專利名稱：：含有輔助t細(xì)胞和b細(xì)胞表位的新的免疫原性脂肽的制作方法含有輔助T細(xì)胞和B細(xì)胞表位的新的免疫原性脂肽本申請(qǐng)是2003年8月12日提交的，發(fā)明名稱為"含有輔助T細(xì)胞和B細(xì)胞表位的新的免疫原性脂肽"的中國(guó)專利申請(qǐng)03824149.8的分案申請(qǐng)。發(fā)明領(lǐng)域本發(fā)明主要涉及免疫學(xué)領(lǐng)域，尤其是用于產(chǎn)生抗體和/或?qū)Χ嚯拿庖咴募?xì)胞應(yīng)答的試劑，及用所述試劑來(lái)加強(qiáng)受試者的免疫應(yīng)答或接種受試者的方法。更為特別地，本發(fā)明涉及具有被加強(qiáng)的免疫原性活性的脂肽，配劑和含有所述脂肽的疫苗組合物，例如與藥學(xué)上可接受的載體或賦形劑一起；還涉及制備和使用本發(fā)明的這種配方和疫苗組合物的方法。發(fā)明背景1、概述本說(shuō)明書(shū)包含基于Patentln3.1版本的氨基酸序列信息，在摘要后列于此。都是。每一條序列在序列表中都可以通過(guò)數(shù)字指示<210>之后的序列識(shí)別符來(lái)進(jìn)行識(shí)別(例如<210>1，<210>2等)。每條序列的長(zhǎng)度及其來(lái)源有機(jī)體的信息分別通過(guò)數(shù)字指示<211>和<213>所提供的信息來(lái)進(jìn)行標(biāo)識(shí)。本說(shuō)明書(shū)所涉及的序列是通過(guò)序列識(shí)別符之后的術(shù)語(yǔ)"SEQIDNO:"進(jìn)行定義的(例如SEQIDNO"是指被指定為<400>1的序列)。本文中所用術(shù)語(yǔ)"來(lái)源于"一詞，用來(lái)說(shuō)明某種指定的化合物可以從某種具體的原料獲得，盡管不必直接來(lái)自于該原料。在本說(shuō)明書(shū)中，除非特別說(shuō)明，"包含"一詞都被理解為意指包含有某一規(guī)定的步驟或成分或化合物或者一組規(guī)定的步驟或成分或化合物，以及任何其他步驟或成分或化合物或者一組成分或化合物。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)意識(shí)到可容許本發(fā)明在明確的描述以外所進(jìn)行的變化和修改，并且這些變化和修改也應(yīng)該被包括在本發(fā)明之內(nèi)。本發(fā)明也包括在說(shuō)明書(shū)中涉及和指出的所有步驟、特征、成分和化合物中的單一或者是全部形式，以及任意兩種或更多步驟或特征的任意和所有組成形式。本發(fā)明并不限于在此所描述的具體實(shí)例，在此所描述的具有相同功能的產(chǎn)物、成分及方法也無(wú)疑應(yīng)屬于本發(fā)明的范圍之內(nèi)。本申請(qǐng)中所引用的全部參考文獻(xiàn)都通過(guò)引用被詳細(xì)地引入本發(fā)明。除非特別指明，本發(fā)明是應(yīng)用分子生物學(xué)，微生物學(xué)，病毒學(xué)，重組DNA技術(shù)，液相多肽合成，固相多肽合成和免疫學(xué)的常規(guī)技術(shù)，在沒(méi)有過(guò)多的實(shí)驗(yàn)的情況下進(jìn)行的。這些方法被記述在下文中，通過(guò)下述參考文獻(xiàn)被引入本發(fā)明1.Sambrook，F(xiàn)ritsch&Maniatis，MolecularCloning:ALaboratoryManual,ColdSpringHarborLaboratories,NewYork,SecondEdition(1989),wholeofVolsI,II，andIII;2.DNACloning:APracticalApproach,Vols.IandII(D.N.Glover,ed.，1985)，IRLPress,Oxford,wholeoftext;3.OligonucleotideSynthesis:APracticalApproach(M.J.Gait,ed.，1984)IRLPress,Oxford,wholeoftext,andparticularlythepapersthereinbyGait，ppl-22;Atkinsonetal.,pp35-81;Sproatetal.，pp83-115;andWuetal"pp135-151;4.NucleicAcidHybridization:APracticalApproach(B.D.Hames&S.J.Higgins，eds.，1985)IRLPress,Oxford,wholeoftext;5.AnimalCellCulture:PracticalApproach,ThirdEdition(JohnR.W.Masters,ed.，2000),ISBN0199637970,wholeoftext;6.ImmobilizedCellsandEnzymes:APracticalApproach(1986)IRLPress,Oxford,wholeoftext;7.Perbal,B.，APracticalGuidetoMolecularCloning(1984);8.MethodsInEnzymology(S.ColowickandN.Kaplan,eds.，AcademicPress,Inc.),wholeofseries;9.J.F.RamalhoOrtig3o,"TheChemistryofPeptideSynthesis"In:KnowledgedatabaseofAccesstoVirtualLaboratorywebsite(Interactiva，Germany);10.Sakakibara，D.,Teichman，J.，Lien,E.LandFenichel，R丄.(1976).Biochem.Biophys.Res.Co謹(jǐn)un.73336-34211.Merrifield,R.B.(1963).J.Am.Chem.Soc.M,2149-2154.12.Barany,G.andMemfield，R.B.(1979)inThePeptides(Gross,E.andMeienhofer，J.eds.)，vol.2,pp.1-284,AcademicPress,NewYork.13.Wiinsch，E.,ed.(1974)SynthesevonPeptideninHouben-WeylsMethodenderOrganischenChemie(Miiler,E.，ed.)，vol.15,4thedn.，Parts1and2,Thieme，Stuttgart.14.Bodanszky，M.(1984)PrinciplesofPeptideSynthesis,Springer-Verlag，Heidelberg.15.Bodanszky,M.&Bodanszky,A.(1984)ThePracticeofPeptideSynthesis,Springer-Verlag,Heidelberg.16.Bodanszky,M.(1985)Int.J.PeptideProteinRes.25,449-474.17.HandbookofExperimentalImmunology,Vols.I-IV(D.M.WeirandC.C.Blackwell,eds.，1986，BlackwellScientificPublications).相關(guān)技術(shù)描述免疫療法或接種疫苗對(duì)預(yù)防或治療廣泛的機(jī)能紊亂具有相當(dāng)?shù)奈?，比如某些傳染性疾病或癌癥。然而，這種治療方式的應(yīng)用和成功卻部分受制于靶抗原的低免疫原性。許多多肽，糖肽，脂類，脂肽和碳水化合物等是低免疫原性的。幾種技術(shù)被用于增強(qiáng)受試者機(jī)體對(duì)多肽免疫原的免疫應(yīng)答。眾所周知，可以采用多肽免疫原的外源佐劑配方(即在使用之前與免疫原相混合)，例如弗氏完全佐劑(CFA)，來(lái)增強(qiáng)機(jī)體對(duì)多肽免疫原的免疫應(yīng)答。然而目前所能獲得的多數(shù)佐劑對(duì)于用于人類而言毒性過(guò)強(qiáng)，或者完全無(wú)效。而且，這一類佐劑需要在施用前立即與多肽免疫原進(jìn)行預(yù)混合，這樣的配方通常具有較低的溶解性或不溶。脂肽中所含有的脂質(zhì)部分可以作為佐劑與多肽免疫原進(jìn)行共價(jià)結(jié)合，即可在缺乏外源佐劑的時(shí)候增強(qiáng)弱免疫原性多肽的免疫原性[Jungetal.,AngewChem,IntEdEngl10,872，(1985);Marti,etal"JImmunol149,3416,(1992);Toyokunietal"JAmChemSoc116，395，(1994);Deprez，etal"JMedChem38，459,(1995);andSauzetetal"Vaccine13,1339，(1995);Be腦ohamedetal"Eur.J.Immunol.27，1242:(1997);Wiesmulleretal.,Vaccine7，29,(1989);Nardinetal.，Vaccine16,590，(1998);Be腦ohamed，etal.Vaccine18,2843，(2000);andObert:etal.，Vaccine16,161,(1998)]。合適的脂肽不會(huì)產(chǎn)生與佐劑配方相關(guān)的有害副作用，并且可以觀察到針對(duì)于該脂肽的抗體和細(xì)胞應(yīng)答。已知幾種不同的脂肪酸可用于脂質(zhì)部分中。代表性的脂肪酸包括，但不限于棕櫚酰，肉豆蔻酰，硬脂酰和癸酰，或者更普遍地任何C2到C3o的飽和，單不飽和或多不飽和脂酰基都被認(rèn)為是有用的。脂氨基酸N-棕櫚酰-S-[2,3二(棕櫚酰氧基)丙基]半胱氨酸，又可被稱為Pam3Cys或Pam3Cys-OH(Wiesmulleretal.,Z.Physiol.Chem.364(1983)，p593)，是橫跨革蘭氏陰性菌內(nèi)外膜的Bmun氏脂蛋白的N末端部分的一種合成形式。Pam3Cys的結(jié)構(gòu)見(jiàn)于分子式(I):<formula>formulaseeoriginaldocumentpage10</formula>Metzger等人在其獲得的美國(guó)專利No.5，700，910(December23,1997)中對(duì)數(shù)種脂肽制備過(guò)程中用做中間體的N-?；?S-(2-羥烷基)半胱氨酸進(jìn)行了描述，該脂肽可作為合成佐劑，B淋巴細(xì)胞刺激物，巨噬細(xì)胞剌激物或者合成疫苗。Metzger等人也教導(dǎo)了在合成Pam3Cys-OH(Wiesmulleretal.，Z.Physiol.Chem.364，p593，1983)的過(guò)程中，該化合物以及在其N末端含有這種脂氨基酸或其類似物的脂肽作為中間體的應(yīng)用。Pam3Cys已證明可以刺激流感病毒感染細(xì)胞的病毒特異性細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞(CTL)應(yīng)答(Deresetal.，Nature342,561,1989)，并可以在與適合的表位結(jié)合時(shí)，產(chǎn)生針對(duì)于口蹄疫疾病的保護(hù)性抗體(Wiesmulleretal.，Vaccine7，29,1989;UnitedStatesPatentNo.6,024,964toJungetal"February15，2000)。最近，Pam3Cys的類似物Pam2Cys(又名雙棕櫚酰-S-丙三基-半胱氨酸或S-[2,3-二(棕櫚酰氧基)丙基]半胱氨酸)已被人工合成(Metzger,J.W.，A.GlBeck-Sickinger，M.Loleit，M.Eckert,W.G.Bessler，andGJung.1995.JPeptSci1:184.)，并被證明與從支原體中提取的一種巨噬細(xì)胞激活脂肽MALP-2的脂質(zhì)部分相對(duì)應(yīng)(Sacht,G.，A.Marten,U.Deiters，R.Sussmuth，G.Jung，E.Wingender,andP.F,Muhlradt.1998.EurJImmunol28:4207:Muhlradt,P.F.,M.Kiess,H.Meyer,R.Sussmuth,andG.Jung.1998.InfectImmun66:4804:Muhlradt,RF"M.Kiess，H.Meyer,R.Sussmuth,andG.Jung.1997.JExpMed185:1951)。Pam2Cys的結(jié)構(gòu)見(jiàn)于分子式(II):H——NH-CH——COOHCH2ISICH2IH3C—(CH2)14-CO-O-CHH3C—(CH2)14-CO——O——CH2根據(jù)報(bào)道，對(duì)脾細(xì)胞和巨噬細(xì)胞而言,Pam2Cys是一種比Pam3Cys更加有效的刺激物(Metzgeretal.,JP印t.Sci1,184，1995;Muhlradtetal"JExpMed185，1951，1997;andMuhlradtetal.，InfectImmun66，4804,1998)。產(chǎn)生針對(duì)某一特定抗原的抗體反應(yīng)需要產(chǎn)生強(qiáng)烈的輔助T細(xì)胞應(yīng)答。因此，理想狀態(tài)下是將一種抗原與至少一種輔助T細(xì)胞表位一起進(jìn)行給藥(Vitielloetal.，J.Clin.Invest.95，341-349，1995;Livingstonetal.,J.Immunol.159,1383-1392,1997)。然而，由于輔助T細(xì)胞應(yīng)答是由識(shí)別抗原呈遞細(xì)胞(APCs)表面上MHCII類分子多肽抗原片斷的CD4+T細(xì)胞所提供的，許多處理后的多肽抗原只表現(xiàn)為MHC單倍型的一種或少數(shù)幾種等位基因型。這就使得針對(duì)特定抗原多肽的輔助T細(xì)胞應(yīng)答處于個(gè)體遺傳的嚴(yán)格控制下。為避免特定群體在對(duì)某種抗原的免疫應(yīng)答中發(fā)生大量遺傳變異，該抗原是和具有一組輔助T細(xì)胞表位的一種大分子蛋白聯(lián)合施用的?；蛘?，也可以將包含混雜的(promiscuous)或允許的(permissive)輔助T細(xì)胞表位的多肽與抗原一起聯(lián)合施用。這些包含混雜的或允許的輔助T細(xì)胞表位的多肽可以呈現(xiàn)為許多MHCII類單倍體型，因此可在遠(yuǎn)交人群的大多數(shù)成員中誘導(dǎo)產(chǎn)生強(qiáng)烈的CD4+T細(xì)胞反應(yīng)。這些混雜的或允許的輔助T細(xì)胞表位的例子有破傷風(fēng)毒素多肽、惡性瘧原蟲(chóng)pfg27、乳酸脫氫酶和HlVgpl20(Contreasetal.，Infect.Immun,66，3579-3590,1998;Gaudeboutetal.，J.A丄D.S.HumanRetrovirol14,91-101,1997;Kaumayaetal.，J.Mol.Recog.6,81-94，1993;andFernandGoodJ.Immunol.148,907-913,1992)。Ghosh等人(Ghoshetal.，Immunol104,58-66,2001)和國(guó)際專利申請(qǐng)(No.PCT/AUOO/00070(WO00/46390))也描述了來(lái)自犬瘟熱病毒(CDV-F)融合蛋白的輔助T細(xì)胞表位。某些混雜的輔助T細(xì)胞表位誘導(dǎo)針對(duì)特定抗原的強(qiáng)烈B細(xì)胞應(yīng)答，并能回避某些單倍體限制性免疫應(yīng)答(Kaumayaetal.,J.Mol.Recog.6，81-94，1993)。通常，一種疫苗制劑由含有輔助T細(xì)胞表位和抗原表位的多肽混合物組成，但是也己知可施用含有輔助T細(xì)胞表位和抗原表位兩者的單—多肽。(GhoshandJackson,Int.Immunol.11，1103,1999)。發(fā)明概述在準(zhǔn)備本發(fā)明的工作中，發(fā)明人力圖制備出這樣一種高免疫原性的脂肽，它具有脂質(zhì)部分和含有輔助T細(xì)胞表位和抗原B細(xì)胞表位兩者的肽部分抗原B細(xì)胞，并期望得到針對(duì)上述表位的免疫應(yīng)答。本發(fā)明中的脂肽通過(guò)內(nèi)部賴氨酸或例如鳥(niǎo)氨酸，二氨基丙酸，或二氨基丁酸這樣的內(nèi)部賴氨酸類似物的末端側(cè)鏈氨基將其脂質(zhì)部分附著于肽部分內(nèi)。這與先前所描述的N末端附著和C末端附著大相徑庭(Grass-Masseetal.Vaccine,14,375,1996)。于是，將上述一個(gè)或多個(gè)賴氨酸殘基或賴氨酸類似物殘基在多肽合成時(shí)放置于多肽內(nèi)部的預(yù)定位置，脂質(zhì)的附著位點(diǎn)可以很容易地確定下來(lái)。于是脂肽中脂質(zhì)部分的定位的目的是提高疫苗或佐劑配方終產(chǎn)物效果。令人驚奇的是，發(fā)明人發(fā)現(xiàn)在許多情況下，借助于位于輔助T細(xì)胞表位與抗原氨基酸序列之間的內(nèi)部賴氨酸殘基的側(cè)鏈S-氨基或內(nèi)部賴氨酸類似物殘基的末端側(cè)鏈基團(tuán)的脂質(zhì)部分的附著，可以增強(qiáng)脂肽產(chǎn)物的溶解性。本發(fā)明所提供脂肽的一個(gè)優(yōu)勢(shì)在于它具有足夠的免疫原性，因此通常不需要在包含這些脂肽的疫苗配方中加入外源佐劑。本發(fā)明明確包括了位于輔助T細(xì)胞表位或抗原氨基酸序列內(nèi)的內(nèi)部賴氨酸殘基的e-氨基或內(nèi)部賴氨酸類似物殘基的末端側(cè)鏈基團(tuán)進(jìn)行的脂質(zhì)部分的附著，僅排除多肽的N末端或C末端被脂質(zhì)部分附著的情況。如文中舉例說(shuō)明，發(fā)明人明確指出，例如，脂質(zhì)可以被附著于輔助T細(xì)胞表位內(nèi)的內(nèi)部賴氨酸殘基的s-氨基，與其中脂質(zhì)被附著于位于輔助T細(xì)胞表位和B細(xì)胞表位之間的賴氨酸的s-氨基的脂肽相比，不會(huì)降低該脂肽產(chǎn)生免疫應(yīng)答的能力。"內(nèi)部"一詞的意思是指在除了含有輔助T細(xì)胞表位和抗原B細(xì)胞表位的多肽的N末端或C末端的所有位置。優(yōu)選，脂質(zhì)部分通過(guò)位于輔助T細(xì)胞表位和抗原B細(xì)胞表位之間的氨基酸序列中的賴氨酸殘基的s-氨基或者內(nèi)部賴氨酸類似物殘基的末端側(cè)鏈基團(tuán)被附著于肽部分。本領(lǐng)域的技術(shù)人員熟知，基于商業(yè)角度的考慮，非常希望獲得抗原的可溶性用于生產(chǎn)疫苗配方。從這個(gè)角度來(lái)說(shuō)，發(fā)明人己發(fā)現(xiàn)本發(fā)明中大多數(shù)有效的脂肽都是高度可溶的。本發(fā)明中的脂肽正調(diào)節(jié)未成熟樹(shù)突細(xì)胞(DC)上的MHCII類分子的表面表達(dá)的活性可以反應(yīng)出該脂肽在缺乏外源佐劑條件下誘導(dǎo)產(chǎn)生抗體應(yīng)答的相對(duì)活性。舉例說(shuō)明，脂質(zhì)部分的結(jié)構(gòu)對(duì)于最終的脂肽的活性不是必需的，比如包含棕櫚酸，月桂酸，硬脂酸或辛酸的脂質(zhì)部分都可被采用，且不會(huì)導(dǎo)致免疫原性的喪失。因此，除非文中特別指明，本發(fā)明并不被脂質(zhì)部分的結(jié)構(gòu)所限制。同樣地，除非文中特別說(shuō)明，盡管在一般情況下并不必要，本發(fā)明也包括將多個(gè)脂質(zhì)部分添加到肽部分上。如文中舉例說(shuō)明，與僅有單個(gè)脂質(zhì)部分附著的多肽相比較，將多個(gè)脂質(zhì)部分添加到肽部分上，例如添加到輔助T細(xì)胞表位內(nèi)的一個(gè)位置和添加到位于輔助T細(xì)胞表位與B細(xì)胞表位之間的一個(gè)位置，這并不會(huì)降低該脂肽刺激IgG產(chǎn)生的活性。如前所述，很顯然可以很方便地將多肽合成為單條氨基酸鏈，從而不再需要合成后的修飾來(lái)?yè)饺雰煞N表位。氨基酸間隔可被任意地添加到將被脂質(zhì)部分附著的內(nèi)部賴氨酸或賴氨酸類似物的任意一側(cè)，比如，位于輔助T細(xì)胞和B細(xì)胞表位之間。如文中舉例說(shuō)明，發(fā)明人通過(guò)將脂質(zhì)部分偶合到位于合成^^部分內(nèi)的輔助T細(xì)胞和B細(xì)胞表位之間的內(nèi)部賴氨酸殘基的暴露s-氨基上來(lái)制備本發(fā)明的脂肽，有或沒(méi)有氨基酸間隔。在這里首選的間隔是絲氨酸二聚體，三聚體，四聚體等。任一常規(guī)類型的間隔都可以在脂質(zhì)部分和肽部分之間插入。在這里首選的氨基酸間隔包括精氨酸或絲氨酸二聚體，三聚體，四聚體等?？蛇x地，也可以使用6-氨基己酸間隔?？晒┻x擇的間隔也是可以預(yù)期的。比如，可以在與脂質(zhì)部分進(jìn)行加成之前，先往內(nèi)部賴氨酸暴露的s-氨基或內(nèi)部賴氨酸類似物末端側(cè)鏈基團(tuán)上添加一個(gè)間隔。可選地，式(III)或(IV)的脂氨基酸可以被直接地添加到內(nèi)部賴氨酸殘基的e-氨基上或內(nèi)部賴氨酸類似物末端側(cè)鏈基團(tuán)上。如文中舉例說(shuō)明，當(dāng)對(duì)受試動(dòng)物施用本發(fā)明的脂肽時(shí)，可誘導(dǎo)產(chǎn)生針對(duì)B細(xì)胞表位部分的高滴度抗體，而不需要任何佐劑來(lái)達(dá)到相似的抗體滴度。這一效果也可經(jīng)過(guò)脂肽給藥后增強(qiáng)的樹(shù)突狀細(xì)胞成熟得到印證(即相對(duì)于具有N末端結(jié)合脂質(zhì)的脂肽有增強(qiáng)的抗原呈遞)。同樣如文中舉例說(shuō)明，本發(fā)明中含有抗原B細(xì)胞表位LHRH的脂肽可以在以小鼠模型為代表的哺乳動(dòng)物中誘導(dǎo)不育。本發(fā)明的脂肽可以使得針對(duì)于LHRH的抗體持續(xù)產(chǎn)生，這說(shuō)明該脂肽在誘導(dǎo)體液免疫中和作為疫苗制劑中的活性組分的普遍效用。也如文中舉例說(shuō)明，包含來(lái)自于A群鏈球菌(GAS)M蛋白的抗原B細(xì)胞表位的本發(fā)明的脂肽，可以在以小鼠模型為代表的需要針對(duì)GAS接種疫苗的人類或其他哺乳動(dòng)物中誘導(dǎo)保護(hù)。這里所提供的數(shù)據(jù)說(shuō)明本發(fā)明的脂肽可以誘導(dǎo)針對(duì)GAS的抗體的持續(xù)表達(dá)(血清lgG，唾液和糞IgA)，GAS的調(diào)理作用以及抗后續(xù)GAS攻擊的動(dòng)物存活。這些數(shù)據(jù)證明了該脂肽對(duì)動(dòng)物機(jī)體具有誘導(dǎo)體液免疫和作為抗GAS的疫苗制劑中的活性成分的普遍效用。也如文中舉例說(shuō)明，本發(fā)明中含有胃泌素抗原B細(xì)胞表位(五肽胃泌素)的脂肽可以在以小鼠模型為代表的需要抑制胃酸分泌的其他哺乳動(dòng)物中誘導(dǎo)抗胃泌素和/或縮膽囊素抗體的持續(xù)表達(dá)。這里提供的數(shù)據(jù)都證明了該脂肽可在患有胃酸過(guò)多，Zollinger-Ellison綜合癥，由于胃酸的過(guò)量和不可調(diào)分泌導(dǎo)致的胃潰瘍或十二指腸潰瘍的動(dòng)物中，誘導(dǎo)產(chǎn)生針對(duì)于胃泌素的體液免疫和免疫中和作用，從而阻斷胃酸的分泌，或降低或避免在胰腺或十二指腸中形成胃泌素依賴的腫瘤(也就是促胃液素瘤的預(yù)防和/或治療)。本領(lǐng)域的技術(shù)人員應(yīng)清楚，輔助T細(xì)胞和B細(xì)胞表位的性質(zhì)對(duì)本發(fā)明而言并不重要。將脂質(zhì)部分附著于肽部分內(nèi)的一個(gè)或多個(gè)內(nèi)部賴氨酸殘基或賴氨酸類似物殘基的s-氨基的新方法才具有廣泛的申請(qǐng)空間。所以，基于以上數(shù)據(jù)，可以理解很大范圍的輔助T細(xì)胞和B細(xì)胞表位都能用在脂肽結(jié)構(gòu)中。事實(shí)上，本申請(qǐng)所舉實(shí)例的范圍之廣，說(shuō)明了本發(fā)明的脂肽在預(yù)防和治療需要產(chǎn)生針對(duì)抗原B細(xì)胞表位的免疫應(yīng)答的人類和其他乳動(dòng)物的許多不同疾病的普遍性。因此，本發(fā)明不局限于對(duì)任何具體條件，失調(diào)或者疾病狀態(tài)的治療。圖1表示的是合成多肽與脂肽的結(jié)構(gòu)(左)和這些合成多肽與脂肽樣本在鹽溶液中的相對(duì)溶解性(右)。所述多^:被指定如下(i)[Th]為來(lái)自于流感病毒血細(xì)胞凝集素輕鏈的一個(gè)CD4+輔助T細(xì)胞表位(SEQIDNO:l)或者來(lái)自于CDV-F的肽P25的CD4+輔助T細(xì)胞(SEQIDNO:24);(ii)[B]為由LHRH的殘基l-10(SEQIDNO:2)或LHRH的殘基2-10(SEQIDNO:3)或LHRH的殘基6-10(SEQIDNO:4)組成的一種B細(xì)胞表位；一種A群鏈球菌M蛋白的B細(xì)胞表位(肽J14，SEQIDNO:101);或者一種被包含在胃泌素的C末端5個(gè)殘基內(nèi)的胃泌素B細(xì)胞表位(即五肽胃泌素，SEQIDNO:102);(iii)[Th]-[B]由(i)和(ii)多肽組成(比如，SEQIDNO:5，103,104，105，107，109或111);禾口(iv)[Th]-i^-[B]由被一個(gè)賴氨酸殘基分隔的(i)和(ii)的多肽組成(比如，SEQIDNO:7，9，13，106，108，110或112)。所述脂肽被指定如下(i)Pam3Cys-[ThHB]由綴合于上述肽[Th]-[B]的N末端(即綴合于，例如，SEQIDNO:5，103，104，105，107，109或111中的任意一個(gè)的N末端)的式(I)的脂質(zhì)組成；(ii)Pam3Cys-Ser-Ser-[Th]-[B]由綴合于上述肽[Th]-[B]的N末端(即綴合于，例如，SEQIDN05，103，104，105，107,109或111中的任意一個(gè)的N末端)的式(III)的脂氨基酸組成；(iii)Pam2Cys-[ThHB]由綴合于上述肽[Th]-[B]的N末端(即綴合于，例如，SEQIDNO:5，103，104，105，107，109或111中的任意一個(gè)的N末端)的式(II)的脂質(zhì)組成；(iv)Pam2Cys-Ser-Ser-[ThHB]由綴合于上述肽[Th]-[B]的N末端(即綴合于,例如，SEQIDNO:5，103，104，105，107，109或lll中的任意一個(gè)的N末端)的式(IV)的脂質(zhì)組成；(v)[Th]-Lys(Pam3Cys)-[B]由肽[Th]-Lys-[B](例如，SEQIDNO:7，9，13，106，108,110或112中的任意一個(gè))以及綴合于上述肽的內(nèi)部賴氨酸(Lys)的e-氨基的式(I)的脂質(zhì)組成；(vi)[Th]-Lys(Pam2Cys)-[B〗由肽[Th]-Lys-[B](即SEQIDNO:7，9,13,106，108，110,或112中的任意一個(gè))和綴合于上述肽內(nèi)部賴氨酸(Lys)的e-氨基的式(II)的脂質(zhì)組成；和(vii)[Th]-Lys(Pam2Cys-Ser-Ser)-[B]由依次經(jīng)內(nèi)部賴氨酸(Lys)e-氨基綴合于絲氨酸同型二聚體(即絲氨酸-絲氨酸)及隨后的式(II)的脂質(zhì)的肽[Th]-Lys-[B](例如SEQIDNO:7，9,13，106,108，110,或112中的任意一個(gè))組成。因此，為制備這樣的支鏈脂肽，兩個(gè)絲氨酸殘基在脂質(zhì)部分被附著之前就已經(jīng)被加到了賴氨酸殘基的e-氨基上?；诹鞲胁《炯t細(xì)胞凝集素輔助T細(xì)胞表位(SEQIDNO:l)和LHRH1-10B細(xì)胞表位(SEQIDNO:2)的多肽與脂^:的相對(duì)溶解性見(jiàn)于圖的右側(cè)，從低溶解性(-)到高溶解性(++++)。圖2表示的是如圖1中所述脂肽[Th]-Lys(Pani2Cys-Ser-SerHB](左)和Pam2Cys-Ser-Ser-[Th]-[B](右)的溶解性，其中肽部分的氨基酸序列分別如SEQIDNO:7和SEQIDNO:5所示。兩種溶液在鹽水中的濃度都約為lmg脂肽/ml。含有脂肽[Th]-Lys(Pam2Cys-Ser-Ser)-[B]的溶液增強(qiáng)的透明度說(shuō)明了它相對(duì)于脂肽Pam2CyS-Ser-Ser-[Th]-[B]來(lái)說(shuō)具有更高的溶解度。圖3圖示的是使用圖1中的多肽和脂肽的每一個(gè)所獲得的抗-LHRH的抗體滴度，其中肽部分的氨基酸序列如SEQIDNO:5或SEQIDNO:7所示。被標(biāo)作Pam3Cys-Ser-Lys4陰性對(duì)照脂肽，由綴合于具有氨基酸序列Ser-Lys-Lys-Lys-Lys(SEQIDNO:17)的肽的N末端的式(I)的脂質(zhì)組成。所有肽和脂肽都于鹽水中進(jìn)行了皮下(S.C.)第一次接種(空心圓)和第二次接種(實(shí)心圓)。兩種未脂化肽[Th]-Lys-[B]和[Th]-[B]在弗氏完全佐劑(CFA)中進(jìn)行了第一次接種，在不完全弗氏佐劑(IFA)中進(jìn)行了第二次接種。為了對(duì)多肽[Th]-[B]和脂肽Parri3Cys-S-Lys4進(jìn)行聯(lián)合給藥，將多肽溶于鹽水中，并如所示那樣以l:l或l:5摩爾比與脂肽進(jìn)行混合。多肽和脂肽免疫原的給藥劑量為20nmo1。在所有情況下，對(duì)照組動(dòng)物用在弗氏完全佐劑(CFA)中乳化的鹽水進(jìn)行第一次接種，用在不完全弗氏佐劑(IFA)中乳化的鹽水進(jìn)行第二次接種。圖4圖示的是在二次抗體應(yīng)答期間獲得或引起的對(duì)每一種抗-LHRH抗體同種型(即IgM，IgA，IgGl，IgG2a，IgG2b，IgG3，和總Ig，橫坐標(biāo))的抗-LHRH抗體滴度(logu)，縱坐標(biāo))，隨后用脂肽[Th]-Lys(Pam2Cys-Ser-SerHB](SEQIDNO:7)進(jìn)行接種。鼠用于鹽水中的脂肽疫苗通過(guò)皮下(空心方形)，或者鼻內(nèi)(實(shí)心方形)二次給藥2周后進(jìn)行采血。圖5圖示的是如圖1中所示多肽和脂肽(即SEQIDNO:5或SEQIDNO:7)在樹(shù)突細(xì)胞表面提高M(jìn)HCII類分子表達(dá)的相對(duì)能力。圖中肽與脂肽依照?qǐng)D1的命名表示在每組中。對(duì)每一種多肽和脂肽，都有8xl04個(gè)Dl細(xì)胞被暴露于4.5finole肽或脂肽并過(guò)夜培養(yǎng)。將這些細(xì)胞收集，用FITC結(jié)合的antW-Ek，d單克隆抗體的進(jìn)行染色后再采用流式細(xì)胞計(jì)數(shù)對(duì)MHCII類分子的表達(dá)進(jìn)行檢測(cè)。每個(gè)樣本可以分析3xl04個(gè)D1細(xì)胞。顯示的數(shù)據(jù)是四次獨(dú)立試驗(yàn)的代表，并顯示出增強(qiáng)的單克隆抗體染色(即增強(qiáng)的D1細(xì)胞成熟)，隨后施用脂肽,尤其誘導(dǎo)Dl成熟率接近遭脂多糖(LPS)攻擊的Dl細(xì)胞所觀察到的水平的脂肽[Th]-Lys(Pam2Cys-Ser-Ser)-[B]。采用未脂化肽[Th]-Lys-[B]得到的數(shù)據(jù)與在未添加任何肽，脂肽或脂多糖的培養(yǎng)基中孵育的Dl細(xì)胞完全相同，都呈現(xiàn)出約26%的自發(fā)成熟率。圖6圖示的是由脂化的[Th]-Lys(Pam2Cys)-[B]引起的抗-LHRH抗體應(yīng)答，其中[Th]由來(lái)源于流感病毒紅細(xì)胞凝集素輕鏈的CD4+T細(xì)胞表位(SEQIDNO:l)組成，[B]是LHRH1-10(SEQIDNO:2)或LHRH6-10(即LHRHC末端的5個(gè)殘基；SEQIDNO:4)，含有或不含位于脂質(zhì)部分與肽部分之間的絲氨酸間隔(Ser-Ser)的組成。脂肽[111]-1^(31112€丫3)-0&1^1^\$1"00&在結(jié)構(gòu)上與[丁}1]-1^(01112€丫8)-[B]相似，區(qū)別在于前者含有SEQIDNO:4替換了SEQIDNO:2。圖7圖示的是基于輔助T細(xì)胞表位P25(SEQIDNO:24)和LHRH2-10(SEQIDNO:3)的不同脂肽構(gòu)建體的結(jié)構(gòu)數(shù)據(jù)，HPLC和質(zhì)譜數(shù)據(jù)，其中肽部分具有如SEQIDNO:9所示的氨基酸序列，脂質(zhì)部分具有選自(i)Pam2Cys;(ii)Ste2Cys;(iii)Lau2Cys;禾B(iv)Oct2Cys所組成的組。在脂質(zhì)部分和肽部分中間也可以放置不同的間隔，比如(i)Ser-Ser，兩個(gè)絲氨酸殘基；(ii)Arg-Arg,兩個(gè)精氨酸殘基；和(iii)Ahx，6-氨基己酸。脂^s:的結(jié)構(gòu)列示于左欄中，脂肽的HPLC層析圖列示于中欄中，質(zhì)譜結(jié)構(gòu)列示于圖中右欄。圖8圖示的是如圖7所述在肽部分和脂質(zhì)部分之間具有Ser-Ser間隔的那些脂肽的免疫原性，其中的脂質(zhì)部分選自由(i)Pani2Cys;(ii)Ste2Cys;(iii)Lau2Cys;和(iv)Oct2Cys所組成的組。BALB/c小鼠組(6-8周齡)用20nmol^t免疫原進(jìn)行皮下第一次接種和第二次接種。所有脂肽都溶于鹽水進(jìn)行給藥。未脂化肽[Th]-Lys-間被溶于弗氏完全佐劑(CFA)進(jìn)行給藥作為對(duì)照。在進(jìn)行第一次接種(空心圓)后4周和進(jìn)行第二次接種(實(shí)心圓)后2周采血提取血清。圖9圖示的來(lái)自圖7的在肽部分和脂質(zhì)部分之間含有不同間隔的脂肽免疫原的免疫原性，具體的氨基酸間隔包含絲氨酸同型二聚體(Ser-Ser)，精氨酸同型二聚體(Arg-Arg)或6-氨基己酸(Ahx)。BALB/c小鼠(6-8周齡)被分組并用20nmo1肽免疫原進(jìn)行皮下第一次接種和第二次接種。所有脂肽都溶于鹽水進(jìn)行給藥。未脂化肽[Th]-Lys-間被溶于弗氏完全佐劑(CFA)進(jìn)行給藥作為對(duì)照。在進(jìn)行第一次接種(空心圓)后4周和進(jìn)行第二次接種(實(shí)心圓)后2周采血提取血清。圖10圖示的是脂肽構(gòu)建體[Th](Pam2Cys-Ser-Ser)-[B]的質(zhì)量控制數(shù)據(jù)，其中脂質(zhì)部分與SEQIDNO:103所示肽的輔助T細(xì)胞表位里的內(nèi)部氨基酸殘基(Lys-14)的e-氨基相對(duì)。脂肽的結(jié)構(gòu)列示于左欄中，脂肽的HPLC層析圖列示于中欄中，質(zhì)譜數(shù)據(jù)列示于圖中右欄。圖11圖示的是如圖10中所述脂肽免疫原，相對(duì)于具有被添加到位于輔助T細(xì)胞表位和B細(xì)胞表位之間的內(nèi)部賴氨酸殘基的脂肽免疫原(即脂質(zhì)部分被添加到如SEQIDNO:9所示的氨基酸序列上，與SEQIDNO:103的區(qū)別在于輔助T細(xì)胞表位和B細(xì)胞表位之間添加了一個(gè)內(nèi)部賴氨酸)的免疫原性。對(duì)照設(shè)為具有SEQIDNO:9的氨基酸序列的未脂化肽(即[Th]-Lys-[B])。BALB/c小鼠(6-8周齡)被分組并用20nmol肽免疫原進(jìn)行皮下第一次接種和第二次接種。所有脂肽都溶于鹽水進(jìn)行給藥。未脂化肽[Th]-Lys-[B]被溶于弗氏完全佐劑(CFA)中施用作為對(duì)照。在進(jìn)行第一次接種(空心圓)后4周和進(jìn)行第二次接種(實(shí)心圓)后2周采血提取血清。脂肽構(gòu)建體[Th](Pam2Cys-Ser-Ser)-[B]的脂質(zhì)部分附著于輔助T細(xì)胞表位內(nèi)的賴氨酸殘基(Lys-14)的e-氨基。脂肽結(jié)構(gòu)[Th]-Lys(Pam2Cys-Ser-Ser)-[B]的脂質(zhì)部分附著于兩種肽表位間的賴氨酸殘基的e-氨基。圖12圖示的是包含輔助T細(xì)胞表位P25(SEQIDNO:24)和A群鏈球菌B細(xì)胞表位("J14";SEQIDNO:IOI)以及具有SEQIDNO:106所示的氨基酸序列和一個(gè)或兩個(gè)脂質(zhì)部分的脂肽在小鼠體內(nèi)產(chǎn)生血清IgG的活性。所有被檢測(cè)的脂肽都含有附著于輔助T細(xì)胞表位和B細(xì)胞表位之間的內(nèi)部賴氨酸的脂氨基酸部分Pam2CyS-Ser-Ser。在脂肽[Th]-Lys(Pam2Cys-Ser-Ser)-[J14]中這是唯一的脂質(zhì)部分，在脂肽Pam2Cys-Ser-Ser-[Th]-Lys(Pam2Cys-Ser-Ser)-[J14]+，一個(gè)額外的脂氨基酸部分Pam2Cys-Ser-Ser被添加到輔助T細(xì)胞表位的N末端氨基酸。其他的免疫原如下，J14，由含有J14B細(xì)胞表位的肽(SEQIDNO:101)組成的未脂化肽；[Th]-[J14]，一種由輔助T細(xì)胞表位(SEQIDNO:24)和J14肽(SEQIDNO:IOI)組成的未脂化肽，其具有SEQIDNO:106的氨基酸序列；一種由輔助T細(xì)胞表位(SEQIDNO:24)和含LHRHB細(xì)胞表位的肽(SEQIDNO:3)組成的脂肽，其具有SEQIDNO:9的氨基酸序列；和磷酸鹽緩沖液(PBS)。用含60ug基于肽的疫苗，總體積30ulPBS對(duì)4-6周齡(15只/組)的雌性遠(yuǎn)交Quackenbush小鼠進(jìn)行鼻內(nèi)接種?？偣策M(jìn)行三次免疫，每次間隔21天。在最后一次免疫7天后從小鼠的尾靜脈采血以檢測(cè)J14特異性血清IgG。接受任何含有J14脂肽免疫的小鼠都比對(duì)照組具有顯著提高的血清IgG滴度(P<0.05)。圖13圖示的是如圖12中所述由未脂化肽和脂肽產(chǎn)生的抗血清的調(diào)理能力。用含60ug基于多肽的疫苗，總體積30ulPBS對(duì)4-6周齡(15只/組)的雌性遠(yuǎn)交Quackenbush小鼠進(jìn)行鼻內(nèi)接種。總共進(jìn)行三次免疫，每次間隔21天。通過(guò)在體外的間接殺菌試驗(yàn)來(lái)確定來(lái)自免疫小鼠的血清調(diào)理或殺死M1GAS菌株的活性。采集自接受任何含有J14脂肽免疫的小鼠的血清都比采集自對(duì)照組肽或脂肽或PBS的動(dòng)物具有顯著提高的殺死GAS的能力(P0.05)。圖14圖示的是如圖12種所述的未脂化肽和脂肽剌激小鼠產(chǎn)生唾液IgA的能力。用60ug各基于多肽的疫苗，總體積30ulPBS對(duì)4-6周齡(15只/組)的雌性遠(yuǎn)交Quackenbush小鼠進(jìn)行鼻內(nèi)接種。總共進(jìn)行三次免疫，每次間隔21天。在最后一次免疫8天后收集個(gè)體小鼠的唾液，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)ELISA的方法檢測(cè)J14特異性唾液IgA抗體滴度。接受任何含有J14脂肽接種的小鼠都比用對(duì)照組多肽或脂肽或PBS免疫的對(duì)照組具有顯著提高的抗體滴度(P0.05)。圖15圖示的是如圖12中所示的含有J14肽的未脂化肽和脂肽在小鼠中產(chǎn)生糞IgA的能力。用6(Hig基于肽的疫苗，總體積30^1PBS，對(duì)4-6周齡(15只/組)的雌性遠(yuǎn)交Quackenbush小鼠進(jìn)行鼻內(nèi)接種?？偣策M(jìn)行三次免疫，每次間隔21天。在最后一次免疫6天后對(duì)糞IgA進(jìn)行檢測(cè)。只有接受其中脂質(zhì)部分位于輔助T細(xì)胞表位和B細(xì)胞表位之間(即[Th]-Lys(Pam2Cys-Ser-Ser)-[J14])的含有J14的單脂化肽接種的小鼠才具有顯著的糞IgA抗體滴度(P《05)。圖16圖示的是如圖12所述采用未脂化肽和脂肽進(jìn)行免疫后小鼠對(duì)細(xì)菌攻擊的存活能力。在最后一次抗原給藥后兩周，對(duì)小鼠用M1GAS菌株進(jìn)行鼻內(nèi)攻擊，并在其后的不同時(shí)間段測(cè)定其存活情況。感染后，接受其中脂質(zhì)部分位于輔助T細(xì)胞表位和B細(xì)胞表位之間(即[Th]-Lys(Pam2Cys-Ser-Ser)-[J14])的含有J14的單脂化肽接種的小鼠具有最高的存活率。圖17圖示的是基于胃泌素的脂肽免疫原的免疫原性。用20rnrno1多肽免疫原對(duì)BALB/c小鼠組(5只/組，6-8周齡)進(jìn)行尾基皮下給藥。采用的肽為胃泌素-17(SEQIDNO:113)和[P25]-Lys-[五肽胃泌素](SEQIDNO:110)，其中的五肽胃泌素是如(SEQIDNO:102)所示的胃泌素的C末端序列GWMDF;和[P25]-Lys(Pam2Cys-Ser-Ser)-[五肽胃泌素](SEQIDNO:110,其脂質(zhì)部分結(jié)合于內(nèi)部賴氨酸殘基上)。所有脂肽都溶于PBS進(jìn)行給藥，未脂化肽被溶于弗氏完全佐劑(CFA)中進(jìn)行給藥。將以弗氏完全佐劑(CFA)乳化的鹽水設(shè)為陰性對(duì)照。在進(jìn)行免疫4周后收獲血清，同時(shí)以相似劑量的抗原進(jìn)行二次免疫。在二次免疫2周后再次采血，并用ELISA檢測(cè)能與胃泌素-17序列反應(yīng)的抗體。其結(jié)果以抗胃泌素17的抗體滴度表示。優(yōu)選實(shí)施例的詳細(xì)描述脂肽本發(fā)明的一個(gè)方面提供了含有一種含有被綴合于一個(gè)或多個(gè)脂質(zhì)部分的多^^的分離的脂肽，其中(i)所述多肽包含一氨基酸序列，該序列包含(a)—種輔助T細(xì)胞(Th)表位的氨基酸序列和一種B細(xì)胞表位的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列是不同的，和O))—個(gè)或多個(gè)內(nèi)部賴氨酸殘基或內(nèi)部賴氨酸類似物殘基，其用于經(jīng)所述賴氨酸或賴氨酸類似物的s-氨基或末端側(cè)鏈基團(tuán)共價(jià)附著于所述脂質(zhì)部分的每一個(gè)；和(ii)所述一個(gè)或多個(gè)脂質(zhì)部分的每一個(gè)被直接地或間接地共價(jià)附著于所述一個(gè)或多個(gè)內(nèi)部賴氨酸的s-氨基，或被附著于所述內(nèi)部賴氨酸類似物殘基的末端側(cè)鏈基團(tuán)。在這里，"脂肽"一詞的是指任何非自然形成的物質(zhì)組合物，這樣的組合物包含一種或多種脂質(zhì)部分和被直接地或間接地綴合的一種或多種氨基酸序列，所述組合物基本上不含非特異性非綴合的脂質(zhì)或蛋白。"直接"一詞的意思是一個(gè)脂質(zhì)部分和一段氨基酸序列沒(méi)有被間隔分子分開(kāi)。"間接"一詞的意思是一個(gè)脂質(zhì)部分和一段氨基酸序列被一個(gè)含有一或多個(gè)含碳的分子的間隔所分隔，比如一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基。氨基酸序列的長(zhǎng)度可以任意，只要其范圍符合同時(shí)具有輔助T細(xì)胞表位和B細(xì)胞表位的功能的長(zhǎng)度即可。"內(nèi)部賴氨酸殘基"意思是指同時(shí)含有輔助T細(xì)胞表位和B細(xì)胞表位的多肽中的賴氨酸殘基，其中所述賴氨酸既不是所述多肽的N末端氨基酸殘基，也不是C末端殘基。這意味著脂質(zhì)部分所附著的內(nèi)部賴氨酸殘基是存在于輔助T細(xì)胞表位的氨基酸序列內(nèi)或抗原氨基酸序列內(nèi)的殘基。內(nèi)部賴氨酸殘基也可以獨(dú)立于這兩個(gè)多肽表位，但在這種情況下該賴氨酸殘基必須連接多肽的這兩種表位。同樣的，"內(nèi)部賴氨酸類似物殘基"意思是指同時(shí)含有輔助T細(xì)胞表位和B細(xì)胞表位的多肽內(nèi)的賴氨酸類似物殘基，其中所述賴氨酸類似物既不是所述多肽的N末端氨基酸殘基，也不是C末端殘基。確定一個(gè)賴氨酸殘基是否是"內(nèi)部"賴氨酸殘基的標(biāo)準(zhǔn)經(jīng)適應(yīng)性修改也適用于確定某個(gè)賴氨酸類似物是否是內(nèi)部的。"賴氨酸類似物"一詞的意思是一種可以被摻入到肽內(nèi)部的合成化合物，其具有適合于脂質(zhì)部分結(jié)合的側(cè)鏈基團(tuán)，該化合物包括氨基酸類似物或含有這樣氨基側(cè)鏈基團(tuán)的非天然存在的氨基酸。優(yōu)選的賴氨酸類似物包括以下通式(V)中的化合物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage24</formula>其中，n代表從0到3的整數(shù)，X是選自由NH,O和S所組成的組的所述內(nèi)部賴氨酸類似物殘基的末端側(cè)鏈基團(tuán)。優(yōu)選n是從1到3的整數(shù)。優(yōu)選X是氨基，且賴氨酸類似物是一種二氨基化合物。在其中一個(gè)優(yōu)選實(shí)施例中，賴氨酸類似物選自于由2,3-二氨基丙酸(Dpr)，2,4-二氨基丁酸(Dab)和2,5-二氨基戊酸[即鳥(niǎo)氨酸(Orn)]所組成的組。本領(lǐng)域中技術(shù)人員都己知術(shù)語(yǔ)"e-氨基"的意思。術(shù)語(yǔ)"末端側(cè)鏈基團(tuán)"是指賴氨酸類似物側(cè)鏈上，遠(yuǎn)離所述類似物a碳原子的一個(gè)取代基團(tuán)，例如2,3-二氨基丙酸的e氨基，2,4-二氨基丁酸的Y氨基或者是鳥(niǎo)氨酸的S氨基。發(fā)明人發(fā)現(xiàn)最有效的脂肽都是高度可溶的。本發(fā)明中脂肽在缺乏外源佐劑時(shí)誘導(dǎo)抗體應(yīng)答的相對(duì)活性，可以通過(guò)它們正調(diào)節(jié)未成熟樹(shù)突細(xì)胞(DC)，尤其是如Winzler等人所描述的Dl細(xì)胞(JExpMed185，317,1997)上的MHCII類分子的表面表達(dá)活性反映出。本領(lǐng)域技術(shù)人員都熟知，賴氨酸中的e-氨基是該氨基酸中的側(cè)鏈末端氨基。使用賴氨酸的e-氨基或賴氨酸類似物的末端側(cè)鏈基團(tuán)與脂質(zhì)部分進(jìn)行交聯(lián)，有助于作為共-線性氨基酸序列的多肽部分合成，并同時(shí)摻入了輔助T細(xì)胞表位和B細(xì)胞表位。其中脂質(zhì)經(jīng)賴氨酸殘基的e-氨基或賴氨酸類似物末端側(cè)鏈基團(tuán)附著的脂肽與具有經(jīng)賴氨酸的a-氨基附著的脂質(zhì)的脂肽有明顯的結(jié)構(gòu)上的區(qū)別，因?yàn)楹笳咧膬H可將脂質(zhì)部分綴合于N-末端殘基。因此，尤其優(yōu)選那些脂質(zhì)部分所附著的至少一個(gè)內(nèi)部賴氨酸殘基或內(nèi)部賴氨酸類似物位于多肽部分內(nèi)，用來(lái)分隔具有免疫學(xué)功能性的表位。比如，內(nèi)部賴氨酸殘基或內(nèi)部賴氨酸類似物殘基可以作為一種表位之間的一種間隔和/或連接殘基。在自然條件下，當(dāng)內(nèi)部賴氨酸或內(nèi)部賴氨酸類似物位于輔助T細(xì)胞表位和B細(xì)胞表位之間時(shí)，脂質(zhì)部分將附著于這些表位之間的某個(gè)位置，雖然這樣會(huì)使得多肽的氨基酸序列形成一個(gè)新的分支。優(yōu)選，采用單個(gè)內(nèi)部賴氨酸殘基或內(nèi)部賴氨酸類似物來(lái)分隔B細(xì)胞與輔助T細(xì)胞表位(例如，SEQIDNO:7,9，13，106,108,110或112中的任何一個(gè))，在這樣的情況下，脂質(zhì)部分經(jīng)位于輔助T細(xì)胞表位和抗原B細(xì)胞表位之間氨基酸序列間的賴氨酸殘基的e-氨基或賴氨酸類似物的末端側(cè)鏈基團(tuán)被附著。內(nèi)部賴氨酸的e-氨基或賴氨酸類似,的末端側(cè)鏈基團(tuán)可以通過(guò)化學(xué)基團(tuán)進(jìn)行保護(hù)，這些化學(xué)基團(tuán)與那些用來(lái)保護(hù)其它氨基酸的a-氨基和側(cè)鏈功能基團(tuán)互成直角。這樣，賴氨酸的e-氨基或賴氨酸類似物的末端側(cè)鏈基團(tuán)就可以被選擇性的暴露出來(lái)，以允許化學(xué)基團(tuán)，比如含脂質(zhì)的部分，特異性地附著于恰當(dāng)?shù)膃-氨基或末端側(cè)鏈基團(tuán)。采用Fmoc化學(xué)方法進(jìn)行多肽的合成，可以通過(guò)被修飾的氨基酸殘基Fmoc-Lys(Mtt)-OH(Na-Fmoc-Ns-4-甲基三苯甲基-L-賴氨酸)提供被適當(dāng)正交(orthogonally)保護(hù)的賴氨酸的e氨基。同樣也可以預(yù)期可以得到類似的被適當(dāng)正交保護(hù)的不同賴氨酸類似物的側(cè)鏈基團(tuán)，比如Fmoc-Orn(Mtt)-OH(Na-Fmoc-N5-4-甲基三苯甲基-L-鳥(niǎo)氨酸)，F(xiàn)moc-Dab(Mtt)-OH(Na-Fmoc-Ny-4-甲基三苯甲基-L-二氨基丁酸)和Fmoc-Dpr(Mtt)-OH(Na-Fmoc-Np-4-甲基三苯甲基-L-二氨基丙酸)。在存在于賴氨酸或賴氨酸類似物a-氨基的Fmoc基團(tuán)被去除的條件下，側(cè)鏈保護(hù)基團(tuán)Mtt是穩(wěn)定的，但其可以用溶于二氯甲烷的1%三氣乙酸選擇性去除。Fmoc-Lys(Dde)-OH^00孑1110(:^5-1-(4,4-二甲基-2,6-二氧代亞環(huán)己-1-基)乙基-L-賴氨酸)或Fmoc-Lys(ivDde)-OH^0^!!100>^-1-(4,4-二甲基-2，6-二氧代亞環(huán)己-1-基)-3-甲基丁基丄-賴氨酸)也可以應(yīng)用，其中Dde側(cè)鏈保護(hù)基團(tuán)可以在肽合成過(guò)程中通過(guò)肼處理選擇性地被去除。Boc-Lys(Fmoc)-OH可用于Boc化學(xué)法合成，側(cè)鏈保護(hù)基團(tuán)Fmoc可以通過(guò)哌喊或DBU(1,8-二氮雜雙環(huán)[5.4.0]H~—碳-7-烯)處理進(jìn)行選擇性去除，但是當(dāng)用三氟乙酸對(duì)a末端的Boc基團(tuán)進(jìn)行去除時(shí)，F(xiàn)moc仍繼續(xù)存在。對(duì)每一種輔助T細(xì)胞表位，B細(xì)胞表位和脂的結(jié)合來(lái)說(shuō)，輔助T細(xì)胞表位與B細(xì)胞表位之間的最適距離，以及隨之而來(lái)的本發(fā)明中脂肽內(nèi)部賴氨酸或賴氨酸類似物殘基的精確定位和數(shù)量，很容易根據(jù)經(jīng)驗(yàn)來(lái)確定。就合成肽與多肽來(lái)說(shuō)，對(duì)用于制備多肽的合成方法的限制可以部分決定可實(shí)現(xiàn)的輔助T細(xì)胞表位和B細(xì)胞表位之間的分隔，以及內(nèi)部賴氨酸或賴氨酸類似物殘基的數(shù)量和定位。優(yōu)選，輔助T細(xì)胞表位和B細(xì)胞表位至少被包含一個(gè)內(nèi)部賴氨酸殘基或賴氨酸類似物殘基的一個(gè)或兩個(gè)或三個(gè)或四個(gè)或五個(gè)氨基酸殘基所分隔。很清楚，本發(fā)明致力于將多個(gè)脂質(zhì)部分連接到多肽部分上。為了達(dá)到這個(gè)目的，多肽可以包含多個(gè)內(nèi)部賴氨酸殘基或多個(gè)內(nèi)部賴氨酸殘基類似物以及它們的混合形式。在與脂質(zhì)部分相連時(shí)，如果多個(gè)內(nèi)部賴氨酸或賴氨酸類似物殘基的位置過(guò)于緊密時(shí)，會(huì)產(chǎn)生空間位阻的情況，從而導(dǎo)致終產(chǎn)物的混合，或者是產(chǎn)率的降低。與此相應(yīng)的一種考慮情況是這樣一種事實(shí)，即并不需要含有輔助T細(xì)胞表位或B細(xì)胞表位的完整氨基酸序列，才能具有免疫功能。從而，同時(shí)包含上述表位的上述氨基酸序列可以擁有不具有輔助T細(xì)胞活性或B細(xì)胞表位的額外序列。額外序列含有一個(gè)或多個(gè)內(nèi)部賴氨酸或賴氨酸類似物殘基，這些殘基的末端側(cè)鏈基團(tuán)可以作為脂質(zhì)部分的附著位點(diǎn)。自然地，必須保留輔助T細(xì)胞與B細(xì)胞表位的功能。用于脂質(zhì)部分附著的內(nèi)部賴氨酸殘基或內(nèi)部賴氨酸類似物的定位也應(yīng)該經(jīng)過(guò)選擇，這樣才能使得在施用了脂肽的受試者中，脂質(zhì)部分的附著不會(huì)影響到輔助T細(xì)胞表位或B細(xì)胞表位的免疫功能。比如，依賴于對(duì)脂質(zhì)部分的選擇，所述脂質(zhì)部分在B細(xì)胞表位內(nèi)的附著可以在空間上阻礙抗原呈遞。本發(fā)明的脂肽的一種通用的優(yōu)選形式，其中內(nèi)部賴氨酸或內(nèi)部賴氨酸類似物被放置于輔助T細(xì)胞和B細(xì)胞表位之間，由通式(VI)所提供。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage28</formula>其中表位是輔助T細(xì)胞表位或B細(xì)胞表位；A存在或不存在，由一個(gè)約1到6個(gè)氨基酸長(zhǎng)度的氨基酸間隔組成；n是l，2，3或4的整數(shù)；X是選自由NH，O和S所組成的組的末端側(cè)鏈基團(tuán)，優(yōu)選含有NH;Y存在或不存在，由一個(gè)約1到6個(gè)氨基酸長(zhǎng)度的間隔組成，其中優(yōu)選所述間隔包含精氨酸，絲氨酸或6-氨基己酸;和Z是脂質(zhì)部分，優(yōu)選一種選自由Pam2Cys，Pam3Cys，Ste2Cys，Lau2Cys和Oct2Cys.所組成的組的脂氨基酸部分。本領(lǐng)域的技術(shù)人員應(yīng)該意識(shí)到，Ste2Cys也可稱為S-[2,3-二(硬脂酰氧基)丙基]半胱氨酸或二硬脂酰-S-丙三基-半胱氨酸;Laii2Cys也可稱為S-[2,3-雙(月桂酰氧基)丙基]半胱氨酸或二月桂酰-S-丙三基-半胱氨酸；Oct2Cys也可被稱為S-[2,3-二(辛酰氧基)丙基]半胱氨酸或二辛?；?S-丙三基-半胱氨酸。輔助T細(xì)胞表位是指任意一種本領(lǐng)域的技術(shù)人員已知的用以提高特定的目標(biāo)受試者(即人類，或一種特定的非人類動(dòng)物，比如小鼠，大鼠，豚鼠，狗，馬，豬或山羊)體內(nèi)的免疫應(yīng)答的輔助T細(xì)胞表位。優(yōu)選輔助T細(xì)胞表位包含至少約10到24殘基長(zhǎng)度的氨基酸，更普通的情況是包含約15到20個(gè)殘基長(zhǎng)度的氨基酸。尤其優(yōu)選混雜的或允許的輔助T細(xì)胞表位，因?yàn)樗鼈兒苋菀捉?jīng)化學(xué)合成而且不需要使用含有多個(gè)輔助T細(xì)胞表位的長(zhǎng)多肽。適合應(yīng)用于本發(fā)明脂肽的混雜的或允許的輔助T細(xì)胞表位的實(shí)例，是選自由以下所組成的組(i)一種嚙齒動(dòng)物或人類破傷風(fēng)毒素肽(TTP)的輔助T細(xì)胞表位，比如TTP的氨基酸第830位-第843位(Panina-Bordignon等，Eur.J.I腿un.19,2237-2242，1989);(ii)一種嚙齒動(dòng)物或人類惡性瘧原蟲(chóng)pfg27的輔助T細(xì)胞表位；(m)—種嚙齒動(dòng)物或人類乳酸脫氫酶的輔助T細(xì)胞表位；(iv)—種嚙齒動(dòng)物或人類HIV或fflVgpl20包膜蛋白的輔助T細(xì)胞表位(Berzofsky等，J.Clin.Invest.88,876-884，1991);(v)—種從已知錨定蛋白氨基酸序列(Alexander等，Immunity1:751-761,1994)預(yù)測(cè)的合成的人輔助T細(xì)胞表位(PADRE);(vi)—種嚙齒動(dòng)物或人類麻疹病毒融合蛋白的輔助T細(xì)胞表位(MV-F;Muller等，Mol.Immunol.32，37-47，1995;Partidosetal.,J.Gen.Virol"71，2099-2105，19卯)；(vii)—種含有犬瘟熱病毒融合蛋白(CDV-F)的至少約10個(gè)氨基酸殘基的輔助T細(xì)胞表位，例如CDV-F的氨基酸第148-第283位(Ghosh等，Immunol.104,58-66,2001;國(guó)際專利公開(kāi)號(hào)WO000/46390);(viii)—種從MUC1粘蛋白(美國(guó)專利申請(qǐng)?zhí)朜o.0020018806)胞外串聯(lián)重復(fù)結(jié)構(gòu)域多肽序列衍生而來(lái)的人類輔助T細(xì)胞表位；(be)—種嚙齒動(dòng)物或人類流感病毒血細(xì)胞凝集素(IV-H)(Jackson等，Virol.198，613-623,1994)的輔助T細(xì)胞表位；和(x)—種牛或駱駝口蹄疫病毒(FMDV-0!Kaufbeuren病毒株)的VP3蛋白的輔助T細(xì)胞表位，它包含VP3的殘基第173位-176位或與另一FMDV病毒株相應(yīng)的氨基酸序列。如本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知，一種輔助T細(xì)胞表位可以為一種或多種不同哺乳動(dòng)物所識(shí)別。由此，在這里對(duì)任意輔助T細(xì)胞表位的命名并不應(yīng)被認(rèn)為限制了其中表位能被識(shí)別的物種的免疫系統(tǒng)。比如，一種嚙齒動(dòng)物輔助T細(xì)胞表位可以被小鼠，大鼠，兔，豚鼠，以及其他嚙齒動(dòng)物，或人類，或狗的免疫系統(tǒng)所識(shí)別。更優(yōu)選輔助細(xì)胞表位包含選自由以下所組成的組的氨基酸序列(i)來(lái)自IV-H的GALNNRFQIKGVELKS(SEQIDNO:l);(ii)來(lái)自IV-H的ALNNRFQIKGVELKS(SEQIDNO:18);(iii)來(lái)自MV-F的LSEIKGVIVHRLEGV(SEQIDNO:19);(iv)來(lái)自CDV-F的TAAQITAGIALHQSNLN(SEQIDNO:20);(v)來(lái)自CDV-F的IGTDNVHYKIMTRPSHQ(SEQIDNO:21);(vi)來(lái)自CDV-F的YKIMTRPSHQYLVIKLI(SEQIDNO:22);(vii)來(lái)自CDV-F的SHQYLVIKLIPNASLIE(SEQIDNO:23);(viii)來(lái)自CDV-F的KLIPNASLIENCTKAEL(SEQIDNO:24);(ix)來(lái)自CDV-F的LIENCTKAELGEYEKLL(SEQIDNO:25);(x)來(lái)自CDV-F的AELGEYEKLLNSVLEPI(SEQIDNO:26);(xi)來(lái)自CDV-F的KLLNSVLEPINQALTLM(SEQIDNO:27);(xii)來(lái)自CDV-F的EPINQALTLMTKNVKPL(SEQIDNO:28);(xiii)來(lái)自CDV-F的TLMTKNVKPLQSLGSGR(SEQIDNO:29);(xiv)來(lái)自CDV-F的KPLQSLGSGRRQRRFAG(SEQIDNO:30);(xv)來(lái)自CDV-F的SGRRQRRFAGWLAGVA(SEQIDNO:31);(xvi)來(lái)自CDV-F的FAGWLAGVALGVATAA(SEQIDNO:32);(xvii)來(lái)自CDV-F的GVALGVATAAQITAGIA(SEQIDNO:33);(xviii)來(lái)自CDV-F的GIALHQSNLNAQAIQSL(SEQIDNO:34);(xix)來(lái)自CDV-F的NLNAQAIQSLRTSLEQS(SEQIDNO:35);(xx)來(lái)自CDV-F的QSLRTSLEQSNKAIEEI(SEQIDNO:36);(xxi)來(lái)自CDV-F的EQSNKAIEEIREATQET(SEQIDNO:37);(xxii)來(lái)自CDV-F的SSKTQTHTQQDRPPQPS(SEQIDNO:38);(xxiii)來(lái)自CDV-F的QPSTELEETRTSRARHS(SEQIDNO:39);(xxiv)來(lái)自CDV-F的RHSTTSAQRSTHYDPRT(SEQIDNO:40);(xxv)來(lái)自CDV-F的PRTSDRPVSYTMNRTRS(SEQIDNO:41);(xxvi)來(lái)自CDV-F的TRSRKQTSHRLKNIPVH(SEQIDNO:42);(xxvii)來(lái)自CDV-F的TELLSIFGPSLRDPISA(SEQIDNO:43);(xxviii)來(lái)自CDV-F的PRYIATNGYLISNFDES(SEQIDNO:44);(xxix)來(lái)自CDV誦F的CIRGDTSSCARTLVSGT(SEQIDNO:45);(xxx)來(lái)自CDV-F的DESSCVFVSESAICSQN(SEQIDNO:46);(xxxi)來(lái)自CDV-F的TSTIINQSPDKLLTFIA(SEQIDNO:47);(xxxii)來(lái)自CDV-F的SPDKLLTFIASDTCPLV(SEQIDNO:48);(xxxiii)來(lái)自MUC-l的STAPPAHGVTSAPDTRAPGSTAPP(SEQIDNO:49);(xxxiv)來(lái)自MUC-l的GVTSAPDTRPAPGSTASSL(SEQIDNO:50);(xxxv)來(lái)自MUC-l的GVTSAPDTRPAPGSTASL(SEQIDNO:51);(xxxvi)來(lái)自而C-1的TAPPAHGVTSAPDTRPAPGSTAPPKKG(SEQIDNO:52);(xxxvii)來(lái)自MUC-1的STAPPAHGVTSAPDTRPAPGSTAPPK(SEQIDNO:53);(xxxviii)來(lái)自FMDV-VP3蛋白的GVAE(SEQIDNO:54);(xxxix)來(lái)自FMDV-VP3蛋白的TASGVAETTN(residues170to179)(SEQIDNO:55);以及(xl)來(lái)自FMDV的TAKSKKFPSYTATYQF(SEQIDNO:56)。在這里所公開(kāi)的輔助T細(xì)胞表位的目的是僅用于例舉。采用本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的標(biāo)準(zhǔn)多肽合成技術(shù)，可以很容易用其他不同的輔助T細(xì)胞表位取代在這里所提到的輔助T細(xì)胞表位，使本發(fā)明中的脂肽適用于不同的物種。因此，并不排除本領(lǐng)域研究人員所熟知的，對(duì)引起或增強(qiáng)靶物種免疫應(yīng)答有用的額外輔助T細(xì)胞表位。采用體外T細(xì)胞刺激技術(shù)的詳細(xì)分析可以鑒定額外輔助T細(xì)胞表位的組分蛋白質(zhì)，蛋白質(zhì)片斷和多肽進(jìn)行詳細(xì)地鑒定，進(jìn)而鑒定出適合的序歹!l(Goodman和Sercarz,Ann.Rev.Immunol"1,465,(1983);Berzofsky,In:"TheYearinImmunology,Vol.2"第151頁(yè)，Karger，Basel,1986;以及Livingstone和Fathman,Ann.Rev.Immunol"5，477，1987)。B細(xì)胞表位可以方便地衍生自病毒，原核或真核有機(jī)體的免疫原性蛋白質(zhì)，脂蛋白或糖蛋白的氨基酸序列，包括但不限于衍生自哺乳動(dòng)物受試者或細(xì)菌，真菌，原生動(dòng)物或感染了所述受試者的寄生蟲(chóng)的抗原。針對(duì)其期望獲得免疫應(yīng)答的獨(dú)特型及抗獨(dú)特型B細(xì)胞表位被明確包括在內(nèi)，比如脂質(zhì)修飾的B細(xì)胞表位?；蛘?，B細(xì)胞表位可以是一種碳水化合物抗原，比如一種ABO血型抗原，移植抗原(比如Galal-3Gal卩畫(huà)4N-乙酰-D-葡糖胺；Sandrinetal.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA90，11391-11395，1993;Galilietal.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA84，1369-1373，1987;Schofieldetal.，Nature418:785-789,2002)或其綴合物。當(dāng)對(duì)哺乳動(dòng)物施用時(shí)，B細(xì)胞表位可以引起抗體的生成，優(yōu)選中和抗體，更優(yōu)選高滴度的中和抗體。優(yōu)選較短的B細(xì)胞表位用以促進(jìn)肽的合成。優(yōu)選B細(xì)胞表位不超過(guò)約30個(gè)氨基酸長(zhǎng)度。更優(yōu)選B細(xì)胞表位序列不超過(guò)約25個(gè)氨基酸殘基或更短，更優(yōu)選少于20個(gè)氨基酸殘基更優(yōu)選只有約5-20個(gè)氨基酸殘基長(zhǎng)度。優(yōu)選合成多^:呈現(xiàn)出模擬天然多肽構(gòu)象的構(gòu)象，B細(xì)胞表位衍生自該天然多肽。優(yōu)選來(lái)源于寄生蟲(chóng)的B細(xì)胞表位與有利什曼原蟲(chóng)，瘧疾，錐蟲(chóng)病，巴倍蟲(chóng)病或血吸蟲(chóng)病相關(guān)，比如，選自由以下所組成的組的B細(xì)胞表位(i)一種惡性瘧原蟲(chóng)的B細(xì)胞表位(NANP)3(Goodetal.,J.Exp.Med.164,6551986);(ii)—種疙原蟲(chóng)環(huán)子孢子的B細(xì)胞表位(Goodetal,ProteinSci.，235,1059，1987);(iii)一種含有丄e/Awa剛'adortov朋/重復(fù)多肽第326-343位氨基酸殘基的B細(xì)胞表位(Liew等，J.Exp.Med.172,1359(1990》；(iv)—種Sc/u'"cwomago"必'P30表面蛋白的B細(xì)胞表位(Darcy等，J.Immunol.149，3636(1992));以及(v)—禾中SchistosomamansoniSm-28GST抗原(Wolowxzuketal"J.Immunol146:1987(1991))的B細(xì)胞表位。優(yōu)選病毒特異性B細(xì)胞表位來(lái)自于輪狀病毒，皰疹病毒，冠狀病毒，細(xì)小核糖核酸病毒(即Apthovirus)，呼吸道合胞病毒，流感病毒，副流感病毒，腺病毒，痘病毒，牛皰疹病毒I型，牛病毒性腹瀉病毒，牛輪狀病毒，犬瘟熱病毒(CDV)，馬鼻炎A型病毒(ERAV)，馬鼻炎B型病毒(ERBV)，口蹄疫病毒(FMDV)，麻疹病毒(MV)，人免疫缺陷病毒(HIV)，貓免疫缺陷病毒(FIV)，埃-巴二氏病毒(EBV)，或肝炎病毒等，和/或可產(chǎn)生針對(duì)上述病毒的抗體。適合的病毒性B細(xì)胞表位包括且不限于來(lái)自于選自由下列物質(zhì)所組成的組的表位-(i)HlVgpl20V3環(huán)，氨基酸殘基308-311(Jatsushita等，J.Virol.62,2107(1988》；(ii)fflVgpl20氨基酸殘基428-443(Ratneretal"Nature313:277(1985》；(iii)HIVgpl20氨基酸殘基112-124(Berzofskyetal,Nature334，706(1988));(iv)—種HIV逆轉(zhuǎn)錄酶的B細(xì)胞表位(Hosmalinetal.Proc.NatlAcad.Sci.(USA)87，2344(1990));(v)流感病毒核蛋白氨基酸殘基335-349(Townsendetal.Cell44，959(1986));(vi)流感病毒核蛋白氨基酸殘基366-379(Townsend等，Cell44,959(1986));(vii)流感病毒紅血球凝集素氨基酸殘基48-66(Mills等，J.Exp.Med.163,1477(1986));;(viii)流感病毒紅血球凝集素氨基酸殘基111-120(Hackett等，J.Exp.Med158,294(1983));;(ix)流感病毒紅血球凝集素氨基酸殘基114-131(LambandGreen，Immunology50,659(1983));(x)埃-巴二氏病毒LMP氨基酸殘基43-53(Thorley-Lawson等，Proc.NatlAcad.Sci.(USA)84，5384(1987));(xi)乙型肝炎病毒表面抗原氨基酸殘基95-109(Milich等，J.Immunol.134，4203(1985));(xii)乙型肝炎病毒表面抗原氨基酸殘基140-154;(xiii)乙型肝炎病毒Pre-S抗原氨基酸殘基120-132(Milich等，J.Exp.Med.164，532(1986));(xiv)單純皰疹病毒gD蛋白氨基酸殘基5-23(Jayaraman等，J.Immunol.151,5777(1993));(xv)單純皰疹病毒gD蛋白氨基酸殘基241-260(Wyckoff等,Immunobiol.,177,134(1988));(xvi)狂犬病糖蛋白氨基酸殘基32-44(MacFarlan等，J.Immunol.133,2748(1984》；(xvii)至少含有口蹄疫病毒血清型O,的VP1衣殼蛋白的氨基酸殘基134-168，或殘基137-160，或殘基142-160，或殘基137-162，或殘基145-150，或其他相應(yīng)的病毒血清型氨基酸殘基，比如血清型A，C，SAT1，SAT2，SAT3或ASIA1(US5,864,008和6，107，021)的主要口蹄疫病毒細(xì)胞表位；以及(xviii)丙型肝炎病毒(HCV)變種AD78病毒E2蛋白的高變區(qū)1(HVR1)(Zibertetal.，J,Virol.71,4123-4127,1997)。優(yōu)選細(xì)菌特異性B細(xì)胞表位來(lái)自于巴斯德菌，放線菌，嗜血桿菌，Listeriamonocytogenes,分支桿菌，葡萄球菌，大腸桿菌禾Q志賀菌等，和/或可產(chǎn)生針對(duì)上述細(xì)菌的抗體。適合的細(xì)菌性B細(xì)胞表位包括但不限于選自由以下所組成的組的多肽(i)結(jié)核分枝桿菌65Kd蛋白氨基酸殘基112-126(Lambetal.，EMBOJ"6，1245(1987》；(ii)結(jié)核分枝桿菌65Kd蛋白氨基酸殘基163-184(Lambetal.，EMBOJ"6,1245(1987》；(iii)結(jié)核分枝桿菌65Kd蛋白227-243氨基酸殘基(Lambetal.，EMBOJ.，6，1245(1987));(iv)結(jié)核分枝桿菌65Kd蛋白242-266氨基酸殘基(Lambetal.,EMBOJ.，6,1245(1987));(v)結(jié)核分枝桿菌65Kd蛋白437-459氨基酸殘基(Lambetal.,EMBOJ"6,1245(1987》；(vi)結(jié)核分枝桿菌ESAT-6蛋白殘基3-15(Mortenetal.,Infect.Immun.66，717-723，1998);(vii)結(jié)核分枝桿菌ESAT-6蛋白殘基40-62(Mortenetal.,Infect.Immun.66,717—723，1998);(viii)瘰疬分枝桿菌a-抗原殘基279-290(Mikikoetal.，Microb.Path.23,95—100，1997);(ix)金黃色葡萄球菌核酸酶蛋白氨基酸殘基61-80(Finnegan等,J.Exp.Med.164,897(1986));(x)大腸桿菌熱穩(wěn)定腸毒素的一種B細(xì)胞表位(Cardenasetal.,Infect.Immunity61,4629(1993));(xi)大腸桿菌熱不穩(wěn)定腸毒素的一種B細(xì)胞表位(Clementsetal"Infect.Immunity53，685(1986));(xii)宋內(nèi)志賀菌I型抗原的一種B細(xì)胞表位(Formaletal，Infect.Immunity34，746(1981));(xiii)來(lái)自于A群鏈球菌的一種B細(xì)胞表位，優(yōu)選衍生自M蛋白，更優(yōu)選衍生自M蛋白的C末端半部分，更優(yōu)選衍生自M蛋白的保守的C末端半部分的最小化，螺旋狀的非寄主交叉反應(yīng)肽，它包含有一種用于保持螺旋的折疊和在所述最小化螺旋狀的非寄主交叉反應(yīng)多肽內(nèi)所呈現(xiàn)的抗原性的非M蛋白肽。比如，該非M蛋白肽(例如J14肽)可以用化學(xué)方法與一種或多種血清型的M蛋白多肽相連，使得免疫原可以指示所有懸垂于烷烴主鏈的單個(gè)肽，因此具有了極好的免疫原性和保護(hù)。(US6，174，528;Brandtetal.,Nat.Med.6:455-459，2000)。(xiv)—種霍亂毒素B亞基(CTB)的B細(xì)胞表位，比如由KazemiandFinkelsteinMol.Immunol.28，865-876，1991所描述；(x力一種炭疽桿菌(anthrax)蛋白的B細(xì)胞表位，比如一種來(lái)源于炭疽外生孢子外壁例如250kDa糖蛋白的B細(xì)胞表位(Sylvestreetal.,In:Proc.4thInt.Conf.Anthrax,StJohn'sCollegeAnnapolid，Mayl肌d，CAJune10-13,2001,Abstract31B)，以及(xvi)—種來(lái)源于破傷風(fēng)蛋白的B細(xì)胞表位，比如破傷風(fēng)類毒素蛋白。優(yōu)選來(lái)自于哺乳動(dòng)物受試者的B細(xì)胞表位衍生自一種腫瘤抗原，和/或可產(chǎn)生針對(duì)該腫瘤抗原的抗體。腫瘤抗原通常是天然的或外源的抗原，它的表達(dá)與腫瘤的發(fā)育，生長(zhǎng)，存在或復(fù)發(fā)相關(guān)。因?yàn)槟[瘤抗原對(duì)于將異常組織從正常組織區(qū)分開(kāi)是有用的，它們可以用做治療干涉的靶。腫瘤抗原是本領(lǐng)域中所熟知的。實(shí)際上，已有幾個(gè)例子被詳細(xì)描述，且是目前關(guān)于很感興趣的腫瘤特異性治療的產(chǎn)生的焦點(diǎn)。腫瘤抗原非限制性的例子有癌胚抗原(CEA)，前列腺特異性抗原(PSA)，黑素瘤抗原(MAGE，BAGE，GAGE)和粘蛋白，比如固C-l。或者，優(yōu)選來(lái)源于哺乳動(dòng)物受試者的B細(xì)胞表位衍生自人類或其他哺乳動(dòng)物比如豬的透明帶蛋白例如ZP3(ChamberlinandDeanProc.Natl.Acad.Sci.(USA)87，6014-6018,1990)或ZP3a(Yurewiczetal.,Biochim.Biophys.Acta1174,211-214,1993)。在這一類B細(xì)胞表位中，尤其優(yōu)選的是人ZP3氨基酸殘基323-341(Chamberlin和DeanProc.Natl.Acad.Sci.(USA)87,6014-6018，1990);豬ZP3a氨基酸殘基8-18，或殘基272-283或殘基319-330(Yurewicz等，Biochim.Biophys.Acta1174,211-214，1993)。更優(yōu)選哺乳動(dòng)物B細(xì)胞表位來(lái)源于如過(guò)飽激素(即瘦蛋白)，消化激素(即胃泌素)，生殖性肽類激素(即黃體素釋放激素LHRH)，促卵泡素(FSH)，黃體素(LH)，人絨毛膜促性腺激素(hCG;Carlsenetal.,J,Biol.Chem.248,6810-6827,1973)等肽激素，或者FSH受體(Kraaijetal.,,T.Endocrinol.158,127-136,1998)等激素受體，且/或可產(chǎn)生與其相對(duì)應(yīng)的抗體。更優(yōu)選哺乳動(dòng)物B細(xì)胞表位來(lái)源于肽激素，比如過(guò)飽激素(即瘦蛋白)，消化激素(即胃泌素)或生殖性肽類激素(即黃體素釋放激素LHRH)，促卵泡素(FSH)，黃體素(LH)，人絨毛膜促性腺激素(hCG;Carlsenetal.,J.Biol.Chem.248,6810-6827,1973)，或者激素受體，如FSH受體(Kraaijetal.，J.Endocrinol.158,127-136，1998)，且/或可產(chǎn)生與其相對(duì)應(yīng)的抗體。在這一類B細(xì)胞表位中，尤其優(yōu)選的是具有抗原性且不與LH發(fā)生交聯(lián)的b-hCG碳末端部分(CTR)(Carlsenetal.,J.Biol.Chem.248,6810-6827，1973)。在某個(gè)具體的優(yōu)選實(shí)施例中，含有B細(xì)胞表位多肽的氨基酸序列是從下面挑選出來(lái)的(i)來(lái)源于LHRH的EHWSYGLRPG(在這里將其稱之為L(zhǎng)HRH1-10,SEQIDNO:2);(ii)來(lái)源于LHRH的HWSYGLRPG(在這里將其稱之為L(zhǎng)HRH2-10,SEQIDNO:3);(iii)來(lái)源于LHRH的GLRPG(在這里將其稱之為L(zhǎng)HRH6-10，SEQIDNO:4);(iv)來(lái)自于Leishmanimajor的EAEEAARLQA;(iv)從下述序列中挑選出來(lái)含有口蹄疫病毒非結(jié)構(gòu)蛋白3A，3B或3C(美國(guó)專利6，048，538)的一段序列FRERTLTGQRACNDVNSE(SEQIDNO:58)，NPLETSGASTVGFRERTL(SEQIDNO:59)，IRETRKRQKMVDDAVNEY(SEQIDNO:60)，AKAPWKEGPYEGPVKKPV(SEQIDNO:61)，AGPLERQKPLKVKAKAPVV(SEQIDNO:62)，KVRAKLPQQEGPYAGPLER(SEQIDNO:63)，GPYTGPLERQRPLKVRAKL(SEQIDNO:64)，VGRLIFSGEALTYKDTVV(SEQIDNO:65)，TKHFRDTARMKKGTPVVGV(SEQIDNO:66)，以及SGAPPTDLQKMVMGNTKPV(SEQIDNO:67);(v)來(lái)源于口蹄疫病毒VP1主要細(xì)胞表位的NKYSASGSGVRGDFGSLAPRVARQLPASFNYGAIK(腦，107，021;SEQIDNO:68);(vi)從含有LYTKWHYRKWIKDTIVANP(SEQIDNO:69),AVKVMDLPQEPALGTTCYA(SEQIDNO:70)，IVGGWECEKHSQPWQVLVAS(SEQIDNO:71)，CAQVHPQKVTKFML(SEQIDNO:72)，YLMLLRLSEPAELTDDAVKVM(SEQIDNO:73),LLKNRFLRPGDDSSHDLMLLY(SEQIDNO:74),以及ILLGRHSLFHPEDTGQVFQVY(SEQIDNO:75)等序列中挑選出的一段前列腺特異性抗原(US6,326,471);(vii)來(lái)源于b-Hcg的TCDDPRFQDSSSSKAPPPSLPSPSRLPGPSDTPILPQ序列(SEQIDNO:76);(viii)來(lái)源于FSH受體的CQDSKVTEIPTLPRNAI序列(SEQIDNO:77);(ix)來(lái)源于人ZP3蛋白的NKGDCGTPSHSRRQPHVMS序列(SEQIDNO:78);(x)從含有WLCFPLCLALP(SEQIDNO:79)，LGGLYCGPSSF(SEQIDNO:80),GSITRDSIFRLR(SEQIDNO:81)，SALPVNIQWTL(SEQIDNO:82)，ELQIAKDERYGS(SEQIDNO:83)和VKLLREPIYVEV(SEQIDNO:84)等序列中挑選出的一段豬ZP3a蛋白序列；(xi)來(lái)源于癌胚抗原的PPAQYSWLIDGN(CEA;SEQIDNO:85);(xii)從含有ANASQTDNGVNRSGSEDPTV(SEQIDNO:86)和PETKHPKKGVEKYGPEASAF(SEQTDNO:87)的序列中挑選出的一段葡萄球菌核酸酶序列(Coneetal.，J.Biol.Chem.246，3103-3110.簡(jiǎn))；(xiii)從含有LVLLDYQGMLPVCPL(SEQIDNO:88)和TKPSDGNCTCIPIPS(SEQIDNO:89)的序列中挑選出的一段乙型肝炎病毒表面抗原序列(KobayashiandKoike,Gene30,227-232，1984);(xiv)來(lái)源于乙型肝炎病毒前體表面抗原的MQWNSTTFHQALL(SEQIDNO:90);(xv)從含有AAFEDLRVSSnRGT(SEQIDNO:91)和SNENMETMDSSTLE(SEQIDNO:92)的序列中挑選出的一段流感病毒和蛋白序列(Gregoryetal.，J.Gen.Virol.82，1397-1406,2001);(xvi)從含有HPLILDTCTIEGLIYGNPS(SEQIDNO:93)，YQRIQIFPDT(SEQIDNO:94)，和IQIFPDTIWNVSYSGTSK(SEQIDNO:95)等的序列中挑選出的一段流感病毒紅血球凝集素序列；(xvii)來(lái)源于口蹄疫病毒衣殼糖蛋白VP1的CKYSASGSGVRGDFGSLAPRVARCLPASFNTGAIKNKY序列(SEQIDNO:96);(xviii)從含有EQQWNFAG正AAA(SEQIDNO:97)和AAAWGGSGSEAYQGVQQKWDATA(SEQIDNO:98)的序列中挑選出的一段結(jié)核分枝桿菌ESAT-6蛋白序列；(xix)來(lái)源于HCV的GGPTRTIGGSQAQTASGLVSMFSVGPSQK序列(SEQIDNO:99);(xx)來(lái)源于M.jcn/w/acewma抗原的KFQDAYNAAGGH(SEQIDNO駕)；(xxi)來(lái)源于A群鏈球菌M蛋白(在這里將其稱之為"J14")的KQAEDKVKASREAKKQVEKALEQLEDKVK(SEQIDNO:101);和(xxii)來(lái)源于胃泌素(即含有胃泌素C-末端5個(gè)氨基酸殘基的五肽胃泌素)的GWMDF(SEQIDNO:102)。顯然，從以上描述可知，脂肽的肽部分可以方便的以單一氨基酸鏈的形式進(jìn)行合成，因此，不需要合成后的修飾來(lái)?yè)饺雰煞N表位。特別優(yōu)選含有被連接到流感病毒紅血球凝集素的輔助T細(xì)胞表位(SEQIDNO:l)或CDVF的輔助T細(xì)胞表位(SEQIDNO:20，24，26或44)的LHRH(SEQIDNO:2或3或4)的高免疫原性B細(xì)胞表位的多肽部分，比如含有選自由以下所組成的組的氨基酸序列的多肽(i)GALNNRFQIKGVELKSEHWSYGLRPG(SEQIDNO:5);(ii)EHWSYGLRPGGALNNRFQIKGVELKS(SEQIDNO:6);(iii)GALNNRFQIKGVELKSKE而SYGLRPG(SEQIDNO:7);(iv)EHWSYGLRPGKGALNNRFQIKGVELKS(SEQIDNO:8);(v)KLIPNASLIENCTKAELKHWSYGLRPG(SEQIDNO:9);(vi)AELGEYEKLLNSVLEPIKEHWSYGLRPG(SEQIDNO:10);(vii)TAAQITAGIALHQSNLNKEHWSYGLRPG(SEQIDNO:ll);(viii)PRYIATNGYLISNFDESKEHWSYGLRPG(SEQIDNO:12);(ix)KLIPNASLIENCTKAELKGLRPG(SEQIDNO:13);(x)AELGEYEKLLNSVLEPIKGLRPG(SEQIDNO:14);(xi)TAAQITAGIALHQSNLNKGLRPG(SEQIDNO:15);(xii)PRYIATNGYLISNFDESKGLRPG(SEQIDNO:16);(xiii)KLIPNASLIENCTKAELHWSYGLRPG(SEQIDNO:103);以及(xiv)KLIPNASLIENCTKAELGLRPG(SEQIDNO:104)。在一個(gè)具體的優(yōu)選實(shí)施方式中，LHRH表位(即如SEQIDNO:2所示的LHRH1-10;如SEQIDNO:3所示的LHRH2-10或如SEQIDNO:4所示的LHRH6-10)被放置于可使得其C-末端甘氨酸殘基被暴露出來(lái)或不在內(nèi)部的位置。由此，特別優(yōu)選如SEQIDN05，7,或9-16中任一序列所示的構(gòu)型。在一個(gè)具體的實(shí)施例中，LHRH1-10被綴合于流感病毒紅血球凝集素輔助T細(xì)胞表位(即SEQIDNO:l)，如通過(guò)SEQIDNO:5或7所示的序列描述；LHRH2-10或LHRH6-10被綴合于CDV-F(SEQIDNO:24)的輔助T細(xì)胞表位，如通過(guò)SEQIDNO:9，13，103或104所示的序列描述。很顯然，其他的結(jié)合情況也是有可能發(fā)生的，并且應(yīng)包含在本發(fā)明中。在另一個(gè)實(shí)施例中，尤其優(yōu)選包含與CDV-F的輔助T細(xì)胞表位(SEQIDNO:24)或流感病毒紅血球凝集素(SEQIDNO:l)結(jié)合的具有高免疫原性的A群鏈球菌M蛋白(作為SEQIDNO:101的J14肽)B細(xì)胞表位的多肽部分，含有選自有以下所組成的組的氨基酸序列的多肽(i)KLIPNASL腿CTKAELKQAEDKVKASREAKKQVEKALEQLEDKVK(SEQIDNO:105);(ii)KLIPNASL冊(cè)CTKAELKKQAEDKVKASREAKKQVEKALEQLEDKVK(SEQIDNO:106);(m)GALNNRFQIKGVELKSKQAEDKVKASREAKKQVEKALEQLEDKVK(SEQIDNO:107);以及(iv)GALNNRFQIKGVELKSKKQAEDKVKASREAKKQVEKALEQLEDKVK(SEQIDNO:108)。在另一個(gè)實(shí)施例中，尤其優(yōu)選與CDV-F的輔助T細(xì)胞表位(SEQIDNO:24)或流感病毒紅血球凝集素(SEQIDNO:l)結(jié)合的具有高免疫原性五肽胃泌素的B細(xì)胞表位(如SEQIDNO:102)的多肽部分，比如含有選自有以下所組成的組的氨基酸序列的多月太-(i)KLIPNASLIENCTKAELGWMDF(SEQIDNO:109);(ii)KLIPNASLIENCTKAELKGWMDF(SEQIDNO:110);(iii)GALNNRFQIKGVELKSGWMDF(SEQIDNO:lll);以及(iv)GALNNRFQIKGVELKSKGWMDF(SEQIDNO:112)。本領(lǐng)域中的技術(shù)人員能方便的通過(guò)對(duì)具有SEQIDNO.5-16或SEQIDNO.103-112中的任一序列的輔助T細(xì)胞和/或B細(xì)胞表位進(jìn)行取代，以合成那些例舉的額外多肽。，比如如SEQIDNO:18-56中任一所示的輔助T細(xì)胞表位或任一SEQIDNO:57-102所示的B細(xì)胞表位。而且，根據(jù)靶物種和可見(jiàn)引起免疫應(yīng)答的抗原，本領(lǐng)域中的技術(shù)人員可從上述公布中選擇合適的輔助T細(xì)胞表位和B細(xì)胞表位o本領(lǐng)域技術(shù)人員可以針對(duì)特定的目的采用合適的方法，對(duì)這里描述的的多肽部分氨基酸序列包括那些被例舉的，如SEQIDNO:5-16和SEQIDNO:103-112所示的多肽，進(jìn)行修飾而不減弱他們的免疫功能。比如，可對(duì)特定的肽殘基進(jìn)行衍生化作用或化學(xué)修飾，以増強(qiáng)它們的免疫應(yīng)答或允許肽被偶合到其它的基團(tuán)上，尤其是脂質(zhì)。也可以在肽鏈內(nèi)部對(duì)特定的氨基酸進(jìn)行改變而不影響到肽的整個(gè)結(jié)構(gòu)或抗原性，這樣的改變被稱為"保守的"改變是依賴于殘基的疏水性或極性。側(cè)鏈的大小和域電荷也是測(cè)定那些取代是"保守的"的相關(guān)因素。本領(lǐng)域的技術(shù)人員熟知，獲得一種具有同等生物學(xué)功能的蛋白質(zhì)或多肽的定義意味著，可在分子內(nèi)限定的某一部分進(jìn)行有限次數(shù)的改變，以使得該分子具有在可接受范圍內(nèi)的等同生物學(xué)活性。在這里所定義的生物學(xué)功能等價(jià)物多肽，是指那些其中某些特定的氨基酸殘基可以被取代的多肽。具體的實(shí)施例中包含在多肽的氨基酸序列內(nèi)有1個(gè)，2個(gè)，3個(gè)，4個(gè)，5個(gè)或更多氨基酸進(jìn)行變化。當(dāng)然，大量具有不同取代的不同蛋白/多肽可以很容易地被制備并根據(jù)本發(fā)明被使用。本領(lǐng)域中技術(shù)人員應(yīng)明白以下的取代是允許的保守性取代(i)涉及到精氨酸，賴氨酸和組氨酸的取代；(ii)涉及到丙氨酸，甘氨酸，絲氨酸和(iii)涉及到苯丙氨酸，色氨酸和酪氨酸。摻入了這些保守性取代基的多肽在這里被定義為生物學(xué)功能等價(jià)物。本領(lǐng)域中都熟知氨基酸親水性指數(shù)對(duì)蛋白質(zhì)的互作生物學(xué)功能的重要性(Kyte和Doolettle，J.Mol。Biol，105-132，1982)。己知某些氨基酸可為其他具有相似親水性指數(shù)或分值的氨基酸所取代，并依然保留了相似的生物學(xué)活性。氨基酸的親水性指數(shù)也可用來(lái)確定生產(chǎn)功能等價(jià)物分子的保守性取代基?；谑杷院碗姾商卣?，每一種氨基酸都被指定了一種親水性指數(shù)異亮氨酸(+4，5);纈氨酸(+4.2);亮氨酸(+3.8);苯丙氨酸(+2.8);半胱氨酸(+2,5);甲硫氨酸(+1.9);丙氨酸(+1.8);甘氨酸(-0.4);蘇氨酸(-0.7);絲氨酸(-0.8);色氨酸(-0.9);酪氨酸(-1.3);脯氨酸(-1.6);組氨酸(-3.2);谷氨酸(-3.5);谷氨酰胺(-3.5);天冬氨酸(-3.5);天冬酰胺(-3.5);賴氨酸(-3.9)和精氨酸(-4.5)。在進(jìn)行基于親水性指數(shù)變化時(shí)，優(yōu)選親水性指數(shù)介于+/-0.2.之間的氨基酸的取代。更優(yōu)選該取代將涉及親水性指數(shù)介于+/-0.1之間的氨基酸，最優(yōu)選介于+/-0.05之間。在本領(lǐng)域中仍能理解進(jìn)行基于親水性的相似氨基酸的取代是很有效的，尤其是當(dāng)這些生物學(xué)功能等價(jià)蛋白或多肽是用來(lái)在如本發(fā)明中的免疫學(xué)實(shí)施例中進(jìn)行使用的時(shí)候(例如US4，554，101)。如在US4,554,101中所詳述的那樣，各氨基酸被指定具有以下的疏水性指數(shù)精氨酸(+3.0);賴氨酸(+3.0);天冬氨酸(+3.0+/-0.1);谷氨酸(+3.0+/-0.1);絲氨酸(+0.3);天冬酰胺(+0,2);谷氨酰胺(+0.2);甘氨酸(0);蘇氨酸(-0.4);脯氨酸(-0.5+/-0.1);丙氨酸(-0.5);組氨酸(-0.5);半胱氨酸(-1.0);甲硫氨酸(-1.3);纈氨酸(-1.5);亮氨酸(-1.8);異亮氨酸(-1.8);酪氨酸(-2.3);苯丙氨酸(-2.5);色氨酸(-3.4)?；谙嗨频挠H水性值的變化，優(yōu)選取代氨基酸得到疏水性指數(shù)介于+/-0.2.之間，更優(yōu)選+/-0.1之間，最優(yōu)選介于+/-0.05之間。一旦某多肽被認(rèn)定適于用做免疫原使用，就也可以預(yù)期其他具有相似空間結(jié)構(gòu)的化合物也可以用來(lái)模擬該多肽結(jié)構(gòu)的關(guān)鍵部分。這些可被稱為多肽模擬物的化合物，可以與本發(fā)明中的多肽相同的方式使用，因此也是功能性等價(jià)物。本領(lǐng)域中技術(shù)人員都熟知，可以采用化學(xué)設(shè)計(jì)和建模等技術(shù)獲得這樣的結(jié)構(gòu)功能性等價(jià)物。同樣，所有這些具有相似空間結(jié)構(gòu)的化合物也落在本發(fā)明的范圍。另一種確定修飾多肽"等價(jià)性"的方法涉及到功能方法。例如，一種給定的多肽被用來(lái)產(chǎn)生單克隆或多克隆抗體。這些抗體隨后可以用于對(duì)含有成千上萬(wàn)的簡(jiǎn)并多肽的文庫(kù)進(jìn)行篩選，至少在某種程度上可得到具有免疫性的等價(jià)物。當(dāng)然，這樣的結(jié)構(gòu)可能與用于產(chǎn)生抗體的多肽具有很大的序列同源性，但也有可能相差很大。對(duì)多肽部分的合成可以采用諸如Merrifield氏合成方法的標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)(Memfield，JAmChemSoc，85,:2149-2154,1963)及其改進(jìn)技術(shù)(參見(jiàn)，例如，SyntheticPeptides:AUser'sGuide,Grant,ed.(1992)W.H.Freeman&Co.,NewYork,pp.382;Jones(1994)，TheChemicalSynthesisofPeptides,ClarendonPress,Oxford,pp.230.);Barany,G.andMerrifield，R.B.(1979)inThePeptides(Gross,E.andMeienhofer，J.eds.)，vol.2,pp.1-284，AcademicPress,NewYork;Wtinsch,E.，ed.(1974)SynthesevonPeptideninHouben陽(yáng)WeylsMethodenderOrganischenChemie(Miller,E.，ed.),vol.15，4thedn.，Parts1and2,Thieme，Stuttgart;Bodanszky,M.(1984)PrinciplesofPeptideSynthesis,Springer-Verlag，Heidelberg;Bodanszky,M.&Bodanszky,A.(1984)ThePracticeofPeptideSynthesis,Springer-Verlag,Heidelberg;Bodanszky,M.(1985)Int.J.PeptideProteinRes.25，449-474)。脂質(zhì)部分可包含任何從C2到C30的飽和，單不飽和或多不飽和直鏈或支鏈脂酰基，優(yōu)選脂肪酸基團(tuán)選自由棕櫚酰，肉豆蔻酰，硬脂酰，月桂酰，辛酰和癸酰所組成的組。脂氨基酸是本文中特別優(yōu)選的脂質(zhì)部分。術(shù)語(yǔ)"脂氨基酸"在這里是指被共價(jià)附著于是氨基酸殘基的1個(gè)，2個(gè)，3個(gè)或多個(gè)脂質(zhì)的分子，比如半胱氨酸或絲氨酸或賴氨酸及其類似物。在一個(gè)獨(dú)特的優(yōu)選實(shí)施例中，脂氨基酸包含半胱氨酸，或者可選地含有一個(gè)，兩個(gè)或多個(gè)精氨酸或絲氨酸殘基，或者可選地為6-氨基己酸。脂質(zhì)部分優(yōu)選是具有以下通式(VII)結(jié)構(gòu)的化合物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage47</formula>其中(i)X是選自由硫，氧，二硫鍵(-S-S-)，亞甲基(-CH2-)和氨基(-NH-)所組成的組；(ii)m的值為整數(shù)l或2;(iii)n的值為整數(shù)0到5;(iv)Ri選自由氫，羰基(-CO-)和R，-CO-所組成的組，其中R，選自由具有7_25個(gè)碳原子的烷基、烯基或炔基所組成的組，其中所述烷基、烯基或炔基可以選擇性的被羥基，氨基，氧代，?；颦h(huán)烷基所取代；(v)R2基團(tuán)選自由R，-CO-O-，R，-O-，R，-O-CO-，R，-NH-CO-和R'-CO-NH-所組成的組，其中R'選自由具有7-25個(gè)碳原子的烷基、烯基或炔基的基團(tuán)中挑選出來(lái)的，其中所述垸基、烯基或炔基可以選擇性的被羥基，氨基，氧代，?；颦h(huán)烷基所取代；(vi)R3基團(tuán)選自由R，-CO-O-，R，-O-，R，-O-CO-，R，-NH-CO畫(huà)和R'-CO-NH-所組成的組，其中R'選自由具有7-25個(gè)碳原子的烷基、烯基或炔基所組成的組，其中所述烷基、烯基或炔基可以選擇性的被羥基，氨基，氧代，?；颦h(huán)烷基所取代，其中R,,R2，和R3可以相同也可以不同。根據(jù)取代基的不同，通用結(jié)構(gòu)vn的脂質(zhì)部分可以成為一個(gè)手性分子，其中直接或間接與R,和R2整體共價(jià)相連的碳原子是不對(duì)稱的右旋或左旋(即，R或S)構(gòu)型。優(yōu)選，X為硫；m和n都為1;R，選自由氫和R'-CO所組成的組，其中R'是具有7-25個(gè)碳原子的垸基，R2和R3選自由R，-CO-O-，R，-O-，R，-O-CO-，R，-NH-CO-和R，-CO-NH-所組成的組，其中R，是具有7-25個(gè)碳原子的烷基。優(yōu)選，R'是選自由棕櫚酰，肉豆蔻酰，硬脂酰，月桂酰，辛酰基和癸?；M成的組。更優(yōu)選，R'是選自由棕櫚?；舛罐Ⅴ；?，月桂?；?，辛?；凸秕；M成的組。所述脂質(zhì)部分中的每一個(gè)R'整體可以相同也可以不同。在一個(gè)具體的優(yōu)選實(shí)施例中，X為硫；m和n都為l;Rt是從含有氫或R'-CO-，其中R'選自由棕櫚酰，硬脂酰，月桂酰和辛酰所組成的組中R2和R3都是R'-CO-0-，其中R'選自由棕櫚酰，硬脂酰，月桂酰和辛酰所組成的組。尤其優(yōu)選其中R'是棕櫚酰的化合物如之前的式(I)和分式(II)中所示。脂質(zhì)部分也可以下面的式(vm)形式出現(xiàn)R,-NH-CH-COOH(i)R4選自(i)一種含有約7個(gè)-約25個(gè)碳原子的a-?；舅釟埢?；(ii)一種a-烷基-e羥基脂肪酸殘基；(m)—種P-羥基酯或a-垸基-e羥基脂肪酸殘基，其中酯基優(yōu)選含有超過(guò)8個(gè)碳原子的直鏈或支鏈；和(iv)脂氨基酸殘基；以及(ii)R5是氫或者某種氨基酸的側(cè)鏈。優(yōu)選，R4含有約10個(gè)-約20個(gè)之間的碳原子，更優(yōu)選約14個(gè)-約18個(gè)之間的碳原子。當(dāng)R4是一個(gè)脂氨基酸殘基時(shí)，R4和Rs的側(cè)鏈可以形成一種共價(jià)附著。比如，當(dāng)R4含有選自由賴氨酸，鳥(niǎo)氨酸，谷氨酸，天冬氨酸，賴氨酸衍生物，鳥(niǎo)氨酸衍生物，谷氨酸衍生物和天冬氨酸衍生物所組成的組的氨基酸時(shí)，該氨基酸或衍生物的側(cè)鏈就會(huì)通過(guò)酰胺或酯健共價(jià)附著于Rs上。優(yōu)選，如通式VIII所示的結(jié)構(gòu)的脂質(zhì)部分選自由N，N'-二酰賴氨酸；N，N'-二酰鳥(niǎo)氨酸；二(單烷基)氨基化合物或谷氨酸酯；二(單烷基)氨基化合物或天冬氨酸酯；絲氨酸，高絲氨酸或蘇氨酸的N，O-二酰衍生物；以及半胱氨酸或高胱氨酸的N，S-二酰衍生物。尤其是那些疏水性不超過(guò)Pam3Cys(分子式(I))的兩親性分子，也是優(yōu)選的分子。式(I)，(II)，(VI)或(VIII)的脂質(zhì)部分都經(jīng)過(guò)了添加一個(gè)或多個(gè)間隔基分子的合成中或合成后的再修飾，優(yōu)選間隔基包含碳，更優(yōu)選包含一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基。這些被方便地添加到脂質(zhì)結(jié)構(gòu)上，通過(guò)傳統(tǒng)的縮合反應(yīng)，加成反應(yīng)，取代反應(yīng)或氧化反應(yīng)中的末端羧基。這些間隔分子的作用是用來(lái)將脂質(zhì)部分和多肽部分分隔開(kāi)，以降低分子的空間位阻效應(yīng)，這可能會(huì)避免降低脂肽產(chǎn)物的免疫原性。對(duì)這個(gè)目的而言，尤其優(yōu)選精氨酸或絲氨酸二聚體，三聚體，四聚體等或可選地為6-氨基己酸。優(yōu)選，這樣的間隔含有一個(gè)末端保護(hù)氨基酸殘基，使得后來(lái)經(jīng)過(guò)修飾的脂氨基酸可以綴合于多肽上。針對(duì)本實(shí)施例所合成的經(jīng)修飾的模式脂氨基酸可見(jiàn)于分子式(III)和(IV)，它們可以通過(guò)分別向分子式(I)和(II)添加一個(gè)絲氨酸同型二聚體來(lái)實(shí)現(xiàn)。如文中所例舉，對(duì)這個(gè)目的而言，式(I)的Pam3Cys或式(II)的Pam2Cys被方便地合成得到式(III)的脂氨基酸Pam3Cys-Ser-Ser或式(IV)的脂氨基酸Pam2Cys-Ser-Ser。式(in):<formula>formulaseeoriginaldocumentpage50</formula>式(IV):<formula>formulaseeoriginaldocumentpage50</formula>作為添加到脂質(zhì)部分間隔基的替代物，間隔基可以被添加于多肽部分里的內(nèi)部賴氨酸殘基的S-氨基或賴氨酸類似物的末端側(cè)鏈基團(tuán)上，或者是例如精氨酸或絲氨酸同型二聚體，同型三聚體或同型四聚體等的短肽，或者是對(duì)氨基酸殘基進(jìn)行順序加成，得到一條支鏈多肽。這種方法的優(yōu)勢(shì)在于，可對(duì)內(nèi)部賴氨酸殘基的S-氨基或賴氨酸類似物的末端側(cè)鏈基團(tuán)進(jìn)行修飾，從而在對(duì)間隔分子進(jìn)行加成反應(yīng)時(shí)獲得特異性。很自然，為了避免連續(xù)的間隔加成，該間隔的末端氨基酸殘基應(yīng)優(yōu)選被保護(hù)起來(lái)，這樣的話，脫保護(hù)可以促使脂質(zhì)部分綴合于支鏈多肽上。或者，間隔也可以通過(guò)傳統(tǒng)的親核取代反應(yīng)添加到多肽的未經(jīng)修飾的S-氨基上。然而，如果具有包含單個(gè)內(nèi)部賴氨酸或賴氨酸類似物殘基和一個(gè)封閉的N末端的氨基酸序列時(shí)，優(yōu)選采用這種方法。脂質(zhì)部分可以通過(guò)傳統(tǒng)的合成方法獲得，比如美國(guó)專利5,700,910和6,024,964中所描述的方法，或由Wiesmuller等，HoppeSeylersZurPhysiol.Chem.364,593(1983)，Zeng等，J.PeptSci2，66(1996)，Jones等，Xenobiotica5，155(1975),orMetzger等，Int.J.Pept.ProteinRes.38，545(1991)所描述的方法。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以很容易地對(duì)這些方法稍加修改，以獲得用于綴合與多肽的目的脂質(zhì)的合成。也可預(yù)期不同脂相互結(jié)合可用于本發(fā)明的脂肽中。比如，一種或兩種含有豆蔻?；闹|(zhì)或脂氨基酸通過(guò)內(nèi)部賴氨酸或賴氨酸類似物殘基被附著于多肽部分上，通過(guò)間隔基隨意地從多肽分隔開(kāi)。也不排除其他的組合。本發(fā)明中的脂肽很容易地被修飾后用于診斷用途。比如，通過(guò)添加一種天然的或合成的半抗原，抗生素，激素，類固醇，核苷，核苷酸，核酸，酶，酶底物，酶抑制劑，生物素，抗生物素蛋白，聚乙二醇，多肽部分(比如吞噬細(xì)胞增強(qiáng)激素，聚賴氨酸)，熒光標(biāo)記(比如FITC，RITC，丹磺酰，氨基苯二酰肼或香豆素)，生物熒光標(biāo)記，自旋標(biāo)記，生物堿，生物胺，維生素，毒素(比如地高辛，毒傘素，蛾膏蕈毒環(huán)肽，河豚毒素)或一種復(fù)合劑。又例如，提供了高的免疫原性和溶解性的脂肽，包括通過(guò)多肽的內(nèi)部賴氨酸s-氨基綴合的式(I)的Pani3Cys或式(II)的Pam2Cys或Ste2Cys或Lau2Cys或Oct2Cys，這樣的多肽包括(i)得自流感病毒紅細(xì)胞凝集素輕鏈的CD4+輔助T細(xì)胞表位的氨基酸序列(Jackson等，Virol.198,613-623，1994;GALNNRFQIKGVELKS;SEQIDNO:l)，或得自CDV-F蛋白的多肽的氨基酸序列(SEQIDNO:24);(ii)含有B細(xì)胞表位的多肽，含有選自由黃體生成激素釋放激素(LHRH;Fraser等，J.Endocrinol.63，399(1974);Fraser和Baker,J.Endocrinol.77，85(1978);"LHRH1-10"EHWSYGLRPG，SEQIDNO:2;"LHRH2-10"氨基酸序列HWSYGLRPG，SEQIDNO:3;或"LHRH6-10"GLRPG，SEQIDNO:4),A群鏈球菌(GAS)M蛋白(即SEQIDNO:101)和五肽胃泌素(即SEQIDNO:102)所組成的的組的氨基酸序列；(iii)位于所述CD4+輔助T細(xì)胞表位與所述B細(xì)胞表位之間的一個(gè)賴氨酸殘基；和可選地(iv)位于所述CD4+輔助T細(xì)胞表位內(nèi)部的一個(gè)賴氨酸殘基。脂肽的制備本發(fā)明的另一方面提供了一種制備含有以下成分的脂肽的方法(i)產(chǎn)生包含一種氨基酸序列的多肽，所述氨基酸序列包含(a)輔助T細(xì)胞(Th)表位的氨基酸序列和B細(xì)胞表位的氨基酸序列，其中所述的氨基酸序列是不同的；以及(b)—個(gè)或多個(gè)內(nèi)部賴氨酸殘基或內(nèi)部賴氨酸類似物殘基；以及(iii)直接地或間接地將所述一個(gè)或多個(gè)脂質(zhì)部分共價(jià)附著于所述一個(gè)或多個(gè)內(nèi)部賴氨酸殘基的s-氨基，或所述一個(gè)或多個(gè)內(nèi)部賴氨酸類似物殘基的末端側(cè)鏈基團(tuán)，以生產(chǎn)具有被附著于所述內(nèi)部賴氨酸殘基的s-氨基的脂質(zhì)部分，或具有被附著于所述內(nèi)部賴氨酸類似物殘基末端側(cè)鏈基團(tuán)的脂質(zhì)部分。優(yōu)選該方法還進(jìn)一步包含了脂質(zhì)部分的生產(chǎn)。在進(jìn)行多肽部分和脂質(zhì)部分的合成時(shí)，首選的是傳統(tǒng)的化學(xué)合成方法。優(yōu)選，通過(guò)選擇性的從內(nèi)部賴氨酸殘基或內(nèi)部賴氨酸類似物的末端側(cè)鏈基團(tuán)，尤其是末端側(cè)鏈的氨基去除一個(gè)封閉基團(tuán)(例如Mtt)，以便允許在該位置添加一個(gè)氨基酸殘基，一個(gè)間隔或脂質(zhì)部分，包括脂氨基酸。關(guān)于脂質(zhì)附著于多肽，可以通過(guò)本領(lǐng)域眾所周知的多肽合成方法便捷地對(duì)多肽官能團(tuán)加以保護(hù)，以確保在這些官能團(tuán)上不發(fā)生不需要的反應(yīng)。在熟知結(jié)合的過(guò)程之后，多肽的合成是在固體或如多聚物(比如Meirifidd樹(shù)脂)可溶性載體上進(jìn)行的，并可以附著于間隔基，氨基酸或脂質(zhì)。例如，內(nèi)部賴氨酸的e-氨基或內(nèi)部賴氨酸類似物的末端側(cè)鏈基團(tuán)可以用一組保護(hù)性基團(tuán)的其中一個(gè)加以保護(hù)。封閉基團(tuán)(也成為保護(hù)性基團(tuán)或掩護(hù)基團(tuán))是用來(lái)保護(hù)具有與偶合反應(yīng)有關(guān)的活性羧基的氨基酸的氨基，或者是用來(lái)保護(hù)具有與偶合反應(yīng)有關(guān)得的?；被冒被岬敏然?。為保證偶合的發(fā)生，封閉基團(tuán)必須在不打斷肽鍵或?qū)θ我桓街诙嚯牧硪徊糠值谋Ｗo(hù)性基團(tuán)得情況下去除。對(duì)固相的多肽合成來(lái)說(shuō)，經(jīng)多次處理依然穩(wěn)定的封閉基團(tuán)，對(duì)在肽鏈生長(zhǎng)時(shí)去除氨基保護(hù)基團(tuán)和重復(fù)的氨基酸偶合是必不可少的，并可用來(lái)保護(hù)氨基酸的側(cè)鏈。而且，通過(guò)肽-樹(shù)脂錨合來(lái)對(duì)多肽的C末端進(jìn)行的保護(hù)貫穿于合成過(guò)程的始終，直到需要將樹(shù)脂與其分開(kāi)為止。所以，通過(guò)明智的選擇正交保護(hù)的cc-氨基酸，脂質(zhì)和/或氨基酸在生長(zhǎng)多肽仍在樹(shù)脂上的時(shí)候被附著于其合適位置。優(yōu)選氨基保護(hù)基團(tuán)應(yīng)很容易去除但在偶合反應(yīng)和其他操作時(shí)保持穩(wěn)定，比如對(duì)側(cè)鏈基團(tuán)進(jìn)行修飾。優(yōu)選氨基封閉基團(tuán)選自由以下成分所組成的組(i)可在室溫和常壓條件下，經(jīng)過(guò)催化氫化，或在氨水中加入金屬鈉，在乙酸中加入氫溴酸，去除的芐氧羰基(Z或芐氧羰基)；(ii)可用t-丁氧基羰基疊氮化物(Boc)或二叔丁基碳酸氫鹽引入，用弱酸，如三氟乙酸(50%三氟乙酸溶于二氯甲垸)或溶于乙酸仁氧雜環(huán)己垸/乙酸乙酯的鹽酸去除的t-丁氧基羰基；(iii)在弱堿性，非水解條件下，比如使用伯胺和仲胺(20%哌啶溶于二甲基甲酰胺)切除的9-芴基甲基氧羰基(Fmoc);(iv)2-(4-聯(lián)苯)丙基(2)氧羰基(Bpoc);(v)2-硝基-苯次磺酸基(Nps);和(vi)二硫琥珀?；?Dts)。側(cè)鏈保護(hù)基團(tuán)則要根據(jù)形成合成多肽的氨基酸的功能性側(cè)鏈進(jìn)行選擇。側(cè)鏈保護(hù)基團(tuán)通常是基于Bzl或tBu基團(tuán)。在側(cè)鏈含有醇或羧酸的氨基酸一般以Bzl醚，Bzl酯，cHex酯，tBu醚或tBu酯的形式進(jìn)行保護(hù)。Fmoc氨基酸的側(cè)鏈保護(hù)需要在堿性條件穩(wěn)定，在弱酸性條件(TFA)下不穩(wěn)定的封閉基團(tuán)。例如，可使用Mtt(如Fmoc-lysine(Mtt)-OH)對(duì)賴氨酸的s-氨基進(jìn)行保護(hù)。又如，鹵化芐基衍生物，比如CIZ也可以用來(lái)在升高的酸性條件下保護(hù)賴氨酸側(cè)鏈。在一般條件下，胱氨酸的硫羥基，組氨酸的咪唑基或精氨酸的胍基都需要特別的保護(hù)。許多用于多肽合成的不同的保護(hù)基團(tuán)已被描述(ThePeptides,Gross等，eds.，Vol.3，AcademicPress,NewYork,1981)。在保護(hù)策略中最常用的是Boc/Bzl-策略和Fmoc/tBu策略。在Boc/Bzl-策略中，Boc用來(lái)保護(hù)氨基而基于Bzl或cHex的基團(tuán)則用來(lái)保護(hù)多種氨基酸的側(cè)鏈。Boc基團(tuán)在催化氫化條件下穩(wěn)定并被正交地用來(lái)與Z基團(tuán)一起對(duì)許多側(cè)鏈基團(tuán)進(jìn)行保護(hù)。在Fmoc/tBu策略中，F(xiàn)moc用來(lái)保護(hù)氨基而基于tBu的基團(tuán)則用來(lái)保護(hù)側(cè)鏈。多肽通過(guò)本領(lǐng)域所熟知的方法被脂化。標(biāo)準(zhǔn)的縮合反應(yīng)，加成反應(yīng)，取代反應(yīng)或氧化反應(yīng)(例如在內(nèi)部賴氨酸或內(nèi)部賴氨酸類似物的末端氨基與進(jìn)入氨基酸或多肽或脂氨基酸的羧基末端間形成的二硫化物架橋酰氨鍵形成)都可以將脂質(zhì)加成到多肽上。在另一個(gè)實(shí)施例中，本發(fā)明中的一種用作免疫原的多肽是通過(guò)化學(xué)選擇性絡(luò)合或化學(xué)結(jié)合來(lái)制備的。這樣的方法在本領(lǐng)域中己為大家熟知，允許單獨(dú)的肽成分通過(guò)化學(xué)或重組的方法，并隨后以適當(dāng)?shù)臉?gòu)型或構(gòu)象或順序進(jìn)行化學(xué)性絡(luò)合來(lái)制備(Nardin等，Vaccine16,590(1998);Nardin等，J.Immunol.166,481(2001);Rose等，Mol.Immunol.32,1031(1995);Rose等，Bioconjug.Chem7，552(1996);及Zeng等，Vaccine18,1031(2000)，它們?cè)谶@里通過(guò)引用被整合到本發(fā)明中)。脂肽配方脂肽在藥學(xué)上可接受的賦形劑或稀釋劑中被方便地配制，例如水性的溶劑，非水性的溶劑，無(wú)毒的賦形劑比如鹽，防腐劑，緩沖液等等。非水性溶劑的例子是丙二醇，聚乙二醇，植物油和可注射的有機(jī)酯，比如油酸乙酯。水溶性溶劑包括水，醇/水溶液，鹽溶液，胃腸外載體，比如氯化鈉，Ringer's右旋糖，等。防腐劑包括抗菌劑，抗氧化劑，螯合劑和惰性氣體。制藥成分中的Ph值和精確濃度可根據(jù)本領(lǐng)域的常規(guī)技術(shù)來(lái)進(jìn)行調(diào)節(jié)。盡管通常并不需要，往脂肽配方中加入外源佐劑也應(yīng)包括在本發(fā)明中。這樣的外源佐劑包括了所有可接受的免疫刺激性化合物，比如細(xì)胞因子，毒素或合成組分。典型的佐劑包括IL-1，IL-2，BCG，氫氧化鋁，N-乙酰-胞壁酰-I^-蘇氨酰-D-異谷氨酰胺(thur-MDP)，N-乙酰-去甲-胞壁酰-L-丙氨酰-D-異谷氨酰胺(CGP11637，也稱做nor-MDP)，忖-乙酰胞壁酰七-丙氨酰-0-異谷氨酰丄-丙氨酸-2-(l'-2'-二棕櫚酰-sn-甘油-3-羥基磷酰氧化)-乙胺(CGP1983A，MTP-PE)，脂質(zhì)A，MPL和RIBI，其中含有三種從細(xì)菌中分離到的成分，單磷酰脂質(zhì)A，海藻糖(trehalose)dimycolate和細(xì)胞壁骨架(MPL+TDM+CWS)于2%角鯊烯/Tween80乳濁液中。也可以將生物反應(yīng)調(diào)節(jié)物(BRM)與脂肽進(jìn)行共給藥，以下調(diào)抑制性T細(xì)胞的活性。典型的生物反應(yīng)調(diào)節(jié)物包括且不限于甲腈咪胍(CIM;1200mg/d)(Smith/Kline,PA，USA);茚甲新(IND;150mg/d)(Lederle，NJ，USA)或者是低劑量的環(huán)磷酰胺(CYP;75,150或300mg/m.sup.2)(JohnsonMead，NJ，USA).。脂肽在免疫中的使用本發(fā)明中新穎的脂肽與已知的抗原的脂肽綴合物的本質(zhì)區(qū)別在于它們提高的可溶性和免疫原性，以及在不施用額外佐劑的條件下引起免疫應(yīng)答的能力。由此，本發(fā)明脂肽的特別應(yīng)用就是用于抗體制造領(lǐng)域，合成疫苗制備，應(yīng)用抗體和抗體配基的診斷方法，以及用于獸醫(yī)和人類醫(yī)學(xué)的免疫治療。更特別的是，在對(duì)動(dòng)物受試者施用本發(fā)明的脂肽時(shí)，該脂肽可以誘導(dǎo)針對(duì)于B細(xì)胞表位部分的高滴度抗體的產(chǎn)生，并不需要佐劑來(lái)達(dá)到相似的抗體滴度。向受試者施用脂肽后會(huì)增強(qiáng)樹(shù)突細(xì)胞的成熟，也支持了上述的效用(即與在N末端偶合了脂質(zhì)的脂肽相比具有增強(qiáng)的抗原呈遞)。因此，本發(fā)明的第三方面提供了一種引起針對(duì)抗原B細(xì)胞表位的抗體的產(chǎn)生的方法，該方法包括在足以引起針對(duì)所述抗原B細(xì)胞表位的抗體產(chǎn)生的條件下，對(duì)所述受實(shí)者施用一段時(shí)間的一種分離脂^:，該脂肽含有一種偶合于一個(gè)或多個(gè)脂質(zhì)部分的多肽，其中(i)所述多肽包含(a)—種輔助T細(xì)胞(Th)表位的氨基酸序列和一種B細(xì)胞表位的氨基酸序列，其中所述的氨基酸序列是不同的；和(b)—個(gè)或多個(gè)內(nèi)部賴氨酸殘基或內(nèi)部賴氨酸類似物殘基，其用于經(jīng)所述內(nèi)部賴氨酸的S-氨基或經(jīng)所述內(nèi)部賴氨酸類似物的末端側(cè)鏈基團(tuán)共價(jià)附著于所述脂質(zhì)部分的每一個(gè)；和(ii)所述一個(gè)或多個(gè)脂質(zhì)部分的每一個(gè)被直接地或間接地共價(jià)附著于所述一個(gè)或多個(gè)內(nèi)部賴氨酸殘基的s-氨基或內(nèi)部賴氨酸類似物殘基的末端側(cè)鏈基團(tuán)進(jìn)行共價(jià)結(jié)合。用于抗體產(chǎn)生的有效劑量脂肽根據(jù)免疫原性B細(xì)胞表位的特性施用途徑，用于免疫的動(dòng)物以及所尋求抗體的特性發(fā)生變化。這些參數(shù)都是通過(guò)本領(lǐng)域所公認(rèn)的方法據(jù)試驗(yàn)來(lái)確定。這里所涉及的抗體包括全部的多克隆和單克隆抗體，及其單獨(dú)或綴合與其他部分結(jié)合的部分?？贵w部分包含有Fab和F(ab)2片段以及單鏈抗體。這些抗體可以在適合的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體內(nèi)獲得，或者采用重組DNA技術(shù)在體外獲得工程化抗體(單鏈抗體或SCABS等)。與本發(fā)明的這一方面相對(duì)應(yīng)，這些抗體可以對(duì)動(dòng)物進(jìn)行免疫獲得，在這種情況下，特別優(yōu)選與B細(xì)胞表位結(jié)合的高滴度或中和抗體。當(dāng)然，要根據(jù)免疫的抗原性B細(xì)胞表位來(lái)選擇進(jìn)行免疫的合適的受試動(dòng)物?？梢灶A(yù)期，本發(fā)明將被廣泛地用來(lái)對(duì)多種動(dòng)物進(jìn)行免疫，比如農(nóng)業(yè)動(dòng)物(如馬，牛，綿羊，豬，山羊，雞，鴨，火雞等)，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物(如大鼠，小鼠，豚鼠，兔)，家養(yǎng)動(dòng)物(貓，狗，鳥(niǎo)等)，野生的外來(lái)動(dòng)物(負(fù)鼠，貓，狗，水牛，野狗等)和人?；蛘?，這些抗體可作為商業(yè)或診斷用途，在這種情況下，被施用脂肽的受試者最好是實(shí)驗(yàn)動(dòng)物或農(nóng)業(yè)動(dòng)物。有很多動(dòng)物品種都可以用來(lái)生產(chǎn)抗血清。兔，小鼠，大鼠，倉(cāng)鼠，豚鼠，山羊，綿羊，豬，狗，馬或雞都是用來(lái)生產(chǎn)抗血清的典型動(dòng)物。因?yàn)橥玫难毫枯^大，所以優(yōu)選兔來(lái)制備多克隆抗體。然而，本領(lǐng)域中的專業(yè)人員應(yīng)熟知，為了從大動(dòng)物身上為獲得大量的抗體，大劑量的免疫原是必需的，而對(duì)諸如小鼠等小動(dòng)物則相反。在這樣的情況下，可以期望從被免疫的動(dòng)物分離目的抗體。優(yōu)選抗體是高滴度的抗體。"高滴度"的意思是其滴度高到足以適于在診斷或治療中使用。本領(lǐng)域中專業(yè)人員也應(yīng)熟知，有一些變化情況也可被認(rèn)為是高滴度。對(duì)大多是使用情況來(lái)說(shuō)，優(yōu)選滴度介于至少約103-104之間，更優(yōu)選抗體滴度可以介于約104到約105之間，甚至是介于約105到約106之間更優(yōu)選當(dāng)B細(xì)胞表位來(lái)源于病原體，病毒或細(xì)菌時(shí)，抗體是中和抗體(即可以中和有機(jī)體的傳染性，其后自該有機(jī)體衍生了B細(xì)胞表位)。為了產(chǎn)生抗體，脂肽，可以與任何合適的或有效的載體，佐劑，BRM或藥學(xué)上可接受的賦形劑進(jìn)行配置，以可注射組合物的形式方便地施用。注射方式可為鼻內(nèi)給藥，肌肉給藥，皮下給藥，靜脈內(nèi)給藥，皮內(nèi)給藥，腹膜內(nèi)給藥或其他已知的途徑。本發(fā)明的脂肽已證明了鼻內(nèi)給藥的效力。如果采用靜脈注射，最好再在包含一種或多種液體和營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充物。制備和分析抗體的方法在本領(lǐng)域應(yīng)為人所熟知(參見(jiàn)例如，ANTIBODIES:ALABORATORYMANUAL,ColdSpringHarborLaboratory,1988,在此處通過(guò)引用合并入本發(fā)明中)。在生產(chǎn)抗體時(shí)，脂肽的效能是通過(guò)用一種含有脂肽的配方，對(duì)如小鼠，大鼠，兔，豚鼠，豬，狗，馬，牛，山羊或豬等動(dòng)物進(jìn)行免疫，再監(jiān)測(cè)B細(xì)胞表位的免疫應(yīng)答來(lái)確定的，如實(shí)施例中所述。初級(jí)免疫應(yīng)答和次級(jí)免疫應(yīng)答都被監(jiān)測(cè)?？梢允褂脗鹘y(tǒng)的免疫測(cè)定技術(shù)，如ELISA或放射性免疫測(cè)定來(lái)對(duì)抗體滴度進(jìn)行測(cè)定。可以通過(guò)對(duì)免疫動(dòng)物在免疫后的不同時(shí)段進(jìn)行血液抽樣來(lái)對(duì)多克隆抗體的產(chǎn)生進(jìn)行監(jiān)測(cè)。如果想獲得期望的抗體滴度，還可以進(jìn)行二次的加強(qiáng)給藥。重復(fù)加強(qiáng)免疫和滴度測(cè)定的過(guò)程，直到達(dá)到適合的滴度。當(dāng)達(dá)到理想的免疫原性水平時(shí)，對(duì)免疫動(dòng)物進(jìn)行采血，分離血清并保存起來(lái)，和/或?qū)⒃搫?dòng)物用來(lái)生產(chǎn)單克隆抗體(Mabs)?？梢圆捎枚喾N眾所周知的技術(shù)的任一種來(lái)獲得單克隆抗體(Mabs)，例如在US4,196,265中所例舉的方法，在此通過(guò)引用并入本發(fā)明。比如，在足以刺激抗體生成細(xì)胞的條件下，將用有效量的本發(fā)明的脂肽對(duì)適合的動(dòng)物進(jìn)行免疫。小鼠和大鼠等嚙齒類動(dòng)物是首選的動(dòng)物，除此之外也可以使用兔，綿羊或青蛙的細(xì)胞。使用大鼠會(huì)具有某些優(yōu)點(diǎn)，但優(yōu)選的是小鼠，尤其優(yōu)選最常用和可產(chǎn)生更高比例穩(wěn)定融合的BALB/c小鼠。在免疫之后，能生成抗體尤其是B淋巴細(xì)胞(B細(xì)胞)的體細(xì)胞被選擇用于產(chǎn)生單克隆抗體的方法中。這些細(xì)胞可以從活體的脾臟，扁桃腺，淋巴結(jié)或外周血樣本中獲得。優(yōu)選是脾細(xì)胞和外周血細(xì)胞，選擇前者是因?yàn)樗缓幱诔蓾{細(xì)胞的分裂期的抗體生成細(xì)胞，選擇后者則是因?yàn)橥庵苎苋菀撰@得。通常的做法是對(duì)一組動(dòng)物進(jìn)行免疫，并將抗體滴度最高動(dòng)物的脾臟摘除。采用注射器對(duì)脾臟進(jìn)行勻漿以得到脾淋巴細(xì)胞。典型地，一只免疫小鼠的脾臟含有大約5x107到2xl()S個(gè)淋巴細(xì)胞。來(lái)自于免疫動(dòng)物的B細(xì)胞隨后將與無(wú)限增殖骨髓瘤細(xì)胞進(jìn)行融合，它通常來(lái)源于采用脂肽配方進(jìn)行免疫的同種屬的動(dòng)物。適用于雜交瘤產(chǎn)生融合步驟的骨髓瘤細(xì)胞系優(yōu)選是不產(chǎn)生抗體的，它具有極高的融合效率且缺乏酶，這使它們不能在某些只支持期望的融合細(xì)胞或雜交瘤生長(zhǎng)的選擇性培養(yǎng)基中生長(zhǎng)。任意一種骨髓瘤細(xì)胞都可以被采用，這己為本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知(比如鼠P3-X63/Ag8，X63-Ag8.653,NSl/l.Ag41，Sp210畫(huà)Ag14，F(xiàn)O，NSO/U，MPC-U，MPC11-X45-GTG1.7和S194/5XXO;或大鼠R210.RCY3，Y3-Ag1.2.3,IR983F和4B210;以及U-266，GM1500-GRG2，LICR-LON-HMy2和UC729-6)。優(yōu)選的鼠骨髓瘤細(xì)胞是NS-1骨髓瘤細(xì)胞系(也稱為P3-NS-l-Ag4-l)，它可方便地從NIGMS人類遺傳突變細(xì)胞庫(kù)中獲得，獲取號(hào)為GM3573。或者可以采用具有8-疊鳥(niǎo)嘌呤的抗性的鼠骨髓瘤SP2/0不產(chǎn)病毒性細(xì)胞系。為了產(chǎn)生抗體生成脾或淋巴結(jié)細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞的雜種細(xì)胞，體細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞在含有一種或多種促進(jìn)細(xì)胞膜融合試劑(化學(xué)的或電子的)存在的條件下，以大約20:l到大約l:l的比例分別進(jìn)行混合。采用仙臺(tái)病毒進(jìn)行融合的方法已由Kohler和Milstein等人進(jìn)行了報(bào)道(Kohler和Milstein,Nature256,495-497，1975;以及KohlerandMilstein，Eur.J.Immunol.6，511-519，1976.)。使用聚乙二醇(PEG),比如37%(v/v)PEG進(jìn)行融合的方法也由Gefter等人進(jìn)行了詳細(xì)地描述(Gefier等，SomaticCellGenet.3,231-236,1977.)。同樣也可以釆取電誘導(dǎo)的融合方法。雜種細(xì)胞的擴(kuò)增是通過(guò)在含有阻斷核苷酸在組織培養(yǎng)基中從頭合成的試劑的選擇性培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)實(shí)現(xiàn)的。典型的和優(yōu)選的試劑是氨基喋呤，氨甲蝶呤和重氮絲氨酸。氨基喋呤和氨甲蝶呤可阻斷嘌呤和嘧啶的從頭合成，而重氮絲氨酸只能阻斷嘌呤的合成。當(dāng)使用氨基喋呤和氨甲蝶呤時(shí)，培養(yǎng)基中需要補(bǔ)充添加作為核苷酸源的次黃嘌呤和胸苷(HAT培養(yǎng)基)。而當(dāng)使用重氮絲氨酸時(shí)，培養(yǎng)基中需要補(bǔ)充添加次黃嘌呤。優(yōu)選選擇性培養(yǎng)基是HAT，因?yàn)橹挥心切┛梢詥?dòng)核苷酸補(bǔ)救途徑的雜種細(xì)胞才可以在HAT培養(yǎng)基中存活，而缺乏補(bǔ)救途徑關(guān)鍵酶(例如次黃嘌呤磷酸核糖基轉(zhuǎn)移酶或HPRT)的雜種細(xì)胞則不能存活。B細(xì)胞可以啟動(dòng)這一補(bǔ)救途徑，但它們?cè)谂囵B(yǎng)基中的壽命很短，通常在約兩星期之內(nèi)就死亡。所以，在選擇性培養(yǎng)基中存活下來(lái)的細(xì)胞只可能是來(lái)自于骨髓瘤細(xì)胞和B細(xì)胞的雜種細(xì)胞。擴(kuò)增后的雜種細(xì)胞被用于針對(duì)抗體特異性和/或滴度的功能性選擇，比如免疫測(cè)定(例如放射免疫分析，酶免疫測(cè)定，細(xì)胞毒性分析，噬菌斑測(cè)定，點(diǎn)免疫結(jié)合分析等)。經(jīng)過(guò)選擇的雜種細(xì)胞隨后被順次稀釋并克隆到單獨(dú)的抗體生成細(xì)胞系中，這些克隆隨后被不定繁殖以提供單克隆抗體。該細(xì)胞系可以通過(guò)兩種基本方式用于單克隆抗體的生產(chǎn)。雜種細(xì)胞樣本經(jīng)腹膜腔被注射到用于提供體細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞以供原始融合的組織相容性動(dòng)物。被注射的動(dòng)物發(fā)育分泌由融合雜種細(xì)胞所產(chǎn)生的特異性單克隆抗體的腫瘤。該動(dòng)物的體液，如血清和腹水可以被抽除以產(chǎn)生高濃度的單克隆抗體。也可以在體外對(duì)單個(gè)的細(xì)胞系進(jìn)行培養(yǎng)，其中單克隆抗體被自然地分泌到培養(yǎng)基中并從中容易地獲得高濃度的單克隆抗體。如果需要的話，可以采用過(guò)濾，離心，以及多種層析方法如HPLC或親和層析法，對(duì)通過(guò)以上方法獲得的單克隆抗體進(jìn)行進(jìn)一步純化。通過(guò)本領(lǐng)域眾所周知的方法獲得的本發(fā)明中的單克隆抗體，也含有抗獨(dú)特型抗體。本發(fā)明中的單克隆抗體也可能是單克隆復(fù)共軛對(duì)配合物(即兩個(gè)或更多抗體分子的雜種細(xì)胞)。在另一個(gè)實(shí)施例中，本發(fā)明的單克隆抗體是嵌合的單克隆抗體。在一個(gè)方法中，嵌合的單克隆抗體是通過(guò)對(duì)含有鼠抗-PSA生成細(xì)胞啟動(dòng)區(qū)，引導(dǎo)肽和可變區(qū)序列，以及人抗體基因恒定區(qū)外顯子的重組DNA進(jìn)行克隆而得到的。被這樣的重組基因所編碼的抗體是鼠-人嵌合體。它的抗體特異性決定于來(lái)自于鼠序列的可變區(qū)，其同種型的抗體特異性則由來(lái)源人DNA的恒定區(qū)決定。在另一實(shí)施例中，通過(guò)本領(lǐng)域中眾所周知的技術(shù)獲得的，根據(jù)本發(fā)明的單克隆抗體是一種"人源化"的單克隆抗體。即鼠的互補(bǔ)決定區(qū)(CDRs)，從鼠Ig重鏈和輕鏈V區(qū)轉(zhuǎn)移到了人的V區(qū)，伴隨著一些人類的殘基取代了相應(yīng)結(jié)構(gòu)區(qū)域的鼠源對(duì)應(yīng)殘基。根據(jù)本發(fā)明的"人源化"單克隆抗體尤其適合在體內(nèi)診斷和治療方法中進(jìn)行使用。如上所述，基于本發(fā)明的單克隆抗體及其片斷可以通過(guò)本領(lǐng)域中眾所周知的方法在體外和體內(nèi)進(jìn)行擴(kuò)增。體外的擴(kuò)增可以在合適的培養(yǎng)基如DMEM或RPMI1640培養(yǎng)基中得以實(shí)現(xiàn)，可選擇向其中補(bǔ)充哺乳動(dòng)物血清如胎牛血清或痕量因子以及維持生長(zhǎng)的添加成分，比如養(yǎng)細(xì)胞，即正常小鼠腹膜滲出液細(xì)胞，脾細(xì)胞，骨髓巨噬細(xì)胞等體外生產(chǎn)可以提供相對(duì)純粹的抗體，并允許對(duì)期望的抗體進(jìn)行大規(guī)模的生產(chǎn)。包括純系懸浮培養(yǎng)(在一個(gè)氣動(dòng)反應(yīng)器，或一個(gè)連續(xù)攪拌反應(yīng)器，或固定化，或截流細(xì)胞培養(yǎng))等對(duì)大規(guī)模雜種細(xì)胞的組織培養(yǎng)條件在本領(lǐng)域內(nèi)為眾人所知。本發(fā)明中的大規(guī)模的單克隆抗體也可以通過(guò)在體內(nèi)進(jìn)行雜種細(xì)胞的擴(kuò)增來(lái)獲得。將細(xì)胞克隆給藥到與其親代細(xì)胞具有組織相容性的動(dòng)物體內(nèi)(即同系的小鼠)，以引起抗體生成腫瘤的生長(zhǎng)。主要用烴尤其是降植垸(四甲基五癸烷)等油在給藥前進(jìn)行對(duì)動(dòng)物進(jìn)行抗原接觸。與本發(fā)明相一致的是，單克隆抗體的片斷是從通過(guò)對(duì)用上述方法得到的單克隆抗體進(jìn)行胃蛋白酶或木瓜蛋白酶消化，和/或通過(guò)化學(xué)還原切斷二硫鍵等方法得到的。本發(fā)明中單克隆抗體的偶聯(lián)物，是通過(guò)本領(lǐng)域中眾所周知的方法，如將通過(guò)上述方法得到的單克隆抗體與偶合試劑如戊二醛或高碘酸鹽在酶的作用下作用得到的。含有熒光素標(biāo)記的偶合物是在含有這些偶合試劑的條件下制備的，或者與異硫氰酸鹽進(jìn)行反應(yīng)得到的。含有金屬螯合劑的偶合物也是通過(guò)類似的方法得到的。其他與抗體偶合的部分包括諸如3H，125I,.32P,.35S，"C，51Cr，36C1，57Co,5SCo,59Fe,75Se,和'"Eu等放射性核。本發(fā)明中放射性標(biāo)記的單克隆抗體是根據(jù)本領(lǐng)域中眾所周知的方法得到的。比如，通過(guò)與碘化鈉或碘化鉀，化學(xué)氧化劑次氯酸鈉，或乳過(guò)氧化物酶等酶氧化劑相接觸，將單克隆抗體進(jìn)行碘化。本發(fā)明中的單克隆抗體可通過(guò)配給交換進(jìn)行锝"的標(biāo)記，比如，通過(guò)含有錫的溶液還原高锝酸鹽，將剩余的锝螯合至Sephadex柱子上，并通過(guò)直接標(biāo)記技術(shù)將抗體引入到這個(gè)柱子上(即，對(duì)高锝酸鹽的溫育，比如SNCl2的還原劑，比如鄰苯二甲酸鈉鉀的緩沖液，和抗體)?？梢圆捎萌魏我环N免疫分析的方式來(lái)監(jiān)測(cè)脂肽配方引起的抗體產(chǎn)生。免疫分析的最基本和直接原理就是結(jié)合分析。某些首選的免疫分析是本領(lǐng)域中為眾人所知的多樣的酶聯(lián)免疫吸收分析(ELISAs)和放射免疫分析(RIA)。對(duì)組織切片進(jìn)行免疫組化檢測(cè)也是特別有用的方法。然而，除此之外的Western雜交，點(diǎn)雜交，F(xiàn)ACS分析等都是簡(jiǎn)便易行的檢測(cè)方法。更優(yōu)選檢測(cè)結(jié)果可以產(chǎn)生出定量的數(shù)據(jù)。例如，對(duì)抗體進(jìn)行簡(jiǎn)單的競(jìng)爭(zhēng)性分析。一種已知的抗體準(zhǔn)備與B細(xì)胞表位相結(jié)合，將要檢測(cè)的抗體與含有該B細(xì)胞表位的抗原合成物進(jìn)行溫育，更優(yōu)選一種天然的抗原。"抗原合成物"一詞在這里的意思是指具有某種可接近形式、含有B細(xì)胞表位某些特征的任何合成物。優(yōu)選在ELISA板上用抗原包被的孔。在一個(gè)實(shí)施例中，將已知抗體與待測(cè)抗體在使用前，以不同的比例(1:1，1:10,1:100)進(jìn)行一段時(shí)間的預(yù)混合。如果已知抗體被標(biāo)記上，對(duì)結(jié)合于該抗原標(biāo)記的直接檢測(cè)就可實(shí)現(xiàn)；相對(duì)于未混合的樣品待測(cè)抗體的分析將確定競(jìng)爭(zhēng)和交聯(lián)反應(yīng)。或者使用對(duì)己知或待測(cè)抗體特異的二抗，也可以確定其競(jìng)爭(zhēng)情況。與抗原合成物結(jié)合的抗體，可以與已知抗體進(jìn)行有效的競(jìng)爭(zhēng)，從而顯著的降低后者的結(jié)合。將在沒(méi)有任何待測(cè)抗體的條件下，已知抗體的反應(yīng)性設(shè)為對(duì)照。待測(cè)抗體出現(xiàn)后反應(yīng)性的降低說(shuō)明了待測(cè)抗體與B細(xì)胞表位發(fā)生了結(jié)合(即，與已知抗體發(fā)生了交叉反應(yīng))。在一個(gè)示范性的ELISA中，針對(duì)與B細(xì)胞表位的抗體被固定于具有蛋白親和性的的表面上，比如聚苯乙烯微孔板的小孔中。然后將含有B細(xì)胞表位的合成物加入這些小孔。在經(jīng)過(guò)結(jié)合與洗脫以去除非特異性結(jié)合的免疫復(fù)合物后，可以檢測(cè)到結(jié)合的表位。通過(guò)加入結(jié)合于B細(xì)胞表位的可被檢測(cè)到的二抗，可以使得檢測(cè)更加容易。這類ELISA是一種簡(jiǎn)單的"三明治型ELISA"。同樣也可以在加入二抗以后，再加入與二抗具有結(jié)合能力、且連有檢測(cè)標(biāo)記的三抗，進(jìn)行檢測(cè)。不育的誘導(dǎo)本發(fā)明中一種含有某種生殖性激素或激素受體抗原性B細(xì)胞表位，具有適當(dāng)構(gòu)型的脂肽，可在該對(duì)象體內(nèi)誘導(dǎo)不育。因此，本發(fā)明從另一方面提供了一種在給藥了含有結(jié)合有一個(gè)或多個(gè)脂質(zhì)部分多肽的單獨(dú)脂肽的對(duì)象中誘導(dǎo)不育的方法，其中(i)這樣的多肽含有(a)—種輔助T細(xì)胞表位的氨基酸序列和一種生殖性激素或激素受體B細(xì)胞表位的氨基酸序列，其中所屬的氨基酸序列并不相同；以及(b)通過(guò)所述內(nèi)部賴氨酸s-氨基，或所述內(nèi)部賴氨酸類似物末端側(cè)鏈基團(tuán)，與所述脂質(zhì)部分進(jìn)行共價(jià)結(jié)合的一個(gè)或多個(gè)內(nèi)部賴氨酸殘基或內(nèi)部賴氨酸類似物殘基；以及(ii)直接或間接與所述一個(gè)或多個(gè)內(nèi)部賴氨酸殘基的s-氨基，或所述一個(gè)或多個(gè)內(nèi)部賴氨酸類似物殘基的末端側(cè)鏈基團(tuán)進(jìn)行共價(jià)結(jié)合的每一個(gè)或多個(gè)脂質(zhì)部分；以及(iii)在足以引起對(duì)于所述抗原性B細(xì)胞表位的體液免疫反應(yīng)的條件下，對(duì)受體動(dòng)物進(jìn)行給藥的脂肽。脂肽可以任何在這里描述的方便配方形式進(jìn)行給藥。"體液免疫"的意思是對(duì)于足以產(chǎn)生阻止卵子發(fā)生，精子發(fā)生，受精，著床或胚胎發(fā)育B細(xì)胞表位進(jìn)行的二次免疫應(yīng)答。更優(yōu)選，體液免疫產(chǎn)生了針對(duì)于受體中B細(xì)胞表位持續(xù)水平的抗體。"持續(xù)水平的抗體"意思是產(chǎn)生足夠水平針對(duì)于阻止卵子發(fā)生，精子發(fā)生，受精，著床或胚胎發(fā)育B細(xì)胞表位的循環(huán)抗體。優(yōu)選，對(duì)雌性受體來(lái)說(shuō)，抗體水平至少持續(xù)一個(gè)生殖循環(huán)，更優(yōu)選至少6個(gè)月，9個(gè)月，12個(gè)月或2年。優(yōu)選，B細(xì)胞表位來(lái)自于黃體激素釋放激素(LHRH)，促卵泡素(FSH)，黃體素(LH)，人絨毛膜促性腺激素(hCG)，透明帶蛋白如ZP3，或FSH受體，人或豬ZP3a上的氨基酸序列。在這一種類中，優(yōu)選B細(xì)胞表位含有p-hCG的C末端部分；人ZP3的氨基酸殘基323-341;豬ZP3a的氨基酸殘疾8-18或272-283或319-330。更優(yōu)選，B細(xì)胞表位含有從下列序列挑選出來(lái)的氨基酸序列SEQIDNO:2，SEQIDNO:3，SEQIDNO:4，SEQIDNO:76，SEQIDNO:77，SEQIDNO:78，SEQIDNO:79，SEQIDNO:80，SEQIDNO:81，SEQIDNO:82，SEQIDNO:83，和SEQIDNO:84.優(yōu)選輔助T細(xì)胞表位含有從下列序列挑選出來(lái)的氨基酸序列SEQIDNO:1，SEQIDNO:20，SEQIDNO:24，SEQIDNO:26和SEQIDNO:44，以及SEQIDNO為1，或18-56中任意一條。在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施例中，輔助T細(xì)胞表位含有以下任意一條的氨基酸序列，SEQIDNO:l，SEQIDNO:20，SEQIDNO:24，SEQIDNO:26和SEQIDNO:44;B細(xì)胞表位來(lái)自于含有LHRH及SEQIDNO:2或SEQIDNO:3或SEQIDNO:4的氨基酸序列。與優(yōu)選實(shí)施例—致，多肽的氨基酸序列來(lái)源于SEQIDN05-16，103或104。同樣為與優(yōu)選實(shí)施例一致，優(yōu)選不是主要的)含有脂氨基酸的脂質(zhì)部分是從含有下面的組中挑選出來(lái)的(i)Pam2Cys;(ii)Ste2Cys;(iii)Lau2Cys;和(iv)Oct2Cys。對(duì)于LHRH可以產(chǎn)生持續(xù)的抗體證明了本發(fā)明中脂肽作為一種作為誘導(dǎo)不育或避孕試劑的疫苗活性成分的通用效用。因此，本發(fā)明從另一方面提供了一種含有藥物學(xué)可接受的稀釋液，以及含有單獨(dú)結(jié)合于一個(gè)或多個(gè)脂質(zhì)部分多^C的脂肽避孕試劑，其中(i)這樣的多肽含有(a)—種T細(xì)胞表位的氨基酸序列和一種生殖激素或激素受體的B細(xì)胞表位，其中所述的氨基酸序列并不相同；以及(b)通過(guò)所述內(nèi)部賴氨酸s-氨基，或所述內(nèi)部賴氨酸類似物末端側(cè)鏈基團(tuán)，與所述脂質(zhì)部分進(jìn)行共價(jià)結(jié)合的一個(gè)或多個(gè)內(nèi)部賴氨酸殘基或內(nèi)部賴氨酸類似物殘基；以及(c)直接或間接與所述一個(gè)或多個(gè)內(nèi)部賴氨酸殘基的e-氨基，或所述一個(gè)或多個(gè)內(nèi)部賴氨酸類似物殘基的末端側(cè)鏈基團(tuán)進(jìn)行共價(jià)結(jié)合的每一個(gè)或多個(gè)脂質(zhì)部分。本發(fā)明的這種疫苗/避孕試劑可以由含有一種或多種載體或賦形劑或其他在"脂肽配方"中描述過(guò)的試劑構(gòu)成。類似地，受體動(dòng)物的進(jìn)行疫苗/避孕劑的給藥也可通過(guò)上述方法完成。優(yōu)選是人，或動(dòng)物，比如農(nóng)業(yè)動(dòng)物，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，家養(yǎng)動(dòng)物，兇猛動(dòng)物或野生動(dòng)物。對(duì)于A型微球菌的免疫A型微球菌(GAS)是一種相對(duì)溫和的疾病細(xì)菌代理，比如膿毒性咽喉炎和膿皰病，以及少有的，嚴(yán)重的，甚至是危及生命的壞死性肌膜炎和鏈球菌中毒休克綜合癥。嚴(yán)重甚至是危及生命的GAS疾病可能發(fā)生在當(dāng)細(xì)菌進(jìn)入機(jī)體中通常不含有細(xì)菌的部分時(shí)，比如血液，肌肉或肺。一個(gè)感染名詞"入侵性GAS疾病"。兩種最嚴(yán)重形式的入侵性GAS疾病就是壞死性肌膜炎和鏈球菌中毒休克綜合癥。壞死性肌膜炎破壞肌肉，脂肪和皮膚組織。STSS導(dǎo)致血壓急劇降低和臟器喪失功能(腎臟，肝臟和肺)。大約20%的壞死性肌膜炎患者和超過(guò)一半的STSS患者會(huì)死亡。大約10-15%患有其他形式入侵性GAS疾病的患者也會(huì)死亡。在1999年美國(guó)大約發(fā)生了9,400起入侵性GAS疾病。入侵性GAS感染通常通過(guò)越過(guò)被感染人的防御系統(tǒng)而對(duì)其進(jìn)行感染，比如，某人皮膚上的傷口可以使得該細(xì)菌進(jìn)入到組織內(nèi)，或當(dāng)某人遭受包括HIV/AIDS等慢性疾病或影響免疫系統(tǒng)疾病影響，抗感染能力下降時(shí)。同樣，一些GAS有毒菌株比其他菌株更容易引發(fā)嚴(yán)重的疾病。對(duì)遭受癌癥，糖尿病，腎透析和其他使用類固醇進(jìn)行藥物治療的慢性病人來(lái)說(shuō)，他們的危險(xiǎn)性更大。例如，本發(fā)明中由含有A型鏈球菌抗原，尤其是M蛋白的B細(xì)胞表位組成的具有適合構(gòu)型的脂肽，可以對(duì)動(dòng)物進(jìn)行GAS免疫；也對(duì)于GAS的再次感染，提供了一種保護(hù)性免疫應(yīng)答，尤其是誘導(dǎo)針對(duì)于GAS的M蛋白的IgG，唾液IgA和糞IgA的產(chǎn)生，以降低GAS誘導(dǎo)的死亡率。因此，本發(fā)明從另一個(gè)方面提供了一種可對(duì)給藥了含有結(jié)合于一個(gè)或多個(gè)脂質(zhì)部分多肽的單獨(dú)脂肽的所述受體誘導(dǎo)產(chǎn)生對(duì)于A型鏈球菌的免疫應(yīng)答，其中(iv)這樣的多肽含有(b)T細(xì)胞表位的氨基酸序列和一種A型鏈球菌抗原的B細(xì)胞表位，其中所述的氨基酸序列并不相同；以及(c)通過(guò)所述內(nèi)部賴氨酸s-氨基，或所述內(nèi)部賴氨酸類似物末端側(cè)鏈基團(tuán)，與所述脂質(zhì)部分進(jìn)行共價(jià)結(jié)合的一個(gè)或多個(gè)內(nèi)部賴氨酸殘基或內(nèi)部賴氨酸類似物殘基；以及(v)直接或間接與所述一個(gè)或多個(gè)內(nèi)部賴氨酸殘基的s-氨基，或所述一個(gè)或多個(gè)內(nèi)部賴氨酸類似物殘基的末端側(cè)鏈基團(tuán)進(jìn)行共價(jià)結(jié)合的每一個(gè)或多個(gè)脂質(zhì)部分；以及(vi)在足以引起對(duì)于所述抗原性B細(xì)胞表位的體液免疫反應(yīng)的條件下，對(duì)受體動(dòng)物進(jìn)行給藥的脂肽。脂肽可以任何在這里描述的方便配方形式進(jìn)行給藥。"體液免疫"的意思是對(duì)于足以誘導(dǎo)產(chǎn)生血清IgG，唾液IgA或糞IgA的B細(xì)胞表位進(jìn)行的二次免疫應(yīng)答，或提供一種對(duì)于A型鏈球菌再次感染的保護(hù)性免疫反應(yīng)。更優(yōu)選體液免疫產(chǎn)生了針對(duì)于受體中B細(xì)胞表位持續(xù)水平的抗體。"持續(xù)水平的抗體"意思是產(chǎn)生足夠水平防止A型鏈球菌感染的傳播，和/或降低受到A型鏈球菌感染受體動(dòng)物的致病率或死亡率的B細(xì)胞表位循環(huán)抗體。優(yōu)選體水平至少持續(xù)6個(gè)月，9個(gè)月，12個(gè)月或2年。優(yōu)選B胞表位來(lái)自于A型鏈球菌M蛋白的氨基酸序列。在這一種類中，首選的B細(xì)胞表位含有SEQIDNO:101多肽中的氨基酸序列。首選的輔助T細(xì)胞表位含有從下列序列挑選出來(lái)的氨基酸序列SEQIDNO:1，SEQIDNO:20,SEQIDNO:24，SEQIDNO:26和SEQIDNO:44，以及SEQIDNO為l，或18-56中任意一條。在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施例中，輔助T細(xì)胞表位含有SEQIDNO:24中的氨基酸序列，而B(niǎo)細(xì)胞表位含有SEQIDNO:101中的氨基酸序列。與優(yōu)選實(shí)施例一致，多肽的氨基酸序列來(lái)源于SEQIDNO105-108。同樣為與優(yōu)選實(shí)施例一致，首選(但不是主要的)的含有脂氨基酸的脂質(zhì)部分是從含有下面的分子式(I)或(II)中挑選出來(lái)的，在這里描述的其他脂也同樣可用。對(duì)于J14多肽可以產(chǎn)生持續(xù)的抗體證明了本發(fā)明中脂肽作為一種作為對(duì)A型鏈球菌提供免疫疫苗活性成分的通用性。因此，本發(fā)明從另一方面提供了一種含有藥物學(xué)可接受的稀釋液，以及含有單獨(dú)結(jié)合于一個(gè)或多個(gè)脂質(zhì)部分多肽的A型鏈球菌疫苗，其中(ii)這樣的多肽含有(b)—種T細(xì)胞表位的氨基酸序列和一種A型鏈球菌抗原的B細(xì)胞表位，其中所述的氨基酸序列并不相同；以及(c)通過(guò)所述內(nèi)部賴氨酸s-氨基，或所述內(nèi)部賴氨酸類j以物末端側(cè)鏈基團(tuán)，與所述脂質(zhì)部分進(jìn)行共價(jià)結(jié)合的一個(gè)或多個(gè)內(nèi)部賴氨酸殘基或內(nèi)部賴氨酸類似物殘基；以及(iii)直接或間接與所述一個(gè)或多個(gè)內(nèi)部賴氨酸殘基的s-氨基，或所述一個(gè)或多個(gè)內(nèi)部賴氨酸類似物殘基的末端側(cè)鏈基團(tuán)進(jìn)行共價(jià)結(jié)合的每一個(gè)或多個(gè)脂質(zhì)部分。本發(fā)明的這種疫苗可以由含有一種或多種載體或賦形劑或其他在"脂肽配方"中描述過(guò)的試劑構(gòu)成。類似地，對(duì)受體動(dòng)物的進(jìn)行疫苗的給藥也可通過(guò)上述方纟去完成。優(yōu)選受體是人，或動(dòng)物，比如農(nóng)業(yè)動(dòng)物，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，家養(yǎng)動(dòng)物，兇猛動(dòng)物或野生動(dòng)物。對(duì)胃酸過(guò)量和不受調(diào)控分泌的抑制與預(yù)防已知胃泌素可以通過(guò)壁細(xì)胞刺激胃酸的分泌，其活性由胃泌素與胃泌素受體或縮膽囊素的結(jié)合來(lái)進(jìn)行調(diào)控的。胃泌素的末端4-5個(gè)氨基酸殘基提供了全長(zhǎng)蛋白質(zhì)的受體特異性和活性。胃泌素末端的5個(gè)氨基酸殘基并成為五肽胃泌素。作為過(guò)量和不受調(diào)控胃酸分泌的后果，不受調(diào)控的胃泌素表達(dá)和分泌可引起高胃泌素血癥，并導(dǎo)致Zollinger-Ellison綜合癥，胃十二指腸潰瘍，胰或十二指腸促胃液素瘤的形成。針對(duì)于胃泌素多肽的內(nèi)部分泌，可以使用對(duì)于胃泌素的抗體進(jìn)行胃泌素免疫中和可以用來(lái)阻止胃酸的分泌。例如，本發(fā)明中由含有胃泌素多肽B細(xì)胞表位組成的具有適合構(gòu)型的脂肽，可以對(duì)動(dòng)物進(jìn)行胃泌素免疫；或在胃酸分泌受到抑制的小鼠模型或其他哺乳動(dòng)物中得到胃泌素過(guò)量分泌。這里的數(shù)據(jù)證明了在誘導(dǎo)對(duì)于胃泌素和胃泌素免疫中和的體液免疫，以及在遭受由于胃酸的過(guò)量和不受調(diào)控的分泌引起的高胃泌素血癥，Zollinger-Ellison綜合征，胃潰瘍或十二指腸潰瘍阻止胃酸分泌，以及在減少或防止胰和十二指腸中胃泌素分泌腫瘤的形成(預(yù)防和/或治療促胃液素瘤)過(guò)程中，脂肽的普遍效用。因此，本發(fā)明從另一方面提供了一種含有藥物學(xué)可接受的稀釋液，以及含有單獨(dú)結(jié)合于一個(gè)或多個(gè)脂質(zhì)部分多肽對(duì)應(yīng)于胃泌素的免疫應(yīng)答，其中(vii)這樣的多肽含有(c)一種T細(xì)胞表位的氨基酸序列和一種胃泌素抗原的B細(xì)胞表位，其中所述的氨基酸序列并不相同；以及(d)通過(guò)所述內(nèi)部賴氨酸s-氨基，或所述內(nèi)部賴氨酸類似物末端側(cè)鏈基團(tuán)，與所述脂質(zhì)部分進(jìn)行共價(jià)結(jié)合的一個(gè)或多個(gè)內(nèi)部賴氨酸殘基或內(nèi)部賴氨酸類似物殘基；以及(viii)直接或間接與所述一個(gè)或多個(gè)內(nèi)部賴氨酸殘基的e-氨基，或所述一個(gè)或多個(gè)內(nèi)部賴氨酸類似物殘基的末端側(cè)鏈基團(tuán)進(jìn)行共價(jià)結(jié)合的每一個(gè)或多個(gè)脂質(zhì)部分；以及(ix)在足以引起對(duì)于所述抗原性B細(xì)胞表位的體液免疫反應(yīng)的條件下，對(duì)受體動(dòng)物進(jìn)行給藥的脂肽。脂肽可以任何在這里描述的方便配方形式進(jìn)行給藥。"體液免疫"的意思是對(duì)于足以產(chǎn)生對(duì)于胃泌素的血清IgG的B細(xì)胞表位進(jìn)行的第二次免疫應(yīng)答。更優(yōu)選，體液免疫產(chǎn)生了針對(duì)于受體中B細(xì)胞表位持續(xù)水平的抗體。"持續(xù)水平的抗體"意思是產(chǎn)生足夠水平以阻止對(duì)于胃泌素的胃酸的過(guò)量和不受調(diào)控的分泌的B細(xì)胞表位循環(huán)抗體。優(yōu)選，抗體水平至少持續(xù)6個(gè)月，9個(gè)月，12個(gè)月或2年。優(yōu)選B細(xì)胞表位含有五肽胃泌素的氨基酸序列。在這一種類中，優(yōu)選B細(xì)胞表位含有SEQIDNO:102多肽中的氨基酸序列，或包含全長(zhǎng)胃泌素蛋白或任何具有其免疫片段的B細(xì)胞表位。優(yōu)選輔助T細(xì)胞表位含有從下列序列挑選出來(lái)的氨基酸序列SEQIDNO:l，SEQIDNO:20，SEQIDNO:24，SEQIDNO:26和SEQIDNO:44，以及SEQIDNO為l，或18-56中任一序列。在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施例中，輔助T細(xì)胞表位含有SEQIDNO:24中的氨基酸序列，而B(niǎo)細(xì)胞表位含有SEQIDNO:102中的氨基酸序列。與優(yōu)選實(shí)施例一致，多肽的氨基酸序列來(lái)源于SEQIDNO109-112。同樣為與優(yōu)選實(shí)施例一致，首選(但不是主要的)的含有脂氨基酸的脂質(zhì)部分是從含有下面的分子式(I)或(II)中挑選出來(lái)的，在這里描述的其他脂也同樣可用。對(duì)于五肽胃泌素或胃泌素可以產(chǎn)生持續(xù)的抗體證明了本發(fā)明中脂肽作為一種作為必要時(shí)對(duì)降低胃泌素副作用提供疫苗活性成分的通用性。因此，本發(fā)明從另一方面提供了一種含有藥物學(xué)可接受的稀釋液，以及含有單獨(dú)結(jié)合于一個(gè)或多個(gè)脂質(zhì)部分多肽的，針對(duì)于胃泌素分泌過(guò)多誘導(dǎo)的情形或疾病的疫苗，其中(iv)這樣的多肽含有(C)一種T細(xì)胞表位的氨基酸序列和一種胃泌素多肽抗原的B細(xì)胞表位，其中所述的氨基酸序列并不相同；以及(d)通過(guò)所述內(nèi)部賴氨酸S-氨基，或所述內(nèi)部賴氨酸類似物末端側(cè)鏈基團(tuán)，與所述脂質(zhì)部分進(jìn)行共價(jià)結(jié)合的一個(gè)或多個(gè)內(nèi)部賴氨酸殘基或內(nèi)部賴氨酸類似物殘基；以及(v)直接或間接與所述一個(gè)或多個(gè)內(nèi)部賴氨酸殘基的s-氨基，或所述一個(gè)或多個(gè)內(nèi)部賴氨酸類似物殘基的末端側(cè)鏈基團(tuán)進(jìn)行共價(jià)結(jié)合的每一個(gè)或多個(gè)脂質(zhì)部分。本發(fā)明的這種疫苗可以由含有一種或多種載體或賦形劑或其他在"脂肽配方"中描述過(guò)的試劑構(gòu)成。類似地，對(duì)受體動(dòng)物的進(jìn)行疫苗的給藥也可通過(guò)上述方法完成。優(yōu)選受體是人。以下將對(duì)本發(fā)明所涉及的若干實(shí)施例和圖表進(jìn)行詳述。優(yōu)選實(shí)施例的詳細(xì)描述月旨肽本發(fā)明的一個(gè)方面提供了含有與一個(gè)或多個(gè)脂質(zhì)部分綴合的單獨(dú)脂肽，其中這樣的多肽含有以下的氨基酸序列一種輔助T細(xì)胞表位的氨基酸序列和B細(xì)胞表位的氨基酸序列，其中這些氨基酸序列并不相同，以及通過(guò)所述內(nèi)部賴氨酸e-氨基，或所述內(nèi)部賴氨酸類似物末端側(cè)鏈基團(tuán)，與所述脂質(zhì)部分進(jìn)行共價(jià)結(jié)合的一個(gè)或多個(gè)內(nèi)部賴氨酸殘基或內(nèi)部賴氨酸類似物殘基；以及直接或間接與所述一個(gè)或多個(gè)內(nèi)部賴氨酸殘基的e-氨基，或所述一個(gè)或多個(gè)內(nèi)部賴氨酸類似物殘基的末端側(cè)鏈基團(tuán)進(jìn)行共價(jià)結(jié)合的每一個(gè)或多個(gè)脂質(zhì)部分。在這里，"脂肽"一詞的意思是任何經(jīng)非自然反應(yīng)獲得的物質(zhì)合成物，這樣的合成物包含一種或多種脂質(zhì)部分，一種或多種氨基酸序列，并可直接或間接與其綴合，該合成物充分游離于非特異性非綴合的脂或蛋白。"直接"一詞的意思是一個(gè)脂質(zhì)部分和氨基酸序列沒(méi)有被間隔分子分開(kāi)。"間接"一詞的意思是一個(gè)脂質(zhì)部分和氨基酸序列被一個(gè)含有單個(gè)或多個(gè)碳原子的分子的間隔物所分隔，比如一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基。氨基酸序列的長(zhǎng)度可以任意，只要其范圍符合同時(shí)具有輔助T細(xì)胞表位和B細(xì)胞表位的功能的長(zhǎng)度即可。同樣的，"內(nèi)部賴氨酸類似物殘基"意思是指同時(shí)含有輔助T細(xì)胞表位和B細(xì)胞表位多肽鏈中的賴氨酸類似物殘基，其中這樣的賴氨酸類似物既不是該多肽鏈的N末端殘基，也不是C末端殘基。成為是否是"內(nèi)部"賴氨酸殘基的標(biāo)準(zhǔn)是采用M/""S咖te7K/j'S的方法來(lái)確定是否某個(gè)賴氨酸類似物是內(nèi)部的。"賴氨酸類似物"一詞的意思是一種可以參入到一個(gè)多肽鏈的內(nèi)部，并具有適合于與脂質(zhì)部分相結(jié)合側(cè)鏈基團(tuán)的化合物，包括單一的氨基酸類似物或含有這樣氨基側(cè)鏈非自然形成的氨基酸。首選的賴氨酸類似物包括以下通式(V)中的化合物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage73</formula>其中，n代表從0到3的整數(shù)，X是來(lái)自于含有NH，O和S等基團(tuán)內(nèi)部賴氨酸類似物殘基的一個(gè)末端側(cè)鏈基團(tuán)。更適宜的情況是n是從1到3的整數(shù)，且X是一個(gè)氨基基團(tuán)，且賴氨酸類似物是一種二氨基化合物。在其中一個(gè)優(yōu)選實(shí)施例中，賴氨酸類似物選自于含有2，3-二氨基丙酸(Ddr)，2,4-二氨基丁酸(Dab)和2,5-二氨基戊酸[即鳥(niǎo)氨酸(Orn)]。本領(lǐng)域技術(shù)人員都會(huì)理解"e-氨基酸"的意思。"末端側(cè)鏈基團(tuán)"一詞的意思是指賴氨酸類似物側(cè)鏈上，遠(yuǎn)離該類似物a碳原子的一個(gè)取代基團(tuán)，比如2，3-二氨基丙酸的P氨基，2，4-二氨基丁酸的Y氨基或者是鳥(niǎo)氨酸的5氨基。發(fā)明人發(fā)現(xiàn)大多數(shù)有效的脂肽都具有極高的溶解性。本發(fā)明中脂肽在缺乏外源佐劑時(shí)誘導(dǎo)抗體反應(yīng)的相對(duì)活性，可以通過(guò)它們能在未成熟樹(shù)突細(xì)胞(DC)表面正調(diào)節(jié)MHCII類分子的表達(dá)活力得到反應(yīng)，尤其是Winzler等人所描述的Dl細(xì)胞(WinzleretaZ/￡yp￥e"《5;317,1997)。本領(lǐng)域技術(shù)人員都熟知，賴氨酸中的e-氨基是該氨基酸中的側(cè)鏈末端氨基基團(tuán)。使用賴氨酸的e-氨基或賴氨酸類似物的末端側(cè)鏈基團(tuán)與脂質(zhì)部分進(jìn)行交聯(lián)，有助于作為共-線性氨基酸序列，可以同時(shí)合并輔助T細(xì)胞表位和B細(xì)胞表位的肽部分合成。脂質(zhì)部分通過(guò)賴氨酸殘基的e-氨基或賴氨酸類似物末端側(cè)鏈基團(tuán)相連的脂肽和脂質(zhì)部分通過(guò)賴氨酸a-氨基相連的脂肽有明顯的結(jié)構(gòu)特征區(qū)別。因?yàn)楹笳咧牡闹缓锌梢耘cN末端殘基綴合的脂質(zhì)部分。因此，尤其首選那些位于肽部分之內(nèi)，與脂質(zhì)部分相結(jié)合，至少含有一個(gè)內(nèi)部賴氨酸殘基或內(nèi)部賴氨酸類似物，用來(lái)分隔具有免疫學(xué)功能性的細(xì)胞表位。比如，內(nèi)部賴氨酸殘基或內(nèi)部賴氨酸類似物殘疾可以作為一種細(xì)胞表位之間的隔離物和/或連接殘基。在自然條件下，當(dāng)內(nèi)部賴氨酸或內(nèi)部賴氨酸類似物位于輔助T細(xì)胞表位和B細(xì)胞表位之間時(shí)，脂質(zhì)部分將會(huì)與這些表位之間的某個(gè)位置進(jìn)行連接，雖然這樣會(huì)使得多肽鏈的氨基酸序列形成一個(gè)新的分支。更適宜的情況是，釆用單一的內(nèi)部賴氨酸殘基或內(nèi)部賴氨酸類似物來(lái)分隔B細(xì)胞與輔助T細(xì)胞表位(例如，以下序列ID序號(hào)中的任何一個(gè)7，9，13，106,108，110或112)，在這樣的情況下，脂質(zhì)部分將與位于輔助T細(xì)胞表位和抗原性B細(xì)胞表位之間氨基酸序列上賴氨酸殘基的e-氨基或賴氨酸類似物末端側(cè)鏈基團(tuán)相連接。內(nèi)部賴氨酸的e-氨基或賴氨酸類^^物的末端側(cè)鏈基團(tuán)可以通過(guò)化學(xué)基團(tuán)進(jìn)行保護(hù)，這些基團(tuán)與那些用來(lái)保護(hù)a-氨基和其他氨基酸側(cè)鏈功能基團(tuán)互成直角。這樣的話，賴氨酸的e-氨基或賴氨酸類似物的末端側(cè)鏈基團(tuán)就可以被選擇性的暴露出來(lái)，與其他化學(xué)基團(tuán)進(jìn)行結(jié)合，比如含脂的部分，可以恰當(dāng)?shù)呐ce-氨基或末端側(cè)鏈基團(tuán)進(jìn)行特異性結(jié)合。采用Fmoc化學(xué)方法進(jìn)行多肽的合成，可以通過(guò)對(duì)Fmoc-Lys(Mtt)-OH(Na-Fmoc-Ns-4-甲基三苯甲基-L-賴氨酸)氨基酸殘基進(jìn)行修飾來(lái)對(duì)賴氨酸的e氨基進(jìn)行正交的保護(hù)，同樣也可以預(yù)期也可用于多種賴氨酸類似物側(cè)鏈基團(tuán)進(jìn)行類似的正交保護(hù)，比如Fmoc-Om(Mtt)-OH(N-Fmoc-N-4-甲基三苯甲基-L-鳥(niǎo)氨酸)，F(xiàn)moc-Dab(Mtt)-OH(N-Fmoc-N-4-甲基三苯甲基-L-二氨基丁酸)和Fmoc-Dpr(Mtt)-OH(N-Fmoc-N-4-甲基三苯甲基-L-二氨基丙酸)側(cè)鏈保護(hù)基團(tuán)Mtt對(duì)于這樣的條件是穩(wěn)定的，即存在于賴氨酸或賴氨酸類似物的a氨基的Fmoc基團(tuán)被移走，但可以選擇性地被存在于二氯甲烷中的1%三氟乙酸選擇性地移走被移走。Fmoc-Lys(Dde)-OH(Na-Fmoc-Ne-l-(4,4-二甲基-2，6-二氧雜環(huán)己基-l-內(nèi)錢鹽)乙基-L-賴氨酸)或Fmoc-Lys(ivDde)-OH(Na-Fmoc-Ns-1-(4,4-二甲基-2，6-二氧雜環(huán)己基-l-二價(jià))-3-甲基丁基-L-賴氨酸)也能被用于本文，其中的Dde側(cè)鏈保護(hù)基團(tuán)在通過(guò)聯(lián)氨處理進(jìn)行多肽合成期間被選擇性地移走。Boc-Lys(Fmoc)-0H可用于Boc化學(xué)多肽合成，側(cè)鏈保護(hù)基團(tuán)Fmoc可以通過(guò)哌啶或DBU(1,8-Diazabicyclo[5.4.0]undec-7-ene)處理進(jìn)行選擇性去除，如果用三氟乙酸對(duì)a末端的Boc基團(tuán)進(jìn)行去除時(shí)，則Fmoc可以繼續(xù)存在。對(duì)每一種與輔助T細(xì)胞表位，B細(xì)胞表位和脂的結(jié)合情況來(lái)說(shuō)，輔助T細(xì)胞表位與B細(xì)胞表位之間的最適距離，以及隨之而來(lái)的本發(fā)明中脂肽內(nèi)部賴氨酸或賴氨酸類似物殘基的精確位置和數(shù)量，很容易根據(jù)經(jīng)驗(yàn)來(lái)確定。在合成肽與多肽的條件下，對(duì)所采用合成方法的限制可以被用來(lái)部分的決定輔助T細(xì)胞表位和B細(xì)胞表位之間的分隔是可完成的，以及內(nèi)部賴氨酸或賴氨酸類似物殘基的數(shù)量和位置。更優(yōu)選，輔助T細(xì)胞表位和B細(xì)胞表位至少被包含一個(gè)內(nèi)部賴氨酸殘基或賴氨酸類似物殘基的一個(gè)或兩個(gè)或三個(gè)或四個(gè)或五個(gè)氨基酸殘基所分隔。很清楚，本發(fā)明致力于將多個(gè)脂質(zhì)部分連接到肽部分上。為了達(dá)到這個(gè)目的，多肽鏈可以包含多個(gè)內(nèi)部賴氨酸殘基或多個(gè)內(nèi)部賴氨酸殘基類似物以及它們的混合形式。在與脂質(zhì)部分相連時(shí)，如果多個(gè)內(nèi)部賴氨酸或賴氨酸類似物殘基的位置過(guò)于緊密時(shí)，會(huì)產(chǎn)生空間位阻的情況，從而導(dǎo)致終產(chǎn)物的混合，或者是產(chǎn)率的降低。與此相類似的一種考慮情況是這樣一種事實(shí)，即并不需要含有輔助T細(xì)胞表位或B細(xì)胞表位的整個(gè)氨基酸序列，才能具有免疫功能。從而，同時(shí)擁有這些表位的上述氨基酸序列可以擁有不具有輔助T細(xì)胞活性或B細(xì)胞表位的額外序列。額外序列含有一個(gè)或多個(gè)內(nèi)部賴氨酸或賴氨酸類似物殘基，這些殘基的末端側(cè)鏈基團(tuán)可以作為與脂質(zhì)部分結(jié)合時(shí)的位點(diǎn)。很自然，首要的問(wèn)題是保持輔助T細(xì)胞的與B細(xì)胞表位的功能。與脂質(zhì)部分結(jié)合時(shí)內(nèi)部賴氨酸殘基或內(nèi)部賴氨酸類似物的位置也應(yīng)該經(jīng)過(guò)選擇，這樣才能使得在注射了脂肽的機(jī)體中，與脂質(zhì)部分進(jìn)行的結(jié)合不會(huì)影響到輔助T細(xì)胞表位或B細(xì)胞表位的免疫功能。比如，依賴于對(duì)脂質(zhì)部分的選擇，該脂質(zhì)部分與與B細(xì)胞表位內(nèi)部的結(jié)合可以在分子空間排布上阻礙抗原呈遞。通式(VI)提供了本發(fā)明中脂肽的一種廣泛首選形式，其中內(nèi)部賴氨酸或內(nèi)部賴氨酸類似物被放置于輔助T細(xì)胞和B細(xì)胞表位之間。分子式(VI)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage76</formula>其中表位指的是輔助T細(xì)胞表位或B細(xì)胞表位A可以存在或不存在，它含有1到6殘基長(zhǎng)度的一種氨基酸間隔;n是l,2，3或4的整數(shù)；X是一個(gè)從含有NH，0和S官能團(tuán)中挑選出來(lái)的的末端側(cè)鏈基團(tuán)，更優(yōu)選含有NH的官能團(tuán)；Y可以存在或不存在，它含有1到6殘基長(zhǎng)度的一種氨基酸間隔，其中優(yōu)選氨基酸間隔包括精氨酸，絲氨酸或6-氨基己酸；以及Z是一種脂質(zhì)部分，更優(yōu)選一種從含有Pam2Cys，PamaCys，Ste2Cys，Lau2Cys和0ct2Cys.的組中挑選出來(lái)的脂氨基酸部分。本領(lǐng)域的技術(shù)人員應(yīng)該意識(shí)到，Ste2Cys也被認(rèn)為是S-[2，3-雙(stearoyloxy)丙基]半胱氨酸或distearoyl-S-丙三基-半胱氨酸；Lau2Cys也可被認(rèn)為是S-[2,3-雙(lauroyloxy)丙基]半胱氨酸或dilauroyl-S-丙三基-半胱氨酸)；0ct2Cys也可被認(rèn)為是S-[2,3-雙(octanoyloxy)丙基]半胱氨酸或二辛胺-S-丙三基-半胱氨酸)。對(duì)本領(lǐng)域的技術(shù)人員來(lái)說(shuō)，輔助T細(xì)胞表位是指任意一種可以提高目標(biāo)機(jī)體(即人類機(jī)體，或一種具體的非人類動(dòng)物機(jī)體，比如小鼠，大鼠，豚鼠，狗，馬，豬或山羊)免疫應(yīng)答反應(yīng)的輔助T細(xì)胞表位。首選的輔助T細(xì)胞表位包含至少10到24殘基長(zhǎng)度的氨基酸，更普通的情況是包含15到20個(gè)殘基長(zhǎng)度的氨基酸。特別優(yōu)選混雜或可允許的輔助T細(xì)胞表位，因?yàn)樗鼈兒苋菀捉?jīng)化學(xué)合成而且不需要使用含有多個(gè)輔助T細(xì)胞表位的長(zhǎng)多肽。適合在應(yīng)用于本發(fā)明脂肽中，含有混雜或可允許的輔助T細(xì)胞表位的實(shí)例，是從含有下述成分的基團(tuán)中挑選出來(lái)的一種嚙齒動(dòng)物或人類破傷風(fēng)毒素多肽(TTP)的輔助T細(xì)胞表位，比如TTP的830-843殘基(Panina-Bordignon"a丄，"，2237-2242,1989);—種嚙齒動(dòng)物或人類惡性瘧原蟲(chóng)pfg27的輔助T細(xì)胞表位；一種嚙齒動(dòng)物或人類乳酸脫氫酶的輔助T細(xì)胞表位；一種嚙齒動(dòng)物或人類HIV或HlVgpl20外殼蛋白的輔助T細(xì)胞表位(Berzofskyeta丄，/幼，876-884，1991);一種從已知錨定蛋白氨基酸序列(Alexandereta丄，/扁"/2j't7,751-761，1994)進(jìn)行預(yù)測(cè)人工合成的人輔助T細(xì)胞表位(PADRE);一種嚙&動(dòng)物或人類麻疹病毒融合蛋白的輔助T細(xì)胞表位(MV-F;Mullereta丄，#。丄i"層〃/o丄<《37—47,1995;Partidoseta丄，/.Ge/7.Kz'ro丄，77,2099—2105,1990);一種含有至少IO個(gè)氨基酸殘基犬瘟熱病毒融合蛋白(CDV-F)的輔助T細(xì)胞表位，例如CDV-F中的148-283氨基酸殘基(Ghosheta丄，/層/70/.竭58-66,2001;國(guó)際專利申請(qǐng)W000/46390);一種從MUC1粘蛋白(美國(guó)專利0020018806)細(xì)胞外串聯(lián)重復(fù)結(jié)構(gòu)域多肽序列衍生而來(lái)的輔助T細(xì)胞表位；一種嚙齒動(dòng)物或人類流感病毒血細(xì)胞凝集素(IV-H)(JacksonWa丄K/ro丄7然613-623，1994)的輔助T細(xì)胞表位；以及一種?；蝰橊効谔阋卟《綱P3蛋白(FMDV-0,Kaufbeuren病毒株)的輔助T細(xì)胞表位，它包含VP3中173-176殘基或與FMDV其他病毒株相對(duì)應(yīng)的氨基酸序列。本領(lǐng)域中的技術(shù)人員應(yīng)意識(shí)到，一種輔助T細(xì)胞表位可以為一種或多種不同種屬的哺乳動(dòng)物所識(shí)別。由此，在這里對(duì)任意輔助T細(xì)胞表位的命名并不僅限于識(shí)別該細(xì)胞表位免疫系統(tǒng)的物種本身。比如，—種嚙齒動(dòng)物輔助T細(xì)胞表位可以被小鼠，大鼠，兔，豚鼠，以及其他嚙齒動(dòng)物，或人類，或狗等動(dòng)物的免疫系統(tǒng)所識(shí)別。更優(yōu)選，輔助T細(xì)胞表位具有的氨基酸序列是從含有以下序列的基團(tuán)中挑選出來(lái)的GAL腿FQIKGVELKS來(lái)自于IV-H(序列ID序號(hào):1);ALNNRFQIKGVELKS來(lái)自于IV-H(序列ID序號(hào)18);LSEIKGVIVHRLEGV來(lái)自于MTAAQITAGIALHQSNLN來(lái)白于IGTDNVHYKIMTRPSHQ來(lái)白于YKIMTRPSHQYLVIKLI來(lái)白于SHQYLVIKLIPNASLIE來(lái)白于KLIPNASLIENCTKAEL來(lái)白于LIENCTKAELGEYEKLL來(lái)白于AELGEYEKLLNSVLEPI來(lái)白于KLLNSVLEPINQALTLM來(lái)白于EPINQALTLMTKNVKPL來(lái)白于TLMTKNVKPLQSLGSGR來(lái)白于KPLQSLGSGRRQRRFAG來(lái)白于SGRRQRRFAGVVLAGVA來(lái)白于FAGVVLAGVALGVATAA來(lái)白于GVALGVATAAQITAGIA來(lái)白于GIALHQSNLNAQAIQSL來(lái)白于NLNAQAIQSLRTSLEQS來(lái)白于QSLRTSLEQSNKAIEEI來(lái)白于EQSNKAIEEIREATQET來(lái)白于SSKTQTHTQQDRPPQPS來(lái)白于QPSTELEETRTS證HS來(lái)白于RHSTTSAQRSTHYDPRT來(lái)白于PRTSDRPVSYTMNRTRS來(lái)白于TRSRKQTSHRLKNIPVH來(lái)白于TELLSIFGPSLRDPISA來(lái)白于PRYIATNGYLISNFDES來(lái)白于CIRGDTSSCARTLVSGT來(lái)白于-F(序列ID序號(hào)19);CDV-F(序列ID序號(hào)20)CDV-F(序列ID序號(hào)21)CDV-F(序列ID序號(hào)22)CDV-F(序列ID序號(hào)23)CDV-F(序列ID序號(hào)24)CDV-F(序列ID序號(hào)25)CDV-F(序列ID序號(hào)26)CDV-F(序列ID序號(hào)27)CDV-F(序列ID序號(hào)28)CDV-F(序列ID序號(hào)29)CDV-F(序列ID序號(hào)30)CDV-F(序列ID序號(hào)31)CDV-F(序列ID序號(hào)32)CDV-F(序列ID序號(hào)33)CDV-F(序列ID序號(hào)34)CDV-F(序列ID序號(hào)35)CDV-F(序列ID序號(hào)36)CDV-F(序列ID序號(hào)37)CDV-F(序列ID序號(hào)38)CDV-F(序列ID序號(hào)39)CDV-F(序列ID序號(hào)40)CDV-F(序列ID序號(hào)41)CDV-F(序列ID序號(hào)42)CDV-F(序列ID序號(hào)43)CDV-F(序列ID序號(hào)44)CDV-F(序列ID序號(hào)45)DESSCVFVSESAICSQN來(lái)自于CDV-F(序列ID序號(hào):46);TSTIINQSPDKLLTFIA來(lái)自于CDV-F(序列ID序號(hào):47);SPDKLLTFIASDTCPLV來(lái)自于CDV-F(序列ID序號(hào):48);STAPPAHGVTSAPDTRAPGSTAPP來(lái)自于MUC-1(序列ID序號(hào)49);GVTSAPDTRPAPGSTASSL來(lái)自于MUC-1(序列ID序號(hào):50);GVTSAPDTRPAPGSTASL來(lái)自于MUC-1(序列ID序號(hào)51);TAPPAHGVTSAPDTRPAPGSTAPPKKG來(lái)自于MUC-1(序列ID序號(hào)52);STAPPAHGVTSAPDTRPAPGSTAPPK來(lái)自于MUC-1(序列ID序號(hào):53);GVAE來(lái)自于FMDV-VP3protein(序列ID序號(hào):54);TASGVAETTN來(lái)自于FMDV-VP3protein(residues170to179)(序列ID序號(hào)55);以及TAKSKKFPSYTATYQF來(lái)自于FMDV(序列ID序號(hào):56)。在這里所公開(kāi)的輔助T細(xì)胞表位的目的是僅限于作為實(shí)施例使用。對(duì)本領(lǐng)域的研究人員來(lái)說(shuō)，采用標(biāo)準(zhǔn)的多肽合成技術(shù)，可以很容易用其他不同的輔助T細(xì)胞表位取代在這里所提到的輔助T細(xì)胞表位，使之成為適合于本發(fā)明中的脂肽，在不同的物種上得到應(yīng)用。因此，并不排除本領(lǐng)域研究人員所熟知的，對(duì)提升或增強(qiáng)目的物種免疫應(yīng)答反應(yīng)的額外輔助T細(xì)胞表位。采用體外T細(xì)胞刺激技術(shù)，可以對(duì)構(gòu)成額外輔助T細(xì)胞表位的蛋白質(zhì)組成，蛋白質(zhì)片斷和多肽進(jìn)行詳細(xì)地分析，進(jìn)而鑒定出適合的序歹!j(Goodman禾口Sercarz，」肌Wer./鵬w/7a/.,二465，(1983);Berzofsky,〃TheYearinImmunology,Vol.2〃page151，Karger:Basel,1986;以及Livingstone禾口Fathman,//72fli//7a/.,5477，1987)。B細(xì)胞表位可以方便的從病毒，原核或真核有機(jī)體中具有免疫原性的蛋白質(zhì)，脂蛋白或糖蛋白的氨基酸序列得到，這些抗原存在于但不僅限于哺乳動(dòng)物，細(xì)菌，真菌，原生動(dòng)物或感染了該機(jī)體的寄生蟲(chóng)中。對(duì)應(yīng)于免疫應(yīng)答的特應(yīng)及抗特應(yīng)性B細(xì)胞表位是希望得到并明確包括在內(nèi)的，比如脂修飾的B細(xì)胞表位?；蛘撸珺細(xì)胞表位是一種碳水化合物抗原，比如一種ABH血清抗原，移植抗原(比如Galalphal-3Galbetal-4GlcNAc;Sandrin等，尸度.淑丄5"c丄〃5M卯，11391—11395，1993;Galili等，尸rocA,at』.lad〃a斜，1369-1373，1987;Schofield等，腸t〃reW&'785-789，2002)或者它們的變化形式。當(dāng)對(duì)哺乳動(dòng)物施用時(shí)，B細(xì)胞表位可以引起抗體的生成，優(yōu)選中和抗體，更優(yōu)選高滴度的中和抗體。優(yōu)選較短的B細(xì)胞表位用以促進(jìn)肽的合成。優(yōu)選，B細(xì)胞表位不應(yīng)該超過(guò)30個(gè)氨基酸的長(zhǎng)度。優(yōu)選B細(xì)胞表位序列不超過(guò)25個(gè)氨基酸殘基或更短，更優(yōu)選B細(xì)胞表位序列少于20個(gè)氨基酸殘基甚至是只有5-20個(gè)氨基酸殘基。更優(yōu)選，合成多肽的構(gòu)象與來(lái)源于天然的B細(xì)胞表位多肽項(xiàng)類似。優(yōu)選的寄生蟲(chóng)B細(xì)胞表位與有利什曼原蟲(chóng)，瘧疾，錐蟲(chóng)病，巴貝西蟲(chóng)病或血吸蟲(chóng)病相關(guān)，比如，從含有下列成分的基團(tuán)中挑選出的B細(xì)胞表位一種惡性疙原蟲(chóng)的B細(xì)胞表位(NANP)3(Good等，/艙^7(54，6551986);一種瘧原蟲(chóng)的B細(xì)胞表位(Good等，尸n^ei/5"cj'.,1059，1987);一種含有利什曼原蟲(chóng)^加raW重復(fù)多肽326-343氨基酸殘基的B細(xì)胞表位(Liewefa丄，#ed/Z,1359(1990));—種含有弓形蟲(chóng)gondiiP30表面蛋白的B細(xì)胞表位(Darcyeta丄'"S3636(1992));以及—種含有5b/7j's^oo邁a咖72so/j.Sm-28GST抗原(Wolowxzuk"a丄，7"./順〃/o(1991))的B細(xì)胞表位。優(yōu)選病毒特異性B細(xì)胞表位來(lái)自于輪狀病毒，皰疹病毒，冠狀病毒，小核糖核酸病毒(即^aoWr"s)，呼吸道合胞病毒，流感病毒，副流感病毒，腺病毒，痘病毒，牛皰疹病毒I型，牛病毒性腹瀉病毒，牛輪狀病毒，犬瘟熱病毒(CDV)，馬鼻炎A型病毒(ERAV)，馬鼻炎B型病毒(ERBV)，口蹄疫病毒(FMDV)，麻疹病毒(MV)，人免疫缺失性病毒(HIV)，貓免疫缺失性病毒(FIV)，埃-巴二氏病毒(EBV),或肝炎病毒等，禾0/或可產(chǎn)生與其相對(duì)應(yīng)的抗體。適合的病毒性B細(xì)胞表位包括且不僅限于來(lái)自于含有下列物質(zhì)的基團(tuán)HIVgpl20V3環(huán)狀區(qū)域的308-311氨基酸殘基(Jatsushita等，「j'i-o丄62,2107(1988));HIVgpl20的428-443氨基酸殘基(Ratner等，iVa^/re3M:277(簡(jiǎn)))；HIVgpl20的112-124氨基酸殘基(Berzofsky等，諷706(1988));一種HIV逆轉(zhuǎn)錄酶的B細(xì)胞表位(Hosmalin等./Voc.泡W&ad《7,2344(1990));流感病毒核蛋白的335-349氨基酸殘基(Townsend等.W,959(1986));流感病毒核蛋白的366-379氨基酸殘基(Townsend等.6W7",959(1986));流感病毒紅血球凝集素的48-66氨基酸殘基(Mills等，&A編，縱1477(1986));流感病毒紅血球凝集素的111-120氨基酸殘基(Hackett等，￡早淑潔，294(1983));流感病毒紅血球凝集素的114-131氨基酸殘基(Lamb和Green,i"卿/7CL柳犯659(畫(huà)))；埃-巴二氏病毒LMP氨基酸的43-53殘基(Thorley-Lawson等，尸roc.7fet75"c丄<945384(1987)):乙型肝炎病毒表面抗原的95-109氨基酸殘基(Milich等，/卿i/;7a."《4203(1985));乙型肝炎病毒表面抗原的140-154氨基酸殘基；乙型肝炎病毒Pre-S抗原的120-132氨基酸殘基(Milich等，/#ed532(1986));單純難疹病毒gD蛋白的5-23氨基酸殘基(Jayaraman等，//廁/2o丄風(fēng)5777(1993));單純皰疹病毒gD蛋白的241-260氨基酸殘基(Wyckoff等，J咖moWo丄，777,134(1988));狂犬病糖蛋白的32-44氨基酸殘基(MacFarlan等，/./順";jo丄，，2748(1984));至少含有口蹄疫病毒血清型O,VP1衣殼蛋白134-168殘基，或137-160殘基，或142-160殘基，或137-162殘基，或145-150殘基，或者其他病毒血清型的相應(yīng)氨基酸殘基，比如血清型A，C，SAT1,SAT2，SAT3或ASIA1(美國(guó)專利5，864，008和6,107，021)的主要口蹄疫病毒細(xì)胞表位；以及丙型肝炎病毒(HCV)變種AD78病毒E2蛋白的高度可變區(qū)l(HVRl)(Zibert等，/Kzo丄W，4123—4127，1997)。優(yōu)選細(xì)菌特異性B細(xì)胞表位來(lái)自于巴斯德菌，放線菌，嗜血桿菌，單核細(xì)胞增多性李氏菌，分支桿菌，葡萄球菌，大腸桿菌和志賀菌等，且/或可產(chǎn)生與之相對(duì)應(yīng)的抗體。適合的細(xì)菌性B細(xì)胞表位包括且不僅限于來(lái)自于含有下列物質(zhì)的基團(tuán)結(jié)核分枝桿菌65Kd蛋白質(zhì)的112-126氨基酸殘基(Lambeta丄，《1245(1987));結(jié)核分枝桿菌65Kd蛋白質(zhì)的163-184氨基酸殘基(Lambeta丄，潔0/"《1245(1987));結(jié)核分枝桿菌65Kd蛋白質(zhì)的227-243氨基酸殘基(Lambeta丄，f娜《1245(1987));結(jié)核分枝桿菌65Kd蛋白質(zhì)的242-266氨基酸殘基(Lambeta丄，6,1245(1987));結(jié)核分枝桿菌65Kd蛋白質(zhì)的437-459氨基酸殘基(LambWa丄，f朋O《1245(1987));結(jié)核分枝桿菌ESAT-6蛋白質(zhì)的3-15氨基酸殘基(Mortena丄，/"/e".J廁".錄717-723,1998);結(jié)核分枝桿菌ESAT-6蛋白質(zhì)的40-62氨基酸殘基(Mortena丄，/"/e".i/fflm//.6《717—723,1998);淋巴結(jié)結(jié)核分支桿菌A-抗原的279-290氨基酸殘基(Mikiko"a丄，#icroZ.95-100,1997);金黃色葡萄球菌核酸酶61-80氨基酸殘基(Finneganeta丄，/.編，諷897(1986));大腸桿菌熱穩(wěn)定腸毒素的一種B細(xì)胞表位(Cardenas"a丄，J"/ect.i"廳"jYy(W,4629(1993));大腸桿菌熱不穩(wěn)定腸毒素的一種B細(xì)胞表位(Clements"a丄，7>/ect.i"順"/7J'tr5^,685(1986));5"/j>e"3so72"eJ'I型抗原的一種B細(xì)胞表位(Formala.,i/j/ect.//nmw7i^r34，746(1981));來(lái)自于A群鏈球菌的一種B細(xì)胞表位，一種適宜的情況是從M蛋白，較適宜的情況是來(lái)自于M蛋白的C末端半部分，更適宜的情況是來(lái)自于M蛋白保守的C末端半部分最小化，螺旋狀的非寄主交叉反應(yīng)多肽，它包含有一種非M蛋白多肽擬/原來(lái)用于保持螺旋的折疊和在這種最小化螺旋狀的非寄豐交叉反應(yīng)多肽的抗原性。(沒(méi)有遞進(jìn)關(guān)系)比如，非M蛋白多肽(即J14多肽)可以用化學(xué)方^^與一種或多種血清型的M蛋白多肽相連，使得免疫原在:^烴主鏈上表現(xiàn)出所有單個(gè)肽鏈的的伸展情況，因此具有了極好的免疫原性和保護(hù)。(US6，174，528;Brandt"a7.,6:455—459,2000)。一種霍亂毒素B亞基(CTB)的B細(xì)胞表位，比如由KazeraiandFinkelsteinU.J鵬"加丄2《865-876，1991描述的例子；一種炭疽桿菌蛋白的B細(xì)胞表位，比如一種來(lái)源于炭疽外生孢子250kDa糖蛋白的B細(xì)胞表位(Sylvestreeta丄，//:Proc.4thInt.Conf.Anthrax,StJohn，sCollegeAnnapolid,Mayiand，CAJune10-13，2001，Abstract31B)，以及一種來(lái)源于破傷風(fēng)蛋白的B細(xì)胞表位，比如破傷風(fēng)類毒素蛋白。優(yōu)選來(lái)自于哺乳動(dòng)物集體的B細(xì)胞表位來(lái)自于一種腫瘤抗原，且/或可產(chǎn)生與其相對(duì)應(yīng)的抗體。腫瘤抗原通常是天然的或外源的抗原，它的表達(dá)于腫瘤的發(fā)育，生長(zhǎng)，存在或復(fù)發(fā)相關(guān)。一定數(shù)量的腫瘤抗原可使得正常組織分化為異常組織，并作為干涉治療的目標(biāo)。腫瘤抗原在本領(lǐng)域中已為大家深入了解，目前己有幾個(gè)詳細(xì)的案例集中闡述腫瘤特異性治療的產(chǎn)生。非限制性的腫瘤抗原有癌胚抗原(CEA)，前列腺特異性抗原(PSA)，黑素瘤抗原(MAGE，BAGE，GAGE)和粘蛋白，比如MUC-l。其他優(yōu)選的晡乳動(dòng)物B細(xì)胞表位來(lái)源于人類或其他哺乳動(dòng)物比如豬透明帶蛋白例如ZP3(ChamberlinandDean尸roc.7V^t/.力caaCf〃5>t><^，6014-6018，1990)或ZP3a(Yurewicz萬(wàn)ioc/i瓜5jfo/力7s.』"a〃a，211-214,1993)。在這一類B細(xì)胞表位中，尤其首選的是任ZP3蛋白323-341氨基酸殘基(ChamberlinandDean尸roc.JcW.5bi.dKSi)<57，6014-6018，1990)或豬ZP3a蛋白的8-18氨基酸殘基，或272-283氨基酸殘基，或319-330氨基酸歹戔基(Yurewiczefa丄，Sj'cc/lz.瓜^z'op//^.力ctaJ77《211—214，1993)。更優(yōu)選哺乳動(dòng)物B細(xì)胞表位來(lái)源于如過(guò)飽激素(即瘦蛋白)，消化激素(即胃泌素)，生殖性肽類激素(即黃體素釋放激素L服H)，促卵泡素(FSH)，黃體素(LH)，人絨毛膜促性腺激素(hCG;Carlsenefa丄，/5j'o丄C/e瓜2必，6810-6827,1973)等月太激素，或者FSH受體(Kraaij"a丄，/-^7abcrjV7a.7幼，127—136，1998)等激素受體，且/或可產(chǎn)生與其相對(duì)應(yīng)的抗體。更優(yōu)選的哺乳動(dòng)物B細(xì)胞表位來(lái)源于肽激素，比如過(guò)飽激素(即瘦蛋白)，消化激素(即胃泌素)或生殖性肽類激素(即黃體素釋放激素LHRH)，促卵泡素(FSH),黃體素(LH)，人絨毛膜促性腺激素(hCG;Carlsen"a丄，/67e瓜i^9，6810—6827,1973)，或者激素受體，如FSH受體(Kraaij/.￡f7obcr_z'/7o."《127-136，1998)，且/或可產(chǎn)生與其相對(duì)應(yīng)的抗體。在這一類B細(xì)胞表位中，尤其優(yōu)選具有抗原性且不與LH發(fā)生交聯(lián)的b-hCG碳末端部分(CTR)(Carlsen"a丄，/.A'o丄C/e瓜24《6810—6827,1973)。在某個(gè)特定的優(yōu)選實(shí)施例中，含有B細(xì)胞表位多肽的氨基酸序列是從下面挑選出來(lái)的(i)來(lái)源于L服H的EHWSYGLRPG(在這里將其稱之為L(zhǎng)HRH1-10,SEQIDNo.2);(ii)來(lái)源于LHRH的HWSYGLRPG(在這里將其稱之為L(zhǎng)HRH2-10，SEQIDNo.3);(iii)來(lái)源于LHRH的GLRPG(在這里將其稱之為L(zhǎng)HRH6-10，SEQIDNo.4);(iv)來(lái)自于Zej's/鵬/n'鵬》r的EAEEMRLQA;(v)從下述序列中挑選出來(lái)含有口蹄疫病毒非結(jié)構(gòu)蛋白3A，3B或3C(美國(guó)專利6,048,538)的一段序列FRERTLTGQRACNDVNSE(SEQIDNo.58)，NPLETSGASTVGFRERTL(SEQIDNo.59),IRETRKRQKMVDDAVNEY(SEQIDNo.60)，AKAP雨EGPYEGPVKKPV(SEQIDNo.61)，AGPLERQKPLKVKAKAPVV(SEQIDNo.62)，KVRAKLPQQEGPYAGPLER(SEQIDNo.63)，GPYTGPLERQRPLKVRAKL(SEQIDNo.64)，VGRLIFSGEALTYKDIVV(SEQIDNo.65)，TKHFRDTARMKKGTPVVGV(SEQIDNo.66)，以及SGAPPTDLQKMVMGNTKPV(SEQIDNo.67);(vi)來(lái)源于口蹄疫病毒VP1主要細(xì)胞表位的NKYSASGSGVRGDFGSLAPRVARQLPASFNYGAIK(US6,107,021;SEQIDNo.68);(vii)從含有LYTKVVHYRKWIKDTIVANP(SEQIDNo.69)，AVKVMDLPQEPALGTTCYA(SEQIDNo.70)，IVGGWECEKHSQPWQVLVAS(SEQIDNo.71)，CAQVHPQKVTKFML(SEQIDNo.72),YLMLLRLSEPAELTDDAVKVM(SEQIDNo.73)，LLKNRFLRPGDDSSHDLMLLY(SEQIDNo.74),以及ILLGRHSLFHPEDTGQVFQVY(SEQIDNo.75)等序列中挑選出的一段前列腺特異性抗原(US6,326,471);(viii)來(lái)源于b-Hcg的TCDDPRFQDSSSSKAPPPSLPSPSRLPGPSDTPILPQ序列(SEQIDNo.76);(ix)來(lái)源于FSH受體的CQDSKVTEIPTLPRNAI序列(SEQIDNo.77);(X)來(lái)源于人ZP3蛋白的NKGDCGTPSHSRRQPHVMS序列(序列ID序號(hào)78);(xi)從含有WLCFPLCLALP(SEQIDNo.79)，LGGLYCGPSSF(SEQIDNo.80)，GSITRDSIFRLR(SEQIDNo.81)，SALPVNIQVFTL(SEQIDNo.82)，ELQIAKDERYGS(SEQIDNo.83)和VKLLREPIYVEV(SEQIDNo.84)等序列中挑選出的一段豬ZP3a蛋白序列；(xii)來(lái)源于癌胚抗原的PPAQYSWLIDGN(CEA,SEQIDNo.85);(xiii)從含有ANASQTDNGVNRSGSEDPTV(SEQIDNo.86)和PETKHPKKGVEKYGPEASAF(SEQIDNo.87)的序列中挑選出的一段葡萄球菌核酸酶序列<formula>formulaseeoriginaldocumentpage88</formula>(xiv)從含有LVLLDYQGMLPVCPL(SEQIDNo.88)和TKPSDGNCTCIPIPS(SEQIDNo.89)的序列中挑選出的一段乙型肝炎病毒表面抗原序列(KobayashiandKoike,C觀227-232,1984);(xv)來(lái)源于乙型肝炎病毒前體表面抗原的MQWNSTTFHQALL(SEQIDNo.90);(xvi)從含有MFEDLRVSSFIRGT(SEQIDNo.91)和SNENMETMDSSTLE(SEQIDNo.92)的序列中挑選出的一段流感病毒和蛋白序列<formula>formulaseeoriginaldocumentpage88</formula>(xvii)從含有HPLILDTCTIEGLIYGNPS(SEQIDNo.93),YQRIQIFPDT(SEQIDNo.94)，和IQIFPDTI,SYSGTSK(SEQIDNo.95)等的序列中挑選出的一段流感病毒紅血球凝集素序列；(xviii)來(lái)源于口蹄疫病毒衣殼糖蛋白VP1的CKYSASGSGVRGDFGSLAPRVARCLPASFNTGAIKNKY序列(SEQIDNo.96);(xix)從含有EQQWNFAGIEAAA(SEQIDNo.97)和AAAWGGSGSEAYQGVQQKWDATA(SEQIDNo.98)的序列中挑選出的一段結(jié)核分枝桿菌ESAT-6蛋白序列；(xx)來(lái)源于HCV的GGPTRTIGGSQAQTASGLVSMFSVGPSQK序列(SEQIDNo.99);(xxi)來(lái)源于淋巴結(jié)結(jié)核分支桿菌a抗原的KFQDAYNMGGH(SEQIDNo.100);(xxii)來(lái)源于A型鏈球菌M蛋白(在這里將其稱之為"J14")的KQAEDKVKASREAKKQVEKALEQLEDKVK(SEQIDNo.101);(xxiii)來(lái)源于胃泌素(即含有胃泌素碳末端5個(gè)氨基酸殘基的五肽胃泌素)的GWMDF(SEQIDNo.102)。顯然，從以上描述可知，脂肽的肽部分可以方便的以單一氨基酸鏈的形式進(jìn)行合成，進(jìn)而省略了在與兩種細(xì)胞表位進(jìn)行連接時(shí)的合成后修飾。特別優(yōu)選與流感病毒紅血球凝集素的輔助T細(xì)胞表位(SEQIDNo.1)或CDV-F的輔助T細(xì)胞表位(SEQIDNo.20，24，26或44)結(jié)合的具有高免疫原性LHRH(SEQIDNo.2或3或4)B細(xì)胞表位的肽部分，例如含有選自由以下序列所構(gòu)成的組的氨基酸序列的多肽(i)GALNNRFQIKGVELKSEHWSYGLRPG(SEQIDNo.5);(ii)EHWSYGLRPGGALNNRFQIKGVELKS(SEQIDNo.6);(iii)GALNNRFQIKGVELKSKEHWSYGLRPG(SEQIDNo.7);(iv)EHWSYGLRPGKGALNNRFQIKGVELKS(SEQIDNo.8);(v)KLIPNASLIENCTKAELKHWSYGLRPG(SEQIDNo.9);(vi)AELGEYEKLLNSVLEPIKEHWSYGLRPG(SEQIDNo.10);(vii)TAAQITAGIALHQSNLNKEHWSYGLRPG(SEQIDNo.11);(viii)PRYIATNGYLISNFDESKEHWSYGLRPG(SEQIDNo.12);(ix)KLIPNASLIENCTKAELKGLRPG(SEQIDNo.13);(x)AELGEYEKLLNSVLEPIKGLRPG(SEQIDNo.14);(xi)TAAQITAGIALHQSNLNKGLRPG(SEQIDNo,15);(xii)PRYIATNGYLISNFDESKGLRPG(SEQIDNo.16);(xiii)KLIPNASLIENCTKAELHWSYGLRPG(SEQIDNo.103);和(xiv)KLIPNASLIENCTKAELGLRPG(SEQIDNo.104)。在一個(gè)具體的優(yōu)選實(shí)施方式中，L服H表位(即如SEQIDNo.2所示的LHRH1-10;如SEQIDNo.3所示的LHRH2-10或如SEQIDNo.4所示的LHRH6-10)被放置于可使得其C-末端甘氨酸殘基被暴露出來(lái)或不在內(nèi)部的位置。由此，特別優(yōu)選如SEQIDNo.5，7或9-16中任一序列所示的構(gòu)型。在一個(gè)具體的實(shí)施例中，LHRH1-10被綴合于流感病毒紅血球凝集素輔助T細(xì)胞表位(即SEQIDNo.1)，如通過(guò)SEQIDNo.5或7所示的序列描述；LHRH2-10或LHRH6-10被綴合于CDV-F輔助T細(xì)胞表位(即SEQIDNo.24)，如通過(guò)SEQIDNo.9、13、103或104所示的序列描述。很顯然，其他的結(jié)合情況也是有可能發(fā)生的，并被包含在本發(fā)明中。在另一個(gè)實(shí)施例中，尤其優(yōu)選的是與CDV-F(如SEQIDNo.24)或流感病毒紅血球凝集素(如SEQIDNo.l)結(jié)合的含有A群鏈球菌M蛋白高免疫原性B細(xì)胞表位的肽部分(如SEQIDNo.101所示的J14肽)，比如含有選自由下述序列所組成的組的氨基酸序列的多肽(i)KLIPNASLIENCTKAELKQAEDKVKASREAKKQVEKALEQLEDKVK(SEQIDNo.105);(ii)KLIPNASLIENCTKAELKKQAEDKVKASREAKKQVEKALEQLEDKVK(SEQIDNo.106);(iii)GALNNRFQIKGVELKSKQAEDKVKASREAKKQVEKALEQLEDKVK(SEQIDNo.107);以及(iv)GALNNRFQIKGVELKSKKQAEDKVKASREAKKQVEKALEQLEDKVK(SEQIDNo.108)。在另一個(gè)實(shí)施方式中，優(yōu)選的是與CDV-F(如SEQIDNo.24)或流感病毒紅血球凝集素(如SEQIDNo.1)結(jié)合的具有高免疫原性五肽胃泌素B細(xì)胞表位(如SEQIDNo.l02所示的序列)的多肽部分，比如含有選自由以下序列所構(gòu)成的組的氨基酸序列的多肽(i)KLIPNASLIENCTKAELGWMDF(SEQIDNo.109);(ii)KLIPNASLIENCTKAELKGWMDF(SEQIDNo.110);(iii)GALNNRFQIKGVELKSGWMDF(SEQIDNo.Ill);禾口(iv)GAL鵬FQIKGVELKSKG職F(SEQIDNo.112)。本領(lǐng)域技術(shù)人員能容易地用其它的輔助T細(xì)胞表位或B細(xì)胞表位對(duì)SEQIDNo.5-16中的任一序列或SEQIDNo.103-112的任一序列的輔助T細(xì)胞表位和/或B細(xì)胞表位進(jìn)行取代，對(duì)此也將例舉以用于目的脂肽中。上述其它的表位是如SEQIDNo.18-56所示的輔助T細(xì)胞表位中的任一個(gè)或如SEQIDNo.57-102所示的B細(xì)胞表位中的任一個(gè)。而且，根據(jù)靶物種和期望發(fā)生針對(duì)其的免疫應(yīng)答的抗原，本領(lǐng)域技術(shù)人員可從上述公開(kāi)中選擇合適的輔助T細(xì)胞表位和B細(xì)胞表位的組合。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以針對(duì)特定的目的采用合適的方法，對(duì)這里所描述的實(shí)施例中含有如SEQIDNo.5-16和SEQIDNo.103-112所示的肽部分氨基酸序列進(jìn)行修飾而不減弱他們的免疫功能。比如，可以對(duì)特定的肽殘基進(jìn)行衍生或化學(xué)修飾，以增強(qiáng)它們的免疫應(yīng)答或使得它們與其它的基團(tuán)尤其是脂進(jìn)行結(jié)合。也可以在肽鏈內(nèi)部對(duì)特定的氨基酸進(jìn)行改變而不影響到整個(gè)肽鏈結(jié)構(gòu)或抗原性這種被稱為"保守的"變化是源于殘基的疏水性或極性。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)熟知，獲得一種具有同等生物學(xué)功能的蛋白質(zhì)或多肽的定義意味著，可在分子內(nèi)限定的某一部分進(jìn)行有限次數(shù)的改變，以使得該分子具有在可接受范圍內(nèi)的等同生物學(xué)活性。在這里所定義的生物學(xué)功能等價(jià)物多肽，是指那些可將某些特定的氨基酸殘基進(jìn)行取代的多肽。具體的實(shí)施例中包含可對(duì)其進(jìn)行l(wèi)個(gè)，2個(gè)，3個(gè)，4個(gè)，5個(gè)或更多氨基酸進(jìn)行變化的多肽。當(dāng)然，本發(fā)明也應(yīng)包括通過(guò)簡(jiǎn)單方法獲得與得到應(yīng)用的，對(duì)相同蛋白/多肽進(jìn)行的不同取代反應(yīng)的多種不同結(jié)構(gòu)。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)明白以下的取代情況是可允許的保守性取代(i)涉及到精氨酸，賴氨酸和組氨酸的取代；(ii)涉及到丙氨酸，甘氨酸，絲氨酸和(iii)涉及到苯丙氨酸，色氨酸和酪氨酸。與這些保守性取代基結(jié)合的多肽在這里被定義為生物學(xué)功能等價(jià)物。本領(lǐng)域中都熟知氨基酸親水性指數(shù)對(duì)蛋白質(zhì)互作生物學(xué)功能的重要性。某些氨基酸可為其他具有相似親水性指數(shù)的氨基酸所取代，并依然保留了相似的生物學(xué)活性。氨基酸的親水性指數(shù)也可用來(lái)確定采用何種保守性取代基，以獲得相同功能等價(jià)物分子。基于疏水性和電荷特征，每一種氨基酸都具有一種親水性指數(shù)異亮氨酸(+4.5);纈氨酸(+4.2);亮氨酸(+3.8);苯丙氨酸(+2.8);半胱氨酸(+2.5);甲硫氨酸(+1.9);丙氨酸(+1.8);甘氨酸(-0.4);蘇氨酸(-0.7);絲氨酸(-0.8);色氨酸(-0.9);酪氨酸(-1.3);脯氨酸(-1.6);組氨酸(-3.2);谷氨酸(-3.5);谷氨酰胺(-3.5);天冬氨酸(-3.5);天冬酰胺(-3.5);賴氨酸(-3.9);和精氨酸(-4.5)在進(jìn)行基于親水性指數(shù)進(jìn)行反應(yīng)時(shí)，優(yōu)選的取代氨基酸親水性指數(shù)應(yīng)介于+/-0.2.之間。優(yōu)選所涉及的氨基酸親水性指數(shù)介于+/-0.1之間，更優(yōu)選介于+/-0.05之間。在本領(lǐng)域中進(jìn)行基于疏水性的氨基酸的取代是很有效的，尤其是當(dāng)這些生物學(xué)活性等同蛋白或多肽是用來(lái)在免疫實(shí)施例中進(jìn)行使用的時(shí)候。比如，在美國(guó)專利4,554,101中，各氨基酸具有以下的疏水性指數(shù)精氨酸(+3.0);賴氨酸(+3.0);天冬氨酸(+3.0+/-0.1);谷氨酸(+3.0+/-0.1);絲氨酸(+0.3);天冬酰胺(+0.2);谷氨酰胺(+0.2);甘氨酸(O);蘇氨酸(-0.4);脯氨酸(-0.5+/-0.1);丙氨酸H).5);組氨酸(-0.5);半胱氨酸(-1.0);甲硫氨酸(-1.3);纈氨酸(-1.5);亮氨酸(-1.8);異亮氨酸(-1.8);酪氨酸(-2.3);苯丙氨酸(-2.5);色氨酸(-3.4)。在進(jìn)行基于疏水性指數(shù)進(jìn)行反應(yīng)時(shí)，首選的取代氨基酸疏水性指數(shù)應(yīng)介于+/-0.2.之間，適宜的情況是所涉及的氨基酸疏水性指數(shù)介于+/-0.1之間，更適宜的情況是介于+/-0.05之間。一旦某多肽被認(rèn)定為可以作為免疫原進(jìn)行使用，就可以預(yù)期其他具有相似空間結(jié)構(gòu)的化合物也可以用來(lái)模擬該多肽的關(guān)鍵部分。這些被稱為多肽模擬物的化合物，可以在本發(fā)明中與其模擬的多肽具有完全相同的性質(zhì)，即作為功能等同物。本領(lǐng)域中的專業(yè)人員都熟知，可以采用化學(xué)設(shè)計(jì)和建模等技術(shù)獲得這樣的機(jī)構(gòu)功能等同物。同樣，所有這些具有相似空間結(jié)構(gòu)的化合物也屬于本發(fā)明的領(lǐng)域。另一種確定修飾多肽"等同性"的方法涉及到功能方面的方法。例如，一種給定的多肽可以用來(lái)產(chǎn)生單克隆或多克隆抗體。這些抗體隨后可以用對(duì)含有成千上萬(wàn)的簡(jiǎn)并多肽的文庫(kù)進(jìn)行篩選，至少在某種程度上可得到具有免疫結(jié)構(gòu)活性的等價(jià)物。當(dāng)然，這樣的結(jié)構(gòu)可能與用于產(chǎn)生抗體的多肽具有很大的序列同源性，但也有可能相差很大。對(duì)肽部分的合成可以采用諸如Meirifield氏合成方法的標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)(Merrifield,/^zO柳5bc,<95;:2149-2154，1963)及其改進(jìn)技術(shù)(參見(jiàn)，例如，Synthetic-P印tides:AUser'sGuide,Grant,ed.(1992)W.H.Freeman&Co.，NewYork,pp.382:Jones(1994)，TheChemicalSynthesisofPeptides,ClarendonPress,Oxford,pp.230.);Barany，G.andMerrifield，R.B.(1979)in77e尸柳Ves(Gross,E.andMeienhofer，J.eds.)，vol.2,pp.1-284,AcademicPress,NewYork;WUnsch,E.，ed.(1974)5y/7t/eseko"尸eptfofe"j'/〃。l^e/7-^"e/i51#et/oate/7cferQr卵/7j.sc力e;7C力e/z7J.e(Mtller，E.,ed.)，vol.15，4thedn.，Parts1and2,Thieme，Stuttgart;Bodanszky，M.(1984)尸rJ'"ci/Jeso/尸eptj'Je5>77力/esj's，Springer-Verlag,Heidelberg;Bodanszky，M.&Bodanszky,A.(1984)7TeZVa"j.ce0/尸ep"de5>"tresis1,&/7'/7《6廣Far/恥Heidelberg;Bodanszky,M.(1985)i"zzt./-尸e/tjVe尸rotei""*es.25,449-474)。脂質(zhì)部分可包含任何從G到U的飽和，單不飽和或多不飽和直鏈或支鏈脂?；瑑?yōu)選脂肪酸基團(tuán)選自由棕櫚酰，豆蔻酰，硬脂酰，月桂酰，辛酰和癸酰所組成的組。脂氨基酸是本文中特別優(yōu)選的脂質(zhì)部分。術(shù)語(yǔ)"脂氨基酸"在這里指被共價(jià)附著于氨基酸殘基的1個(gè)，2個(gè)，3個(gè)或多個(gè)脂分子進(jìn)行共價(jià)附著的與某個(gè)氨基酸殘基，比如半胱氨酸或絲氨酸或賴氨酸及其類似物。在一個(gè)特定的優(yōu)選實(shí)施例中，脂氨基酸由半胱氨酸，或含有一個(gè)，兩個(gè)或多個(gè)的精氨酸或絲氨酸殘基，或者可選地為6-氨基己酸。優(yōu)選脂質(zhì)部分是具有以下通式(VII)結(jié)構(gòu)的化合物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage95</formula>其中-X是從含有硫，氧，二硫鍵(-S-S-),亞甲基(-CH2-)和氨基(-NH-)等基團(tuán)中挑選出來(lái)的；m的值為整數(shù)l或2;n的值為整數(shù)0到5;R,基團(tuán)選自由氫，羰基(-CO-)和R'-CO-所組成的組，其中R'選自由含有7-25個(gè)碳原子的垸基、烯基或炔基所組成的組，其中的烷基、烯基或炔基可以選擇性地被羥基，氨基，氧代，?；颦h(huán)垸基所取代；R2基團(tuán)選自由R，-CO-0-，R，-0-，R，—0-CO-，R'-NH—CO-和R'-C0-NH-所組成的組，其中R'選自由含有7-25個(gè)碳原子的烷基、烯基或炔基所組成的組，其中的垸基、烯基或炔基可以選擇性地被羥基，氨基，氧代，?；颦h(huán)烷基所取代；R3基團(tuán)選自由R，-C0-0-,R，-0-，R，-O-CO-，R，-NH-CO-和R'-CO-NH-所組成的組，其中R'選自由含有7-25個(gè)碳原子的烷基、烯基或炔基所組成的組，其中的垸基、烯基或炔基可以選擇性地被羥基，氨基，氧代，?；颦h(huán)烷基所取代，其中仏，R2，和R3可以相同也可以不同。根據(jù)取代基的不同，通用結(jié)構(gòu)VII的脂質(zhì)部分可以成為一個(gè)手性分子，其中直接或間接與R,和R2整體共價(jià)相連的碳原子是不對(duì)稱的右旋或左旋(即R或S)構(gòu)型。優(yōu)選，X為硫；m和n都為1;R,選自由氫和R'-CO-所組成的組，其中R'是具有7-25個(gè)碳原子的烷基，&和&選自由R，-CO-0-，R，-0-，R，-0-CO-，R，-NH-CO-和R，-C0—NH-所組成的組，其中R'是具有7-25個(gè)碳原子的垸基。優(yōu)選，R'選自由棕櫚酰，豆蔻酰，硬脂酰，月桂酰，辛酰和癸酰所組成的組。更優(yōu)選，R'選自由棕櫚酰，豆蔻酰，月桂酰，辛酰和癸酰所組成的組。脂質(zhì)部分中的每一個(gè)R'整體可以相同也可以不同。在一個(gè)具體的優(yōu)選實(shí)施例中，X為硫；m和n都為1;R,是氫或R'-CO-，其中R'選自由棕櫚酰，硬脂酰，月桂酰和辛酰所組成的組，R2和R3都是R'-CO-0-，其中R'選自由棕櫚酰，硬脂酰，月桂酰和辛酰所組成的組。尤其優(yōu)選其中R'是棕櫚酰的化合物如之前的式(I)和分子式(II)所示。脂質(zhì)部分也可以下面的通式(VIII)形式出現(xiàn)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage96</formula>其中(i)R4選自由以下所組成的組(i)—種含有約7個(gè)-約25個(gè)碳原子的a-酰基脂肪酸殘基；(ii)一種a-烷基-p羥基脂肪酸殘基；(iii)一種P-羥基酯或a-烷基-P羥基脂肪酸殘基，其中酯基優(yōu)選含有超過(guò)8個(gè)碳原子的直鏈或支鏈；(iv)脂氨基酸殘基；以及(ii)R5是氫或者某種氨基酸的側(cè)鏈。優(yōu)選，R4含有約10-20個(gè)間的碳原子，更優(yōu)選含有約14-18個(gè)間的碳原子。當(dāng)R4是一個(gè)脂氨基酸殘基時(shí)，R4和Rs的側(cè)鏈可以形成一種共價(jià)附著。比如，當(dāng)R4是由含有賴氨酸，鳥(niǎo)氨酸，谷氨酸，天冬氮酸，賴氨酸衍生物，鳥(niǎo)氨酸衍生物，谷氨酸衍生物和天冬氨酸衍生物的氨基酸組成時(shí)，該氨基酸或衍生物的側(cè)鏈就會(huì)通過(guò)酰胺或酯鍵共價(jià)附著于Rs上。優(yōu)選，如通式VIII所示的結(jié)構(gòu)的脂質(zhì)部分選自由N，N'-二酰賴氨酸；N,N'-二酰鳥(niǎo)氨酸；二(單垸基)氨基化合物或谷氨酸酯；二(單烷基)氨基化合物或天冬氨酸酯；絲氨酸，高絲氨酸或蘇氨酸的N，0-二酰衍生物；以及半胱氨酸或高胱氨酸的N，S-二酰衍生物。尤其是那些疏水性不超過(guò)Pam3Cys(分子式(I))的兩性分子，也是優(yōu)選的分子。式(I)，(II)，(VI)或(VIII)脂質(zhì)部分都經(jīng)過(guò)了添加一個(gè)或多個(gè)間隔基分子的合成中或合成后的再修飾，優(yōu)選間隔基包含碳，更優(yōu)選包含一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基。這樣的脂質(zhì)部分可以通過(guò)傳統(tǒng)的縮合反應(yīng)，加成反應(yīng)，取代反應(yīng)或氧化反應(yīng)中的末端羧基添加到脂質(zhì)結(jié)構(gòu)上。這些間隔分子的作用是用來(lái)將脂質(zhì)部分和多肽部分分隔開(kāi)，以降低分子的空間位阻效應(yīng)，這可能會(huì)避免降低脂肽產(chǎn)物的免疫原性型。對(duì)這個(gè)目的而言，尤其優(yōu)選的分子包括精氨酸或絲氨酸二聚體，三聚體，四聚體或6-氨基己酸等。更優(yōu)選，這樣間隔基含有一個(gè)末端保護(hù)氨基酸殘基，使得后來(lái)經(jīng)過(guò)修飾的脂氨基酸可以綴合于多肽上。針對(duì)本實(shí)施例所合成的經(jīng)修飾的模式脂氨基酸可見(jiàn)于分子式(III)和(IV)，它們可以通過(guò)分別向分子式(I)和(II)添加一個(gè)絲氨酸同型二聚體來(lái)實(shí)現(xiàn)。比如，對(duì)這個(gè)目的而言，可以通過(guò)對(duì)分子式(I)的Pam3Cys或分子式(II)的Pam2Cys進(jìn)行合成得到分子式(III)PanbCys-Ser-Ser或分子式(IV)脂氨基酸Pam2Cys-Ser-Ser。式(III):H3C-(CH2>14-GO——NH——CljJ—CO-NH——<^—CO——NH——，-COOHrrrSOHOHICH2IH3C—(CH2)14——CO——O——CHH3C_(CHz)14——CO——O——CH2式(IV):H——NH-CH-CO—NH'CH2ISICH2IH3C—(CH2)14-CO—O-CHH3C—(CH2>14-CO—O-CH2'CH—CO-NH-CH-COOHIIGH，CH，IIOHOH添加到脂質(zhì)部分間隔基的替代物，間隔基可以添加于多肽部分里的內(nèi)部賴氨酸殘基的s-氨基或賴氨酸類似物的末端側(cè)鏈基團(tuán)上，或者是例如精氨酸或絲氨酸同型二聚體，同型三聚體或同型四聚體等的短肽，或者是對(duì)氨基酸殘基進(jìn)行順序加成，得到一條支鏈多肽。這種方法的優(yōu)勢(shì)在于，可對(duì)內(nèi)部賴氨酸殘基的e-氨基或賴氨酸類似物的末端側(cè)鏈基團(tuán)進(jìn)行修飾，從而在對(duì)間隔基進(jìn)行加成反應(yīng)時(shí)產(chǎn)生其特異性。很自然，為了避免連續(xù)的間隔加成，該間隔基的末端氨基酸殘基優(yōu)選被保護(hù)起來(lái)，這樣的話，脫保護(hù)可以促使脂質(zhì)部分綴合于支鏈多肽上。或者，間隔基也可以通過(guò)傳統(tǒng)的親核取代反應(yīng)添加到多肽的未經(jīng)修飾的e-氨基上。然而，這種方法要求多肽鏈含有一個(gè)內(nèi)部賴氨酸或賴氨酸類似物和一個(gè)封閉的N末端。脂質(zhì)部分可以通過(guò)傳統(tǒng)的合成方法獲得，比如美國(guó)專利5,700,910和6,024，964中所描述的方法，或可見(jiàn)于Wiesmuller"etal.hoppeseylerszurphysiol.chem.364.593(1983),orZengetal.J.pept,sic2,66(1996),jonesetal.xenobiotica5,155(1975),ormetzgeretal.,int.j.pept.proteinres.38.545(1991)。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以對(duì)這些方法稍加修改，以獲得可與多肽鏈相結(jié)合的目的脂分子。也可預(yù)期不同脂相互結(jié)合可用于本發(fā)明的脂肽中。比如，一種或兩種含有豆蔻酰的脂質(zhì)或脂氨基酸通過(guò)內(nèi)部賴氨酸或賴氨酸類似物殘基被附著于多肽部分上，通過(guò)間隔基隨意地從多肽分隔開(kāi)分子將多肽隨意地分隔開(kāi)了。也不排除其它的組合。對(duì)本發(fā)明中的脂肽稍作修飾即可用于診斷用途。比如，對(duì)其添加—種天然或合成的半抗原，抗生素，激素，類固醇，核苷，核苷酸，核酸，種酶，酶底物，酶抑制劑，生物素，抗生物素蛋白，聚乙二醇，多肽部分(比如吞噬細(xì)胞增強(qiáng)激素，聚賴氨酸)，熒光標(biāo)記(比如FITC,RITC，丹磺酰，氨基苯二酰肼或香豆素)，生物熒光標(biāo)記，自旋標(biāo)記，生物堿，生物胺，維生素，毒素(比如地高辛，毒傘素，蛾膏蕈毒環(huán)肽，河豚毒素)或一種復(fù)合劑。又如，假若含有分子式(I)的PanbCys或分子式(II)的Pani2Cys或Ste2Cys或Lau2Cys或0ct2Cys通過(guò)綴合與以下肽鏈的內(nèi)部賴氨酸e-氨基相聯(lián)，這樣的脂肽將具有較高的免疫原性和溶解性。這樣的肽鏈有(i)來(lái)自于流感病毒紅細(xì)胞凝集素輕鏈的CD4+輔助T細(xì)胞表位的氨基酸序列(JacksonetaAKz'ro丄79《613-623，1994;GALNNRFQIKGVELKS:序列ID序號(hào)1)，或CDV-F蛋白的多肽序列(序列ID序號(hào)24);(ii)含有B細(xì)胞表位的多肽，含有選自由黃體生成激素釋放激素氨基酸序列(L服H;Frasere"丄，^7c/ocrj'/:o丄簡(jiǎn)399(1974);FraserandBaker,f油ci^.加丄77，85(1978);"L服H1-10"EHWSYGLRPG，序列ID序號(hào)2;"LHRH2-10"氨基酸序列HWSYGLRPG，SQEIDNo.3;或"LHRH6-10"GLRPG,SQEIDNo.4)，A群鏈球菌(GAS)M蛋白(即序列ID序號(hào)IOI)和五肽胃泌素(即SQEIDNo.102)所組成的組的氨基酸序列；(iii)位于所述CD4+輔助T細(xì)胞表位與所述B細(xì)胞表位之間的一個(gè)賴氨酸殘基；和可選地(iv)位于所述CD4+輔助T細(xì)胞表位內(nèi)部的一個(gè)賴氨酸殘基。脂肽的準(zhǔn)備本發(fā)明的另一方面提供了一種制備含有以下成分的脂肽的方法(i)產(chǎn)生包含一種氨基酸序列的多肽，所述氨基酸序列包含頁(yè)(a)輔助T細(xì)胞(Th)表位的氨基酸序列和B細(xì)胞表位的氨基酸序列，其中所述的氨基酸序列是不同的；以及(b)—個(gè)或多個(gè)內(nèi)部賴氨酸殘基或內(nèi)部賴氨酸類似物殘基；以及(iii)直接地或間接地將所述一個(gè)或多個(gè)脂質(zhì)部分共價(jià)附著于所述一個(gè)或多個(gè)內(nèi)部賴氨酸殘基的e-氨基，或所述一個(gè)或多個(gè)內(nèi)部賴氨酸類似物殘基的末端側(cè)鏈基團(tuán)進(jìn)行共價(jià)結(jié)合的每一個(gè)或多個(gè)脂質(zhì)部分，以產(chǎn)生將其脂質(zhì)部分附著于所述內(nèi)部賴氨酸殘基e-氨基或?qū)⑵渲|(zhì)部分附著于所述內(nèi)部賴氨酸類似物殘基末端側(cè)鏈基團(tuán)的脂肽。優(yōu)選該方法還進(jìn)一步包括了脂質(zhì)部分的生產(chǎn)。在進(jìn)行多肽部分和脂質(zhì)部分的合成時(shí)，優(yōu)選傳統(tǒng)的化學(xué)合成方法。優(yōu)選，通過(guò)選擇性的從內(nèi)部賴氨酸殘基或內(nèi)部賴氨酸類似物的末端側(cè)鏈基團(tuán)，尤其是末端側(cè)鏈的氨基去除一個(gè)封閉基團(tuán)(例如Mtt)，以便允許在該位置添加一個(gè)氨基酸殘基，一個(gè)間隔或脂質(zhì)部分，包括脂氨基酸。關(guān)于脂質(zhì)附著于多肽，可以通過(guò)本領(lǐng)域眾所周知的多肽合成方法便捷地對(duì)多肽官能團(tuán)加以保護(hù)，以確保在這些官能團(tuán)上不發(fā)生不需要的反應(yīng)。在熟知結(jié)合的過(guò)程之后，多肽的合成是在固體或如多聚物(比如Meirifield樹(shù)脂)可溶性載體上進(jìn)行的，并可以附著于間隔基，氨基酸或脂質(zhì)。例如，內(nèi)部賴氨酸的e-氨基或內(nèi)部賴氨酸類似物的末端側(cè)鏈基團(tuán)可以用一組保護(hù)性基團(tuán)的其中一個(gè)加以保護(hù)。封閉基團(tuán)(也成為保護(hù)性基團(tuán)或掩護(hù)基團(tuán))是用來(lái)保護(hù)具有與偶合反應(yīng)有關(guān)的活性羧基的氨基酸的氨基，或者是用來(lái)保護(hù)具有與偶合反應(yīng)有關(guān)的?；被聂然?。為保證結(jié)合作用的發(fā)生，封閉基團(tuán)必須在不打斷肽鍵的情況下去除，對(duì)任何結(jié)合于肽鏈上的保護(hù)基團(tuán)都是如此。對(duì)固相的多肽合成來(lái)說(shuō)，經(jīng)多次處理依然穩(wěn)定的封閉基團(tuán)，對(duì)在肽鏈生長(zhǎng)時(shí)去除氨基保護(hù)基團(tuán)和重復(fù)的氨基酸結(jié)合必不可少，并可用來(lái)保護(hù)氨基酸的側(cè)鏈。而且，通過(guò)肽-樹(shù)脂錨合來(lái)對(duì)多肽的c末端進(jìn)行的保護(hù)貫穿于合成過(guò)程的始終，直到需要將樹(shù)脂與其分開(kāi)為止。所以，需要明智的選擇正交保護(hù)的a-氨基酸，脂和/或氨基酸，以便當(dāng)其附著在樹(shù)脂上時(shí)，可以被加成到生長(zhǎng)肽鏈的合適位置。優(yōu)選氨基保護(hù)基團(tuán)應(yīng)很容易去除但在結(jié)合反應(yīng)和其他操作時(shí)保持穩(wěn)定，比如對(duì)側(cè)鏈基團(tuán)進(jìn)行修飾。首選的氨基保護(hù)基團(tuán)來(lái)自于含有以下成分的基團(tuán)(i)可在室溫和常壓條件下，或在氨水中加入金屬鈉，在乙酸中加入氫溴酸，經(jīng)過(guò)催化氫化去除的芐氧羰基(Z或芐氧羰基)；(ii)可用t-丁醇羰基疊氮化物或2-4-二丁醇酯引入，用不太濃的酸，如三氟乙酸(50%三氟乙酸溶于二氯甲烷)或溶于乙酸/二氧六環(huán)/乙酸乙酯的鹽酸去除的的t-丁醇羰基；(iii)在溫和的，中性非水解條件下，比如使用伯胺和仲胺(20%哌啶溶于二甲基甲酰胺)下的9-芴甲氧羰基(Fmoc);(iv)2-(4聯(lián)苯)丙基(2)氧羰基(Bp0C);(V)2-硝基-苯次磺酸基(NpS);和(vi)二硫琥珀?；?Dts)。側(cè)鏈保護(hù)基團(tuán)則要根據(jù)形成合成多肽的氨基酸的功能性側(cè)鏈進(jìn)行選擇?；鶊F(tuán)通常是基于Bzl或tBU基團(tuán)。含有醇或羧酸的側(cè)鏈一般用Bzl醚，Bzl酯，cHex酯，tBu醚或tBu酯進(jìn)行保護(hù)。Fmoc氨基酸的側(cè)鏈保護(hù)需要保護(hù)基團(tuán)在堿性條件喜愛(ài)保持穩(wěn)定，而在弱酸性條件(TFA)下可發(fā)生反應(yīng)。例如，可使用Mtt(Fmoc-lysine(Mtt)-0H)對(duì)賴氨酸的e-氨基進(jìn)行保護(hù)。又如，鹵化芐基衍生物，比如CIZ也可以用來(lái)在升高的酸性條件下保護(hù)賴氨酸側(cè)鏈在一般條件下，半胱氨酸的硫醇基，組氨酸的咪唑基或精氨酸的胍基都需要特別的保護(hù)。有許多不同的保護(hù)基團(tuán)在多肽合成時(shí)得到應(yīng)用(TheP印tides,Grosseta丄eds.，Vol.3,AcademicPress,NewYork,1981)。在保護(hù)策略中最常用的是Boc/Bzl-策略和Fmoc/tBu策略。在Boc/Bzl-策略中，Boc用來(lái)保護(hù)氨基而基于Bzl或cHex的基團(tuán)則用來(lái)保護(hù)多種氨基酸的側(cè)鏈。Boc基團(tuán)在催化氫化條件下穩(wěn)定并被正交地用來(lái)與Z基團(tuán)一起對(duì)許多側(cè)鏈基團(tuán)進(jìn)行保護(hù)。在Fmoc/tBu策略中，F(xiàn)moc用來(lái)保護(hù)氨基而基干tBu的基團(tuán)則用來(lái)保護(hù)側(cè)鏈。多肽通過(guò)本領(lǐng)域所熟知的方法被脂化。標(biāo)準(zhǔn)的縮合反應(yīng)，加成反應(yīng)，取代反應(yīng)或氧化反應(yīng)(例如在內(nèi)部賴氨酸或內(nèi)部賴氨酸類似物的末端氨基與進(jìn)入氨基酸或多肽或脂氨基酸的羧基末端間形成的二硫化物架橋酰氨鍵形成)都可以將脂質(zhì)加成到多肽上。在另一個(gè)實(shí)施例中，本發(fā)明中的一種作為免疫原的多肽是通過(guò)化學(xué)選擇性絡(luò)合或化學(xué)結(jié)合來(lái)制備的的。這樣的方法在本領(lǐng)域中已為大家熟知，允許單獨(dú)的肽成分通過(guò)化學(xué)或重組的方法，并隨后以適當(dāng)?shù)臉?gòu)型或構(gòu)象或順序經(jīng)過(guò)化學(xué)性絡(luò)合來(lái)制備(Nardin"a丄，F(xiàn)acci/7eJ《娜Nardin"s丄，J.I畫(huà)no1.166,481(2001);Roseeta丄,ifo7.//nmu/70丄W，1031(1995);RoseA.occvj^.O柳5552(1996);andZeng"a丄，2《1031(2000))。它們?cè)谶@里通過(guò)引用被整合到本發(fā)明中)。脂肽配方脂肽可作用一種方便的藥用賦形劑或稀釋液，例如一種水性的溶劑，非水性的溶劑，非毒性的賦形劑比如鹽，防腐劑，緩沖液等等。非水性溶劑的例子是丙烯乙二醇，聚乙二醇，植物油和可注射的有機(jī)酯，比如乙基油酸酯。水溶性溶劑包括水，醇的水溶液，鹽溶液，腸胃外載體，比如氯化鈉，Ringer's右旋糖苷等。防腐劑包括抗菌的，抗氧化劑，螯合劑和惰性氣體。制藥成分中的Ph值和確切的濃度可根據(jù)常規(guī)技術(shù)來(lái)進(jìn)行調(diào)節(jié)。盡管通常并不需要，往脂肽配方中加入外源佐劑也應(yīng)包括在本發(fā)明中。這樣的外源佐劑包括了所有可接受的免疫刺激化合物，比如細(xì)胞因子，毒素，或合成組分。典型的佐劑包括IL-1，IL-2，BCG，氫氧化鋁，N-乙酰-胞壁酰-L-蘇氨酰-D-異谷氨酰胺(thur-MDP)，N-乙酰-去甲-胞壁酰-L-丙氨酰-D-異谷氨酰胺(CGP11637，也稱做nor-MDP)，N-乙酰胞壁酰-L-丙氨酰-D-異谷氨酰-L-丙氨酸-2-(1，-2，-二棕櫚酰-sn-甘油-3-羥基磷酰氧化)-乙胺(CGP1983A，MTP-PE)，脂質(zhì)A，MPL和RIBI，其中含有三種從細(xì)菌中分離到的成分，單磷酰脂質(zhì)A，海藻糖(trehalose)dimycolate和細(xì)胞壁骨架(MPL+TDM+CWS)于2呢角鳘烯/Tween80乳濁液中。也可以將生物反應(yīng)調(diào)節(jié)物(BRM)與脂肽進(jìn)行共給藥，以下調(diào)抑制性T細(xì)胞的活性。典型的生物反應(yīng)調(diào)節(jié)物包括且不限于甲腈咪胍(CIM;1200mg/d)(Smith/Kline，PA,USA);茚甲新(IND;150mg/d)(Lederle，NJ,USA)或者是低劑量的環(huán)磷酰胺(CYP;75，150或300mg/m.sup.2)(Johnson/Mead,NJ，USA).。微在被柳柳本發(fā)明中新的脂肽與己知的抗原的脂肽綴合物的本質(zhì)的區(qū)別在于它們提高的可溶性和免疫原性，以及在不需使用額外佐劑的條件下引起免疫應(yīng)答的能力。由此，本發(fā)明脂肽的一種特別應(yīng)用就是用于抗體制造領(lǐng)域，合成疫苗制備，應(yīng)用抗體和抗體配基的診斷方法，以及用于獸醫(yī)和人類醫(yī)學(xué)的免疫治療。更特別的是，在對(duì)動(dòng)物受試者施用本發(fā)明的月旨月太時(shí)，該脂肽可以誘導(dǎo)針對(duì)于B細(xì)胞表位部分的高滴度抗體的產(chǎn)生，并不需要佐劑來(lái)達(dá)到相似的抗體滴度。向受試者施用脂肽后會(huì)增強(qiáng)樹(shù)突細(xì)胞的成熟，也支持了上述的效用(即與在N末端偶合了脂質(zhì)的脂肽相比具有增強(qiáng)的抗原呈遞)。因此，本發(fā)明的第三方面提供了一種引起針對(duì)抗原B細(xì)胞表位的抗體的產(chǎn)生的方法，該方法包括在足以引起針對(duì)所述抗原B細(xì)胞表位的抗體產(chǎn)生的條件下，對(duì)所述受實(shí)者施用一段時(shí)間的一種分離脂肽，該脂肽含有一種偶合于一個(gè)或多個(gè)脂質(zhì)部分的多肽，其中-(i)所述多肽包含(a)—種輔助T細(xì)胞(Th)表位的氨基酸序列和一種B細(xì)胞表位的氨基酸序列，其中所述的氨基酸序列是不同的；禾口(b)—個(gè)或多個(gè)內(nèi)部賴氨酸殘基或內(nèi)部賴氨酸類似物殘基，其用于經(jīng)所述內(nèi)部賴氨酸的e-氨基或經(jīng)所述內(nèi)部賴氨酸類似物的末端側(cè)鏈基團(tuán)共價(jià)附著于所述脂質(zhì)部分的每一個(gè)；和(ii)所述一個(gè)或多個(gè)脂質(zhì)部分的每一個(gè)被直接地或間接地共價(jià)附著于所述一個(gè)或多個(gè)內(nèi)部賴氨酸殘基的s-氨基或內(nèi)部賴氨酸類似物殘基的末端側(cè)鏈基團(tuán)。用于產(chǎn)生抗體的有效脂肽劑量與免疫原性B細(xì)胞表位的本性，常規(guī)的注射方法，用來(lái)進(jìn)行免疫的動(dòng)物以及所尋求的抗體特性發(fā)生變化。這些參數(shù)都是通過(guò)本領(lǐng)域所公認(rèn)的方法據(jù)試驗(yàn)來(lái)確定。這里所涉及的抗體包括全部的多克隆抗體，單克隆抗體，以及單獨(dú)或綴合與其他部分結(jié)合的一部分。抗體部分包含有Fab和F(ab)2片段及單鏈抗體。這些抗體可在適合的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體內(nèi)獲得，或者采用重組DNA技術(shù)在體外對(duì)工程化抗體(單鏈抗體或SCABS等)進(jìn)行合成。與本發(fā)明的這一方面相對(duì)應(yīng)，這些抗體可以對(duì)動(dòng)物進(jìn)行免疫獲得，在這種情況下，優(yōu)選與B細(xì)胞表位結(jié)合的高滴度或中和抗體。當(dāng)然，要根據(jù)免疫的抗原性B細(xì)胞表位來(lái)選擇進(jìn)行免疫的合適的受試動(dòng)物?？梢灶A(yù)期，本發(fā)明將被廣泛地用來(lái)對(duì)多種動(dòng)物進(jìn)行免疫，比如農(nóng)業(yè)動(dòng)物(如馬，牛，綿羊，豬，山羊，雞，鴨，火雞等)，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物(如大鼠，小鼠，豚鼠，兔)，家養(yǎng)動(dòng)物(貓，狗，鳥(niǎo)等)，野生的或外來(lái)動(dòng)物(負(fù)鼠，貓，狗，水牛，野狗等)和人?；蛘?，這些抗體可作為商業(yè)或診斷用途，在這種情況下，被施用脂肽的受試者最好是實(shí)驗(yàn)動(dòng)物或農(nóng)業(yè)動(dòng)物。有很多動(dòng)物品種都可以用來(lái)生產(chǎn)抗血清。兔，小鼠，大鼠，倉(cāng)鼠，豚鼠，山羊，綿羊，豬，狗，馬或雞都是用來(lái)生產(chǎn)抗血清的典型動(dòng)物。因?yàn)橥玫难毫枯^大，所以兔是制作多克隆抗體的首選。然而，本領(lǐng)域中的技術(shù)人員應(yīng)熟知，為了從大動(dòng)物身上為獲得大量的抗體，大劑量的免疫原是必需的，而對(duì)諸如小鼠等小動(dòng)物則相反。在這樣的情況下，可以期望從被免疫的動(dòng)物分離目的抗體。優(yōu)選抗體是高滴度的抗體。"高滴度"的意思是其滴度高到足以適于在診斷或治療中使用。本領(lǐng)域技術(shù)人員也應(yīng)熟知，有一些變化情況也可被認(rèn)為是高滴度。對(duì)大多是使用情況來(lái)說(shuō)，優(yōu)選滴度介于至少約103-104之間，更優(yōu)選抗體滴度可以介于約104到約105之間，甚至是介于約105到約106之間更優(yōu)選當(dāng)B細(xì)胞表位來(lái)源于病原體，病毒或細(xì)菌時(shí)，抗體是中和抗體(即可以中和有機(jī)體的傳染性，其后自該有機(jī)體衍生了B細(xì)胞表位)。為了產(chǎn)生抗體，脂肽，可以與任何合適的或有效的載體，佐劑，BRM或藥學(xué)上可接受的賦形劑進(jìn)行配置，以可注射組合物的形式方便地施用。注射方式可為鼻內(nèi)給藥，肌肉給藥，皮下給藥，靜脈內(nèi)給藥，皮內(nèi)給藥，腹膜內(nèi)給藥或其他已知的途徑。本發(fā)明的脂肽已證明了鼻內(nèi)給藥的效力。如果采用靜脈注射，最好再在包含一種或多種液體和營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充物。制備和分析抗體的方法在本領(lǐng)域應(yīng)為人所熟知(參見(jiàn)例如，ANTIBODIES:ALABORATORYMANUAL,ColdSpringHarborLaboratory,1988,在此處通過(guò)引用合并入本發(fā)明中)。在生產(chǎn)抗體時(shí)，脂肽的功效是通過(guò)用一種含有脂肽的配方，對(duì)小鼠，大鼠，兔，豚鼠，豬，狗，馬，牛，山羊或豬等動(dòng)物進(jìn)行免疫，再監(jiān)測(cè)B細(xì)胞表位的免疫應(yīng)答來(lái)確定的。初級(jí)免疫應(yīng)答和次級(jí)免疫應(yīng)答都需要進(jìn)行監(jiān)測(cè)。可以使用傳統(tǒng)的免疫分析技術(shù)，如ELISA或放射性免疫分析來(lái)對(duì)抗體滴度進(jìn)行測(cè)定?？梢酝ㄟ^(guò)對(duì)免疫動(dòng)物在免疫后的不同時(shí)段進(jìn)行血液抽樣來(lái)對(duì)多克隆抗體的產(chǎn)生進(jìn)行監(jiān)測(cè)。如果想獲得期望的抗體滴度，還可以進(jìn)行二次的加強(qiáng)給藥。重復(fù)加強(qiáng)免疫和滴度測(cè)定的過(guò)程，直到達(dá)到適合的滴度。當(dāng)達(dá)到理想的免疫原性水平時(shí)，對(duì)免疫動(dòng)物進(jìn)行采血，分離血清并保存起來(lái)，和Z或?qū)⒃搫?dòng)物用來(lái)生產(chǎn)單克隆抗體(Mabs)。可以采用多種眾所周知的技術(shù)的任一種來(lái)獲得單克隆抗體(Mabs)，例如在US4,196,265中所例舉的方法，在此通過(guò)引用并入本發(fā)明。比如，在足以剌激抗體生成細(xì)胞的條件下，將用有效量的本發(fā)明的脂肽對(duì)適合的動(dòng)物進(jìn)行免疫。小鼠和大鼠等嚙齒類動(dòng)物是首選的動(dòng)物，除此之外也可以使用兔，綿羊或青蛙的細(xì)胞。使用大鼠會(huì)具有某些優(yōu)點(diǎn)，但優(yōu)選的是小鼠，尤其優(yōu)選最常用和可產(chǎn)生更高比例穩(wěn)定融合的BALB/c小鼠。在免疫之后，能生成抗體尤其是B淋巴細(xì)胞(B細(xì)胞)的體細(xì)胞被選擇用于產(chǎn)生單克隆抗體的方法中。這些細(xì)胞可以從活體的脾臟，扁桃腺，淋巴結(jié)或外周血樣本中獲得。優(yōu)選是脾細(xì)胞和外周血細(xì)胞，選擇前者是因?yàn)樗缓幱诔蓾{細(xì)胞的分裂期的抗體生成細(xì)胞，選擇后者則是因?yàn)橥庵苎苋菀撰@得。通常的做法是對(duì)一組動(dòng)物進(jìn)行免疫，并將抗體滴度最高動(dòng)物的脾臟摘除。采用注射器對(duì)脾臟進(jìn)行勻漿以得到脾淋巴細(xì)胞。典型地，一只免疫小鼠的脾臟含有大約5)(107到2xl()8個(gè)淋巴細(xì)胞。來(lái)自于免疫動(dòng)物的B細(xì)胞隨后將與無(wú)限增殖骨髓瘤細(xì)胞進(jìn)行融合，它通常也來(lái)源于采用脂肽配方進(jìn)行免疫的同種屬的動(dòng)物。首選的適用于雜交瘤產(chǎn)生融合步驟的骨髓瘤細(xì)胞系是不產(chǎn)生抗體的，它具有極高的融合效率，而且缺乏只有期望的融合細(xì)胞才具有的可在選擇性培養(yǎng)基中進(jìn)行生長(zhǎng)的酶。本領(lǐng)域中的專業(yè)人員應(yīng)熟知，幾乎任意一種骨髓瘤細(xì)胞都可以被釆用(比如鼠P3-X63/Ag8，X63-Ag8.653，NSl/l.Ag41，Sp210-Agl4，F(xiàn)O，NSO/U,MPC-ll,MPCll-X45-GTG1.7和S194/5XX0;或大鼠R210.RCY3，Y3-Ag1.2.3，IR983F和4B210;以及U-266,GM1500-GRG2,LICR-L0N-HMy2和UC729-6)。首選的鼠骨髓瘤細(xì)胞是NS-1骨髓瘤細(xì)胞系(也稱為P3-NS-l-Ag4-1)，可方便的從NTGMS人類遺傳突變細(xì)胞庫(kù)中獲得，獲取號(hào)GM3573。或者可以采用具有8-疊鳥(niǎo)嘌呤的抗性的鼠骨髓瘤SP2./0不產(chǎn)病毒性細(xì)胞系。為了產(chǎn)生抗體生成脾或淋巴結(jié)細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞的雜種細(xì)胞，體細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞在含有一種或多種促進(jìn)細(xì)胞膜融合試劑(化學(xué)的或電子的)存在的條件下，以大約20:1到大約1:1的比例分別進(jìn)行混合。采用仙臺(tái)病毒進(jìn)行融合的方法已由Kohler和Milstein等人進(jìn)行了報(bào)道(Kohler和Milstein，Nature256,495-497，1975;以及KohlerandMilstein,Eur.J.Immunol.6,511-519,1976.)。使用聚乙二醇(PEG),比如37%(v/v)PEG進(jìn)行融合的方法也由Gefter等人進(jìn)行了詳細(xì)地描述(Gefter等，SomaticCellGenet.3,231-236,1977.)。同樣也可以采取電誘導(dǎo)的融合方法。雜種細(xì)胞的擴(kuò)增是通過(guò)在含有阻斷核苷酸在組織培養(yǎng)基中從頭合成的試劑的選擇性培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)實(shí)現(xiàn)的。典型的和優(yōu)選的試劑是氨基喋呤，氨甲蝶呤和重氮絲氨酸。氨基喋呤和氨甲蝶呤可阻斷嘌呤和嘧啶的從頭合成，而重氮絲氨酸只能阻斷嘌呤的合成。當(dāng)使用氨基喋呤和氨甲蝶呤時(shí)，培養(yǎng)基中需要補(bǔ)充添加作為核苷酸源的次黃嘌呤和胸苷(HAT培養(yǎng)基)。而當(dāng)使用重氮絲氨酸時(shí)，培養(yǎng)基中需要補(bǔ)充添加次黃嘌呤。優(yōu)選選擇性培養(yǎng)基是HAT，因?yàn)橹挥心切┛梢詥?dòng)核苷酸補(bǔ)救途《仝的雜種細(xì)胞才可以在HAT培養(yǎng)基中存活，而缺乏補(bǔ)救途徑關(guān)鍵酶(例如次黃嘌呤磷酸核糖基轉(zhuǎn)移酶或HPRT)的雜種細(xì)胞則不能存活。B細(xì)胞可以啟動(dòng)這一補(bǔ)救途徑，但它們?cè)谂囵B(yǎng)基中的壽命很短，通常在約兩星期之內(nèi)就死亡。所以，在選擇性培養(yǎng)基中存活下來(lái)的細(xì)胞只可能是來(lái)自于骨髓瘤細(xì)胞和B細(xì)胞的雜種細(xì)胞。擴(kuò)增后的雜種細(xì)胞被用于針對(duì)抗體特異性和域滴度的功能性選擇，比如免疫測(cè)定(例如放射免疫分析，酶免疫測(cè)定，細(xì)胞毒性分析，噬菌斑測(cè)定，點(diǎn)免疫結(jié)合分析等)。經(jīng)過(guò)選擇的雜種細(xì)胞隨后被順次稀釋并克隆到單獨(dú)的抗體生成細(xì)胞系中，這些克隆隨后被不定繁殖以提供單克隆抗體。該細(xì)胞系可以通過(guò)兩種基本方式用于單克隆抗體的生產(chǎn)。雜種細(xì)胞樣本經(jīng)腹膜腔被注射到用于提供體細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞以供原始融合的組織相容性動(dòng)物。被注射的動(dòng)物發(fā)育分泌由融合雜種細(xì)胞所產(chǎn)生的特異性單克隆抗體的腫瘤。該動(dòng)物的體液，如血清和腹水可以被抽除以產(chǎn)生高濃度的單克隆抗體。也可以在體外對(duì)單個(gè)的細(xì)胞系進(jìn)行培養(yǎng)，其中單克隆抗體被自然地分泌到培養(yǎng)基中并從中容易地獲得高濃度的單克隆抗體。如果需要的話，可以采用過(guò)濾，離心，以及多種層析方法如HPLC或親和層析法，對(duì)通過(guò)以上方法獲得的單克隆抗體進(jìn)行進(jìn)一步純化。通過(guò)本領(lǐng)域眾所周知的方法獲得的本發(fā)明中的單克隆抗體，也含有抗獨(dú)特型抗體。本發(fā)明中的單克隆抗體也可能是單克隆復(fù)共軛對(duì)配合物(即兩個(gè)或更多抗體分子的雜種細(xì)胞)。在另一個(gè)實(shí)施例中，本發(fā)明的單克隆抗體是嵌合的單克隆抗體。在一個(gè)方法中，嵌合的單克隆抗體是通過(guò)對(duì)含有鼠抗-PSA生成細(xì)胞啟動(dòng)區(qū)，弓l導(dǎo)肽和可變區(qū)序列，以及人抗體基因恒定區(qū)外顯子的重組DNA進(jìn)行克隆而得到的。被這樣的重組基因所編碼的抗體是鼠-人嵌合體。它的抗體特異性決定于來(lái)自于鼠序列的可變區(qū)，其同種型的抗體特異性則由來(lái)源人DNA的恒定區(qū)決定。在另一實(shí)施例中，通過(guò)本領(lǐng)域中眾所周知的技術(shù)獲得的，根據(jù)本發(fā)明的單克隆抗體是一種"人源化"的單克隆抗體。即鼠的互補(bǔ)決定區(qū)(CDRs)，從鼠Ig重鏈和輕鏈V區(qū)轉(zhuǎn)移到了人的V區(qū)，伴隨著一些人類的殘基取代了相應(yīng)結(jié)構(gòu)區(qū)域的鼠源對(duì)應(yīng)殘基。根據(jù)本發(fā)明的"人源化"單克隆抗體尤其適合于在體內(nèi)的診斷和治療方法中進(jìn)行使用。如上所述，根據(jù)本發(fā)明的單克隆抗體及其片斷可以通過(guò)本領(lǐng)域中眾所周知的方法在體外和體內(nèi)進(jìn)行擴(kuò)增。體外的擴(kuò)增可以在合適的培養(yǎng)基如DMEM或RPMI1640培養(yǎng)基中得以實(shí)現(xiàn)，可選擇向其中補(bǔ)充哺乳動(dòng)物血清如胎牛血清或痕量因子以及維持生長(zhǎng)的添加成分，比如養(yǎng)細(xì)胞，即正常小鼠腹膜滲出液細(xì)胞，脾細(xì)胞，骨髓巨噬細(xì)胞等體外生產(chǎn)可以提供相對(duì)純粹的抗體，并允許對(duì)期望的抗體進(jìn)行大規(guī)模的生產(chǎn)。包括純系懸浮培養(yǎng)(在一個(gè)氣動(dòng)反應(yīng)器，或一個(gè)連續(xù)攪拌反應(yīng)器，或固定化，或截流細(xì)胞培養(yǎng))等對(duì)大規(guī)模雜種細(xì)胞的組織培養(yǎng)條件在本領(lǐng)域內(nèi)為眾人所知。本發(fā)明中的大規(guī)模的單克隆抗體也可以通過(guò)在體內(nèi)進(jìn)行雜種細(xì)胞的擴(kuò)增來(lái)獲得。將細(xì)胞克隆注射到與其親代細(xì)胞具有組織相容性的動(dòng)物體內(nèi)(即同系的小鼠)，以引起抗體生成腫瘤的生長(zhǎng)。主要用烴尤其是降植烷(四甲基五癸烷)等油在注射前進(jìn)行對(duì)動(dòng)物進(jìn)行抗原接觸。與本發(fā)明相一致的是，單克隆抗體的片斷是從通過(guò)對(duì)用上述方法得到的單克隆抗體進(jìn)行胃蛋白酶或木瓜蛋白酶消化，和/或通過(guò)化學(xué)還原切斷二硫鍵等方法得到的。本發(fā)明中單克隆抗體的偶聯(lián)物，是通過(guò)本領(lǐng)域中眾所周知的方法，如將通過(guò)上述方法得到的單克隆抗體與偶合試劑如戊二醛或高碘酸鹽在酶的作用下作用得到的。含有熒光素標(biāo)記的偶合物是在含有這些偶合試劑的條件下制備的，或者與異硫氰酸鹽進(jìn)行反應(yīng)得到的。含有金屬螯合劑的偶合物也是通過(guò)類似的方法得到的。其他與抗體偶合的部分包括諸如3H，125I，.32P，.35S,14C，51Cr，36Cl,57Co,58Co,59Fe，75Se,和152Eu等放射性核。本發(fā)明中放射性標(biāo)記的單克隆抗體是根據(jù)本領(lǐng)域中眾所周知的方法得到的。比如，通過(guò)與碘化鈉或碘化鉀，化學(xué)氧化劑次氯酸鈉，或乳過(guò)氧化物酶等酶氧化劑相接觸，將單克隆抗體進(jìn)行碘化。本發(fā)明中的單克隆抗體可通過(guò)配給交換進(jìn)行锝"的標(biāo)記，比如，通過(guò)含有錫的溶液還原高锝酸鹽，將剩余的锝螯合至S印hadex柱子上，并通過(guò)直接標(biāo)記技術(shù)將抗體引入到這個(gè)柱子上(即，對(duì)高锝酸鹽的溫育，比如SNCh的還原劑，比如鄰苯二甲酸鈉鉀的緩沖液，和抗體)?？梢圆捎萌魏我环N免疫分析的方式來(lái)監(jiān)測(cè)脂肽配方引起的抗體產(chǎn)生。免疫分析的最基本和直接原理就是結(jié)合分析。某些首選的免疫分析是本領(lǐng)域中為眾人所知的多樣的酶聯(lián)免疫吸收分析(ELISAs)和放射免疫分析(RIA)。對(duì)組織切片進(jìn)行免疫組化檢測(cè)也是特別有用的方法。然而，除此之外的Western雜交，點(diǎn)雜交，F(xiàn)ACS分析等都是簡(jiǎn)便易行的檢測(cè)方法。更優(yōu)選檢測(cè)結(jié)果可以產(chǎn)生出定量的數(shù)據(jù)。例如，對(duì)抗體進(jìn)行簡(jiǎn)單的競(jìng)爭(zhēng)性分析。一種已知的抗體準(zhǔn)備與B細(xì)胞表位相結(jié)合，將要檢測(cè)的抗體與含有該B細(xì)胞表位的抗原合成物進(jìn)行溫育，更優(yōu)選一種天然的抗原。"抗原合成物"一詞在這里的意思是指具有某種可接近形式、含有B細(xì)胞表位某些特征的任何合成物。優(yōu)選在ELISA板上用抗原包被的孔。在一個(gè)實(shí)施例中，將已知抗體與待測(cè)抗體在使用前，以不同的比例(1:1，1:10，1:100)進(jìn)行一段時(shí)間的預(yù)混合。如果已知抗體被標(biāo)記上，對(duì)結(jié)合于該抗原標(biāo)記的直接檢測(cè)就可實(shí)現(xiàn)；相對(duì)于未混合的樣品待測(cè)抗體的分析將確定競(jìng)爭(zhēng)和交聯(lián)反應(yīng)?；蛘呤褂脤?duì)已知或待測(cè)抗體特異的二抗，也可以確定其競(jìng)爭(zhēng)情況。與抗原合成物結(jié)合的抗體，可以與己知抗體進(jìn)行有效的競(jìng)爭(zhēng)，從而顯著的降低后者的結(jié)合。將在沒(méi)有任何待測(cè)抗體的條件下，已知抗體的反應(yīng)性設(shè)為對(duì)照。待測(cè)抗體出現(xiàn)后反應(yīng)性的降低說(shuō)明了待測(cè)抗體與B細(xì)胞表位發(fā)生了結(jié)合(即，與已知抗體發(fā)生了交叉反應(yīng))。在一個(gè)示范性的ELISA中，針對(duì)與B細(xì)胞表位的抗體被固定于具有蛋白親和性的的表面上，比如聚苯乙烯微孔板的小孔中。然后將含有B細(xì)胞表位的合成物加入這些小孔。在經(jīng)過(guò)結(jié)合與洗脫以去除非特異性結(jié)合的免疫復(fù)合物后，可以檢測(cè)到結(jié)合的表位。通過(guò)加入結(jié)合于B細(xì)胞表位的可被檢測(cè)到的二抗，可以使得檢測(cè)更加容易。這類ELISA是一種簡(jiǎn)單的"三明治型ELISA"。同樣也可以在加入二抗以后，再加入與二抗具有結(jié)合能力、且連有檢測(cè)標(biāo)記的三抗，進(jìn)行檢測(cè)。不育的誘導(dǎo)本發(fā)明中一種含有某種生殖性激素或激素受體抗原性B細(xì)胞表位，具有適當(dāng)構(gòu)型的脂肽，可在該對(duì)象體內(nèi)誘導(dǎo)不育。因此，本發(fā)明從另一方面提供了一種在注射了含有結(jié)合有一個(gè)或多個(gè)脂質(zhì)部分多肽的單獨(dú)脂肽的對(duì)象中誘導(dǎo)不育的方法，其中這樣的多肽含有一種輔助T細(xì)胞表位的氨基酸序列和一種生殖性激素或激素受體B細(xì)胞表位的氨基酸序列，其中所屬的氨基酸序列并不相同；以及通過(guò)所述內(nèi)部賴氨酸e-氨基，或所述內(nèi)部賴氨酸類似物末端側(cè)鏈基團(tuán)，與所述脂質(zhì)部分進(jìn)行共價(jià)結(jié)合的一個(gè)或多個(gè)內(nèi)部賴氨酸殘基或內(nèi)部賴氨酸類似物殘基；以及直接或間接與所述一個(gè)或多個(gè)內(nèi)部賴氨酸殘基的e-氨基，或所述一個(gè)或多個(gè)內(nèi)部賴氨酸類似物殘基的末端側(cè)鏈基團(tuán)進(jìn)行共價(jià)結(jié)合的每一個(gè)或多個(gè)脂質(zhì)部分；以及在足以引起對(duì)于所述抗原性B細(xì)胞表位的體液免疫反應(yīng)的條件下，對(duì)受體動(dòng)物進(jìn)行注射的脂肽。脂肽可以任何在這里描述的方便的配方形式進(jìn)行給藥。"體液免疫"的意思是對(duì)于足以產(chǎn)生阻止卵子發(fā)生，賴子發(fā)生，受精，著床或胚胎發(fā)育B細(xì)胞表位進(jìn)行的第二次免疫應(yīng)答。更優(yōu)選，體液免疫產(chǎn)生了針對(duì)于受體中B細(xì)胞表位持續(xù)水平的抗體。"持續(xù)水平的抗體"意思是產(chǎn)生足夠水平針對(duì)于阻止卵子發(fā)生，精子發(fā)生，受精，著床或胚胎發(fā)育B細(xì)胞表位的循環(huán)抗體。優(yōu)選，對(duì)雌性受體來(lái)說(shuō)，抗體水平至少持續(xù)一個(gè)生殖循環(huán)，更優(yōu)選，至少6個(gè)月，9個(gè)月，12個(gè)月或2年。優(yōu)選，B細(xì)胞表位來(lái)自于黃體激素釋放激素(LHRH),促卵泡素(FSH)，黃體素(LH),人絨毛膜促性腺激素(hCG),透明帶蛋白如ZP3，或FSH受體，人或豬ZP3a上的氨基酸序列。在這一種類中，優(yōu)選B細(xì)胞表位含有P-hCG的C末端部分；人ZP3的氨基酸殘基323-341;豬ZP3a的氨基酸殘疾8-18或272-283或319-330。更優(yōu)選，B細(xì)胞表位含有從下列序列挑選出來(lái)的氨基酸序列序列ID序號(hào)2，序列ID序號(hào)3，序列ID序號(hào)4，序列ID序號(hào)76，序列ID序號(hào)77，序列ID序號(hào)78，序列ID序號(hào)79，序列ID序號(hào)80，序列ID序號(hào)81，序列ID序號(hào)82，序列ID序號(hào)83，和序列ID序號(hào)84.優(yōu)選輔助T細(xì)胞表位含有從下列序列挑選出來(lái)的氨基酸序列序列ID序號(hào)1，序列ID序號(hào)20，序列ID序號(hào)24，序列ID序號(hào)26和序列ID序號(hào)44，以及序列ID序號(hào)為1，或18-56中任意一條。在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施例中，輔助T細(xì)胞表位含有以下任意一條的氨基酸序列，序列ID序號(hào)1，序列ID序號(hào)20，序列ID序號(hào)24，序列ID序號(hào)26和序列ID序號(hào)44;B細(xì)胞表位來(lái)自于含有L服H及序列ID序號(hào)2或序列ID序號(hào)3或序列ID序號(hào)4的氨基酸序列。與優(yōu)選實(shí)施例一致，多肽的氨基酸序列來(lái)源于序列ID序號(hào)5-16，103或104。同樣為與優(yōu)選實(shí)施例一致，優(yōu)選的(但不是主要的)含有脂氨基酸的脂質(zhì)部分是從含有下面的組中挑選出來(lái)的(i)Pansys;(ii)Ste2Cys;(iii)Lau2Cys:和(iv)Oct2Cys。對(duì)于L服H可以產(chǎn)生持續(xù)的抗體證明了本發(fā)明中脂肽作為一種作為誘導(dǎo)不育或避孕試劑的疫苗活性成分的通用效用。因此，本發(fā)明從另一方面提供了一種含有藥物學(xué)可接受的稀釋液，以及含有單獨(dú)結(jié)合于一個(gè)或多個(gè)脂質(zhì)部分多肽的脂肽避孕試劑，其中(i)上述多肽含有-(a)—種輔助T細(xì)胞(Th)表位的氨基酸序列和一種生殖激素或激素受體的B細(xì)胞表位，其中所述的氨基酸序列是不同的；和(b)—個(gè)或多個(gè)內(nèi)部賴氨酸殘基或內(nèi)部賴氨酸類似物殘基，其用于經(jīng)所述內(nèi)部賴氨酸e-氨基或經(jīng)所述內(nèi)部賴氨酸類似物末端側(cè)鏈基團(tuán)共價(jià)附著于所述脂質(zhì)部分的每一個(gè)；禾口(ii)所述一個(gè)或多個(gè)脂質(zhì)部分的每一個(gè)被直接地或間接地共價(jià)附著于一個(gè)或多個(gè)內(nèi)部賴氨酸殘基的e-氨基或內(nèi)部賴氨酸類似物殘基的末端側(cè)鏈基團(tuán)。本發(fā)明的這種疫苗/避孕試劑可以由含有一種或多種載體或賦形劑或其他在"脂肽配方"中描述的試劑構(gòu)成。類似地，對(duì)受體動(dòng)物的進(jìn)行疫苗/避孕劑的注射也可通過(guò)上述方法完成。優(yōu)選受體是人，或動(dòng)物，比如農(nóng)業(yè)動(dòng)物，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，家養(yǎng)動(dòng)物，兇猛動(dòng)物或野生動(dòng)物。對(duì)于A型微球菌的免疫A型微球菌(GAS)是一種相對(duì)溫和的疾病細(xì)菌代理，比如膿毒性咽喉炎和膿皰病，以及少有的，嚴(yán)重的，甚至是危及生命的necrotizingfaciitis和鏈球菌中毒休克綜合癥。嚴(yán)重甚至是危及生命的GAS疾病可能發(fā)生在當(dāng)細(xì)菌進(jìn)入機(jī)體中通常不含有細(xì)菌的部分時(shí)，比如血液，肌肉或肺。一個(gè)感染名詞"入侵性GAS疾病"。兩種最嚴(yán)重形式的入侵性GAS疾病就是necrotizingfasciitis和鏈球菌中毒休克綜合癥。necrotizingfasciitis破壞肌肉，脂肪和皮膚組織。STSS導(dǎo)致血壓急劇降低和臟器喪失功能(腎臟，肝臟和肺)。大約20%的necrotizingfasciitis患者和超過(guò)一半的STSS患者會(huì)死亡。大約10-15%患有其他形式入侵性GAS疾病的患者也會(huì)死亡。在1999年美國(guó)大約發(fā)生了9，400起入侵性GAS疾病。入侵性GAS感染通常通過(guò)越過(guò)被感染人的防御系統(tǒng)而對(duì)其進(jìn)行感染，比如，某人皮膚上的傷口可以使得該細(xì)菌進(jìn)入到組織內(nèi)，或當(dāng)某人遭受包括HIV/AIDS等慢性疾病或影響免疫系統(tǒng)疾病影響，抗感染能力下降時(shí)。同樣，一些GAS有毒菌株比其他菌株更容易引發(fā)嚴(yán)重的疾病。對(duì)遭受癌癥，糖尿病，腎透析和其他使用類固醇進(jìn)行藥物治療的慢性病人來(lái)說(shuō)，他們的危險(xiǎn)性更大。例如，本發(fā)明中由含有A群鏈球菌抗原，尤其是M蛋白的B細(xì)胞表位組成的具有適合構(gòu)型的脂肽，可以對(duì)動(dòng)物進(jìn)行GAS免疫；也對(duì)于GAS的再次感染，提供了一種保護(hù)性免疫應(yīng)答，尤其是誘導(dǎo)針對(duì)于GAS的M蛋白的IgG，唾液IgA和糞IgA的產(chǎn)生，以降低GAS誘導(dǎo)的死亡率。因此，本發(fā)明從另一個(gè)方面提供了一種可對(duì)施用了含有附著于一個(gè)或多個(gè)脂質(zhì)部分多肽的分離脂肽的所述受體誘導(dǎo)產(chǎn)生對(duì)于A群鏈球菌的免疫應(yīng)答的方法，其中(iv)這樣的多肽含有(b)—種輔助T細(xì)胞表位和一種A群鏈球菌抗原的B細(xì)胞表位的氨基酸序列，其中所述的氨基酸序列是不同的；以及(C)一個(gè)或多個(gè)內(nèi)部賴氨酸殘基或內(nèi)部賴氨酸類似物殘基，其用于經(jīng)所述內(nèi)部賴氨酸的e-氨基或經(jīng)所述內(nèi)部賴氨酸類似物的末端側(cè)鏈基團(tuán)共價(jià)附著于所述脂質(zhì)部分的每一個(gè)；和(v)所述一個(gè)或多個(gè)脂質(zhì)部分的每一個(gè)被直接地或間接地共價(jià)附著于所述一個(gè)或多個(gè)內(nèi)部賴氨酸殘基的e-氨基或內(nèi)部賴氨酸類似物殘基的末端側(cè)鏈基團(tuán)；和(vi)在足以引起對(duì)于所述抗原性B細(xì)胞表位的體液免疫反應(yīng)的條件下，對(duì)受體動(dòng)物施用的脂肽。脂肽可以任何在這里描述的方便配方形式進(jìn)行注射。"體液免疫"的意思是對(duì)于足以誘導(dǎo)產(chǎn)生血清IgG，唾液IgA或糞IgA的B細(xì)胞表位進(jìn)行的第二次免疫應(yīng)答，或提供一種對(duì)于A型鏈球菌再次感染的保護(hù)性免疫反應(yīng)。更優(yōu)選，體液免疫產(chǎn)生了針對(duì)于受體中B細(xì)胞表位持續(xù)水平的抗體。"持續(xù)水平的抗體"意思是產(chǎn)生足夠水平防止A型鏈球菌感染的傳播，和/或降低受到A型鏈球菌感染受體動(dòng)物的致病率或死亡率的B細(xì)胞表位循環(huán)抗體。優(yōu)選，抗體水平至少持續(xù)6個(gè)月，9個(gè)月，12個(gè)月或2年。優(yōu)選B細(xì)胞表位來(lái)自于A群鏈球菌M蛋白的氨基酸序列。在這一種類中，優(yōu)選B細(xì)胞表位含有SEQIDNo.101多肽中的氨基酸序列。優(yōu)選輔助T細(xì)胞表位含有選自下列序列的氨基酸序列SEQIDNo.1，SEQIDNo.20，SEQIDNo.24，SEQIDNo.26和SEQIDNo.44，以及SEQIDNo.1或18-56中任意一條。在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施例中，輔助T細(xì)胞表位含有序列ID序號(hào):24中的氨基酸序列，而B(niǎo)細(xì)胞表位含有序列ID序號(hào)101中的氨基酸序列。與優(yōu)選實(shí)施例一致，多肽的氨基酸序列來(lái)源于序列ID序號(hào)105-108。同樣為與優(yōu)選實(shí)施例一致，首選(但不是主要的)的含有脂氨基酸的脂質(zhì)部分是從含有下面的分子式(I)或(II)中挑選出來(lái)的，在這里描述的其他脂也同樣可用。對(duì)于J14多肽可以產(chǎn)生持續(xù)的抗體證明了本發(fā)明中脂肽作為一種作為對(duì)A型鏈球菌提供免疫疫苗活性成分的通用性。因此，本發(fā)明從另一方面提供了一種含有藥物學(xué)可接受的稀釋液，以及含有單獨(dú)結(jié)合于一個(gè)或多個(gè)脂質(zhì)部分多肽的A型鏈球菌疫苗，其中這樣的多肽含有一種T細(xì)胞表位的氨基酸序列和一種A型鏈球菌抗原的B細(xì)胞表位，其中所述的氨基酸序列并不相同；以及通過(guò)所述內(nèi)部賴氨酸e-氨基，或所述內(nèi)部賴氨酸類似物末端側(cè)鏈基團(tuán)，與所述脂質(zhì)部分進(jìn)行共價(jià)結(jié)合的一個(gè)或多個(gè)內(nèi)部賴氨酸殘基或內(nèi)部賴氨酸類似物殘基；以及直接或間接與所述一個(gè)或多個(gè)內(nèi)部賴氨酸殘基的e-氨基，或所述一個(gè)或多個(gè)內(nèi)部賴氨酸類似物殘基的末端側(cè)鏈基團(tuán)進(jìn)行共價(jià)結(jié)合的每一個(gè)或多個(gè)脂質(zhì)部分。本發(fā)明的這種疫苗可以由含有一種或多種載體或賦形劑或其他在"脂肽配方"中描述過(guò)的試劑構(gòu)成。類似地，對(duì)受體動(dòng)物的進(jìn)行疫苗的注射也可通過(guò)上述方法完成。優(yōu)選受體是人，或動(dòng)物，比如農(nóng)業(yè)動(dòng)物，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，家養(yǎng)動(dòng)物，兇猛動(dòng)物或野生動(dòng)物。對(duì)胃酸過(guò)量和不受調(diào)控分泌的抑制與預(yù)防己知胃泌素可以通過(guò)壁細(xì)胞刺激胃酸的分泌，其活性由胃泌素與胃泌素受體或縮膽囊素的結(jié)合來(lái)進(jìn)行調(diào)控的。胃泌素的末端4-5個(gè)氨基酸殘基提供了全長(zhǎng)蛋白質(zhì)的受體特異性和活性。胃泌素末端的5個(gè)氨基酸殘基并成為五肽胃泌素。作為過(guò)量和不受調(diào)控胃酸分泌的后果，不受調(diào)控的胃泌素表達(dá)和分泌可引起hypergastrinemia，并導(dǎo)致Zollinger-Ellison綜合癥，胃十二指腸潰瘍，胰或十二指腸促胃液素瘤的形成。針對(duì)于胃泌素多肽的內(nèi)部分泌，可以使用對(duì)于胃泌素的抗體進(jìn)行胃泌素免疫中和可以用來(lái)阻止胃酸的分泌。例如，本發(fā)明中由含有胃泌素多肽B細(xì)胞表位組成的具有適合構(gòu)型的脂肽，可以對(duì)宿主動(dòng)物進(jìn)行胃泌素免疫；或在胃酸分泌受到抑制的小鼠模型或其他哺乳動(dòng)物中得到胃泌素過(guò)量分泌。這里的數(shù)據(jù)證明了在誘導(dǎo)對(duì)于胃泌素和胃泌素免疫中和的體液免疫，以及在遭受由于胃酸的過(guò)量和不受調(diào)控的分泌引起的hypergastrinemia,Zollinger-Ellison綜合征，胃潰瘍或十二指腸潰瘍阻止胃酸分泌，以及在減少或防止胰和十二指腸中胃泌素分泌腫瘤的形成(預(yù)防和/或治療促胃液素瘤)過(guò)程中，脂肽的普遍效用。因此，本發(fā)明進(jìn)一步提供了一種在受試者體內(nèi)誘導(dǎo)針對(duì)胃泌素肽的免疫應(yīng)答的方法，該方法包括對(duì)所述受試者施用一種含有共價(jià)結(jié)合于一種或多種脂質(zhì)部分的多肽的分離脂肽，其中(vii)上述多肽含有(c)一種輔助T細(xì)胞表位和一種胃泌素抗原的B細(xì)胞表位的氨基酸序列，其中所述的氨基酸序列是不同的；和(d)—個(gè)或多個(gè)內(nèi)部賴氨酸殘基或內(nèi)部賴氨酸類似物殘基，其用于經(jīng)所述內(nèi)部賴氨酸的e-氨基或經(jīng)所述內(nèi)部賴氨酸類似物的末端側(cè)鏈基團(tuán)共價(jià)附著于所述脂質(zhì)部分的每一個(gè)；和(viii)所述一個(gè)或多個(gè)脂質(zhì)部分的每一個(gè)被直接地或間接地共價(jià)附著于所述一個(gè)或多個(gè)內(nèi)部賴氨酸殘基的e-氨基或內(nèi)部賴氨酸類似物殘基的末端側(cè)鏈基團(tuán)；和(ix)在足以引起對(duì)于所述抗原性B細(xì)胞表位的體液免疫應(yīng)答的條件下，對(duì)受試體動(dòng)物施用一定時(shí)間的脂肽。脂肽可以任何在這里描述的方便配方形式進(jìn)行注射。"體液免疫"的意思是對(duì)于足以產(chǎn)生對(duì)于胃泌素的血清IgG的B細(xì)胞表位進(jìn)行的二次免疫應(yīng)答。更優(yōu)選，體液免疫產(chǎn)生了針對(duì)于受體中B細(xì)胞表位持續(xù)水平的抗體。"持續(xù)水平的抗體"意思是產(chǎn)生足夠水平以阻止對(duì)于胃泌素的胃酸的過(guò)量和不受調(diào)控的分泌的B細(xì)胞表位循環(huán)抗體。優(yōu)選，抗體水平至少持續(xù)6個(gè)月，9個(gè)月，12個(gè)月或2年。優(yōu)選B細(xì)胞表位含有五肽胃泌素的氨基酸序列。在這一種類中，優(yōu)選B細(xì)胞表位含有序列ID序號(hào)102多肽中的氨基酸序列，或包含全長(zhǎng)胃泌素蛋白或任何具有其免疫片段的B細(xì)胞表位。優(yōu)選輔助T細(xì)胞表位含有從下列序列挑選出來(lái)的氨基酸序列序列ID序號(hào)1，序列ID序號(hào)20，序列ID序號(hào)24，序列ID序號(hào)26和序列ID序號(hào)44，以及序列ID序號(hào)為1，或18-56中任意一條。在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施例中，輔助T細(xì)胞表位含有序列ID序號(hào)24中的氨基酸序列，而B(niǎo)細(xì)胞表位含有序列ID序號(hào)102中的氨基酸序列。與優(yōu)選實(shí)施例一致，多肽的氨基酸序列來(lái)源于序列ID序號(hào)109-112。同樣為與優(yōu)選實(shí)施例一致，優(yōu)選(但不是主要的)的含有脂氨基酸的脂質(zhì)部分是從含有下面的分子式(I)或(II)中挑選出來(lái)的，在這里描述的其他脂也同樣可用。對(duì)于五肽胃泌素或胃泌素可以產(chǎn)生持續(xù)的抗體證明了本發(fā)明中脂肽作為一種作為必要時(shí)對(duì)降低胃泌素副作用提供疫苗活性成分的通用性。因此，本發(fā)明從另一方面提供了一種含有藥物學(xué)可接受的稀釋液，以及含有單獨(dú)結(jié)合于一個(gè)或多個(gè)脂質(zhì)部分多肽的，針對(duì)于胃泌素分泌過(guò)多誘導(dǎo)的情形或疾病的疫苗，其中(v)上述多肽含有(c)一種T細(xì)胞表位和一種胃泌素多肽抗原的B細(xì)胞表位的氨基酸序列，其中所述的氨基酸序列是不同的；和(d)—個(gè)或多個(gè)內(nèi)部賴氨酸殘基或內(nèi)部賴氨酸類似物殘基，其用于經(jīng)所述內(nèi)部賴氨酸的e-氨基或經(jīng)所述內(nèi)部賴氨酸類似物的末端側(cè)鏈基團(tuán)共價(jià)附著于所述脂質(zhì)部分的每一個(gè)；禾口(vi)所述一個(gè)或多個(gè)脂質(zhì)部分的每一個(gè)被直接地或間接地共價(jià)附著于所述一個(gè)或多個(gè)內(nèi)部賴氨酸殘基的e-氨基或內(nèi)部賴氨酸類似物殘基的末端側(cè)鏈基團(tuán)。本發(fā)明的這種疫苗可以由含有一種或多種載體或賦形劑或其他在"脂肽配方"中描述過(guò)的試劑。類似地，對(duì)受體動(dòng)物的進(jìn)行疫苗的注射也可通過(guò)上述方法完成。優(yōu)選受試者是人。本發(fā)明用以下非限制性實(shí)施例和附圖進(jìn)行進(jìn)一步描述。實(shí)施例1材料和方法眾爆另除非另作說(shuō)明，化學(xué)制品是分析級(jí)或其等價(jià)物。N，N'-二甲替甲酰胺(DMF),哌啶，三氟乙酸(TFA)，0'苯并三唑-A/;7VW,-四甲基uroniu六氟磷酸鹽(HBTU)，l-羥基苯并三唑(HOBt)和二異丙基乙胺(DIPEA)和二異丙基碳二亞胺(DIPCDI)獲自AuspepPty.Ltd.，墨爾本，澳大利亞和Sigma-AldrichPty.Ltd.,CastleHill,澳大利亞。O'苯并三唑-A^7V;A^V'-四甲基uranium四氟硼酸鹽(TBTU)獲自Bachem,(BachemAG,瑞士).二氯甲(DCM)和二乙醚獲自MerckPtyLtd.(Kilsyth,澳大利亞)。苯酚和三異丙基硅烷(TIPS)來(lái)自Aldrich(Milwaulke,WI)，及三硝基苯甲基磺酸(TNBSA)禾Bdiaminopyridine(DMAP)來(lái)自Fluka;l，8-diazabicyclo[5.4.0]undec-7-ene(DBU)獲自Sigma,棕櫚酸來(lái)自Fluka。蹄游微薪分微成Pam3Cys根據(jù)Weismuller等人，HoppeSeylersZPhysiolChem364，593(1983)中所描述的方法被制備，如根據(jù)Zeng等人，《/尸印f&/二66(1996)中所描述的方法被修飾。根據(jù)Zeng等人(s甲ra)所描述的程序，脂氨基酸Pam3Cys被附著于被暴露的賴氨酸的s氨基上。簡(jiǎn)單地說(shuō)，添加超過(guò)2倍的Pam3Cys,TBTU和HOBt被溶解在DCM中，超過(guò)3倍的DIPEA。然后，溶液被添加到被樹(shù)脂結(jié)合的多肽上以產(chǎn)生脂肽。船鄉(xiāng)微粉游會(huì)成""根據(jù)Jones等人，Ze"o&o"cfl5，155(1975)和Metzger等人，尸e/^尸rato'"/as3S，545(1991)所描述的方法，制備Pam3Cys及其衍生物Fmoc-Pam3Cys-OH。微游會(huì)成Pam2Cys,Ste2Cys,Oct2Cys或Lau2Cys被用Jones等人，為oto/ca5，155(1975)禾口Metzger等人，/""尸e/Z^3《，545(1991)所描述的方法的一個(gè)變化形式連接到多肽上。I.S-(2，3-二羥基丙酯)半胱氨酸的合成三乙胺(6g，8.2ml,58mmoles)被添加到水中的L-半胱氨酸氫氯化物(3g，19圃oles)和3-溴基-丙烷-l，2-二醇(4.2g，2.36ml，27mmoles)，該均相溶液于室溫保持3天。該溶液在真空中于4(TC被還原成硅渣，硅渣與甲醇(100ml)—起被煮沸，離心，將殘余物溶解在水(5ml)中。這一水溶液被添加到丙酮(300ml)中，并通過(guò)離心過(guò)濾分離沉淀物。該沉淀物通過(guò)幾次沉淀被從含有丙酮的水中純化出來(lái)，以提供白色無(wú)定形粉末S-(2，3-二羥基丙酯)半胱氨酸(2.4g，12.3醒ol，64.7%)。II.N-芴基甲氧基羰基-S-a3-二羥基丙酯)半胱氨酸(Fmoc-Dhc-OH)的合成S-(2,3-二羥基丙酯)半胱氨酸(2.45g,12.6mmole)被溶解入9%的碳酸鈉中(20ml)。于乙腈(20ml)中的芴基甲氧基羰基-N-羥基琥珀酰亞胺溶液(3.45g，10.5mmole)被加入，該混合物被攪拌2小時(shí)，然后用水(240ml)稀釋，并用二乙醚萃取(25mlx3)。水相被用濃鹽酸酸化至pH2，然后用乙酸乙酯萃取(70mlx3)。萃取物被用水(50mlx2)，飽和氯化鈉溶液(50mlx2)洗滌，被在硫酸鈉上干燥并被蒸發(fā)至干燥狀態(tài)。于-20。C，從乙醚和乙酸乙酯中的重結(jié)晶產(chǎn)生無(wú)色粉末(2.8g，6.7腿ole，63.8%)。III.Fmoc-Dhc-OH偶合到樹(shù)脂結(jié)合多肽上resin-boundpeptide:Fmoc-Dhc-OH(100mg,0.24蘭ole)在DCM和DMF(1:1，v/v,3ml)中，用HOBt(36mg,0.24mmole)和DICI(37ul,0.24mrno1)，于0。C被激活5分鐘。該混合物然后被添加帶含有樹(shù)脂結(jié)合多肽(0.04mmole,0.25g氨基多肽樹(shù)脂)的容器中。搖動(dòng)2小時(shí)后，溶液通過(guò)過(guò)濾被移走，樹(shù)脂用DCM和DMF洗漆(分別3x30ml)。該反應(yīng)用TNBSA實(shí)驗(yàn)監(jiān)控其是否完成。如果需要進(jìn)行兩次偶合。IVa.Fmoc-Dhc-多肽樹(shù)脂的兩個(gè)羥基的棕櫚?；貦八?204mg，0.8mmole)，DICI(154ul,l醒ole)禾口DMAP(9.76mg,0.08mmole)被溶解在2ml的DCM和lml的DMF中。樹(shù)脂結(jié)合Fmoc-Dhc-多肽樹(shù)脂(0.04mmole，0.25g)被懸浮在上述溶液中并在室溫下被搖動(dòng)16小時(shí)。溶液通過(guò)過(guò)濾被移走，然后用DSM和DMF徹底地洗滌樹(shù)脂以移走任何尿素殘余物。用2.5%DBU完成Fmoc基團(tuán)的移走(2x5分鐘)。IVb.Fmoc-Dhc-多肽樹(shù)脂的兩個(gè)羥基的硬脂?；仓?約0.8mmole)，DICI(154ul,lmmole)和DMAP(9.76mg，0.08mmole)被溶解在2ml的DCM禾Q1ml的DMF中。樹(shù)脂結(jié)合Fmoc-Dhc-多肽樹(shù)脂(0.04mmole，0.25g)被懸浮在上述溶液中并在室溫下被搖動(dòng)16小時(shí)。溶液通過(guò)過(guò)濾被移走，然后用DSM和DMF徹底地洗滌樹(shù)脂以移走任何尿素殘余物。用2.5%DBU完成Fmoc基團(tuán)的移走(2x5分鐘)。IVc.Fmoc-Dhc-多肽樹(shù)脂的兩個(gè)羥基的十二烷?；樗?約0.8mmole)，DICI(154ul，lmtnole)和DMAP(9.76mg，0.08mmole)被溶解在2ml的DCM和1ml的DMF中。樹(shù)脂結(jié)合Fmoc-Dhc-多肽樹(shù)脂(0.04mmole，0.25g)被懸浮在上述溶液中并在室溫下被搖動(dòng)16小時(shí)。溶液通過(guò)過(guò)濾被移走，然后用DSM和DMF徹底地洗滌樹(shù)脂以移走任何尿素殘余物。用2.5%DBU完成Fmoc基團(tuán)的移走(2x5分鐘)。IVd.FmooDhc-多肽樹(shù)脂的兩個(gè)羥基的辛?；了?約0.8mmole)，DICI(154ul，lmole)和DMAP(9.76mg,0.08mmole)被溶解在2ml的DCM和1ml的DMF中。樹(shù)脂結(jié)合Fmoc-Dhc-多肽樹(shù)脂(0.04mmole，0.25g)被懸浮在上述溶液中并在室溫下被搖動(dòng)16小時(shí)。溶液通過(guò)過(guò)濾被移走，然后用DSM和DMF徹底地洗滌樹(shù)脂以移走任何尿素殘余物。用2.5%DBU完成Fmoc基團(tuán)的移走(2x5分鐘)。微絲用于多肽合成的常規(guī)程序已經(jīng)被JacksonFacc/"e18，355(1999)所描述。為使得CD4+T細(xì)胞表位和B細(xì)胞表位間的脂質(zhì)分子結(jié)合，F(xiàn)moc-賴氨酸(Mtt)-OH被插入到樹(shù)脂結(jié)合多肽的近似中心內(nèi)，兩個(gè)表位間的一個(gè)位置。如果脂質(zhì)是被添加到多肽內(nèi)的另一個(gè)位置，例如SEQIDNO:24的Lys-14殘基，那么Fmoc-賴氨酸(Mtt)-OH也被插入到那個(gè)位置。多肽合成完成后,使用溶于二氯甲中的1%的TFA通過(guò)連續(xù)流式洗滌30-45分鐘移走M(jìn)tt基團(tuán)，以暴露賴氨酸殘基的e氨基。當(dāng)兩個(gè)絲氨酸殘基被用作間隔基的時(shí)候，兩個(gè)絲氨酸殘基被偶合到該e氨基上。可選地，當(dāng)兩個(gè)精氨酸殘基被用作間隔基的時(shí)候，兩個(gè)精氨酸殘基被偶合到該e氨基上。可選地，6-氨基己酸被偶合到該s氨基上。隨后的脂質(zhì)部分，如Pam3Cys,Pam2Cys,Ste2Cys，Oct2Cys，或Lau2Cys的偶合在前面被描述。全部的樹(shù)脂結(jié)合多肽結(jié)構(gòu)用試劑B(88%TFA，5%苯酚，2%TIPS,5%水)作用2小時(shí)，被從固相載體分開(kāi)，且通過(guò)如Zeng""/.,M，1031(2000)所述的倒相層析被純化。用被插入到水中HPLC系統(tǒng)的VydacC4(4.6x250mm)柱進(jìn)行分析倒相高壓液體層析(RP-HPLC);將溶于水的0.1%TFA和溶于CH3CN的0.1。/。TFA用作限制溶劑，在流速為lml/分鐘被展開(kāi)。全部產(chǎn)品在分析RP-HPLC上呈現(xiàn)為單獨(dú)的主峰；當(dāng)在裝備定時(shí)離子萃取的BrukerBIFLEX裝置上通過(guò)MALDI-TOF質(zhì)譜分析的時(shí)候，具有被期望的分子量。最終的免疫原的定量利用在多肽結(jié)構(gòu)中存在的色氨酸和酪氨酸殘基，通過(guò)測(cè)量280nrn處的吸收值進(jìn)行(摩爾消光系數(shù)為6.6xl03)。通過(guò)加入兩個(gè)殘基在多肽和含Pam3Cys多肽與含Pam2Cys多肽的脂質(zhì)部分之間來(lái)研究絲氨酸的效應(yīng)，兩個(gè)絲氨酸殘基隨后在脂質(zhì)部分(其結(jié)構(gòu)如圖1所示)的共價(jià)附著之前被添加到多肽上。通過(guò)分析RP-HPLC和質(zhì)譜分析完成的它們的特征的概述，由表1和表2呈現(xiàn)。M方案5只6-8周齡的雌性BALB/c鼠，在O天被接種，在第28天再次接種?；蛘?，4-6周齡的雌性雜交繁育的Quackenbush鼠，被經(jīng)鼻腔免疫并按照初次免疫在每21天間隔時(shí)提供加強(qiáng)免疫。對(duì)于皮下(s.c.)接種(每劑100nl)，脂肽結(jié)構(gòu)在鹽中和在等體積的用于初次注射的弗氏完全佐劑(CFA)或用于二次免疫的弗氏不完全佐劑中被制成乳狀液的未脂化多肽中。對(duì)于鼻腔內(nèi)(i.n.)接種，50^1在鹽中的多肽被用于用penthrane麻醉的鼠的鼻孔吸入。血清從取自初次接種后4周和二次接種后兩周的血液制備，或可選地，從最后一次免疫七天后的尾部放血制備。麟棘級(jí)A嫌雜丄卿在基本如Ghoshetal.，IntImmun.11,1103，(1999)所述的血清樣本上進(jìn)行ELISA測(cè)定，用免疫試劑(如LHRH，J14或五肽胃泌素)作為包被抗原。抗體滴度用為達(dá)到OD2的血清最高稀釋度的倒數(shù)來(lái)表示，這呈現(xiàn)出是在沒(méi)有抗體的情況下的背景結(jié)合的約5倍。前被Ghoshetal.，Intlmmun.11，1103，(1999)所描述的那樣，LHRH或J14特異性的抗體的同種型用抗鼠IgM，IgGl，IgG2a，IgG2b，IgG3或IgA(ICN醫(yī)藥品公司，CostaMesa，CA)的兔抗血清來(lái)測(cè)定。宭虔力,究在被用多肽免疫原接種后及隨后暴露給雄性鼠，對(duì)雌性鼠的產(chǎn)仔能力進(jìn)fili試。一組雌性鼠被用CFA中的鹽免疫作為對(duì)照組。1只雄性鼠被放入其中飼養(yǎng)由2只或3只雌性鼠的一個(gè)籠中，雄性鼠在各籠間輪換以將每組雌性鼠暴露給每只雄性鼠。雄性和雌性鼠被一起飼喂總共3周，在該時(shí)間段末雄性鼠被移走，雌性鼠被留下用于觀察。HPLC洗提和基于流感病毒紅血球凝聚素輔助T細(xì)胞表位(SEQIDNO:1)和LHRHB-細(xì)胞表位(SEQIDNO:2)的多肽疫苗的質(zhì)量特征<table>tableseeoriginaldocumentpage127</column></row><table>1倒相層析發(fā)在被插入到水相HPLC系統(tǒng)中的VydacC4柱(4.6x250mm)上進(jìn)行，以流速lml/分鐘展開(kāi)，用存在于水中的0.1%TFA和存在于CH3CN中的0.1%TFA作為極限溶劑。s質(zhì)譜測(cè)定用裝備有定時(shí)離子萃取的BrukerBIFLEXMALDI-TOF裝置進(jìn)行。在線性模型中進(jìn)行分析。說(shuō)明書(shū)第123/177頁(yè)表2.HPLC洗提基于CDV-FP25輔助T細(xì)胞表位(SEQIDNO:24)和五肽胃泌素B-細(xì)胞表位(SEQIDNO:102)的多肽疫苗的質(zhì)量特征<table>tableseeoriginaldocumentpage128</column></row><table>1倒相層析發(fā)在被插入到水相HPLC系統(tǒng)中的VydacC4柱(4.6x300mm)上進(jìn)行，以流速lml/分鐘展開(kāi)，用存在于水中的0.1%TFA和存在于CH3CN中的0.1%TFA作為極限溶劑。2質(zhì)譜測(cè)定用Agilent110LC/MSD離子阱質(zhì)譜儀進(jìn)行。微潘應(yīng)薦養(yǎng)樹(shù)突細(xì)胞(DC)被在基于完全I(xiàn)DDM的培養(yǎng)基中培養(yǎng)。它由含有25mMHEPES且不含有a-硫甘油或L-谷氨酸鹽(JRHBioscience,Lenexa,USA)的Iscove，sModifiedDulbecco，s培養(yǎng)基(IMDM)組成，補(bǔ)充10%(V/V)加熱失活(56。C，30min)的胎牛血清(CSLLtd.,Parkville，Victoria,Australia)，慶大霉素(24ng/mL)，谷氨酸鹽(2mM)，丙酮酸鈉(2mM)，青霉素(100IU/mL)，鏈霉素(180ng/mL)和2-巰基乙醇(0.1mM)。用于DC制備，完全I(xiàn)MDM還進(jìn)一步被添加了30%的來(lái)自被培養(yǎng)的NIH/3T3細(xì)胞的上清和存在于來(lái)自被GM-CSF基因轉(zhuǎn)染的Ag8653細(xì)胞的上清中的5%的GM-CSF(DC培養(yǎng)基)。未成熟樹(shù)突細(xì)胞的培養(yǎng)方法是據(jù)WinzlerWa/.,/ExpAfed/S5，317(1997)的修改。來(lái)自BALB/c鼠的脾細(xì)胞以1.5xl06個(gè)細(xì)胞/55mm平皿(Techno-Plas,S.A.，Australia)接種在3ml的DC培養(yǎng)基中，并于37。C與5%0)2孵育。所有用于培養(yǎng)的裝置都沒(méi)有熱源。培養(yǎng)基每隔4小時(shí)被改變且全部的細(xì)胞回到培養(yǎng)皿中。在第12天，被懸浮的和輕微黏附的細(xì)胞兩者都通過(guò)有效地移液被收集，隨后抽吸培養(yǎng)基。該程序用2mlPBS重復(fù)兩次。剩下的堅(jiān)固地黏附的細(xì)胞被排除。被收集的細(xì)胞通過(guò)離心過(guò)濾被制成丸狀并被重新接種到一個(gè)新的培養(yǎng)皿中。細(xì)胞隨后以培養(yǎng)基變化和轉(zhuǎn)變的4天一個(gè)交替的周期被保持.1個(gè)月連續(xù)培養(yǎng)后，浮游的和半黏附的細(xì)胞呈現(xiàn)出未成熟樹(shù)突細(xì)胞的外觀和著色特性，并被歸類為Dl細(xì)胞。在這些傳^^條件下，多數(shù)被培養(yǎng)的D1細(xì)胞保持了由細(xì)胞表面MHCII類分子表征的未成熟的表型。潘應(yīng)游魔(欲應(yīng)iW用lmlDC培養(yǎng)基將Dl細(xì)胞(每個(gè)樣本有1x105個(gè)細(xì)胞)接種到一個(gè)新的有蓋培養(yǎng)皿中，以0.0045nmok溶解在完全I(xiàn)MDM培養(yǎng)基中的脂肽孵育。將5|ug/mL的純化自大腸桿菌血清型0111.-B4(Difco，Detroit,Michigan,USA，受贈(zèng)自Dr.E.MargotAnders,DepartmentofMicrobiologyandImmunology,UniversityofMelbourne)的脂多醣用作陽(yáng)性對(duì)照。過(guò)夜孵育后，收獲細(xì)胞并用含有1。/。FCS的PBS洗滌一次。為了阻止對(duì)FCyRII/III的非特異性結(jié)合，細(xì)胞用20pL正常鼠血清在室溫下預(yù)先孵育5分鐘。然后在冰面上將細(xì)胞暴露于FITC-綴合單克隆抗體14-4-4S30分鐘(IgG2a，抗-I-Ek，d;Ozato等.,/./mm歸/.,肌533，1980)。單克隆抗體36/1(Brown等.,^^F/Wl11990)對(duì)流感病毒紅血球凝聚素具有特異性，被用作同種型對(duì)照。所有抗體都在2.5昭/mL被使用。樣本用含有1%FCS的PBS洗滌一次，并用含有4%多聚甲醛的PBS在冰面上固定15分鐘。用FACSort(BectonDickinson,SanJose,USA)進(jìn)行流式細(xì)胞記數(shù)分析，數(shù)據(jù)用FlowJo軟件(TreeStar,Inc.,SanCarlos，CA,USA)分析。實(shí)施例2含有LHRHB細(xì)胞表位脂肽的研究含有LHRH脂肽的溶解特性對(duì)含有LHRH不同脂肽的目測(cè)說(shuō)明它們?cè)谌芙庑允蔷哂袠O大的差別(圖2)。那些脂質(zhì)部分結(jié)合于兩種表位中部的分子具有明顯增強(qiáng)的溶解性。脂肽[Th]-Lys(Pam2Cys)-[B]和[Th]-Lys(Pam3Cys)-[B]可以至少8mg/ml(沒(méi)有對(duì)更高的濃度進(jìn)行檢測(cè))的濃度溶解于鹽水中，而那些脂質(zhì)部分與多肽N末端序列結(jié)合的結(jié)構(gòu)則在0.25mg/ml濃度時(shí)就形成了乳白色液體。試圖在脂質(zhì)部分與多肽N末端結(jié)合分子的脂質(zhì)部分和多肽部分之間上加入兩個(gè)親水性絲氨酸殘基(Pam2Cys-Ser-Ser-[Th〗-[B]和Pam3Cys-Ser-Ser-[Th]-[B])來(lái)增加其溶解性的努力，被證明是不成功的。事實(shí)上，脂肽Pam3Cys-Ser-Ser-[Th]-[B]相當(dāng)難以溶解，以至于它甚至不能在與其他脂肽相同的條件下進(jìn)行RP-HPLC純化。我們認(rèn)為該成分的不溶解性本質(zhì)使得很難將其作為疫苗生產(chǎn)中的可行性提議加以考慮。含有LHRHB細(xì)胞表位脂肽的免疫原性將下述三種脂肽Pam2Cys-Ser-Ser-[Th]-[B]，[Th]-Lys(Pam2CysHB]和[Th]-Lys(Pam3Cys)-[B]溶于鹽水進(jìn)行皮下給藥可以誘導(dǎo)高水平的抗-LHRH抗體。事實(shí)上，用上述脂肽進(jìn)行兩次免疫后的抗體滴度和用弗氏完全佐劑與[Th]-[B]或[Th]-Lys-[B]混合進(jìn)行給藥的滴度相似(圖3)。接受Pam3Cys-Ser-Ser-[Th]-[B]或Pam2Cys-[Th]-[B]免疫小鼠血清中的抗-LHRH抗體滴度稍低一些。相對(duì)于不可榮的脂肽結(jié)構(gòu)，可溶性脂肽[Th]-Lys(Pam2Cys)-[B]，[Th]-Lys(Pam3Cys)-[B]可以在首次免疫后誘導(dǎo)10-100倍的抗-LHRH抗體表達(dá)。相對(duì)于采用Pam3Cys-Ser-(Lys)4作為佐劑的其他結(jié)果(Jung,G,和W.G.Bessler.(1995)In:"在醫(yī)學(xué)和生物學(xué)中的多肽免疫識(shí)別，N.D.Zegers，W.J.A.Boersma,andE.Claassen,eds..CRCPress,Boca，NewYork,London,Tokyo，p.159)，兩組各5只接受[Th]-[B]和Pam3Cys-Ser-(Lys)4以1:1或l:5混合進(jìn)行免疫的小鼠，都沒(méi)有顯示出抗-LHRH抗體的顯著提咼，采用多種脂肽進(jìn)行二次免疫后2周的育性試驗(yàn)結(jié)果可見(jiàn)于表3。沒(méi)有任何用溶于鹽水的脂肽[Th]-Lys(Pam2Cys)-[B]或[Th]-Lys(Pam3Cys)-[B]，和與弗氏完全佐劑進(jìn)行混合的非脂肽結(jié)構(gòu)[Th]-[B]or[Th]-Lys-[B]免疫過(guò)的小鼠懷孕。在接受Pam2Cys-Ser-Ser-[Th]-[B]免疫的組中有1只和2只用Pam3Cys-Ser-Ser-[Th]-[B]或Pam2Cys-[Th]-[B]免疫的動(dòng)物產(chǎn)仔。所有采用溶于弗氏完全佐劑鹽水或與混有[Th]-[B]和Pam3Cys-S-(Lys)4多肽的對(duì)照組都產(chǎn)仔。在二次免疫后對(duì)抗體水平進(jìn)行了7個(gè)月的跟蹤檢測(cè)。用脂肽和溶于復(fù)制完全佐劑中的非脂肽進(jìn)行免疫小鼠的抗-LHRH抗體滴度在26周內(nèi)分別下降了4-20倍。在二次免疫后3個(gè)月進(jìn)行的育性試驗(yàn)結(jié)果與該次免疫后2周的結(jié)果相似。接受溶于鹽水的可溶性脂肽[Th]-Lys(Pam2CysHB]或[Th]-Lys(Pam3CysHB]，或溶于弗氏完全佐劑的非脂肽[ThHB]和[Th]-Lys-[B]免疫的小鼠都保持不育。表3在采用多肽結(jié)構(gòu)進(jìn)行免疫后的抗-LHRH抗體滴度和懷孕發(fā)生率<table>tableseeoriginaldocumentpage132</column></row><table>'[Th]-[B]，[Th]-Lys-間和鹽水都溶于弗氏完全佐劑進(jìn)行給藥，所有其他肽結(jié)構(gòu)都溶于鹽水進(jìn)行給藥。皮下給藥的劑量為20nmole。2滴度代表的是各組中5只雌性BALB/c小鼠的幾何平均數(shù)。200710128717.4絡(luò)s擊被127/177sPam2Cys是比Pam3Cys更有效的佐劑相對(duì)于免疫原Pam2Cys-[Th]-[B]，Pam2Cys-Ser-Ser-[Th]-[B]和Pam3Cys-Ser-Ser-[Th]-[B]來(lái)說(shuō)，圖3和表2的結(jié)果都顯示出具有支鏈的脂肽[Th]-Lys(Pam2Cys)-[B]和[Th]-Lys(Pam3Cys)-[B]不僅溶解性更高，而且可以提高抗體滴度，尤其是在初次抗體應(yīng)答時(shí)。為了對(duì)這一問(wèn)題進(jìn)行深入研究，我們對(duì)[Th]-Lys(Pam2Cys)-[B]和[Th]-Lys(Pam3Cys)-[B]劑量的降低進(jìn)行了檢測(cè)。在10nmole和1nmole水平條件下，[Th]-Lys(Pani2CysHB]可以比[Th]-Lys(Pam3Cys)-[B]又到更高的抗體滴度(表4)。更令人驚奇的是在接受10和lnmol[Th]-Lys(Pam2Cys)-[B]免疫的小鼠的交配實(shí)驗(yàn)中，分別在5個(gè)個(gè)體中觀察到了1個(gè)和0個(gè)個(gè)體的產(chǎn)仔，而在同樣劑量下接受[Th]-Lys(Pam3Cys)-[B]免疫的小鼠中，分別在5個(gè)個(gè)體中觀察到了3個(gè)和5個(gè)個(gè)體的產(chǎn)仔(表4)。這些結(jié)果說(shuō)明含有Pam2Cys的多肽比含有Pam3Cys的多肽更適于作為免疫原。含有Pam2Cys的免疫原中加入額外的絲氨酸殘基對(duì)動(dòng)物的育性幾乎根本沒(méi)有作用，盡管這樣的做法可以使得在二次免疫后提高抗體的滴度(表4)。表4采用不同劑量多肽疫苗進(jìn)行免疫后的抗-LHRH抗體滴度和懷孕狀態(tài)'接種體二次接種后2周的抗-LHRH抗體滴度(log,o)平均值2懷孕狀態(tài)(每組中產(chǎn)仔個(gè)體數(shù))[Th]曙L(fēng)ys(Pam3Cys)-間3.76±0.363/5[Th]-Lys(Pam3Cys)-間3.22±0.515/5[Th]-Lys(Pam2Cys)-[B]4.22±0.331/5[Th]-Lys(Pam2Cys)-[B]3.61±U80/5[Th]-Lys(Pam2Cys-Ser-Ser)4.64±0.230/5[Th]-Lys(Pam2Cys-Ser-Ser)3.92±0.651/5[Th]-間inCFA4.72±0.211/5[Th]畫(huà)問(wèn)inCFA3.56±0.223/5溶于弗式完全佐劑的鹽水<25/5i采用溶于鹽水的脂肽和溶于弗氏完全佐劑的非脂肽[Th]-[B]和鹽水進(jìn)行首次給藥接種，而采用溶于弗氏不完全完全佐劑的非脂肽[Th]-[B]和鹽水進(jìn)行二次接種。所有疫苗都采用常規(guī)方式進(jìn)行皮下給藥。2在進(jìn)行疫苗的二次給藥2周后開(kāi)始育性試驗(yàn)。鼻內(nèi)免疫后的系統(tǒng)性抗體應(yīng)答我們采用鼻內(nèi)免疫方式用溶于鹽水的[Th]-Lys(Pam2Cys-Ser-Ser)-[B]和Pam2Cys-Ser-Ser-[Th]-[B]進(jìn)行接種。同時(shí)也采用皮下免疫的方式對(duì)相同的疫苗進(jìn)行接種并檢測(cè)系統(tǒng)的抗-LHRH抗體應(yīng)答.用于接種[Th]-Lys(Pam2Cys-Ser-Ser)-[B]的溶液澄清，而用于接種Pam2Cys-Ser-Ser-[Th]-[B]的溶液則呈乳白色，說(shuō)明這兩種配方的溶解性差異。進(jìn)行鼻內(nèi)給藥后，每種疫苗所誘導(dǎo)產(chǎn)生的血清抗-LHRH抗體滴度都稍低于皮下接種誘導(dǎo)產(chǎn)生的滴度(表5)。溶解性更高的[Th]-Lys(Pam2Cys-Ser-Ser)-[B]在首次接種后4周所誘導(dǎo)產(chǎn)生的抗-LHRH抗體滴度明顯高于溶解度較低的Pam2Cys-Ser-Ser-[Th]-[B](p=0.00007);而事實(shí)上，這與通過(guò)皮下給藥獲得的結(jié)果相類似。與接受Pani2Cys-Ser-Ser-[Th]-[B]鼻內(nèi)免疫后5只中有3只小鼠產(chǎn)仔情況相比較，接受[Th]-Lys(Pam2Cys-Ser-Ser)-[B]鼻內(nèi)免疫的小鼠沒(méi)有任何一只懷孕。通過(guò)兩種不同方式接受兩種疫苗所誘導(dǎo)產(chǎn)生應(yīng)答的壽命比較可見(jiàn)于表5。在二次疫苗免疫26周后所有小鼠的抗體水平都已經(jīng)下降到二次免疫2周后的水平之下。接受皮下給藥[Th]-Lys(Pam2Cys-Ser-Ser)-[B〗的分組中，其誘導(dǎo)產(chǎn)生抗-LHRH抗體的下降情況并不是非常明顯，有一次說(shuō)明Pam2Cys-Ser-Ser結(jié)合于分子中具有的優(yōu)越性。表5接受多種脂肽結(jié)構(gòu)鼻內(nèi)或皮下接種后抗-LHRH抗體滴度和懷孕狀態(tài)<table>tableseeoriginaldocumentpage136</column></row><table>11采用溶于鹽水的脂肽和溶于弗氏完全佐劑的非脂肽[Th]-[B]和鹽水進(jìn)行首次給藥接種，而采用溶于弗氏不完全完全佐劑的非脂肽[Th]-[B]和鹽水進(jìn)行二次接種。2在進(jìn)行疫苗的二次給藥2周后開(kāi)始育性試驗(yàn)。我們還檢測(cè)了可溶性的[Th]-Lys(Pam2Cys-Ser-Ser)-[B]經(jīng)過(guò)皮下和鼻內(nèi)兩種給藥方式所誘導(dǎo)產(chǎn)生直接針對(duì)LHRH的個(gè)別抗體同種型(圖4)。盡管鼻內(nèi)接種誘導(dǎo)的總Ig量少于皮下接種，鼻內(nèi)接種表現(xiàn)出比皮下接種可誘導(dǎo)IgG3，IgG2b和可能的IgM的更高水平。樹(shù)突細(xì)胞與多肽和脂肽的接觸可誘導(dǎo)不同水平MHCII類分子的細(xì)胞表面原始CD4+T細(xì)胞在次級(jí)淋巴器官的成熟，發(fā)生在抗原與成熟的樹(shù)突細(xì)胞接觸之前。這樣的成熟特征表現(xiàn)為通過(guò)正調(diào)節(jié)MHC產(chǎn)物和共剌激樹(shù)突細(xì)胞表面的分子。于是我們通過(guò)檢測(cè)不同多肽與脂肽激活樹(shù)突細(xì)胞能力的區(qū)別，來(lái)解釋這些候選疫苗的不同免疫原性質(zhì)。采用一種未成熟的樹(shù)突細(xì)胞，Dl細(xì)胞，與多肽接觸，并對(duì)MHCII類分子的表面表達(dá)進(jìn)行染色，然后進(jìn)行流式細(xì)胞分析，該實(shí)驗(yàn)的結(jié)果證明在導(dǎo)致樹(shù)突細(xì)胞的成熟過(guò)程中，[Th]-Lys(Pam2Cys-Ser-Ser)-[B〗最有效果，而Pam2Cys-[ThHB的效果最差(圖5)。[Th]-Lys(Parri2Cys-Ser-Ser)-[B]正調(diào)節(jié)II類表達(dá)的能力接近于細(xì)菌脂多糖(LPS)，而Pam2Cys-Ser-Ser[Th]-[B]和[Th]-Lys(Pam2Cys)-[B]的激活能力則居中。在培養(yǎng)過(guò)程中，非脂肽誘導(dǎo)D1細(xì)胞的成熟并不高于26%的自發(fā)成熟比例。脂肽誘導(dǎo)Dl細(xì)胞的成熟是濃度依賴的(數(shù)據(jù)未顯示)。這些脂肽誘導(dǎo)D1細(xì)胞的成熟能力直接反應(yīng)了他們誘導(dǎo)抗體的的能力，為免疫原性的區(qū)別提供了一種可能的機(jī)制。對(duì)于LHRHC末端五肽的抗體應(yīng)答如圖6所示，脂化的[Th]-Lys(Pam2Cys)-[B]可引起大約相同的抗體應(yīng)答，其中[Th]由來(lái)源于流感病毒紅細(xì)胞凝集素輕鏈的CD4+T細(xì)胞表位(SEQIDNO:l)組成，間由位于脂質(zhì)部分與多肽部分之間，含有或不含間隔絲氨酸(Ser-Ser)的LHRH1-10(SEQIDNO:2)或LHRH6-10(即LHRHC末端的5個(gè)殘基；SEQIDNO:4)組成。這些數(shù)據(jù)證明了在做為免疫抗原時(shí)，脂肽的有用性并不不局限于任何具體的氨基酸序列這一假設(shè)。在膺欣祭椅^餘:r/^"i2c^之//有屑游應(yīng)質(zhì)如圖7所示，用20nmole多肽免疫原對(duì)分組的BALB/c小鼠(6-8周齡)進(jìn)行皮下初次和二次接種免疫，該多肽免疫原由于具有SEQIDNO:9氨基酸序列結(jié)合的脂質(zhì)部分Pam2Cys，Ste2Cys，Lau2Cys，或Oct2Cys(即與具有SEQIDNO:24的CDV-F輔助T細(xì)胞表位結(jié)合的在兩個(gè)表位之間具有內(nèi)部賴氨酸殘基具有SEQIDNO:3的LHRH2-10)。脂肽的結(jié)構(gòu)可見(jiàn)于圖7。所有多肽都溶于鹽水進(jìn)行給藥。非脂肽溶于弗氏完全佐劑進(jìn)行給藥作為對(duì)照。從初次免疫4周后和二次免疫2周后的血液中提取血清。圖8中的數(shù)據(jù)顯示出當(dāng)在脂肽結(jié)構(gòu)中采用Pam2Cys替換其他脂質(zhì)部分可以獲得強(qiáng)烈地初次和二次抗體應(yīng)答。聯(lián)不鵬募基,腐基舒A微^艦儒應(yīng)如圖7所示，用20nmole多肽免疫原對(duì)分組的BALB/c小鼠(6-8周齡)進(jìn)行皮下免疫。該多肽免疫原由于具有SEQIDNO:9氨基酸序列結(jié)合的脂質(zhì)部分Pam2Cys，和用含有絲氨酸同型二聚體，精氨酸同型二聚體或6-氨基己酸等將其分隔的氨基酸間隔。多肽結(jié)構(gòu)可見(jiàn)圖7。所有脂肽都溶于鹽水進(jìn)行給藥，未脂化肽溶于弗氏完全佐劑施用作為對(duì)照。從初次免疫4周后和二次免疫2周后的血液中提取血清。圖9中的數(shù)據(jù)顯示出當(dāng)在脂肽結(jié)構(gòu)中Pam2Cys部分被一系列不同氨基酸間隔與多肽部分分隔時(shí)可以獲得強(qiáng)烈地初次和二次抗體應(yīng)答。微救藉凝厥舒薪勵(lì)r鄉(xiāng)表泣力辦教麟麟基為了確定與脂質(zhì)部分結(jié)合的內(nèi)部賴氨酸殘基位置的嚴(yán)謹(jǐn)性，我們也對(duì)脂質(zhì)部分與輔助t細(xì)胞表位內(nèi)的內(nèi)部賴氨酸殘基結(jié)合脂肽結(jié)構(gòu)的免疫原性進(jìn)行了研究。采用20nmole多肽免疫原對(duì)分組的BALB/c小鼠(0-4周齡)進(jìn)行皮下免疫，其中的免疫原包含共價(jià)附著于位于輔助T細(xì)胞表位和B細(xì)胞表位之間的如SEQIDNO:9所示的氨基酸序列或共價(jià)附著于輔助T細(xì)胞表位內(nèi)Lys-14位置處的如SEQIDNO.'103所示的氨基酸序列的Pam2Cys脂質(zhì)部分。多肽結(jié)構(gòu)可見(jiàn)于圖7和10。所有脂肽都溶于鹽水施用，未脂化肽溶于弗氏完全佐劑施用作為對(duì)照。從初次免疫4周后和二次免疫2周后的血液中提取血清。圖11中的數(shù)據(jù)顯示出脂質(zhì)部分結(jié)合于任一位置的脂肽都可以獲得強(qiáng)烈的抗體應(yīng)答，由此說(shuō)明，內(nèi)部賴氨酸以及脂質(zhì)部分嚴(yán)謹(jǐn)?shù)奈恢脤?duì)于免疫原性來(lái)說(shuō)是無(wú)關(guān)緊要的。討論在本研究中，我們描述了一系列具有CD4+T細(xì)胞表位的脂肽免疫原，以及含有一個(gè)或多個(gè)B細(xì)胞表位和Pam3Cys或Pam2Cys的LHRH多肽本身。在解除了不需要將脂放置于中央位置的嚴(yán)謹(jǐn)要求后，我們發(fā)現(xiàn)將脂放置于多肽免疫原大約中部的T細(xì)胞表位于LHRH之間，而非通常的N末端位置所得的疫苗具有提高的溶解性，采用這樣的支鏈結(jié)構(gòu)，可以輕松的獲得接種所需要的澄清鹽溶液。相比較而言，脂與N末端結(jié)合的免疫原具有較低的溶解性，在鹽溶液中呈乳白色。對(duì)抗體應(yīng)答和后續(xù)育性試驗(yàn)的研究說(shuō)明，水溶性的脂肽可在初次接種4周后誘導(dǎo)出更高的抗體滴度，同樣也比脂結(jié)合于N末端溶解性較差的脂肽更有效的防止懷孕。與部分溶解或不容的材料相比，水溶性的自我佐劑疫苗在制造過(guò)程的簡(jiǎn)化和劑量的正確度量方面等具有明顯的優(yōu)勢(shì)。對(duì)脂質(zhì)部分結(jié)合位置嚴(yán)謹(jǐn)要求的研究發(fā)現(xiàn)一些機(jī)動(dòng)性也是可能的，因?yàn)橛靡恍┪挥谳o助T細(xì)胞表位內(nèi)部而不是位于輔助T細(xì)胞表位和B細(xì)胞表位的脂對(duì)動(dòng)物進(jìn)行免疫也可以觀察到抗體的應(yīng)答。對(duì)不同脂肽劑量效果的研究說(shuō)明，含有Pam2Cys的脂肽比含有Pam3CyS的脂肽更適于作為免疫原。然而其他脂肽也可以產(chǎn)生強(qiáng)烈的抗體應(yīng)答，比如含有Ste2Cys的脂肽，含有Lau2Cys的脂肽和含有Oct2Cys的脂肽。在本研究中，我們還發(fā)現(xiàn)，在脂質(zhì)部分和肽鏈中插入兩個(gè)絲氨酸殘基或兩個(gè)精氨酸殘基可以提高含有Pam2Cys免疫原的力量。當(dāng)脂與N末端相連時(shí)，這兩個(gè)絲氨酸殘基有可能作為脂和多肽序列的間隔物，也可能作為輔助T細(xì)胞表位的延伸，從而改變其免疫學(xué)活性。在那些脂與分子中部賴氨酸殘基e-氨基結(jié)合的情況中，兩個(gè)絲氨酸殘基或兩個(gè)精氨酸殘基就是一個(gè)間隔物，因?yàn)樽鳛槎栊蚤g隔物，6-氨基己酸液具有相似的結(jié)果。我們還發(fā)現(xiàn)多肽結(jié)構(gòu)的免疫原性并不依賴于所用輔助T細(xì)胞表位或B細(xì)胞表位中具體的氨基酸序列，說(shuō)明本方法在多種不同動(dòng)物宿主體內(nèi)生產(chǎn)對(duì)于不同抗原性B細(xì)胞表位廣譜脂肽的通用性。眾所周知巨噬細(xì)胞是由微生物產(chǎn)物刺激產(chǎn)生并與細(xì)胞表面受體結(jié)合的；這種結(jié)合的信號(hào)通過(guò)Toll-like受體進(jìn)行傳遞，最終導(dǎo)致pro-inflammatorycytokines禾口chemokines的產(chǎn)生。這些受體也存在于樹(shù)突細(xì)胞群體中，一旦發(fā)生結(jié)合，這些受體也會(huì)為細(xì)胞成熟與遷移以及需要有效抗原呈遞分子的生產(chǎn)傳遞信號(hào)。本研究中使用的多種合成脂肽疫苗都可以用于誘導(dǎo)評(píng)估樹(shù)突細(xì)胞成熟程度、存在于未成熟樹(shù)突細(xì)胞表面，MHCII類分子的正調(diào)節(jié)。相對(duì)而言，非脂肽結(jié)構(gòu)就不能導(dǎo)致樹(shù)突細(xì)胞的成熟，說(shuō)明脂質(zhì)部分是負(fù)責(zé)這一效應(yīng)的。T脂肽誘導(dǎo)樹(shù)突細(xì)胞成熟的層次，也通過(guò)包含疫苗的結(jié)合以及誘導(dǎo)樹(shù)突細(xì)胞成熟已形成更佳免疫應(yīng)答能力的多肽結(jié)構(gòu)來(lái)展示了免疫原性的層次，有可能通過(guò)被告知的成熟和向排泄淋巴結(jié)遷移的樹(shù)突細(xì)胞的充填來(lái)提高CD4+T細(xì)胞成熟的效率。脂肽可以在缺乏外源佐劑的條件下引發(fā)免疫應(yīng)答，既可以通過(guò)非給藥途徑進(jìn)行使用。于是，我們對(duì)含有Pam2Cy的多肽進(jìn)行鼻內(nèi)接種以研究隨后的抗體應(yīng)答。所得結(jié)果說(shuō)明采用[Th]-Lys(Pam2Cys-Ser-Ser)-[B]或Pam2Cys-Ser-Ser-[Th]-[B]進(jìn)行鼻內(nèi)接種誘導(dǎo)的系統(tǒng)性抗-LHRH抗體滴度低于采用皮下接種方法的滴度，并且產(chǎn)生的免疫球蛋白的同種型也不一樣。相對(duì)于皮下免疫，可溶性脂肽[Th]-Lys(Pam2Cys-Ser-Ser)-[B]的鼻內(nèi)接種可誘導(dǎo)更高水平的IgG2b禾卩IgG3，但更低水平的的IgGl和IgG2a。這樣的結(jié)果說(shuō)明了兩種免疫方法可能誘導(dǎo)了不同的T細(xì)胞亞族來(lái)幫助產(chǎn)生抗體，部分可能是因?yàn)榕c不同類群樹(shù)突細(xì)胞在不同的位置發(fā)生了結(jié)合。也可能反應(yīng)了樹(shù)突細(xì)胞對(duì)異常幾何構(gòu)象分子的偏好性。相對(duì)于不溶性的Pam2Cys-Ser-Ser-[Th]-[B]，對(duì)水溶性[Th]-Lys(Pam2Cys-Ser-Ser)-[B]肽結(jié)構(gòu)的鼻內(nèi)接種，可在首次疫苗給藥后4周誘導(dǎo)顯著增高的抗體滴度。育性試驗(yàn)證明，僅有[Th]-Lys(Pam2Cys-Ser-Ser)-[B]鼻內(nèi)免疫的小鼠才能完全沒(méi)有進(jìn)行繁殖。盡管在進(jìn)行二次給藥的兩組小鼠中都有相似的抗體滴度，只有[Th]-Lys(Pam2Cys-Ser-Ser)-[B]在能在初次應(yīng)答中誘導(dǎo)產(chǎn)生高滴度的抗體。由此可見(jiàn)，可能一種免疫避孕的疫苗是有效的，高滴度抗體的出現(xiàn)時(shí)間是決定其功效的重要依據(jù)?？偟膩?lái)說(shuō)，對(duì)抗體滴度的檢測(cè)和育性試驗(yàn)的結(jié)果都說(shuō)明，在在大約整個(gè)合成多肽疫苗中部，B細(xì)胞表位和輔助T細(xì)胞表位之間放置的Pam2CyS，可以提高疫苗的溶解性和免疫原性。這種提高的免疫原性可以通過(guò)在支鏈多肽疫苗的脂和肽序列之間引入兩個(gè)絲氨酸殘基得到再次增強(qiáng)。與脂、自我佐劑部分在基于肽疫苗不同位置的結(jié)合可以深入地改變疫苗的物理，免疫原性和生物學(xué)性質(zhì)，從而為成功的疫苗設(shè)計(jì)提供不同的策略。實(shí)施例3含有來(lái)自于A型鏈球菌M蛋白B細(xì)胞表位脂肽的研究多脂的效用為了檢測(cè)脂肽的免疫原性是否依賴于和多肽結(jié)合的脂質(zhì)分子數(shù)，以及有效脂肽是否可以生成針對(duì)不同抗原性B細(xì)胞表位的多肽，我們置備了含有CDV-FP25輔助T細(xì)胞表位和A型鏈球菌B細(xì)胞表位J14(即具有SEQIDNO:105的氨基酸序列)多肽部分和一個(gè)或兩個(gè)脂質(zhì)部分的脂肽。脂氨基酸部分Pam2Cys-Ser-Ser被結(jié)合在位于輔助T細(xì)胞表位和B細(xì)胞表位之間的內(nèi)部賴氨酸上，在其中一種結(jié)構(gòu)中，額外的脂氨基酸部分Pam2Cys-Ser-Ser被結(jié)合在位于輔助T細(xì)胞表位的N末端賴氨酸上。用含60ug基于多肽的疫苗，總體積30ulPBS對(duì)4-6周齡(15只/組)的雎性遠(yuǎn)交Quackenbush小鼠進(jìn)行鼻內(nèi)接種?？偣策M(jìn)行三次免疫，每次間隔21天。在最后一次給藥6天后對(duì)糞IgA進(jìn)行檢測(cè)。在最后一次給藥7天后從小鼠的尾靜脈采血以檢測(cè)J14特異的血清IgG。通過(guò)在體外對(duì)MlGAS菌株具有的調(diào)理或殺死情況的間接殺菌試驗(yàn)來(lái)確定免疫小鼠血清的活性。在最后一次給藥8天后收集個(gè)體小鼠的唾液，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)ELISA的方法檢測(cè)平均的J14特異的唾液IgA抗體。在最后一次給藥2周后，用MlGAS菌株對(duì)小鼠進(jìn)行鼻內(nèi)感染，并在其后多個(gè)時(shí)間段對(duì)存活率進(jìn)行計(jì)算。圖12中的數(shù)據(jù)說(shuō)明相對(duì)于非脂肽或PBS而言，用任何一種脂肽進(jìn)行免疫都可以顯著的提升血清IgG滴度(P0.05)，標(biāo)志著脂肽結(jié)構(gòu)并不依賴于對(duì)輔助T細(xì)胞表位或B細(xì)胞表位的選擇，在進(jìn)行鼻內(nèi)免疫之后，含有一個(gè)或多個(gè)脂質(zhì)部分的脂肽都可以提升血清IgG水平。圖13屮的數(shù)據(jù)也說(shuō)明，相比較于從接受非脂肽或PBS免疫對(duì)照小鼠中采集的血清，從接受含有一個(gè)或兩個(gè)脂質(zhì)部分具有J14的脂肽免疫小鼠中采集的血清可以更顯著的殺死GAS的能力(P0.05)。.圖14中的數(shù)據(jù)說(shuō)明，相比較于從接受非脂肽或PBS免疫的對(duì)照小鼠，接受含有一個(gè)或兩個(gè)脂質(zhì)部分具有J14的脂肽免疫的小鼠具有更高的唾液IgA滴度(P〈0.05)。而通過(guò)鼻內(nèi)免疫，單脂多肽遠(yuǎn)遠(yuǎn)比二脂多肽可誘導(dǎo)唾液種IgA的高水平。有意思的是，相比較于PBS或非脂肽，只有采用單脂化含有J14多肽接種的小鼠才能在最后一次免疫6天后具有顯著的糞IgA滴度(圖15)，其中的脂質(zhì)部分位于輔助T細(xì)胞表位和B細(xì)胞表位之間(即[Th]-Lys(Pam2Cys-Ser-Ser)-[J14])。這可能是因?yàn)闀r(shí)間的順序，因?yàn)榧SIgA是在唾液IgA或血清IgG之前進(jìn)行測(cè)定的，也可能是鼻內(nèi)免疫的順序關(guān)系，目前也還有其他的解釋。圖16的數(shù)據(jù)說(shuō)明，相比較于二脂化肽或非脂肽，只有采用單脂化含有J14多肽接種的小鼠才能在接受后續(xù)的鼻內(nèi)GAS攻擊后具有最高的存活率，其中的脂質(zhì)部分位于輔助T細(xì)胞表位和B細(xì)胞表位之間(&P[Th]-Lys(Pam2Cys-Ser-Ser)-[J14])。然而，相對(duì)于單獨(dú)的J14多肽或PBS，二脂化肽和非脂肽也都可以產(chǎn)生一些保護(hù)性免疫。總的來(lái)說(shuō)，實(shí)施例2和3中的數(shù)據(jù)說(shuō)明，本發(fā)明的脂肽配方可以廣泛的應(yīng)用于誘導(dǎo)動(dòng)物體內(nèi)，尤其是鼠類模型中，一系列輔助T細(xì)胞表位和B細(xì)胞表位強(qiáng)烈的抗體應(yīng)答。而且，由于可以得到強(qiáng)烈的IgG和IgA的應(yīng)答，該脂肽配方尤其適用于鼻內(nèi)給藥。然而我們的數(shù)據(jù)表明，至少對(duì)J14免疫原來(lái)說(shuō)，單脂多肽比含有多脂質(zhì)部分的多肽更適于作為黏膜佐劑。實(shí)施例4對(duì)含有來(lái)自胃泌激素的B細(xì)胞表位的脂肽的研究測(cè)定基于胃泌激素的脂肽免疫原的免疫原性。用20nmoles多肽或脂肽免疫原皮下接種雌性BALB/c鼠的尾巴基部。所有的脂肽都在PBS中施用，非脂化多肽在CFA中施用。使用CFA的鹽乳化被用作陰性對(duì)照。所用多肽是胃泌激素-17(序列EGPWLEEEEEAYGWMDF;SEQIDNO:113);[P25H^-五肽胃泌素(SEQIDNO:110)，其中五肽胃泌素是胃泌激素-17的C末端序列(也就是SEQIDNO:102);和[P25]-i^(Pam2Cys-Ser-Ser)-五肽胃泌素。免疫4周后，從動(dòng)物獲得血清并同時(shí)接受第二次相似劑量的抗原。第二次抗原劑量后經(jīng)過(guò)2周，鼠被第二次取血；能與多肽胃泌激素-17序列反應(yīng)的抗體在ELISA中測(cè)定。如圖17中所示，用CFA中的胃泌激素-17接種的鼠包含抗-胃泌激素-17抗體的水平，相當(dāng)于存在于CFA中的鹽的陰性對(duì)照。因?yàn)榉侵嚯腫P25]-丄"-五肽胃泌素免疫引起很低水平的抗-胃泌激素-17抗體，鼠用顯示高抗體滴度的脂肽[P25]-丄^(Pam2Cys-Ser-Ser)-五肽胃泌素免疫，這與用CFA中的多肽免疫后引起的結(jié)果相類似。這些數(shù)據(jù)再次說(shuō)明本發(fā)明的脂肽配方可廣泛適用于誘導(dǎo)動(dòng)物體內(nèi)強(qiáng)烈的抗體反應(yīng)，同時(shí)具有多種的輔助T細(xì)胞表位和B細(xì)胞表位。序列表<110>昆十蘭醫(yī)學(xué)研究所理事會(huì)、120>A有輔助T細(xì)胞和B細(xì)胞表位的新的免疫原性脂肽.;H94946/MRO<150>US60/402838<151>2002-12-08<160>113<170>Patentlnversion3.1<210>1<211>16<212>PRT<213>synthetic<400>1GlyAlaLeuAsnAsnArgPheGinlieLysGlyValGluLeuLysSer151015<210>2<211>10<212>PRT<213>synthetic<400>2GluHisTrpSerTyrGlyLeuArgProGly1510<210>3<211>9<212>PRT<2丄3>synthetic<400>3HisTrpSerTyrGlyLeuArgProGly<210>4<211>5<212>PRT<213>synthetic<400>4GlyLeuArgProGly<210>5<211>26<212>PRT<213>synthetic<■>5GlyAlaLeuAsnAsnArgPheGinlieLysGlyValGluLeuLysSer151015GluHisTrpSerTyrGlyLeuArgProGly2025<210>6<211>26<212〉PRT<213>synthetic<權(quán)>6GluHisTrpSerTyrGlyLeuArgProGlyGlyAlaLeuAsnAsnArg151015PheGinlieLysG丄yValG丄uLeuLysSer2025<210>7<211>27<212>PRT<213>synthetic<400>7GlyAlaLeuAsnAsnArgPheGinlieLysGlyValGluLeuLysSer151015LysGluHisTrpSerTyrGlyLeuArgProGly2025<210>8<211>27<212>PRT<213>synthetic<糊>8GluHisTrpSerTyrGlyLeuArgProGlyLysGlyAlaLeuAsnAsn151015ArgPheGinlieLysGlyValGluLeuLysSer2025<210>9<211>27<212>PRT<213>synthetic<400>9LysLeulieProAsnAlaSerLeulieGluAsnCysThrLysAlaGlu151015Leu!LysHisTrpSerTyrGlyLeuArgProGly20_—2.5<210>10<211>28<212>PRT<213>synthetic<400>10AlaGluLeuGlyGluTyrGluLysLeuLeuAsnSerValLeuGluPro151015lieLysGluHisTrpSerTyrGlyLeuArgProGly2025<210>11<211>28<212>PRT<213>synthetic<400>11ThrAlaAlaGinlieThrAlaGlylieAlaLeuHisGinSerAsnLeu151015AsnLysGluHisTrpSerTyrGlyLeuArgProGly2025<210>12<211>28<212>PRT<213>synthetic<400>12ProArgTyrlieAlaThrAsnGlyTyrLeulieSerAsnPheAspGlu151015SerLysGluHisTrpSerTyrGlyLeuArgProGly2025<210>13<211>23<212>PRT<213>synthetic<400>13LysLeulieProAsnAlaSerLeulieGluAsnCysThrLysAlaGlu151015LeuLysGlyLeuArgProGly20<210>14<211>23<212>PRT<213>synthetic<400>14AlaGluLeuGlyGluTyrGluLysLeuLeuAsnSerValLeuGluPro151015lieLysGlyLeuArgProGly20<210>15<211>23<212>PRT<213>synthetic<權(quán)>15ThrAlaAlaGin工leThrAlaGlylieAlaLeuHisGinSerAsnLeu151015Asn!LysGlyLeuArqProGly20<210>16<211>23<212>PRT<213>synthetic<400>16ProArgTyrlieAlaThrAsnGlyTyrLeulieSerAsnPheAspGlu151015SerLysGlyLeuArgP:roGly20<210>17<211>5<212>PRT<213〉synthetic<400>17Ser!LysLysLysLys15<210>18<211>15<212>PRT<213>synthetic<御>18AlaLeuAsnAsnArgPheGin工leLysGlyValGluLeuLysSer151015<210>19、11>15<2丄2>PRT<213〉synthetic<400>19LeuSerGlulieLysGlyVallieValHisArgLeuGluGlyVal151015<210>20<211>17<212>PRT<213>synthetic<400>20ThrAlaAlaGin工leThrAlaGlylieAlaLeuHisGinSerAsnLeu151015Asn<210〉<211><212><213>2117PRTsynthetic<400〉21lieGlyThrAspAsnValHisTyrLyslieMetThrArgProSerHis151015Gin<210>22<211>17<212>PRT.、'213>synthetic:400>22TvrLyslieMetThrArgProSerHisGinTyrLeuVallieLysLeu151015lie<210>23<211>17<212>PRT<213>synthetic<400>23SerHisGinTyrLeuVallieLys15LeulieProAsnAlaSerLeulie1015Glu<210>24<211〉17<212>PRT<213〉synthetic<400>24LvsLeulieProAsnAlaSerLeulieGluAsnCysThrLysAlaGlu151015!Leu<210>25<211>17<212>PRT<213〉synthetic■、400>LeulieGluAsnCysThrLysAlaGluLeuGlyGluTyrGluLeun51015Leu<210>26<211>17<212>PRT<213〉synthetic<400>26AlaGluLeuGlyGluTyrGluLysLeuLeuAsnSerValLeuGluPro，r1015lie<210>27<211>17<212>PRT<213>synthetic<400>27LysLeuLeuAsnSerValLeuGluProlieAsnGinAlaLeuThrLeu/51015Met<210>28<211>17<212>PRT-..213>synthetic-:.400>2SGluProlieAsnGinAlaLeuThrLeuMetThrLysAsnValLysPro151015!Leu<210>29<211>17<212>PRT<213>synthetic<400>29ThrLeuMetThrLysAsnValLysProLeuGinSerLeuGlySerGly151015Arg<210>30<211>17<212>PRT<213>synthetic<400>30LysProLeuGinSerLeuGlySerGlyArgArgGinArgArgPheAla151015Gly<210>31<211>17<212>PRT<213>synthetic<權(quán)>31SerGlyArgArgGlnArgArgPheAlaGlyVal\7alLeuAlaGlyVal151015Ala<210>32<211>17<212>PRT<213>synthetic<4O0>32PheAlaGlyValValLeuAlaGlyValAlaLeuGlyValAlaThrAla151015Ala<210>33<211>17<212>PRT<213>synthetic<4O0>33GlyValAlaLeuGlyValAlaThrAlaAlaGinlieThrAlaGlylie151015Ala<210>34<211>17<212>PRT<213>synthetic<400>34GlylieAlaLeuHisGinSerAsnLeuAsnAlaGinAlalieGinSer151015Leu<210>35<211>17<212>PRT<213>synthetic<400>35AsnLeuAsnAlaGinAlalieGinSerLeuArgThrSerLeuGluGin151015Ser<210>36<211>17<212>PRT<213>synthetic<400>36GinSerLeuArgThrSer!LeuGluGinSerAsnLysAlalieGluGlu151015Ile<210>37<211>17<212>PRT<213>synthetic-"00>37GluGlnSerAsnLysAlalieGluGlulieArgGluAlaThrGinGlu151015Thr<210>38<211〉17<212>PRT<213>synthetic<400>38SerSerLysThrGinThrHisThrGinGinAspArgProProGinPro151015<210>39<211>17<212>PRT<213>synthetic<權(quán)>39GinProSerThrGluLeuGluGluThrArgThrSerArgAlaArgHis151015Se:c<210〉40<211>17<212>PRT、'213>syntheticArgHisSerThrThrSerAlaGinArgSerThrHisTyrAspProArg1015Thr、'210><211><212><213>4117PRTsynthetic<400>41ProArgThrSerAspArgProValSerTyrThrMetAsnArgThrArg151015Ser<210><211><212><213>4217PRTsynthetic<400>42ThrArgSerArgLysGinThrSerHisArgLeuLysAsnlieProVal151015His<210>43<211>17<212>PRT、:213>synthetic"00>43ThrGluLeuLeuSerliePheGlyProSerLeuArgAspProlieSer151015Ala<210>44<211>17<212〉PRT<213>synthetic<400>44ProArgTyrlieAlaThrAsnGlyTyrLeulieSerAsnPheAspGlu151015Ser<210>45<211>17<212>PRT<213〉synthetic<權(quán)>45CyslieArgGlyAspThrSerSerCysAlaArgThrLeuValSerGly151015Thr<formula>formulaseeoriginaldocumentpage161</formula><210>49<211>24<212>PRT〈丄3>synthetic<400>49SerThrAlaProProAlaHisGlyValThrSerAlaProAspThrArg151015MaProGlySerThrAlaProPro20<210>50<211>19<212>PRT<213>synthetic<秦>50GlyValThrSerAlaProAspThrArgProAlaProGlySerThrAla151015SerSerLeu<210>51<211>18<212>PRT<213>synthetic<400>51GlyValThrSerAlaProAspThrArgProAlaProGlySerThrAla151015SerLeu<210>52<211>27<212>PRT<213>synthetic'-:徹>52T!uAlaProProAlaHisGlyValThrSerAlaProAspThrArgPro151015AlaProGlySerThrAlaProProLysLysGly2025<210>53<211>26<212>PRT<213>synthetic<400>53SerThrAlaProProAlaHisGlyValThrSerAlaProAspThrArg151015ProAlaProGlySerThrAlaProProLys2025<210>54<211>4<212>PRT<213>synthetic<400>54GlyValAlaGlu<210>55<formula>formulaseeoriginaldocumentpage164</formula>SerGlu<210>59<211>18<212>PRT<213〉synthetic<400>59AsnProLeuGluThrSerGlyAlaSerThrValGlyPheArgGluArg151015Thr!Leu<210>60<211>18<212>PRT<213〉synthetic<400>60lieArgGluThrArgLysArgGin15LysMetValAspAspAlaValAsn1015GluTyr<210>61<211>19<212>PRT<213>synthetic<400>61—AlaLysAlaProValValLysGluGlyProTyrGluGlyProValLys151015LysProVal<210>62,211>19、'212>PRT<213>synthetic<400>62AlaGlyProLeuGluArgGinLysProLeuLysValLysAlaLysMa151015ProValVal<210>63<211>19<212>PRT<213>synthetic<400>63LysValArgAlaLysLeuProGinGinGluGlyProTyrAlaGlyPro151015LeuGluArg<210>64<211>19<212>PRT<213>synthetic<400〉64GlyProTyrThrGlyProLeuGluArgGinArgProLeuLysValArg151015Ala!LysLeu<210>65,211>18<212>PRT<213>synthetic<400>65ValGlyArgLeuliePheSerGlyGluAlaLeuThrTyrLysAsplie151015ValVal<210>66<211>19<212>PRT<213>syntheticThrLysHisPheArgAspThrAlaArgMetLysLysGlyThrProVal151015ValGlyVal<210>67<211>19<212>PRT<213>synthetic<400>67SerGlyAlaProProThrAspLeuGinLysMetValMetGlyAsnThr151015LysProVal<210>68<2丄1>35<212>PRT〈213>synthetic<400>68AsnLysTyrSerAlaSerGlySerGlyValArgGlyAspPheGlySer151015LeuAlaProArgValAlaArgGinLeuProMaSerPheAsnTyrGly202530AlalieLys35<210>69<211>20<212>PRT<213>synthetic<400>69LeuTyrThrLysValValHisTyrArgLysTrplieLysAspThrlie151015ValAlaAsnPro20<210〉70<211>19<212>PRT<213>synthetic<400>70AlaValLysValMetAspLeuProGinGluProAlaLeuGlyThrThr151015CysTyi:Ala<210>71<211>20<212>PRT<213>synthetic<400>71lieValGlyGlyTrpGluCysGluLysHisSerGinProTrpGinVal151015LeuValAlaSer20<210>72<211>14<212>PRT<213>synthetic<400>72CysAlaGinValHisProGinLysValThrLysPheMetLeu1510<210>73<211>21<212>PRT<213>synthetic<400>73TyrLeuMetLeuLeuArgLeuSerGluProAlaGluLeuThrAspAsp151015AlaValLysValMet20、'210>74<:ill>21<2丄2>fK'丄'-213>synthetic<働>"74LeuLeuLysAsnArgPheLeuArgProGlyAspAspSerSerHisAsp151015LeuMetLeuLeuTyr20<210>75<211>21<2丄2>PRT<213>synthetic<秦>75lieLeuLeuGlyArgHisSerLeuPheHisProGluAspThrGlyGin151015ValPheGinValTyr20<210>76<211>37<212>PRT<213>synthetic<400>76ThrCysAspAspProArgPheGinAspSerSerSerSerLysAlaPro151015ProProSerLeuProSerProSerArgLeuProGlyProSerAspThr202530ProlieLeuProGin35<2丄0>7/'、:'丄1;'17〈212>PRT<213〉synthetic<權(quán)>77CysGinAspSerLysValThrGlulieProThrLeuProArgAsnAla151015lie<210>78<211>19<212>PRT<213>synthetic<400>78AsnLysGlyAspCysGlyThrProSerHisSerArgArgGinProHis151015ValMetSer<210>79<211>11<212〉PRT<213>synthetic<400>79TrpLeuCysPheProLeuCysLeuAlaLeuPro1510<210>80<211>11<212>PK'r'、213>synthetic<400>80LeuGlyGly!LeuTyrCysGlyProSerSerPhe1510<210>81<211>12<212>PRT<213>synthetic<400>81GlySerlieThrArgAspSerliePheArgLeuArg1510<210>82<211>12<212>PRT<213>synthetic<400>82SerAlaLeuProValAsn工leGinValPheThrLeu1510<210>83<211>12<212>PRT<213>synthetic<■>83GluLeuGinlieAlaLysAspGluArgTyrGlySer1510<二'丄0>8412<212>PRT<213>synthetic<400>84ValLysLeuLeuArgGluProlieTyrValGluVal1510(210>85<211>12<212>PRT<213>synthetic<400>85ProProAlaGinTyrSerTrpLeulieAspGlyAsn1510<210>86<211>20<212>PRT<213>synthetic<400>86AlaAsnAlaSerGinThrAspAsnGlyValAsnArgSerGlySerGlu151015AspProThrVal20<210>87<211>20<212>PRT':2丄3>synthetic-:-400>87ProGluThrLysHisProLysLysGlyValGluLysTyrGlyProGlu151015AlaSerAlaPhe20<210>88<211>15<212>PRT<213>synthetic<400>88LeuValLeuLeuAspTyrGinGlyMetLeuProValCysProLeu151015<210>89<211>15<212>PRT<213>synthetic<400>89ThrLysProSerAspGlyAsnCysThrCys工leProlieProSer151015<210>90<211>13<212〉PRT<213>synthetic<400〉90MetGinTrpAsnSerThrThrPheHisGinAlaLeuLeu1510<210>91、。11>15<212〉PRT<213>synthetic<400〉91AlaAlaPheGluAspLeuArgVal15SerSerPhelieArgGlyThr1015<210>92<211>14<212>PRT<213>synthetic<權(quán)>92SerAsnGluAsnMetGluThrMetAspSerSerThrLeuGlu1510<210>93<211>19<212>PRT<213>synthetic<權(quán)>93HisProLeulieLeuAspThrCysThrlieGluGlyLeulieTyrGly151015AsnProSer<210>94<211>10<212>PRT'<213>synthetic<400>94TyrGinArglieGinliePheProAspThr1510<210>95<211>18<212>PRT<213>synthetic<徹>95lieGinliePheProAspThrlieTrpAsnValSerTyrSerGlyThr151015SerLys<210>96<211>38<212>PRT<213>synthetic<權(quán)>96CysLysTyrSerAlaSerGlySerGlyValArgGlyAspPheGlySer151015LeuAlaProArgValAlaArgCysLeuProAlaSerPheAsnThrGly202530AlalieLysAsnLysTyr35<210〉97<211>13<212>PRT-:213>synthetic<400>97GluGlnGlnTrpAsnPheAlaGlylieGluAlaAlaAla1510<210>98《211>23<212>PRT<213>synthetic<400>98AlaAlaAlaTrpGlyGlySerGlySerGluAlaTyrGlnGlyValGln151015GlnLysTrpAspAlaThrAla20<210>99<211〉29<212>PRT<213>synthetic<400>99GlyGlyProThrArgThrlieGlyGlySerGlnAlaGlnThrAlaSer151015GlyLeuValSerMetPheSerValGlyProSerGlnLys2025<210>100<211>12<212>PRT<213>synthetic<徹>100LysPheGinAspAlaTyrAsnAlaAlaGlyGlyHis1510<210>101<211>29<212>PRT<213>synthetic<>101LysGinAlaGluAspLysValLysAlaSerArgGluAlaLysLysGin151015ValGluLysAlaLeuGluGinLeuGluAspLysValLys2025<210>102<211>5<212>PRT<213>synthetic<徹>102GlyTrpMetAspPhe15<210>103<211>26<212>面<213〉synthetic<權(quán)>103LysLeulieProAsnAlaSerLeulieGluAsnCysThrLysAlaGlu151015!LeuHisTrpSerTyrGlyLeuArgProGly2025<210>.:2丄1><212><213>10422PRTsynthetic<400>104LyslieulieProAsnAlaSer!LeulieGluAsnCysThrLysAlaGlu5LeuGlyLeuArgProGly201015<210><211><212><213>10546PRTsynthetic<400>105LysLeulieProAsnAlaSerLeulieGluAsnCysThrLysAlaGlu151015LeuLysGinAlaGluAspLysValLysAlaSerArgGluAlaLysLys202530GinValGluLysAlaLeuGluGinLeuGluAspLysValLys354045<210>106<211>47<212>PRT<213>synthetic<糊>106LysLeulieProAsnAlaSerLeulieGluAsnCysThrLysAlaGlu151015LeuLysLysGinAlaGluAspLysValLysAlaSerArgGluAlaLys202530LysGinValGluLysAlaLeuGluGinLeuGluAspLysValLys354045<210>107<211>45<212>PRT<213>synthetic<400>107GlyAlaLeuAsnAsnArgPheGin工leLysGlyValGluLeuLysSer151015LysGinAlaGluAspLysValLysAlaSerArgGluAlaLysLysGin202530ValGluLysAlaLeuGluGinLeuGluAspLysValLys354045<210><211><212><213>10846PRTsynthetic<400>108GlyAlaLeuAsnAsnArgPheGinlieLysGlyValGluLeuLysSer151015LysLysGinAlaGluAspLysValLysAlaSerArgGluAlaLysLys202530GinValGluLysAlaLeuGluGinLeuGluAspLysValLys354045<210>109<211>22<212>PRT<213>synthetic<400>109LysLeulieProAsnAlaSerLeulieGluAsnCysThrLysAlaGlu151015LeuGlyTrpMetAspPhe20<210>110<211>23<212>PRT<213>synthetic<權(quán)>110LysLeulieProAsnAlaSerLeulieGluAsnCysThrLysAlaGlu151015LeuLysGlyTrpMetAspPhe20<210>111<211>21<212>PRT<213>synthetic<400>111GlyAlaLeuAsnAsnArgPheGinlieLysGlyValGluLeuLysSer151015GlyTrpMetAspPhe20<210>112<211>22<212>PRT<213>synthetic<400>112GlyAlaLeuAsnAsnArgPheGinlieLysGlyValGluLeuLysSer151015LysGlyTrpMetAspPhe20<210>113<211>17<212>PRT<213>synthetic<400>113GluGlyProTrpLeuGluGluGluGluGluAlaTyrGlyTrpMetAsp151015Phe權(quán)利要求1.一種脂肽，其包含輔助T細(xì)胞(Th)表位和B細(xì)胞表位、一或多個(gè)內(nèi)部賴氨酸殘基或內(nèi)部賴氨酸類似物殘基和一或多個(gè)脂質(zhì)部分，其中所述Th表位的氨基酸序列不同于B細(xì)胞表位的氨基酸序列，所述脂質(zhì)部分共價(jià)附著于所述內(nèi)部賴氨酸殘基或內(nèi)部賴氨酸類似物2.權(quán)利要求1的脂肽，其中所述脂質(zhì)部分所附著的所述內(nèi)部賴氨酸殘基位于Th表位和B細(xì)胞表位之間。3.權(quán)利要求1或2的脂肽，其中脂質(zhì)部分所附著的所述內(nèi)部賴氨酸殘基位于Th表位內(nèi)。4.權(quán)利要求1—3任一項(xiàng)的脂肽，其中所述脂質(zhì)部分具有通式(VII)的結(jié)構(gòu)通式(VII)<formula>seeoriginaldocumentpage2</formula>其中X選自由硫、氧、二硫L鍵(-S-S-)，亞甲基(-CH2-)和氨基(-NH-)所組成的組；m是整數(shù)l或2;n是從0到5的整數(shù)；R,選自由氫、羰基(-CO-)和R，-CO-組成的組，其中R，選自由具有7-25個(gè)碳原子的垸基、具有7-25個(gè)碳原子的鏈烯基和具有7-25個(gè)碳原子的炔基組成的組，其中所述烷基、鏈烯基或炔基任選地由羥基、氨基、氧(oxo)、?；颦h(huán)垸基所取代；R2選自由R，-CO畫(huà)O-、R，-O-、R，-O畫(huà)CO畫(huà)、R，-NH國(guó)CO-和R，國(guó)CO曙NH-組成的組，其中R'選自由具有7-25個(gè)碳原子的烷基、具有7-25個(gè)碳原子的鏈烯基和具有7-25個(gè)碳原子的炔基組成的組，其中所述烷基、鏈烯基或炔基任選地由羥基、氨基、氧、?；颦h(huán)烷基所取代；和R3選自由R，-CO-O-、R，-O-、R，-O-CO-、R，-NH-CO-和R，-CO-NH-組成的組，其中R'選自由具有7-25個(gè)碳原子的烷基、具有7-25個(gè)碳原子的鏈烯基和具有7-25個(gè)碳原子的炔基組成的組，其中所述烷基、鏈烯基或炔基任選地由羥基、氨基、氧、?；颦h(huán)烷基所取代；且其中R,、R2和R3各自相同或者不相同。5.權(quán)利要求4的脂肽，其中X是硫，m和n都為l;R,選自氫和R'-CO-，其中R'是具有7-25個(gè)碳原子的烷基；112和113選自由R，-CO-O陽(yáng)、R，-O-、R，-O陽(yáng)CO畫(huà)、R，-NH-CO-和R，-CO-NH國(guó)組成的組，其中R'是具有7-25個(gè)碳原子的垸基。6.權(quán)利要求5的脂肽，其中R'選自由棕櫚酰、肉豆蔻酰、硬脂酰、月桂酰、辛酰、癸酰和膽固醇組成的組。7.權(quán)利要求4-6任一項(xiàng)的脂肽，其中脂質(zhì)包含在選自由PamCys、Pam2Cys、Pam3Cys、Chol2Lys、Ste2Cys、Lau2Cys禾BOct2Cys組成的一組的一種脂氨基酸部分內(nèi)。8.權(quán)利要求7的脂肽，其中所述脂氨基酸部分是Pam2Cys。9.權(quán)利要求1_3任一項(xiàng)的脂肽，其中脂質(zhì)部分具有下述通式<formula>seeoriginaldocumentpage3</formula>其中R4選自如下一組(i)一種由約7至約25個(gè)碳原子組成的oc-?；舅釟埢?ii)一種a-烷基-p-羥基脂肪酸殘基；(iii)一種a-烷基-p-羥基脂肪酸殘基的p-羥基酯；以及(iv)—種脂氨基酸殘基；及R5是氫或一種氨基酸殘基的側(cè)鏈。10.權(quán)利要求l一9任一項(xiàng)的脂肽，其中脂質(zhì)部分通過(guò)一間隔基與肽部分隔開(kāi)。11.權(quán)利要求10的脂肽，其中所述間隔基包括精氨酸、絲氨酸或6-氨基己酸。12.權(quán)利要求10或11的脂肽，其中所述間隔基由絲氨酸同二聚體組成。13.權(quán)利要求1一12任一項(xiàng)的脂肽，其中所述內(nèi)部賴氨酸或內(nèi)部賴氨酸類似物位于具有低免疫原性的合成氨基酸序列內(nèi)。14.權(quán)利要求1一13任一項(xiàng)的脂肽，其中輔助T細(xì)胞表位是流感病毒血凝素的輔助T細(xì)胞表位或者犬瘟熱病毒F蛋白(CDV-F)的輔助T細(xì)胞表位。15.權(quán)利要求14的脂肽，其中流感病毒血凝素的輔助T細(xì)胞表位包含SEQIDNO:1所示的氨基酸序列。16.權(quán)利要求14的脂肽，其中CDV-F蛋白的輔助T細(xì)胞表位包含SEQIDNO:20所示的氨基酸序列。17.—種脂肽，其包含輔助T細(xì)胞(Th)表位和B細(xì)胞表位、一或多個(gè)內(nèi)部賴氨酸殘基或內(nèi)部賴氨酸類似物殘基和一或多個(gè)脂質(zhì)部分，其中所述Th表位的氨基酸序列不同于所述B細(xì)胞表位的氨基酸序列，所述脂質(zhì)部分共價(jià)附著于所述內(nèi)部賴氨酸殘基或內(nèi)部賴氨酸類似物殘基，并且所述脂肽具有通式(VI):<formula>seeoriginaldocumentpage5</formula>其中-一個(gè)表位是輔助T細(xì)胞表位且另一個(gè)是B細(xì)胞表位；A存在或不存在，由長(zhǎng)度約1至約6個(gè)氨基酸的氨基酸間隔基組成；n是值為0、1、2、3或4的整數(shù)；X是選自NH、O和S的末端側(cè)鏈基團(tuán)；Y存在或不存在，由長(zhǎng)度約1至約6個(gè)氨基酸的氨基酸間隔基組成；以及Z是脂質(zhì)部分。18.權(quán)利要求17的脂肽，其中A不存在。19.權(quán)利要求17或18的脂肽，其中Y存在并由絲氨酸同二聚體組成。20.權(quán)利要求17—19任一項(xiàng)的脂肽，其中Z選自PaiiMCys、Pam2Cys、Pam3Cys、Chol2Lys、Ste2Cys、Lau2Cys禾口Oct2Cys。21.—種包含權(quán)利要求1一20任一項(xiàng)的脂肽和一種藥物學(xué)可接受賦形劑或稀釋劑的組合物。全文摘要本發(fā)明提供了含有共線性輔助T細(xì)胞和B細(xì)胞表位的合成免疫原性脂肽分子，其制備和用于產(chǎn)生初次和二次免疫應(yīng)答的方法，及接種受試動(dòng)物以抗特定抗原的方法。更特別地，本發(fā)明提供了高可溶性的脂肽，其中的脂質(zhì)部分被附著于內(nèi)部賴氨酸或賴氨酸類似物的末端側(cè)鏈基團(tuán)上，優(yōu)選附著于內(nèi)部二氨基酸殘基的末端側(cè)鏈基團(tuán)上。優(yōu)選該內(nèi)部賴氨酸或賴氨酸類似物被置于輔助T細(xì)胞表位和B細(xì)胞表位之間或輔助T細(xì)胞表位里。文檔編號(hào)A61P15/18GK101121754SQ20071012871公開(kāi)日2008年2月13日申請(qǐng)日期2003年8月12日優(yōu)先權(quán)日2002年8月12日發(fā)明者戴維·杰克遜,曾偉光申請(qǐng)人:昆士蘭醫(yī)學(xué)研究所理事會(huì)