專利名稱：染料木黃酮的新穎用途的制作方法
染料木黃酮的新穎用途
本發(fā)明涉及染料木黃酮的新穎用途以及包含其的組合物。更精確地， 本發(fā)明涉及染料木黃酮和含有其的組合物在治療和預(yù)防干眼綜合征中的用 途，還涉及含有染料木黃酮的組合物。
干眼在1993年被National Eye Institute (NEI)/ Industry Workshop定義 為由于缺乏淚液或過(guò)度蒸發(fā)導(dǎo)致的淚膜"病癥"，其導(dǎo)致對(duì)眼瞼間眼表面 的損傷，并且與不適癥狀相關(guān)(Lemp， M.A.: CLAO J. 1995, 21: 221-232)。基于目前對(duì)干眼的認(rèn)知，認(rèn)為它是眼表面炎性綜合征(而非簡(jiǎn)單 的淚液不足)也是合適的。數(shù)十年來(lái)用于描述干眼中發(fā)展的眼表面疾病的 的術(shù)語(yǔ)干燥性角膜結(jié)膜炎(keratoconjunctivitis sicca) (KCS)已從定義上 確認(rèn)了炎性病因。因此，為對(duì)干眼做出更寬的定義，術(shù)語(yǔ)淚腺角結(jié)膜炎 (lacrimal keratoconjunctivitis) (LKC)看起來(lái)更合適，目前其被廣泛用 于描述從淚膜受損發(fā)展的眼表面炎癥(見例如，Pflugfelder, S.C.: "Dry eye: The problem" in Dry Eye and Ocular Surface Disorders, Marcel Decker, New York, 2004, 1-10)。
鑒于LKC具有多因素誘因，已經(jīng)提出了若干可能有前途的新療法，例 如，新穎的淚液刺激劑和免疫調(diào)節(jié)劑(綜述見Albietz， J.M., Clin. Exp. Optom. M, 4-18, 2001)，然而它們都沒(méi)有真正帶來(lái)好的結(jié)果。直到2005 年，對(duì)干眼綜合征的治療仍被認(rèn)為是日常眼科實(shí)踐中最棘手的臨床問(wèn)題之 —(Versura, P. et al.， Gynecol. Endcrinol.巡，289-298， 2005)。雖然已提出 很多化學(xué)化合物是有效的，并且可商業(yè)獲得含有它們的組合物，但是仍在 積極搜索能刺激淚腺產(chǎn)生質(zhì)和量上都正常的淚液而不造成副作用的物質(zhì)。 Versura et al.還報(bào)道稱，對(duì)有眼部不適癥狀的絕經(jīng)期后婦女進(jìn)行的激素替代 療法(HRT)尚有爭(zhēng)議，并且警示應(yīng)謹(jǐn)慎使用HRT來(lái)治療干眼，因?yàn)樯?不明確雌激素或雄激素缺乏或其不平衡是否會(huì)損害眼表面功能。
因此，申請(qǐng)人吃驚地發(fā)現(xiàn)，染料木黃酮一一天然存在于植物中并且己知具有雌激素活性的化合物，可用于治療LKC。使用染料木黃酮的可能性 并沒(méi)有提出過(guò)，雖然有過(guò)對(duì)用雌激素和雄激素作為全身性治療劑的討論
(Scott， G. et al.， Am. J. Ophthalmol. 12， 1109-10, 2005)。
已在胸腺中發(fā)現(xiàn)了染料木黃酮受體，這使得它們能在免疫系統(tǒng)調(diào)控中 有效(Cooke, P.S., et al.; J. Nutr. 136， 704-8, 2006)。還注意到，染料木黃 酮能通過(guò)基因應(yīng)答調(diào)節(jié)影響雄激素/雌激素誘導(dǎo)的信號(hào)途徑(Takahashi, Y.， etal.，Mol.Carcinog.4^, 18-25,2006)，并且，已發(fā)現(xiàn)由于染料木黃酮對(duì)眼 部新血管形成有抑制作用，從而具有特別的眼部活性(Kruse， F.E., et al.， Ophthalmology M， 152-6， 1997)。
因此，植物雌激素染料木黃酮作為免疫系統(tǒng)和雄激素-雌激素信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo) 兩者的調(diào)節(jié)劑的活性和其抑制新血管形成的平行活性，以及眼表面性類固 醇受體的存在，都展示了染料木黃酮在對(duì)干眼的治療和預(yù)防中的令人吃驚 的、以前沒(méi)有報(bào)道過(guò)的活性。
因此，本發(fā)明涉及染料木黃酮在治療和預(yù)防干眼綜合征或LKC中的用 途，或在制造用于治療和預(yù)防人或動(dòng)物的干眼綜合征或LKC的組合物中 的用途；在人或動(dòng)物中治療和預(yù)防干眼綜合征的方法以及含有有效量染料 木黃酮的相應(yīng)組合物，其優(yōu)選用于口服應(yīng)用。
在本發(fā)明的上下文中，術(shù)語(yǔ)"染料木黃酮"表示4，,5,7-三羥基-異黃 酮，并且包括該化合物的所有形式(即游離形式或作為鹽的形式)，以及 來(lái)自所有來(lái)源的形式(即，無(wú)論其是合成制備的、通過(guò)遺傳改造和從微生 物中表達(dá)來(lái)制備的或從自然來(lái)源分離的〉以及或多或少濃縮和純化的形 式。術(shù)語(yǔ)"染料木黃酮"在本發(fā)明的上下文中還涵蓋染料木黃酮的生物等 同衍生物，即，衍生自染料木黃酮的化合物，其天然存在(即，在天然來(lái) 源中)或作為代謝途徑中的代謝產(chǎn)物，例如糖苷(例如，染料木苷)或葡 糖酸苷，或可通過(guò)化學(xué)修飾或合成從染料木黃酮獲得的化合物。與染料木 黃酮生物等同的所有衍生物都包括在內(nèi)，這意味著它們?cè)谄浔粦?yīng)用的生物 中轉(zhuǎn)化為染料木黃酮的藥理活性形式。
本發(fā)明的含染料木黃酮的組合物和應(yīng)用形式是本領(lǐng)域公知的那些，并 且已用于治療和預(yù)防其它醫(yī)療適應(yīng)癥和疾病。此類組合物既包含用于全身
4性(例如口服或非腸道)應(yīng)用也包含用于局部性和局部應(yīng)用的制劑，其可 以是藥物形式的也可以是營(yíng)養(yǎng)藥物制劑形式的，例如片劑、膠囊、眼藥 水、膏劑、凝膠、貼片或噴霧以及其它蓋侖劑量形式；用于食物或飼料補(bǔ) 充的溶液、濃縮物和預(yù)混合物，以及所有類型的食物或伺料本身，包括飲 料。
術(shù)語(yǔ)"動(dòng)物"包括所有可能遭受干眼綜合征或LKC的動(dòng)物，尤其是哺 乳動(dòng)物，優(yōu)選是畜牧動(dòng)物，例如，反芻動(dòng)物、馬和豬；寵物，例如貓和狗 以及動(dòng)物園里的動(dòng)物。
可通過(guò)本領(lǐng)域普通技術(shù)人員已知的傳統(tǒng)的范圍找尋技術(shù)來(lái)確定合適的 劑量和劑量方案。對(duì)于染料木黃酮的新用途而言，如果全身性施用的話， 典型的每日施用范圍在大約1至大約500 mg，優(yōu)選大約5至大約100 mg。局部(尤其是眼部施用，例如以眼藥水、眼部乳液和眼部噴霧的形 式)典型地將涉及總共大約0.1 mg至總共大約5 mg的染料木黃酮施用， 優(yōu)選地，總共0.5-1 mg。用于局部使用的典型溶液含有濃度為0.0025-5% 的染料木黃酮，優(yōu)選至少0.01%，優(yōu)選可多至1%，更優(yōu)選可多至0.5%, 最優(yōu)選可多至0.05% w/v。優(yōu)選濃度為100 pM。在染料木黃酮衍生物的情 況下，必須根據(jù)其生物利用性(與染料木黃酮自身的生物利用性相比較) 對(duì)這些值加以改動(dòng)。在本發(fā)明的新用途中，使用染料木黃酮的藥物組合物 時(shí)，關(guān)于合適制劑的更多細(xì)節(jié)可從現(xiàn)有文獻(xiàn)，例如WO 99/45920或WO 98/26784中獲得。
可通過(guò)本領(lǐng)域已知的流程來(lái)制備含有染料木黃酮的藥物組合物。例 如，可將染料木黃酮配制成片劑、膠囊、粉末、懸浮液、溶液，用于非腸 道和局部施用(包括靜脈內(nèi)、肌內(nèi)和皮下施用)，以及配制成溶液，用于 與常用且傳統(tǒng)的載體、粘合劑、稀釋劑和賦形劑一起應(yīng)用到用于透皮應(yīng)用 的貼片上。在一種優(yōu)選的實(shí)施方式中，用于本發(fā)明方法中的藥物配方包括 純度至少40%的染料木黃酮，優(yōu)選純度至少85%?？捎糜谛纬伤幬锱浞降?惰性可藥用載體包括淀粉、甘露糖醇、硫酸鈣、磷酸二鈣、硬脂酸鎂、硅 衍生物和/或糖(例如蔗糖、乳糖和葡萄糖)。粘合劑包括羧甲基纖維素鈉 和其它纖維素衍生物、明膠、天然膠和合成膠(包括藻酸鹽，例如藻酸鈉)、聚乙二醇、蠟等。可用于本發(fā)明的稀釋劑包括合適的油、鹽水、糖 溶液(例如水性右旋糖或水性葡萄糖)和乙二醇類(例如聚乙二醇或聚丙 二醇)。其它賦形劑包括潤(rùn)滑劑，例如油酸鈉、乙酸鈉、硬脂酸鈉、.氯 化鈉、苯甲酸鈉、云母、硬脂酸鎂等；崩解劑，包括瓊脂、碳酸鈣、碳酸 氫鈉、淀粉、黃原膠等；以及吸附性載體，例如，膨潤(rùn)土和高嶺土。還可 向藥物配方中加入著色和調(diào)味試劑。
根據(jù)本領(lǐng)域已知的方法，例如WO 2005/063223或US 6,001,368中所 述，實(shí)現(xiàn)將染料木黃酮用于營(yíng)養(yǎng)配方、膳食組合物或功能性食物。
根據(jù)本發(fā)明方法的膳食組合物是含有染料木黃酮的食物或飼料或者食 物或飼料組分，其可通過(guò)在食物制備工藝中將染料木黃酮加入到食物或食 物組分中來(lái)制備，而不管染料木黃酮的來(lái)源?？上蚱渲屑尤肴玖夏军S酮化 合物的食物和飼料包括幾乎所有的食物和飼料，包括飲料和飲用水。例 如，染料木黃酮可加入到下述食物中，所述食物包括但不限于，肉類，例 如，碎肉、肉糜、經(jīng)漬泡的肉、干肉和香腸；功能性食物；飲料，例如營(yíng) 養(yǎng)飲料、運(yùn)動(dòng)飲料、蛋白強(qiáng)化飲料、檸檬汽水、果汁、礦泉水、奶制品、 奶、奶替代品和減肥或能量飲料；奶酪，例如硬奶酪和軟奶酪、奶油奶酪 和茅屋奶酪；冷凍甜品，例如冰淇淋、冰牛奶、低脂冷凍甜品和非奶制冷 凍甜品；酸奶；湯；布??；烘焙制品；蛋糕和餅干；沙拉醬；蘸料和涂抹 醬，例如蛋黃醬和薯片醬；以及經(jīng)擠出的零食制品?？蛇x擇染料木黃酮加 入到食物中的量，以便將期望的劑量遞送給食物消費(fèi)者。在一種優(yōu)選的實(shí) 施方式中，根據(jù)本發(fā)明的方法加入到食物中用作為膳食組合物的染料木黃 酮組合物含有至少40%的染料木黃酮，優(yōu)選至少85%的染料木黃酮。
已經(jīng)使用了針對(duì)干眼綜合征的已知?jiǎng)游锬Ｐ?，測(cè)試了染料木黃酮作為 干眼綜合征治療劑的效果，如下所示
OVX模型去卵巢(OVX)雌性Sprague-Dawley大鼠(120-160 g) 是針對(duì)人絕經(jīng)期病況的模型(Pflugfelder, S.C. et al. Dry eye and ocular surface disorders. Marcel Dekker, New York, 2004)，因此其是用作為干眼 表面疾病的天然模型。此外，可用皮下雌二醇處理OVX動(dòng)物，以對(duì)該激 素替代療法和用染料木黃酮進(jìn)行的治療的效果加以比較。車莨菪堿(scopolamine)模型另一被廣泛接受的干眼模型是車莨菪 堿模型，其利用車莨菪堿的皮下注射(10 ml中5 mg)或皮膚貼片或凝膠 劑量(Durson et al., Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 41: 632-8, 2002)，通過(guò)阻
斷副交感神經(jīng)，在大鼠中誘導(dǎo)干眼病況。
這些模型及其變化形式被用于測(cè)試染料木黃酮的療效，染料木黃酮作 為飼料預(yù)混合物(50 mg/kg低劑量和250 mg/kg高劑量)遞送，以減輕干 眼癥狀。此外， 一個(gè)測(cè)試組用作為對(duì)照組，它們僅獲得沒(méi)有添加異黃酮的 介載體飼料。
測(cè)試動(dòng)物組的動(dòng)物(大鼠)數(shù)量相等，如下所示
干眼測(cè)試組
OVX: 高劑量染料木黃酮
低劑量染料木黃酮 介載體-沒(méi)有異黃酮
車莨菪堿 高劑量染料木黃酮
低劑量染料木黃酮 介載體-沒(méi)有異黃酮
對(duì)照組
陽(yáng)性對(duì)照 OVX雌二醇注射
高劑量染料木黃酮 低劑量染料木黃酮 介載體-沒(méi)有異黃酮 陰性對(duì)照 野生型
介載體-沒(méi)有異黃酮 通過(guò)使用表面染料熒光素和羅丹明，用裂隙燈生物顯微鏡進(jìn)行眼部檢 查，來(lái)完成對(duì)補(bǔ)充有染料木黃酮或介載體的動(dòng)物的臨床活體測(cè)試，以評(píng)估 染料木黃酮的作用。
利用熒光素觀察任何局部的角膜上皮細(xì)胞損失(作為間斷染色可見) 以及上皮完整性的任何破壞(通過(guò)裂縫染色證實(shí))。還利用熒光素來(lái)測(cè)量
淚膜被破壞的時(shí)間(Tear Break Up Time - TBUT)，這是對(duì)蒸發(fā)的量度。
7TBUT的正常范圍是10秒，但是對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和對(duì)照動(dòng)物的比較是主要的比較。
羅丹明是有機(jī)脂質(zhì)染料，其對(duì)天然細(xì)胞壁加以染色，因此被用于檢測(cè) 具有不足潤(rùn)濕過(guò)程的角膜上皮細(xì)胞。羅丹明染色的結(jié)果量度是任何陽(yáng)性染 色，尤其是較之對(duì)照動(dòng)物檢查而言的陽(yáng)性染色。
通過(guò)使用苯酚紅浸漬的吸附性線，來(lái)評(píng)估淚液體積(區(qū)域快速檢 驗(yàn))。結(jié)果量度是根據(jù)測(cè)試說(shuō)明書中的標(biāo)準(zhǔn)以及與對(duì)照動(dòng)物結(jié)果相比較來(lái) 進(jìn)行的。


圖1展現(xiàn)了補(bǔ)充染料木黃酮對(duì)用車莨菪堿處理過(guò)的大鼠(已建立的用 于研究干眼綜合征的動(dòng)物模型)中淚液產(chǎn)生的影響。通過(guò)區(qū)域快速檢驗(yàn)來(lái) 監(jiān)測(cè)淚液體積。該活體測(cè)試是對(duì)淚液產(chǎn)生的標(biāo)準(zhǔn)化測(cè)量。其由苯酚紅浸潰 的線構(gòu)成，當(dāng)將線應(yīng)用到淚池中時(shí)，苯酚紅導(dǎo)致被淚水濡濕的線長(zhǎng)的顏色
變化。濕線的長(zhǎng)度(以mm計(jì))與產(chǎn)生的淚液體積成正比。
縮寫
0-對(duì)照,0-SCOP:每8只對(duì)照動(dòng)物(沒(méi)有車莨菪堿或有車莨菪堿) 50-SCOP:補(bǔ)充50ppm染料木黃酮的8只動(dòng)物(有車莨菪堿) 250-SCOP:補(bǔ)充250ppm染料木黃酮的8只動(dòng)物(有車莨菪堿) MIDTEST-補(bǔ)充周期為2.5周 FINALTEST—卜充周期為5.0周
結(jié)果
如圖所示，向經(jīng)車莨菪堿處理的大鼠補(bǔ)充染料木黃酮使得其淚液體積 恢復(fù)到接近對(duì)照值，在補(bǔ)充250 mg的組中產(chǎn)生的淚液比50 mg組中的 多，這一趨勢(shì)表示可能存在劑量應(yīng)答關(guān)系。
權(quán)利要求
1.染料木黃酮在制造用于治療和預(yù)防人或動(dòng)物的干眼綜合征或LKC的組合物中的用途。
2. 權(quán)利要求1的用途，其中所述組合物用于全身性應(yīng)用，優(yōu)選口服或 局部應(yīng)用。
3. 染料木黃酮在治療和預(yù)防干眼綜合征或LKC中的用途，其特征在于 向需要其的人或動(dòng)物應(yīng)用含有有效量的染料木黃酮的組合物。
4. 權(quán)利要求3的用途，其中所述組合物用于全身性應(yīng)用，優(yōu)選口服應(yīng)用。
5. 治療和預(yù)防干眼綜合征或LKC的方法，所述方法通過(guò)向需要其的人 或動(dòng)物應(yīng)用含有有效量的染料木黃酮的組合物來(lái)實(shí)現(xiàn)。
6. 權(quán)利要求5的方法，其中所述組合物用于全身性應(yīng)用，優(yōu)選口服應(yīng)用。
7. 用于治療和預(yù)防干眼綜合征或LKC的組合物，其特征在于其含有有 效量的染料木黃酮。
8. 權(quán)利要求7的組合物，用于全身性應(yīng)用，優(yōu)選口服應(yīng)用。
9. 權(quán)利要求7或8的組合物，其是藥物劑量形式。
10. 權(quán)利要求7或8的組合物，其是食物或飼料或相應(yīng)補(bǔ)充劑的形式。
11. 補(bǔ)充有染料木黃酮或含染料木黃酮的組合物的食物或飼料。
12. 權(quán)利要求11的食物或飼料，其是功能性食物或飲料。
全文摘要
本發(fā)明提供了染料木黃酮用于治療和預(yù)防干眼綜合征或LKC的用途以及含有染料木黃酮的相應(yīng)組合物。
文檔編號(hào)A61K31/352GK101652135SQ200880011479
公開日2010年2月17日 申請(qǐng)日期2008年4月1日 優(yōu)先權(quán)日2007年4月2日
發(fā)明者克里斯托弗·瑞吉爾, 凱文·布魯?shù)露魉? 沃夫?qū)に股澈?申請(qǐng)人:帝斯曼知識(shí)產(chǎn)權(quán)資產(chǎn)管理有限公司