專利名稱：：山竹果皮提取物在制備用于抗心肌缺血藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種中藥新藥材中的提取物及其提取方法及其藥物用途。技術(shù)背景山竹(yz7a/7g(951tee/Carcj'/7ia/as/^osfa"aL.)，原名莽吉柿。原產(chǎn)馬來西亞群島，今廣西、海南盛產(chǎn)。屬藤黃科常綠中型喬木，樹高10-20米，樹型美觀。單葉對生，橢圓形、革質(zhì)，花頂生，花瓣紅色，2-4月開花，果實(shí)成熟時(shí)紫紅色，內(nèi)有種子l-2粒，褐色，果肉白色透明，味清甜軟滑。,用山竹子生長慢，種后8-10年才結(jié)果，果熟期6-7月，果肉含可溶性固形物16.8%、檸檬酸0.63%，還含有其它維生素B1、B2、C4和礦物質(zhì)，是典型熱帶水果。山竹是具有濃密樹冠的常綠喬木,樹高10-25米。水果單性繁殖，果的直徑6-7厘米表皮堅(jiān)實(shí)光滑，皮色未成熟時(shí)為綠色，成熟時(shí)轉(zhuǎn)為黑紫或粉紅色，內(nèi)有4-8瓣的可食用果肉，風(fēng)味清香甜中微酸。每個(gè)果實(shí)中有1-2粒種子。山竹一般種植10年才開始結(jié)果，對環(huán)境要求非常嚴(yán)格，因此是名副其實(shí)的綠色水果，非常名貴，其幽香氣爽，滑潤而不膩滯，與榴蓮齊名，號稱"果中皇后"。功效凈化血液、降低膽固醇。山竹果肉約占總重量的20-30%左右，其余部分為果皮，作為廢棄物扔掉。經(jīng)過初步的化學(xué)及藥效學(xué)研究表明山竹果皮中含有大量的黃酮類化合物，在降低高血脂方面具有較強(qiáng)的生物活性。將資源豐富的山竹果皮開發(fā)成為降血脂新藥，針對廣大的高血脂患者人群，具有廣泛的應(yīng)用前景。目前，有關(guān)山竹果皮總提取物及其提取方法及其藥物用途未見到報(bào)道。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的提供了山竹果皮提取物在制備用于抗高血脂癥、抗心肌缺血、治療冠心病、心絞痛的藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明山竹果皮提取物的提取精制方法是a.將山竹果皮粉碎，在30-8(TC條件下，用20-25倍量30°/。-95%乙醇提取3次，每次分別為3h、2h、lh，過濾，合并提取液；b.將步驟a得到的提取液上，回收乙醇至浸膏，干燥。因山竹子生長慢，種后8-10年才結(jié)果，果熟期6-7月，果肉含可溶性固形物僅16.8%，而果皮占果實(shí)的70%-80%以上，資源非常豐富，經(jīng)過研究表明其富含總黃酮等有效成分，是十分珍貴的新的藥材，未見到報(bào)道，其降血脂藥物用途屬首次發(fā)現(xiàn)。山竹果皮提取物其特征為淺黃色至褐色，粉末狀，味苦，可溶于水、乙醇等。該山竹果皮提取物總黃酮的含量占山竹果皮干重的2%以上。當(dāng)本發(fā)明用于制備抗心肌缺血、治療冠心病、心絞痛的藥物時(shí)，其口服或胃腸外給藥，均是安全的，在口服情況下，其可以任何常規(guī)形式給藥，如散劑、粒劑、片劑、膠囊劑、丸劑、溶液劑、懸浮液、糖漿、口腔含片、舌下含片等:當(dāng)該藥物腸胃外給藥時(shí)，可采取任何常規(guī)形式，例如注射劑如靜脈內(nèi)注射、軟膏劑、栓劑、經(jīng)皮給藥、吸入劑等。本發(fā)明制備抗心肌缺血、治療冠心病、心絞痛的藥物是由有效成芬單體或有效成分與固體或液體的賦形劑一起構(gòu)成的，這里使用的固體或液體的賦形劑在本領(lǐng)域是眾所周知的，下面舉幾個(gè)具體例子，散劑是內(nèi)服的粉末劑，它的賦形劑有乳糖、淀粉、漿糊精、碳酸鈣、合成或天然硫酸鋁、氧化鎂、硬脂酸鎂，碳酸氫鈉、干燥酵母等；溶液劑的賦形劑有水、甘油、丙二醇、單糖漿、乙醇、乙二醇、聚乙二醇、山梨糖醇等；軟膏劑的賦形劑可以使用脂油，含水羊毛脂、凡士林、甘油、蜂臘、木臘、液體石臘、樹脂、高級臘等組合成的疏水劑或親水劑。本發(fā)明的有益效果是，山竹果皮提取物屬于山竹新藥材提取物，其藥物用途屬首次發(fā)現(xiàn)，為抗心肌缺血、治療冠心病、心絞痛發(fā)現(xiàn)了新的藥源。有效物質(zhì)的劑量可以根據(jù)服用方式，病人的年齡和體重及病情嚴(yán)重程度和其它類似的因素而改變，口服量為70120mg/次，每日12次服用注射3070mg/次，每日一次。具體實(shí)施方式本發(fā)明可通過下面的實(shí)驗(yàn)例進(jìn)一步說明。山竹果皮提取物以下簡稱SZGPT。實(shí)驗(yàn)例一、SZGPT預(yù)防和治療高血脂癥的初步試驗(yàn)1、材料與方法1.1動(dòng)物SD大鼠,40只，雌雄各半,體質(zhì)量130g-150g，購自本校實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。1.2藥物山竹果皮提取物SZGPT:自制；月見草油，白求恩醫(yī)科大學(xué)制藥廠生產(chǎn)。膽固醇粉(AR),由中國醫(yī)藥(集團(tuán))上?；瘜W(xué)試劑公司提供(批號F20030410)。1.3高脂兔飼料及各種含藥物高脂飼料的配制高脂飼料配制:基礎(chǔ)飼料100g中加入膽固醇0.4g，豬油2mL;在高脂飼料的基礎(chǔ)上加入不同含量的藥物配制成含藥物的高脂飼料供實(shí)驗(yàn)喂養(yǎng)。2、對正常大鼠血脂水平的影響取大鼠40只,雌雄各半，禁食給水12h，稱體質(zhì)量,隨機(jī)分為4組(各10只):正常對照組(生理鹽水，lml/100g)、陽性對照組(月見草油1.2g/100g)、山竹果皮提取物大劑量組(0.84g/kg)、中劑量組((U2g/kg)和小劑量組(0.21g/kg)。上述藥物均灌胃(ig)給藥，每日1次，共15d，實(shí)驗(yàn)過程中每周稱體質(zhì)量1次，第16天摘除大鼠眼球,眼眶取血2-3ml,送血生化檢査,測血清中TG和TC含量。3、山竹果皮提取物提取物降血脂試驗(yàn)結(jié)果見表l。表l山竹果皮提取物降血脂試驗(yàn)結(jié)果，組—....................TC(mmol/L)TG(mmol/L)正常對照組2.260±0.2251.513±0.351Rl性對照組1細(xì)±0.177*1.241±0.235山竹果皮提取物小劑量組1.960±0.292*1.073±0.365*中劑量組1.835±0.214*1.040±0.173*大劑量組1.637±0.205*1.035±0.154*4、結(jié)論實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明山竹果皮提取物具有明顯的降血脂作用。實(shí)驗(yàn)例二、SZGPT抗心肌缺血、治療冠心病、心絞痛的初步試驗(yàn)1.材料與方法1.l動(dòng)物健康成年雜種犬，雌、雄兼用，體重16.23士1.87kg。1.2藥品及試劑山竹果皮提取物(藥粉)，性狀淺粽色粉末，純度:樣品中山竹果皮提取物總黃酮含量不少于2%，批號031007，由吉林大學(xué)再生醫(yī)學(xué)科學(xué)研究所提供；陽性對照藥銀杏葉片，規(guī)格12mg/片，含總黃酮苷9.6mg，萜類內(nèi)脂2.4mg，批號20031212，貴州信邦制藥股份有限公司產(chǎn)品；戊巴比妥鈉，規(guī)格分析純(25g/瓶)，批號950427，北京通縣育才精細(xì)化工廠產(chǎn)品；肝素鈉注射液，規(guī)格12500U:2ml，批號0104108，徐州萬邦生化制藥有限公司產(chǎn)品；氯化硝基四氮唑藍(lán)，規(guī)格分析純，批號F20020830，中國醫(yī)藥(集團(tuán))上?；瘜W(xué)試劑公司產(chǎn)品；谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)檢測試齊j盒，規(guī)格:10mlX10支，批號020151、肌酸激酶(CK)檢測試劑盒，規(guī)格10mlX10支，批號090151、乳酸脫氫酶(LDH-L)檢測試劑盒，規(guī)格10mlX10支，批號130081，中生北控生物科技股份有限公司產(chǎn)品；丙二醛(M[)A)檢測試劑盒，規(guī)格50T/盒，批號20040322、超氧化物歧化酶(SOD)檢測試劑盒，規(guī)格50T/盒，批號20040323，南京建成生物工程研究所產(chǎn)品。1.3儀器CBI-8000激光多普勒血流量儀(美國BI0PAC公司產(chǎn)品)，根據(jù)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物冠狀動(dòng)脈及主動(dòng)脈直徑選擇適合口徑血流量探頭；Powerlab/8s型八導(dǎo)數(shù)據(jù)分析記錄儀及相關(guān)附件(澳大利亞埃德公司產(chǎn)品)；SC-3型人工呼吸機(jī)(上海醫(yī)療設(shè)備廠產(chǎn)品)；HL-2型恒流泵(上海市滬西儀器廠產(chǎn)品)；TU-1800S型紫外可見分光光度計(jì)(北京普析通用儀器有限責(zé)任公司產(chǎn)品)；BI-2000醫(yī)學(xué)圖象分析儀(成都泰盟科技有限公司產(chǎn)品)。2.實(shí)驗(yàn)方法2.1分組及給藥劑量將實(shí)驗(yàn)犬隨機(jī)分為對照組；陽性對照藥銀杏葉片組(24mg/kg);山竹果皮提取物24mg/kg、12mg/kg和6mg/kg三個(gè)給藥劑量組。每組6只。對照藥物及受試藥物用蒸餾水配制成所需濃度混懸液。2.2手術(shù)操作方法實(shí)驗(yàn)動(dòng)物用3X戊巴比妥鈉(30mg/kg)靜脈注射麻醉。頸部手術(shù)，氣管插管，連接人工呼吸機(jī)，分離左側(cè)頸總動(dòng)脈，插管經(jīng)壓力換能器記錄動(dòng)脈血壓；分離股靜脈，插管供補(bǔ)充液體或麻藥；分離右側(cè)股動(dòng)脈并插管至左心室，連接壓力換能器測量左心室內(nèi)壓及左心室舒張期終末壓，再經(jīng)微分器測量左心室內(nèi)壓變化速率；腹部手術(shù)，做十二指腸插管，供十二指腸給藥；開胸，縱向剪開心包膜，做荷包固定托起心臟，分離出冠狀動(dòng)脈左旋支及主動(dòng)脈根部，放置適合口徑的激光多普勒探頭，分別測量冠狀動(dòng)脈血流量及主動(dòng)脈血流量(心輸出量)。3.觀察指標(biāo)及其檢測方法3.l心肌缺血模型的建立手術(shù)完畢，穩(wěn)定30min，待各項(xiàng)生理指標(biāo)平穩(wěn)后，先記錄各項(xiàng)指標(biāo)的正常曲線作為給藥前對照。隨后開始給藥，陽性對照藥銀杏葉片和受試藥洋參果冠心片經(jīng)十二指腸給藥，對照組動(dòng)物經(jīng)十二指腸給予等體積蒸餾水。給藥后45min，結(jié)扎左冠狀動(dòng)脈左前降支中下1/3段，建立急性心肌缺血模型。分別于結(jié)扎后2min、5min、10min、20min、30min、60min、90min、120min、180min、240min、300min和360min時(shí)，測量記錄冠狀動(dòng)脈結(jié)扎后6h心肌三酶、S0D、MDA、心肌梗死面積百分比。3.2心肌梗塞面積測量方法實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)剪下心臟，用生理鹽水洗凈，除去血污，剔除血管脂肪等非心肌組織，用吸水紙吸去水分，稱全心濕重。剪去冠狀溝以上心房，稱心室重。順房室溝從心尖到心基部平行將心室切成厚度為lcm的心肌切片，用生理鹽水洗凈。把心肌切片放置于0.025%硝基四氮唑藍(lán)(NBT)溶液中，在37t:水浴中溫孵15min染色，染色過程中不斷凍拌染色液使之與心肌有充分的接觸機(jī)會(huì)。染色后立即用水沖洗多余的染料，正常心肌被染成藍(lán)色，梗塞心肌不被染色。通過BI-2000醫(yī)學(xué)圖象分析系統(tǒng)的錄象裝置將各組心肌切片以圖片形式攝入電腦，再通過BI-2000醫(yī)學(xué)圖象分析系統(tǒng)處理面積的軟件確定計(jì)算心肌梗死的面積及整塊心肌面積，可用公式心肌梗塞面積=未染色面積和/心肌片總面積和X100%。4.結(jié)果與討論山竹果皮提取物對心肌缺血犬心肌梗死面積的影響冠狀動(dòng)脈結(jié)扎后6h，通過心肌切片，大體標(biāo)本經(jīng)氯化硝基四氮唑藍(lán)(NBT)染色，計(jì)算出心肌梗死面積占心肌總面積的百分比，可以直觀的反映出結(jié)扎后心肌梗塞面積的大小和藥物對心梗的預(yù)防治療作用。由表2可以看出冠狀動(dòng)脈結(jié)扎后6h，對照組的心肌梗塞面積為25.7±4.0%;陽性對照相藥銀杏葉片24mg/kg組的心肌梗塞面積為18.1±2.0%(與對照組比較P<0.01)::受試新藥山竹果皮提取物24mg/kg、12mg/kg和6mg/kg劑量組的心肌梗塞面積分別為13.1±2.9%、19.1±1.5%和23.6±1.5%(與對照組比較分別為P<0.001、P<0.01和PX).05)。此外，受試新藥山竹果皮提取物24mg/kg劑量組的心肌梗塞面積還明顯小于相同給藥劑量的陽性對照藥銀杏葉片(PO.Ol)。上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，受試新藥山竹果皮提取物在心肌缺血條件下，可以增加冠狀動(dòng)脈血流量，改善心肌供血供氧狀況，治療和預(yù)防冠心病、心絞痛、減少心肌梗塞面積。并且該作用明顯優(yōu)于相同劑量的陽性對照藥銀杏葉片。詳細(xì)結(jié)果見表2。表2.山竹果皮提取物對心肌缺血犬心肌三酶、SOD、MDA和心肌梗塞面積的影響(；±sn=6)<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>注與對照組比較'PO.05;"PO.01;'"PO.OOl。與陽性對照藥銀杏葉片組比較AAP<0.01。提取方法的實(shí)施例l:a.將山竹果皮粉碎，在8(TC條件下，用25倍量30%乙醇提取3次，每次分別為3h、2h、lh，過濾，合并提取液；b.將步驟a得到的提取液上，回收乙醇至浸膏，干燥。提取方法的實(shí)施例2:a.將山竹果皮粉碎，在3(TC條件下，用20倍量95%乙醇提取3次，每次分別為3h、2h、lh，過濾，合并提取液；b.將步驟a得到的提取液上，回收乙醇至浸膏，干燥。.提取方法的實(shí)施例3:a.將山竹果皮粉碎，在5(TC條件下，用22倍量60%乙醇提取3次，每次分別為3h、2h、lh，過濾，合并提取液；b.將步驟a得到的提取液上，回收乙醇至浸膏，干燥。制備藥劑的實(shí)施例l-取山竹果皮提取物50g，加入藥用淀粉250g，二者充分混合，制成1000粒膠囊，每粒重0.3g，含山竹提取物50mg。制備藥劑的實(shí)施例2:取山竹果皮提取物60g，加入藥用淀粉240g，二者充分混合，制成1000片，每片重0.3g,含山竹果皮提取物60mg。權(quán)利要求1、山竹果皮提取物在制備用于抗心肌缺血、治療冠心病、心絞痛的藥物中的應(yīng)用。全文摘要本發(fā)明公開了一種山竹果皮提取物在制備用于抗心肌缺血、治療冠心病、心絞痛的藥物中的應(yīng)用。將山竹果皮粉碎后用30％-95％乙醇提取，回收乙醇可得到用于中藥新藥研究的原料藥。本發(fā)明提取純化的山竹果皮提取物具有抗心肌缺血、治療冠心病、心絞痛的作用。文檔編號A61K36/896GK101219183SQ200710300598公開日2008年7月16日申請日期2006年1月5日優(yōu)先權(quán)日2006年1月5日發(fā)明者李平亞申請人:李平亞