專利名稱：：含三唑環(huán)萘酰亞胺抗腫瘤化合物及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一類含三唑環(huán)萘酰亞胺抗腫瘤化合物及其制備方法，其屬于生物有機合成領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
：在芳環(huán)上引入含氮雜原子取代基的單萘酰亞胺類化合物具有良好的抗癌活性，其中活性最好的amonaflde(N-((3-二甲基氨基乙基)-3-胺基-1,8-萘酰亞胺)(MalviyaVK，LiuPY,AlbertsDS，etal.Am.J.Clin.Oncol"1992,15:41-44.)和mitonafide(N-①-二甲基氨基乙基)-3-硝基-1,8-萘酰亞胺)(BranaM.F，SantosA.，RoldanC.M.,etal.Eur丄Med.Chem.Chim.Ther"1981,16,207-212)己經(jīng)進(jìn)入二期臨床i式驗。該類化合物能夠有效地抑制腫瘤細(xì)胞的生長，其作用機理是嵌插入DNA的堿基對之間，抑制DNA和RNA的合成，并能夠抑制拓?fù)洚悩?gòu)酶II，從而達(dá)到抑制腫瘤的目的。由此可以得知，如果在芳環(huán)卜.5位引入具有良好生物活性的含氮基團(tuán)，提高其對DNA的嵌插能力，從而提高其抗腫瘤活性。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明所述的含三唑環(huán)萘酰亞胺抗腫瘤化合物主要在芳環(huán)體系上的5位引入五元三唑環(huán)，通過芳環(huán)取代基的形式設(shè)計合成了一類新型的含有1,2,3-三唑環(huán)類萘酰亞胺化合物。其目的是通過鏈接反應(yīng)(Clickchemistry)設(shè)計合成了一類含有1,2,3-三唑環(huán)的萘酰亞胺化合物，試驗證明其對體外腫瘤細(xì)胞生長的抑制能力。本發(fā)明解決上述技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案是一類含三唑環(huán)萘酰亞胺抗腫瘤化合物，其化學(xué)分子結(jié)構(gòu)通式如下<formula>formulaseeoriginaldocumentpage3</formula>式(1)中R5R!為Cl-C6烷基、""(CH2h^OH或一^CH^"N〔、R2為H或苯環(huán)。其中，115，116均同為甲基、乙基，或R5+Re為哌嗪環(huán)、嗎啉環(huán)、硫代嗎啉環(huán)，11=2~4。所述抗腫瘤化合物分別為n-(n^n:二甲基胺乙基)苯基三唑基萘酰亞胺、n-(n^nC二乙基肢乙基)苯基三哇基萘酰亞胺、n-丁基苯基三唑基萘酰亞胺、n-(2^羥基乙基)苯基三唑基萘酰亞胺、n-(,哌嗪基乙基)苯基三唑基萘酰亞胺、n-(n7，n^二甲基胺乙基)三唑基萘酰亞胺、n-(n。n匸二乙基胺乙基)三唑基萘酰亞胺、n-丁基三唑基萘酰亞胺、n-(2^羥基乙基)三唑基萘酰亞胺、n-(2'-哌嗪基乙基)三唑基萘酰亞胺。所述的含三唑環(huán)萘酰亞胺抗腫瘤化合物的制備方法以3-硝基-1,8萘酐為原料，在DMF溶劑中以Pd/C作催化劑于室溫，1.5MPaH2下還原3個小時，得到一中間化合物；此中間化合物于05"C懸浮在濃HC1中加入1倍摩爾量的亞硝酸鈉水溶液，半小時后加入1倍摩爾量的疊氮鈉水溶液，反應(yīng)1小時后，過濾得到另一中間化合物；此中間化合物通過"ClickChemistry"反應(yīng)，即在CuS04和抗壞血酸鈉存在下，于溶劑叔丁醇和水中加入苯乙炔或通入乙炔氣，得到的產(chǎn)物與相應(yīng)的伯胺在乙醇中回流3小時即可得到以上所述的含三唑環(huán)的萘酰亞胺化合物。下面介紹含三唑環(huán)萘酰亞胺抗腫瘤化合物合成路線(<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>式中&的定義與上文所述相同。以3-硝基-l,8萘酐(化合物(2))為原料，依次經(jīng)過步驟a(步驟a的反應(yīng)條件Pd/C催化劑，1.5MPaH2，室溫反應(yīng)3小時)、步驟b(步驟b反應(yīng)條件HCl/NaN02，冰水浴下反應(yīng)2小時后，滴加NaN3溶液，在05。C下反應(yīng)1小時)和步驟c(步驟c的反應(yīng)條件t-BuOH/H20，在CuS04和抗壞血酸鈉存在下，加入苯乙炔，于室溫下反應(yīng)8小時。)得到化合物(3)?；衔?3)經(jīng)步驟d(步驟d的反應(yīng)條件與H2NR,，在乙醇中回流3小時)得到目標(biāo)化合物(4)。另外以3-硝基-l,8萘酐(化合物(2))為原料，依次經(jīng)過步驟a(步驟a的反應(yīng)條件Pd/C催化劑，1.5MPaH2，室溫反應(yīng)3小時)、步驟b(步驟b反應(yīng)條件HCl/NaN02，冰水浴下反應(yīng)2小時后，滴加NaN3溶液，在05'C下反應(yīng)1小時)和步驟e(步驟e的反應(yīng)條件t-BuOH/H20，在CuS04和抗壞血酸鈉存在，通入乙炔氣，于室溫下反應(yīng)8小時)得到化合物(5)?；衔?5)經(jīng)步驟f(步驟f的反應(yīng)條件與H2NR,，在乙醇中回流3小時)得到目標(biāo)化合物(6)。下面說明含三唑環(huán)萘酰亞胺抗腫瘤化合物對腫瘤細(xì)胞體外抑制生長活性的實驗方法(1)化合物對腫瘤細(xì)胞體外抑制生長活性采用四氮唑還原法對MOLT-4人白血病細(xì)胞株、U251人神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞株進(jìn)行實驗。方法是按不同腫瘤生長速率，將一定數(shù)量處于對數(shù)生長期的腫瘤細(xì)胞90pL/孔接種于％孔微量培養(yǎng)板內(nèi)，培養(yǎng)24h后加入藥液1(HiL/孔，對每個細(xì)胞株，每個濃度均為三個復(fù)孔。另設(shè)無細(xì)胞調(diào)零孔、如果藥物有顏色要做相應(yīng)藥物濃度無細(xì)胞調(diào)零孔。腫瘤細(xì)胞在37。C、5%C02條件下培養(yǎng)48h后，加MTT(Sigma)液5mg/mL用生理鹽水配制20L/孔；繼續(xù)培養(yǎng)4h后，加入三聯(lián)液(10%SDS-5%異丁醇-0.01mol/lHCl)50^L/孔，于C02培養(yǎng)箱中過夜。然后用酶標(biāo)儀測OD570值。按下列公式計算被測物對癌細(xì)胞生長的抑制率腫瘤抑制率=(對照組OD值-治療組OD值)/對照組OD值xl00%。(2)采用磺酰羅丹明B蛋白染色法對A-549人肺腺癌細(xì)胞株進(jìn)行實驗，方法是根據(jù)細(xì)胞生長速率,將處于對數(shù)生長期的腫瘤細(xì)胞以90pL/孔接種于96孔培養(yǎng)板，貼壁生長24h，再加藥10pL/孔。每個濃度設(shè)三復(fù)孔。并設(shè)相應(yīng)濃度的生理鹽水溶媒對照及無細(xì)胞調(diào)零孔。腫瘤細(xì)胞在37°C、5%C02條件下培養(yǎng)72小時，然后傾去培養(yǎng)液，用10%冷TCA固定細(xì)胞，4。C放置lh后用蒸餾水洗滌5次，空氣中自然干燥。然后加入由1。/。冰醋酸配制的SRB(Sigma)4mg/mL溶液100pL/孔，室溫中染色15min，去上清液，用1%醋酸洗滌5次，空氣干燥。最后加入150(jL/孔的Tris溶液，酶標(biāo)儀520nm波長下測定A值。按下列公式計算被測物對癌細(xì)胞生長的抑制率腫瘤抑制率=(A540對船L一A54o給藥孔)/A540對照孔x1000/。。本發(fā)明的有益效果是這種含三唑環(huán)萘酰亞胺抗腫瘤化合物是通過在萘酰亞胺母體上引入五元1，2,3-三唑環(huán)，以取代基形式來對化合物進(jìn)行設(shè)計合成，該類化合物具有良好的抗腫瘤活性，對多種不同組織來源的腫瘤細(xì)胞(如人肺癌、神經(jīng)膠質(zhì)癌等)和多種不同來源的遺傳變異細(xì)胞(如白血病細(xì)胞等)的正常生長具有較好的抑制作用。具體實施例方式下面通過實施例對本發(fā)明作進(jìn)一步的說明。實施例l:>1-(<1^-二甲基胺基乙基)-5-(4-苯基-[l,2,3]-三唑)-萘酰亞胺(化合物l)的合成<formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula>(1)在200ml高壓釜中加入7.5g3-硝基-l，8萘酐，0.5gPd/C催化劑和DMF50ml，排空6次，充入1.5MPa氫氣，于室溫下反應(yīng)3小時，至氫氣壓力不再下降時停止反應(yīng)。濾出Pd/C催化劑，將濾液倒入500ml冰水中，析出桔黃色沉淀，過濾，洗滌，烘干，得桔黃色固體5.7g，產(chǎn)率86.7%。熔點〉30(TC<formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula>(2)在100ml雙口瓶中，加入4.1g3-胺基-l，8萘酐，30ml濃鹽酸，用碎冰冷卻20分鐘。將1.2gNaN02溶解在15ml水中，滴加入反應(yīng)體系中，1小時內(nèi)加完，繼續(xù)反應(yīng)l小時，溫度不超過5。C。然后將l.lgNaN3溶解在10ml水中，滴加入反應(yīng)體系，反應(yīng)1小時，撤出碎冰浴。將反應(yīng)液倒入300ml冰水中，析出黃色沉淀，過濾，水洗至中性，烘干，得到黃色固體4.0g，產(chǎn)率86.9%。IR(KBr，cm隱l):3050，2155，1770，1730，1601，1521。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage7</formula>(3)在100ml單口瓶中，加入2.0g(8.2mmol)3-疊氮-1,8萘酐，0.85g(8.2mmol)苯乙炔以及10mlt-BuOH和10ml水混合液，再加入88mg(0.4mmol)抗壞血酸鈉和10mg(0.04mmol)CuS04'5H20在室溫下反應(yīng)8小時，TLC跟蹤反應(yīng)至完全，將反應(yīng)液倒入300ml冰水中，析出黃色沉淀，靜置，過濾，洗滌，烘干的黃色固體2.65g，產(chǎn)率92.3%。熔點〉30(TC。1H畫R(d6-DMSO，400MHz):5(ppm):7.25(t，Jl=6.8Hz，J2=7.2Hz，1H)，7.31(t，Jl=7.2Hz，J2=7.6Hz，2H)，7.62(m，3H)，8.21(m，2H)，8.41(s，1H)，8.62(s，1H)，9.01(s，1H)。HR-MS(m/z):C2oHuN303，計算值341.0800，實測值341.0789。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage7</formula>(4)在25ml單口瓶中，加入0.47g步驟(3)合成的產(chǎn)物和無水乙醇15ml，再加入N/，NZ-二甲基乙二胺0.3ml。磁力攪拌，升溫回流3小時，TLC跟蹤反應(yīng)至完全。過濾，所得固體經(jīng)硅膠柱層析分離，得到目標(biāo)產(chǎn)物(化合物l)0.47g，產(chǎn)率83%。熔點205.3206.1°C。1H畫R(d6-DMSO，400MHz):S(ppm):2.25(s，6H)，2.57(t，Jl=6.4Hz，J2=6.8Hz，2H)，4.17(t，Jl=6.4Hz，J2=6.8Hz，2H)，7.40(t，Jl=7.2Hz，J2=7.2Hz，1H)，7.51(t，Jl=7.6Hz，J2=7.6Hz，2H)，7.95(m，3H)，8.50(m，2H)，8.92(s，1H)，8.99(s，1H)，9.59(s，1H)。HR-MS(m/z):C24H21N502，計算值411.1695，實測值411.1703。IR(KBr，cm-l):2942，2775，1698，1662，1596，1477，1384，1338，1261，1238，1151，1043，883，781。實施例2:N-(N/，>^/-二乙基胺基乙基)-5-(4-苯基-[l,2,3]-三唑)-萘酰亞胺(化合物2)的合成<formula>formulaseeoriginaldocumentpage8</formula>除用N/，NA二乙基乙二胺替代N/，NA二甲基乙二胺外，其它合成及提純方法同實施例l，得到目標(biāo)化合物2，熔點191.1192.3°C。1H雨R(d6-DMSO，400MHz):5(ppm):0.97(t，Jl=6.8Hz，J2=7.2Hz，6H)，2.50(m，4H)，2.68(t，Jl=7.2Hz，J2=7.2Hz，2H)，4.12(t，Jl=6.8Hz，J2=7.2Hz，2H)，7.42(t，Jl=7.6Hz，J2=7.2Hz，1H)，7.52(t，Jl=7.6Hz，J2=7.6Hz，2H)，7.98(m，3H)，8.50(m，2H)，8.93(d，J=2Hz，1H)，9.0(d，J=2.4Hz，1H)，9.62(s，1H)。HR-MS(m/z):C26H25N502，計算值439.2008，實測值439.2001。IR(KBr，cm-l):2971，2803，1702，1664，1627，1517，1477，1380，1361，1290，1257，1203，1172，1050，881，765。實施例3:N-丁基-5-(4-苯基-[l,2，3]-三唑)-萘酰亞胺(化合物3)的合成除用正丁胺替代N/，NA二甲基乙二胺外，其它合成及提純方法同實施例1，得到目標(biāo)化合物3，熔點195.5196.7°C。1H醒R(d6-DMSO，楊MHz):S(ppm):0.94(t，Jl=7.2Hz，J2=7.2Hz，3H)，1.37(m，2H)，1.64(m，2H)，4.05(t，Jl=7.2Hz，J2=7.6Hz，2H)，7.41(t，Jl=7.2Hz，J2=7.6Hz，1H)，7.52(t，Jl=7.6Hz，J2=7.6Hz，2H)，7.97(m，3H)，8.51(m，2H)，8.93(d，J=1.6Hz，1H)，9.0(d，J=2.4Hz，1H)，9.62(s，1H)。HR-MS(m/z):C24H20N4O2，計算值396.1586，實測值396.1590。IR(KBr，cm-l):2950，1708，1669，1630，1510，1472，1378，1361，1293，1245，1201，1172，1055，883，780。實施例4:>^-(2/-羥基乙基)-5-(4-苯基-[l，2，3]-二唑)-萘酰亞胺(化合物4)的合成OH除用乙醇胺替代N/，NA二甲基乙二胺外，其它合成及提純方法同實施例1，得到目標(biāo)化合物4，熔點257.3258.6。C。1H畫R(d6-DMSO，400MHz):5(ppm):3.61(d，J=5.6Hz，2H)，4.20(d，J=5.2Hz，2H)，4.92(s，1H)，7.42(t，Jl=6.8Hz，J2=6.8Hz，1H)，7.53(t，Jl=6.4Hz，J2=7.2Hz，2H)，7.97(m，3H)，8.52(m，2H)，8.93(s，1H)，9.00(s，1H)，9.60(s，m)。HR-MS(m/z):C22H16N403，計算值384.1222實測值384.1230。IR(KBr，cm-l):3630，1710，1655，1600，1510，1450，1330，1230，1156，1112，1015，825。實施例5:>4-(2/-哌嗪基乙基>;-(4-苯基-[l,2,3]-三唑)-萘酰亞胺(化合物5)的合成:除用l-(2-氨基乙基)哌嗪替代N/，NA二甲基乙二胺外，其它合成及提純方法同實施例l，得到目標(biāo)化合物5，熔點250.2251.7t:。1HNMR(d6-DMSO，400MHz):5(ppm):2.50(s，4H，NHCH2NCH2)，2.60(t，Jl=6.8Hz，J2=7.2Hz，2H)，2.76(s，4H，NCH2)，4.19(t，Jl=6.4Hz，J2=6.4Hz，2H)，7.41(t，Jl=7.2Hz，J2=7.2Hz，1H)，7.53(t，Jl=7.6Hz，J2=7.6Hz，2H)，7.96(m，3H)，8.52(m，2H)，8.95(s，1H)，9.01(s，1H)，9.63(s，1H)。HR-MS(m/z):C26H24N602，計算值452.1961，實測值452.1986。IR(KBr，cm-l):2919，1700，1662，1625，1590，1519，1436，1234，1149，1041，840。實施例6:N-(N/，N/-二甲基胺基乙基)-5-([1，2,3]-三唑)-萘酰亞胺(化合物6)的合成CuS04-5H20VC鈉乙塊N，N-二甲基乙二胺H20/t-BuOH乙醇除用乙炔替代苯乙炔外，其它合成及提純方法同實施例1，得到目標(biāo)化合物6，熔點226.3227.5°C。H麗R(d6-DMSO，400MHz):S(ppm):2.24(s，6H)，2.51(t，Jl=6.4Hz，J2=6.8Hz，2H)，4.18(t，Jl=6.4Hz，J2=6.8Hz，2H)，7.96(t，Jl=7.6Hz，J2=8Hz,1H)，8.10(d，J=1.2Hz，1H)，8.53(t，Jl=7.2Hz，J2=7.2Hz，2H)，8.93(d，J=2.4Hz，1H)，9.02(d，J=2Hz，1H)，9.16(d，J=1.2Hz，1H)。HR-MS(m/z):C18H17N502，計算值335.1382，實測值335.1382。IR(KBr，cm墨l):2923，2815，2771，1700，1656，1627，1598，1471，1381，1292，1240，1174，1058，890，790。實施例7:N-(N/，>^/-二乙基胺基乙基>5-([1，2,3]-三唑)-萘酰亞胺(化合物7)的合成:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage11</formula>除用N/，NA二乙基乙二胺替代N/，NA二甲基乙二胺外，其它合成及提純方法同實施例6，得到目標(biāo)化合物7，熔點200.5201.5'C。1H麗R(d6-DMSO，400MHz):S(ppm):0.97(t，Jl=7.2Hz，J2=6.8Hz，6H)，2.56(s，4H)，2.68(s，2H)，4.13(t，Jl=7.2Hz，J2=6.8Hz，2H)，7.95(t,Jl=7.6Hz，J2=7.6Hz，1H)，8.10(s，1H)，8.52(t，Jl=7.6Hz，J2=6.4Hz，2H)，8.93(d，J=2Hz，1H)，9.02(d，J=2Hz，1H)，9.16(s，1H)。HR-MS(m/z):C20H21N5O2，計算值363.1695，實測值363.1701。IR(KBr，cm隱l):2925，2811，2750，1711，1651，1616，1601，1462，1376，1276，1233，1168，1043，891，793。實施例8:N-丁基-5-([1,2,3]-三唑)-萘酰亞胺(化合物8)的合成<formula>formulaseeoriginaldocumentpage11</formula>除用正丁胺替代N/，NA二甲基乙二胺外，其它合成及提純方法同實施例6，得到目標(biāo)化合物8，熔點191.9193.rC。1HNMR(d6-DMSO，400MHz):3(ppm):0.94(t，Jl=7.2Hz，J2=7.6Hz，3H)，1.37(m，2H)，1.64(m，2H)，4.05(t，Jl=7.2Hz，J2=7.2Hz,2H)，7.94(t，Jl=8Hz，J2=7.6Hz，1H)，8.10(s，1H)，8.50(m，2H)，8.89(d，J=2Hz，1H)，8.99(d，J=2Hz，1H)，9.15(s，1H)。HR-MS(m/z):C18H16N402，計算值320.1273，實測值320.1278。IR(KBr，cm-l):2930，2825，2750，1706，1655，1613，1601，1451，1376，1280，1233，1150，1052，890，795。實施例9:^(2/-羥基乙基)-5-([1,2,3]-三唑)-萘酰亞胺(化合物9)的合成<formula>formulaseeoriginaldocumentpage12</formula>除用乙醇胺替代N/，NZ-二甲基乙二胺外，其它合成及提純方法同實施例6，得到目標(biāo)化合物9，熔點257.3258.6'C。1H麗R(d6-DMS0，400MHz):5(ppm):3.71(d，J=5.6Hz，2H)，4.35(d，J=5.2Hz，2H)，4.96(s，1H)，7.93(t，Jl=8Hz，J2=7.6Hz，1H)，8.09(s，1H),8.51(m，2H)，8.89(d，J=2Hz，1H),8.98(d，J=2,4Hz，1H)，9.16(s，1H)。HR-MS(m/z):C16H12N403，計算值308.0909:實測值308.0915。IR(KBr，cm-l):3660，1706，1651，1607，1518，1432，1330，1235，1152，1111，1012，821。實施例10:>1-(2/-哌嗪基乙基)-5-([1，2，3]-三唑)-萘酰亞胺(化合物IO)的合成<formula>formulaseeoriginaldocumentpage13</formula>除用l-(2-氨基乙基)哌嗪替代N/，NZ-二甲基乙二胺外，其它合成及提純方法同實施例6，得到目標(biāo)化合物IO，熔點250.2251,C。1HNMR(d6-DMSO，權(quán)MHz):5(ppm):2.53(s，4H，NHCH2NCH2)，2.65(t，Jl=7.2Hz，J2=7.2Hz，2H)，2.78(s，4H，NCH2)，4.19(t，Jl=6.8Hz，J2=7.2Hz，2H)，7.92(t，Jl=7.2Hz，J2=7.6Hz，1H),8.09(s，1H)，8.51(m，2H)，8.88(d，J=2.4Hz，1H)，8.99(d，J=2Hz，1H)，9.15(s，1H)。HR-MS(m/z):C2QH2。N602，計算值376.1648，實測值376.1645。IR(KBr，cm-l):2911，1705，1650，1610，1590，1510，1429，1229，1130，1050，833。實施例ll:測定化合物的體外抑制腫瘤細(xì)胞生長活性用四氮唑鹽(microculturetetrozolium,MTT)還原法對MOLT-4人白血病細(xì)胞和U251人神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞進(jìn)行體外抑制試驗。四氮唑鹽(MTT)還原法的具體操作是按不同腫瘤生長速率，將一定數(shù)量處于對數(shù)生長期的腫瘤細(xì)胞90^1/孔接種于96孔微量培養(yǎng)板內(nèi)，培養(yǎng)24h后加入藥液10pl/L，對每個細(xì)胞株，每個濃度均為三個復(fù)孔。另設(shè)無細(xì)胞調(diào)零孔、如果藥物有顏色要做相應(yīng)藥物濃度無細(xì)胞調(diào)零孔。腫瘤細(xì)胞在37'C、5。/。C02條件下培養(yǎng)48小時后，加MTT(Sigma)液5mg/ml用生理鹽水配制20^1/孔；繼續(xù)培養(yǎng)4小時后，加入三聯(lián)液(10。/。SDS-5。/。異丁醇-0.01mol/lHCl)50pl/孔，于C02培養(yǎng)箱中過夜。然后用酶標(biāo)儀測OD570值。按下列公式計算被測物對癌細(xì)胞生長的抑制率腫瘤抑制率=(對照組OD值-治療組OD值)/對照組OD值xl00%。表1.化合物1-10對U251人神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞的生長抑制率<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>表2.化合物2和7對MOLT-4人白血病細(xì)胞的生長抑制率<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>用磺酰羅丹明B(SulforhodamineB,SRB)蛋白染色法對A-549人肺腺癌細(xì)胞進(jìn)行體外抑制試驗?；酋Ａ_丹明B(SulforhodamineB,SRB)蛋白染色法的具體操作如下根據(jù)細(xì)胞生長速率,將處于對數(shù)生長期的腫瘤細(xì)胞以卯pl/孔接種于96孔培養(yǎng)板，貼壁生長24小時再加藥10pl/L。每個濃度設(shè)三復(fù)孔。并設(shè)相應(yīng)濃度的生理鹽水溶媒對照及無細(xì)胞調(diào)零孔。腫瘤細(xì)胞在37"C、5y。C02條件下培養(yǎng)72小時，然后傾去培養(yǎng)液，用10%冷TCA固定細(xì)胞，4"C放置1小時后用蒸餾水洗滌5次，空氣中自然干燥。然后加入由1%冰醋酸配制的SRB(Sigma)4mg/ml溶液]00p1/孔，室溫中染色15分鐘，去上清液，用1%醋酸洗滌5次，空氣干燥。最后加入15(Hil/孔的Tris溶液，酶標(biāo)儀520nm波長下測定A值。按下列公式計算被測物對癌細(xì)胞生長的抑制率腫瘤抑制率=(A540對照孔—A540給藥孔表3:化合物2和7對A-549人肺腺癌細(xì)胞的生長抑制率<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>從以上數(shù)據(jù)可以看出，化合物具有顯著的抑制腫瘤細(xì)胞活性。權(quán)利要求1、一類含三唑環(huán)萘酰亞胺抗腫瘤化合物，其特征在于該化合物的化學(xué)分子結(jié)構(gòu)通式如下式中R1為C1-C6烷基、id="icf0002"file="A2008100117000002C2.tif"wi="25"he="5"top="111"left="51"img-content="drawing"img-format="tif"orientation="portrait"inline="yes"/>或id="icf0003"file="A2008100117000002C3.tif"wi="32"he="13"top="108"left="82"img-content="drawing"img-format="tif"orientation="portrait"inline="yes"/>為H或苯環(huán)；其中，R5，R6均同為甲基、乙基，或R5+R6為哌嗪環(huán)、嗎啉環(huán)、硫代嗎啉環(huán)，n＝2～4。2、據(jù)權(quán)利要求1所述的含三唑環(huán)萘酰亞胺抗腫瘤化合物，其特征是所述抗腫瘤化合物分別為N-(W，N'-二甲基胺乙基)苯基三唑基萘酰亞胺、N-(N。N7-二乙基胺乙基)苯基三唑基萘酰亞胺、N-丁基苯基三唑基萘酰亞胺、N-(2^羥基乙基)苯基三唑基萘酰亞胺、N-(27-哌嗪基乙基)苯基三唑基萘酰亞胺、N-(N、N^二甲基胺乙基)三唑基萘酰亞胺、N-(Ny，N'-二乙基胺乙基)三唑基萘酰亞胺、N-丁基三唑基萘酰亞胺、N-(2L羥基乙基)三唑基萘酰亞胺或N-(么哌嗪基乙基)三唑基萘酰亞胺。3、所述的含三唑環(huán)萘酰亞胺抗腫瘤化合物的制備方法，其特征是以3-硝基-1，8萘酐為原料，在DMF溶劑中以Pd/C作催化劑，于室溫，1.5MPaH2下還原3個小時，得到一中間化合物；此中間化合物于05。C懸浮在濃HC1中加入1倍摩爾量的亞硝酸鈉水溶液，半小時后加入1倍摩爾量的疊氮鈉水溶液，反應(yīng)1小時后，過濾得到另一中間化合物；此中間化合物通過"ClickChemistry"反應(yīng)，即在CuS04和抗壞血酸鈉存在下，于溶劑叔丁醇和水中加入苯乙炔或通入乙炔氣，得到的產(chǎn)物與相應(yīng)的伯胺在乙醇中回流3小時即可得到以上所述的含三唑環(huán)的萘酰亞胺化合物。全文摘要一類含三唑環(huán)萘酰亞胺抗腫瘤化合物及其制備方法，其屬于生物有機合成領(lǐng)域。這種含三唑環(huán)萘酰亞胺抗腫瘤化合物是在萘酰亞胺母體上以取代基形式引入五元1，2，3-三唑環(huán)，通過硝基還原、重氮化反應(yīng)、疊氮取代反應(yīng)、ClickChemistry和氨基縮合反應(yīng)對化合物進(jìn)行設(shè)計合成，該類化合物具有良好的抗腫瘤活性，對多種不同組織來源的腫瘤細(xì)胞(如人肺癌、神經(jīng)膠質(zhì)癌等)和多種不同來源的遺傳變異細(xì)胞(如白血病細(xì)胞等)的正常生長具有較好的抑制作用。文檔編號A61P35/00GK101284827SQ200810011700公開日2008年10月15日申請日期2008年6月6日優(yōu)先權(quán)日2008年6月6日發(fā)明者李曉蓮,袁玉坤,錢旭紅申請人:大連理工大學(xué)