專利名稱：枳殼提取物水合橙皮內(nèi)酯用于制備促腸動(dòng)力藥物的用途及制劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及中藥枳殼提取物，具體涉及從枳殼中提取的水合橙皮內(nèi)酯及 水合橙皮內(nèi)酯的用途和其藥用制劑。
技術(shù)背景現(xiàn)有研究表明，水合橙皮內(nèi)酯，化學(xué)名為7-甲氧基-8-(2'， 3'-二羥基-3'-甲基丁基)-香豆素，英文名merazin hydrate，分子量為278，化學(xué)式為CH30'主要存在于獨(dú)活屬重齒毛當(dāng)歸、蕓香科蛇床子、九里香、小葉九里香等 植物中，未見(jiàn)報(bào)道存在于枳殼(枳實(shí))中。中藥枳殼，拉丁名Fructus Aurantii，別名只殼、江枳殼、商殼、炒枳 殼，為蕓香科植物酸橙(Citrus aumntium L.)及其栽培變種的干燥未成熟 果實(shí)。己知枳殼具有促進(jìn)腸動(dòng)力的作用，己被廣泛用于治療消化道疾病(參 見(jiàn)《中藥藥理學(xué)》.侯家玉主編.2002.8，第一版.pl18)。中國(guó)藥典2005版記 載枳殼的藥理有效成分為橙皮苷和柚皮苷，但有研究(參見(jiàn)官福蘭等.陳皮 及橙皮苷對(duì)離體腸管運(yùn)動(dòng)的影響.時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2002， 13 (2))發(fā)現(xiàn)，橙 皮苷和柚皮苷這兩種成分的腸動(dòng)力實(shí)驗(yàn)并無(wú)明顯療效。發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于從中藥枳殼中提取得到一種新的有效成分——水合橙 皮內(nèi)酯，并發(fā)現(xiàn)枳殼體內(nèi)促腸動(dòng)力的效應(yīng)成分主要與水合橙皮內(nèi)酯相關(guān)，而 非橙皮苷和柚皮苷，水合橙皮內(nèi)酯才是枳殼促腸動(dòng)力藥理作用的有效成分。本發(fā)明的進(jìn)一步目的在于以枳殼為原料制備出包含枳殼提取物水合橙皮 內(nèi)酯的藥學(xué)上可接受的各種藥物制劑。發(fā)明人研究發(fā)現(xiàn)枳殼體內(nèi)促腸動(dòng)力的效應(yīng)成分主要與水合橙皮內(nèi)酯相 關(guān)，而非現(xiàn)有技術(shù)所認(rèn)為的與橙皮苷和柚皮苷相關(guān)。從枳殼中分離提取水合橙皮內(nèi)酯的方法為粉碎枳殼，用乙酸乙酯回流 提取濾液，將濾液減壓濃縮后加丙酮溶解，上于硅膠柱上，先以石油醚洗脫， 再用石油醚丙酮=20: 1、石油醚丙酮=10: 1，以及丙酮洗脫各一次，合 并洗脫液，減壓濃縮，加醇溶解，離心，取上清液，冷凍干燥。本發(fā)明糾正了人們一直來(lái)認(rèn)為橙皮苷和柚皮苷是中藥枳殼促腸動(dòng)力藥理 作用有效成分的偏見(jiàn)，通過(guò)細(xì)致地研究發(fā)現(xiàn)枳殼促腸動(dòng)力的效應(yīng)成分原來(lái)主 要與水合橙皮內(nèi)酯相關(guān)，而不是橙皮苷和柚皮苷。發(fā)明人從枳殼中分離提取 出水合橙皮內(nèi)酯，并通過(guò)實(shí)驗(yàn)證實(shí)了枳殼提取物水合橙皮內(nèi)酯能顯著抑制離 體小腸平滑肌的自發(fā)活動(dòng)、拮抗Ach、 Bacl2或5-HT等引起的腸道收縮痙攣， 其作用遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過(guò)橙皮苷和柚皮苷。在這一研究的基礎(chǔ)上，發(fā)明人得到一種包 含枳殼提取物水合橙皮內(nèi)酯的藥物，該藥物將是一種很好的促腸動(dòng)力藥物。


圖l:空白血清的HPLC色譜圖；圖2:含藥血清的HPLC色譜圖；圖3:加味逍遙散湯劑的HPLC色譜圖；圖4:含藥血清中水合橙皮內(nèi)酯光譜圖；圖5:枳殼中水合橙皮內(nèi)酯光譜圖。
具體實(shí)施方式
實(shí)施例l:水合橙皮內(nèi)酯作為枳殼活性成分的發(fā)現(xiàn)空白血清健康人血清，n=6;含藥血清健康人口服加味逍遙散30 min后血清，n=6。加味逍遙散梔枝(lg)、丹皮(lg)、柴胡(1.7g);茯苓(1.7g)、白術(shù)(lg)、當(dāng)歸(1.7g);厚樸(2g)、枳殼(2g)、白芍(1.7g)、生姜(4g);葛根(2.7g)、大棗(lg)、薄荷(lg)、甘草(lg)十四味中藥水沒(méi)、浸泡半小時(shí)后上火，沸騰后文火煎煮40分鐘x2次。樣品處理取空白血清lml, IOO水浴IO分鐘，用勻漿機(jī)打碎，8500轉(zhuǎn)/min離心20分種，取上清液用氮?dú)饬鞔?，定容?50ul，待測(cè)；含藥血清處理方法相同。用高效液相色譜法對(duì)空白血清、含藥血清及加味逍遙散制劑進(jìn)行分析， 色譜圖分別見(jiàn)圖1~圖3。發(fā)明人發(fā)現(xiàn)在加味逍遙散制劑中存在一個(gè)保留時(shí)間為26.020的峰，且在加味逍遙散的含藥血清中與存在一個(gè)保留時(shí)間為 25.803的峰，而這個(gè)未知峰在空白血清中卻沒(méi)有，說(shuō)明是由服藥引起的。通 過(guò)色譜圖和保留時(shí)間分析說(shuō)明，這兩個(gè)峰可能為同一物質(zhì)(未知成分X)，且 來(lái)源于加味逍遙散。含藥血清中未知成分X光譜圖見(jiàn)附圖4。隨后，將加味逍遙散十四味生藥隨機(jī)分為四組，按整個(gè)方制劑中的量稱取第一組梔枝(lg)、丹皮(lg)、柴胡(1.7g);第二組茯苓(1.7g)、 白術(shù)(lg)、當(dāng)歸(1.7g);第三組厚樸(2g)、枳殼(2g)、白芍Q.7g)、 生姜(4g);第四組葛根(2.7g)、大棗(lg)、薄荷(lg)、甘草(lg)。對(duì)以上四組生藥進(jìn)行高效液相色譜分析。進(jìn)樣6次，由保留時(shí)間與光譜圖得知， 未知成分X來(lái)源于生藥枳殼。枳殼中未知成分X的光譜圖見(jiàn)附圖5。實(shí)施例2:從生藥枳殼分離提取水合橙皮內(nèi)酯用硅膠柱層析法從枳殼中分離純化未知成分X，具體過(guò)程如下稱取粉碎的枳殼2g, 20ml乙酸乙酯回流提取1.5h，提取三次，減壓濃縮后加2ml丙酮溶解，上于硅膠柱上，先以石油醚100ml洗脫，再用石油醚丙酮20: 1、 10:1，丙酮洗脫各100ml，合并洗脫液為洗脫液l，減壓濃縮，加2ml甲醇溶解 15000r/min轉(zhuǎn)速離心15min。取上清液進(jìn)樣。經(jīng)分析型HPLC檢測(cè)其純度，按 峰面積歸一化法計(jì)算得純度〉98%。經(jīng)制備型HPLC 5次制備，在體積超載狀態(tài) 下工作，進(jìn)樣體積10 ml，得未知成分19.63 mg，得率0.0098%。對(duì)制備物冷凍干燥后進(jìn)行成分鑒定，結(jié)合圖譜 DMS0-C13-2006-8-2HX-0815的全炭譜，氫譜、質(zhì)譜、紅外以及文獻(xiàn)報(bào)道物性 數(shù)據(jù)，判斷所測(cè)樣品Rf(EtoAc)0.3，分子量為278，分子式為C15H1805，結(jié) 合文獻(xiàn)資料，確定樣品為水合橙皮內(nèi)酯。實(shí)施例3:水合橙皮內(nèi)酯藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)180 220gSD大鼠(雌雄兼?zhèn)?隨機(jī)分為6組，每組15只，分別為A (蒸 餾水)組、B(水合橙皮內(nèi)酯)組、C (橙皮苷)組、D (柚皮苷)組、E(水合 橙皮內(nèi)酯+阿托品)組、F (橙皮苷+阿托品)組、G (柚皮苷+阿托品)組。各組灌服藥液0. 3 mL / d，連續(xù)灌服3d， 1次/ d。 A組灌服199%蒸餾 水；B和E組灌服水合橙皮內(nèi)酯(20 mg/ml)、 C和F組灌服橙皮苷(20 mg/ml)、 D和G組灌服柚皮苷(20 mg/ml)。第4 d禁食12 h后灌服上述藥物各0. 3 mL， 同時(shí)E組、F組和G組腹腔注射0. 0 003 g / kg鹽酸嗎啡。20 min后灌服 葡聚糖藍(lán)2000水溶液O. 4mL， 15 min后脫臼處死大鼠，剖腹，分離自賁門 至直腸末端，以幽門處取胃，將胃內(nèi)容物充分溶解于裝有l(wèi). 5mL四氯化碳、0. 5 mL無(wú)水乙醇和2 mL蒸餾水的試管內(nèi)，3500 r/min離心15 min，取上 清液，以分光光度計(jì)于九620 nm處測(cè)吸光度，以蒸餾水組的吸光度均值為 100%，其余各組吸光度與之相比所得百分?jǐn)?shù)為相對(duì)胃內(nèi)色素殘留率，作為胃 排空功能的指標(biāo)。同時(shí)分別測(cè)量自幽門至色素最前端及至回盲部的距離，二 者之比為平均小腸推進(jìn)比。取出十二指腸，制備大鼠離體十二指腸肌標(biāo)本， 置于盛有20ml臺(tái)氏液的麥?zhǔn)显〔蹆?nèi)，通空氣，38±0. 5X:恒溫，張力負(fù)荷 1 g,穩(wěn)定后加入致痙劑乙酰膽堿(lug/ml-0. lml)、氯化鋇(20%-0. lml)、 5-HT (10mg/ml-0. lm 1)，待其平穩(wěn)后加入上述各藥液。測(cè)定其給藥前后振幅，計(jì) 算其拮抗率。對(duì)比觀察水合陳皮內(nèi)脂、陳皮苷及柚皮苷對(duì)大鼠小腸收縮強(qiáng)度的作用， 水合陳皮內(nèi)脂能顯著抑制離體小腸平滑肌的自發(fā)活動(dòng)、拮抗Ach、Bacl2或5-HT 引起的腸道收縮痙攣，而后兩者的作用不明顯。橙皮內(nèi)脂、橙皮苷和柚皮苷拮抗Ach、 Bacl2、 5-HT的作用比較拮抗百分率(%)_橙皮內(nèi)脂 橙皮苷 柚皮苷98. 40±10. 31* 28. 37±9. 60 29. 77±6. 34 77. 54±6. 89* 17. 54±7. 5623. 57±5. 865-HT_86. 06士7. 24* 27. 59士4. 3819. 48士7. 43注*與橙皮苷和柚皮苷比較？<0.001橙皮內(nèi)脂、橙皮苷和柚皮苷對(duì)平均小腸推進(jìn)比和相對(duì)胃內(nèi)色素殘留率的 作用比較組別相對(duì)胃內(nèi)色素殘留率平均小腸推進(jìn)比(％)(%)蒸餾水100±28. 2348. 63±8. 22橙皮內(nèi)脂38. 96±18. 34*71. 47±5. 69*橙皮苷98. 27±58. 4351. 49±9. 55柚皮苷94. 38±46. 2847. 49±7. 48橙皮內(nèi)脂+嗎啡57. 29±37. 41*80. 33±7. 19*橙皮苷+嗎啡102. 46±50. 1253. 67±4. 24柚皮苷+嗎啡110. 17±42. 5746. 24±5. 79注N=15，與蒸餾水組比較，p〈O.OQlAch Bacl2實(shí)施例4:水合橙皮內(nèi)酯藥物組合物制備取實(shí)施例2中的水合橙皮內(nèi)酯提取物，按本領(lǐng)域已知的常規(guī)方法制備各 種藥學(xué)上可接受的各種形式的藥用組合物。水合橙皮內(nèi)酯片水合橙皮內(nèi)酯提取物凍干粉中加入淀粉，過(guò)80目篩，充分混勻后加粘合劑，制成顆粒，于60(TC干燥，整粒，加入滑料，壓片，片 重為0. 05或0. Olg，每片含水合橙皮內(nèi)酯20 mg。水合橙皮內(nèi)酯膠囊水合橙皮內(nèi)酯提取物凍干粉中加入淀粉，過(guò)80目篩， 充分混勻后加粘合劑，制成顆粒，于60(TC干燥，整粒，裝膠囊即得，每粒重 0. 4g。
權(quán)利要求
1.一種從枳殼中分離提取水合橙皮內(nèi)酯的方法，粉碎枳殼，用乙酸乙酯回流提取濾液；將濾液減壓濃縮后加丙酮溶解，上于硅膠柱上，先以石油醚洗脫，再用石油醚∶丙酮＝20∶1、石油醚∶丙酮＝10∶1，以及丙酮洗脫各一次，合并洗脫液，減壓濃縮；加醇溶解，離心，取上清液；冷凍干燥，得水合橙皮內(nèi)酯凍干粉。
2. 如權(quán)利要求1所述的水合橙皮內(nèi)酯用于制備促腸動(dòng)力藥物的用途。
3. 包含如權(quán)利要求1所述的枳殼提取物水合橙皮內(nèi)酯的藥學(xué)上可接受的藥 物組合物。
4. 如權(quán)利要求3所述的藥物組合物，其特征為該藥物組合物是以水合橙皮 內(nèi)酯為有效成分的片劑。
5. 如權(quán)利要求3所述的藥物組合物，其特征為該藥物組合物是以水合橙皮 內(nèi)酯為有效成分的膠囊劑。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種從枳殼中分離提取水合橙皮內(nèi)酯的方法和水合橙皮內(nèi)酯用于制備促腸動(dòng)力藥物的用途及制劑。粉碎枳殼，用乙酸乙酯回流提取濾液；將濾液減壓濃縮后加丙酮溶解，上于硅膠柱上，以石油醚、石油醚和丙酮丙酮洗脫，合并洗脫液，減壓濃縮；加醇溶解，離心，取上清液，冷凍干燥，得水合橙皮內(nèi)酯。本發(fā)明從枳殼中分離提取出水合橙皮內(nèi)酯，并通過(guò)實(shí)驗(yàn)證實(shí)了枳殼提取物水合橙皮內(nèi)酯的促腸動(dòng)力的作用遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過(guò)橙皮苷和柚皮苷，從而糾正了人們一直來(lái)認(rèn)為橙皮苷和柚皮苷是中藥枳殼促腸動(dòng)力藥理作用有效成分的偏見(jiàn)。
文檔編號(hào)A61K31/37GK101328162SQ20081003197
公開(kāi)日2008年12月24日 申請(qǐng)日期2008年8月1日 優(yōu)先權(quán)日2008年8月1日
發(fā)明者平 任, 鋒 秦, 熙 黃 申請(qǐng)人:中南大學(xué)