專利名稱：：已知藥理學(xué)活性化合物的新用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及已知藥理學(xué)活性化合物的新用途。更具體而言，本發(fā)明涉及a-酮戊二酸、其酰胺、鹽及它們的混合物在制備用于在有此需要的受試者中在體內(nèi)治療性提高血管彈性(尤其是動(dòng)脈彈性)的藥物制劑或者食物補(bǔ)充劑或飼料補(bǔ)充劑中的新用途。
背景技術(shù)：
：胃手術(shù)隨著西方世界中肥胖的逐步增加，介入式(invasive)減肥形式作為降低死亡率和改善共存病癥之手段的前景日益看好。實(shí)際上，一些人倡導(dǎo)介入式減肥是唯一可接受的減肥方式，因?yàn)?992年NIH發(fā)表的聲明中報(bào)道了非手術(shù)方法在肥胖患者中的成功率為5%或更低。已經(jīng)表明胃旁路手術(shù)能使過(guò)高的體重減少高達(dá)70%，其中長(zhǎng)期體重減輕持續(xù)10-14年。近來(lái)，Coates和她的同事報(bào)道，諸如胃旁路手術(shù)的介入式手術(shù)可能影響骨骼健康。在對(duì)胃旁路手術(shù)的25名患者進(jìn)行的研究中，發(fā)現(xiàn)髖轉(zhuǎn)節(jié)中骨轉(zhuǎn)換標(biāo)志物顯著提高并且骨礦物質(zhì)密度降低。已知胃旁路手術(shù)還對(duì)降低高血壓有益，高血壓是病態(tài)肥胖中常見(jiàn)的問(wèn)題。在對(duì)67名登記為高血壓(bp>160/90mmHg)的病態(tài)肥胖患者的隨訪中，表明胃旁路手術(shù)減輕了44名個(gè)體(66%)中的術(shù)前高血壓。疾病中的血管彈性很久以來(lái)，眾所周知血管彈性(尤其是動(dòng)脈彈性)與高血壓及相關(guān)病癥有關(guān)。已經(jīng)表明，動(dòng)脈硬化是非高血壓受試者中高血壓進(jìn)展的獨(dú)立預(yù)兆，即動(dòng)脈硬化是獨(dú)立于其它已知風(fēng)險(xiǎn)因素的發(fā)生高血壓的風(fēng)險(xiǎn)因素(Dernellis和Panaretou，Hypertension.2005;45:426-431)。視網(wǎng)膜血管病可能是由于高血壓性視網(wǎng)膜病引起的，也即由系統(tǒng)性高血壓引起。肺高血壓(pulmonaryhypertension,PH)是指肺動(dòng)脈、肺靜脈或肺毛細(xì)血管(總稱為肺血管)的血壓升高，導(dǎo)致呼吸短促、頭暈、昏厥和其它癥狀，所有這些癥狀均可由于運(yùn)動(dòng)而加重。根據(jù)病因，肺高血壓可以是運(yùn)動(dòng)耐性顯著降低的嚴(yán)重疾病，并且可導(dǎo)致右心衰竭。肺動(dòng)脈高血壓(WH0的I類)涉及與肺連接的血管及肺內(nèi)血管的血管收縮或硬化。這使得心臟更難于將血液泵出通過(guò)肺。隨著時(shí)間的推移，受影響的血管在稱為纖維化的過(guò)程中變得更硬、更厚。這進(jìn)一步升高了肺內(nèi)的血壓并且損害其血流。此外，心臟負(fù)荷增加可導(dǎo)致右心室肥厚，其可發(fā)展為右心室衰竭。動(dòng)脈瘤是由疾病或血管壁衰弱而引起血管的局部充血擴(kuò)張(氣球樣膨脹)。動(dòng)脈瘤最常見(jiàn)于腦基底動(dòng)脈(Willis循環(huán))和主動(dòng)脈(從心臟流出的主要?jiǎng)用})中，稱為主動(dòng)脈瘤。血管中的膨脹可在任何時(shí)候破裂并導(dǎo)致疾病或死亡。動(dòng)脈瘤越大，其越可能破裂。雖然存在對(duì)高血壓、肺高血壓、心室肥大和動(dòng)脈瘤的治療(藥物和手術(shù))，但是仍然需要具有更好效力和/或更少副作用和/或更好成本效益的改進(jìn)治療。
發(fā)明內(nèi)容現(xiàn)在，本發(fā)明人顯示，肥胖個(gè)體在進(jìn)行胃手術(shù)之后其動(dòng)脈的彈性改變。旁路手術(shù)改變了影響動(dòng)脈結(jié)構(gòu)的養(yǎng)分的吸收(與骨骼系統(tǒng)中所見(jiàn)的方式相似)，對(duì)動(dòng)脈的彈性和強(qiáng)度具有不良后果。然而，還沒(méi)有報(bào)道對(duì)這些副作用的有效治療。因此，存在對(duì)預(yù)防胃手術(shù)的這些副作用的未滿足的需求。此外，還發(fā)現(xiàn)相同的治療可用在需要增加血管彈性的其它受試者(例如老齡受試者)中。因此，本發(fā)明提供選自以下的至少一種物質(zhì)在制備用于在有此需要的受試者中提高血管彈性的藥物制劑或者食物補(bǔ)充劑或飼料補(bǔ)充劑中的用途a)a-酮戊二酸(AKG);b)a_酮戊二酸的可藥用鹽；c)氨基酸、二肽或三肽與a-酮戊二酸形成的酰胺及其可藥用鹽；以及d)a_酮戊二酸或其可藥用鹽與至少一種氨基酸或其可藥用鹽的可藥用物理混合物。所述血管優(yōu)選是動(dòng)脈。在某些實(shí)施方案中，所述受試者需要治療和/或預(yù)防高血壓、肺動(dòng)脈高血壓、心血管病、視網(wǎng)膜血管病、心力衰竭、動(dòng)脈粥樣硬化、心室肥大、中風(fēng)、動(dòng)脈瘤、腎衰竭、腎硬化癥或與高血壓有關(guān)的其它疾病。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及選自以下的至少一種物質(zhì)在制備用于在患有營(yíng)養(yǎng)不良相關(guān)病癥的個(gè)體、已經(jīng)進(jìn)行胃手術(shù)的個(gè)體或老齡個(gè)體中治療對(duì)血管彈性及強(qiáng)度的副作用的藥物制劑或者食物補(bǔ)充劑或飼料補(bǔ)充劑中的用途a-酮戊二酸(AKG);a-酮戊二酸的可藥用鹽；氨基酸、二肽或三肽與a-酮戊二酸形成的酰胺及其可藥用鹽；以及a_酮戊二酸或其可藥用鹽與至少一種氨基酸的可藥用物理混合物。根據(jù)又一些實(shí)施方案，所述胃手術(shù)是胃旁路手術(shù)、胃切除術(shù)、部分胃切除術(shù)或胃結(jié)扎術(shù)。根據(jù)又一些實(shí)施方案，使用a-酮戊二酸或其堿金屬鹽或堿土金屬鹽或它們的組合。根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案，使用a-酮戊二酸鈉。根據(jù)另一個(gè)實(shí)施方案，使用a-酮戊二酸鈣。根據(jù)又一些實(shí)施方案，施用給患者的物質(zhì)的劑量為l-1000mg/kg體重/天、10-400mg/kg體重/天或10-100mg/kg體重/天。在本發(fā)明的另一個(gè)方面中，提供用于在有此需要的受試者中提高血管彈性的治療方法，所述方法包括向有此需要的受試者施用有效量的至少一種選自以下的物質(zhì)a)a-酮戊二酸(AKG);b)a_酮戊二酸的可藥用鹽；c)氨基酸、二肽或三肽與a-酮戊二酸形成的酰胺及其可藥用鹽；以及d)a_酮戊二酸或其可藥用鹽與至少一種氨基酸或其可藥用鹽的可藥用物理混合物。所述方法中的血管優(yōu)選是動(dòng)脈。施用所述治療的受試者可以是需要治療和/或預(yù)防高血壓、肺動(dòng)脈高血壓、心血管病、視網(wǎng)膜血管病、心力衰竭、動(dòng)脈粥樣硬化、心室肥大、中風(fēng)、動(dòng)脈瘤、腎衰竭、腎硬化癥或與高血壓有關(guān)的其它疾病的受試者。根據(jù)本發(fā)明，出乎意料地發(fā)現(xiàn)a-酮戊二酸(AKG);a_酮戊二酸的可藥用鹽；氨基酸、二肽或三肽與a-酮戊二酸形成的酰胺及其可藥用鹽；以及a-酮戊二酸或其可藥用鹽與至少一種氨基酸或其可藥用鹽的可藥用物理混合物可用于在體內(nèi)對(duì)進(jìn)行了胃手術(shù)的個(gè)體中對(duì)血管彈性和強(qiáng)度的副作用進(jìn)行治療性處理。根據(jù)又一些實(shí)施方案，所述胃手術(shù)是胃旁路手術(shù)、胃切除術(shù)、部分胃切除術(shù)或胃結(jié)扎術(shù)。在又一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及用于治療已經(jīng)進(jìn)行胃手術(shù)的個(gè)體中對(duì)血管彈性和強(qiáng)度的副作用的方法，所述方法包括向有此需要的受試者施用有效量的至少一種選自以下的物質(zhì)a_酮戊二酸(AKG);a-酮戊二酸的可藥用鹽；氨基酸、二肽或三肽與a-酮戊二酸形成的酰胺及其可藥用鹽；以及a_酮戊二酸或其可藥用鹽與至少一種氨基酸的可藥用物理混合物。根據(jù)又一些實(shí)施方案，所述胃手術(shù)是胃旁路手術(shù)、胃切除術(shù)、部分胃切除術(shù)或胃結(jié)扎術(shù)。在又一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及治療患有與營(yíng)養(yǎng)不良相關(guān)的病癥的個(gè)體或老齡個(gè)體中對(duì)血管彈性和強(qiáng)度的副作用的方法，所述方法包括向需要這種治療或預(yù)防的受試者施用有效量的至少一種選自以下的物質(zhì)a_酮戊二酸(AKG);a-酮戊二酸的可藥用鹽；氨基酸、二肽或三肽與a-酮戊二酸形成的酰胺及其可藥用鹽；以及a-酮戊二酸或其可藥用鹽與至少一種氨基酸的可藥用物理混合物。根據(jù)又一些實(shí)施方案，使用a-酮戊二酸或其堿金屬鹽或堿土金屬鹽或者它們的組合。根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案，使用a-酮戊二酸鈉。根據(jù)另一個(gè)實(shí)施方案，使用a-酮戊二酸鈣。根據(jù)又一些實(shí)施方案，在本發(fā)明方法中施用給患者的物質(zhì)的劑量為l-1000mg/kg體重/天、10-400mg/kg體重/天或10-100mg/kg體重/天。在下述說(shuō)明書中借助優(yōu)選實(shí)施方案、實(shí)施例研究和附圖進(jìn)一步解釋本發(fā)明圖1顯示施用AKG(+AKG)或載體(-AKG)的旁路手術(shù)大鼠(B)和假手術(shù)大鼠(S)的主動(dòng)脈節(jié)段的彈性回縮力記錄值。用力傳感器進(jìn)行記錄，所述力傳感器與A/D轉(zhuǎn)換器相連，采樣速度為1000個(gè)樣品/秒。每個(gè)點(diǎn)表示平均值士SE。平均值之間的顯著性差異如下a和d=p<0.05，b=p<0.01，c=p=0.01。分配到四個(gè)組中的動(dòng)物如下B-AKGn=6，B+AKGn=11，S-AKGn=12以及S+AKGn=12。圖2顯示進(jìn)行一系列拉伸/松弛循環(huán)的主動(dòng)脈節(jié)段的典型實(shí)驗(yàn)圖。所施加的最大拉伸力為在大鼠主動(dòng)脈中所測(cè)的(13-14kPa)約O.14%。注意將第一個(gè)拉伸/松弛循環(huán)的線的斜率與第二個(gè)和第三個(gè)循環(huán)的線的斜率相比較。此斜率代表主動(dòng)脈節(jié)段中固有的彈性回縮力(為手動(dòng)施加張力的約16%)。明顯地，在此范圍內(nèi)重復(fù)拉伸/松弛循環(huán)導(dǎo)致彈性降低。圖3未示出。圖4顯示第一個(gè)拉伸系列以對(duì)照和(A)Na-AKG以及(B)Ca-AKG處理的小鼠的主動(dòng)脈節(jié)段的彈性回縮力記錄值。用力傳感器進(jìn)行記錄，所述力傳感器與A/D轉(zhuǎn)換器相連，采樣速度為1000個(gè)樣品/秒。每個(gè)點(diǎn)表示平均值±SE。平均值之間的顯著性差異如下a=P<0.05，b=P<0.01，c=P<0.001。分配到三個(gè)組中的動(dòng)物均為n=6。圖5顯示第二個(gè)拉伸系列以對(duì)照和(A)Na-AKG以及(B)Ca-AKG處理的小鼠的主動(dòng)脈節(jié)段的彈性回縮力記錄值。用力傳感器進(jìn)行記錄，所述力傳感器與A/D轉(zhuǎn)換器相連，采樣速度為1000個(gè)樣品/秒。每個(gè)點(diǎn)表示平均值士SE。平均值之間的顯著差異如下a二P<0.05，b=P<0.01，c=P<0.001。分配到三個(gè)組中的動(dòng)物均為n=6。發(fā)明詳述本發(fā)明的一個(gè)目的是提供可用于在有此需要的受試者中提高血管彈性的有效且安全的治療。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，彈性提高的血管是動(dòng)脈，但是靜脈、毛細(xì)血管、小靜脈和小動(dòng)脈的彈性也可通過(guò)本發(fā)明來(lái)提高。因?yàn)檠軓椥?尤其是動(dòng)脈彈性)與高血壓和肺動(dòng)脈高血壓之間具有確定的關(guān)聯(lián)，因此所提供的提高血管彈性的治療可用于制備用于治療和/或預(yù)防高血壓和肺動(dòng)脈高血壓的藥物。又已知高血壓是心血管病、視網(wǎng)膜血管疾病、心力衰竭、中風(fēng)、動(dòng)脈粥樣硬化、腎衰竭、腎硬化癥和其它疾病的發(fā)病因素。同樣，已知肺動(dòng)脈高血壓是右心室肥大的發(fā)病因素。因此，所提供的提高血管彈性的治療可用于制備藥物，所述藥物用于治療和/或預(yù)防高血壓和肺動(dòng)脈高血壓作為發(fā)病因素或風(fēng)險(xiǎn)因子的所述疾病和病癥以及其它高血壓和肺動(dòng)脈高血壓作為發(fā)病因素或風(fēng)險(xiǎn)因子的其他疾病和病癥。所提供的治療還可以用于制備用于治療和/或預(yù)防其中已知血管彈性受損的其它病癥的藥物。本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供對(duì)胃手術(shù)引起的對(duì)血管彈性和強(qiáng)度之副作用的有效和安全的治療。與本發(fā)明相關(guān)的各種語(yǔ)法形式的術(shù)語(yǔ)"治療"指預(yù)防、治愈、逆轉(zhuǎn)、減弱、減輕、改善、抑制、最小化、制止或停止受治病癥的副作用。與本發(fā)明上下文中的胃手術(shù)相關(guān)的術(shù)語(yǔ)"副作用"指胃手術(shù)后出現(xiàn)的對(duì)血管性能(例如動(dòng)脈彈性和/或強(qiáng)度)的不良影響。例如，胃旁路手術(shù)后可見(jiàn)動(dòng)脈彈性降低。術(shù)語(yǔ)"營(yíng)養(yǎng)不良"意指由飲食不充分或不足而引起的醫(yī)學(xué)病癥，通常是由養(yǎng)分?jǐn)z入不足、吸收不良或過(guò)量丟失引起的。即便飲食充分，與營(yíng)養(yǎng)不良有關(guān)的某些病癥也會(huì)出現(xiàn)。例如，可能由于年老或其它疾病而使胃腸道功能受損。在這樣的情形下，消化受損可能是由于例如胃、腸、胰腺等中宿主消化酶或其產(chǎn)生不足；膽汁形成不足；胃PH不適當(dāng)(HC1產(chǎn)生受損)或其它原因引起的。由于年老、飲食(例如不耐受麩質(zhì))或疾病破壞絨毛引起的絨毛萎縮可能是吸收受損引起的營(yíng)養(yǎng)不良的直接原因。涉及細(xì)菌過(guò)度生長(zhǎng)或缺少消化道細(xì)菌的病癥也可能是營(yíng)養(yǎng)不良的原因。幾種其它原因也造成營(yíng)養(yǎng)不良，例如腸癌、手術(shù)、毒素、遺傳、循環(huán)(血液和淋巴)問(wèn)題、厭食等。在任何情形下，營(yíng)養(yǎng)不良和與營(yíng)養(yǎng)不良有關(guān)的病癥均可導(dǎo)致惡病質(zhì)(kachexia)并且降低生命機(jī)能。本發(fā)明上下文中的術(shù)語(yǔ)"老齡"意指生物(例如人)中與年齡相關(guān)的衰退開(kāi)始變得明顯的年齡段。在人的情形下，老齡可被定義為40歲以上，優(yōu)選50歲以上，更優(yōu)選60歲以上，或者最優(yōu)選65歲以上。"提高血管彈性"意指血管彈性變大，即血管硬度變小。該術(shù)語(yǔ)還包括血管的抗張強(qiáng)度提高。與本發(fā)明相關(guān)的胃手術(shù)的實(shí)例包括但不限于胃旁路手術(shù)、胃切除術(shù)、部分胃切除術(shù)和胃結(jié)扎術(shù)。因此，根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)方面，提供了選自以下的至少一種物質(zhì)在制備用于提高血管彈性(例如用于治療和/或預(yù)防高血壓、肺動(dòng)脈高血壓、心血管病、視網(wǎng)膜血管病、心力衰竭、動(dòng)脈粥樣硬化、心室肥大、中風(fēng)、動(dòng)脈瘤、腎衰竭、腎硬化癥和與高血壓有關(guān)的疾病)的藥物制劑或者食物補(bǔ)充劑或飼料補(bǔ)充劑中的用途a-酮戊二酸(AKG);a-酮戊二酸的可藥用鹽；氨基酸或二肽或三肽與a-酮戊二酸形成的酰胺及其可藥用鹽；以及a_酮戊二酸或其可藥用鹽與至少一種氨基酸或其可藥用鹽的可藥用物理混合物。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述藥物制劑涉及提高動(dòng)脈的彈性。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述藥物制劑涉及已經(jīng)進(jìn)行胃手術(shù)的受試者。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述藥物制劑涉及患有與營(yíng)養(yǎng)不良有關(guān)的病癥的受試者。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述藥物制劑涉及老齡受試者。根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案，使用a-酮戊二酸或其堿金屬鹽或堿土金屬鹽或它們的組合。優(yōu)選地，使用a-酮戊二酸鈉。甚至更優(yōu)選地，使用a-酮戊二酸鈣。a-酮戊二酸鈉在腸內(nèi)施用之后吸收較快，峰值血液水平較高，而a-酮戊二酸鈣在腸內(nèi)施用之后吸收較慢，作用較持久。實(shí)施例2顯示在某些病癥中a-酮戊二酸鈣的效果比a-酮戊二酸鈉的好。在又一個(gè)方面中，本發(fā)明涉及用于提高血管彈性(例如用于治療和/或預(yù)防高血壓、肺動(dòng)脈高血壓、心血管病、視網(wǎng)膜血管病、心力衰竭、動(dòng)脈粥樣硬化、心室肥大、中風(fēng)、動(dòng)脈瘤、腎衰竭、腎硬化癥和與高血壓有關(guān)的疾病)的方法，所述方法包括向需要這種治療或預(yù)防的受試者施用有效量的至少一種選自以下的物質(zhì)a-酮戊二酸(AKG);a-酮戊二酸的可藥用鹽；氨基酸或二肽或三肽與a-酮戊二酸形成的酰胺及其可藥用鹽；以及a-酮戊二酸或其可藥用鹽與至少一種氨基酸或其可藥用鹽的可藥用物理混合物。根據(jù)某些實(shí)施方案，所述受試者已進(jìn)行了胃手術(shù)、患有與營(yíng)養(yǎng)不良相關(guān)的病癥，或者是老齡受試者。根據(jù)這些方面的一些實(shí)施方案，施用a-酮戊二酸或其堿金屬鹽或堿土金屬鹽或其組合。優(yōu)選地，施用a-酮戊二酸鈉。更優(yōu)選地，施用a-酮戊二酸鈣?？蓪⒈景l(fā)明所用的活性成分的藥物制劑施用給脊椎動(dòng)物，包括哺乳動(dòng)物和鳥類，例如嚙齒動(dòng)物，比如小鼠、大鼠、豚鼠或兔；鳥類，例如火雞、母雞或小雞以及其它肉雞和散養(yǎng)動(dòng)物(freegoinganimal);牛、馬、豬或小豬以及其它農(nóng)場(chǎng)動(dòng)物；狗、貓和其它寵物，尤其是人。根據(jù)待治療的脊椎動(dòng)物的種類、需要所述方法治療的脊椎動(dòng)物的病癥和待治療的具體適應(yīng)癥，可以不同方式進(jìn)行施用。在一個(gè)實(shí)施方案中，以食物補(bǔ)充劑或飼料補(bǔ)充劑(例如飲食補(bǔ)充劑和/或固體食物和/或飲料形式的成分)進(jìn)行施用。其它的實(shí)施方案可以是混懸液或溶液，例如下文中進(jìn)一步描述的飲料。此外，所述形式可以是膠囊或片劑，例如咀嚼片或可溶片(例如泡騰片)以及粉末和本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的其它干形式，例如丸劑(例如微丸)和顆粒?？梢晕改c外、直腸或口服的食物補(bǔ)充劑或飼料補(bǔ)充劑進(jìn)行施用，如上文所述。胃腸外載體包括氯化鈉溶液、林格氏葡萄糖、葡萄糖和氯化鈉、乳酸林格氏液或不揮發(fā)油。所述食物補(bǔ)充劑和飼料補(bǔ)充劑還可被乳化。然后，可將活性治療成分與賦形劑混合，所述賦形劑是可藥用的并且與該活性成分相容。合適的賦形劑是例如水、鹽水、葡萄糖、甘油、乙醇等以及其組合。此外，必要時(shí)，所述組合物可含有少量的能增強(qiáng)活性成分效力的輔助物質(zhì)，例如潤(rùn)濕劑或乳化劑、PH緩沖劑。不同形式的胃腸外用食物補(bǔ)充劑或飼料補(bǔ)充劑可以例如固體食物、液體或凍干或其它干制劑形式提供。其可包含具有不同緩沖劑(例如Tris-HCl、醋酸鹽、磷酸鹽)、pH和離子強(qiáng)度的稀釋劑；添加劑(例如白蛋白或明膠)，以防止表面吸附；去污劑(例如吐溫20、吐溫80、普流尼克F68、膽酸鹽)；增溶劑(例如甘油、聚乙二醇)、抗氧化劑(例如抗壞血酸、偏亞硫酸鈉)；防腐劑(例如Thimerosal、芐醇、尼泊金);填充物質(zhì)(bulkingsubstance)或張力調(diào)節(jié)劑(例如乳糖、甘露醇)；與組合物共價(jià)連接的聚合物(例如聚乙二醇)；與金屬離子的配合物；或者將所述材料摻入到聚合物化合物(例如聚乳酸、聚羥基乙酸、水凝膠等)的顆粒制劑之內(nèi)或之上；或摻入到脂質(zhì)體、微乳、膠束、單層囊泡或多層囊泡、紅細(xì)胞血影或球狀體之上。在一個(gè)實(shí)施方案中，在本發(fā)明任何方法中以飲料或干組合物的形式施用食物補(bǔ)充劑或飼料補(bǔ)充劑。飲料包含有效量的活性成分與營(yíng)養(yǎng)學(xué)上可接受的水溶性載體，例如礦物質(zhì)、維生素、碳水化合物、脂肪和蛋白質(zhì)。如果以干形式提供飲料，則所有這些成分以干形式提供。所提供的準(zhǔn)備用于消費(fèi)的飲料還包含水。最終的飲料溶液還可具有可控的張力和酸度，例如符合上文段落一般推薦的緩沖溶液。ra范圍優(yōu)選為約2-5，尤其是約2-4，以防止細(xì)菌和真菌生長(zhǎng)。還可使用pH約6_8的無(wú)菌飲料。所述飲料可單獨(dú)提供，或與一種或多種治療有效的組合物相組合提供。根據(jù)又一個(gè)實(shí)施方案，作為經(jīng)口服和直腸使用之藥物的藥物制劑可以為片劑、錠劑、膠囊、粉末、水性混懸劑或油性混懸劑、糖漿劑、酏劑、水溶液等的形式，其含有與可藥用載體和/或添加劑(例如可用于本發(fā)明公開(kāi)的方法和用途中的稀釋劑、防腐劑、增溶劑、乳化劑、佐劑和/或載體)混合的活性成分，。此外，本文所用的"可藥用載體"是本領(lǐng)域技術(shù)人員眾所周知的，可包括但不限于0.01-0.05M磷酸鹽緩沖液或0.8%鹽水。另外，這樣的可藥用載體可以是含水或不含水的溶液、混懸液和乳液。非水溶劑的實(shí)例是丙二醇、聚乙二醇、植物油(例如橄欖油)和注射用有機(jī)酯(例如油酸乙酯)。含水載體包括水、醇/水溶液、乳液或混懸液，包括鹽水和緩沖介質(zhì)。胃腸外載體包括氯化鈉溶液、林格氏液葡萄糖、葡萄糖和氯化鈉、乳酸林格氏液或不揮發(fā)性油。還可存在防腐劑和其它添加劑，例如抗微生物劑、抗氧化劑、螯合劑、惰性氣體等。在氨基酸或二肽或三肽與a-酮戊二酸形成的酰胺中，所述氨基酸或形成二肽或三肽的氨基酸可以是作為天然肽中成分存在的任意氨基酸。這同樣適用于a-酮戊二酸或其鹽與至少一種氨基酸的可藥用物理混合物。優(yōu)選地，所述氨基酸選自精氨酸、鳥氨酸、亮氨酸、異亮氨酸和賴氨酸。所述氨基酸優(yōu)選以其L-構(gòu)型使用。a-酮戊二酸與氨基酸、二肽或三肽形成的酰胺的實(shí)例包括但不限于a-酮戊二酸與選自谷胺酰胺、谷氨酸、精氨酸、鳥氨酸、賴氨酸、脯氨酸、異亮氨酸和亮氨酸的氨基酸所形成的酰胺；a_酮戊二酸與谷胺酰胺和谷氨酸、精氨酸、鳥氨酸、賴氨酸、脯氨酸、異亮氨酸和亮氨酸中任一種的二肽所形成的酰胺；以及a-酮戊二酸與谷氨酸和精氨酸、鳥氨酸、賴氨酸、脯氨酸、異亮氨酸和亮氨酸中任一種的二肽所形成的酰胺。a-酮戊二酸或其鹽與至少一種氨基酸的物理混合物的實(shí)例包括但不限于選自a_酮戊二酸及其鈉鹽、鉀鹽、鈣鹽和鎂鹽的至少一種與谷胺酰胺、谷氨酸、精氨酸、鳥氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、賴氨酸和脯氨酸中任一種以及所述氨基酸之任意組合的混合物?！愣裕鑫锢砘旌衔镏衋-酮戊二酸或其鹽與氨基酸的摩爾比為1:0.01至i:2，優(yōu)選為i:o.i至i:1.5，最優(yōu)選為i:o.2至i:i.o。根據(jù)待使用的活性成分；待治療的病癥；待治療患者的年齡、性別、體重等，待施用的劑量可不同，但是，劑量范圍通常為l-1000mg/kg體重/天，或10-400mg/kg體重/天，優(yōu)選10-100mg/kg體重/天。上述的實(shí)施方案可彼此自由組合。因此，對(duì)上文所述的和權(quán)利要求中的細(xì)節(jié)和特殊情況作適當(dāng)修改后，同樣適用于本發(fā)明的任意其它實(shí)施方案。雖然根據(jù)所公開(kāi)的某些實(shí)施方案描述了本發(fā)明，但是技術(shù)人員可以預(yù)見(jiàn)到未具體描述的其它實(shí)施方案、改動(dòng)或組合，這些也包含在所附權(quán)利要求的范圍內(nèi)。本發(fā)明所引用的所有參考文獻(xiàn)在此通過(guò)引用以整體并入本文。本文所用的表述"包含"、"包括"、"含有"應(yīng)當(dāng)理解為包括但不限于所述項(xiàng)目。現(xiàn)在通過(guò)實(shí)施例進(jìn)一步舉例說(shuō)明本發(fā)明，所述實(shí)施例不應(yīng)當(dāng)解釋為限制本發(fā)明的范圍。實(shí)施例實(shí)施例1本研究的目的在于解決1)大鼠中將食管與十二指腸相連的旁路手術(shù)對(duì)動(dòng)脈彈性的影響；2)該手術(shù)對(duì)血壓的長(zhǎng)期影響；以及3)AKG攝入在逆轉(zhuǎn)旁路手術(shù)所致任何動(dòng)脈彈性改變方面的任何有益作用。動(dòng)物和主動(dòng)脈的準(zhǔn)備使用于隆德大學(xué)比較生理學(xué)系的動(dòng)物設(shè)施中飼養(yǎng)的成年雄性SpragueDawley大鼠。在相同條件下飼養(yǎng)動(dòng)物，12/12光周期，動(dòng)物體重為479士5g。大鼠隨意進(jìn)食嚙齒動(dòng)物的粒料(Altrominno.1314Spezialfutterwerke，Lage，德國(guó))并且自由飲水。如下將大鼠分組旁路手術(shù)，不施用AKG(B-AKG)(n=6);旁路手術(shù)，施用AKG(B+AKG)(n=ll);假手術(shù)，不施用AKG(S-AKG)(n=12);假手術(shù)，施用AKG(S+AKG)(n=12)。將大鼠暴露于95%C02中并用頸椎脫臼法處死大鼠。根據(jù)當(dāng)?shù)睾蛧?guó)家規(guī)定處死大鼠。仔細(xì)清洗剝離的腹主動(dòng)脈部分(位于右髂總動(dòng)脈和左髂總動(dòng)脈前方)以除去粘附組織。將主動(dòng)脈切成約6-9mm的段，其靜止時(shí)的直徑是3-4mm，然后將每段的一端牢固地連接在力傳感器上，另一端與固定件上的金屬釘相連，如Harrison等R印rodFertilDev.1997;9(7):731-40，HarrisonandFlatmanAmJPhysiol.1999Dec;277(6Pt2):R1646-53中所述。主動(dòng)脈段的重量范圍為8_25mg(平均為14.32mg)，平均直徑為3.75±0.08mm。將主動(dòng)脈節(jié)段浸在充氧的恒溫控制箱(37°C)中，所述控制箱的內(nèi)部深度和直徑分別為5.5和3.2cm，盛有44ml磷酸鹽緩沖液(0.15MPBS，pH7.4)，其中含有136.91mMNaCl、2.68mMKC1、8.08mMNa2HP04以及1.66mMNaH2P04。利用FT03力位移傳感器(GrassInstrument,WestWarwick,RI)測(cè)力，所述力位移傳感器與自制的橋式放大器相連，所述橋式放大器與8SPowerLabA/D轉(zhuǎn)換器(ADInstruments,Chalgrove，Oxfordshire,UK)連接。所述轉(zhuǎn)換器的功能范圍(functionalrange)為0-0.05kg，其中置信力(reliableforce)為2mg，等于所述功能范圍的0.004%。所述8SPowerLabA/D轉(zhuǎn)換器與運(yùn)行Chart5v.5.4軟件(ADInstr咖ents，澳大利亞)的iBookG4相連。以每秒40000個(gè)數(shù)據(jù)樣品的采樣速度(40KHz)進(jìn)行數(shù)據(jù)記錄，所述放大器的輸入阻抗為200MQ差分。力的測(cè)定將主動(dòng)脈節(jié)段垂直懸掛，一式三份。利用固定在前置放大單元上的補(bǔ)償度盤將未張拉的主動(dòng)脈節(jié)段的記錄信號(hào)調(diào)節(jié)至零。然后對(duì)每個(gè)主動(dòng)脈節(jié)段施加約5次逐步增加的張力(每次為約0.09N)，直到達(dá)到0.49N的最終最大張力(利用FT03Grass力傳感器測(cè)定)。這一最終張力水平遠(yuǎn)未接近在主動(dòng)脈節(jié)段中記錄的生理最大力。然后使主動(dòng)脈節(jié)段徹底松弛，然后再重復(fù)施加逐步增加的張力2次。隨后取出主動(dòng)脈節(jié)段，稱重。采用每秒1000個(gè)數(shù)據(jù)樣品的記錄速度。在逐步增加的張力之后，可見(jiàn)記錄圖立即出現(xiàn)非常小的下降，因?yàn)橹鲃?dòng)脈組織表現(xiàn)出一定程度的彈性回縮。測(cè)量這種記錄圖中經(jīng)過(guò)單位時(shí)間的下降。張力計(jì)算拉普拉斯方程假設(shè)空?qǐng)A柱體壁上的張力(T)與圓柱體半徑(r)和圓柱體內(nèi)的流動(dòng)所引起的對(duì)壁的壓力(P)成正比，從而T二pXr。如果假設(shè)主動(dòng)脈節(jié)段壁上的張力等于力傳感器所記錄的作為手動(dòng)拉伸結(jié)果的張力，那么導(dǎo)致這種張力增加的壓力可利用拉普拉斯方程和所測(cè)量的每個(gè)主動(dòng)脈節(jié)段的半徑來(lái)計(jì)算。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析數(shù)據(jù)以平均值±SE表示。利用student配對(duì)t_檢驗(yàn)和額外的高斯正態(tài)分布檢驗(yàn)來(lái)檢測(cè)平均值之間差異的統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性。發(fā)現(xiàn)數(shù)據(jù)呈正態(tài)分布并且方差齊性。認(rèn)為P值〉0.05的差異不具有顯著性。結(jié)果張力和壓力測(cè)定通常，在完全張拉時(shí)，施加給主動(dòng)脈節(jié)段的張力為約0.034N/mg濕重(0.49N最大張力/14.32mg平均組織重量)。因此，利用拉普拉斯方程和1.87mm的平均主動(dòng)脈半徑，所得到的壓力為0.018kPa級(jí)別。這樣的壓力增加為通常在人動(dòng)脈中所測(cè)(10kPa)的0.18%，為在大鼠中所測(cè)(13-14kPa)的約0.14%(Carroll等2006;Duka等2006)。手動(dòng)步驟的平均張力增加為0.09N(4.95X10—、/mg濕重)，通常，主動(dòng)脈節(jié)段的回縮力為0.015N，為手動(dòng)施加的張力的約16%。假手術(shù)對(duì)照大鼠對(duì)照的主動(dòng)脈的彈性顯著高于旁路手術(shù)大鼠(P=0.007;B-AKG組和S-AKG組分別為1.9X10—7±0.2X10—7N/ms/mg濕重禾口4.9X10—7±0.8X10—7N/ms/mg濕重)。在對(duì)照組中，AKG攝入對(duì)此現(xiàn)象沒(méi)有影響(P=0.44)。旁路手術(shù)大鼠攝入和未攝入AKG的旁路手術(shù)大鼠的主動(dòng)脈彈性均顯示低于對(duì)照大鼠(P=0.037;B+AKG組和S-AKG組分別為3.IX10—7±0.4X10—7N/ms/mg濕重和4.9X10—7±0.8X10—/ms/mg濕重)。在旁路手術(shù)大鼠中，AKG攝入具有顯著影響，使動(dòng)脈彈性提高至對(duì)照大鼠與旁路手術(shù)大鼠(B-AKG)之間的水平；P=0.047;B-AKG組和B+AKG組分別為1.9X10—7±0.2X10—7N/ms/mg濕重和3.1X10—7±0.4X10—7N/ms/mg濕重(見(jiàn)圖1)。拉伸系列在所研究的所有動(dòng)脈中，最初的拉伸系列(例如施加張力，然后松弛)導(dǎo)致在隨后施加張力的情形下彈性降低。此作用可與預(yù)計(jì)出現(xiàn)血壓突然增加的損傷種類相比較(見(jiàn)圖2)。討論本研究結(jié)果清楚地表明，旁路手術(shù)對(duì)動(dòng)脈彈性具有不利的影響。此外，據(jù)我們所知，這是首次記載這樣的手術(shù)可導(dǎo)致動(dòng)脈彈性顯著改變。利用與血壓突然升高相當(dāng)?shù)睦煲部砂l(fā)生相似的改變。旁路手術(shù)在此實(shí)驗(yàn)中，旁路手術(shù)大鼠均不肥胖，或與假手術(shù)對(duì)照組存在任何不同。兩組均進(jìn)行手術(shù)，所以與手術(shù)相關(guān)的任何應(yīng)力對(duì)它們來(lái)說(shuō)是共有的。然而，就使食管與十二指腸連接的手術(shù)旁路術(shù)而言，組與組之間不同。此類型的旁路手術(shù)可與Roux-en-Y胃旁路手術(shù)相比較，在所述Roux-en-Y胃旁路手術(shù)中，以允許一部分胃(近端部分)、胰腺、膽和十二指腸分泌的方式繞過(guò)大部分胃和十二指腸。這是目前選擇減肥手術(shù)來(lái)治療病態(tài)肥胖的最常見(jiàn)方法(Adrian等2003)。預(yù)計(jì)胃旁路手術(shù)能限制食物攝入，從而防止肥胖。此效果非常明顯(Coatesetal2004，CowanandBuffington1998，F(xiàn)ernstrometal2006)，但是還必須考慮生理后果。除了作為食物貯庫(kù)和機(jī)械性分解食物以外，胃還是消化和分泌的場(chǎng)所。當(dāng)食物進(jìn)入胃時(shí)，有一個(gè)來(lái)自唾液的消化酶仍然起作用的階段。在消化中缺少該階段可尤其影響淀粉的分解。盡管這樣使產(chǎn)生的能量較少，但是在消化中這不應(yīng)當(dāng)是必不可少的或出現(xiàn)大問(wèn)題。一般而言，對(duì)于食物顆粒的機(jī)械分解而言也是這樣?！獋€(gè)更嚴(yán)重的方面是失去胃分泌。胃中的主要成分是胃蛋白酶和脂肪酶、內(nèi)因子和鹽酸。胃蛋白酶是蛋白質(zhì)分解必不可少的，該酶需要鹽酸將分泌的胃蛋白酶原激活為胃蛋白酶。因此，缺少胃可嚴(yán)重影響氨基酸吸收，造成氨基酸缺乏。另一個(gè)方面是與酶結(jié)合的礦物質(zhì)和維生素的釋放。如果微量營(yíng)養(yǎng)素不釋放出來(lái)，那么它們不能沿消化道進(jìn)一步吸收。來(lái)自胃的脂肪酶分解甘油三酯，但是即使這不發(fā)生，甘油三酯仍然會(huì)遇到來(lái)自胰腺的脂肪酶，對(duì)脂肪酸的需求應(yīng)該能滿足。然而，在沒(méi)有胃的情形下，對(duì)胰腺分泌或膽汁的調(diào)節(jié)可能下降，因?yàn)檫M(jìn)入到十二指腸的溶液的酸度調(diào)節(jié)這種分泌。胃還調(diào)節(jié)在任意指定的時(shí)間進(jìn)入到十二指腸的食物量。轉(zhuǎn)運(yùn)取決于碳水化合物、蛋白質(zhì)或脂肪的含量，其中在任意指定的時(shí)間通過(guò)的脂肪的量最小，碳水化合物的量最大。此機(jī)制保證有效消化并且調(diào)節(jié)通過(guò)腸的運(yùn)動(dòng)速度。借助旁路手術(shù)，該機(jī)制被消除，總體消化受損。隨著酸度和流速的改變，某些成分可能吸收不良或吸收減少。維生素B12是從蛋白質(zhì)中釋放的，內(nèi)因子在胃中分泌。內(nèi)因子對(duì)回腸中B12的吸收是必不可少的。正常情況下，維生素B12含量豐富，但是手術(shù)后，突然就可能不是這樣。還報(bào)道，在人中，70X旁路手術(shù)患者在手術(shù)后隨訪時(shí)出現(xiàn)維生素B12缺乏(Lynch等2006，Shah等2006)。這些作者還報(bào)道了貧血，這可能部分是由于鐵缺乏(當(dāng)環(huán)境酸性不足時(shí)尤其是從蛋白質(zhì)中釋放較少造成的)引起，部分是由于維生素缺乏引起。還報(bào)道了旁路手術(shù)后鈣和葉酸缺乏(Lynch2006，Parkes2006，Shah2006)。不清楚這是否是由于沒(méi)有十二指腸而造成的吸收不良引起的，還是由于這兩種物質(zhì)的利用度更低造成的。在本發(fā)明的大鼠研究中，十二指腸應(yīng)當(dāng)能起作用，但是流動(dòng)性和PH的改變可影響?zhàn)B分在其余腸中的分解，并表現(xiàn)不同的吸收模式。高滲物質(zhì)流入腸道中可顯著影響流動(dòng)性。這得到以下假設(shè)的支持高滲食物流入小腸中可能是一些胃旁路患者中"傾倒綜合征"(可導(dǎo)致嘔吐)的原因(Lynch等2006)。在我們的研究中，利用假手術(shù)大鼠作為對(duì)照組來(lái)考慮了手術(shù)的應(yīng)激作用。此外，在手術(shù)之前，任何大鼠均無(wú)肥胖或具有高血壓，我們可假設(shè)在旁路手術(shù)之前動(dòng)脈具有正常的彈性。在人中，旁路手術(shù)后出現(xiàn)血壓降低(Coates，Buffington1998，F(xiàn)ernstrometal2006，F(xiàn)oleyetal1992)。這很可能主要是由于體重減輕引起的，但是也可能部分地由于代謝和激素平衡的改變?cè)斐?。因此，在我們的旁路手術(shù)大鼠中出現(xiàn)的動(dòng)脈彈性改變不大可能是高血壓造成的，因?yàn)轭A(yù)計(jì)血壓稍微降低或保持正常。手術(shù)后，我們的測(cè)量清楚地表明動(dòng)脈彈性降低?，F(xiàn)在的問(wèn)題是手術(shù)后發(fā)生了什么？什么可影響動(dòng)脈壁？Gokce等(2005)報(bào)道了通過(guò)體重減輕來(lái)長(zhǎng)期提高內(nèi)皮依賴性流動(dòng)所介導(dǎo)的舒張，在胃旁路手術(shù)患者中，此提高顯著好于藥物治療的重量減輕。在我們的手術(shù)之前不超重的大鼠中，我們僅考查機(jī)體吸收營(yíng)養(yǎng)物的變化和代謝與激素平衡的影響?？捎绊懷獕旱年?yáng)離子(例如鈣和鉀)在很大程度上與帶電荷的蛋白質(zhì)結(jié)合，并且很可能以低于正常的濃度存在。可能在其它方面得到解釋。如果蛋白質(zhì)不被分解或僅僅部分分解，那么運(yùn)輸?shù)侥c的氨基酸將不足。這必然影響蛋白質(zhì)的轉(zhuǎn)換。在動(dòng)脈壁中，彈性部分地歸因于所述壁中的結(jié)締組織。該組織始終在重塑，如果受到損傷，其將被修復(fù)。如果用于重塑或修復(fù)的氨基酸的量不足，那么隨著時(shí)間的推移，壁將失去其彈性。造成此結(jié)果的另一個(gè)因素可能是由于消化道發(fā)出的信號(hào)不同而引起不同的激素平衡。這可能歸因于導(dǎo)致以下情況的相同原因在胃旁路的人中，可見(jiàn)骨轉(zhuǎn)換增加并且骨吸收增加，然后骨質(zhì)量降低。部分原因可能是健康轉(zhuǎn)換所需的蛋白質(zhì)不能被胃旁路大鼠消化。較高的骨轉(zhuǎn)化還證明激素調(diào)節(jié)的循環(huán)被重新編程。如果彈性降低，將是彈性纖維的結(jié)構(gòu)或百分比導(dǎo)致了這種總體改變。拉伸作用血管壁內(nèi)的流體壓力P等于所述壁的張力T除以曲率半徑r再加上外壓pn，即P=pn+T(l/r)，如拉普拉斯定律所定義。如果選擇忽略外壓和來(lái)自周圍組織的任何支持，僅處理合理尺寸的圓柱體靜脈或動(dòng)脈，那么所述方程可簡(jiǎn)化為P=T/r。此外，眾所周知的是，所形成的張力取決于血管壁的厚度，也就是說(shuō)，取決于構(gòu)成血管壁的膜和肌肉組織的量。因此，如果維持恒定的壓力，那么根據(jù)簡(jiǎn)化的方程預(yù)計(jì)，血管壁的厚度應(yīng)當(dāng)隨血管半徑而改變。然而，現(xiàn)實(shí)中，循環(huán)系統(tǒng)內(nèi)的壓力不是恒定的，實(shí)際上其由于摩擦損失而下降。但是，盡管如此，較大和較小血管在一定時(shí)期仍符合簡(jiǎn)化方程設(shè)定的規(guī)律，其中壁厚與血管尺寸成比例。AKG作用已知某些氨基酸在腸壁內(nèi)代謝_指出將AKG優(yōu)先用于AA，因此，與旁路不施用AKG的旁路大鼠相比較而言，在旁路大鼠中補(bǔ)充AKG可增加AA吸收。結(jié)論該研究的結(jié)果表明，此類型的旁路手術(shù)顯著影響動(dòng)脈彈性。AKG攝入對(duì)旁路手術(shù)大鼠中動(dòng)脈彈性具有正影響，但是對(duì)照中不具有此正影響。在對(duì)照和旁路手術(shù)大鼠中，突發(fā)的高被動(dòng)張力對(duì)動(dòng)脈彈性都具有持久的作用，使血管更不易出現(xiàn)血壓突然改變。實(shí)施例2方法本研究的目的是闡明實(shí)施例1的研究中所觀察到的作用是否局限于已進(jìn)行胃手術(shù)的受試者。現(xiàn)在，研究了由于更一般的原因(即年齡增長(zhǎng))而需要增加動(dòng)脈彈性的實(shí)驗(yàn)受試者。當(dāng)?shù)貍惱碓S可本研究獲得了隆德大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)倫理審查委員會(huì)的批準(zhǔn)(倫理許可M14-05)，并且是根據(jù)涉及實(shí)驗(yàn)動(dòng)物保護(hù)的歐洲共同體規(guī)則進(jìn)行的。動(dòng)物和主動(dòng)脈的準(zhǔn)備將雌性NMRI小鼠(實(shí)驗(yàn)開(kāi)始時(shí)為50周齡)飼養(yǎng)在瑞典隆德大學(xué)的細(xì)胞和有機(jī)體生物學(xué)系的動(dòng)物設(shè)施中。在相同條件下飼養(yǎng)動(dòng)物，12/12小時(shí)光周期。小鼠隨意進(jìn)食嚙齒動(dòng)物的粒料(Altrominno.1314Spezialfutterwerke，Lage，德國(guó))并且自由飲水。將小鼠隨機(jī)分到三組中的一個(gè)組中，飼養(yǎng)182天，直到它們達(dá)到76周齡，此時(shí)它們的體重為28±7g。第一組中的小鼠進(jìn)食嚙齒動(dòng)物粒料和(2%w/v)Na2-AKG2H20(n=6)，而第二組中的小鼠進(jìn)食嚙齒動(dòng)物粒料和(2%w/v)Ca-AKGH20(n=6)。分到第三組中的小鼠僅僅進(jìn)食嚙齒動(dòng)物粒料，被認(rèn)為是對(duì)照組(n=6)。作為食物補(bǔ)充劑食用的AKG水平為小鼠的自愿食物攝入量的2%，每天的食物攝入量為體重的約10-15%。將小鼠暴露于95%C02中進(jìn)行麻醉，采用頸椎脫臼法處死小鼠。仔細(xì)清洗剝離的腹主動(dòng)脈部分(位于右髂總動(dòng)脈和左髂總動(dòng)脈前方)以除去粘附組織。將主動(dòng)脈切成約4.5mm的段，其中靜止時(shí)的直徑是lmm，然后將各段的一端牢固地連接在力傳感器上，另一端與固定件上的金屬釘相連，如Harrisonetal.R印rodFertilDev.1997;9(7):731-40，HarrisonandFlatmanAmJPhysiol.1999Dec;277(6Pt2):R1646-53中所述。利用能記錄重量的天平(精確至0.Olmg)稱量主動(dòng)脈節(jié)段的重量平均為2.75mg。將主動(dòng)脈節(jié)段浸在充氧氣的恒溫控制箱(37°C)中，所述控制箱的內(nèi)部深度和直徑分別為5.5和3.2cm，盛有44ml磷酸鹽緩沖液(0.15MPBS，pH7.4)，其中含有136.91mMNaCl、2.68mMKC1、8.08mMNa2HP04以及1.66mMNaH2P04。利用FT03力位移傳感器(Grasslnstrument,WestWarwick,RI)測(cè)力，所述力位移傳感器與自制的橋式放大器相連，所述橋式放大器的接口與8SPowerLabA/D轉(zhuǎn)換器(ADInst進(jìn)ents，Chalgrove，Oxfordshire,UK)連接。所述轉(zhuǎn)換器的功能范圍為0-0.05kg，其中置信力為2mg，等于所述功能范圍的0.004%。所述8SPowerLabA/D轉(zhuǎn)換器與運(yùn)行Chart5v.5.4軟件(ADInstruments，澳大利亞)的iBookG4running相連。以每秒40.000個(gè)數(shù)據(jù)樣品的采樣速度進(jìn)行數(shù)據(jù)記錄(40KHz)，所述放大器的輸入阻抗為200MQ差分。力的測(cè)定將主動(dòng)脈節(jié)段垂直懸掛，一式三份。利用固定在前置放大單元上的補(bǔ)償度盤將未張拉的主動(dòng)脈節(jié)段的記錄信號(hào)調(diào)節(jié)至零。然后對(duì)每個(gè)主動(dòng)脈節(jié)段施加約5次逐步增加的張力(每次為約0.09N)，直到達(dá)到0.49N的最終最大張力(利用FT03Grass力傳感器測(cè)定)。這一最終張力水平遠(yuǎn)未接近在主動(dòng)脈節(jié)段中記錄的生理最大力。然后使主動(dòng)脈節(jié)段徹底松弛，然后緊密地再重復(fù)施加逐步增加的張力2次。隨后取出主動(dòng)脈節(jié)段，稱重。在逐步增加張力之后，可見(jiàn)記錄圖立即出現(xiàn)非常小的下降，因?yàn)橹鲃?dòng)脈組織表現(xiàn)出一定程度的彈性回縮。這種記錄圖的下降是隨時(shí)間利用作為Chartv.5.4軟件(ADInstruments，澳大利亞)一部分的平均斜率計(jì)算來(lái)測(cè)量的。平均斜率(Pg/ms)是圖選擇中的數(shù)據(jù)點(diǎn)的時(shí)間導(dǎo)數(shù)，可由最佳擬合的最小方差線計(jì)算。張力計(jì)算拉普拉斯方程假設(shè)空?qǐng)A柱體壁上的張力(T)與圓柱體半徑(r)和圓柱體內(nèi)的流動(dòng)所引起的對(duì)壁的壓力(P)成正比，從而T二pXr。如果假設(shè)主動(dòng)脈節(jié)段壁上的張力等于力傳感器所記錄的作為手動(dòng)拉伸結(jié)果的張力，那么導(dǎo)致這種張力增加的壓力可利用拉普拉斯方程和所測(cè)量的每個(gè)主動(dòng)脈節(jié)段的半徑來(lái)計(jì)算。因此，將由每個(gè)主動(dòng)脈樣品得到的平均斜率g/ms)的測(cè)量值轉(zhuǎn)換為牛頓(N/ms)，然后根據(jù)樣品重量進(jìn)行調(diào)整，得到以N/ms/mg濕重表示的最終彈性回縮力值。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析數(shù)據(jù)以平均值士SE表示。利用單因素ANOVA和額外的高斯正態(tài)分布檢驗(yàn)來(lái)檢測(cè)平均值之間差異的統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性。發(fā)現(xiàn)數(shù)據(jù)呈正態(tài)分布并且方差齊性。認(rèn)為P值X).05的差異不具有顯著性。結(jié)果張力測(cè)定通常，當(dāng)完全拉伸時(shí)，施加給主動(dòng)脈節(jié)段的張力為0.178N/mg濕重(0.49N最大張力/2.75mg平均組織重量)。因此，利用拉普拉斯方程和1.Omm的平均主動(dòng)脈半徑，所得到的壓力為O.178kPa的級(jí)別。手動(dòng)步驟的平均張力增加為0.09N(4.95X10—、/mg濕重)，通常，主動(dòng)脈節(jié)段的回縮力為0.015N，為手動(dòng)施加的張力的約16%。對(duì)照小鼠就第一個(gè)系列和第二個(gè)系列的拉伸而言，對(duì)照的主動(dòng)脈彈性分別為3.3X10—5±7.8X10—7N/ms/mg濕重和3.4X10—6±9.4X10—7N/ms/mg濕重。第二個(gè)系列與第一個(gè)系列相比，重復(fù)拉伸方案導(dǎo)致彈性回縮力下降約90%(圖5)。Na-AKG小鼠(A)就第一個(gè)系列和第二個(gè)系列的拉伸而言，攝入Na-AKG小鼠的主動(dòng)脈節(jié)的彈性分別為4.3X10—5±1.6X10—6N/ms/mg濕重禾口3.7X10—6±1.1X10—6N/ms/mg濕重。與對(duì)照小鼠相比較而言，Na-AKG攝入對(duì)動(dòng)脈彈性具有顯著影響(見(jiàn)圖4)。第二個(gè)系列與第一個(gè)系列相比，重復(fù)拉伸方案導(dǎo)致彈性回縮力下降91%(圖5)。Ca-AKG小鼠(B)就第一個(gè)系列和第二個(gè)系列的拉伸而言，攝入Ca-AKG小鼠的主動(dòng)脈節(jié)的彈性分別為6.4X10—5±2.7X10—6N/ms/mg濕重和3.8X10—6±1.2X10—6N/ms/mg濕重。與對(duì)照小鼠相比較而言，Ca-AKG攝入對(duì)動(dòng)脈彈性具有顯著影響(見(jiàn)圖4)。第二個(gè)系列與第一個(gè)系列相比，重復(fù)拉伸方案導(dǎo)致彈性回縮力下降94%(圖5)。拉伸系列和動(dòng)脈堅(jiān)韌性(robustness)在所研究的所有動(dòng)脈中，最初的拉伸系列(例如施加張力，然后松弛)導(dǎo)致后續(xù)施加張力時(shí)的彈性下降。此作用可與預(yù)計(jì)使血壓突然升高的損傷類型相比較(見(jiàn)圖5)。表1:動(dòng)脈節(jié)段對(duì)拉伸的堅(jiān)韌性。承受逐漸達(dá)到的0.49N的最大張力而未發(fā)生破裂的所切割主動(dòng)脈節(jié)段的連續(xù)拉伸數(shù)(一式三份)。<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>討論本研究的結(jié)果清楚地表明，a-酮戊二酸鹽處理對(duì)老齡小鼠的動(dòng)脈彈性具有有益作用。此外，據(jù)我們所知，這是首次報(bào)道能以大動(dòng)脈的硬度為目標(biāo)的治療。動(dòng)物在本研究中，選擇其周齡可與老齡人受試者的年齡具有可比性的成年動(dòng)物。在本研究中，在從小鼠中剝離主動(dòng)脈時(shí)，很明顯發(fā)生了動(dòng)脈沉積，使得主動(dòng)脈看上去幾乎為白色至半透明的，甚至在剝離后，它們?nèi)员３止軤钚螒B(tài)。血壓和張力在6月齡及以上的大鼠中，記錄通過(guò)腹主動(dòng)脈或髂動(dòng)脈或頸動(dòng)脈插管而獲得的血壓，平均值為119mmHg(上限為150mmHg，下限為92mmHg)(Durant，1927)。該作者還描述了年齡與直到6月齡的血壓之間的關(guān)聯(lián)，6個(gè)月后記錄的血壓不再進(jìn)一步升高，盡管體重進(jìn)一步增加。小型嚙齒動(dòng)物中的此血壓值非常接近人受試者的靜息血壓，收縮壓通常為120mmHg(16kPa)。此外，在本研究中動(dòng)脈節(jié)段的壓力升高值為在人動(dòng)脈中通常表現(xiàn)出的1.8%，為在大鼠中所測(cè)量的(13-14kPa)約1.4%(Carroll等2006;Duka等2006)。主動(dòng)脈層(aorticmedia)中含有成層的平滑肌細(xì)胞，它們沿切線方向與彈性層連接；通過(guò)改變彈性纖維與膠原纖維之間力的分布，平滑肌緊張性的改變提供了硬度的動(dòng)態(tài)或功能性調(diào)節(jié)(McEniery等2007)。實(shí)際上，在較低水平的動(dòng)脈壓下，主動(dòng)脈壁內(nèi)產(chǎn)生的應(yīng)力主要由彈性纖維承擔(dān)，而在較高水平的動(dòng)脈壓下，所述應(yīng)力通常由更具剛性的膠原纖維承擔(dān)。因此，老化的一個(gè)作用是在較低水平的動(dòng)脈壓力下使膠原纖維參與，結(jié)果同時(shí)升高脈壓。動(dòng)脈中所產(chǎn)生的張力取決于血管壁的厚度，也就是說(shuō)，取決于壁中含有的結(jié)締組織和肌肉組織的量。因此，如果維持恒定的壓力，那么拉普拉斯方程預(yù)測(cè)血管壁的厚度應(yīng)當(dāng)隨血管半徑而變化。然而，現(xiàn)實(shí)中，循環(huán)系統(tǒng)內(nèi)的壓力不是恒定的，實(shí)際上其通過(guò)摩擦損失而降低。盡管如此，在一定時(shí)間內(nèi)，根據(jù)簡(jiǎn)化方程，較大和較小血管符合拉普拉斯定律。拉普拉斯方程表明，血管壁內(nèi)的流體壓P等于壁的張力T除以曲率半徑r再加上外壓Pn，即P=Pn+T(l/r)。如果選擇忽略外壓和來(lái)自周圍組織的任何支持，僅處理合理尺寸的圓柱體動(dòng)脈，那么所述方程可簡(jiǎn)化為P=T/r。在本研究中，主動(dòng)脈節(jié)段是從腹主動(dòng)脈(在右髂總動(dòng)脈和左髂總動(dòng)脈前方)中剝離出來(lái)的，并且其直徑使它們滿足拉普拉斯定律的要求。老化的動(dòng)脈老化以不同方式影響生物體中器官、組織和細(xì)胞類型，其可以多種方式被認(rèn)為是功能下降的微分速率(Calabresi等2007)。在大動(dòng)脈的血管壁內(nèi)，出現(xiàn)與年齡有關(guān)的結(jié)構(gòu)改變，包括中膜的硬化和加厚以及內(nèi)腔直徑增大(Marin&Rodriguez-Martinez，1999;Dao等2005)，并且這些改變沿動(dòng)脈樹(shù)常常是不同的(Hajdu等1990;Moreau等1998;Laurant等2004)。在老齡大鼠的主動(dòng)脈中，平滑肌細(xì)胞數(shù)量改變、膠原沉積增加以及彈性蛋白的結(jié)構(gòu)改變均是特征性的表現(xiàn)(Jacob,2003;Dao等2005)。實(shí)際上，許多研究報(bào)道了平滑肌細(xì)胞數(shù)量隨著年齡增長(zhǎng)而下降(Cliff，1970;0rlandietal.1993)，動(dòng)脈中I型和III型膠原增加以及彈性蛋白密度相對(duì)降低(Jacob,2003;Dao等2005;Marin，1995)。值得注意的是，本研究所采用的拉伸方法表明，第二個(gè)系列的重復(fù)拉伸的彈性回縮程度比第一個(gè)系列的重復(fù)拉伸弱得多。這一點(diǎn)表明并強(qiáng)調(diào)，老齡主動(dòng)脈節(jié)段具備或缺少應(yīng)對(duì)相當(dāng)于O.178kPa血壓提高的相對(duì)溫和拉伸期的能力。因此，第二拉伸可看作堅(jiān)韌性的指標(biāo)，在此情形下，所述堅(jiān)韌性似乎不存在于老齡小鼠主動(dòng)脈節(jié)段中。在人中，到60歲時(shí)，每一個(gè)體平均發(fā)生二十億次主動(dòng)脈應(yīng)力循環(huán)(平均心率X年齡)(McEnieryetal.2007)，其中由這些應(yīng)力循環(huán)引起的損傷需要立即調(diào)節(jié)和修復(fù)，涉及血管壁的彈性蛋白、膠原和平滑肌組分。在本研究中，不可能調(diào)節(jié)平滑肌緊張性，也沒(méi)有任何機(jī)會(huì)來(lái)修復(fù)彈性蛋白和膠原纖維，因此事實(shí)是在第一個(gè)系列拉伸后，對(duì)照主動(dòng)脈失去了幾乎90%彈性回縮力(N/ms/mg濕重)，對(duì)AKG處理的小鼠而言，發(fā)現(xiàn)在第二個(gè)系列中彈性回縮水平相似，這表明了老齡小鼠的大血管回縮力是多么脆弱。動(dòng)脈彈性回縮力和AKG雖然已經(jīng)報(bào)道傳統(tǒng)的抗高血壓劑會(huì)降低動(dòng)脈硬化(主要借助降低平均血壓的間接作用)，但外周動(dòng)脈對(duì)隨年齡所致硬化的相對(duì)不敏感通常被歸因于彈性蛋白與平滑肌和膠原的比例低得多，雖然其也可反映其它生物學(xué)過(guò)程，例如動(dòng)脈自身重塑的能力(McEniery等2007)。a-酮戊二酸是Krebs循環(huán)中的限速中間體，其在細(xì)胞能量代謝中起到關(guān)鍵作用。它還發(fā)揮谷氨酸源和谷胺酰胺源的功能，并剌激蛋白質(zhì)合成和抑制蛋白質(zhì)降解(Hammarqvist等，1991)。就膠原代謝而言，AKG不僅用作脯氨酰_4_水解酶(其催化4_羥基脯氨酸的形成，所述4-羥基脯氨酸是形成膠原三螺旋所必需的)的輔因子，而且還通過(guò)增加來(lái)自谷氨酸的脯氨酸池來(lái)促進(jìn)膠原合成(Son等2007)。與Na-AKG組相比較而言，Ca-AKG組的作用更好，這可通過(guò)Ca-AKG鹽中所提供的AKG可用性更長(zhǎng)久來(lái)解釋。Ca鹽起到緩慢釋放AKG離子的作用，控制AKG離子在腸腔的出現(xiàn)，因?yàn)槠淙芙舛葹?g/100ml，而Na-AKG的溶解度為Ca-AKG的50倍。因此，Na-AKG形式的AKG陰離子可更快被利用。在此情形下，當(dāng)血液水平超過(guò)約lOyg/ml時(shí)，大部分AKG簡(jiǎn)單地轉(zhuǎn)化為能量。腸內(nèi)施用Na-AKG后，AKG的血液水平可容易地超過(guò)10iig/ml。腸內(nèi)施用Ca-AKG后，則不會(huì)或很少會(huì)觀察到此現(xiàn)象。當(dāng)以Ca-AKG形式提供AKG時(shí)，其釋放緩慢并且釋放時(shí)間更長(zhǎng)，因此有更多時(shí)間來(lái)轉(zhuǎn)化為脯氨酸和其它氨基酸，而不是轉(zhuǎn)化為能量。近來(lái)，AKG被認(rèn)為是G蛋白偶聯(lián)受體(CPR99)的天然配體，目前已知所述受體在腎、睪丸和平滑肌中表達(dá)(He等，2004)。作為G蛋白偶聯(lián)受體的配體，AKG可將TCA循環(huán)中間體與代謝狀態(tài)和蛋白質(zhì)/膠原合成二者之間形成關(guān)聯(lián)，實(shí)際上這可能被證實(shí)為在本發(fā)明中所觀察的對(duì)主動(dòng)脈壁彈性的有益作用的內(nèi)在原因。結(jié)論本研究的結(jié)果表明AKG不僅有效增加已進(jìn)行胃手術(shù)的受試者中動(dòng)脈彈性(實(shí)施例1)，而且有效增加動(dòng)脈彈性降低的其它受試者的動(dòng)脈彈性。在此情形下，所述受試者是老齡嚙齒動(dòng)物，其被認(rèn)為是動(dòng)脈彈性降低的人受試者的相關(guān)模型，所述人受試者通常為老齡受試者。參考文獻(xiàn)BrolinREBariatricsurgeryandlong-termcontrolofmorbidobesityJAMA2882793-2796,2002BrolinRECriticalanalysisofresultsweightlossandqualityofdataAmJClinNutr55556S-559S，1992CarrollJF，WJZenebeandTBStrangeCardiovascularfunctioninaratmodelofdiet—inducedobesityHypertension4865_72，2006CliffWJTheaortictunicamediainagingratsExpMolPathol13172-189，1970CoatesPS，JDFernstrom，MHFernstrom，PRSchauerandSLGreenspanGastricbypasssurgeryformorbidobesityleadstoanincreaseinboneturnoverandadecreaseinbonemassJClinEndocrinolMetab891061—1065，2004DaoHH，REssalihi，CBouvetandPMoreauEvolutionandmodulationofage—relatedmedialelastocalcinosisimpactonlargearterystiffnessandisolatedsystolichypertensionCardiovascRes66307—317，2005DukaA，IDuka，GGao，SShenouda，IGavrasandHGavrasRoleofbradykininandB2receptorsinnormalbloodpressureregulationAmJPhysiolEndocrionolMetab291E268-E274,2006DurantRRBloodpressureintheratAmJPhysiolEndocrionolMetab81679-685,1927Flanebaum，L&Belsley，SJGastrointestSurg11,500-507(2007)FlegalKM，MDCarroll，CLOgdenandCLJohnsonPrevalenceandtrendsinobesityamongUSadults,1999-2000JAMA2881723-1727,2002FoleyEF，PNBenotti，BCBorlase，JHollingsheadandGLBlackburnImpactofgastricrestrictivesurgeryonhypertensioninthemorbidlyobeseAmJSurgl63294-297,1992Gokce，NetalAmJCardiol95,266-268(2005)HajduMA，DDHeistad，JESiemsandGLBaumbachEffectsofagingonmechanicsandcompositionofcerebralarteriolesinratsCircRes661747-1754,1990Harrison,AP&Flatman，JAAmJPhysiol，277，R1646-R1653(1999)JacobMPExtracellularmatrixremodellingandmatrixmetalloproteinasesinthevascularwallduringagingandinpathologicalconditionsBiomedPharmacother57195—202,2003Kristensen，NB，Jungvid，H，F(xiàn)ernandez,JA&Pierzynowski，SGJAnimalPhysiolAnimalNutr86,239-245(2002)LaurantP，MAdrianandABerthelotEffectofageonmechanicalpropertiesofratmesentericsmallarteriesCanJPhysiolPharmacol82269—275，2004MarinJAge-relatedchangesinvascularresponsesareviewMechAgeingDev7971-114,1995MarinJ，MARodriguez-MartinezAge-relatedchangesinvascularresponses-ExpGerontol34503—512，1999McEnieryCM，IBWilkinsonandAPAvolioAge，hypertensionandarterialf皿ctionClinExpPharmPhysiol34665_671，2007MoreauP，LVdl)scioandTFLuscherStructureandreactivityofsmallarteriesinagingCardiovascRes37247_253，19980rlandiA，AMauriello，BMarinoandLGSpagnoliAge-relatedmodificationsofaortaandcoronariesintherabbitamorphologicalandmorphometricalassessmentArchGerontolGeriatr1737—53,1993PattersonEJ，DGDavis，YKhajancheeandLLSwanstromComparisonofobjectiveoutcomesfollowinglaparoscopicNissenfundoplicationvsl即aroscopicgastricbypassinthemorbidlyobesewithheartburnSurgEndosc171561-1565,2003Pories，WJetalAnnalsofSurgery222,339-352(1995)SonED，GHChoi，HKim，BLee，ISChangandJSHwangAlpha-Ketoglutaratestimulatesprocollagenproductioninculturedhumandermalfibroblasts，anddecreasesUVB_inducedwrinkleformationfollowingtopicalapplicationonthedorsalskinofhairlessmiceBiolPharmBull301395—1399,200權(quán)利要求選自以下的至少一種物質(zhì)在制備用于在有此需要的受試者中提高血管彈性的藥物制劑或者食物補(bǔ)充劑或飼料補(bǔ)充劑中的用途a)α-酮戊二酸(AKG)；b)α-酮戊二酸的可藥用鹽；c)氨基酸、二肽或三肽與α-酮戊二酸形成的酰胺及其可藥用鹽；以及d)α-酮戊二酸或其可藥用鹽與至少一種氨基酸或其可藥用鹽的可藥用物理混合物。2.權(quán)利要求l的用途，其中所述血管是動(dòng)脈。3.前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的用途，其中所述受試者需要治療和/或預(yù)防高血壓、肺高血壓、視網(wǎng)膜血管病、心室肥大或動(dòng)脈瘤。4.前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的用途，其中所述受試者進(jìn)行了胃手術(shù)。5.權(quán)利要求4的用途，其中所述胃手術(shù)是胃旁路手術(shù)、胃切除術(shù)、部分胃切除術(shù)或胃結(jié)扎術(shù)。6.前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的用途，其中所述受試者患有與營(yíng)養(yǎng)不良相關(guān)的病癥。7.前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的用途，其中所述受試者是老年人。8.前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的用途，其中使用a-酮戊二酸或其堿金屬鹽或堿土金屬鹽或其組合。9.權(quán)利要求8的用途，其中使用a-酮戊二酸鈉或a-酮戊二酸鈣。10.前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的用途，其中施用給患者的劑量范圍為l-1000mg/kg體重/天的所述物質(zhì)。11.前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的用途，其中施用給患者的劑量范圍為10-400mg/kg體重/天的所述物質(zhì)。12.前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的用途，其中施用給患者的劑量范圍為10-100mg/kg體重/天的所述物質(zhì)。13.—種用于在有此需要的受試者中提高血管彈性的治療方法，所述方法包括向有此需要的受試者施用有效量的至少一種選自以下的物質(zhì)a)a_酮戊二酸(AKG);b)a-酮戊二酸的可藥用鹽；c)氨基酸、二肽或三肽與a-酮戊二酸形成的酰胺及其可藥用鹽；以及d)a-酮戊二酸或其可藥用鹽與至少一種氨基酸或其可藥用鹽的可藥用物理混合物。14.權(quán)利要求13的方法，其中所述血管是動(dòng)脈。15.權(quán)利要求13的方法，其中所述受試者需要治療和/或預(yù)防高血壓、肺高血壓、視網(wǎng)膜血管病、心室肥大或動(dòng)脈瘤。16.權(quán)利要求13的方法，其中所述受試者進(jìn)行了胃手術(shù)。17.權(quán)利要求16的方法，其中所述胃手術(shù)是胃旁路手術(shù)、胃切除術(shù)、部分胃切除術(shù)或胃結(jié)扎術(shù)。18.權(quán)利要求13的方法，其中所述受試者患有與營(yíng)養(yǎng)不良相關(guān)的病癥。19.權(quán)利要求13的方法，其中所述受試者是老年人。20.權(quán)利要求13-19的方法，其中施用a-酮戊二酸或其堿金屬鹽或堿土金屬鹽或其組合。21.權(quán)利要求20的方法，其中施用a-酮戊二酸鈉或a-酮戊二酸鈣'全文摘要本發(fā)明涉及α-酮戊二酸、其酰胺、鹽及它們的混合物在制備用于在有需要的受試者中在體內(nèi)治療性提高血管彈性(尤其是動(dòng)脈彈性)的藥物制劑或者食物補(bǔ)充劑或飼料補(bǔ)充劑中的新用途。提高血管彈性可用于治療和/或預(yù)防高血壓、肺動(dòng)脈高血壓、心血管病、視網(wǎng)膜血管病、心力衰竭、動(dòng)脈粥樣硬化、心室肥大、中風(fēng)、動(dòng)脈瘤、腎衰竭、腎硬化癥和與高血壓有關(guān)的疾病。文檔編號(hào)A61P9/14GK101730532SQ200880023418公開(kāi)日2010年6月9日申請(qǐng)日期2008年6月27日優(yōu)先權(quán)日2007年7月2日發(fā)明者斯特凡·G·彼任諾夫斯基申請(qǐng)人:恩特雷斯公司