產(chǎn)品的應(yīng)用的適應(yīng)證、用法、用藥量、給藥、禁忌癥和/或警告有關(guān)的信息。在優(yōu)選的實施方案中，產(chǎn)品容器的物品可進(jìn)一步包括藥用載體。產(chǎn)品的物品可進(jìn)一步包括無菌稀釋劑，其優(yōu)選地保存在單獨的附加容器中。在此所使用的“藥用載體”意在包括與藥物施用相配伍的任何和所有物質(zhì)，包括溶劑、分散介質(zhì)、包衣、抗菌劑、抗真菌劑、等滲劑和吸收延遲劑，以及與藥物施用相配伍的其他物質(zhì)和化合物。除非任何常規(guī)的介質(zhì)或藥劑與活性化合物不相容，則其被考慮用于本發(fā)明的組合物中。補充的活性化合物也可以合并入該組合物中。藥物組合物可通過將本發(fā)明所述的II型抗⑶20抗體和/或抗Bcl-2活性劑與藥用無機(jī)或有機(jī)載體加工而獲得藥物組合物。可使用，例如，乳糖、玉米淀粉或其衍生物、滑石、硬脂酸或其鹽類等作為用于片劑、包衣片劑、糖衣丸(dragSes)和硬明膠膠囊的此類載體。用于軟明膠膠囊的適當(dāng)載體為，例如，植物油、蠟、脂肪、半固體和液體多元醇類等。然而，根據(jù)活性物質(zhì)的特性，在軟明膠膠囊中通常不需要載體。用于生產(chǎn)溶液劑和糖漿劑的適當(dāng)載體為，例如，水、多元醇類、甘油、植物油等。用于栓劑的適當(dāng)載體為，例如，天然或硬化油、蠟、脂肪、半固體或液體多元醇類等。而且，藥物組合物可含有防腐劑、增溶劑、穩(wěn)定劑、濕潤劑、乳化劑、增甜劑、著色劑、香料、用于改變滲透壓的鹽類、緩沖劑、掩蔽劑或抗氧化劑。它們也可含有其他的治療上有價值的物質(zhì)。本發(fā)明的一個實施方案是一種特別用于表達(dá)⑶20的癌癥的包括所述11型抗⑶20抗體和所述抗Bcl-2活性劑兩者的藥物組合物。所述藥物組合物可進(jìn)一步包括一種或多種藥用載體。本發(fā)明進(jìn)一步提供一種特別用于癌癥的藥學(xué)組合物，其包括(i)第一有效量的II型抗⑶20抗體，和(ii)第二有效量的抗Bcl-2活性劑。該組合物任選地包括藥學(xué)可接受的載體和/或賦形劑。通過將具有所需純度的抗體與任選的藥學(xué)可接受的載體、賦形劑或穩(wěn)定劑混合，以凍干制劑或水溶液的形式制備根據(jù)本發(fā)明單獨使用的II型抗CD20抗體的藥物組合物用于儲存(Remington'sPharmaceuticalSciences(雷明頓制藥學(xué))，第16版，Osol，A.主編(1980))。可接受的載體、賦形劑或穩(wěn)定劑在采用的用藥量和濃度下對接受者無毒性，并且包括下列各項緩沖劑諸如磷酸鹽、檸檬酸和其他有機(jī)酸；抗氧化劑，包括抗壞血酸和甲硫氨酸；防腐劑(諸如十八烷基二甲基芐基氯化銨(octadecyldimethylbenzylammoniumchloride)；氯化六甲雙胺(hexamethoniumchloride)；苯扎氯銨(benzalkoniumchloride)、芐索氯銨(benzethoniumchloride)；苯酚、丁醇或苯甲醇；對羥基苯甲酸烷基酯，諸如對羥基苯甲酸甲酯或丙酯；兒茶酚(catechol)；間苯二酚(resorcinol)；環(huán)己醇；3_戊醇；以及間甲酚；低分子量(小于約10個殘基)多肽；蛋白質(zhì)，諸如血清白蛋白、明膠或免疫球蛋白；親水聚合物諸如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸諸如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、組氨酸、精氨酸或賴氨酸；單糖類、二糖類和其他糖類包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合劑諸如EDTA；糖類諸如蔗糖、甘露醇、海藻糖或山梨醇；形成鹽的平衡離子諸如鈉；金屬絡(luò)合物(例如，Zn-蛋白絡(luò)合物)；和/或非離子型表面活性劑諸如TWEENTM、PLURONICSTM或聚乙二醇(PEG)。單獨抗Bcl-2活性劑，例如Bcl-2抑制劑的藥學(xué)組合物，取決于其藥學(xué)特性；例如，對于小的化學(xué)化合物諸如，例如，ABT-737或ABT-263，例如，一種劑型可以如下a)片劑制劑(濕法制粒)<table>tableseeoriginaldocumentpage22</column></row><table>制備步驟1.將第1、2、3和4項混合并用純水制粒。2.將顆粒在50°C下干燥。3.使顆粒通過適當(dāng)?shù)难心パb置。4.加入第5項并混合3分鐘；在適當(dāng)?shù)膲浩瑱C(jī)上擠壓。b)膠囊制劑<table>tableseeoriginaldocumentpage22</column></row><table>制備步驟1.將第1、2和3項在適當(dāng)?shù)幕旌蠙C(jī)中混合30分鐘。2.加入第4和5項并混合3分鐘。3.填充至適當(dāng)?shù)哪z囊中。在本發(fā)明的一個進(jìn)一步的實施方案中，根據(jù)本發(fā)明的藥物組合物為關(guān)于所述II型抗CD20抗體和所述Bcl-2抑制劑的兩個單獨的制劑?；钚猿煞忠部砂裨诶缤ㄟ^凝聚技術(shù)或通過界面聚合制備的微膠囊中，所述微膠囊例如，分別用于膠體藥物遞送系統(tǒng)(例如，脂質(zhì)體、白蛋白微球、微乳液、納米顆粒和納米膠囊)或在大乳液(macroemulsion)中的羥甲基纖維素或明膠-微膠囊和聚(甲基丙烯酸甲酯)微膠囊。這些技術(shù)公開在(Remington'sPharmaceuticalSciences(雷明頓制藥學(xué))，第16版，0sol，A.主編(1980))中?？芍苽渚忈屩苿?。緩釋制劑的適當(dāng)例子包括含有抗體的固體疏水聚合物的半透性基質(zhì)，該基質(zhì)采用成形制品的形式，例如，膜，或微膠囊。緩釋基質(zhì)的例子包括聚酯、水凝膠(例如，聚(甲基丙烯酸2-羥基乙酯)或聚(乙烯醇))、聚丙交酯(US3，773，919)、L-谷氨酸和L-谷氨酸、-乙酯的共聚物、非可降解乙烯-乙酸乙酯、可降解的乳酸_乙醇酸共聚物諸如LUPR0NDEP0T(由乳酸-乙醇酸共聚物和乙酸亮丙立德組成的可注射微球)、和聚-D-(-)-3-羥丁酸。要用于體內(nèi)施用的制劑必需是無菌的。這很容易地通過無菌過濾膜經(jīng)過濾來完成。本發(fā)明進(jìn)一步提供了一種治療癌癥的方法，包括對需要此治療的受試者施用(i)第一有效量的II型抗⑶20抗體；以及(ii)第二有效量的抗Bcl-2活性劑。本發(fā)明進(jìn)一步提供了一種治療癌癥的方法，包括對需要此治療的受試者施用(i)第一有效量的II型抗⑶20抗體；以及(ii)第二有效量的抗Bcl-2活性劑。在此施用的術(shù)語“患者”優(yōu)選地指需要出于任何目的用II型抗⑶20抗體治療的人(例如，患有表達(dá)CD20的癌癥的患者)，并更優(yōu)選地指需要該治療來治療癌癥、或癌前病癥或病變的人。然而，術(shù)語“患者”還可指非人動物，其中優(yōu)選地是諸如犬、貓、馬、牛、豬、羊和非人靈長類的哺乳動物。本發(fā)明進(jìn)一步包括用于與抗Bcl-2活性劑聯(lián)合治療表達(dá)⑶20的癌癥的II型抗⑶20抗體。本發(fā)明進(jìn)一步包括用于與抗Bcl-2活性劑聯(lián)合治療患有表達(dá)⑶20的癌癥的患者的II型抗⑶20抗體。本發(fā)明進(jìn)一步包括用于治療表達(dá)⑶20的癌癥的II型抗⑶20抗體和抗Bcl-2活性劑。本發(fā)明進(jìn)一步包括用于治療患有表達(dá)⑶20的癌癥的患者的II型抗⑶20抗體和抗Bcl-2活性劑。優(yōu)選地，所述抗Bcl-2活性劑選自奧利美生、SPC-2996、RTA-402、棉酚、AT-101、甲磺酸奧巴克拉、A-371191、A-385358、A-438744、ABT-737、AT-101、BL-11、BL-193、GX-15-003、2-甲氧基抗霉素A3、HA-14-1、KF-67544、紅桔酚、TP-TW-37、YC-137和Z-24。優(yōu)選地，抗Bcl-2活性劑是抗Bcl-2抑制活性的IC50為5iM或更小的Bcl_2蛋白結(jié)合抑制劑。該Bcl-2蛋白結(jié)合抑制劑優(yōu)選地選自棉酚、AT-101、甲磺酸奧巴克拉、ABT-263和ABT-737，更優(yōu)選地選自ABT-263或ABT-737。優(yōu)選地，所述II型抗⑶20抗體具有的所述II型⑶20抗體與Raji細(xì)胞(ATCC編號CCL-86)上⑶20的結(jié)合力與利妥昔單抗相比較的比值為0.30.6，更優(yōu)選為0.350.55，并且還更優(yōu)選為0.40.5。優(yōu)選地，所述II型抗⑶20抗體是人源化B-Lyl抗體。優(yōu)選地，所述II型抗⑶20抗體具有增加的抗體依賴性細(xì)胞毒性(ADCC)。優(yōu)選地，表達(dá)⑶20的癌癥是B細(xì)胞非霍奇金淋巴瘤(NHL)。優(yōu)選地，所述II型抗⑶20抗體是單克隆抗體。下列的實施例、序列表和附圖提供用于輔助理解本發(fā)明，本發(fā)明的真正范圍在附加的權(quán)利要求中給出。要理解的是在不背離本發(fā)明的精神的前提下可對給出的步驟進(jìn)行修改。序列表SEQIDNO1鼠單克隆抗⑶20抗體B_Lyl的重鏈可變區(qū)(VH)的氨基酸序列。SEQIDNO2鼠單克隆抗⑶20抗體B_Lyl的輕鏈可變區(qū)(VL)的氨基酸序列。SEQIDNO:3_19人源化B-Lyl抗體(B-HH2至B-HH9、B-HL8以及B-HL10至B-HL17)的重鏈可變區(qū)(VH)的氨基酸序列。SEQIDNO20人源化B_Lyl抗體B-KV1的輕鏈可變區(qū)(VL)的氨基酸序列。圖1所述II型CD20抗體與Raji細(xì)胞(ATCC編號CCL_86)上CD20的結(jié)合力與利妥昔單抗相比較的比值為0.44的II型抗⑶20抗體(B-HH6-B-KV1GE)與Bcl_2抑制劑(ABT-737)(Bcl-2抑制活性的IC500.040uM)的聯(lián)合治療對SU-DHL-4DLBCLB細(xì)胞非霍奇金淋巴瘤(NHL)的抗腫瘤活性。腫瘤體積的平均值[mm3]在y-軸上作圖；注射腫瘤細(xì)胞后的天數(shù)在x-軸上作圖。圖例:A)賦形劑(圓圈)，B)人源化B-lyl(B-HH6-B-KVlGE)10mg/kg每周一次(正方形)，C)Bcl-2抑制劑ABT-737100mg/kg每兩天一次(三角形)以及D)人源化B-lyl(B-HH6-B-KV1GE)10mg/kg每周一次與Bcl_2抑制劑ABT-737(100mg/kg每兩天一次)共同施用(十字)。圖21型抗⑶20抗體(Cy5_利妥昔單抗=白色條形)和II型抗⑶20抗體(Cy5人源化B-LylB-HH6-B-KV1GE=黑色條形)在Raji細(xì)胞(ATCC編號CCL_86)上的平均熒光強(qiáng)度(MFI，左側(cè)y-軸)；I型抗⑶20抗體(利妥昔單抗)和II型抗⑶20抗體(B-HH6-B-KV1GE)與CD20的結(jié)合力與利妥昔單抗比較的比值(按比例繪制在右側(cè)y_軸上)。圖3兩個II型抗⑶20抗體的治療對Z138人非霍奇金淋巴瘤(NHL)的抗腫瘤活性。兩個抗體均為人源化B-Lyl抗⑶20抗體；1)B-HH6-B-KV1糖基化改造(GE)以及2)B-HH6-B-KV1野生型(wt，未糖基化改造)。腫瘤體積的平均值[mm3]在y-軸上作圖；注射腫瘤細(xì)胞后的天數(shù)在x-軸上作圖。圖例A)賦形劑(圓圈)，B)人源化B-LylGE(B-HH6-B-KV1GE)30mg/kg每周一次(三角形)，以及C)人源化B-Lylwt(B-HH6-B-KV1wt)30mg/kg每周一次(十字)。試驗步驟實施例1II型抗CD20抗體(B-HH6-B-KV1GE)與Bcl_2抑制劑(ABT-737)的聯(lián)合治療的抗腫瘤活性檢測藥劑瑞士施利倫格黎卡特(GlycArt，Schlieren，Switzerland)提供的II型抗CD20抗體B-HH6-B-KV1GE(=人源化B_Lyl，糖基化改造的B-HH6-B-KV1，見WO2005/044859和WO2007/031875)作為母液(c=9.4mg/ml)?？贵w緩沖液包括組氨酸、海藻糖和聚山梨酸酯20。注射前抗體溶液從母液中取出在PBS中適當(dāng)?shù)叵♂尅cl-2抑制劑ABT-737作為化學(xué)品粉末提供，并配制在含有1.5%DMS0，5%吐溫80,30%1，2-丙二醇的5%葡萄糖溶液中，c=10mg/ml。細(xì)胞系和培養(yǎng)條件SU-DHL-4人非霍奇金淋巴瘤(NHL)細(xì)胞(Chang,H.等人，Leuk.Lymphoma.(白血病和淋巴瘤)8(1992)129-136)由DSMZ，Braunschweig饋贈。腫瘤細(xì)胞系常規(guī)地在添加了10%胎牛血清(PAALaboratories，奧地利)和2mML-谷氨酰胺的RPMI培養(yǎng)基(PAA，Laboratories，奧地利)中在37°C下在水飽和氣氛中在5%CO2中培養(yǎng)。第5代用于移植。動物雌性SCID拜格小鼠(beigemic)；到達(dá)時4-5周齡(購自Bomholtgard，Ry，丹麥)根據(jù)被批準(zhǔn)的指導(dǎo)方針(GV-Solas；Felasa；TierschG)在無特異病原菌條件下飼養(yǎng)，每天12小時晝/12小時夜循環(huán)。試驗研究方案由當(dāng)?shù)卣u審并批準(zhǔn)。到達(dá)后，動物在動物設(shè)施的檢疫區(qū)飼養(yǎng)一周以使其適應(yīng)新環(huán)境并用于觀察。定期進(jìn)行連續(xù)的健康監(jiān)測。隨意提供進(jìn)食食物(ProvimiKliba3337)和飲水(酸化至pH2.5-3)監(jiān)測每天監(jiān)控動物的臨床癥狀并檢測不良反應(yīng)。為了在整個試驗中進(jìn)行監(jiān)測，動物的體重每周記錄兩次，并在分級后用測徑器測量腫瘤體積。動物的治療在細(xì)胞移植后隨機(jī)的一天即22天時開始動物治療。作為單一藥劑或聯(lián)合治療的人源化II型抗⑶20抗體B-HH6-B-KV1GE接受組和相應(yīng)的賦形劑組在第22、29、36和43研究日時以10mg/kg的指定用藥量經(jīng)靜脈給藥每7天1次(q7d)。Bcl_2抑制劑ABT-737每兩天一次(第23-33天，每兩天一次)以100mg/kg經(jīng)腹膜內(nèi)給藥，并且由于耐受性低至第41天時以50mg/kg的減少劑量給藥。體內(nèi)腫瘤生長抑制研究接受賦形劑對照的荷瘤動物在治療開始后15天由于腫瘤負(fù)荷不得不被排除。與對照相比，用B-HH6-B-KV1GE(10mg/kg)作為單劑每周一次治療動物顯著地抑制異種移植物生長14天(TGI87%)。然而，盡管每周抗體治療，SU-DHL-4異種移植物持續(xù)進(jìn)展。相反，每2天一次以100mg/kg給予Bcl-2抑制劑的單劑治療僅有輕微活性，并且與對照類似，腫瘤進(jìn)行性地生長。盡管兩種化合物作為單劑具有中等程度的活性，但在聯(lián)合治療組中，SU-DHL-4淋巴瘤異種移植物被迫使完全消失。每周用B-HH6-B-KV1GE(IOmgAg)治療并每兩天一次注射Bcl-2抑制劑ABT-737使淋巴瘤在第一周內(nèi)消失，并且在隨后的聯(lián)合治療期中，所有SU-DHL-4腫瘤顯示腫瘤完全消失，沒有觀察到再生長。實施例2II型抗CD20抗體的與Raji細(xì)胞(ATCC編號CCL_86)上CD20的結(jié)合力與利妥昔單抗相比較的比值的測定Raji細(xì)胞(ATCC-編號:CCL_86)在含有10%FCS(Gibco,Cat.-No.10500-064)的RPMI-1640培養(yǎng)基(PanBiotechGmbH,Cat.-No.P04-18500)中維持培養(yǎng)。II型抗CD20抗體B-HH6-B-KV1(人源化B-Lyl抗體)和利妥昔單抗使用Cy5單NHS酯(AmershamGEHealthcare(安瑪西亞GE衛(wèi)生保健)，目錄號PA15101)根據(jù)供應(yīng)商的說明書進(jìn)行標(biāo)記。Cy5-綴合的利妥昔單抗的標(biāo)記比為2.O分子Cy5/抗體。Cy5_綴合的B-HH6-B-KV1的標(biāo)記比為2.2分子Cy5/抗體。為了測定和比較兩個抗體的結(jié)合力和模式，使用伯基特淋巴瘤細(xì)胞系Raji(ATCC-編號CCL-86)通過直接免疫熒光生成結(jié)合曲線(通過滴定Cy5_綴合的利妥昔單抗和Cy5-綴合的B-HH6-B-KV1)。分別將Cy5_綴合的利妥昔單抗和Cy5_綴合的B-HH6-B-KV的EC50(最大強(qiáng)度的50%)作為平均熒光強(qiáng)度(MFI)來分析。5*105細(xì)胞/樣品在4°C下染色30分鐘。然后，細(xì)胞在培養(yǎng)基中洗滌。使用碘化丙啶(PI)染色來排除死細(xì)胞。使用FACSArray(BectonDickinson)進(jìn)行測量。在遠(yuǎn)紅外A(FarRedA)處測量碘化丙啶(PI)，并且在紅外-A(Red-A)處測量Cy5。圖2顯示在Cy5_標(biāo)記的B-HH6-B-KV1(黑色條形)和Cy5-標(biāo)記的利妥昔單抗(白色條形)的EC50(最大強(qiáng)度的50%)處結(jié)合的平均熒光強(qiáng)度(MFI)。然后根據(jù)下式計算與Raji細(xì)胞(ATCC-編號CCL_86)上CD20的結(jié)合力的比值與Raji細(xì)胞(ATCC-編號CCL-86)上CD20的結(jié)合力的比值=MFI(Cy5-抗CD2(^C體)“Cy5標(biāo)記比(Cy5-利妥昔單拘MFI(Cy5-利妥昔單鉤XCy漸記敗Cy5-抗CD2啦體)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage26</formula>因此，作為典型的II型抗⑶20抗體的B-HH6-B-KV1顯示結(jié)合力與利妥昔單抗相比較是減小的。實施例3Bcl-2抑制劑(ABT-737)的抗Bcl_2抑制活性的IC50值的測定Bcl-2和Bcl-xL結(jié)合-HTRF測定步驟化合物制劑板從100%DMSO中的IOmM母液以1.8mM開始連續(xù)地稀釋化合物(3倍，10個點)。試劑Bcl-2測定1)用于Bcl-2測定的生物素化-BAD肽(Bio-BAD)(BAD=細(xì)胞死亡的Bcl_2_拮抗劑；BAD蛋白是與BCL2和BAX相關(guān)的凋亡誘導(dǎo)物))·在含有50mMTris-HCL緩沖液，牛血清白蛋白(BSA)O.2mg/mL,二硫蘇糖醇ImM和9%DMSO的測定緩沖液中制備Bio-BAD肽(73.64nM)。2)His6-Bcl2在含有50mMTris-HCL，牛血清白蛋白(BSA)0.2mg/mL，二硫蘇糖醇ImM的測定緩沖液中制備His6-Bcl2(180nM)。3)Lance銪-抗生物素蛋白(EU-SA)和抗_6HisAPC在檢測緩沖液50mMTris-HCL,BSA0.2mg/mL,Eu-SA4.5nM和抗_6HisAPC67.5nM中制備溶液。最終測定濃度Bio-BAD(22.5nM)，His6-Bc_12(80nM)，EU-SA(InM)，APC(15nM)Bcl-xL1)用于Bcl-xL測定的生物素化-BAD肽(Bio-BAD)在含有50mMTris-HCL緩沖液、BSA0.2mg/mL、二硫蘇糖醇ImM和9%DMSO的測定緩沖液中制備Bio-BAD肽(9.82nM)。2)HisBcl-xL·在含有50mMTris-HCL,BSA0.2mg/mL,二硫蘇糖醇ImM的測定緩沖液中制備His6-Bcl-xL(22.5nM)。3)Lance銪-抗生物素蛋白(EU-SA)和抗_6HisAPC在檢測緩沖液50mMTris-HCL,BSA0.2mg/mL，Eu-SA3.4nM和抗_6HisAPC45nM中配制溶液。最終測定濃度Bio-Bad(3nM)，His6-Bcl_xL(IOnM)，EU-SA(0.75nM)，抗_6HisAPC(IOnM)步驟轉(zhuǎn)移板將5μL化合物從化合物制備板轉(zhuǎn)移至384孔板轉(zhuǎn)移板中(或?qū)?μL100%DMSO轉(zhuǎn)移至無藥物對照孔中)，并加入55μLBio-BAD溶液。從轉(zhuǎn)移板轉(zhuǎn)移12μL至測定板中，并在檢測孔中加入16μLHis6-Bcl2或His6-BclXL或在空白孔中加入測定緩沖液。在37°C下孵育1小時。加入8μLEU-SA/APC溶液/孔并在室溫下孵育1小時。在適于均相時間分辨熒光(HTRF)形式的平板讀數(shù)器上在340nm下激發(fā)并在665/615nm發(fā)射下讀板。最終化合物濃度50，16.7,5.6，1.85，0.62，0.21，0.07，0.03，0.01，0.004μM0串光(crosstalk)校正向多個孔中加入16μL測定緩沖液，12μLBio-BAD，8μL含有和不含有EU-SA/APC的檢測緩沖液。結(jié)果檢測ABT-737對Bcl-2和Bcl-xL的抑制；使用非線性曲線擬合(XLfit軟件(IDBusinessSolutionLtd.，Guilford,Surrey,UK))計算IC50值。ABT-737的IC50(Bcl-2):0·040μMABT-737的IC50(Bcl-xL):0·019μM實施例4糖基化改造(GE)和非糖基化改造的(野生型，wt)抗⑶20抗體(B-HH6-B-KV1GE和wt)對SCID拜格小鼠中的Z138MCL異種移植物的類似抗腫瘤活性檢測藥劑瑞士施利倫格黎卡特(GlycArt，Schlieren，Switzerland)提供的II型抗CD20抗體B-HH6-B-KV1(糖基化改造(GE)和野生型(wt))作為母液(c=9.4mg/ml和12.5mg/ml)?？贵w緩沖液包括組氨酸、海藻糖和聚山梨酸酯20。在注射前兩種溶液均從母液中取出在PBS中適當(dāng)?shù)叵♂尅＜?xì)胞系和培養(yǎng)條件Z138人B-Cell非霍奇金淋巴瘤(NHL)細(xì)胞最初獲自Glycart(格黎卡特)(外套細(xì)胞淋巴瘤-MCL)。腫瘤細(xì)胞系常規(guī)地在添加了10%胎牛血清(PAALaboratories，奧地利)和2mML-谷氨酰胺的DMEM培養(yǎng)基(PAA，Laboratories,奧地利)中，在37°C下在水飽和氣氛中在5%CO2中培養(yǎng)。第2代用于移植。動物雌性SCID拜格小鼠；到達(dá)時4-5周齡(購自Bomholtgard，Ry,丹麥)根據(jù)被批準(zhǔn)的指導(dǎo)方針(GV-Solas；Felasa；TierschG)在無特異病原菌條件下飼養(yǎng)，每天12小時晝/12小時夜循環(huán)。試驗研究方案由當(dāng)?shù)卣u審并批準(zhǔn)。到達(dá)后，動物在動物設(shè)施的檢疫區(qū)飼養(yǎng)一周以使其適應(yīng)新環(huán)境并用于觀察。定期進(jìn)行連續(xù)的健康監(jiān)測。隨意提供進(jìn)食食物(ProvimiKliba3337)和飲水(酸化至pH2.5-3)。監(jiān)測每天監(jiān)控動物的臨床癥狀并檢測不良反應(yīng)。為了在整個試驗中進(jìn)行監(jiān)測，動物的體重每周記錄兩次，并在開始分級時用測徑器測量腫瘤體積。動物的治療在皮下細(xì)胞移植后隨機(jī)的一天即14天時開始動物治療。人源化抗CD20抗體(B-HH6-B-KV1GE和wt)接受組和相應(yīng)的賦形劑組在第14、20、27和34研究日時以IOmg/kg的指定用藥量經(jīng)靜脈治療每7天1次(q7d)。體內(nèi)腫瘤生長抑制研究接受賦形劑對照的荷瘤動物在治療開始后19天由于腫瘤負(fù)荷不得不被排除。用作為wt或糖基化改造的B-HH6-B-KV1(B-HH6-B-KV1GE和wt)以10mg/kg每周一次治療動物在開始治療后很快抑制異種移植物的向外生長。在對照終止時，所有抗體均使腫瘤消退，并且后來大多數(shù)Z138腫瘤異種移植物顯示完全消退。在此異種移植物模型中，在抗CD20抗體B-HH6-B-KV1的wt和糖基化改造形式之間沒有觀察到顯著差異。這并非是不可能的，因為小鼠在其NK細(xì)胞上不表達(dá)正確的Fc受體，此外，由于嚴(yán)重的三倍體免疫缺陷，SCID拜格小鼠被認(rèn)為沒有發(fā)生NK-介導(dǎo)的ADCC的能力。因此，SCID拜格小鼠的皮下異種移植物模型不適合用于用糖基化修飾抗體模擬人ADCC介導(dǎo)的效應(yīng)。權(quán)利要求II型抗CD20抗體在制備用于與抗Bcl-2活性劑聯(lián)合治療表達(dá)CD20的癌癥的藥物中的應(yīng)用。2.II型抗⑶20抗體在制備用于與抗Bcl-2活性劑聯(lián)合治療患有表達(dá)⑶20的癌癥的患者的藥物中的應(yīng)用。3.根據(jù)權(quán)利要求1-2中任意一項所述的應(yīng)用，其特征在于所述II型抗CD20抗體具有的所述II型⑶20抗體與Raji細(xì)胞(ATCC編號CCL_86)上⑶20的結(jié)合力與利妥昔單抗相比較的比值為0.30.6。4.根據(jù)權(quán)利要求1-3中任意一項所述的應(yīng)用，其特征在于所述II型抗CD20抗體是人源化B-Lyl抗體。5.根據(jù)權(quán)利要求1-4中任意一項所述的應(yīng)用，其特征在于所述II型抗CD20抗體具有提高的抗體依賴性細(xì)胞毒性(ADCC)。6.根據(jù)權(quán)利要求1-5中任意一項所述的應(yīng)用，其特征在于所述II型抗CD20抗體Fc區(qū)的至少40%或更多的寡糖為非巖藻糖基化的。7.根據(jù)權(quán)利要求1-6中任意一項所述的應(yīng)用，其特征在于所述抗Bcl-2活性劑選自奧利美生、SPC-2996、RTA-402、棉酚、AT-101、甲磺酸奧巴克拉、A-371191、A-385358、A-438744、ABT-737、AT-101、BL-11、BL-193、GX-15_003、2-甲氧基抗霉素A3、HA-14-1、KF-67544、紅掊酚、TP-TW-37、YC-137和Z-24，優(yōu)選地選自ABT-263和ABT-737。8.根據(jù)權(quán)利要求1-7中任意一項所述的應(yīng)用，其特征在于所述抗Bcl-2活性劑是抗Bcl-2抑制活性的IC50為5iiM以下的Bcl-2蛋白結(jié)合抑制劑。9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的應(yīng)用，其特征在于所述Bcl-2蛋白結(jié)合抑制劑選自ABT-263或ABT-737。10.根據(jù)權(quán)利要求1-9中任意一項所述的應(yīng)用，其特征在于施用一種或多種附加的其他細(xì)胞毒性劑、化學(xué)治療劑或抗癌劑，或增強(qiáng)這些藥劑的作用的化合物。11.根據(jù)權(quán)利要求1-10中任意一項所述的應(yīng)用，其特征在于所述表達(dá)CD20的癌癥是B-細(xì)胞非霍奇金淋巴瘤(NHL)。12.—種試劑盒，包括用于聯(lián)合治療患有表達(dá)⑶20的癌癥的患者的II型抗⑶20抗體和抗Bcl-2活性劑。13.一種特別地用于表達(dá)CD20的癌癥的藥物組合物，其包括所述II型抗CD20抗體和所述抗Bcl-2活性劑，其中所述藥物組合物可進(jìn)一步包括一種或多種藥用的載體。全文摘要本發(fā)明涉及II型抗CD20抗體在制備用于與抗Bcl-2活性劑聯(lián)合治療癌癥，尤其是表達(dá)CD20的癌癥的藥物中的應(yīng)用。文檔編號A61P35/00GK101827611SQ200880111728公開日2010年9月8日申請日期2008年10月13日優(yōu)先權(quán)日2007年10月15日發(fā)明者克里斯蒂安·克萊因,巴勃羅·烏馬納,帕梅拉·布雷姆,托馬斯·弗里斯申請人:羅氏格黎卡特股份公司