金雀異黃酮防治根尖周病的新用圖
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于根尖周病的防治技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及金雀異黃酮防治根尖周病的新用 途。
【背景技術(shù)】
[0002] 根尖周病是口腔的常見病、多發(fā)病，主要病理特征是根尖周牙槽骨的破壞吸收。根 尖周病的主要致病因素來自根管內(nèi)厭氧菌和兼性厭氧菌的感染，所以臨床上多采用根管治 療以除去根管內(nèi)感染物質(zhì)。近年來CT檢測顯示，約63%的患牙雖經(jīng)過完善的根管治療，其 根尖周骨破壞仍難痊愈，最后可能需要采取根尖切除或?qū)⒒佳腊纬Ｒ虼?，尋找有效防治?尖周病的潛在藥物已成為根管治療的重要輔助策略。
[0003] 金雀異黃酮，又稱染料木黃酮，其化學(xué)名為4'，5, 7-三羥基異黃酮，是廣泛存在于 豆科植物中的一類異黃酮類化合物，其結(jié)構(gòu)與雌激素十分相似，除了能與破骨細(xì)胞上的雌 激素受體α結(jié)合直接發(fā)揮作用外，還可以影響相關(guān)細(xì)胞因子的產(chǎn)生、抑制炎癥并調(diào)控破骨 細(xì)胞的活性與功能。有文獻(xiàn)報(bào)道金雀異黃酮可抑制蛋白酪氨酸激酶，從而對哮喘豚鼠肺部 炎癥有預(yù)防作用；并且，金雀異黃酮對二硝基氟苯誘發(fā)的小鼠變應(yīng)性接觸性皮炎有顯著的 抑制作用。同時(shí)，金雀異黃酮可通過提升骨質(zhì)疏松大鼠股骨骨小梁體積、厚度和密度，減少 去勢所導(dǎo)致骨量的丟失。
[0004] 金雀異黃酮以其突出的優(yōu)點(diǎn)越來越受到人們的關(guān)注。目前，涉及到金雀異黃酮的 報(bào)道有防治骨質(zhì)疏松，預(yù)防干眼癥，治療癌癥和改善肥胖癥等。但是，迄今為止，金雀異黃酮 防治根尖周病的應(yīng)用沒有被公開或使用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的在于提供金雀異黃酮在防治根尖周病中的應(yīng)用。
[0006] 為達(dá)到上述目的，本發(fā)明采用了以下技術(shù)方案：
[0007] 金雀異黃酮可通過改善根尖周病灶骨質(zhì)破壞，達(dá)到防治根尖周病的作用。
[0008] 金雀異黃酮可通過減緩根尖周病灶炎癥細(xì)胞浸潤，達(dá)到防治根尖周病的作用。
[0009] 金雀異黃酮可通過降低根尖周病灶核因子kappaB受體激活劑配體（Receptor activator of nuclear factor kappaB ligand, RANKL)表達(dá)水平，達(dá)到防治根尖周病的作 用。
[0010] 金雀異黃酮可通過促進(jìn)根尖周病灶骨保護(hù)素（Osteoprotegrin, 0PG)表達(dá)，達(dá)到 防治根尖周病的作用。
[0011] 金雀異黃酮的上述作用表明其可用于制備防治根尖周病的藥物，具體為金雀異黃 酮可用于制備改善根尖周病灶骨質(zhì)破壞、減緩根尖周病灶炎癥細(xì)胞浸潤、降低根尖周病灶 RANKL表達(dá)水平或促進(jìn)根尖周病灶OPG表達(dá)的藥物。
[0012] 本發(fā)明的有益效果主要體現(xiàn)在：提供了金雀異黃酮用于防治根尖周病的新用途， 該用途表明金雀異黃酮可用于制備防治根尖周病的藥物。金雀異黃酮為純天然物質(zhì)，用藥 較安全，毒副作用小。
【附圖說明】
[0013] 圖1是金雀異黃酮（25mg/kg)對開髓14天和28天導(dǎo)致小鼠下頒第一磨牙遠(yuǎn)中根 根尖區(qū)骨破壞的三維圖。
[0014] 圖2是HE染色觀察金雀異黃酮（25mg/kg)對開髓14天導(dǎo)致小鼠下頒第一磨牙遠(yuǎn) 中根根尖區(qū)骨破壞的干預(yù)效果圖，A :HE熒光模式，14天模型對照組；B :HE熒光模式，14天 金雀異黃酮給藥組；C :HE光學(xué)模式，14天模型對照組；D :HE光學(xué)模式，14天金雀異黃酮給 藥組。
[0015] 圖3是HE染色觀察金雀異黃酮（25mg/kg)對開髓28天導(dǎo)致小鼠下頒第一磨牙遠(yuǎn) 中根根尖區(qū)骨破壞的干預(yù)效果圖，A :HE熒光模式，28天模型對照組；B :HE熒光模式，28天 金雀異黃酮給藥組；C :HE光學(xué)模式，28天模型對照組；D :HE光學(xué)模式，28天金雀異黃酮給 藥組。
[0016] 圖4是TRAP染色觀察金雀異黃酮（25mg/kg)對開髓導(dǎo)致小鼠下頒第一磨牙遠(yuǎn)中 根根尖區(qū)破骨細(xì)胞的影響圖，A :14天對照組；B :14天金雀異黃酮給藥組；C :28天模型對照 組；D :28天金雀異黃酮給藥組，黑色箭頭示為破骨細(xì)胞。
[0017] 圖5是免疫組織化學(xué)染色觀察金雀異黃酮（25mg/kg)對開髓導(dǎo)致小鼠下頒第一磨 牙遠(yuǎn)中根根尖區(qū)RANKL表達(dá)的影響圖，A :14天模型對照組；B :14天金雀異黃酮給藥組；C : 28天模型對照組；D :28天金雀異黃酮給藥組，黑色箭頭示為RANKL陽性細(xì)胞。
[0018] 圖6是免疫組織化學(xué)染色觀察金雀異黃酮（25mg/kg)對開髓導(dǎo)致小鼠下頒第一磨 牙遠(yuǎn)中根根尖區(qū)OPG表達(dá)的影響圖，A :14天模型對照組；B :14天金雀異黃酮給藥組；C :28 天模型對照組；D :28天金雀異黃酮給藥組，黑色箭頭示為OPG陽性細(xì)胞。
【具體實(shí)施方式】
[0019] 下面結(jié)合實(shí)施例，對本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)的說明，但不應(yīng)理解為對本發(fā)明的限制。 在不背離本發(fā)明精神和實(shí)質(zhì)的情況下，對本發(fā)明方法、步驟或條件所作的修改或替換，均屬 于本發(fā)明的范圍。
[0020] 實(shí)施例1
[0021] 1.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及材料：
[0022] I. 1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
[0023] 所有的實(shí)驗(yàn)程序符合武漢大學(xué)口腔醫(yī)學(xué)院倫理委員會(huì)的指導(dǎo)原則。SPF級6-8周 C57BL雄性小鼠（購于武漢大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心，許可證號：SCXK (鄂）2008-0004) 20只，體重 20克左右，分籠飼養(yǎng)，每籠5只。
[0024] 1.2實(shí)驗(yàn)材料
[0025] 金雀異黃酮購置于Cayman公司（分子式C15HltlO 5，分子量270. 2,純度蘭98% )。參 考相關(guān)文獻(xiàn)及藥物說明書，于給藥前一天將粉劑金雀異黃酮溶于DMSO(Biosharp公司），母 液濃度30mg/mL，用PBS制備成藥物工作濃度2. 5mg/mL。
[0026] 2.動(dòng)物分組及小鼠根尖周病模型的建立：
[0027] 2. 1動(dòng)物分組
[0028] 隨機(jī)分成14天模型對照組、14天金雀異黃酮給藥組、28天模型對照組、28天金雀 異黃酮給藥組，每組5只。常規(guī)飼養(yǎng)、稱體重并做標(biāo)記。
[0029] 2. 1小鼠根尖周病模型的建立
[0030] 0.4%水合氯醛（0. lmL/10g)腹腔注射麻醉小鼠后，用1/4號球鉆（瑞士登士柏公 司）在小鼠雙側(cè)下頒第一磨牙遠(yuǎn)中窩處開髓，開髓深度為0. 5個(gè)球鉆直徑并能探及穿髓點(diǎn)； 將髓腔直接暴露于口腔環(huán)境，常規(guī)飼養(yǎng)14天或28天。
[0031] 3.實(shí)驗(yàn)方法：
[0032] 3. 1給藥方案
[0033] 金雀異黃酮給藥組于模型建立后隔天腹腔注射金雀異黃酮（25mg/kg);模型對照 組進(jìn)行PBS腹腔注射處理。所有小鼠預(yù)定時(shí)間頸椎脫白處死并分離下頒骨組織。
[0034] 3. 2標(biāo)本的采集和MicroCT掃描
[0035] 分離的下頒骨用4%多聚甲醛4°C固定24h，每組取出5個(gè)下頒骨標(biāo)本，0.5%的多 聚甲醛作為介質(zhì)，進(jìn)行MicroCT掃描。將載樣管置于MicroCT掃描，掃描參數(shù)為：片層厚度 15 μ m，電壓70千伏，電流114毫安，重建圖像分辨率為1024 X 1024像素。
[0036] 3. 3切片制備
[0037] 分離的下頒骨用4%多聚甲醛4°C固定24h，所有標(biāo)本流水沖洗24h后轉(zhuǎn)入10%的 乙二胺四乙酸（EDTA)中，隔天換液，室溫脫鈣2-3周，以ImL注射器無阻力通過第三磨牙牙 冠為標(biāo)準(zhǔn)，終止脫鈣。修整標(biāo)本，保留下頒第一磨牙周圍l_2mm組織。標(biāo)本流水沖洗24h， 50%、60%、70% (可過夜）、80%、90%、95%1(可過夜）、95%11上行梯度酒精脫水，每個(gè) 梯度2h，正丁醇繼續(xù)脫水透明3d。隨后置入含正丁醇：石蠟（比例為1:1，v/v)的蠟缸中 浸蠟3h，再置入含純低熔點(diǎn)石蠟的蠟缸中浸蠟3h，再用高熔點(diǎn)石蠟進(jìn)行包埋，使下頒骨頰 面朝下。行4 μπι近遠(yuǎn)中向連續(xù)切片，展片后用表面黏附有多聚賴氨酸的載玻片撈片，傾斜 控水后，將切片編號裝入烤片架，60°C烤箱烤片2-3h后取出常溫保存。
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