專(zhuān)利名稱(chēng)：紅細(xì)胞生成素改善化療誘導(dǎo)的體內(nèi)毒性的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及M^器官細(xì)胞毒性，例如在服用細(xì)胞毒性劑(如棚中瘤劑)試 驗(yàn)?zāi)戵w內(nèi)的肺部毒性的施。
技術(shù)背景紅細(xì)胞生成素(EPO)是一種在腎臟中產(chǎn)生的糖蛋白，劍賺紅細(xì),生 (紅細(xì)JK生)的主要激素。EPO刺激骨髓中定型紅細(xì)胞祖細(xì)胞的分裂和分化。 正常的血漿紅細(xì)胞生成素7jC平的范圍從0.01至0.03單位/斬，在^f(^貧 JW可働Q到高達(dá)100—1000倍。參見(jiàn)Graber和Krantz,醫(yī)f^述(AraiRevMed) 29: 51 (1978); Eschbach和Adamson,國(guó)際腎Jt^志(Ki—M.) 28: 1 (1985)。 重組的人紅細(xì)胞生成素(rHuEpo或epoetin a )可以Epogen (Amgen公司， Thousand Oaks， CA)和Procrit (Ortho生,術(shù)公司，Raritan, NJ)的形式 商購(gòu)獲得。EPO常常用于增加由于其疾病或由于^ffl化療藥物進(jìn)行治療而貧血 的癌癥患者的血細(xì)胞比容。EPO棚來(lái)治療貧血，包括與癌癥化療、慢性腎衰 竭、惡'鵬中瘤、離和幼^IWS性關(guān)節(jié)炎、血紅蛋白合成障礙、早熟以及HIV 感染的齊多夫定(zidovudine)治療相關(guān)的貧血。肺纖維化是由于化療藥物弓胞的肺部毒性的最普遍彭見(jiàn)。肺纖維化是間質(zhì) 腔中聚合纖維蛋白的病理沉積。其精確的病理生理學(xué)還不能完全理解，但是由 于暴M^外原因子中，在慢性炎癥情況下常?？梢钥吹竭@種癥狀。盡管肺部的 損害與許多拗中瘤劑有關(guān)，博來(lái)霉素、亞硝基脲、絲裂霉素、白消安、P彌胞 苷(ara—C)、白細(xì)胞介素-2和氨甲蝶呤是與肺部毒性最常相關(guān)的棚中瘤劑。
所以，需對(duì)湘U—種新的方法以減少與細(xì)胞毒性劑給藥相關(guān)的器官毒性。 發(fā)明內(nèi)容依據(jù)本發(fā)明的 方案，本發(fā)明是一種M^月師細(xì)胞毒性布K^im體內(nèi)器官毒性的方法，i^^跑括同時(shí)纟好細(xì)胞毒性劑和紅細(xì)lfe^素(EPO;"活 性劑")，EPO的給藥量足以有效減少由于細(xì)胞毒性劑弓胞的器官毒性。 一般 來(lái)說(shuō)，細(xì)胞毒性劑的給藥敏育噠到其治療艦，例如^中瘤量的拋中瘤劑。依據(jù)本發(fā)明的 方案，采用本發(fā)明的方法進(jìn)行治療或保護(hù)的器官包括肝 臟、腦、腎臟和肺，特別^ 。依據(jù)本發(fā)明的其它的實(shí)施方案，棚中瘤劑，i^^的肺產(chǎn)生細(xì)胞毒性 的試劑。依賺定的實(shí)施方案，棚中瘤劑敏生素、亞硝基脲、^S磺離、胞苷 類(lèi)似物、長(zhǎng)春花生物堿、表鬼臼毒素、白細(xì)胞介素、葉^^似物或它們的組合。臓依據(jù)本發(fā)明的其它魏方案，本發(fā)明包括娜口上臓的活性劑制備 藥物以實(shí)施如J^M的方法。在本文的附圖和如下所述的詳述中更加詳細(xì)iW釋本發(fā)明的前述內(nèi)容和其 它實(shí)施方案和方面。


圖1用圖說(shuō)明治療兩個(gè)翻之后EPO和博來(lái)霉素對(duì)肺功能的影響；和 圖2用圖說(shuō)明治療四個(gè)翻之后EPO和博來(lái)霉素對(duì)肺功能的影響。
具體實(shí)施方式
釆用本發(fā)明方法治療的^ 包括人和動(dòng)物(例如狗、貓、牛、馬)試 且雌哺乳動(dòng)物^mo如本文所采用的，至i!^種化合物與至少一種第二化合物的同時(shí)給藥意味 著兩種化合物的給藥時(shí)間足，近，以便一種化^tl的存在改變另一種的生物 作用。至少兩種化合物可以同時(shí)或依次給藥。依次給藥使得化糊的給藥作為 一種在引入細(xì)胞毒性劑之前的預(yù)防性治療，有效減少了化療誘導(dǎo)的毒性，作為 治療以^^由于事先鄉(xiāng)好至^>~種細(xì)胞毒性劑弓胞的化療誘導(dǎo)的毒性。細(xì)胞毒性劑 一般來(lái)說(shuō)，可與本發(fā)明結(jié)合使用的細(xì)胞毒性劑JitJtl中瘤劑。 如本文所采用的，術(shù)語(yǔ)棚中瘤劑或化療劑是是指優(yōu)先殺^l中瘤細(xì)胞或使ffl3I增 殖細(xì)胞的細(xì)胞周期中斷的試劑，治療上用來(lái)dlh或斷RI中瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)。如本
文所釆用的，化療包括單一JOT—種化療劑，化療劑的^S行治療。在需要治療的試驗(yàn)對(duì)象中，化療可與外科治療或放療或與其它抗腫瘤治療方法聯(lián)合。拋嫩O^S那些本領(lǐng)^^:人員么A卩的物質(zhì)。作為范例,嫩i鵬， 但不限于，長(zhǎng)春花生tffii、表鬼臼毒素、蒽環(huán)抗生素(anthracycline antibiotic)、 放線菌素D、普卡霉素、卩I^霉素、短桿菌肽D、鄉(xiāng)醇(T欲o鵬，Bristol Myets Squibb)、 ^MllM、細(xì)胞松弛素B、 fi^淀、，素、安叮啶(或"mAMSA") 和亞硝基脲。長(zhǎng)春花生物^tt Goodman和Gilman的治療學(xué)的藥理學(xué)基礎(chǔ)， 1227—1280 (第7版，1985)(下文為"Goodman和Gilman")中有描述。長(zhǎng) 春花生物堿的范例包括，但不限于，長(zhǎng)春新堿、長(zhǎng)# 0長(zhǎng)春地辛。表鬼臼毒 素類(lèi)在上文Goodman和Gilman， 1280—1281上文。表鬼臼毒素的范例包括，但 不限于，依托泊式、依托泊式正醌和替尼泊式。H^抗生素類(lèi)在上文Goodman 和Gilman， 1283—1285中有描述。蒽環(huán)抗生素的范例包括，但不限于，柔紅 霉素、阿霉素、米托蒽醌和比生群。鵬菌素D，也稱(chēng)為更生菌素在上文Goodman 和Gilman, 1281 — 1283中有描述。普卡霉素，也稱(chēng)為光神霉素，在上文Goodman 和Gilman, 1287—1288中有皿。亞石tt^括，但不限于，環(huán)BM硝脲[CCNU] (CeeNU , Bristol Myers Squibb),憤芥[BCNU] (BiCNU , Bristol Myers Squibb),司莫司汀[甲基一CCNU]和 霉素。其它的化療劑包括，但不限于，鵬(Platino膨，Bristol Myers Squibb); 卡鉑(Paraplatin , Bristol Myers Squibb):絲裂霉素(Mutamycin , Bristol Myers Squibb);六甲蜜胺(Hexalen , U.S.Bioscience, Inc.);環(huán)磷酰胺(Cytoxan , Bristol Myers Squibb);白消安(MYLERAN , Gl欲oSmithKline); P^J^胞苷， 如ara—C，白細(xì)胞介素一2和氨甲蝶呤。正如本領(lǐng),術(shù)人員所知，化療藥物的給藥方法^所使用的具體的化療 齊靦^^變化。IHg所J鯛的化^^，化^W的給藥例如可ii^湖(靜脈內(nèi)、 肌肉內(nèi)、腹膜內(nèi)、皮下、鞘內(nèi)、腫瘤內(nèi)、胸膜內(nèi))或口服。紅細(xì)胞生成素如本文所釆用的，人紅細(xì)胞M素(EPO)是指天然存在 的人紅細(xì)胞生成素糖蛋白以及重組的人紅細(xì)胞生成素(rHu^x)或epoetin a ， 可以Epogen⑧(Amgen公司，Thousand Oaks， CA)和Procritd) (Ortho生^/^ 術(shù)公司，Baritan, NJ)的形式商購(gòu)獲得)。EPO的肽類(lèi)似物也可用于本發(fā)明的 方法中。如本文所采用的，肽類(lèi)似物為雖然不具有與EPO相同的錢(qián),列， 但具有與，似的三維結(jié)構(gòu)的那，合物。在與受體相互作用的蛋白分子中，相互作用發(fā)生在穩(wěn)定的三維肝的表麗到達(dá)位點(diǎn)。M:以適宜構(gòu)像排列關(guān)鍵 的結(jié)合位點(diǎn)殘基，可根據(jù)已有的技術(shù)設(shè)計(jì)和合^i擬epo結(jié)合區(qū)必要的表面特征的肽。具有與EPO結(jié)合表面的分子拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)基本相同的表面區(qū)域的分子 將會(huì)辦模擬EPO與EPO受體的相互作用。確定I太三維結(jié)構(gòu)以及，似物的方 法已被A^f知，有時(shí)被稱(chēng)為'合理的藥物設(shè)計(jì)技術(shù)'。參見(jiàn)例如Geysen的美國(guó) 專(zhuān)利號(hào)4， 833, 092; Nestor的美國(guó)專(zhuān)利號(hào)4， 859, 765; Pantoliano的美國(guó)專(zhuān) 利號(hào)4, 853, 871; Blalock的美國(guó)專(zhuān)利號(hào)4， 863， 857 (申請(qǐng)人特別說(shuō)明本文 所弓l用的所有美國(guó)專(zhuān)利公開(kāi)的內(nèi)容被全文弓I A^發(fā)明作為參考)。在本發(fā)明的方法中，模擬紅細(xì)胞生成素生物活性的肽(EPO受體肽配體) 可替代EPO。這些肽的序列可j樣錄EPO蛋白序列的片段，該片段能結(jié)合 和活化EPO受體。財(cái)卜，具有與EPO序列不相似的肽可用于本發(fā)明的方法， 這些欣模擬EPO的生物活性。Wrighton ^it了結(jié)合并活化M胞表面上的 紅細(xì)胞生成素受體的小分子肽的鑒定和表征，雖然這些肽序列不相似于EPO 的一 列(Wrighton等，科學(xué)273 : 458 (1996年7月26日))。這^ffit激動(dòng) 劑用具有已鑒定的最小共有序列的14一氨基酸二硫鍵鍵合環(huán)肽表示。Livnah 等，科學(xué)273: 464 (1996年7月26日)描述了一種這樣的S太模擬物與,胞 生成素受體的復(fù)合物的結(jié)構(gòu)。根據(jù)本發(fā)明方法所使用的EPO可M31本領(lǐng)^^:人員顯而易見(jiàn)的樹(shù)可適 宜的方式給藥。EPO可全身(例如靜脈內(nèi))鵬部(例如激到中瘤、緊圍繞 腫瘤的組織中^lt至含有腫瘤的解剖學(xué)區(qū)室中)給藥。其中全身性Mm化 療劑時(shí)，例如全身m^好內(nèi)皮做量的EPO時(shí)，可艦靜脈鄉(xiāng)。與化療劑結(jié)合^ffl的EPO的齊糧和給藥時(shí)間^lt^k取決于M望蹈lJ 的效果。本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)根據(jù)EPO的給藥時(shí)間(在化療劑給藥的同時(shí)、之前或 之后)以及EPO的劑量，EPO能微內(nèi)皮免受化療劑的生長(zhǎng)抑制的影響，或 能增強(qiáng)4柳化療劑所見(jiàn)到的內(nèi)皮生長(zhǎng)抑制。如何艦常規(guī)實(shí)驗(yàn)確定與特定化療 劑結(jié)合以獲得所需效果的EPO的給藥劑量和給藥時(shí)間對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員來(lái) 講皿而易見(jiàn)的。單次或者多次給藥的EPO的最大量還未確定。在三辛四周中給與髙達(dá)1， 500 單位/kg的齊懂而沒(méi)有由于EPO本身弓胞的毒性作用。參見(jiàn)Eschbach等，慢 ',毒癥的預(yù)防(Prevention of Chronic Uremia) (Friedman等旭)，F(xiàn)ield和 Wood Inc., Philadelphia, pp.148—155 (1989)。適宜的劑量可為約1，10或100 單位/kg (U/kg)到約200, 1000或2000U/kg。藥辦擠U依據(jù)已矢nfe術(shù)，±^活性化^/可以配制到藥 ;體中而給藥。參見(jiàn)例如Remington^ The Science And Practice of Pharmacy (第9版，1995)。在依據(jù)本發(fā)明的藥物制劑的制備中，活性化^t/ (包括其生ah可接受的鹽)一 般與一種可接受的載,混合。當(dāng)然，載體必須是在一定意義上能與制劑中的 其它成分相容，^a^i^im無(wú)害。載體可以是固^^喊兩^tpw,且雌與化^tf己制鵬位劑量的帝躋!j，例如片劑，其可以含有0.01或0.5錢(qián)％到 95重量％或99龍％的活性化糊。在本發(fā)明的制劑中可以摻入一種鞭多種活性化合物，其可以利用《琉一種已知的主要由混合各成分(任選包括一種或更多種輔助成分)纟賊的制藥技術(shù)來(lái)制備。本發(fā)明的制劑包括那頓用于口服、艦、局部、頰(例如舌下)、陰道、 腸胃外(例如皮下，肌肉內(nèi)，皮內(nèi)或靜脈內(nèi))、局部(即皮膚和粘膜表面，包括氣道表面)和經(jīng)皮給藥，盡管在特定情況下;SiS宜的途徑?jīng)Q定于需要治療狀 況的IM和嚴(yán)重性以及所用的特定活性化合物的性質(zhì)。適用于口鵬合藥的制劑可以離散的單位形式存在，例如膠囊、扁囊劑、錠 齊蜮片劑，每種含有預(yù)定量的活性化，；作為粉^^粒；作為含7jC^E水 液體中的溶液^l懸浮液；或作為水包油或油包水乳狀液。這些制劑可采用任何 適當(dāng)?shù)闹扑幏椒ㄖ苽?，該方魏縱到活性化合物和適當(dāng)載體(其可以含有一 種或更多種如上戶(hù)腿的輔助成分)締合的步驟。 一皿說(shuō)，本發(fā)明的制劑可以 ，均勻和緊密 活性化^1與液，細(xì)分的固^^#^兩者混賴(lài)恪，然 后，如果需要，使所得混合物成型。例如，片劑可il3i壓縮或模塑含有活性化 合物且任選具有一種或更多種輔助成分的粉^^粒來(lái)制備。壓制片劑在適當(dāng) 的機(jī)器中艦壓縮流動(dòng)形式的化合物例如任選與粘合劑、潤(rùn)滑劑、惰性繊液 和/或表面活性齊lJ/分散劑混合的粉末或顆粒制備。模制片在適當(dāng)?shù)臋C(jī)器中通過(guò)模,惰性液懶占合齊鵬濕的粉末化合物制備。適用于腸胃外給藥的本發(fā)明制劑包括活性化合物的無(wú)菌的含7jOR^7jC注射溶液，這種制劑皿與預(yù)定，者的血等滲。這種制劑可以包括抗氧化劑、緩
沖液、抑菌劑和使得制劑與預(yù)定接受者的血等滲的溶質(zhì)。含7K或^7JC無(wú)菌懸浮液可包,浮劑和增稠劑。制劑可存在于單位劑量或多劑量容器中，例如密封 的安瓿和管形瓶，可以?xún)?chǔ)存在冷凍f嫩凍千的)剝牛下，其僅僅需要在j柳之 前立即添加無(wú)菌的液體載體(例如含鹽的或注射用水)。臨時(shí)的注射溶液和懸 浮液可由先前描述的各種無(wú)菌粉末、顆粒和片劑制備。例如，本發(fā)明的一個(gè)方 面是皿一種在密封容器中以單位劑量形式存在的含有活性化^l或其鹽的可 alt的、穩(wěn)定的無(wú)菌組合物。,以?xún)龈僧a(chǎn)物形式存在的化^t/或鹽，其可與 適宜的藥效可接受的載體重配以形皿于&^到 ^中的液體組合物。單位劑型^^^^勺io毫憩喲io克的化^ &。當(dāng)化^KSk^s^t于水 時(shí)，可采用足量病理生理學(xué)上可接受的乳化劑以乳化含水載體中的化合物或 鹽。這種有用的乳化劑中的其中一種是磷脂醐旦堿。除了活性劑鄉(xiāng)鹽之外，藥物組^ti可以含有其它添加抓例如pH調(diào)節(jié) 劑。特別是，有用的pH調(diào)節(jié)劑包括，但不限于，酸(例如鹽酸)，鵬緩沖溶 液(例如乳,、醋,、磷,、擰檬,、硼,或葡萄糖,)。而且， 組合物可以含貧^^物防腐劑。有用的1t^物防腐齊抱括，但不限于，灘逮苯 甲酸甲酯、對(duì)羥基苯甲酸丙酯和苯甲醇。當(dāng)制劑放置在設(shè)計(jì)用于多次劑量的管 形瓶中時(shí)，一般4頓微生物防腐劑。當(dāng)然，正如所指出的，可以i頓本領(lǐng)域已 知的技術(shù)凍干本發(fā)明的藥物組^J。用下面非P艮定性的實(shí)施例詳細(xì)說(shuō)明本發(fā)明。實(shí)施例i治療方案用各種劑量的單獨(dú)的EPO以及與博來(lái)霉素的^來(lái)治療年齡在7和12個(gè) 星期之間，重約20克的C57B16雌鼠。用安慰劑、^^f蟲(chóng)的EPO(540 ug/鼠，i. p.)、與蟲(chóng)的博來(lái)霉素(0,25-0.75 u g/鼠，i,p,)、或EPO和博來(lái)霉素的^^h 星期醫(yī)治動(dòng)物兩次。在2周，4周和6周對(duì)動(dòng) 行分等級(jí)(048毫效新) 的甲基膽繊l微。 時(shí)，4頓全身^f只描記鄉(xiāng)uxco， Niskayuna^ NY)測(cè)定肺 功能。這是一種非介入性的方法，其利用一個(gè)配有兩個(gè)呼吸速率計(jì) (pneumotachs)和一個(gè)與計(jì)OTl^接的傳感器的透明塑料動(dòng)物室。iM分析儀 器評(píng)價(jià)肺部的阻抗和動(dòng)力順應(yīng)性，該分析儀翻懂在吸氣和Bfn過(guò)程中，在相 等的肺容積下的、 ^卩壓力微("等容量法")。動(dòng)物運(yùn)動(dòng)和非典型性呼吸(例
如，"用力吸氣(sniffing)")產(chǎn)生的偽M過(guò)鵬可調(diào)整為適合單個(gè)動(dòng)物的潮 氣量和吸氣時(shí)間的參數(shù)的計(jì)靴的分析而忽略。研究全身^f只描記法后發(fā)現(xiàn)它 是小鼠S市部功能的有鵬標(biāo)。(Hamelmann等，Am. J.Respir.Crit. CareMed.156) 3 Ptl) 776-75(1997)。實(shí)施例2試驗(yàn)結(jié)果已發(fā)現(xiàn)博來(lái)霉素會(huì)斷gl市功能，這一點(diǎn)艦增加的間歇(Tenh"，氣道阻力 的替代物)改變可以反映出來(lái)。用博來(lái)霉素治療兩周，每周兩次，并進(jìn)行分等級(jí) (0—48毫3^iO的甲基膽繊臓的糊與對(duì)照^I相t傲(參見(jiàn)圖l), Penh 值惡化了2,6倍。無(wú)博來(lái)霉素的EPO給藥促働市功倉(cāng)鵬,加。但是，纟Si博 來(lái)霉素和紅細(xì)胞生成素的聯(lián)合治療的小鼠比單多OT博來(lái)霉素治療的小鼠的肺功 能好60%。當(dāng)治療4周賺査肺部功能，可以觀察到Penh值有相似歡(參 見(jiàn)圖2)。前面的內(nèi)容是對(duì)本發(fā)明的說(shuō)明，不應(yīng)認(rèn)為m它的限定。本發(fā)明用下述權(quán) 禾腰求來(lái)限定，權(quán)利要求的等同內(nèi)容應(yīng)被包括在其中。
權(quán)利要求
1.紅細(xì)胞生成素在制備用于與對(duì)試驗(yàn)對(duì)象的肺產(chǎn)生細(xì)胞毒性的抗腫瘤劑或化療劑聯(lián)合給藥而減少服用所述抗腫瘤劑或化療劑的試驗(yàn)對(duì)象體內(nèi)化療誘導(dǎo)的肺毒性的藥物中的用途。
2. 依據(jù)權(quán)利要求1的用途，其中戶(hù); ^中瘤劑是博來(lái)霉素。
3. 依據(jù)權(quán)利要求l的用途，其中所述藥物含約1U/kg到約2000 U/kg紅細(xì)胞 素。
4. 依據(jù)權(quán)利要求1的用途，其中戶(hù)腿藥物含約1U/kg到約200 U/kg紅細(xì)胞生成素。
5. 依據(jù)權(quán)利要求l的用途，其中戶(hù)腿藥物制備為口服、飾、局部、頰、 陰道、腸胃外、局部離5皮制劑及其組合。
全文摘要
本發(fā)明涉及紅細(xì)胞生成素改善化療誘導(dǎo)的體內(nèi)毒性。本發(fā)明描述了一種減少服用細(xì)胞毒性劑的試驗(yàn)對(duì)象的器官毒性的方法，該方法包括同時(shí)給予細(xì)胞毒性劑紅細(xì)胞生成素(EPO)，給予的EPO量能有效減少由于細(xì)胞毒性劑引起的肺部毒性。
文檔編號(hào)A61K38/22GK101152565SQ20071015338
公開(kāi)日2008年4月2日 申請(qǐng)日期2002年4月8日 優(yōu)先權(quán)日2001年4月9日
發(fā)明者G·西古納斯, P·梅爾霍普 申請(qǐng)人:東卡羅萊娜大學(xué)