專利名稱：：一種治療脂肪肝的藥物組合物及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種治療脂肪肝的藥物組合物，具體地，是以姜黃、虎杖為原料制備而成的藥物組合物。屬中藥領(lǐng)域。脂肪肝(FattyLiver，F(xiàn)L)是肝臟脂蛋白代謝紊亂，甘油三酯(Triglyceride,TG)的合成速度大于將其泌入血液的速度，TG大量堆積于肝臟而致的一種病理改變。正常情況下，肝脂肪占肝濕重的3%5%，當(dāng)脂肪含量超過肝濕重的5%或組織學(xué)上1/3以上肝實(shí)質(zhì)脂肪化即為脂肪肝。臨床根據(jù)發(fā)病的緩急程度分為急性脂肪肝和慢性脂肪肝兩大類。急性脂肪肝見于四環(huán)素類藥物中毒、妊娠晚期、腦病脂肪肝綜合征(Reye綜合征)等，其臨床表現(xiàn)及預(yù)后類似于急性或亞急性重癥病毒性肝炎，若治療及時(shí)一般不留后遺癥；慢性脂肪肝發(fā)病隱匿，臨床表現(xiàn)及實(shí)驗(yàn)室檢查缺乏特異性，一般認(rèn)為與酗酒、肥胖、高脂蛋白血癥、2型糖尿病、病毒性肝炎、營養(yǎng)不良等有關(guān)。在我國臨床常見及通常所說的脂肪肝主要是肥胖性脂肪肝、糖尿病性脂肪肝、酒精性脂肪肝。此類慢性脂肪肝又可分為酒精性脂肪和非酒精性脂肪肝。近年來隨著人們生活水平的提高、飲食結(jié)構(gòu)的改變、檢測手段的進(jìn)步以及保健意識的增強(qiáng)，脂肪肝的檢出率呈逐年增高的趨勢。臨床流行病學(xué)研究表明我國脂肪肝的發(fā)病率在5.2%11.4%之間，所處經(jīng)濟(jì)地區(qū)越發(fā)達(dá)，發(fā)病率也越高，并且發(fā)病年齡有越來越小的趨勢。慢性脂肪肝既是多種病因的結(jié)果，同時(shí)也作為病因使單純性脂肪肝向脂肪性肝炎、脂肪性肝纖維化、脂肪性肝硬化發(fā)展，故及早診治對于防止脂肪性肝病的發(fā)展極為重要。然而脂肪肝的危害至今尚未引起公眾及醫(yī)學(xué)界足夠的重視，目前尚無特效治療藥物，而且病因治療中的一些促進(jìn)血液中脂質(zhì)運(yùn)輸至肝臟進(jìn)行代謝的降血脂藥物，在降低血脂的同時(shí)卻升高肝脂，加重肝臟脂肪沉積；II型糖尿病伴脂肪肝者，在用胰島素治療的同時(shí)，脂肪性肝炎的發(fā)生率明顯增高；病毒性肝炎的治療過程中，脂肪肝的形成是肝功能改善緩慢的一個(gè)重要原因。即在針對相關(guān)疾病治療的同時(shí)，脂肪肝也未必能夠得到有效的控制，并且常伴隨脂肪肝發(fā)生的肥胖、高脂血癥等發(fā)病機(jī)制復(fù)雜多樣，采用控制飲食、增加體力活動等非藥物療法及藥物治療也常難獲得滿意療效。盡管目前有許多報(bào)道認(rèn)為中醫(yī)藥對脂肪肝的防治具有一定的優(yōu)勢，然而臨床及基礎(chǔ)研究方面仍存在許多問題，還需做更深入、規(guī)范的研究。關(guān)于脂肪肝的藥物治療，臨床用于脂肪肝治療的藥物主要有調(diào)血脂藥和護(hù)肝去脂藥兩大類。常用的調(diào)血脂藥有的在降低血脂時(shí)肝脂未見減少，甚至有的藥物在降低血脂的同時(shí)，肝脂反而增加。因此對于血脂正常的脂肪肝患者來說，原則上不用降脂藥。護(hù)肝去脂藥中較早應(yīng)用的是膽堿，其為卵磷脂的組成成分，可促進(jìn)磷脂合成，加速肝內(nèi)脂肪轉(zhuǎn)運(yùn)而去除肝脂。同類藥物還有蛋氨酸，可在體內(nèi)提供甲基合成膽堿，具有促進(jìn)肝內(nèi)脂肪代謝及保肝解毒作用。因人類幾乎不存在膽堿缺乏現(xiàn)象，故膽堿不但不能防治人類高脂飲食和酒精誘發(fā)的脂肪肝，并因其有一定程度的肝毒性，反可致肝損傷。目前認(rèn)為此類藥物僅適用于營養(yǎng)缺乏、胃腸外營養(yǎng)導(dǎo)致膽堿缺乏或某些藥物誘發(fā)的脂肪肝。氨基酸制劑補(bǔ)給機(jī)體合成蛋白質(zhì)必須的氨基酸，可用于惡性營養(yǎng)不良性脂肪肝。具有護(hù)肝去脂作用的藥物還有水飛薊素、肉毒堿乳清酸鹽、熊去氧膽酸、甜菜堿、牛黃酸、還原型谷胱甘肽等，它們通過抗氧化、改善肝臟微循環(huán)，促進(jìn)VLDL合成，促進(jìn)線粒體代謝活性，抗肝細(xì)胞壞死等環(huán)節(jié)發(fā)揮作用，但這些藥物治療作用報(bào)道有的是動物實(shí)驗(yàn)研究資料，或僅為部分臨床研究結(jié)論，治療脂肪肝的確切療效、機(jī)制及安全性尚須做更進(jìn)一步的研究。中醫(yī)藥研究一、病因、病機(jī)，輕、中度脂肪肝早期雖無明顯的臨床癥狀，但隨著病情的發(fā)展，部分患者可出現(xiàn)脅痛、食欲不振、乏力、肝腫大等癥狀與體征，并且脂肪肝患者多具長期酗酒、食肥甘厚味、形體肥胖等特點(diǎn)，中醫(yī)將其歸為癥瘕、積聚、脅痛、痰濁、濕氣、臌脹等范疇。發(fā)病機(jī)制與痰、瘀、積有關(guān)，認(rèn)為脂肪肝是飲食不節(jié)、嗜食肥甘或飲酒無度，致使脾失健運(yùn)，肝失疏泄，濕熱蘊(yùn)積于脾胃，痰濕內(nèi)生，氣滯血瘀，最終導(dǎo)致氣滯、痰濕、血瘀互結(jié)，積于脅下而成。其病位主要在肝脾兩臟。脾主運(yùn)化，若飲食不節(jié)，脾失健運(yùn)，水濕不化、濕濁內(nèi)阻而見乏力、納差。肝主疏泄，調(diào)暢全身氣血、津液，肝失疏泄，氣機(jī)郁結(jié)，氣滯血瘀而見脅肋脹滿不適、隱痛、肝腫大。二、中醫(yī)藥治療，(一)單味中藥，有學(xué)者對臨床報(bào)道治療脂肪肝的中藥處方進(jìn)行了分析，得出使用效率最高的單味中藥依次為山楂、丹參、澤瀉、柴胡、草決明、制首烏、郁金、茯苓、陳皮、半夏、大黃。(二)復(fù)方治療，去脂軟肝丸、虎金丸、肝脂平丸、舒肝脂膠囊、小柴胡湯、脂肝樂膠囊、五子衍宗丸，目前尚無單獨(dú)將姜黃、虎杖配伍用于治療脂肪肝的相關(guān)報(bào)道。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的技術(shù)方案是涉及一種新的治療脂肪肝的藥物組合物。本發(fā)明還提供了該藥物組合物的制備方法和用途。本發(fā)明提供了一種治療脂肪肝的藥物組合物，它是由下述重量配比的原料制備而成的制劑姜黃l-3份、虎杖l-3份。進(jìn)一步優(yōu)選地，它是由下述重量配比的原料制備而成的制劑姜黃l-2份、虎杖l-2份。進(jìn)一步優(yōu)選地，它是由下述重量配比的原料制備而成的制劑姜黃1份、虎杖l-2份。更進(jìn)一步優(yōu)選地，它是由下述重量配比的原料制備而成的制劑姜黃1份、虎杖1份。其中，所述的藥劑為膠囊劑、片劑、丸劑、口服液或顆粒劑。本發(fā)明還提供了一種制備所述的治療脂肪肝的藥物組合物，它包括如下步驟a、取藥材姜黃、虎杖；b、姜黃醇提(乙醇濃度>55%)，減壓回收乙醇，結(jié)晶，過濾，干燥，即得姜黃提取物；c、取虎杖，加水浸透，粉碎，含氧溶劑提取，濃縮，結(jié)晶，過濾，干燥，即得虎杖提取物；所述的含氧溶劑為水、含水醇、甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯等；d、將姜黃提取物、虎杖提取物混合，加入藥劑上可接受的輔料或輔助性成分制備成藥學(xué)上常用的藥劑。本發(fā)明姜黃提取物、虎杖提取物和適量輔料制備成適合于口服給藥的各種固體劑型，對高脂飲食、乙硫氨酸、四環(huán)素、四氯化碳、復(fù)合因素(高脂+酒精)等多種病因所致實(shí)驗(yàn)性脂肪肝均有很好的治療或?qū)棺饔茫⒛苡行Ы档脱逯心懝檀?、低密度脂蛋白及極低密度脂蛋白含量，升高高密度脂蛋白含量，具有協(xié)同增效作用，有效物質(zhì)清楚，質(zhì)量可以控制，且無明顯毒性作用，是一種新型抗脂肪肝有效藥物。具體實(shí)施方式實(shí)施例1本發(fā)明藥物的制備取藥材姜黃l份，粉碎成粗粉，加65%乙醇滲濾提取，至流出液近無色，減壓回收乙醇，得清膏，保溫結(jié)晶，過濾，干燥，即得姜黃提取物取藥材虎杖l份，加2倍量水，浸透，粉碎成粗粉，加入水提取，濃縮，結(jié)晶，過濾，干燥，即得虎杖提取物；將姜黃提取物、虎杖提取物混合均勻，填裝膠囊；或者加入藥劑上可接受的輔料、輔助性成分，按常規(guī)制備成藥學(xué)上常用的藥劑如片劑、顆粒劑、口服液等。實(shí)施例2本發(fā)明藥物的制備取姜黃1份、虎杖3份；姜黃提取物按實(shí)施例l提取，虎杖提取物按實(shí)施例l方法提取，其中使用的含氧溶劑為含水醇。實(shí)施例3本發(fā)明藥物的制備取姜黃3份、虎杖l份；姜黃提取物按實(shí)施例l提取，虎杖提取物按實(shí)施例1方法提取，其中使用的含氧溶劑為甲醇。實(shí)施例4本發(fā)明藥物的制備取姜黃1份、虎杖2份；姜黃提取物按實(shí)施例1提取，虎杖提取物按實(shí)施例l方法提取，其中使用的含氧溶劑為乙醇。實(shí)施例5本發(fā)明藥物的制備取姜黃2份、虎杖l份；姜黃提取物按實(shí)施例1提取，虎杖提取物按實(shí)施例1方法提取，其中使用的含氧溶劑為丙酮。實(shí)施例6本發(fā)明藥物的制備姜黃提取物按實(shí)施例1提取，虎杖提取物按實(shí)施例1方法提取，其中使用的含氧溶劑為乙酸乙酯。實(shí)施例7本發(fā)明藥物的質(zhì)量控制方法。姜黃素照高效液相色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VID)測定。色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八垸基硅烷鍵合硅膠為填充劑；異丙醇水冰醋酸(20:27:48:5)為流動相；檢測波長為420nm。理論塔板數(shù)以姜黃素峰計(jì)算應(yīng)不低于2000。對照品溶液的制備精密稱取在6(TC減壓干燥4小時(shí)的姜黃素對照品適量，加甲醇制成每lml含15ug的溶液，即得。供試品溶液的制備精密稱取實(shí)施例卜6制備的藥物5mg，置100ml容量瓶中，加入甲醇使溶解，搖勻，定容，即為供試品溶液。測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各lOul，注入液相色譜儀，測定，即得。本發(fā)明藥物膠囊劑的內(nèi)容物含姜黃素(C21H8006)應(yīng)不少于30%。白黎戸醇照高效液相色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VID)測定。色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；甲醇水(45:55)為流動相；檢測波長為318nm。理論塔板數(shù)以白黎蘆醇峰計(jì)算應(yīng)不低于2500。對照品溶液的制備精密稱取在6(TC減壓干燥4小時(shí)的白黎蘆醇對照品適量，加甲醇制成每lml含100iig的溶液，即得。供試品溶液的制備精密稱取本品內(nèi)容物5mg，置10ral容量瓶中，加入甲醇使溶解，搖勻，定容，即為供試品溶液。測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10ul，注入液相色譜儀，測定，即得。本發(fā)明藥物膠囊劑的內(nèi)容物含白黎盧醇(Cl4H1203)應(yīng)不少于25%。以下通過藥效學(xué)試驗(yàn)證明本發(fā)明的有益效果。1、藥品與試劑本發(fā)明藥物膠囊，由實(shí)施例1的方法制備，由本所藥化室楊安東研究員提供。4'C密閉避光保存。批號010306。每克姜黃提取物相當(dāng)于原生藥83g，每克虎杖提取物相當(dāng)于原生藥82g。提取物由四川省中藥研究所藥物化學(xué)研究室提供。需用時(shí)用蒸餾水配成所需濃度的混懸液。聯(lián)苯雙酯滴丸浙江醫(yī)藥股份有限公司新昌制藥廠生產(chǎn)，批號070501當(dāng)飛利肝靈，四川美達(dá)康藥業(yè)生產(chǎn)，AST，ALT，TG試劑盒長春匯力生物技術(shù)有限公司。批號AST:2007031，ALT:2007004，TG:2007004吉非羅奇膠囊黑衛(wèi)藥準(zhǔn)字(1996)第200055號。哈爾濱制藥總廠，批號A20000403。月見草油膠丸粵衛(wèi)藥準(zhǔn)字(1994)第104156號。廣州星群(藥業(yè))股份有限公司提供，批號0008001。去氫膽酸片衛(wèi)藥準(zhǔn)字(1981)第0570號。上海黃河制藥廠出品，批號840504A。金晶康(鹽酸四環(huán)素膠囊)國藥準(zhǔn)字(1988)XF-1429號。寧夏制藥廠，批號000803。東寶肝泰吉衛(wèi)藥準(zhǔn)字(1996)第430110號。通化東寶藥業(yè)股份有限公司，批號000310。聯(lián)苯雙脂滴丸魯衛(wèi)藥準(zhǔn)字(1996)第055039號。山東省德州制藥廠，批號20000709?？偰懝檀紲y定試劑盒，四川省邁克科技有限責(zé)任公司，批號001030，010221。甘油三酯測定試劑盒四川省邁克科技有限責(zé)任公司，批號001030，00122。總膽紅素測定試劑盒(重氮法)，四川省邁克科技有限責(zé)任公司，批號010510。丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT/GPT)測定一改良賴氏法試劑盒，四川省邁克科技有限責(zé)任公司，批號001117。門東氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST/GOT)測定一改良賴氏法試劑盒，四川省邁克科技有限責(zé)任公司，批號001120。高密度脂蛋白膽固醇測定試劑盒(磷鎢酸鎂沉淀法)，四川省邁克科技有限責(zé)任公司，批號001025，010321。低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)測定-PVS法試劑盒，四川邁克科技有限責(zé)任公司，批號000928，010424。載脂蛋白A1、B測定(apoAl，B)，全液體雙試劑透射比濁法，南京聚力生物醫(yī)學(xué)工程研究所，批號.*010412丙二醛測定試劑盒(MDA—TBA比色法)，南京聚力生物醫(yī)學(xué)工程研究所，批號010402。超氧化物歧化酶(SOD)測定試劑盒，南京聚力生物醫(yī)學(xué)工程研究所，批號乙硫氨酸(DL-ethionine)，Sigma公司生產(chǎn)，批號。膽固醇，化學(xué)純(進(jìn)口分裝)，廣州南方化玻公司分裝，批號991123。丙硫氧嘧啶片(丙賽優(yōu))，滬衛(wèi)藥準(zhǔn)字(1995)第045006號，上海復(fù)星朝暉藥業(yè)有限公司，批號。脫氧膽酸鈉，進(jìn)口分裝，中國醫(yī)藥集團(tuán)上海化學(xué)試劑公司，批號98051。色拉油，駱駝牌，生產(chǎn)日期2000年11月23日，番禹合興油脂有限公司。白酒，(60度高梁酒)九江牌，重慶市江津酒廠。豬油，自制。其余試劑均為市售分析純。2、實(shí)驗(yàn)環(huán)境與動物認(rèn)(昆明種)小鼠，一級合格，川實(shí)動管第2002—33號，由四川省中藥研究所實(shí)驗(yàn)動物中心提供。SD大鼠，一級合格，川實(shí)動管第2002—32號，由四川省中藥研究所實(shí)驗(yàn)動物中心提供。實(shí)驗(yàn)環(huán)境符合國家小鼠、大鼠一級使用環(huán)境設(shè)施標(biāo)準(zhǔn)(四川省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動物管理會醫(yī)動字第24303013號)。3、實(shí)驗(yàn)儀器日本島津UV730半自動生化分析儀。北京世帝科學(xué)儀器公司LG-R-80系列血液粘度測試儀。北京醫(yī)用離心機(jī)廠LD5-2A低速離心機(jī)。SigmaZK15型冷凍離心機(jī)。日本SHIMADZUEB—3200D型電子天平(d=0.01g)。寧波新芝科學(xué)儀器廠DY89—I型電動玻璃勻漿機(jī)。法國BASIC半自動生化分析儀。上海精天電子儀器有限公司JA1003A電子天平(c^lmg)。試驗(yàn)例1本發(fā)明藥物藥效協(xié)同作用試驗(yàn)在處方篩選的過程中，選擇了四氯化碳和乙硫氨酸兩個(gè)小鼠急性肝損傷的快篩模型，來驗(yàn)證配伍后的增效性。四氯化碳模型CC1,在肝內(nèi)經(jīng)微粒體細(xì)胞色素氧化酶P450激活為自由基CC13—，導(dǎo)致肝微粒體的脂質(zhì)過氧化，同時(shí)CCl4還可以損傷多種細(xì)胞器，如破壞線粒體結(jié)果及功能，使其對脂肪的氧化能力下降，損傷肝細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)使脂蛋白的合成減少。乙硫氨酸模型乙硫氨酸與甲硫氨酸結(jié)構(gòu)相似，后者為體內(nèi)甲基轉(zhuǎn)化的供體，乙硫氨酸與之競爭，取代甲基而提供乙基使肝臟蛋白合成產(chǎn)生障礙，造成把TG轉(zhuǎn)運(yùn)出肝臟的載脂蛋白減少，從而導(dǎo)致TG蓄積于肝臟而成脂肪肝。按姜黃與虎杖總生藥量為18g計(jì)算，分別設(shè)定姜黃與虎杖配比1:2組，1:3組，2:l組，3:1組，換算成小鼠劑量(相當(dāng)于臨床劑量20倍)，給藥劑量為0.072g/kg。又分別設(shè)l:1比例組中、小劑量(分別相當(dāng)與臨床劑量的10倍、5倍)，給藥劑量分別為姜黃虎杖混合物0.036g/kg，0.018g/kg，聯(lián)苯雙酯100mg/kg，當(dāng)飛利肝靈(臨床劑量20倍)普通級昆明種小鼠80只，體重1822g,雌雄各半，隨機(jī)分為8組，每組10只，8組分別為正常對照組，模型組，聯(lián)苯雙酯陽性對照組，姜黃與虎杖配比l:l組，1:2組，1:3組，2:1組，3:1組。將提取物用蒸餾水配成混懸液，小鼠灌胃給藥，每日一次，連續(xù)6天。除空白組外，第6天用0.15%的四氯化碳液體石蠟溶液0.lml/10g給小鼠腹腔注射，空白組給予等體積液體石蠟腹腔注射，于注射后即禁食，注射后16h時(shí)，小鼠眶內(nèi)靜脈取血，解剖取肝臟，血以3000r/m離心15min，取血清。半自動生化儀測定AST,ALT，TG。表1_對四氯化碳誘導(dǎo)的小鼠肝損傷的影響Hi動物數(shù)"f^(只)U/Lmmol/L注與正常對照組比較#p<005,^p<001;與模型組比較:*p<0.05'**p<0.001結(jié)果表1可見，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，四氯化碳能夠明顯升高小鼠血內(nèi)的ALT，TG，提示造模成功。姜黃虎杖1:1配伍組對四氯化碳誘導(dǎo)的ALT有明顯降低作用，對TG的升高也有明顯的降低作用。姜黃虎杖2:1組或3:1組對TG的升高也有降低作用。1067.87±3扁0.920.80±0.1810114.32±7.87##0.98±0.23##1075.28土23.19"0.67±0.15**1087.37土36.32"0.87±0.24*10121.00±42.830.97±0.2610118.04±29.831.21±0.3510140.31±26.420.89±0.25*10107.23±46.370.83±0.18*組組組組組組組組常型性1231,正模陽1.LLl3結(jié)論綜合考慮以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果，設(shè)定姜黃虎杖l:l配伍組為最佳配伍比例組，并以此為基礎(chǔ)進(jìn)行最佳配伍劑量的實(shí)驗(yàn)。試驗(yàn)例2本發(fā)明藥物對四氯化碳誘導(dǎo)的小鼠急性肝損傷的影響根據(jù)《中國藥典》2005版，姜黃用量為39g，虎杖用量為915g，單味藥選最大劑量，配伍組按姜黃最大劑量(即9g)以比例l:l配伍，換算成小鼠劑量(相當(dāng)于臨床劑量20倍)。即姜黃0.036g/kg，虎杖0.061g/kg，姜黃虎杖混合物0.072g/kg。普通級昆明種小鼠60只，體重1822g，雌雄各半，隨機(jī)分為6組，每組10只，6組分別為正常對照組，模型組，當(dāng)飛利肝靈陽性對照組，姜黃組，虎杖組，姜黃虎杖配伍組。將提取物用蒸餾水配成混懸液，小鼠灌胃給藥，每日一次，連續(xù)6天。除空白組外，第6天用0.15%的四氯化碳液體石蠟溶液0.lml/10g給小鼠腹腔注射，空白組給予等體積液體石蠟腹腔注射，于注射后即禁食，注射后16h時(shí)，小鼠眶內(nèi)靜脈取血，解剖取肝臟，血以3000r/m離心15min，取血清。半自動生化儀測定AST，ALT,TG。_表2對四氯化碳誘導(dǎo)的小鼠急性肝損傷的影響Hi動物數(shù)XSPXi"f~~(只)U/LU/Lmmol/L注與正常對照組比較ttp<005，將p〈001;與模型組比較*p〈0.05，**p〈0.001結(jié)果表2可見，結(jié)果顯示四氯化碳造?？娠@著升高ALT，AST，TG，提示模型成功。姜黃虎杖配伍組可明顯降低被四氯化碳誘導(dǎo)而升高的血內(nèi)ALT，AST，TG。試驗(yàn)例3本發(fā)明藥物對乙硫氨酸誘導(dǎo)的小鼠肝損傷的影響普通級昆明種小鼠60只，體重1822g,雌雄各半，隨機(jī)分為6組，每組10只，6組分別為正常對照組，模型組，聯(lián)苯雙酯陽性對照組，姜黃組，虎杖組，姜黃虎杖配伍組。將提取物用蒸餾水配成混懸液，小鼠灌胃給藥，每日一次，連續(xù)6天。除空白組外，第7天灌胃給予乙硫氨酸2.5mg/10g體重，隨后的4、10小時(shí)再分別灌服各組受試藥2次，7h開始禁食不禁水，給予乙硫氨酸后的24h后眶內(nèi)靜脈取血，以3000r/m離心15min，取血清。半99.23±3.09266.61±7.87##213.62±9.09**263.67±14.41264.00±9.89*211.65±62.55**160.92±23.83259.65±18.95##228.84±9，232.30±8.77233.00±12.87208.69土39.51"0.91±0.222.08±0.51##1.29±0.23**1.60±0.36*1.08±0.39**0.96±0.27**ooooo且經(jīng)§自纟-經(jīng)"白型性黃杖黃空模陽姜虎姜自動生化儀測定AST，TG。表3對乙硫氨酸誘導(dǎo)的小鼠肝損傷的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>注與正常對照組比較ttp〈005,##p<001;與模型組比較*p〈0.05，林p〈0.001結(jié)果表3可見，造模藥物乙硫氨酸可以顯著升高小鼠血內(nèi)AST，TG，提示造模成功，姜黃虎杖配伍組可以明顯降低由乙硫氨酸誘導(dǎo)升高的AST和TG。試驗(yàn)例4本發(fā)明藥物藥效學(xué)試驗(yàn)普通級昆明種小鼠60只，體重1822g,雌雄各半，隨機(jī)分為6組，每組10只，6組分別為正常對照組，模型組，聯(lián)苯雙酯陽性對照組，姜黃與虎杖配比1:1組的大、小劑量組(分別相當(dāng)與臨床劑量的10倍、5倍)。將提取物用蒸餾水配成混懸液，小鼠灌胃給藥，每日一次，連續(xù)6天。除空白組外，第6天用0.15%的四氯化碳液體石蠟溶液0.1ml/10g給小鼠腹腔注射，空白組給予等體積液體石蠟腹腔注射，于注射后即禁食，注射后16h時(shí)，小鼠眶內(nèi)靜脈取血，解剖取肝臟，血以3000r/m離心15min，取血清。半自動生化儀測定AST，ALT，TG。表4對四氯化碳誘導(dǎo)的:l『、性肝損傷的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>注與正常對照組比較p<005，##p<001;與模型組比較*p<0.05，**p<0.001結(jié)果表4:實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，四氯化碳可以明顯提高小鼠血內(nèi)的AST,ALT,TG，提示造模成功。姜黃虎杖大劑量組可以非常明顯降低AST與TG，也可以明顯降低ALT,姜黃虎杖配伍小劑量組可以非常明顯降低ALT，對AST與TG也有明顯的降低作用。藥效結(jié)果說明，姜黃虎杖配伍確對四氯化碳以及乙硫氨酸誘導(dǎo)的小鼠急性肝損傷造成的ALT,AST，TG的升高有明顯降低作用，且在各組配伍比例以及劑量中，姜黃虎杖配伍1:1大劑量組對造模藥物引起的AST,ALT以及TG的升高降低作用綜合評價(jià)最好。這些結(jié)果可能與配伍后治療的機(jī)理有關(guān)，為兩藥配伍治療脂肪肝提供了一定實(shí)驗(yàn)依據(jù)，提示姜黃虎杖配伍1:1大劑量組，有較好的治療脂肪肝的效果。綜上，經(jīng)現(xiàn)代藥理學(xué)研究證明，姜黃虎杖兩藥分別具有保肝降脂作用，將兩藥聯(lián)用，分別用CCl4乙硫氨酸誘導(dǎo)造成小鼠急性肝損傷，經(jīng)實(shí)驗(yàn)證明，配伍后藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)優(yōu)于兩藥分別單用。此實(shí)驗(yàn)為兩藥配伍治療脂肪肝的配方合理性提供了一定的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。試驗(yàn)例5本發(fā)明藥物藥效學(xué)試驗(yàn)K對進(jìn)入肝臟脂肪酸過多(高脂飲食)所致實(shí)驗(yàn)性脂肪肝的影響表5可見，模型對照組動物脂質(zhì)代謝發(fā)生紊亂，表現(xiàn)為血清TC、TG和LDL-C高于正常對照組，模型對照組血清HDL-C低于正常對照組，其中TC、HDL-C差異顯著(p<0.010.05)。本發(fā)明藥物膠囊200mg/kg可以顯著降低大鼠TG水平(p<0.05)，在所試劑量范圍內(nèi)(50200mg/kg)，本發(fā)明藥物膠囊具有降低模型動物血清TC、TG、LDL-C和升高血清HDL-C趨勢，但統(tǒng)計(jì)差異不顯著(p〉0.05)。表6可見，模型對照組大鼠肝組織中TC及TG顯著高于正常對照組(p<0.05)。本發(fā)明藥物膠囊100、200mg/kg組能明顯對抗大鼠肝中TC含量的增高(p<0.05)，本發(fā)明藥物膠囊50、100及200mg/kg組能明顯對抗大鼠肝中TG含量的增加(p〈0.05)，與模型對照組比較均有非常顯著性差異。表7可見，模型對照組大鼠肝臟系數(shù)明顯高于正常對照組(p<0.01)，本發(fā)明藥物膠囊200、400mg/kg有一定降低模型動物肝臟系數(shù)作用趨勢，但統(tǒng)計(jì)差異不顯著(p〉0.05)。組織病理定量分析表明，本發(fā)明藥物膠囊(均由實(shí)施例1制備，批號010306)所試4個(gè)劑量組肝脂變程度組織病理學(xué)平均記分值顯著低于模型對照組(P〈0.010.05)，故可認(rèn)為本發(fā)明藥物膠囊可以顯著減輕高脂飲食所致實(shí)驗(yàn)性脂肪肝動物肝臟脂肪變性程度。表5本發(fā)明藥物對高脂飼料所致脂肪肝大鼠血脂及脂蛋白的影P向(3TiS)<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>與模型對照組比較*，P>0.05;**，p<0.05;***，p<0.01。表6本發(fā)明藥物對高脂詞料所致脂肪肝大鼠肝臟中脂質(zhì)的影響()組別動物數(shù)劑暈肝組織脂質(zhì)含量(mg/g肝重)(n)(mg/kgxd)TCTG正常對照組12一2.40±0.22"17.99±6.38**模型對照組12■——4纖0.5528.62±4.28本發(fā)明藥物1250X214.00±0.42*23.50土3.67"本發(fā)明藥物11100X213.44±0.57**22.30±6.62"本發(fā)明藥物12200X213.45±0.64**24.38±3.36**本發(fā)明藥物12400X213旌0.62'29.73±7.24*與模型對照組比較*，p>0.05;**，p<0.05;***，p<0.01。表7本發(fā)明藥物對高脂飼料所致脂肪肝大鼠組織病理學(xué)的影響(p—s)組另lj動物數(shù)(n)劑量(mg/kgxd)肝臟系數(shù)(g/100g體重)肝贓脂變程度分級(動物數(shù))脂變程度平均記分值0IIIIIIIVV正常對照12一2.72±0.24***1110000.08±0.29***模型對照12_3.37±0.180222153.42±1.62本發(fā)明藥物1250X213逾0.2T0354002.08±0.79***本發(fā)明藥物11■X213.71±0.65*0333202.36±1.12**本發(fā)明藥物12200X213.19±0.28*1362001.75±0.87***本發(fā)明藥物12400X213.32±0.35*0090302.50±0實(shí)*與模型對照組比較(秩和檢驗(yàn))*,P>0.05;**，p<0.05;***，p<0.01。2、對抑制脂肪酸氧化(四氯化碳)致小鼠脂肪肝的影響表8可見，模型對照組小鼠血清ALT和AST含量均明顯升高，與正常對照組比較均有顯著性差異。本發(fā)明藥物膠囊500mg/kg對小鼠ALT和AST含量有降低的作用趨勢，但與模型對照組比較仍未見有顯著性差異。表8本發(fā)明藥物對四氯化碳所致小鼠肝損傷的影響組別劑量(mg/kg)a肝臟系數(shù)ALT(U/L)AST(U/L)正常對照--100.45±0.0561.76±19.26217.60±38.54模型對照--110.48±0.06￡685.34士520.14幽595.25±418.56aA本發(fā)明藥物62.5110.53±0.07*1012.89±375.32*591.58±174.98*本發(fā)明藥物125.0110.51±0.03*1051.42±366.89*607.25±185.08*本發(fā)明藥物250.0110.50±0.06*896.68±602.24*615.85土鄰6.78'本發(fā)明藥物500.0110.48±0.06*431.94±532.5CT405.22±232.67*聯(lián)苯雙脂100.0110.51±0.03*273.97±373.80*423.07±237.58*與正常對照組比較Ap>0.05AAp0.05AAAp0.01與模型對照組比較*p>0.05133、對復(fù)合因素(四氯化碳+高脂飲食+酒精)致大鼠脂肪肝的影響表9可見，模型對照組大鼠血清ALT及AST含量明顯升高，與正常對照組比較均有非常顯著性差異。本發(fā)明藥物膠囊50、100、200及400mg/kg組大鼠血清ALT及AST均有明顯降低的趨勢。表10可見，模型組大鼠血清TG及TG含量均明顯增高，與正常對照組比較均有非常顯著性差異，結(jié)果表明，本實(shí)驗(yàn)所用綜合致病因素已使動物造成了明顯的高脂血癥。表中顯示，本發(fā)明藥物膠囊IOO、200、400mg/kg三個(gè)劑量組均能明顯降低大鼠血清TG含量，與模型對照組比較均有非常顯著性差異，聯(lián)苯雙脂對大鼠血清TG無明顯影響。本發(fā)明藥物膠囊四個(gè)劑量組對大鼠血清TC含量增高，均有對抗作用趨勢，但與模型對照組比較仍未見有顯著性差異。表11可見，模型對照組肝組織中總膽固醇含量及甘油三酯含量明顯增加，與正常對照組比較，均有非常顯著的差異，表明本實(shí)驗(yàn)已造成大鼠脂肪肝模型。由表可見，各給藥組肝組織中總膽固醇有不同程度的減少，但與模型對照組比較未見有明顯差異。本發(fā)明藥物膠囊50mg/g，200Rig/g組肝組織中甘油三酯較對照組明顯降低，兩組間比較差異非常顯著，表明本發(fā)明藥物膠囊對肝臟增高的甘油三酯有對抗作用，而本發(fā)明藥物膠囊100mg/g組肝臟甘油三酯亦有降低趨勢。表12可見，測定結(jié)果表明，模型對照組肝臟系數(shù)及肝臟中MDA含量明顯增高，與對照組比較均有非常顯著性差異，表明本實(shí)驗(yàn)造型的大鼠己造成肝臟明顯腫大和肝中脂質(zhì)過氧化物降解產(chǎn)物明顯增加。從表結(jié)果可見，本發(fā)明藥物膠囊四個(gè)劑量組給藥后，對大鼠肝臟腫大有減輕的趨勢，對大鼠肝中MDA含量亦有降低的作用趨勢，但與對照組比較均未見有顯著性差異。表13可見，組織病理定量分析表明，本發(fā)明藥物膠囊所試4個(gè)劑量組肝脂變程度組織病理學(xué)平均記分值顯著低于模型對照組(p<0.010.05)，故可認(rèn)為本發(fā)明藥物膠囊可以顯著減輕復(fù)合因素(四氯化碳+高脂飲食+酒精)所致實(shí)驗(yàn)性脂肪肝動物肝臟脂肪變性程度。表9本發(fā)明藥物對綜合因素所致脂肪肝大鼠血清ALT及AST的影響(s)<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>表10本發(fā)明藥物對綜合致病因素所致脂肪肝大鼠血脂的影響()<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>與模型對照組比較*，P>0.05;**，pO.05;***，p<0.01。表11本發(fā)明藥物對綜合致病因素所致脂肪肝大鼠肝臟總膽固醇及甘油三酯的影響(^s)<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>與模型對照組比較*，P>0.05;"'，pO.05;***，p<0.01。表12本發(fā)明藥物對綜合因素所致脂肪肝大鼠肝臟丙二醛含量t的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>與模型對照組比較*，P>0.05p<0.05;***，p<0.01表13本發(fā)明藥物對綜合因素所致脂肪肝大鼠組織病理學(xué)的影響(3TiS)<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>與模型對照組比較(秩和檢驗(yàn))*，P>0.05;**，p〈0.05;***，p<0.01。5、對高脂飲食所致脂肪肝大鼠MDA和S0D的影響表14可見，模型組大鼠肝中S0D活性明顯降低，肝臟中MDA含量明顯增高，與正常對照組比較有顯著性差異。本發(fā)明藥物膠囊400mg/kg組大鼠肝中SOD活性明顯增高，與模型對照組比較有顯著性差異，本發(fā)明藥物膠囊50、100、200mg/kg大鼠肝中SOD活性亦有增加的趨勢，但與模型對照組比較，未見有顯著性差異。本發(fā)明藥物膠囊各給藥組肝中MDA含量均有減少趨勢，但與模型對照組比較均未見有顯著性差異。表14本發(fā)明藥物對高脂飼料所致脂肪肝大鼠肝臟MDA和SOD的影響(3T±s)<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>6、對正常大鼠膽汁分泌的影響表15可見，十二指腸一次給予本發(fā)明藥物膠囊100、200及400mg/kg，給藥30、60、90min后大鼠膽汁流量明顯增加，其不同時(shí)間膽汁流量增加率與相應(yīng)對照組比較均有顯著性差異，表明本發(fā)明藥物膠囊有明顯利膽作用。表15本發(fā)明藥物對正常大鼠膽汁流量的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>續(xù)表15本發(fā)明藥物對正常大鼠膽汁流量的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>與正常對照組比較*P>0.05**P<0.05***P<0.01本發(fā)明是將姜黃、虎杖配伍使用，對高脂飲食、四氯化碳、復(fù)合因素(高脂+酒精)等多種病因所致實(shí)驗(yàn)性脂肪肝均有很好的治療或?qū)棺饔?，并能有效降低血清中膽固醇、低密度脂蛋白及極低密度脂蛋白含量，升高高密度脂蛋白含量，具有協(xié)同增效作用，且具有最佳用量配比，有效物質(zhì)清楚，質(zhì)量可以控制，且無明顯毒性作用，是一種新型抗脂肪肝有效藥物。劑量.動物數(shù)'且力J(mg/kg)(n)30-4.14±12.6334.86±29.17*'34.97±24.82*'21.27±18.35*'-4.03±15.4518.82±18.16*41.25土25.04"23.99±19.05*'權(quán)利要求1.一種治療脂肪肝的藥物組合物，其特征在于它是由下述重量配比的原料制備而成的制劑姜黃1-3份、虎杖1-3份。2、根據(jù)權(quán)利要求1所述的治療脂肪肝的藥物組合物，其特征在于它是由下述重量配比的原料制備而成的制劑姜黃l-2份、虎杖l-2份。3、根據(jù)權(quán)利要注2所述的治療脂肪肝的藥物組合物，其特征在于它是由下述重量配比的原料制備而成的制劑姜黃1份、虎杖l-2份。4、根據(jù)權(quán)利要求3所述的治療脂肪肝的藥物組合物，其特征在于它是由下述重量配比的原料制備而成的制劑姜黃1份、虎杖1份。5、根據(jù)權(quán)利要求l-4任一項(xiàng)所述的治療脂肪肝的藥物組合物，其特征在于所述的藥劑為膠囊劑、片劑、丸劑、口服液或顆粒劑。6、一種制備權(quán)利要求1-5任一項(xiàng)所述的治療脂肪肝的藥物組合物的方法，它包括如下步驟a、取藥材姜黃、虎杖；b、姜黃乙醇提取，乙醇濃度>55%，減壓回收乙醇，結(jié)晶，過濾，干燥，即得姜黃提取物；c、取虎杖，加水浸透，粉碎，含氧溶劑提取，濃縮，結(jié)晶，過濾，干燥，即得虎杖提取物；d、將姜黃提取物、虎杖提取物混合，加入藥學(xué)上可接受的輔料或輔助性成分制備成藥學(xué)上常用的藥劑。7、根據(jù)權(quán)利要求6所述的治療脂肪肝的藥物組合物的制備方法，其特征在于所述的含氧溶劑為水、含水醇、甲醇、乙醇、丙酮或乙酸乙酯。全文摘要本發(fā)明提供了一種治療脂肪肝的藥物組合物，它是由下述重量配比的原料制備而成的制劑姜黃9-1份、虎杖1-9份。本發(fā)明還提供了該藥物組合物的制備方法和用途。本發(fā)明藥物是將姜黃、虎杖配伍使用，具有協(xié)同增效作用，有效物質(zhì)清楚，質(zhì)量可控，作用機(jī)理明確，療效顯著。文檔編號A61K36/88GK101249251SQ200810102960公開日2008年8月27日申請日期2008年3月28日優(yōu)先權(quán)日2008年3月28日發(fā)明者楊安東,趙軍寧申請人:四川省中醫(yī)藥科學(xué)院