專利名稱：：綿羊副痘病毒毒株抗器官纖維化的用途的制作方法綿羊副痘病毒毒林抗器官纖維化的用途本申請(qǐng)是申請(qǐng)日為2001年7月11日，申請(qǐng)?zhí)枮?1815127.2，發(fā)明名稱為"綿羊副痘病毒毒林抗器官纖維化的用途"的發(fā)明專利申請(qǐng)的分案申請(qǐng)。本發(fā)明涉及滅活的副痘病毒在對(duì)人預(yù)防和治療伴隨與內(nèi)臟器官例如肝臟和皮膚及其附加結(jié)構(gòu)受到影響有關(guān)的膠原沉積增加的疾病中的用途。本發(fā)明特別涉及病毒性肝炎之后的肝臟纖維化和肝硬化，或者乙醇誘發(fā)的肝病，還有膽嚢纖維化。本發(fā)明特別涉及綿羊副痘病毒(Parapoxvirusovis)的分離物例如D1701毒林，orf-ll毒林，希臘orf毒林176，希臘orf毒林155,新西蘭(NZ)分離物，例如NZ2、NZ7和NZIO，還有從D1701得到的Baypamun⑧對(duì)人的用途。除了原始菌林之外，本發(fā)明還涉及通過(guò)傳代和/或適應(yīng)特定細(xì)胞而獲得的子代，例如WI38。除了完整病毒之外，本發(fā)明還涉及這些病毒的部分或片段。所謂部分理解為利用合適的載體，例如牛痘，在合適的體系，例如成纖維細(xì)胞培養(yǎng)物中表達(dá)的基因組或亞基因組片段。所謂片段理解為是通過(guò)生物化學(xué)純化作用例如色譜法獲得的級(jí)分，或應(yīng)用物理方法例如利用超聲處理破碎之后獲得的顆粒。已知副痘病毒能刺激脊推動(dòng)物非特異性免疫反應(yīng)，Baypamui^是化學(xué)滅活的綿羊副痘病毒毒林D1701的制劑，其用于對(duì)動(dòng)物預(yù)防，病后調(diào)節(jié)和治療傳染性疾病，并且防止脅迫誘發(fā)的疾病。專利文獻(xiàn)DE3504940A(Mayr，Anton)教導(dǎo)了Baypamun⑧對(duì)象高能輻射、化學(xué)治療、AIDS、免疫抑制、與年齡相關(guān)的損傷和解毒作用誘導(dǎo)的免疫缺陷這樣的癥狀的有益作用，但是該文獻(xiàn)沒(méi)有教導(dǎo)肝臟纖維化的直接減少。DE3504940還教導(dǎo)Baypamun⑧作為輔助手段支持腫瘤治療的功效，并且其預(yù)防新生兒由于母親不充分免疫防御引起的疾病。以現(xiàn)有知識(shí)作為出發(fā)點(diǎn)，令人驚奇地發(fā)現(xiàn)，施用滅活的副痘病毒能夠減少或防止肝臟纖維化。在動(dòng)物模型中，在四氯化碳誘導(dǎo)的基于中毒性肝損傷的肝臟纖維化情況下發(fā)現(xiàn)了這種作用，在異源血清誘導(dǎo)這種治"作用的程i同樣令人吃'li:在四氯化碳模型中，與肝臟纖維化相關(guān)的膠原的過(guò)量產(chǎn)生被抑制60%，而在血清模型中幾乎完全被抑制。與這些長(zhǎng)期實(shí)驗(yàn)的結(jié)果相吻合，從急性施用四氯化碳有可能證實(shí)，Baypamun和從上迷綿羊副痘病毒毒株獲得的制劑抑制肝星形細(xì)胞轉(zhuǎn)化為產(chǎn)生膠原的肌成纖維細(xì)胞類型。不同病因能夠誘導(dǎo)肝臟纖維化和/或肝硬化，例如病毒感染和酗酒，但是不同的病理機(jī)理進(jìn)入一個(gè)共同的最終途經(jīng)，即產(chǎn)生膠原.根據(jù)上述非感染性模型得到的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)杲證明，施用滅活副痘病毒出人意料地不依賴誘導(dǎo)病因地防止膠原沉積。因此副痘病毒為對(duì)于導(dǎo)致纖維化的所有的疾病來(lái)說(shuō)是共同的最終途經(jīng)發(fā)揮作用提供了新的治療原理。這種作用提示，當(dāng)使用副痘病毒制劑時(shí)，會(huì)實(shí)現(xiàn)特別有效的治療，即使在病毒誘導(dǎo)的肝臟纖維化的情況下也是如此，因?yàn)橐阎@樣的制劑具有另外的免疫刺激作用.現(xiàn)在發(fā)現(xiàn)Baypamun的強(qiáng)有力的抗纖維化作用打開了使用Baypamun或NZ2制劑作為鑒定抗纖維化物質(zhì)測(cè)試中評(píng)價(jià)抗纖維化作用的參考標(biāo)準(zhǔn)的可能性。所以，滅活的副痘病毒或它們的子代，和從上述毒株獲得的制劑具有廣諳的抗纖維化作用，因此不只是適合預(yù)防和治療肝臟纖維化疾病，而且還適合其它器官的纖維化病變，例如肺的，胰臟的，心臟的和皮膚的纖維化疾病。在預(yù)防和治療肝臟纖維化和肝硬化中，特別優(yōu)選使用副痘病毒的分離物.根據(jù)臨床問(wèn)題，全身施用以副痘病毒為基礎(chǔ)的治療藥物，即，例如肌內(nèi)，皮下，腹膜內(nèi)，靜脈內(nèi)，口服或者通過(guò)吸入，還有局部給藥。副痘病毒被純化和凍干，并且直接在施用之前懸浮于合適的溶劑，或者存在于另一種合適的制劑中，或者以抗胃液口服施用形式或者一些其它口服施用形式存在.與此相關(guān)，多次給藥或者根據(jù)相應(yīng)于臨床問(wèn)題的要求的按時(shí)間給藥的方案長(zhǎng)期治療可能是必需的.本發(fā)明涉及從D1701毒林，orf-ll毒抹，希臘orf毒抹176，希臘orf毒林155，新西蘭(NZ)毒株獲得的副痘病毒的分離物用于制備對(duì)人器官纖維化有預(yù)防或治療作用的藥物的用途.優(yōu)選使用新西蘭(NZ)毒株，即NZ2，NZ7和NZ10毒林用于制備對(duì)人器官纖維化有預(yù)防或治療作用的藥物，其中NZ2毒抹是特別優(yōu)選的.除此之外，通過(guò)傳代或適應(yīng)合適的細(xì)胞能夠修飾上述副痘病毒，并且那些通過(guò)傳代或適應(yīng)合適的細(xì)胞而獲得的副痘病毒能夠用于制備對(duì)人器官纖維化有預(yù)防或治療作用的藥物，與此相關(guān)可以使用人細(xì)胞，例如WI-38，MRC-5，牛細(xì)胞，例如BK-K13A47/Reg或MDBK，和綿羊細(xì)胞，例如MDOK，用于傳代或適應(yīng).也可以使用上述副痘病毒的部分或片段用于制備對(duì)人器官纖維化有預(yù)防或治療作用的藥物，所謂部分理解為利用合適的栽體，例如牛痘病毒，在合適的體系，例如成纖維細(xì)胞培養(yǎng)物中表達(dá)的基因組或亞基因組片段，所謂片段理解為是表達(dá)的病毒顆?；蛲ㄟ^(guò)例如超聲處理物理破碎的病毒顆粒通過(guò)生物化學(xué)純化作用例如色譜法獲得的級(jí)分。本發(fā)明進(jìn)一步涉及上述綿羊副痘病毒毒林或者如上所述從其獲得的修飾物與其它藥物結(jié)合制備對(duì)人器官纖維化有預(yù)防或治療作用的藥物和藥物制劑的用途，涉及Baypamun⑧本身或者與其它藥物結(jié)合制備對(duì)人器官纖維化有預(yù)防或治療作用的藥物和藥物制劑的用途。本發(fā)明優(yōu)選涉及上述綿羊副痘病毒毒林或者如上所述從其獲得的修飾物與其它藥物結(jié)合制備用于口服的制劑的用途，例如制備胃液-抗性膠嚢。本發(fā)明進(jìn)一步涉及Baypamun或NZ2制劑作為鑒定抗纖維化物質(zhì)測(cè)試中評(píng)價(jià)抗纖維化作用的參考標(biāo)準(zhǔn)的用途。這里舉例提到的綿羊副痘病毒NZ-2在2001年7月10日保藏在細(xì)胞培養(yǎng)物歐洲中心，應(yīng)用微生物學(xué)和研究中心，PortonDown,Salisbury,Wiltshire,SP4OJG，UnitedKingdom,保藏號(hào)是。實(shí)施例1綿羊副痘病毒，毒株D1701，Baypamun⑧的效杲方法將從化學(xué)滅活的綿羊副痘病毒，毒抹D1701得到的制劑，Baypamui^干燥物質(zhì)根據(jù)說(shuō)明溶解于水用于注射(根據(jù)TCID50(50%組織培養(yǎng)感染劑量)的效價(jià)大約是IOV毫升).以與Baypamun溶液含有相同量的蛋白質(zhì)的聚明膠肽溶液作為安慰劑溶液，施用給對(duì)照組動(dòng)物.對(duì)每一只動(dòng)物每次腹膜內(nèi)施用0.5ml的溶液.每星期給藥三次，但是從來(lái)不在連續(xù)天給藥，在兩個(gè)動(dòng)物模型中試驗(yàn)Baypamun，這兩種動(dòng)物中纖維化起源不同，即四氯化碳模型和豬血清模型.用四氯化碳慢性處理是實(shí)驗(yàn)誘導(dǎo)隨后發(fā)生硬化的肝臟纖維化的標(biāo)準(zhǔn)方法(McLeanEK，McLeanAEM，SuttonPM.Instantcirrhosis.Br.JExp.Pathol.1969;50:502-506)。其一般被認(rèn)為是人肝臟纖維化和肝硬化的模型。使用雌性Sprague-Dawley大鼠。為了保證最大程度誘導(dǎo)四氯化碳的微粒體的新陳代謝，在開始處理之前一周對(duì)動(dòng)物給予1克的異煙胼/升與飲水。每五天，以0.1毫升/100克體重的劑量口服給與四氯化碳(四氯化碳礦物油-l:l).處理七星期之后，殺死動(dòng)物并且檢查，與四氯化碳處理平^f亍進(jìn)行Baypamun⑧處理.用異源血清處理，例如在大鼠情況下用豬血清處理，同樣是文獻(xiàn)中常常使用的誘導(dǎo)隨后發(fā)生硬化的肝臟纖維化的方法，使用該方法，與其它模型相反，只對(duì)肝臟實(shí)質(zhì)細(xì)胞引起微小的損傷和炎癥(Bhunchet，E.和Wake，K.(1992):間質(zhì)細(xì)胞群在豬血清誘導(dǎo)的大鼠肝臟纖維化中的作用(Roleofmesenchymalcellpopulationsinporcineserum-inducedratliverfibrosis)，肝臟學(xué)(Hepatology)16:1452-1473)。每周兩次腹膜內(nèi)對(duì)每只動(dòng)物施用0.5毫升的滅菌豬血清(Sigma)處理雌性SpragueDawley大鼠，給對(duì)照動(dòng)物施用滅菌氯化鈉生理溶液(每周兩次，0.5毫升/動(dòng)物，腹膜內(nèi)).與豬血清處理平行進(jìn)行Baypamun⑧處理，但是從不在同一天給藥.處理七星期之后，殺死動(dòng)物并且取出肝臟用于定量測(cè)定膠原的量.對(duì)于肝臟組織的組織學(xué)檢查，從肝臟的右前頁(yè)穿孔取出標(biāo)準(zhǔn)橫列組織圓柱體(大約10x2mm)'用0.1%Picrosiriusred溶液將冷凍切片染色，用于檢測(cè)肝臟纖維化產(chǎn)生的膠原斑。使用牢固綠作為復(fù)染劑用于對(duì)比度放大。對(duì)每一個(gè)切片檢測(cè)肝臟纖維化的程度，以用Picrosiriusred染色面積占總測(cè)面積的百分分?jǐn)?shù)表示.將目測(cè)顯微鏡顏色檢查參數(shù)進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化并且在實(shí)驗(yàn)自始至終保持不變，在50倍最后放大率下測(cè)定在31邁012柵格中標(biāo)準(zhǔn)化過(guò)的64個(gè)方塊.為了定量測(cè)定用四氯化碳急性處理大鼠之后肝星形細(xì)胞(BSC;也稱為Ito細(xì)胞或維生素A貯存細(xì)胞)轉(zhuǎn)化的程度，免疫組織學(xué)檢查cc-平滑肌肌動(dòng)蛋白-陽(yáng)性面積，以200倍最后放大率，每種情況下對(duì)每一個(gè)切片，在16小葉中心248xl80微米領(lǐng)域，確定oc-平滑肌肌動(dòng)蛋白-陽(yáng)性區(qū).已知HSC向產(chǎn)生肢原并且產(chǎn)生生長(zhǎng)因子的肌成纖維細(xì)胞樣細(xì)胞的轉(zhuǎn)化是誘導(dǎo)肝臟纖維化的重要步寐.因此轉(zhuǎn)化的HSC是肝臟纖維原活性的早期指示.使用LeicaQuantimed500MC(LeicaGermany)進(jìn)行半自動(dòng)形態(tài)測(cè)定法.為了測(cè)定OH-脯氨酸，各種情況下干燥50-100mg肝組織并且用HC1煮沸大約17小時(shí).在真空烘箱中將酸蒸發(fā)掉之后，將殘余物溶解于5亳升蒸餾水中并且過(guò)濾該溶液.室溫下，將200微升這種過(guò)濾的溶液與200微升乙醇和200微升氧化溶液(7%氯胺T水合物水溶液，用乙酸鹽-檸檬酸鹽緩沖液pH6.0以1:4稀釋)一起溫育25分鐘。之后，加入400微升的Ehrlich's試劑(20毫升乙醇中12克4-二甲基氨基苯甲醛+20毫升乙醇中2.74毫升的濃硫酸)。35TC下溫育3小時(shí)之后，在573nm下測(cè)定吸收度。OH-脯氨酸水溶液(Sigma)用于標(biāo)準(zhǔn)系列，以每克肝干重的亳克數(shù)計(jì)算肝臟樣品中OH-脯氨酸含量，為了監(jiān)測(cè)反應(yīng)性氧自由基的形成，測(cè)定肝中還原的ct-生育紛(a-TOC)，一種自由基-捕獲劑的濃度，同時(shí)測(cè)定血清中自由基-敏感酶7-乙氧基試面靈去乙基化酶(EROD)的活性。在四氯化碳中毒情況下這兩個(gè)參數(shù)被特征性地下調(diào)，并可估計(jì)氧化對(duì)組織的損傷的嚴(yán)重性。通過(guò)測(cè)定一些標(biāo)準(zhǔn)的血清參數(shù)來(lái)確定動(dòng)物的肝臟狀態(tài)丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)，械性磷酸酶(AP)，天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST),Y-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶(GGT)，谷氨酸脫氪酶(GLDH)，和總膽紅素(TBIL).結(jié)論用Baypamun⑧治療顯著降低四氯化碳處理過(guò)的大鼠的肝臟的纖維化退化程度(圖1).另外，可以觀察到HSC轉(zhuǎn)化的幾乎完全的抑制作用(圖2).Baypamun⑧治療過(guò)的動(dòng)物的肝臟中增殖的非實(shí)質(zhì)組織細(xì)胞數(shù)目大大減少(圖3).非實(shí)質(zhì)組織細(xì)胞包括HSC和在纖維發(fā)生中同樣涉及的Kupfer細(xì)胞。肝細(xì)胞損傷的血清指征，例如ALT,AP，AST,GGT,GLDH和TBIL(表l)表明正常化趨勢(shì).對(duì)照組和Baypamun⑧治療組中EROD和ot-生育酚濃度同樣降低提供了兩組中四氯化碳中毒產(chǎn)生的毒性反應(yīng)性氧自由基存在的證據(jù)(表l和2)'因此排除了Baypamun"抗纖維化"作用是由于解毒作用的可能性。在血清模型中，Baypamun⑧表現(xiàn)出幾乎完全的纖維化抑制作用(圖4):在Baypa邁un⑧治療過(guò)的大鼠，肝臟中羥基脯氨酸含量和Siriusred-可染色面積幾乎都處于健康對(duì)照動(dòng)物的水平，而在血清處理過(guò)的對(duì)照大鼠中它們?cè)黾恿藬?shù)倍.在Baypamun組，豬血清處理誘導(dǎo)的膠原舍量的增加只是對(duì)照組相應(yīng)值的10%.實(shí)施例2綿羊副痘病毒，毒株NZ2方法在疊式罐中復(fù)制NZ2病毒。為此，在細(xì)胞培養(yǎng)皿中(37"C)在EMEM2gr+10%FCS中將BK克隆3A細(xì)胞培養(yǎng)3-5天，直到細(xì)胞層達(dá)到90-100%匯合.對(duì)于各疊式罐使用四個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)皿作為接種物，后者裝有培養(yǎng)基(EMEM2gr+10XFCS)至2.5升容積。371C下溫育3-5天(90-100!4匯合細(xì)胞層)，用沒(méi)有加入血清的EMEM2g置換培養(yǎng)基，并且用NZ2病毒(M01，0.001-0.Ol)感染培養(yǎng)基。達(dá)到10(^CPE之后(37TC下溫育大約7-8天)，收集病毒。為此，將病毒懸浮液裝入滅菌培養(yǎng)基小袋并且在-80"C下冷凍.接著在培養(yǎng)室中在371C下將懸浮液解凍，利用深度床過(guò)濾(孔徑5微米)使細(xì)胞自由化.此后，利用超濾(100kDa截留量)將病毒懸浮液濃縮20-40倍?；蛘撸梢酝ㄟ^(guò)超速離心(Ti45，30，000ipm，4€，60分鐘)濃縮病毒。利用對(duì)BK克隆3A細(xì)胞的滴定法測(cè)定包舍在懸浮液中的病毒通過(guò)濃縮后達(dá)到的效價(jià)，使用沒(méi)有FCS的EMEM培養(yǎng)基將病毒效價(jià)調(diào)節(jié)至6.0之后，在581C下將病毒熱滅活2小時(shí)，利用對(duì)BK克隆3A細(xì)胞進(jìn)行的滅活對(duì)照檢查滅活作用.在實(shí)施例1中已經(jīng)使用過(guò)的豬血清誘導(dǎo)大鼠肝臟纖維化的模型中試驗(yàn)綿羊副痘病毒，毒株NZ2:每周兩次對(duì)每只動(dòng)物用0.5毫升的滅菌豬血清(Sigma)腹膜內(nèi)處理雌性SpragueDawley大鼠，給對(duì)照動(dòng)物施用滅菌氯化鈉生理溶液(每周兩次，0.5毫升/動(dòng)物，腹膜內(nèi)).以1.5xl()5或5.0x105TCID"/動(dòng)物的劑量每周三次腹膜內(nèi)施用毒林NZ2(給藥體積0.5毫升/動(dòng)物).對(duì)于較低劑量，用細(xì)胞培養(yǎng)基(Eagle's最小基本培養(yǎng)基，Sigma)8稀釋起始材料，用細(xì)胞培養(yǎng)基處理對(duì)照動(dòng)物。與用血清處理平行進(jìn)行用毒抹NZ2處理，但是從不在同一天給藥。處理七星期之后，殺死動(dòng)物并且取出肝臟；然后用形態(tài)測(cè)定法和通過(guò)OH-脯氨酸含量定量測(cè)定肝臟纖維化.該方法已經(jīng)在實(shí)施例1中描述過(guò)。結(jié)論圖5給出了膠原測(cè)定的結(jié)果，出人意料地，用毒林NZ2處理能抑制肝臟纖維化的發(fā)展與健康動(dòng)物相比，血清處理的對(duì)照動(dòng)物表現(xiàn)出OH-脯氨酸含量和Siriusred-染色膠原的顯著增加。NZ2以劑量依賴方式減少了這種增加。這種作用的程度也是出人意料的5xl05TCID"劑量將肝臟中膠原含量的增加減少至比對(duì)照值少10%。組織學(xué)制品的定性分析表明具有膠原中隔的動(dòng)物的比例在1.5x105TCIDs。組從93%(14/15)減少到33%(5/15)，在5.Oxl()5TCID"組減少到0%.實(shí)施例3口服施用PPVO之后的抗纖維化作用將PPVO配制成胃液-抗性膠嚢中的干燥凍干物(Elanco，Indianapolis，USA)*如下對(duì)各六只實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的四組動(dòng)物進(jìn)行處理對(duì)一個(gè)對(duì)照組(笫1組)只口服給與胃液-抗性膠嚢(沒(méi)有PPVO)，另外腹膜內(nèi)注射無(wú)菌氯化鈉溶液(0.5毫升/動(dòng)物)。第2組中，和0.5毫升四氯化碳/動(dòng)物一起口服給與胃液-抗性膠嚢(沒(méi)有PPVO)，另外腹膜內(nèi)注射0.5毫升生理氯化鈉溶液.對(duì)第3組的動(dòng)物，和0.5毫升四氯化碳/動(dòng)物一起口服給與胃液-抗性膠囊(沒(méi)有PPVO),另外，對(duì)第3組的動(dòng)物腹膜內(nèi)注射給與0.5毫升注射用水中PPVOD1701(劑量5xl06TCID5。/動(dòng)物)。對(duì)第4組的動(dòng)物，口服給與PPVOD1701(劑量5xl06TCIDs。/動(dòng)物，配制成胃液-抗性膠嚢)和0.5邁1四氯化碳。還對(duì)第4組的動(dòng)物腹膜內(nèi)注射施用了0.5毫升無(wú)菌氯化鈉溶液.48小時(shí)之后，取出肝臟，并且用代表性組織切片對(duì)每一只動(dòng)物免疫組織化學(xué)測(cè)定a-平滑肌肌動(dòng)蛋白(a-SMA)陽(yáng)性小葉中心面積，以總測(cè)面積的百分比未表示(JohnsonSJ，HinesJE，BurtAD.，急性肝損傷之后竇周細(xì)胞表型調(diào)控定量分4斤(Phenotypicmodulationofperisinusoidalcellsfollowingacuteliverinjury:aquantitativeanalysis)，Int.JExp.Path.1992;73:765—772)。這個(gè)值是肝星形細(xì)胞轉(zhuǎn)化的一個(gè)量度。根據(jù)上文所述進(jìn)行兩個(gè)實(shí)驗(yàn)系列.表3給出了第一個(gè)實(shí)驗(yàn)系列的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，表4給出了第二個(gè)實(shí)驗(yàn)系列的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。在第一個(gè)實(shí)驗(yàn)系列中，腹膜內(nèi)施用PPVOD1701的動(dòng)物(第3組)的肝組織中cc-SMA-陽(yáng)性小葉中心區(qū)面積的比例比沒(méi)有接受PPVO的動(dòng)物說(shuō)不清地高(與其它實(shí)驗(yàn)結(jié)杲相反).因?yàn)檫@個(gè)原因，進(jìn)行第二個(gè)實(shí)驗(yàn)系列作為重復(fù)實(shí)驗(yàn)。在這兩個(gè)實(shí)驗(yàn)系列中，與對(duì)照組相比較(各種情況下第2組)，發(fā)現(xiàn)在口服施用PPVOD1701(各種情況下第4組)之后，相符并且出人意料地發(fā)現(xiàn)，轉(zhuǎn)化作用被抑制大約50%。在第二個(gè)實(shí)驗(yàn)系列中，口服施用PPVOD1701(第4組)之后轉(zhuǎn)化作用的抑制與腹膜內(nèi)施用PPVOD1701(第3組)觀察到相似的效果。從這些結(jié)果可以推出，在口服施用之后，PPVO也起著抗纖維化作用。表lBaypamun對(duì)肝狀態(tài)的血清參數(shù)和中毒指征的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>alt:丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶；gldh:谷氨酸脫氫酶；ap:堿性^酸酶；erod:7-乙氧基試卣靈去乙基化酶;ggt:y-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶表2Baypamun⑧的影響對(duì)肝oc--生育紛a-生育除nmol/克組織對(duì)照73.1sem2.2四氯化碳35.7sem2.3t*+Baypamun38.5sem6.1表3腹膜內(nèi)或口服給藥ppvo之后，ppvo對(duì)施用纖維發(fā)生劑量的四氯化碳之后的肝星形細(xì)胞轉(zhuǎn)化的影響(第一個(gè)實(shí)驗(yàn)系列)纖維化施藥劑量oc-sma(%)第l組完整口服空膠囊+Wl內(nèi)施用注射用水一0.28±0.04第2組四氯化碳口服空膠囊+Wl內(nèi)施用注射用水■2.76±0.79笫3組四氯化破皿內(nèi)施用注射用水中的PPVO+口服空肢囊5xl06TCIDW動(dòng)物5.05±2.00第4組四氯化碳口J!IUfe用膠囊內(nèi)的PPV0+皿內(nèi)施用注射用水5x10'TCIDs。/動(dòng)物1.46±0.34表4<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>權(quán)利要求1.副痘病毒的分離物用于制備對(duì)人器官纖維化有預(yù)防或治療作用的藥物的用途。2.副痘病毒，例如orf-ll毒抹，希臘orf毒抹176，希臘orf毒株155以及新西蘭(NZ)毒林的分離物用于制備對(duì)人器官纖維化有預(yù)防或治療作用的藥物的用途。3.根據(jù)權(quán)利要求1-2的副痘病毒的分離物的用途，其特征在于用于制備對(duì)人器官纖維化有預(yù)防或治療作用的藥物的新西蘭(NZ)毒林是NZ2、NZ7和NZ10毒林。4.通過(guò)傳代或適應(yīng)合適的細(xì)胞而修飾的權(quán)利要求1-3的副痘病毒用于制備對(duì)人器官纖維化有預(yù)防或治療作用的藥物的用途。5.通過(guò)傳代或適應(yīng)合適的細(xì)胞而修飾的權(quán)利要求1-3的副痘病毒用于制備對(duì)人器官纖維化有預(yù)防或治療作用的藥物的用途，其特征在于使用人細(xì)胞，例如WI-38或MRC-5,牛細(xì)胞，例如BK-K13A47/Reg或MDBK，和綿羊細(xì)胞，例如MD0K，用于傳代或適應(yīng)。6.根據(jù)權(quán)利要求1-5的病毒的部分或片段用于制備對(duì)人器官纖維化有預(yù)防或治療作用的藥物的用途，其特征在于所述部分理解為利用合適的載體，例如牛痘病毒，在合適的體系，例如成纖維細(xì)胞培養(yǎng)物中表達(dá)的基因組或亞基因組片段，所謂片段理解為是表達(dá)的或物理破碎的病毒顆粒通過(guò)生物化學(xué)純化作用例如色譜法而獲得的級(jí)分。7.根據(jù)權(quán)利要求1-6的一種分離物與其它藥物一起用于制備對(duì)人器官纖維化有預(yù)防或治療作用的藥物和藥物制劑的用途。8.綿羊副痘病毒NZ2的制劑作為鑒定抗纖維化物質(zhì)測(cè)試中評(píng)價(jià)抗纖維化作用的參考標(biāo)準(zhǔn)的用途。全文摘要本發(fā)明涉及綿羊副痘病毒毒株抗器官纖維化的用途。具體地說(shuō)，本發(fā)明涉及滅活的副痘病毒在對(duì)人預(yù)防和治療與膠原沉積增加相關(guān)的疾病的用途，所述疾病影響內(nèi)臟器官，例如肝臟，還有皮膚及其附加結(jié)構(gòu)。本發(fā)明特別涉及病毒性肝炎之后導(dǎo)致的肝臟纖維化或肝硬化，或者乙醇誘發(fā)的肝病，例如膽囊纖維化。文檔編號(hào)A61K39/275GK101444539SQ20081014985公開日2009年6月3日申請(qǐng)日期2001年7月11日優(yōu)先權(quán)日2000年7月11日發(fā)明者A·克諾爾,A·西林,C·希爾斯-迪特里希,G·泰斯,O·維伯,T·施拉普申請(qǐng)人:艾庫(kù)里斯有限及兩合公司