專利名稱：：黃姜水溶性皂苷脂質(zhì)體及其制備方法和用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及黃姜水溶性皂苷脂質(zhì)體及其制備方法和用途，屬于醫(yī)藥領(lǐng)域。技術(shù)背景心腦血管疾病是影響我國(guó)人口壽命的第二大因素，隨著人們生活水平的提高，工作壓力的增大，心腦血管疾病的患病呈年輕化，患病人數(shù)呈上升的趨勢(shì)。目前，可供選擇的藥物大多為西藥品種，而中藥品種少，且中藥制劑多為傳統(tǒng)劑型或普通劑型。黃姜，學(xué)名盾葉薯蕷DioscoreazingiberensisC.H.Wright又名火頭根，為我國(guó)特有的薯蕷品種，其根莖內(nèi)薯蕷皂素的含量最高達(dá)16.15%，是合成避孕藥、留體激素類藥物的重要起始原料，被譽(yù)為"藥用黃金"。廣泛應(yīng)用于抗炎、鎮(zhèn)痛、麻醉、避孕、殺蟲、冠心病等癥狀。其水溶性留體皂苷成分具有增加冠脈流量，降低心肌耗氧量，血液流變學(xué)改變的作用，對(duì)心肌缺血、胸痹、高脂血癥等具有明顯治療作用。黃姜水溶性皂苷水溶性極大，在胃腸道黏膜的透過性差，同時(shí)胃的強(qiáng)酸環(huán)境對(duì)藥物有降解作用，因此導(dǎo)致了黃姜水溶性皂苷的生物利用度很低。在藥物載體輸送系統(tǒng)中，微乳、納米粒、脂質(zhì)體等亞微粒的研究，已經(jīng)成為藥物新劑型研究中非常活躍的領(lǐng)域。將藥物包封于這些亞微粒中可，可改變藥物在體內(nèi)的分布，增加藥物在靶器官的分布量，從而提高療效，減輕毒副作用。脂質(zhì)體具有良好的生物相容性，制備工藝簡(jiǎn)單，藥物包封于脂質(zhì)體中，能降低藥物毒性，增強(qiáng)藥理作用，而且能夠降低藥物的消除速率，延長(zhǎng)藥物作用，增加藥物的體內(nèi)外穩(wěn)定性。由于藥物本身性質(zhì)不同，對(duì)同一種脂質(zhì)體選用不同的膜材不同的制備方法包封率會(huì)有很大的差距，因而在制備時(shí)針對(duì)包封藥物要在膜材和制備方法上多做篩選，同時(shí)還要解決產(chǎn)品穩(wěn)定性及被包藥物泄露的問題。因此制備脂質(zhì)體的瓶頸在于如何尋找合適的輔料及輔料用量，尋找合適的藥脂比，使其在包封率、載藥量、穩(wěn)定性方面均適應(yīng)臨床需要。目前，尚無將黃姜水溶性皂苷制成脂質(zhì)體的相關(guān)報(bào)道。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明所解決的技術(shù)問題是提供一種黃姜水溶性皂苷的新劑型，以黃姜水溶性皂苷為活性成分，加入脂類物質(zhì)、磷脂和表面活性劑制備而得的脂質(zhì)體，可提高藥物通過胃腸道的穩(wěn)定性，減少藥物刺激性和毒性，提高藥物的口服生物利用度，并能改善患者用藥的順應(yīng)性。本發(fā)明脂質(zhì)體是含有下述重量配比的組分制備而成的黃姜水溶性皂苷l份、磷脂520份、脂類135份，表面活性劑60100份；可以由薄膜法、逆相蒸發(fā)法、熔融法、注入法、冷凍干燥法、表面活性劑法、復(fù)乳法、鈣融合法、超聲法、溶劑擴(kuò)散法或高壓乳勻法中任一種方法制備而得，制備而得的脂質(zhì)體形態(tài)均一，粒徑為1501800nm，包封率高，滲漏率低，符合藥典對(duì)脂質(zhì)體制劑的各項(xiàng)要求。本發(fā)明脂質(zhì)體既可以作為制劑直接使用，也可以作為其他制劑的原料應(yīng)用，如本發(fā)明脂質(zhì)體可以為吸入劑、口服制劑、氣霧劑或噴霧劑的原料具體實(shí)施方式本發(fā)明黃姜水溶性皂苷脂質(zhì)體，它是含有下述重量配比的組分制備而成的黃姜水溶性皂苷l份、磷脂520份、脂類135份，表面活性劑60100份；磷脂采用卵磷脂、雙肉豆蔻磷脂酰膽堿、雙肉豆蔻磷脂酰甘油、二油酰磷脂酰膽堿、二棕櫚酰磷脂酸、二棕櫚酰磷脂酰膽堿、二棕櫚酰磷脂酰甘油、二硬脂酰磷脂酰膽堿中的至少一種；其中優(yōu)選卵磷脂為大豆卵磷脂、蛋黃卵磷脂、氫化大豆卵磷脂、氫化蛋黃卵磷脂。脂類采用甘油脂、脂肪酸、類固醇、蠟脂中的至少一種。脂類中的甘油脂采用單硬脂酸甘油酯、雙硬脂酸甘油酯、三硬脂酸甘油酯、三肉豆蔻酸甘油酯、單棕櫚酸甘油酯、雙棕櫚酸甘油酯、三棕櫚酸甘油酯、單二十二酸甘油酯、雙二十二酸甘油酯、三月桂酸甘油酯、三油酸甘油酯中的至少一種；脂肪酸采用硬脂酸、棕桐酸、二十二碳烷酸、癸酸中的至少一種;類固醇采用膽固醇；蠟脂采用鯨蠟醇棕櫚酸酯、鯨蠟醇十六酸酯、微晶石蠟中的至少一種表面活性劑采用磷脂類物質(zhì)、膽酸鹽、脫氧膽酸鹽、短鏈醇、泊洛沙姆、聚山梨醇酯-80、山梨糖醇甘油酸酯、聚乙烯醇(PVA)、聚氧乙烯脂肪醇醚、聚氧乙烯脂肪酸酯、聚氧乙烯蓖麻油、聚氧乙烯氫化蓖麻油、聚乙二醇中的至少一種。根據(jù)組分篩選實(shí)驗(yàn)黃姜水溶性皂苷脂質(zhì)體優(yōu)選如下重量配比的組分制備而成的黃姜水溶性皂苷l份、磷脂815份、脂類315份，表面活性劑60100份。本發(fā)明黃姜水溶性皂苷脂質(zhì)體，由薄膜法、逆相蒸發(fā)法、熔融法、注入法、冷凍干燥法、表面活性劑法、復(fù)乳法、鈣融合法、超聲法、溶劑擴(kuò)散法或高壓乳勻法中任一種方法制備而得。優(yōu)選薄膜法、逆相蒸發(fā)法和冷凍干燥法制備。本發(fā)明脂質(zhì)體還可以采用溶劑擴(kuò)散法、超聲法、高壓乳勻法等方法制備為固體脂質(zhì)納米粒即固體脂質(zhì)納米粒(solidlipidnanoparticles，SLN)。本發(fā)明脂質(zhì)體既可以作為制劑直接使用，也可以作為其他制劑的原料應(yīng)用，如本發(fā)明脂質(zhì)體可以為口服制劑、吸入劑、氣霧劑或噴霧劑的原料。通過下列實(shí)施例說明本發(fā)明的具體實(shí)施方式，但本發(fā)明的保護(hù)范圍，不局限于此。實(shí)施例l薄膜法制備黃姜水溶性皂苷脂質(zhì)體取大豆卵磷脂2.5克，膽固醇0.6克用100毫升乙醚溶解于500ml梨形瓶中，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上減壓蒸發(fā)出去乙醚，脂質(zhì)在瓶壁上成一薄膜，加30ml黃姜水溶性皂苷磷酸鹽緩沖液(含黃姜水溶性皂苷O.3g)旋轉(zhuǎn)水化得到黃姜水溶性皂苷脂質(zhì)體。實(shí)施例2逆相蒸發(fā)法制備黃姜水溶性皂苷脂質(zhì)體取大豆卵磷脂3克，膽固醇1.5克用150ml乙醚溶解于500ml梨形瓶中，再加入30ml黃姜水溶性皂苷磷酸鹽緩沖液(含黃姜水溶性皂苷0.4g)，水浴超聲使成為均一的單相體系，減壓蒸發(fā)除去乙醚至凝膠形成，繼續(xù)減壓蒸發(fā)15分鐘，得到黃姜水溶性皂苷脂質(zhì)體。實(shí)施例3冷凍干燥法制備黃姜水溶性皂苷脂質(zhì)體取大豆卵磷脂2.5克，膽固醇0.6克用100毫升乙醚溶解于500ml梨形瓶中，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上減壓蒸發(fā)出去乙醚，脂質(zhì)在瓶壁上成一薄膜，加30ml磷酸鹽緩沖液旋轉(zhuǎn)水化得到空白脂質(zhì)體，加適量海藻糖，混勻，在真空中冷凍干燥，隨即用黃姜水溶性皂苷磷酸鹽緩沖液(含黃姜水溶性皂苷0.3g)振搖進(jìn)行分散，得到黃姜水溶性皂苷脂質(zhì)體。實(shí)施例4注入法制備黃姜水溶性皂苷脂質(zhì)體取大豆卵磷脂3克，膽固醇3克，用120ml乙醚溶解，黃姜水溶性皂苷磷酸鹽緩沖液(含黃姜水溶性皂苷O.35g)保溫在6(TC恒溫振蕩水浴中，用微量注射器將乙醚脂質(zhì)溶液緩緩注入緩沖溶液中，并通氮?dú)馊コ龤堄嘁颐颜魵?，得到黃姜水溶性皂苷脂質(zhì)體。實(shí)施例5溶劑擴(kuò)散法制備黃姜水溶性皂苷固體脂質(zhì)納米粒取單硬脂酸甘油脂400mg，黃姜水溶性皂苷25mg(先溶解在lml蒸餾水中)。置6ml丙酮和18ml乙醇的混合溶劑中，水浴7(TC使溶解，并超聲混勻。在機(jī)械攪拌條件下，將所得的混合物溶液加入到240ml含P/。PVA(w/v)的溶液中，室溫?cái)嚢?min，得SLN分散液。SLN分散液用20000rpm，離心30min，所得沉淀用適量蒸餾水超聲分散。實(shí)施例6超聲法制備黃姜水溶性皂苷固體脂質(zhì)納米粒精密稱取1.5g硬脂酸，1.0g豆磷脂和黃姜水溶性皂苷75mg，在7(TC水浴中溶解于10ml無水乙醇中，形成有機(jī)相溶液，量取5mlTween-80分散于75ml蒸餾水中形成水相。將水相置于恒溫磁力攪拌器上，溫度為8(TC，將有機(jī)相注入水相中，攪拌3h，使成乳白色混懸液，形成初乳。初乳超聲處理300s，攪拌至室溫，用0.45ym微孔濾膜過濾除去超聲探頭釋放的鈦顆粒等雜質(zhì)，得SLN水分散體，4'C密封保存。實(shí)施例7高壓乳勻法制備黃姜水溶性皂苷固體脂質(zhì)納米粒稱取1.5g硬脂酸，1.0g豆磷脂和黃姜水溶性皂苷75mg，在7(TC水浴中溶解于10ml無水乙醇中，形成有機(jī)相溶液，量取45ml甘油分散于75ml蒸餾水中形成水相。將水相置于恒溫磁力攪拌器上，溫度為8(TC，將有機(jī)相注入水相中，攪拌3h，使成乳白色混懸液，形成初乳。在高壓乳勻機(jī)上50MPa乳勻5次，即得SLN，4。C密封保存。實(shí)施例8黃姜水溶性皂苷脂質(zhì)體質(zhì)量檢査1、皂苷脂質(zhì)體的粒徑及其形態(tài)形態(tài)觀察取黃姜水溶性皂苷脂質(zhì)體(按照實(shí)施例17制備)混懸液適量，加磷酸鹽緩沖液稀釋后，然后滴加在覆蓋碳膜的銅網(wǎng)上，經(jīng)磷鎢酸負(fù)染后，在透射電鏡下觀察納米粒形態(tài)并拍攝照片。并取適量經(jīng)稀釋后，置于光學(xué)顯微鏡下觀察其形態(tài)和分布。電鏡下觀察納米粒呈類球形實(shí)體粒子，無聚集粘聯(lián)現(xiàn)象發(fā)生。黃姜水溶性皂苷脂質(zhì)體為單室脂質(zhì)體，圓形或橢圓形，外形圓整光滑，且粒徑均勻。粒徑測(cè)定另取黃姜水溶性皂苷脂質(zhì)體樣品，適量經(jīng)磷酸鹽緩沖液稀釋后，用Zeta電位測(cè)定樣品zeta電位。用粒度測(cè)定儀測(cè)定其靜置l日后和靜置15日粒徑大小變化。平均粒徑為1501746.5nm。表l不同粒徑黃姜水溶性皂苷脂質(zhì)本的制備<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>黃姜水溶性皂苷在以口服途徑給藥過程中，藥物體內(nèi)分布主要面臨肝臟首過效應(yīng)，對(duì)脂質(zhì)體而言，肝臟首過效應(yīng)主要表現(xiàn)在對(duì)于200nm以上的脂質(zhì)體肝臟網(wǎng)狀內(nèi)皮細(xì)胞能過濾去90呢的脂質(zhì)體，導(dǎo)致體內(nèi)其它部位藥物分布濃度低，采取本專利中實(shí)施例中6，7制備成的脂質(zhì)體，由于其粒徑小，可有效避免肝臟的首過效應(yīng)。而當(dāng)藥物主要耙向?yàn)楦闻K時(shí)可采取本專利中l(wèi)-5方法所制備的脂質(zhì)體，利用其脂質(zhì)體粒徑大導(dǎo)致的肝臟首過效應(yīng)達(dá)到被動(dòng)肝臟導(dǎo)向作用，極大提高藥物在肝臟中的分布。2、包封率測(cè)定取黃姜水溶性皂苷脂質(zhì)體混懸液適量，置低溫高速離心機(jī)中，4°C，20000g，30min離心，取上清液20yL，用磷酸鹽緩沖液稀釋至5ml，搖勻。RP—HPLC法測(cè)定游離的水溶性皂苷的峰面積為A游，同法將脂質(zhì)體混懸液稀釋后測(cè)得水溶性皂苷的峰面積為A總，按下式計(jì)算包封沖<:包封率(％)=(1-A游/A總)*100%3、脂質(zhì)體體外泄漏分別考察脂質(zhì)體在(25-0.5)'C和(37+0.5)'C恒溫水浴中持續(xù)振蕩5天的體外釋放狀況。將脂質(zhì)體適量置于透析袋內(nèi)，釋放介質(zhì)為磷酸鹽緩沖液，振蕩頻率為80r/min，持續(xù)振蕩5天，分別于ld、2d、3d、4d、5d取透析液lml，并同時(shí)補(bǔ)充同溫新鮮磷酸鹽緩沖液lml，RP-HPLC測(cè)定透析液中游離的水溶性皂苷。透析完成后，剪破透析袋，收集袋內(nèi)的脂質(zhì)體并用10Q/aritonX-100破壞，作為時(shí)間無窮大時(shí)的藥物泄漏量。計(jì)算其累積釋放量，評(píng)價(jià)脂質(zhì)體的體外穩(wěn)定性。體外釋放實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明脂質(zhì)體在25"C和37"C介質(zhì)中藥物釋放緩慢，37"C5天的體外累積釋放量占時(shí)間無窮大時(shí)脂質(zhì)體釋放量的2.67%，25'C5天的體外累計(jì)釋放量占時(shí)間無窮大時(shí)脂質(zhì)體釋放量的O.71%，脂質(zhì)體在體外的穩(wěn)定性較好。權(quán)利要求1.黃姜水溶性皂苷脂質(zhì)體，其特征在于，它是含有下述重量配比的組分制備而成的黃姜水溶性皂苷1份、磷脂5～20份、脂類1～35份，表面活性劑60～100份；其中，所述脂類為甘油脂、脂肪酸、類固醇、蠟脂中的至少一種；所述表面活性劑為磷脂類物質(zhì)、膽酸鹽、脫氧膽酸鹽、短鏈醇、泊洛沙姆、聚山梨醇酯80、山梨糖醇甘油酸酯、聚乙烯醇、聚氧乙烯脂肪醇醚、聚氧乙烯脂肪酸酯、聚氧乙烯蓖麻油、聚氧乙烯氫化蓖麻油、聚乙二醇中的至少一種。2.根據(jù)權(quán)利要求l所述的黃姜水溶性皂苷脂質(zhì)體，其特征在于，所述磷脂為卵磷脂、雙肉豆蔻磷脂酰膽堿、雙肉豆蔻磷脂酰甘油、二油酰磷脂酰膽堿、二棕櫚酰磷脂酸、二棕櫚酰磷脂酰膽堿、二棕櫚酰磷脂酰甘油、二硬脂酰磷脂酰膽堿中的至少一種。3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的黃姜水溶性皂苷脂質(zhì)體，其特征在于，所述卵磷脂為大豆卵磷脂、蛋黃卵磷脂、氫化大豆卵磷脂、氫化蛋黃卵磷脂中的至少一種。4.根據(jù)權(quán)利要求l所述的黃姜水溶性皂苷脂質(zhì)體，其特征在于，所述脂類中的甘油脂為單硬脂酸甘油酯、雙硬脂酸甘油酯、三硬脂酸甘油酯、三肉豆蔻酸甘油酯、單棕櫚酸甘油酯、雙棕桐酸甘油酯、三棕櫚酸甘油酯、單二十二酸甘油酯、雙二十二酸甘油酯、三月桂酸甘油酯、三油酸甘油酯中的至少一種；脂肪酸為硬脂酸、棕櫚酸、二十二碳烷酸、癸酸中的至少一種；類固醇為膽固醇；蠟脂為鯨蠟醇棕櫚酸酯、鯨蠟醇十六酸酯、微晶石蠟中的至少一種。5.根據(jù)權(quán)利要求l所述的黃姜水溶性皂苷脂質(zhì)體，其特征在于，它是含有下述重量配比的組分制備而成的黃姜水溶性皂苷l份、磷脂815份、脂類315份，表面活性劑60100份。6.根據(jù)權(quán)利要求15任一項(xiàng)所述的黃姜水溶性皂苷脂質(zhì)體，其特征在于，由薄膜法、逆相蒸發(fā)法、熔融法、注入法、冷凍干燥法、表面活性劑法、復(fù)乳法、鈣融合法、超聲法、溶劑擴(kuò)散法或高壓乳勻法中任一種方法制備而得。7.以權(quán)利要求15任一項(xiàng)所述的黃姜水溶性皂苷脂質(zhì)體制備而得的制劑，其特征在于，所述制劑為口服制劑、吸入劑、氣霧劑或噴霧劑。8.權(quán)利要求15任一項(xiàng)所述的黃姜水溶性皂苷脂質(zhì)體的制備方法，它包括如下步驟A、稱取下述重量配比的組分黃姜水溶性皂苷l份、磷脂520份、脂類135份，表面活性劑60100份；B、按照薄膜法、逆相蒸發(fā)法、熔融法、注入法、冷凍干燥法、表面活性劑法、復(fù)乳法、鈣融合法、超聲法、溶劑擴(kuò)散法或高壓乳勻法中任一種方法制備，即得。9.權(quán)利要求15任一項(xiàng)所述的黃姜水溶性皂苷脂質(zhì)體在制備治療心腦血管疾病的藥物中的應(yīng)用。10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的應(yīng)用，其特征在于，所述心腦血管疾病為心肌缺血、胸瘁、高脂血癥、冠心病或心絞痛。全文摘要本發(fā)明涉及黃姜水溶性皂苷脂質(zhì)體及其制備方法和用途，屬于醫(yī)藥領(lǐng)域。它是含有下述重量配比的組分制備而成的黃姜水溶性皂苷1份、磷脂5～20份、脂類1～35份，表面活性劑60～100份?？梢杂杀∧し?、逆相蒸發(fā)法、熔融法、注入法、冷凍干燥法、表面活性劑法、復(fù)乳法、鈣融合法、超聲法、溶劑擴(kuò)散法或高壓乳勻法中等方法制備，本發(fā)明脂質(zhì)體形態(tài)均一，粒徑150～1800nm，包封率高，滲漏率低，符合藥典對(duì)脂質(zhì)體制劑的各項(xiàng)要求。本發(fā)明脂質(zhì)體既可以作為制劑直接使用，也可以作為其他制劑的原料應(yīng)用，如本發(fā)明脂質(zhì)體可以為吸入劑、口服制劑、氣霧劑的原料，應(yīng)用于制備治療心肌缺血、胸痹、高脂血癥、冠心病、心絞痛等疾病的藥物。文檔編號(hào)A61K36/88GK101152545SQ200710201918公開日2008年4月2日申請(qǐng)日期2007年9月29日優(yōu)先權(quán)日2007年9月29日發(fā)明者侯曉敏,航左,媛秦,魏于全,文黃,龔國(guó)華申請(qǐng)人:四川大學(xué)華西醫(yī)院