專利名稱：：一種魚腥草蛋白酶抑制劑及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種具有蛋白酶抑制作用的藥物提取物，尤其涉及一種從植物魚腥草中提取得到的具有蛋白酶抑制活性的提取物；本發(fā)明還涉及該類提取物的制備方法以及該提取物在醫(yī)藥中的應(yīng)用，屬于植物化學(xué)領(lǐng)域。技術(shù)背景魚腥草，又稱蕺菜Wo""i/j77i'acara^z^""/7力人具有清熱解毒、利水消腫排膿之效，為治療痰熱肺癰、咳吐膿血的要藥。臨床和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)均表明中藥魚腥草對(duì)急性肺損傷有一定的治療作用?！侗静菥V目》"其葉腥氣，故稱魚腥草"。魚腥草味腥微寒，寒可泄降，主入肺經(jīng)，以清肺見長，有清熱解毒、利水消腫排膿之效，為治療痰熱肺癰、咳吐膿血的要藥。魚腥草含揮發(fā)油、蕺菜堿、槲皮苷、山奈苷和氯化鉀等，能增強(qiáng)白細(xì)胞吞噬能力，提高機(jī)體免疫力，并有抗感染及抗病毒作用；所含槲皮素及鉀鹽能擴(kuò)張腎功能血流量，因而有較強(qiáng)的利尿作用，此外，還有鎮(zhèn)痛、止血、促進(jìn)組織再生和傷口愈合以及鎮(zhèn)咳等作用。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明中藥魚腥草能降低急性肺損傷大鼠肺組織TNF-a的表達(dá)，從而減輕ALI時(shí)肺組織的炎癥反應(yīng)，魚腥草對(duì)急性肺損傷的治療作用可能部分是通過降低ALI時(shí)肺組織TNF-a表達(dá)實(shí)現(xiàn)的。魚腥草治療放射性肺損傷后，患者生活質(zhì)量明顯提高，臨床癥狀咳嗽、咳痰、氣促、發(fā)熱等發(fā)生率有不同程度降低，治療組效果優(yōu)于腎上腺皮質(zhì)激素聯(lián)合抗生素治療組。但從中藥魚腥草中分離出具蛋白酶抑制劑活性的藥物提取物在現(xiàn)有文獻(xiàn)中從未見報(bào)道。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的一個(gè)目的在于公開一種具有蛋白酶抑制作用的魚腥草提取物；還在于公開制備一種魚腥草提取物的方法；本發(fā)明的另一個(gè)目的在于公開一種魚腥草提取物的質(zhì)量控制方法；還在于公開一種魚腥草提取物的新用途。本發(fā)明目的是通過如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的本發(fā)明魚腥草提取物的制備方法為將植物魚腥草的干燥全草0.51.5重量份加0.21.0moL'mL—'氨水濕潤，加去離子水2040重量倍，用1%氫氧化鈉調(diào)pH89，煮沸0.51.5h，濾過，濾液減壓濃縮至20'C3(TC下相對(duì)密度為1.001.30,離心，得提取浸膏；向提取浸膏中加515倍重量的蒸餾水混懸后，上清液用氯仿萃取,回收溶劑，得氯仿萃取物；將氯仿萃取物過離子交換樹脂，用0.21.0moLmL—'氨水洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮，真空干燥，即得魚腥草提取物。本發(fā)明魚腥草提取物的制備方法優(yōu)選為將植物魚腥草的干燥全草1重量份加0.5moL'ml^氨水濕潤，加去離子水30倍量，F(xiàn)。氫氧化鈉調(diào)pH9，煮沸l(wèi)h，濾過，濾液減壓濃縮至25。C下相對(duì)密度為l.12，離心，得提取浸膏；加10倍重量的蒸餾水混懸后，上清液用氯仿萃取，回收溶劑，得氯仿萃取物；將氯仿萃取物過離子交換樹脂，0.5moL*mL—i氨水洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮，真空干燥，即得魚腥草提取物。本發(fā)明魚腥草提取物的制備方法優(yōu)選為將植物魚腥草的干燥全草0.5重量份加0.2moL'ml^氨水濕潤，加去離子水40倍量，W氫氧化鈉調(diào)pH8，煮沸0.5h，濾過，濾液減壓濃縮至2(TC下相對(duì)密度為1.30，離心，得提取浸膏；加15倍重量的蒸餾水混懸后，上清液用氯仿萃取，回收溶劑，得氯仿萃取物；將氯仿萃取物過離子交換樹脂，0.2moL'mL—1氨水洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮，真空干燥，即得魚腥草提取物。本發(fā)明魚腥草提取物的制備方法優(yōu)選為將植物魚腥草的干燥全草1.5重量份加1.0moL'mL—i氨水濕潤，加去離子水20倍量，ly。氫氧化鈉調(diào)pH9，煮沸1.5h,濾過，濾液減壓濃縮至3(TC下相對(duì)密度為1.00，離心，得提取浸膏；加5倍重量的蒸餾水混懸后，上清液用氯仿萃取，回收溶劑，得氯仿萃取物；將氯仿萃取物過離子交換樹脂，1.0moL*mL—1氨水洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮，真空干燥，即得魚腥草提取物。9本發(fā)明藥物提取物的質(zhì)量檢測方法包括如下鑒別和/或含量測定中的一種或幾種鑒別A.硅鴨酸沉淀試管法檢驗(yàn)將本發(fā)明藥物提取物以水配制成812mg*mL—!溶液，滴加濃鹽酸0.21.0體積份，再逐滴滴加硅鎢酸試液，有類白色或淡黃色不溶物出現(xiàn)，硅鎢酸試液的加入增加，不溶物增多；B.薄層色譜法檢驗(yàn)在硅膠G薄層板上點(diǎn)樣，展開劑為氯仿環(huán)乙垸二乙胺為68:13:0.51.5,聯(lián)苯甲氨-氯氣顯色法進(jìn)行顯色，有雞蛋黃色斑點(diǎn)。含量測定A.以鹽酸麻黃堿為對(duì)照品加水配制成含鹽酸麻黃堿0.10.5mg，mL—1的對(duì)照品標(biāo)準(zhǔn)溶液；精密量取鹽酸麻黃堿對(duì)照品標(biāo)準(zhǔn)溶液1體積份，2體積份，3體積份，4體積份，5體積份分別置于干燥的分液漏斗中，分別補(bǔ)水至46體積份，加氯仿812體積份，振搖混勻待用；精確量取上述五種濃度的鹽酸麻黃堿對(duì)照品標(biāo)準(zhǔn)溶液各0.51.5體積于10體積容量瓶中，用氯仿定容至刻度，搖勻；另取46體積份水，置于干燥的分液漏斗中，加氯仿812體積份，振搖混勻待用，精確量取氯仿水溶液0.51.5體積份于10體積份容量瓶中用氯仿定容至刻度，搖勻，作為空白對(duì)照液；在412nm進(jìn)行測定吸收值，以取樣量為橫坐標(biāo)，吸收值為縱坐標(biāo)，得回歸方程；B.取本發(fā)明藥物提取物0.51.5重量份，用氯仿溶解定容到812體積份，得待測液A，備用；精確移取0.51.5體積份的待測液A于分液漏斗中，再精確加入46體積份pH5.2pH5.6的檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液，0.51.5體積份0.10.5%溴麝香草酚藍(lán)溶液，加氯仿812體積份，振搖混勻，得待測液B，在412nm測定待測液B的吸收度，由回歸方程計(jì)算得總生物堿含量為待測液B重量的50%54%。本發(fā)明藥物提取物的質(zhì)量檢測方法優(yōu)選如下鑒別和/或含量測定中的一種或幾種鑒別A.硅鉤酸沉淀試管法檢驗(yàn)將本發(fā)明藥物提取物以水配制成10mg，mL—1溶液，滴加濃鹽酸0.5體積份，再逐滴滴加硅鎢酸試液，有類白色或淡黃色不溶物出現(xiàn)，硅鎢酸試液的加入增加，不溶物增多；B.薄層色譜法檢驗(yàn)在硅膠G薄層板上點(diǎn)樣，展開劑為氯仿環(huán)乙垸二乙胺為6:3:0.5，聯(lián)苯甲氨-氯氣顯色法進(jìn)行顯色，有雞蛋黃色斑點(diǎn)。A.以鹽酸麻黃堿為對(duì)照品加水配制成含鹽酸麻黃堿O.lmg'ml/'的對(duì)照品標(biāo)準(zhǔn)溶液；精密量取鹽酸麻黃堿對(duì)照品標(biāo)準(zhǔn)溶液1體積，2體積，3體積，4體積，5體積份分別置于干燥的分液漏斗中，分別補(bǔ)水至5體積份，加氯仿IO體積份，振搖混勻待用；精確量取上述五種濃度的鹽酸麻黃堿對(duì)照品標(biāo)準(zhǔn)溶液各1體積份于10體積容量瓶中，用氯仿定容至刻度，搖勻；另取5體積份水，置于干燥的分液漏斗中，加氯仿IO體積份，振搖混勻待用，精確量取氯仿水溶液1體積份于10體積份容量瓶中用氯仿定容至刻度，搖勻，作為空白對(duì)照液；在412nm進(jìn)行測定吸收值，以取樣量為橫坐標(biāo)，吸收值為縱坐標(biāo)，得回歸方程；B.取本發(fā)明藥物提取物1重量份，用氯仿溶解定容到10體積份，得待測液A，備用；精確移取l體積份的待測液于分液漏斗中，再精確加入5體積份pH5.4檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液，1體積份0.1%溴麝香草酚藍(lán)溶液，加氯仿10體積份，振搖混勻，得待測液B，在412nm測定吸收度，由回歸方程計(jì)算得總生物堿含量為待測液B重量的51%。本發(fā)明藥物提取物的質(zhì)量檢測方法優(yōu)選如下鑒別和/或含量測定中的一種或幾種鑒別A.硅鎢酸沉淀試管法檢驗(yàn)將本發(fā)明藥物提取物以水配制成8mg，mL—"溶液，滴加濃鹽酸l.O體積份，再逐滴滴加硅鉤酸試液，有類白色或淡黃色不溶物出現(xiàn)，硅鎢酸試液的加入增加，不溶物增多；B.薄層色譜法檢驗(yàn)在硅膠G薄層板上點(diǎn)樣，展開劑為氯仿環(huán)乙烷二乙胺為8:1:1.5，聯(lián)苯甲氨-氯氣顯色法進(jìn)行顯色，有雞蛋黃色斑點(diǎn)。含量測定A.以鹽酸麻黃堿為對(duì)照品加水配制成含鹽酸麻黃堿O.5mg*mL—'的對(duì)照品標(biāo)準(zhǔn)溶液；精密量取鹽酸麻黃堿對(duì)照品標(biāo)準(zhǔn)溶液1體積，2體積，3體積，4體積，5體積份分別置于干燥的分液漏斗中，分別補(bǔ)水至6體積份，加氯仿12體積份，振搖混勻待用；精確量取上述五種濃度的鹽酸麻黃堿對(duì)照品標(biāo)準(zhǔn)溶液各1.5體積于10體積容量瓶中，用氯仿定容至刻度，搖勻；另取6體積份水，置于干燥的分液漏斗中，加氯仿12體積份，振搖混勻待用，精確量取氯仿水溶液1.5體積份于10體積份容量瓶中用氯仿定容至刻度，搖勻，作為空白對(duì)照液；在412nm進(jìn)行測定吸收值，以取樣量為橫坐標(biāo)，吸收值為縱坐標(biāo)，得回歸方程；B.取本發(fā)明藥物提取物0.5重量份,用氯仿溶解定容到8體積份，得待測液A，備用；精確移取0.5體積份的待測液于分液漏斗中，再精確加入4體積份pH5.6的擰檬酸-擰檬酸鈉緩沖液，0.5體積份0.1%溴麝香草酚藍(lán)溶液，加氯仿8體積份，振搖混勻，得待測液B，在412nm測定吸收度，由回歸方程計(jì)算得總生物堿含量為待測液B重量的52%。本發(fā)明魚腥草提取物的質(zhì)量檢測方法優(yōu)選如下鑒別和/或含量測定中的一種或幾種鑒別A.硅鉤酸沉淀試管法檢驗(yàn)將本發(fā)明藥物提取物以水配制成12mg*mL—1溶液，滴加濃鹽酸l.O體積份，再逐滴滴加硅鎢酸試液，有類白色或淡黃色不溶物出現(xiàn)，硅鎢酸試液的加入增加，不溶物增多；B.薄層色譜法檢驗(yàn)在硅膠G薄層板上點(diǎn)樣，展開劑為氯仿環(huán)乙垸二乙胺為7:2:1.0，聯(lián)苯甲氨-氯氣顯色法進(jìn)行顯色，有雞蛋黃色斑點(diǎn)。A.以鹽酸麻黃堿為對(duì)照品加水配制成含鹽酸麻黃堿O.3mg*mL—'的對(duì)照品標(biāo)準(zhǔn)溶液；精密量取鹽酸麻黃堿對(duì)照品標(biāo)準(zhǔn)溶液1體積，2體積，3體積，4體積，5體積份分別置于干燥的分液漏斗中，分別補(bǔ)水至4體積份，加氯仿8體積份，振搖混勻待用；精確量取上述五種濃度的鹽酸麻黃堿對(duì)照品標(biāo)準(zhǔn)12溶液各0.5體積于IO體積容量瓶中，用氯仿定容至刻度，搖勻；另取4體積份水，置于干燥的分液漏斗中，加氯仿8體積份，振搖混勻待用，精確量取氯仿水溶液0.5體積份于10體積份容量瓶中用氯仿定容至刻度，搖勻，作為空白對(duì)照液；在412nm進(jìn)行測定吸收值，以取樣量為橫坐標(biāo)，吸收值為縱坐標(biāo)，得回歸方程；B.取本發(fā)明藥物提取物1.5重量份，用氯仿溶解定容到12體積份，得待測液A，備用；精確移取1.5體積份的待測液于分液漏斗中，再精確加入6體積份pH5.2的檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液，1.5體積份0.5%溴麝香草酚藍(lán)溶液，加氯仿12體積份，振搖混勻，得待測液B，在412nm測定吸收度，由回歸方程計(jì)算得總生物堿含量為待測液B重量的54%。本發(fā)明的提取物具有較強(qiáng)的蛋白酶抑制活性，能降低急性肺損傷大鼠肺組織脂質(zhì)過氧化水平，增強(qiáng)抗氧化能力，減少氧自由基和炎性因子的釋放，降低肺組織中腿P-2、MMP-9的活性，從而對(duì)急性肺損傷有一定的防治作用。本發(fā)明的提取物對(duì)肺泡上皮細(xì)胞來源的A549細(xì)胞的細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能基因、細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)相關(guān)基因、細(xì)胞代謝基因、轉(zhuǎn)錄和轉(zhuǎn)錄因子類基因以及蛋白質(zhì)翻譯合成類相關(guān)基因有調(diào)節(jié)作用。下面實(shí)驗(yàn)和實(shí)施例用于進(jìn)一步說明但不限于本發(fā)明。實(shí)驗(yàn)例1本發(fā)明提取物的蛋白酶抑制劑活性采用苯甲酰DL-精氨酸對(duì)硝基苯胺(BAPNA)法取胰蛋白酶液1mL，加水1mL在37t:水浴保溫5min，加入BAPNA溶液5mL，37'C水浴保溫10min后，立即在空白對(duì)照水浴前加入lmL3(^三氯乙酸終止反應(yīng)，用分光光度法在410nm條件下測定吸光度Ar;取胰蛋白酶液1mL，加樣品液1mL在37'C水浴保溫5min，加入BAPNA溶液5mL，37t水浴保溫10min后，立即加1mL3(m三氯乙酸終止反應(yīng)，用分光光度法在410nm條件下測定吸光度As;按下列公式計(jì)算樣品液的抑制百分率i=(">"—化腦注i:抑制百分率％;Ar:標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光度；Abr:含標(biāo)準(zhǔn)溶液的空白對(duì)照液的吸光度；As:樣品溶液的吸光度；Abs:含樣品溶液的空白對(duì)照液的吸光度；本發(fā)明提取物對(duì)蛋白酶活性抑制率74.67%±4.8%實(shí)驗(yàn)例2本發(fā)明提取物的藥理作用采用SD大鼠，脂多糖(LPS)制備急性肺損傷模型，以地塞米松磷酸鈉注射液為陽性對(duì)照藥，觀察本發(fā)明提取物的藥理作用，結(jié)果見表l、2、3、4。表l不同組大鼠肺泡灌洗液中二氨基二苯甲垸(MDA)、谷胱甘肽(GSH)含量統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果(；土sn=6)GroupMDA(nmoLg—')GSH(mgL—')N21.36±1.8725.59±2.65M59.15±1.95"12.79±2.20**PT41.12±2.33料"17.32±1.49'，HT39.31士1.28一12.99±1.63**"MT35.23±3.84糾"12.58士1.04""33.79±2.84料甜"12.18±2.ll材"注與正常對(duì)照組比較，**尸<0.01;與模型對(duì)照組比較，#尸<0.05，##尸<0.01;與陽性藥治療組比較，蠱尸<0.05，血血尸<0.01表2大鼠血清中IL-6、IL-8及TNF-a含量的檢測結(jié)果(pg/mL，；±sn=6)GroupIL-6IL-8TNF-aN49.30±12.0952.04±8.6638.19±2.02M175.33±22.18**147.93±52.55**441.31±50.23"PT160.07±17.81**133.09±22.93"s347.16±50.73贈(zèng)HT125.92±45.04"8A124.73±33.48"**327.49±28.13*'wMT119.07±47.54*柳"108.97±19.25**ss"332.91±22.84**組U120.67±53.22"#s"111.82土16.44贈(zèng)"404.52±60.18**8AA注與正常對(duì)照組比較，**尸<0.01;與模型對(duì)照組比較，#尸<0.05，將尸<0.01;與陽性藥治療組比較，▲尸<0.05;血蠱尸<0.01。表3大鼠肺組織勻漿中羥脯氨酸含量的檢測結(jié)果(yg/mg，；±sn=6)GroupNMPTHTMTHYP3.37±0.205.40±0.25**3.89±0.12據(jù)3.94±0.16助3.93±0.20鵬4.24±0.31"注與正常對(duì)照組比較，**尸<0.01;與模型對(duì)照組比較，#尸<0.05，將尸<0.01;與陽性藥治療組比較，盍尸<0.05表4肺組織中畫P-2、腿P-9蛋白表達(dá)圖像分析結(jié)果(；士sn二6)_0D(X10—2)_Group證-2MMP-9N2.132±0.0543.61±0.998M13.092土5.987材18.14±6.095**PT9.078±3.127s12.013±2.000#HT8.991±2.981s11.912±2.018#MT8.899±3.164#9.998±3.014sLT8.769±1.792#10.037±1.998#注與正常對(duì)照組比較，**尸<0.01。與模型對(duì)照組比較，#戶<0.05;實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明本提取物能顯著降低肺泡灌洗液的MDA含量，使大鼠肺泡灌洗液中GSH含量顯著升高，使血清中IL-6、IL-8及TNF-a水平有顯著下降的趨勢；本提取物能調(diào)節(jié)肺組織勻漿中羥脯氨酸(HYP)含量水平接近正常對(duì)照組；肺組織切片腿P-2、MMP-9免疫組織化學(xué)染色結(jié)果及薩P-2、MMP-9蛋白含量Western-blot檢測結(jié)果表明本提取物能使大鼠肺組織中麗P-2、醒P-9含量呈顯著下調(diào)的趨勢。實(shí)驗(yàn)例3本發(fā)明提取物的基因調(diào)節(jié)作用表5上調(diào)基因139條列表GenBankIDRatioPosition(位Name(名字)Symbol(符(基因序列(比置)號(hào))數(shù)據(jù)庫)率)AK02641532.057pl5.3chimerin(chimaerin)2c鵬NM—0005187.811pl5.5hemoglobin,betaHBBNM—002747618ql2-q21mitogen-activatedproteinkinase4證K4NM一0017015.6839q22.3bileacidCoenzymeA:aminoacidBMTN-acylt-ransferase(glycineN-choloyltransferase)NM—0061035.48220ql2-ql3.2WAPfour-disulfidecoredomain2WFDC2NM—0206824.8510q24.32arsenic(+3oxidationstate)AS3MTmethyltransferaseNM—0047964.18314q31neurexin3NRXN3BC0000394.110pter-q26.familywithsequencesimilarity26,FAM26B12memberBNM_0063994.0514q24.3basicleucinezippertranscriptionBATFfactor,ATF-likeNM—0056363.767Xpll.23synovialsarcoma,Xbreakpoint4SSX4AC0919263.55q31.I_q33.gamma-aminobutyricacid(GABA)AGABRG21receptor,gamma2AL1336403.58q23.1-q23.polycystickidneyandhepaticdisease1PKHD1L12(autosomalrecessive)-like1NM—0162063.53pl2.1vestigiallike3(Drosophila)VGLL3既o147923.4514q32.33kiaa0125kim0125XM0964743.447NM—0001383.415q21.1fibrillin1FBN1NM—0243203.3917q21.32ATPasefamily,AAAdomaincontaining4ATAD4M4769163.3522ql3.31chromosome22openreadingframe9C22orf9AL1365503.339Xpll.4transmembrarieprotein47TMEM47AK0215443.254ql3.3methylenetetrahydrofolateMTHFD2Ldehydrogenase(NADP+dependent)2-1ikeAK0556793.22116pl2.1jumonjidomaincontaining5JMJD5NM—0015653.24q21chemokine(C-X-Cmotif)ligand10CXCL10AF0521403.1518pll.31-AL5135473.146q27PHDfingerprotein10raFioXM0272363.10714q24.2tetratricop印tiderepeatdomain9TTC9AL1375733.14q35FSHDregiongene1FRG1AV7006453.1NM—0016443.112pl3.1即olipoproteinBmRNAeditingenzyme,AP0BEC1catalyticpolypeptide1AF4350113.114q23.2spectrinrepeatcontaining,nuclearSYNE2envelope2NM—0014953.058p21GDNFfamilyreceptoralpha2GFRA2NM—0309443.01815q23_q24chromosome15openreadingframe5C15orf5NM—01244937q21sixtransmembraneepithelialantigenofSTEAP1theprostate1BC01233137pl5.3chromosome7openreadingframe30C7orf3016NM—0038512.9lq24cellularrepressorofElA-stimulatedCREG1genes1AV7308072.9TranscribedlocusNM—0051252.9llql3copperch即eroneforsuperoxideCCSdismutaseNM—0023652.864Xp21.3melanomaantigenfamilyB，3MAGEB3NM—0065662.8518q22.3CD226moleculeCD226NM—0007912.8125qll.2-ql3.dihydrofolatereductaseDHFRNM—0007052.787z13q34ATPase，H+/K+exchanging,betaATP4BpolypeptideNM—0007852.712ql3.I_ql3cytochromeP450,family27,subfamilyB，CYP27B1.3polypeptide1NM—0067812.6656p21.3chromosome6openreadingframe10C6orfl0NM—0010852.6514q32.1serpinpeptidaseinhibitor,cladeASERPINA3(alpha-1antiproteinase,antitrypsin),member3AF2785322.63312q22-q23netrin4畫4NM—0049312.6072pl2CD8bmoleculeCD8BNM—0061822.6lql2-q23discoidindomainreceptorfamily,member臓2NM—0025142.68q24.1nephroblastomaoverexpressedgeneNOV■4372.67q32-qterprotease,serine,1(trypsin1)PRSS1U793042.610q21.1familywithsequencesimilarity13,FAM13C1memberCINM—0017952.616q22.1cadherin5,type2，VE-cadherinCDH5(vascularepithelium)NM—0169502.5894q32.3spaxc/osteonectiri,cwcvandkazal~likeSP0CK3domainsproteoglycan(testic肌)3NM—0252312.5816p22.1zincfingerprotein435ZNF435AF2865982.55Xq23angiomotinAMOTAV7008892.55AL0499732.536NM—0004932.5316q21-q22collagen,typeX，alphal(SchmidC0L1祖metaphysealchondrodysplasia)BCO139342.5197q34-q36amiloridebindingprotein1(amineABP1oxidase(copper-containing))NM—0176972.58q22.1RNAbindingmotifprotein35A匪35A<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>alpha-2,8-sialyltransferase2NM—0321922.2117ql2proteinphosphatase1,regulatoryPPP1R1B(inhibitor)subunitIB(dopamineandcAMPregulatedyhosphoprotein，DARPP-32)NM—0148622.20915q24aryl-hydrocarbonrec印tornuclearARNT2translocator2AV6951662.206BG2531902.20419ql3.12zincfingerprotein567ZNF567NM—0071272.22q35-q36villin1VIL1AB0232042.218pll.32erythrocytemembraneproteinbandEPB41L34.l-like3NM—0024222.2llq22.3matrixmetallop印tidase3(stromelysinMMP31,progelatinase)NM—0251072.26q25.2myctarget1MYCT1NM—0000892.1967q22.1collagen,typeI,alpha2C0L1A2NM—0035142.1946p22_p21.3histone1，H2amHIST1H2AMBC0114062.1867q34_q36amiloridebindingprotein1(amineABP1oxidase(copper-containing))NM—0033922.1853p21_pl4wingless-typeMMTVintegrationsiteWNT5Afamily,member5ANM—0053852.1853p23_p21naturalkiller-tumorrecognitionNKTRssqu6nc6NM—0183552.17319ql3.41zincfingerprotein415ZNF415AB0111802.17110q23.33TBCldomainfamily,member12TBC1D12AL0503642.1712q23-q31plakophilin4PKP4NM—0328122.15210pl2.32-plplexindomaincontaining2PLXDC22.31NM—0146592.1515ql5.3HistidineacidphosphatasedomainHISPPD2Acontaining2ANM—0000502.1499q34.1argininosuccinatesynthetaseASSAI8067182.1423pl3proteinphosphatase4,regulatoryPPP4R2subunit2AF1614422.134HSPC324NM—0019422.13418ql2.1desmoglein1DSG1NM—0041262.1277q21guaninenucleotidebindingprotein(GGNG11protein),gamma11NM—0024722.1217pl3.1myosin,heavypolyp印tide8,skeletalMYH8muscle,perinatalNM—0038912.11813q34proteinZ,vitaminK-d印endentplasmaPR0ZglycoproteinAF0521142.1114q32maternallyexpressed3MEG3AF1938552.10813q32Zicfamilymember2(odd-pairedhomolog，ZIC2Drosophila)NM—0201172.1055q32leucyl-tRNAsynthetaseLARSNM—0043542.1024q21.1cyclinG2CCNG2AF1407102.0966q27ribosomalproteinS6kinase,90kDa，RPS6KA2polypeptide2AF332柳2.0938pll.2Wolf-HirschhornsyndromecandidateWHSC1L11-like1NM—0003492.0888pll.2steroidogenicacuteregulatorSTARNM—0247112.0857q34-q36amiloridebindingprotein1(amineABP1oxidase(copper-containing))NM—0145852.0832q32solutecarrierfamily40(iron-regulatedSLC楊ltransporter),member1NM—0010782.069Ip32-p31vascularcelladhesionmolecule1VC腿NM_0020292.05619ql3.4formylpeptidereceptor1FPR1U396572.0517q24.3mitogen-activatedproteinkinasekinase證2K6AC0086802.0430NM—0071682.03517q24ATP-bindingcassette,sub-familyAABCA8(ABC1),member8BI0483362.031MRNA;cDNADKFZp686L20185(fromcloneDKFZp686L20185)U684942.03Iq32-q41solutecarrierfamily30(zincSLC30A1transporter),member1BC0016992.025Iq21.2-q21.FllreceptorFURNM—0024382.02410pl2.33mamiosereceptor,Ctype1MRC1NM—0032592.02419pl3.2intercellularadhesionmolecule5，ICAM5telencephalinAF0536302.022NM_0049512.01713q32.3Epstein-Barrvirusinducedgene2EBI2(lymphocyte-specificGprotein-coupledreceptor)NM—0048582.01512q13.13solutecarrierfamily4，sodiumSLC4A820bicarbonatecotransporter,member8NM—0066822.0157qll.23fibrinogen-like2FGL2NM—0001322.014Xq28coagulationfactorVIII,procoagulantF8component(hemophiliaA)表6下調(diào)基因65條列表GenBank(基因RatioPositionName(名字)Symbol序列數(shù)據(jù)庫)(比率)(位置)(符號(hào))AV647636:0.208NM—0165810.21719pl3.2ECSIThomolog(Drosophila)ECSITAV7439040.234-chromosome17openreadingframe42C17orf42AJ0117130.26619ql3.4troponinTtype1(skeletal,slow)TNNT1AB0514860.3047q31exocystcomplexcomponent4EX0C4NM—0049270.307llql3mitochondrialribosomalproteinL49MRPL49AV722527:0.316NotPresentNM—0028090.32917ql2_q21.1proteasome(prosome，macropain)26SPSMD3subunit,non-ATPase，3AL0496500.33320pl3smallnuclearribonucleoproteinSNRPBpolypeptidesBandBlAV7496480.3393q23coatomerproteincomplex,subunitbetaC0PB22(betaprime)NM—0056260.349lp35.3splicingfactor,arginine/serine-richSFRS4AK0254250.354RCSDdomaincontaining1RCSD1NM—0063580.35622ql3.2solutecarrierfamily25SLC25A17(mitochondrialcarrier;peroxisomalmembraneprotein,34kDa),member17NM—0147730.3625q31.3KIM0141KIM0141NM—0051590.36815qll_Ql4Actin,Alpha,CardiacmuscleACTCNM—0016590.38112ql3ADP-ribosylationfactor3ARF3AK0244480.3849p24.3--AV7377280.385TranscribedlocusAI9619910.39116pl3poly(A)-specificribonucleasePARN(deadenylationnuclease)NM—0024610.40416q24.3mevalonate(diphospho)decarboxylase,NM—0122370.40419ql3sirtuin(silentmatingtypeSIRT2informationregulation2homolog)2(S.21AV7425640.406BC0058480.406L208600.407NM—0020930.408NM—0058130.411NM—0327950.419AL5230990.426NM—01艦30.429NM—0003120..43NM—0305790..43AW7960430.431AL133268:0.432AV7431810.436NM—0140630.437AF2290670.441NM—0147090.444M7695570.448NM—0026020.453AF1040320.455NM—0051590.457BC0073840.461NM—0143030.464AV7419430.468AK0275190.柳cerevisiae)2pl6-1B-cellCLlVly即homa11A(zincfingerprotein)12q24.13DEAD(Asp-Glu-Ala-Asp)boxpolyp印tide5422qll.21-q11glycoproteinlb(platelet),beta.23polypeptide3ql3.3glycogensynthasekinase3beta2p21proteinkinaseD3llq24.2RNApseudouridylatesynthasedomaincontaining4lp36.2phosphoinositide-3-kinase，catalytic,deltapolypeptide4q22.1familywithsequencesimilarity13，memberAl2ql3-ql4proteinC(inactivatorofcoagulationfactorsVaandVilla)16q22.1cytochromeb5typeB(outermitochondrialmembrane)4pl4Kruppel-likefactor3(basic)7pl3lp36.132pl517q2516q24.315qll-ql419pl3.1222ql2.112pll.2-pll.119pl3.1Transcribedlocusdrebrin-likepeptidylaxgininedeiminase,typeIVubiquitinspecificpeptidase34phosphodiesterase6G,cGMP-specific，rod,gammasolutecarrierfamily7(cationicaminoacidtransporter,y+system),member5actin,alpha,cardiacmusclesterilealphamotifdomaincontaining1pescadillohomolog1,containingBRCTdomain(zebrafish)bicaudalDhomolog1(Drosophila)BCL11ADDX54GP1BBGSK3BPRKD3RPUSD4PIK3CDFAM13A1PROCCYB5BKLF3■LPADI4USP34PDE6GSLC7A5ACTCS膽lPES1BICD1solutecarrierfamily44，member2SLC44A2NM一0013480.47119pl3.3death-associatedproteinkinase3DAPK3NM—0037310.4789q34.3Sjogren'ssyndromenuclearautoantigenSSNA1BC0092640.4862pl3.1丄-AI7911350.4927p22.2IQmotifcontainingEIQCEAV6610550.492lp22dihydropyrimidinedehydrogenaseDPYDNM—0013250.艦Xq22.1cleavagestimulationfactor,3'CSTF2pre-腿，subunit2,64kDaNM—0065440.49514q23.1exocystcomplexcomponent5EX0C5NM—0190370.4978q24.3exosomecomponent4EX0SC4既0154420.53p22.3CCR4-N0Ttranscriptioncomplex,CN0T10subunit10A鵬30290.516pl2.1ubiquitinspecificpeptidase31USP31表5、6數(shù)據(jù)表明本發(fā)明提取物對(duì)肺泡上皮細(xì)胞來源的A549細(xì)胞的細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能基因、細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)相關(guān)基因、細(xì)胞代謝基因、轉(zhuǎn)錄和轉(zhuǎn)錄因子類基因以及蛋白質(zhì)翻譯合成類相關(guān)基因有調(diào)節(jié)作用。下述實(shí)施例均能實(shí)現(xiàn)上述實(shí)驗(yàn)例的效果。具體實(shí)施例方式實(shí)施例l:植物魚腥草提取物將植物魚腥草的干燥全草lg加0.5moL*mL—i氨水濕潤，加去離子水30倍量，W氫氧化鈉調(diào)pH8，煮沸l(wèi)h，濾過，濾液減壓濃縮至25。C下相對(duì)密度為1.12,離心，得提取浸膏；加10倍重量的蒸餾水混懸后，上清液用氯仿萃取，回收溶劑，得氯仿萃取物；將氯仿萃取物過離子交換樹脂，0.5moL，mL—1氨水洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮，真空干燥，即得魚腥草提取物。實(shí)施例2:制備植物魚腥草提取物的方法將植物魚腥草的干燥全草0.5g加0.2moL'mL-i氨水濕潤，加去離子水40倍量，P/。氫氧化鈉調(diào)pH8，煮沸0.5h，濾過，濾液減壓濃縮至2(TC下相對(duì)密度為1.30，離心，得提取浸膏；加15倍重量的蒸餾水混懸后，上清液用氯仿萃取，回收溶劑，得氯仿萃取物；將氯仿萃取物過離子交換樹脂，0.2moL*mL—i氨水洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮，真空干燥，即得魚腥草提取物。實(shí)施例3:制備植物魚腥草提取物的方法235g加1.0moL*mL—i氨水濕潤，加去離子水20倍量，19&氫氧化鈉調(diào)pH9，煮沸1.5h，濾過，濾液減壓濃縮至3(TC下相對(duì)密度為1.00，離心，得提取浸膏；加5倍重量的蒸餾水混懸后，上清液用氯仿萃取，回收溶劑，得氯仿萃取物；將氯仿萃取物過離子交換樹脂，1.0moL，mL—i氨水洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮，真空干燥，即得魚腥草提取物。實(shí)施例4:具有蛋白酶抑制活性的魚腥草提取物的鑒別方法A.硅鎢酸沉淀試管法檢驗(yàn)將實(shí)施例1中的提取物以水配制成lOmg'mL-1溶液，滴加濃鹽酸0.5mL，再逐滴滴加硅鎢酸試液，有類白色或淡黃色不溶物出現(xiàn)，硅鎢酸試液的加入增加，不溶物增多；B.薄層色譜法檢驗(yàn)在硅膠G薄層板上點(diǎn)樣，展開劑為氯仿環(huán)乙垸二乙胺為7:2:1，聯(lián)苯甲氨-氯氣顯色法進(jìn)行顯色，有雞蛋黃色斑點(diǎn)。實(shí)施例5:具有急性肺損傷防治作用的魚腥草提取物的含量測定方法A.以鹽酸麻黃堿為對(duì)照品加水配制成含鹽酸麻黃堿的O.lmgmL—'對(duì)照品標(biāo)準(zhǔn)溶液；精密量取鹽酸麻黃堿對(duì)照品標(biāo)準(zhǔn)溶液1mL，2mL,3mL，4mL，5mL分別置于干燥的分液漏斗中，分別補(bǔ)水至5mL，加氯仿10mL，振搖混勻待用；精確量取上述五種濃度鹽酸麻黃堿對(duì)照品標(biāo)準(zhǔn)溶液各lmL于10mL容量瓶中用氯仿定容至刻度，搖勻；另取5mL水，置于干燥的分液漏斗中，加氯仿10mL，振搖混勻待用，精確量取氯仿水溶液lmL于lOmL容量瓶中用氯仿定容至刻度，搖勻，作為空白對(duì)照液；在412nm進(jìn)行測定吸收值，以取樣量為橫坐標(biāo)，吸收值為縱坐標(biāo)，得回歸方程；B.取實(shí)施例l中的提取物lg，用氯仿溶解并定容到10mL，得待測液A，備用；精確移取lmL的待測液10mL于分液漏斗中，再精確加入5mLpH5.4檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液，1mL0.1%溴麝香草酚藍(lán)溶液，加氯仿10mL，振搖混勻，得待測液B，在412nm測定吸收度，由回歸方程計(jì)算得總生物堿含量為待測液B重量的51呢。實(shí)施例6:具有基因有調(diào)節(jié)作用的魚腥草提取物的質(zhì)量控制方法鑒別A.硅鎢酸沉淀試管法檢驗(yàn)將實(shí)施例1中的提取物以水配制成8mg，mL—124溶液，滴加濃鹽酸1.0mL，再逐滴滴加硅鎢酸試液，有類白色或淡黃色不溶物出現(xiàn)，硅鎢酸試液的加入增加，不溶物增多；B.薄層色譜法檢驗(yàn)在硅膠G薄層板上點(diǎn)樣，展開劑為氯仿環(huán)乙垸二乙胺為8:1:1.5，聯(lián)苯甲氨-氯氣顯色法進(jìn)行顯色，有雞蛋黃色斑點(diǎn)。含量測定A.以鹽酸麻黃堿為對(duì)照品加水配制成含鹽酸麻黃堿O.5mg*mL—i的對(duì)照品溶液；精密量取鹽酸麻黃堿對(duì)照品標(biāo)準(zhǔn)溶液1mL，2mL，3mL，4mL,5mL分別置于干燥的分液漏斗中，分別補(bǔ)水至6mL，加氯仿12mL，振搖混勻待用；精確量取各濃度鹽酸麻黃堿對(duì)照品標(biāo)準(zhǔn)溶液各1.5mL于10mL容量瓶中用氯仿定容至刻度，搖勻；另取6mL水，置于干燥的分液漏斗中，加氯仿12mL，振搖混勻待用，精確量取1.5mL于10mL容量瓶中用氯仿定容至刻度，搖勻，作為空白對(duì)照液；在412nm進(jìn)行測定吸收值，以取樣量為橫坐標(biāo)，吸收值為縱坐標(biāo)，得回歸方程；B.取實(shí)施例1中的提取物0.5g，用氯仿溶解定容到8mL,得待測液A，備用；精確移取0.5mL的待測液于分液漏斗中，再精確加入4mLpH5.4擰檬酸-檸檬酸鈉緩沖液，0.5mL0.1%溴麝香草酚藍(lán)溶液，加氯仿8mL,振搖混勻，得待測液B，在412nm測定吸收度，由回歸方程計(jì)算得總生物堿含量為待測液B重量的529&。權(quán)利要求1、一種具有蛋白酶抑制作用的魚腥草提取物，其特征在于該提取物由如下方法制成將植物魚腥草的干燥全草0.5～1.5重量份加0.2～1.0moL·mL-1氨水濕潤，加去離子水20～40倍量，1％氫氧化鈉調(diào)pH8～9，煮沸0.5～1.5h，濾過，濾液減壓濃縮至20℃～30℃下相對(duì)密度為1.00～1.30，離心，得提取浸膏；加5～15倍重量的蒸餾水混懸后，上清液用氯仿萃取，回收溶劑，得氯仿萃取物；將氯仿萃取物過離子交換樹脂，0.2～1.0moL·mL-1氨水洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮，真空干燥，即得。2、如權(quán)利要求1所述的魚腥草提取物，其特征在于該提取物由如下方法制成將植物魚腥草的干燥全草1重量份加0.5moLTnL-i氨水濕潤，加去離子水30倍量，19&氫氧化鈉調(diào)pH9，煮沸l(wèi)h,濾過，濾液減壓濃縮至25'C下相對(duì)密度為1.12，離心，得提取浸膏；加IO倍重量的蒸餾水混懸后，上清液用氯仿萃取，回收溶劑，得氯仿萃取物；將氯仿萃取物過離子交換樹脂，0.5moL'mL—工氨水洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮，真空干燥，即得。3、如權(quán)利要求1所述的魚腥草提取物，其特征在于該提取物由如下方法制成將植物魚腥草的干燥全草0.5重量份加0.2moL'mL—i氨水濕潤，加去離子水40倍量，196氫氧化鈉調(diào)pH8，煮沸0.5h，濾過，濾液減壓濃縮至20'C下相對(duì)密度為1.30,離心，得提取浸膏；加15倍重量的蒸餾水混懸后，上清液用氯仿萃取，回收溶劑，得氯仿萃取物；將氯仿萃取物過離子交換樹脂，0.2moL*mL—工氨水洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮，真空干燥，即得。4、如權(quán)利要求1所述的魚腥草提取物，其特征在于該提取物由如下方法制成將植物魚腥草的干燥全草1.5重量份加1.0moL*mL—i氨水濕潤，加去離子水20倍量，1%氫氧化鈉調(diào)pH9，煮沸1.5h，濾過，濾液減壓濃縮至30'C下相對(duì)密度為1.00，離心，得提取浸膏；加5倍重量的蒸餾水混懸后，上清液用氯仿萃取，回收溶劑，得氯仿萃取物；將氯仿萃取物過離子交換樹脂，1.0moL'ml^氨水洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮，真空干燥，即得。5、如權(quán)利要求1-4任一所述的魚腥草提取物的制備方法，其特征在于該方法包括如下步驟將植物魚腥草的干燥全草0.51.5重量份加0.21.0moL'ml^氨水濕潤，加去離子水2040倍量，1%氫氧化鈉調(diào)pH89，煮沸0.51.5h,濾過，濾液減壓濃縮至2(TC3(TC下相對(duì)密度為1.001.30，離心，得提取浸膏；加515倍重量的蒸餾水混懸后，上清液用氯仿萃取，回收溶劑，得氯仿萃取物；將氯仿萃取物過離子交換樹脂，0.21.0moL，mL—1氨水洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮，真空干燥，即得。6、如權(quán)利要求5所述的魚腥草提取物的制備方法，其特征在于該方法包括如下步驟將植物魚腥草的干燥全草1重量份加0.5moL'mL—i氨水濕潤，加去離子水30倍量，1%氫氧化鈉調(diào)pH9，煮沸l(wèi)h，濾過，濾液減壓濃縮至25"C下相對(duì)密度為1.12，離心，得提取浸膏；加10倍重量的蒸餾水混懸后，上清液用氯仿萃取，回收溶劑，得氯仿萃取物；將氯仿萃取物過離子交換樹脂，0.5moL'mL—'氨水洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮，真空干燥，即得。7、如權(quán)利要求5所述的魚腥草提取物的制備方法，其特征在于該方法包括如下步驟將植物魚腥草的干燥全草0.5重量份加0.2moL'ml^氨水濕潤，加去離子水40倍量，196氫氧化鈉調(diào)pH8，煮沸0.5h,濾過，濾液減壓濃縮至2(TC下相對(duì)密度為1.30，離心，得提取浸膏；加15倍重量的蒸餾水混懸后，上清液用氯仿萃取，回收溶劑，得氯仿萃取物；將氯仿萃取物過離子交換樹脂，0.2moL'mL-i氨水洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮，真空干燥，即得。8、如權(quán)利要求5所述的魚腥草提取物的制備方法，其特征在于該方法包括如下步驟將植物魚腥草的干燥全草1.5重量份加1.0moL*mL—t氨水濕潤，加去離子水20倍量，P/。氫氧化鈉調(diào)pH9，煮沸1.5h，濾過，濾液減壓濃縮至3(TC下相對(duì)密度為1.00，離心，得提取浸膏；加5倍重量的蒸餾水混懸后，上清液用氯仿萃取，回收溶劑，得氯仿萃取物；將氯仿萃取物過離子交換樹脂，1.0moL'ml^氨水洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮，真空干燥，即得。9、如權(quán)利要求1-4任一所述的魚腥草提取物的質(zhì)量檢測方法包括如下鑒別和/或含量測定中的一種或幾種鑒別A.硅鉤酸沉淀試管法檢驗(yàn)將本發(fā)明藥物提取物以水配制成812mg*mL—t溶液，滴加濃鹽酸0.21.0體積份，再逐滴滴加硅鎢酸試液，有類白色或淡黃色不溶物出現(xiàn)，硅鎢酸試液的加入增加，不溶物增多；B.薄層色譜法檢驗(yàn)在硅膠G薄層板上點(diǎn)樣，展開劑為氯仿環(huán)乙垸二乙胺為68:13:0.51.5，聯(lián)苯甲氨-氯氣顯色法進(jìn)行顯色，有雞蛋黃色斑點(diǎn)；含量測定A.以鹽酸麻黃堿為對(duì)照品加水配制成含鹽酸麻黃堿0.10.5mgmL—1的對(duì)照品標(biāo)準(zhǔn)溶液；精密量取鹽酸麻黃堿對(duì)照品標(biāo)準(zhǔn)溶液1體積，2體積，3體積，4體積，5體積份分別置于干燥的分液漏斗中，分別補(bǔ)水至46體積份，加氯仿812體積份，振搖混勻待用；精確量取上述五種濃度的鹽酸麻黃堿對(duì)照品標(biāo)準(zhǔn)溶液各0.51.5體積于10體積容量瓶中，用氯仿定容至刻度，搖勻；另取46體積份水，置于干燥的分液漏斗中，加氯仿812體積份，振搖混勻待用，精確量取氯仿水溶液0.51.5體積份于10體積份容量瓶中用氯仿定容至刻度，搖勻，作為空白對(duì)照液；在412nm進(jìn)行測定吸收值，以取樣量為橫坐標(biāo)，吸收值為縱坐標(biāo)，得回歸方程；B.取本發(fā)明藥物提取物0.51.5重量份，用氯仿溶解定容到812體積份，得待測液A，備用；精確移取0.51.5體積份的待測液A于分液漏斗中，再精確加入46體積份pH5.2pH5.6的檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液，0.51.5體積份0.10.5%溴麝香草酚藍(lán)溶液，加氯仿812體積份，振搖混勻，得待測液B，在412nm測定待測液B的吸收度，由回歸方程計(jì)算總生物堿含量為待測液B重量的50%54%。10、如權(quán)利要求9所述的魚腥草提取物的質(zhì)量檢測方法優(yōu)選如下鑒別和/或含量測定中的一種或幾種鑒別A.硅鉤酸沉淀試管法檢驗(yàn)將本發(fā)明藥物提取物以水配制成10mg，mL—1溶液，滴加濃鹽酸0.5體積份，再逐滴滴加硅鎢酸試液，有類白色或淡黃色不溶物出現(xiàn)，硅鎢酸試液的加入增加，不溶物增多；B.薄層色譜法檢驗(yàn)在硅膠G薄層板上點(diǎn)樣，展開劑為氯仿環(huán)乙烷二乙胺為6:3:0.5，聯(lián)苯甲氨-氯氣顯色法進(jìn)行顯色，有雞蛋黃色斑點(diǎn)；A.以鹽酸麻黃堿為對(duì)照品加水配制成含鹽酸麻黃堿O.lmg，mL—i的對(duì)照品標(biāo)準(zhǔn)溶液；精密量取鹽酸麻黃堿對(duì)照品標(biāo)準(zhǔn)溶液1體積，2體積，3體積，4體積，5體積份分別置于干燥的分液漏斗中，分別補(bǔ)水至5體積份，加氯仿IO體積份，振搖混勻待用；精確量取上述五種濃度的鹽酸麻黃堿對(duì)照品標(biāo)準(zhǔn)溶液各1體積份于IO體積容量瓶中，用氯仿定容至刻度，搖勻；另取5體積份水，置于干燥的分液漏斗中，加氯仿10體積份，振搖混勻待用，精確量取氯仿水溶液1體積份于10體積份容量瓶中用氯仿定容至刻度，搖勻，作為空白對(duì)照液；在412nm進(jìn)行測定吸收值，以取樣量為橫坐標(biāo)，吸收值為縱坐標(biāo)，得回歸方程；B.取本發(fā)明藥物提取物1重量份，用氯仿溶解定容到10體積份，得待測液A，備用；精確移取l體積份的待測液于分液漏斗中，再精確加入5體積份pH5.4擰檬酸-擰檬酸鈉緩沖液，1體積份0.1%溴麝香草酚藍(lán)溶液，加氯仿10體積份，振搖混勻，得待測液B，在412nm測定吸收度，由回歸方程計(jì)算得總生物堿含量為待測液B重量的51%。11、如權(quán)利要求9所述的魚腥草提取物的質(zhì)量檢測方法優(yōu)選如下鑒別和/或含量測定中的一種或幾種鑒別A.硅鉤酸沉淀試管法檢驗(yàn)將本發(fā)明藥物提取物以水配制成8mg，mL—t溶液，滴加濃鹽酸l.O體積份，再逐滴滴加硅鎢酸試液，有類白色或淡黃色不溶物出現(xiàn)，硅鎢酸試液的加入增加，不溶物增多；B.薄層色譜法檢驗(yàn)在硅膠G薄層板上點(diǎn)樣，展開劑為氯仿環(huán)乙烷二乙胺為8:1:1.5，聯(lián)苯甲氨-氯氣顯色法進(jìn)行顯色，有雞蛋黃色斑點(diǎn)；含量測定A.以鹽酸麻黃堿為對(duì)照品加水配制成含鹽酸麻黃堿O.5mg*mL—i的對(duì)照品標(biāo)準(zhǔn)溶液；精密量取鹽酸麻黃堿對(duì)照品標(biāo)準(zhǔn)溶液1體積，2體積，3體積，4體積，5體積份分別置于干燥的分液漏斗中，分別補(bǔ)水至6體積份，加氯仿12體積份，振搖混勻待用；精確量取上述五種濃度的鹽酸麻黃堿對(duì)照品標(biāo)準(zhǔn)溶液各1.5體積于10體積容量瓶中，用氯仿定容至刻度，搖勻；另取6體積份水，置于干燥的分液漏斗中，加氯仿12體積份，振搖混勻待用，精確量取氯仿水溶液1.5體積份于10體積份容量瓶中用氯仿定容至刻度，搖勻，作為空白對(duì)照液；在412nm進(jìn)行測定吸收值，以取樣量為橫坐標(biāo)，吸收值為縱坐標(biāo)，得回歸方程；B.取本發(fā)明藥物提取物0.5重量份，用氯仿溶解定容到8體積份，得待測液A，備用；精確移取0.5體積份的待測液于分液漏斗中，再精確加入4體積份pH5.6的檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液，0.5體積份0.1%溴麝香草酚藍(lán)溶液，加氯仿8體積份，振搖混勻，得待測液B，在412nm測定吸收度，由回歸方程計(jì)算得總生物堿含量為待測液B重量的52%。12、如權(quán)利要求9所述的魚腥草提取物的質(zhì)量檢測方法優(yōu)選如下鑒別和/或含量測定中的一種或幾種鑒別A.硅鉤酸沉淀試管法檢驗(yàn)將本發(fā)明藥物提取物以水配制成12mg*mL—1溶液，滴加濃鹽酸l.O體積份，再逐滴滴加硅鎢酸試液，有類白色或淡黃色不溶物出現(xiàn)，硅鎢酸試液的加入增加，不溶物增多；B.薄層色譜法檢驗(yàn)在硅膠G薄層板上點(diǎn)樣，展開劑為氯仿環(huán)乙烷二乙胺為7:2:1.0，聯(lián)苯甲氨-氯氣顯色法進(jìn)行顯色，有雞蛋黃色斑點(diǎn)；含量測定A.以鹽酸麻黃堿為對(duì)照品加水配制成含鹽酸麻黃堿O.3mg，mL—1的對(duì)照品標(biāo)準(zhǔn)溶液；精密量取鹽酸麻黃堿對(duì)照品標(biāo)準(zhǔn)溶液1體積，2體積，3體積，4體積，5體積份分別置于干燥的分液漏斗中，分別補(bǔ)水至4體積份，加氯仿8體積份，振搖混勻待用；精確量取上述五種濃度的鹽酸麻黃堿對(duì)照品標(biāo)準(zhǔn)溶液各0.5體積于IO體積容量瓶中，用氯仿定容至刻度，搖勻；另取4體積份水，置于干燥的分液漏斗中，加氯仿8體積份，振搖混勻待用，精確量取氯仿水溶液0.5體積份于10體積份容量瓶中用氯仿定容至刻度，搖勻，作為空白對(duì)照液；在412nm進(jìn)行測定吸收值，以取樣量為橫坐標(biāo)，吸收值為縱坐標(biāo)，得回歸方程；B.取本發(fā)明藥物提取物1.5重量份，用氯仿溶解定容到12體積份，得待測液A，備用；精確移取1.5體積份的待測液于分液漏斗中，再精確加入6體積份pH5.2的檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液，1.5體積份0.5%溴麝香草酚藍(lán)溶液，加氯仿12體積份，振搖混勻，得待測液B,在412nm測定吸收度，由回歸方程計(jì)算得總生物堿含量為待測液B重量的54%。13、如權(quán)利要求l-4任一所述的魚腥草提取物在制備具有蛋白酶抑制作用的藥物中的應(yīng)用。14、如權(quán)利要求13所述的蛋白酶抑制作用是指防治急性肺損傷。15、如權(quán)利要求13所述的蛋白酶抑制作用是指對(duì)肺泡上皮細(xì)胞來源的A549細(xì)胞的細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能基因、細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)相關(guān)基因、細(xì)胞代謝基因、轉(zhuǎn)錄和轉(zhuǎn)錄因子類基因以及蛋白質(zhì)翻譯合成類相關(guān)基因有調(diào)節(jié)作用。全文摘要本發(fā)明公開了一種具有蛋白酶抑制作用的魚腥草提取物及其制備方法和質(zhì)量控制方法。在制備過程中通過煎煮、過濾、濃縮、萃取等步驟最終得到魚腥草提取物。本發(fā)明魚腥草提取物具有較強(qiáng)的蛋白酶抑制活性，能降低急性肺損傷、大鼠肺組織脂質(zhì)過氧化水平，增強(qiáng)抗氧化能力，減少氧自由基和炎性因子的釋放，而且對(duì)肺泡上皮細(xì)胞來源的A549細(xì)胞的細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能基因、細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)相關(guān)基因、細(xì)胞代謝基因、轉(zhuǎn)錄和轉(zhuǎn)錄因子類基因以及蛋白質(zhì)翻譯合成類相關(guān)基因有調(diào)節(jié)作用。文檔編號(hào)A61K36/78GK101664472SQ20081011931公開日2010年3月10日申請(qǐng)日期2008年9月3日優(yōu)先權(quán)日2008年9月3日發(fā)明者劉同祥,張宗申,牛建昭,王繼峰申請(qǐng)人:劉同祥;王繼峰;牛建昭;張宗申