專利名稱：：一種治療哮喘的中藥復(fù)方揮發(fā)油部位及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種中藥復(fù)方有效部位及其制備方法，具體地說是涉及一種治療哮喘的中藥復(fù)方揮發(fā)油部位及其制備方法，以及在制備治療哮喘藥物中的應(yīng)用，屬于中醫(yī)藥領(lǐng)域。二
背景技術(shù)：
：支氣管哮喘(簡稱哮喘)是常見的呼吸系統(tǒng)疾病，近年來許多國家和地區(qū)哮喘的發(fā)病率和死亡率均呈逐年增高的趨勢，全球至少有1億人患哮喘病，發(fā)達(dá)國家哮喘總患病率達(dá)7%8%，我國約為1%2%。因此哮喘的防治受到世界衛(wèi)生組織以及各國政府的重視，成為呼吸系統(tǒng)疾病中最為活躍的研究領(lǐng)域。但是哮喘的治療仍是一個(gè)未能完全解決的問題，同時(shí)由于化學(xué)藥物存在副作用，因此積極尋求有效的防治哮喘方法,一直是醫(yī)藥界不倦探索的課題。中醫(yī)藥治療哮喘又悠久的歷史，其治則為發(fā)時(shí)攻邪治標(biāo)，未發(fā)之時(shí)扶正治本。從目前臨床哮喘治療來看，以辨證辨病結(jié)合，中醫(yī)藥愈加顯現(xiàn)其獨(dú)特的治療優(yōu)勢，但存在使用不便、效應(yīng)部位不甚確切的問題。三
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供一種治療哮喘的中藥復(fù)方揮發(fā)油部位及其制備方法，以及在制備治療哮喘藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明的目的是通過以下的技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)的一種治療哮喘的中藥復(fù)方揮發(fā)油部位，其特征在于它是由下列原藥按生藥重量份配比制成甘草2-20份、麻黃3-30份、苦杏仁5-50份、半夏5-50份、生石膏10-100份、細(xì)茶5-50份、五味子3-30份。一種治療哮喘的中藥復(fù)方揮發(fā)油部位的制備方法，其特征在于該方法步驟如下:(1)稱取甘草2-20份、麻黃3-30份、苦杏仁5-50份、半夏5-50份、生石膏310-100份、細(xì)茶5-50份、五味子3-30份混合后粉碎，置于圓底燒瓶中，加純凈水，振搖混合后，浸泡；(2)將圓底燒瓶連接揮發(fā)油提取器與回流冷凝管，自冷凝管上端加水使充滿揮發(fā)油提取器的刻度部分，并溢流入燒瓶時(shí)為止，置電熱套中緩緩加熱至沸騰，并保持微沸，至提取器中油量不再增加，停止加熱，放置片刻，開啟提取器下端活塞，將水緩緩放出，至油層上端到達(dá)刻度0線上面5mm處為止，放置后，再開啟活塞時(shí)油層下降至其上端恰與刻度O線平齊，讀取揮發(fā)油量；(3)將上步驟的揮發(fā)油經(jīng)無水硫酸鈉干燥后得揮發(fā)油為紅黃色透明油狀液體。上述步驟(1)中加純凈水的量是藥材量的10倍，振搖混合后，浸泡30分鐘。上述步驟(2)中所述置于電熱套中緩緩加熱至11(TC沸騰，并保持微沸8小時(shí)，至油層上端到達(dá)刻度口線上面5咖處為止，放置1.5-2小時(shí)。上述步驟(3)中所得干燥后的揮發(fā)油的得率為0.17%。上述的中藥復(fù)方揮發(fā)油部位在制備治療哮喘藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明在前期研究以數(shù)據(jù)挖掘方法對古今治療哮喘方劑進(jìn)行篩選，古今方支持度排前10位的共同藥物有麻黃、杏仁、甘草、半夏、五味子等。本復(fù)方中麻黃配石膏，清宣肺中郁熱而定喘；杏仁宣降肺氣，協(xié)同麻黃以治喘；半夏、五味子燥濕化痰、斂肺止咳，芽茶化痰除熱，甘草和中緩急，調(diào)和諸藥，全方具有清宣肺熱平喘的功效。用治外感風(fēng)寒，內(nèi)蘊(yùn)痰熱，痰氣喘急的哮喘。提取中藥揮發(fā)油的技術(shù)穩(wěn)定，如水蒸氣蒸餾法提取的揮發(fā)油部位的制備方法。但復(fù)方揮發(fā)油的制備以及用于治療哮喘藥物的應(yīng)用很少。對本發(fā)明提供的復(fù)方有效部位進(jìn)行研究符合中藥現(xiàn)代化的發(fā)展方向。本發(fā)明提供的中藥復(fù)方揮發(fā)油部位及其制備方法，可用于涉及在制備治療哮喘藥物中的應(yīng)用，從而為臨床提供制備與使用方便、有效部位較明確、重復(fù)性好的中藥新藥。一種中藥復(fù)方揮發(fā)油的指紋圖譜(1)樣品稱取全方揮發(fā)油49.09mg，置于5mL容量瓶中用丙酮溶解并定容至刻度，得到全方揮發(fā)油樣品9.02mg/mL。(2)GC-MS聯(lián)用條件色譜條件色譜柱HP-5，石英毛細(xì)管色譜柱(0.25mmX30mX0.25um);進(jìn)樣口溫度20(TC，檢測器溫度250'C;程序升溫初始溫度60。C，以4'C/min的速率升溫至150。C保持3min，以25°C/min的速率升溫至200。C保持10min，分流比(40:1)，進(jìn)樣量1P1;載氣為氦氣(純度>99.99%)，流速為LOm]/min。質(zhì)譜條件電子轟擊(EI)離子源，電離電壓70eV，離子源溫度220°C，加速電壓200eV;掃描質(zhì)量m/z35~550。分析方法對復(fù)方總離子流圖中的化學(xué)色譜峰通過氣相質(zhì)譜分析工作站NIST標(biāo)準(zhǔn)圖庫進(jìn)行檢索并參照有關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行確認(rèn)，按峰面積歸一化法計(jì)算各組分相對百分含量，對揮發(fā)油進(jìn)行分析。分析結(jié)果揮發(fā)油中百分含量大于1%的成分共有16個(gè)。其中含量最高的是苯甲醛，保留時(shí)間為6.15min，相對百分含量為18.93%。其次含量較高的有a-衣蘭袖烯和Y-杜松油烯，保留時(shí)間分別為22.86，23.32min，百分含量分別為8.71%和8.62%。其它百分含量高于1%的成分有a-松油醇(百分含量為1.65%，保留時(shí)間為13.12min)，a-檀香烯(百分含量為1.83%，保留時(shí)間為19.50min)，Y-衣蘭油烯(百分含量為1.23%,保留時(shí)間為21.65min)，P-花柏烯(百分含量為1.49%，保留時(shí)間為22.30min)，a-古蕓烯(百分含量為1.39%，保留時(shí)間為22.66min)，a-雪松烯(百分含量為2.60%，保留時(shí)間為24.03min)，大根香葉烯(百分含量為1.77%，保留時(shí)間為24.48min)，Cubenol(百分含量為1.57%，保留時(shí)間為27.22min)，a-檀香醇(百分含量為1.86%，保留時(shí)間為27.92min)和廣藿香烯(百分含量為2.76%，保留時(shí)間為29.40min),本發(fā)明的有益效果如下本發(fā)明用于治療哮喘的中藥復(fù)方揮發(fā)油部位及其制備方法，從甘草、麻黃、苦杏仁、半夏、生石膏、細(xì)茶、五味子組成的中藥復(fù)方中，提取揮發(fā)油部位，并進(jìn)行指紋圖譜分析。該制備工藝簡單、重現(xiàn)性好、成本低。用本發(fā)明提供的中藥復(fù)方揮發(fā)油部位，進(jìn)行支氣管哮喘相關(guān)的藥理實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明，本發(fā)明提供的中藥復(fù)方揮發(fā)油部位具有明顯延長哮喘潛伏期、改善呼吸功能、減輕炎細(xì)胞浸潤、降低炎癥因子水平等抗炎、平喘、調(diào)整免疫功能的療效。四.具體實(shí)施方式實(shí)施例l一種中藥復(fù)方揮發(fā)油部位的制備方法，步驟如下取甘草40g，麻黃60g，苦杏仁100g，半夏100g，生石膏200g，細(xì)茶100g，五味子60g，組成全方共660g，粉碎后置于20000mL圓底燒瓶中，加藥材量10倍量純凈水，振搖混合后，浸泡30min;連接揮發(fā)油提取器與回流冷凝管。自冷凝管上端加水使充滿揮發(fā)油測定器的刻度部分，并溢流入燒瓶時(shí)為止。置電熱套中緩緩加熱至1](TC沸騰，并保持微沸8小時(shí)，至測定器中油量不再增加，停止加熱，放置片刻，開啟測定器下端活塞，將水緩緩放出，至油層上端到達(dá)刻度0線上面5mm處為止。放置l小時(shí)以上，再開啟活塞時(shí)油層下降至其上端恰與刻度0線平齊。經(jīng)無水硫酸鈉干燥后得揮發(fā)油為紅黃色透明油狀液體，具有特殊濃郁香味。得到揮發(fā)油的量為l.lmL。實(shí)施例2—種中藥復(fù)方揮發(fā)油的制備方法，步驟如下取甘草80g，麻黃120g，苦杏仁200g,半夏200g,生石膏400g，細(xì)茶200g，五味子120g，組成全方共1320g，粉碎后置于20000mL圓底燒瓶中，加10倍量純凈水，振搖混合后，浸泡30min。連接揮發(fā)油提取器與回流冷凝管。自冷凝管上端加水使充滿揮發(fā)油提取器的刻度部分，并溢流入燒瓶時(shí)為止。置電熱套中緩緩加熱至110'C沸騰，并保持微沸8小時(shí)，至提取器中油量不再增加，停止加熱，放置片刻，開啟提取器下端活塞，將水緩緩放出，至油層上端到達(dá)刻度0線上面5ran處為止。放置l小時(shí)以上，再開啟活塞時(shí)油層下降至其上端恰與刻度0線平齊。經(jīng)無水硫酸鈉干燥后得揮發(fā)油為紅黃色透明油狀液體，具有特殊濃郁香味。得到揮發(fā)油的量為2.3mL。實(shí)施例3本發(fā)明提供的中藥復(fù)方揮發(fā)油部位治療哮喘的實(shí)驗(yàn)研究本發(fā)明對豚鼠卵蛋白哮喘模型的藥效，具體實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下選取健康豚鼠，體重250士20g，雌雄各半。隨機(jī)分為空白組、模型組、揮發(fā)油組。(1)本發(fā)明提供的中藥復(fù)方揮發(fā)油對引喘潛伏期和行為學(xué)影響表1中藥復(fù)方揮發(fā)油對豚鼠引喘潛伏期和行為學(xué)的影響(^土SD,n=8)<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>模型組中藥復(fù)方揮發(fā)油組4.96172±57站6284±99*4.0±0##3.0±1.1*正常對照組與模型組比較，##P<0.01;給藥組與模型組比較，*P<0.05,**P<0.01。結(jié)果顯示，與模型組相比中藥復(fù)方揮發(fā)油能夠明顯改善豚鼠的行為學(xué)評(píng)分(P〈0.05)，明顯延長豚鼠的引喘潛伏期(P〈0.05)。(2)本發(fā)明提供的中藥復(fù)方揮發(fā)油對氣管灌洗液中EOS的影響表2中藥復(fù)方揮發(fā)油對哮喘豚鼠BALF中EOS的影響(7±SD,ri=8)組別BALF中E0S(%)正常對照組2.67±1.03模型組8.17±1.17##揮發(fā)油組2.67±2.16**正常對照組與模型組比較，##P<0.01;給藥組與模型組比較，*P<0.05,**P<0.01。結(jié)果表明，復(fù)方揮發(fā)油組與模型組相比，BALF中EOS百分率有顯著差異(P〈0.01)。(3)本發(fā)明提供的中藥復(fù)方揮發(fā)油對血清IL-4、IL-5、IFN-Y的影響表3中藥復(fù)方揮發(fā)油對血清IL-4、IL-5、IFN-y的影響("±SD,n=8)組別IL—4IL-5IFN-Ypg/ral正常對照組15.11±5.7713.30±7.4922.77±10.69模型組27.60±8.68#61.74±22.56##9.11±4.74#揮發(fā)油組18.37±3.00*23.22±21.78*19.75±6.84*正常對照組與模型組比較，#P<0.05，##P<0.01;給藥組與模型組比較，*P<0.05，**P<0.01。結(jié)果表明，與模型組相比，中藥揮發(fā)油組對IL-4、IL-5和IFN-Y的影響均有差異(P〈0.05)。(4)本發(fā)明提供的中藥復(fù)方揮發(fā)油對肺組織病理形態(tài)學(xué)的影響結(jié)果見藥物應(yīng)用后能減輕肺及支氣管Eos等炎細(xì)胞浸潤，減輕支氣管周圍炎等肺部炎性病變的程度。在本實(shí)驗(yàn)中，與模型組比較，本發(fā)明提供的中藥復(fù)方揮發(fā)油能夠明顯延長動(dòng)物的引喘潛伏期，顯著降低BALF中EOS百分率(P〈0.01)。模型組與正常對照組相比較，血清IL-4和IL-5均明顯上升(P<0.05，P<0.01)，且血清IFN-y明顯降低(P〈0.05)。給藥后，揮發(fā)油能夠明顯抑制血清IL-4、IL-5(P〈0.01,P〈0.05)，顯著提高血清IFN-Y含量，調(diào)節(jié)Thl/Th2的平衡關(guān)系，改善炎癥細(xì)胞因子的釋放，還能夠在肺組織中抑制主要炎癥細(xì)胞E0S的聚集，明顯改善哮喘的行為學(xué)體征。實(shí)施例4本發(fā)明提供的中藥復(fù)方揮發(fā)油部位治療哮喘的實(shí)驗(yàn)研究本發(fā)明提供的中藥復(fù)方揮發(fā)油部位對呼吸道合胞病毒誘導(dǎo)的致敏小鼠作用，具體實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下Balb/C小鼠，清潔級(jí)，雌性，6-8周齡，體重18-20g。復(fù)制合胞病毒誘導(dǎo)的致敏小鼠哮喘模型。隨機(jī)分為空白組、模型組、陽性對照組(地塞米松)、揮發(fā)油組。(1)氣道反應(yīng)性變化氣道反應(yīng)性結(jié)果見表4，分別以45、135、405ng/mLAch激發(fā)時(shí)，與PBS對照組比，模型組Rt增高值均明顯升高(尸均<0.01);陽性藥DM組、本發(fā)明提供的中藥復(fù)方揮發(fā)油組比均顯著降低(P均<0.01)。表4中藥復(fù)方揮發(fā)油對氣道反應(yīng)性的影響±S，n=10)Group生藥劑量RL[cmH20mL-ls](g/kg)baseline45.0ug/mL135.0ng/mL405.0ng/mL空白對照組13.45±0.5917.27±0.7821.38±5.1228.02±9.14模型組28.76±2.2538.70±0.58**61.31±2.96**65.18±1.77**陽性藥組O.讓,3.2418.74±2.04AA27.97±8.79AA26.42±0.39AA揮發(fā)油13'415.93±3.9319.87±7.36AA21.52±7.73AA29.99±0.67AA注'Z5〈0.05'/><0.01VS.PBScontrolgroup;a尸〈0.05aa尸<0.01VS.OV感SVgroup(2)BALF中細(xì)胞分類計(jì)數(shù)BALF中細(xì)胞分類計(jì)數(shù)結(jié)果見表5，給藥組TCS、macrophages.lymphocytes、eosinophils'、neutrophils數(shù)量與OVA/RSV組比均明顯降低(尸均<0.01)，用藥組的炎細(xì)胞明顯減少。表5中藥復(fù)方揮發(fā)油對BALF中炎性細(xì)胞的影響(^±S，n=10)GroupTCSMacrophages(xloVmL)OloVmL)Lymphocytes(xloVmL)Eosinophils(xl05/mL)Neutrophils(xloVmL)空白對照組模型組13.75±7.9113.30±7.680.15±0.4300.27±0.6380.00±37.89**50.12±19.92**7.22±6.09**4.86±5.21**17.80±12.92**陽性藥組14.38±7.76AA11.68±5.97AA1,09±1,03AA0.51±0.99AA0.91±0.78A"揮發(fā)油組16.88±7.99AA13.90±6.86AA0.97±0.45AA0.56±0.32AA1.44±0.69A'注"/><0.01VS.PBScontrolgroup:A/><0.05AA尸<0.01VS.OVA/RSVgroup(3)BALF對小鼠血清TNF-a水平變化的影響表6中藥復(fù)方揮發(fā)油部位對小鼠血清中TNF-a水平的影響(7士S，n=10)Group生藥劑量(g/kg)TNF-a(ng/ml)空白對照組1.72±0.35模型組2.79±0.55**陽性對照組a(X)241.85±0.63AA揮發(fā)油13'41.80±0.38AA本實(shí)驗(yàn)中，在以45、135、405貼/mLAch激發(fā)時(shí)，模型組RL增高值(與基值比較)與空白組對照組比均明顯升高(P〈0.05，P<0.01)，給藥后RL值有所下降;BALF上清中細(xì)胞分類計(jì)數(shù)表明，模型組較PBS對照組細(xì)胞總數(shù)、淋巴細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞及中性粒細(xì)胞均顯著升高(P均〈0.01)，給藥組的TCS、macrophages、lymphocytes,eosin叩hils數(shù)量與模型組比均明顯降低(P均<0.01)。中藥復(fù)方揮發(fā)油部位降低哮喘模型血清中升高的炎細(xì)胞因子TNF-a水平。權(quán)利要求1、一種中藥復(fù)方揮發(fā)油部位，其特征在于它是由下列原藥按生藥重量份配比制成甘草2-20份、麻黃3-30份、苦杏仁5-50份、半夏5-50份、生石膏10-100份細(xì)茶5-50份、五味子3-30份。2、一種制備權(quán)利要求1所述中藥復(fù)方揮發(fā)油部位的方法，其特征在于該方法的步驟如下(1)稱取甘草2-20份、麻黃3-30份、苦杏仁5-50份、半夏5-50份、生石膏10-100份、細(xì)茶5-50份、五味子3-30份混合后粉碎，置于圓底燒瓶中，加純凈水，振搖混合后，浸泡；(2)將圓底燒瓶連接揮發(fā)油提取器與回流冷凝管，自冷凝管上端加水使充滿揮發(fā)油提取器的刻度部分，并溢流入燒瓶時(shí)為止，置電熱套中緩緩加熱至沸騰,并保持微沸，至提取器中油量不再增加，停止加熱，放置片刻，開啟提取器下端活塞，將水緩緩放出，至油層上端到達(dá)刻度0線上面5mm處為止，放置后，再開啟活塞時(shí)油層下降至其上端恰與刻度0線平齊，讀取揮發(fā)油量；(3)將上述所得揮發(fā)油經(jīng)無水硫酸鈉干燥后得揮發(fā)油為紅黃色透明油狀液體。3、根據(jù)權(quán)利要求2所述中藥復(fù)方揮發(fā)油部位的制備方法，其特征在于在步驟(l)中原藥材粉碎后置于20000ml的圓底燒瓶中，加藥材量IO倍量的純凈水,振搖混合后，浸泡30分鐘。4、根據(jù)權(quán)利要求2所述中藥復(fù)方揮發(fā)油部位的制備方法，其特征在于在步驟(2)中所述置于電熱套中緩緩加熱至ll(TC沸騰，并保持微沸8小時(shí)，至油層上端到達(dá)刻度口線上面5mm處為止，放置1.5-2小時(shí)。5、根據(jù)權(quán)利要求2所述中藥復(fù)方揮發(fā)油部位的制備方法，其特征在于在步驟(3)中所得干燥后的揮發(fā)油的得率為O.17%。6、如權(quán)利要求1所述的中藥復(fù)方揮發(fā)油部位在制備治療哮喘藥物中的應(yīng)用。全文摘要一種用于治療哮喘的中藥復(fù)方揮發(fā)油部位及制備方法。它是從甘草、麻黃、苦杏仁、半夏、生石膏、細(xì)茶、五味子按一定重量份配比的原料藥用水蒸氣蒸餾法提取的中藥復(fù)方揮發(fā)油部位，得率為0.17％。本發(fā)明具有制備工藝簡單、重現(xiàn)性好、成本低的優(yōu)點(diǎn)。經(jīng)藥理試驗(yàn)證明本發(fā)明提供的中藥復(fù)方揮發(fā)油部位能夠顯著延長動(dòng)物的引喘潛伏期，降低哮喘氣道反應(yīng)性，改善哮喘的行為學(xué)體征；顯著降低BALF中EOS，抑制肺組織中主要炎癥細(xì)胞EOS的聚集；同時(shí)顯著抑制血清炎性因子IL-4、IL-5水平、提高血清IFN-γ水平，調(diào)節(jié)Th1/Th2的平衡關(guān)系，因此，本發(fā)明的中藥復(fù)方揮發(fā)油部位是用于制備治療哮喘病的理想藥物。文檔編號(hào)A61K33/06GK101322783SQ20081002083公開日2008年12月17日申請日期2008年7月29日優(yōu)先權(quán)日2008年7月29日發(fā)明者唐于平,立徐,徐惠琴,王明艷,范欣生申請人:南京中醫(yī)藥大學(xué)