專利名稱：：猴頭菌轉化銀杏葉提取物的制備方法及用途的制作方法
技術領域：
：本發(fā)明屬于生物轉化
技術領域：
，涉及生物轉化及降血糖作用，具體為猴頭菌轉化銀杏葉的發(fā)酵液及發(fā)酵液提取物的制備方法及用途。技術背景-猴頭菌(報n'c!'臓en'加mw)是著名的藥食兼用菌，其性平味甘，具有助消化、利五臟的功能。研究表明，猴頭菌具有提高機體耐缺氧能力，提高心血輸出量，加速血液循環(huán)，抑制腫瘤細胞生長等作用，尤其對胃粘膜有較好的保護作用。對具有藥效的一些己知其結構的天然產物進行生物轉化和修飾是當前研究的一個熱點。同時對天然產物進行發(fā)酵改造，改變藥物利用度以產生新的治療作用，或增強原有療效，擴大用藥品種，已經成為生物轉化及制藥行業(yè)研究的重點之一。銀杏葉提取物(Gi"&oLextract,EGB)是從銀杏科銀杏屬植物銀杏葉中提取的活性物質，具有改善心腦血管循環(huán)、保護肝臟提高機體免疫功能等作用。猴頭菌的研究主要集中于猴頭菌深層發(fā)酵及菌絲體的研究，銀杏葉提取物的研究集中在提取物成分的制備及制備方法，對于猴頭菌轉化銀杏葉提取物得到其發(fā)酵液用于降血糖藥物的開發(fā)，國內還未有專利報道。
發(fā)明內容本發(fā)明的目的在于提供一種猴頭菌轉化銀杏葉提取物的制備方法及用途，包括培養(yǎng)基的組成及工藝，并經糖尿病大鼠實驗證明其轉化物具有降血糖作用，為糖尿病的治療提供一種新的方法。為了達到上述目的，本發(fā)明的轉化銀杏葉提取物的方法包括以下內容猴頭菌接種到麩皮固體培養(yǎng)基，分別培養(yǎng)3-7天后，轉接入種子培養(yǎng)基。種子培養(yǎng)組成為葡萄糖1040g/L,麩皮15g/L，蛋白胨210g/L，玉米粉520g/L;培養(yǎng)條件為溫度為2035。C，轉速為30-150rpm,通氣量為0.1:12:1，初始pH范圍為4.07.5。培養(yǎng)1-2天后，轉接入發(fā)酵培養(yǎng)基中培養(yǎng)。發(fā)酵培養(yǎng)基葡萄糖10~40g/L，麩皮l5g/L，蛋白胨210g/L，玉米粉520g/L，MgS04'7H2001g/L和KH2PO40.12g/L，l10g/LCaC03，0.25%的EGB。發(fā)酵培養(yǎng)條件為，通氣量為0.1:12:1，轉速為30-150rpm，溫度為2035。C，初始pH范圍為4.07.5。本發(fā)明的方法成本低，工藝簡單，便于管理，節(jié)省人力物力。制得的發(fā)酵液經糖尿病大鼠實驗證明可用于降血糖藥物的制備。具體實施例方式實施例l猴頭菌接種到麩皮固體培養(yǎng)基，分別培養(yǎng)3-7天后，轉接入種子培養(yǎng)基。經種子培養(yǎng)25-28°C，150r/min培養(yǎng)l-2天后，轉接入添加發(fā)酵培養(yǎng)基中培養(yǎng)。培養(yǎng)基組成葡萄糖40g/L，蛋白胨10g/L，麩皮5g/L，玉米粉20g/L，MgS04-7H201g/L，KH2P042g/L，EGB5g/L和10g/LCaCO3。發(fā)酵工藝轉化溫度為30'C，初始pH范圍為7.5。發(fā)酵培養(yǎng)條件為通氣量為2:1，轉速為150rpm，溫度為35'C。制得發(fā)酵液后進行糖尿病大鼠降血糖實驗，正常雄性SD大鼠實驗前適應性喂養(yǎng)5d，選擇IO只大鼠作為正常對照組。其余大鼠禁食24h后，腹腔注射200mg/kg四氧嘧啶造模型，5d后禁食3-5h，測血糖，取血糖值Wlmmol/L的作為實驗性糖尿病模型鼠。給藥方式如表l所示，實驗結果見表2。表1各組動物給藥方式組別制備方法模型陰性對照組0.9%生理鹽水猴頭發(fā)酵液組猴頭菌發(fā)酵離心后取上清液0.1。/oEGB組EGB溶于0.9。/。生理鹽水，配制成1%濃度(w/v)猴頭轉化O.P/。EGB發(fā)酵液組猴頭菌接種于含有1^EGB(w/v)的培養(yǎng)基,發(fā)酵離心后取上清液猴頭發(fā)酵液+0.P/。EGB組EGB溶于猴頭菌發(fā)酵上清液,配制成1^濃度(w/v)陽性對照組(二甲雙胍)二甲雙胍溶解于0.9n/。生理鹽水,配制成4g/L濃度表2不同處理組與對照組實驗前后空腹血糖含量的變化組別鼠數(shù)試驗前試驗后血糖降低絕對值模型陰性對照組1019.34±1.6519.05土0.98"轉化組1019.54±2.31〗.4.59±1.01**4.95±2.94發(fā)酵液十r/oEGB1018.30±1.9115.98±1.73**.2.32.士0.96'發(fā)酵液組1019.28±1.3617.64±1.63*"1.64士0.82"1%EGB組1018.61±1.7216.25±1.83**..2.36±1.23*二甲雙胍組1019.21±1.6011.66±0.91**'*7.55士2.04'實施例2猴頭菌接種經麩皮固體培養(yǎng)基和種子培養(yǎng)基培養(yǎng)同施例1。培養(yǎng)1-2天后，轉接入添加發(fā)酵培養(yǎng)基中培養(yǎng)。發(fā)酵培養(yǎng)基組成葡萄糖10g/L，蛋白胨2g/L，麩皮lg/L，玉米粉5g/L，KH2PO40.1g/L，0.5%的EGB和lg/LCaC03。發(fā)酵培養(yǎng)條件為通氣量為0.1:1，轉速為30ipm，溫度為20。C。制得發(fā)酵液后進行糖尿病大鼠降血糖實驗，正常雄性SD大鼠實驗前適應性喂養(yǎng)5d，選擇10只大鼠作為正常對照組。其余大鼠禁食24h后，腹腔注射200mg/kg四氧嘧啶造模型，5d后禁食3-5h，測血糖，取血糖值Wlmmol/L的作為實驗性糖尿病模型鼠。給藥方式同于實施例l，實驗結果如表2所示。表2不同處理組與對照組實驗前后空腹血糖含量的變化<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>實施例3猴頭菌接種經麩皮固體培養(yǎng)基和種子培養(yǎng)基培養(yǎng)同施例1。種子培養(yǎng)1-2天后，轉接入發(fā)酵培養(yǎng)基中培養(yǎng)。培養(yǎng)基組成葡萄糖25g/L,蛋白胨6g/L,麩皮3g/L，玉米粉12.5g/L，MgS04'7H200.5g/L和KH2P04lg/L，2.5°/。的EGB和5g/LCaC03。發(fā)酵培養(yǎng)條件為通氣量為l:l，轉速為90rpm，溫度為28。C。制得發(fā)酵液后進行糖尿病大鼠降血糖實驗，正常雄性SD大鼠實驗前適應性喂養(yǎng)5d，選擇10只大鼠作為正常對照組。其余大鼠禁食24h后，腹腔注射200mg/kg四氧嘧啶造模型，5d后禁食3-5h，測血糖，取血糖值Wlmmol/L的作為實驗性糖尿病模型鼠。給藥方式同于實施例l，實驗結果如表3所示。表3不同處理組與對照組實驗前后空腹血糖含量的變化<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>以上已詳細描述了本發(fā)明的實施方案，對本領域技術人員來說很顯然可以做很多改進和變化而不會背離本發(fā)明的基本精神。所有這些變化和改進都在本發(fā)明的保護范圍之內。權利要求1、猴頭菌轉化銀杏葉提取物的制備方法，其特征在于以猴頭菌為出發(fā)菌株，進行一級種子培養(yǎng)和發(fā)酵培養(yǎng)，得到具有降低血糖的猴頭菌發(fā)酵液；其中所述的種子培養(yǎng)基葡萄糖10～40g/L，麩皮1～5g/L，蛋白胨2～10g/L，玉米粉5～20g/L，培養(yǎng)條件為溫度為20～35℃，轉速為30-150rpm，通氣量為0.1∶1～2∶1，初始pH范圍為4.0～7.5；發(fā)酵培養(yǎng)基組成為葡萄糖10～40g/L，麩皮1～5g/L，蛋白胨2～10g/L，玉米粉5～20g/L，MgSO4·7H2O0～1g/L和KH2PO40.1～2g/L，1～10g/LCaCO3，0.2～5％的EGB；發(fā)酵培養(yǎng)的條件是溫度為20～35℃，攪拌速率80～200rpm，初始pH范圍為4.0～7.5；通氣量為0.1∶1～2∶1。2、根據(jù)權利要求1所述的制備方法得到的猴頭菌轉化銀杏葉提取物的用途，其特征是用于制備預防或治療糖尿病的藥物或保健品。全文摘要本發(fā)明屬于生物轉化
技術領域：
，為猴頭菌轉化銀杏葉的發(fā)酵液及發(fā)酵液提取物的制備方法及用途。其將猴頭菌接種到麩皮固體培養(yǎng)基，分別培養(yǎng)3-7天后，先轉接入種子培養(yǎng)基，培養(yǎng)1-2天后，再轉接入發(fā)酵培養(yǎng)基中培養(yǎng)。其中種子培養(yǎng)組成為葡萄糖10～40g/L，麩皮1～5g/L，蛋白胨2～10g/L，玉米粉5～20g/L；發(fā)酵培養(yǎng)基葡萄糖10～40g/L，麩皮1～5g/L，蛋白胨2～10g/L，玉米粉5～20g/L，MgSO₄·7H₂O0～1g/L和KH₂PO₄0.1～2g/L，1～10g/LCaCO₃，0.2～5％的EGB。本發(fā)明的方法成本低，工藝簡單，便于管理，節(jié)省人力物力，制得的發(fā)酵液經糖尿病大鼠實驗證明可用于降血糖藥物的制備。文檔編號A61K36/16GK101181314SQ20071019018公開日2008年5月21日申請日期2007年11月20日優(yōu)先權日2007年11月20日發(fā)明者吳其飛,崔鳳杰,張志才,管國強,香肖,錢靜亞,黃達明申請人:江蘇大學