專利名稱：咪唑并[1,2-α]吡啶-2-甲酰胺的衍生物在治療中的用途的制作方法
咪唑并[1,2-ct]吡啶-2-甲酰胺的衍生物在治療中的用途
本發(fā)明涉及咪唑并[1,2-01]吡啶-2-曱酰胺在治療或預(yù)防涉及Nurr-l核 受體(r6cepteurs加cl6aires)(又稱為NR4A2， NOT, TINUR, RNR-1和 HZF3)的疾病的治療用途。
本發(fā)明的目的是對應(yīng)于式(I)的化合物
其中
R^， R2, 113和114表示氫原子；
X表示苯基，其任選地被一個或多個彼此獨立地選自以下原子或基 團的基團取代:卣素，(C廣C6)烷氧基，(C廣C6)烷基，環(huán)(C廣C6)烷基(C廣C6) 烷基，環(huán)(CrQ0烷基(d-C6)烷氧基，NRaRb;
或R2是氯和X是對-氟苯基；或R3是甲基和X是未被取代的苯基；
或R!是甲基和X是未被取代的苯基；
Ra和Rb,彼此獨立地是氫或(C廣C6)烷基，或與氮原子形成4-7個 《連節(jié)(chainon)的環(huán)；
其為堿或與酸的加成鹽形式，用于制備用來治療和預(yù)防其中涉及 NOT受體的疾病的藥物的用途。
在本發(fā)明目的式(I)化合物中，第一組化合物由以下化合物組成，其
中
R3是甲基和X是未被取代的苯基； 或Ri是甲基和X是未被取代的苯基； 其為堿或與酸的加成鹽的形式。
式(I)化合物可以以石咸或與酸的加成鹽的形式存在。這些加成鹽構(gòu)成本發(fā)明的一部分。
上述鹽可以用可藥用酸進行制備，但是其它的例如用于提純或分離 式(I)化合物的酸的鹽也構(gòu)成本發(fā)明的 一部分。
通式(I)化合物還可以以水合物或溶劑化物的形式存在，即與 一個或 多個水分子或與溶劑結(jié)合或締合的形式存在。上述水合物和溶劑化物也 構(gòu)成本發(fā)明的一部分。
在本發(fā)明目的式(I)化合物中，尤其可以列舉以下化合物 W-苯基咪唑并[1,2-01]吡啶-2-甲酰胺
6- 氯代-AK4-氟苯基)咪唑并[l,2-a]吡啶-2-甲酰胺 AK2-溴代-4,6-二氟苯基)-5-甲基咪唑并[l,2-a]吡啶-2-甲酰胺 AK4-氮雜環(huán)庚烷(azepan)-l-基苯基)-5-甲基咪唑并[l,2-a]吡啶-2-甲
酰胺
A^(5-氯代-2,4-二甲氧基苯基)-5-甲基咪唑并[1,2-(1]吡啶-2-甲酰胺
#-(2-甲氧基-5-曱基苯基)-7-甲基咪唑并[l ,2《]吡啶-2-甲酰胺
AH3-氟苯基)-7-甲基咪唑并[1 ，2-a]吡啶-2-甲酰胺
AH2-氟苯基)-7-曱基咪唑并[l,2-a]吡啶-2-甲酰胺
AH4-氟苯基)-7-曱基咪唑并[l,2-a]吡啶-2-甲酰胺
AK2,5-二乙氧基苯基)-7-曱基咪唑并[l，2-a]吡啶-2-甲酰胺
AH2,4-二曱氧基苯基)-7-曱基咪唑并[l,2-a]吡啶-2-曱酰胺
AK3,5-二曱氧基苯基)-7-曱基咪唑并[l,2-a]吡啶-2-甲酰胺
AH3-甲氧基苯基)-7-甲基咪唑并[1,2《]吡啶-2-甲酰胺
AM>乙氧基苯基)-7-甲基咪唑并[l ,2《]吡啶-2-甲酰胺
7- 曱基-#-(2-甲基苯基)咪唑并[1,2《]吡啶-2-曱酰胺 AL(4-曱氧基苯基)_7-甲基咪唑并[l ,2《]吡啶-2-曱酰胺
7-甲基-,(2-哌啶-1 -基苯基)咪唑并[1,2-01]吡啶-2-曱酰胺 AH2,5-二甲氧基苯基)-7-甲基咪唑并[l,2-a]吡啶-2-甲酰胺 AH2-曱氧基苯基)-7-曱基咪唑并[l,2-a]p比啶-2-曱酰胺 ,(4-氨基苯基)-7-甲基咪唑并[1,2《]吡啶-2-甲酰胺 ,(2-氟苯基)咪唑并[l,2-a]吡啶-2-曱酰胺 琴(4-哌啶-1-基苯基)咪唑并[1,2-01]吡啶-2-甲酰胺 AK3-氯代-4-氟苯基)咪唑并[l，2-a]吡啶-2-曱酰胺 AK4-溴代-3-甲基苯基)咪唑并[l,2-a]吡啶-2-曱酰胺,(2-異丙基-6-曱基苯基)咪唑并[1,2《]吡啶-2-曱酰胺 AK2-哌啶-l-基苯基)咪唑并[l,2-a]吡啶-2-甲酰胺 AA-(3-乙基苯基)咪唑并[l ,2-01]吡啶-2-甲酰胺 AH5-氯代-2-哌啶-l-基苯基)咪唑并[l,2-a]吡。定-2-甲酰胺 AH2-氯苯基)咪唑并[l,2-a]吡啶-2-甲酰胺
6,8-二氯代-A44-(二甲基氨基)笨基]咪唑并[l,2-a]吡啶-2-甲酰胺。 根據(jù)本發(fā)明，可以根據(jù)在下面方案1中描述的方法制備通式(I)化合物。<formula>formula see original document page 6</formula>
(IV)
路徑A在于根據(jù)本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的方法制備式(II)的2-氨基-外匕 啶和在于通過與2-氧代-N-芳基-丙酰胺(III)的衍生物(其中Hal表示氯， 溴或碘原子和X如上所定義)縮合形成咪唑并[l,2-ot]吡嚏環(huán)，所述縮合按 照與例如由J-J. Bourguignon等人在Aust. J. Chem. 1997, 50, 719-725 中和由J. G. Lombardino在J. Org. Chem. (1965)， 30(7), 2403中所描述 的方法類似的方法進行。2-氧代-N-芳基-丙酰胺(III)的卣化衍生物可以根 據(jù)在由R.Kluger等人在J. Am. Chem. Soc.(1984) 106 (14)， 4017中描述 的方法獲得。
第二種合成路徑B, C在于，根據(jù)本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的方法，使 咪唑并吡啶-2-曱酸或它的式(IV)衍生物的一種(其中Y是OH或卣素或(d-C6)烷氧基)與芳基胺X-NH2(VI)(其中X如上所定義)偶聯(lián)。因此，酸可以被預(yù)先轉(zhuǎn)化為它的活性衍生物的一種，如?；铡Ⅳ?、混合酐或活性酯，然后使其與胺(VI)在堿(如二異丙基乙基胺，三乙基胺或吡啶)存在下，在惰性溶劑(如THF, DMF或二氯曱烷)中進行反應(yīng)。偶聯(lián)還可以在偶聯(lián)劑(如CDI、 EDCI、 HATU或HBTU)存在下，在相同的條件下(不需要分離活性中間體)進行。或者，可以使胺(VI)與式(IV)的酸的酯在催化劑如三曱基鋁(根據(jù)Weinreb, S.等人(Tet. Lett. (1977)， 18, 4171)的方法)或叔丁氧基鋯(terbuylate de zirconium )存在下進行反應(yīng)。咪唑并吡咬-2-羧酸和它們的式(IV)衍生物可以按下面方法得到根據(jù)由J.G.Lombardino在J. Org. Chem., 30(7), 2403 (1965)中描述的方法，通過使合適的2-氨基吡啶與3-卣代-2-氧代-丙酸的酯縮合，然后通過脫保護酯形成酸，必要時，將酸轉(zhuǎn)化為它的一種衍生物。
必要時或需要時，為了得到式(I)產(chǎn)物或被轉(zhuǎn)化為式(I)的其它產(chǎn)物，可以使式(I)產(chǎn)物以任一順序經(jīng)受一個或多個以下轉(zhuǎn)化反應(yīng)
a) 羥基官能被轉(zhuǎn)化成烷氧基官能的反應(yīng)，
b) 含囟素衍生物和有機金屬衍生物的衍生物(如錫的或硼的衍生物)的催化偶聯(lián)反應(yīng)，以引入甲基取代基，
c) 活性官能的保護反應(yīng)，
d) 被保護的活性官能可攜帶的保護基團的去除反應(yīng)，
e) 用無^^酸或有才幾酸或^5咸的成鹽反應(yīng)以獲得相應(yīng)的鹽，
f) 外消旋形式被拆分(d6doublement)為對映異構(gòu)體的反應(yīng)，
必要時，這樣獲得的所述式(I)產(chǎn)物全部呈可能為外消旋的、對映異構(gòu)體和非對映異構(gòu)體的異構(gòu)體形式。
在方案l中，所述起始化合物和反應(yīng)劑，當(dāng)沒有描述它們的制備方法時，可以從商業(yè)中獲得或者被描述在文獻中，或可以根據(jù)在本文中描述的方法或本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的方法進行制備。
根據(jù)本發(fā)明的化合物的藥理試驗的目的是可以測定它們對NOT的調(diào)節(jié)作用(effet modulateur)。
對N2A細(xì)胞的體外活性的評價
所述試驗在于測定本發(fā)明的化合物對內(nèi)源表達小鼠的受體Nurr 1的并用連接與熒光素酶報道基因偶聯(lián)的NOT(NBRE)的應(yīng)答元件進行穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的細(xì)胞系(N2A)的體外活性。EC50為O.Ol-lOOOnM。該試驗根據(jù)如下所述的操作方式進行。
Neuro-2A細(xì)胞系來自標(biāo)準(zhǔn)商業(yè)來源(ATCC)。 Neuro-2A克隆由R.J Klebe等人從來源于小白鼠品系A(chǔ) ( souche de souris A albino )的自生月中 瘤獲得。該Neuro-2A系隨后用8NBRE-熒光素酶進行穩(wěn)定轉(zhuǎn)染。培養(yǎng) N2A-8NBRE細(xì)胞直到在包含DMEM的75cn^培養(yǎng)瓶中匯合，其中 DMEM補充有10%胎牛血清，4.5g/L葡萄糖和0.4mg/mL的遺傳霉素 (G6n6ticine)。在培養(yǎng)一周后，用0.25%胰蛋白酶回收細(xì)胞30秒，然后將 細(xì)胞再懸浮于沒有酚紅的DMEM中，其中DMEM包含4.5g/1葡萄糖和 10%Hyclone脫脂血清，并沉積在透明底的96孔白板(plaques blanches ) 中。細(xì)胞(在75jiiL中)以每孔60000的比率沉積24小時，然后加入產(chǎn) 品。施用產(chǎn)品(在25pL中)并再培育24小時。在測量當(dāng)天，把當(dāng)量體 積(100pL)的Steadylite加入到每個孔中然后放置30分鐘以獲得細(xì)胞的完 全溶解并產(chǎn)生最大信號。隨后在微量培養(yǎng)板用粘性膜密封后，在用于微 量培養(yǎng)板的閃爍發(fā)光計數(shù)儀上測量這些板。所述產(chǎn)品被制備為1(^M儲 備溶液形式，然后在100%DMSO中進行稀釋。每個產(chǎn)品濃度在培養(yǎng)基 中被預(yù)先稀釋，然后培育因此包含0.625%最后濃度的DMSO的細(xì)胞。
例如，化合物n°l和2分別顯示出ECso為5.5nM和17nM。
化合物n°l化合物n°2
f^y^」o 人W仆
評價與人類受體NOT的結(jié)合
本發(fā)明的化合物和人類受體NOT的直接結(jié)合(liaison)通過使用 SPR(表面等離振子共振)技術(shù)進行評價。在該試驗中，蛋白被共價固定 在基質(zhì)上，將待研究的分子注入到包含傳感器芯片的室中。蛋白信號與 跟蛋白連接的產(chǎn)品的量成正比。上述結(jié)合試驗在Biacore S51儀器 (Bmcore Inc., Piscataway,N丄)中進行。GST-NOT(NOT-FL)全蛋白由 Invitrogen (PV3265)提供。與NOT的配體(His曙Thr-NOT 329-598)的結(jié)合 結(jié)構(gòu)域(domaine de liaison)如在Nature 423， 555-560中所描述和進行純 化。在包含5mM DTT的pH5.0的乙酸鹽緩沖液中被稀釋到20pg/mL濃 度的這兩種蛋白根據(jù)由Biacore推薦的方案通過用HBS-N緩沖液(10mM
8HEPES, 0.15MNaCl， 3mM EDTA, pH7.4)洗脫經(jīng)過胺偶聯(lián)被固定在羧 甲基5'右旋糖苷(CM5傳感器芯片，Biacore Inc.)的表面上。大約 10000-15000共振單位(RU)的蛋白被捕獲在傳感器芯片CM5表面上。在 DMSO中的1.5mM待研究化合物的儲備溶液在稀釋緩沖液(50mM HEPESpH8; 150mMNaCl; 10mMMgCl2; 2%DMS0, lmMDTT)中被 系列稀釋成3.75-0.1|nM的濃度。在4°C下，將每種濃度的產(chǎn)品以 30pL/min注入1分鐘。不進行其它的表面再生過程，記錄該解離作用5 分鐘。獲得的信號通過測試在未被修飾的右旋糖苷(空白)的表面上的每 個產(chǎn)品濃度進行校準(zhǔn)。屬于轉(zhuǎn)移緩沖液(tampon de migration)的信號從總 信號中扣除(《雙重參照(double referencing)》)以及DMSO的效應(yīng)也如此。 信號分析借助于Bmcore S51分析軟件(1.2.1版本)來進行。然后化合物根 據(jù)其最大連接(fixation)水平和與被固定的蛋白的結(jié)合的動力學(xué)參數(shù)進 行分類。
例如，化合物n。1具有中度親和性。
由于它們在治療或預(yù)防涉及受體NOT的疾病中的治療應(yīng)用，根據(jù) 本發(fā)明的化合物因此可以用于制備藥物。
所述藥物尤其在治療和預(yù)防神經(jīng)變性疾病中具有治療用途，如帕金 森病，阿爾茨海默病(maladie d，Alzheimer), tau蛋白病(tauopathies)(例如， 核上性進行性麻痹，額顳癡呆(lad6mence fronto temporale),皮質(zhì)基底節(jié) 變性(d6g6n6rescence corticobasale), Pick病),多發(fā)性硬4b(la scl6rose en plaque); 腦損傷如腦缺血和顱損傷(les traumatismes craniens)和癲癇癥； 4青^申疾病^口，咪青一申分裂癥，才中省卩癥，物質(zhì)依賴(la d6pendance & une substance); 注意缺陷和多動癥障礙；炎癥如血管疾病(pathologies vasculaires)，動脈粥樣硬化，關(guān)節(jié)炎癥，關(guān)節(jié)病，類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，骨 關(guān)節(jié)炎，過敏性炎癥，如哮喘和用于治愈骨質(zhì)疏松，癌癥。
上述化合物還可以用于與干細(xì)胞的移植(greffe)和/或移植 (transplantation)有關(guān)的治療。
根據(jù)本發(fā)明的其它方面，本發(fā)明涉及藥物組合物，其包含根據(jù)本發(fā) 明的化合物作為活性成分。這些藥物組合物包含有效劑量的至少 一種本 發(fā)明的化合物或所述化合物的可藥用鹽，以及至少 一種可藥用賦形劑。
所述賦形劑根據(jù)藥物形式和所希望的給藥方式在本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的傳統(tǒng)賦形劑中進行選擇。
在用于口服、舌下、皮下、肌內(nèi)、靜脈內(nèi)、體表(topique)、局部、 氣管內(nèi)、鼻內(nèi)、透皮或直腸給藥的本發(fā)明藥物組合物中，上述式(I)的活 性成分，或其鹽可以以單位給藥形式，通過與傳統(tǒng)的可藥用賦形劑混合, 被給予動物或人類以預(yù)防或治療上述的障礙或疾病。
適當(dāng)?shù)膯挝唤o藥形式包括口服途徑形式如片劑、軟膠嚢或硬膠嚢、 粉末、顆粒和口服溶液或懸浮液，舌下、含服(buccale)、氣管內(nèi)、眼內(nèi)、 鼻內(nèi)、通過吸入的給藥形式，體表、透皮、皮下、肌內(nèi)或靜脈內(nèi)給藥形 式，直腸和植入物給藥形式。為了體表施用，可以以乳劑、凝膠、膏或 洗劑形式使用本發(fā)明的化合物。
作為實例，片劑形式的本發(fā)明化合物的單位給藥形式，可含有如下 的組分
根據(jù)本發(fā)明的化合物 50.0mg
甘露醇 223.75mg
交聯(lián)甲羧纖維素鈉 6.0mg
玉米淀粉 15.0mg
幾丙基甲基纖維素 2.25mg
硬脂酸鎂 3.0mg
可以存在特殊情況，在這種情況下更高或更低的劑量可能是適當(dāng) 的，這些劑量也不超出本發(fā)明的范圍。按照通常的實踐，對每一個病人 適當(dāng)?shù)膭┝坑舍t(yī)生根據(jù)給藥方式、所述病人的體重和反應(yīng)來確定。
根據(jù)本發(fā)明的另 一 方面，本發(fā)明還涉及治療如上指出的病理的方 法，包括對病人給藥有效量的本發(fā)明的化合物，或其可藥用鹽中的一種。
權(quán)利要求
1. 式(I)的化合物或這種化合物與可藥用酸的加成鹽用于制備用來治療和預(yù)防其中涉及受體NOT的疾病的藥物的用途其中R1、R2、R3和R4表示氫原子；和X表示苯基，其任選地被一個或多個彼此獨立地選自以下原子或基團的基團取代鹵素，(C1-C6)烷氧基，(C1-C6)烷基，環(huán)(C1-C6)烷基(C1-C6)烷基，環(huán)(C1-C6)烷基(C1-C6)烷氧基，NRaRb；或R2是氯和X是對-氟苯基；或R3是甲基和X是未被取代的苯基；或R1是甲基和X是未被取代的苯基；Ra和Rb，彼此獨立地是氫，(C1-C6)烷基或與氮原子形成4-7個鏈節(jié)的環(huán)；其為堿或與酸的加成鹽形式。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1的式(I)化合物或這種化合物與可藥用酸的加成 鹽的用途，特征在于對于所述式(I)化合物，R3是曱基和X是未被取代的 苯基；或Ri是甲基和X是未被取代的苯基；其以堿或與酸的加成鹽的 形式存在。
3. 根據(jù)權(quán)利要求l-2任一項的式(I)化合物用于制備藥物的用途，該 藥物用來治療和預(yù)防神經(jīng)變性疾病。
4. 根據(jù)權(quán)利要求l-2任一項的式(I)化合物用于制備藥物的用途，該 藥物用來治療和預(yù)防多發(fā)性硬化，腦損傷和癲癇癥。
5. 根據(jù)權(quán)利要求l-2任一項的式(I)化合物用于制備藥物的用途，該 藥物用來治療和預(yù)防精神疾病。
6. 根據(jù)權(quán)利要求l-2任一項的式(I)化合物用于制備藥物的用途，該藥物用來治療和預(yù)防炎癥疾病。
7. 根據(jù)權(quán)利要求l-2任一項的式(I)化合物用于制備藥物的用途，該 藥物用來治療和預(yù)防骨質(zhì)疏松和癌癥。
8. 根據(jù)權(quán)利要求l-2任一項的式(I)化合物用于制備藥物的用途，該 藥物用來治療和預(yù)防帕金森病，阿爾茨海默病，tau蛋白病。
9. 根據(jù)權(quán)利要求l-2任一項的式(I)化合物用于制備藥物的用途，該 藥物用來治療和預(yù)防精神分裂癥，抑郁癥，物質(zhì)依賴，注意缺陷和多動 癥障礙。
全文摘要
本發(fā)明涉及式(I)的化合物，其中R<sub>1</sub>、R<sub>2</sub>、R<sub>3</sub>和R<sub>4</sub>是氫；和X是苯基，其任選地被一個或多個彼此獨立地選自以下原子或基團的基團取代鹵素，(C<sub>1</sub>-C<sub>6</sub>)烷氧基，(C<sub>1</sub>-C<sub>6</sub>)烷基，環(huán)(C<sub>1</sub>-C<sub>6</sub>)烷基(C<sub>1</sub>-C<sub>6</sub>)烷基，環(huán)(C<sub>1</sub>-C<sub>6</sub>)烷基(C<sub>1</sub>-C<sub>6</sub>)烷氧基，NRaRb；或R<sub>2</sub>是氯和X是對-氟苯基；或R<sub>3</sub>是甲基和X是未被取代的苯基；或R<sub>1</sub>是甲基和X是未被取代的苯基；Ra和Rb，彼此獨立地是氫或(C<sub>1</sub>-C<sub>6</sub>)烷基，或與氮原子形成4-7個鏈節(jié)的環(huán)；它們?yōu)閴A或與酸的加成鹽形式，用于制備用于治療和預(yù)防其中涉及受體NOT的疾病的藥物的用途。
文檔編號A61K31/4523GK101484168SQ200780025224
公開日2009年7月15日 申請日期2007年7月3日 優(yōu)先權(quán)日2006年7月3日
發(fā)明者J·-F·佩羅內(nèi)爾 申請人:賽諾菲-安萬特