專利名稱：：具有增強(qiáng)的Th-1模式的C-糖脂的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及新型的合成C-糖脂，其選擇性地誘導(dǎo)以IL-2分泌增強(qiáng)和抗原呈遞細(xì)胞(APC)如樹(shù)狀細(xì)胞活化增強(qiáng)為特征的Thl-型免疫應(yīng)答，并且可直接和作為助劑用于治療感染，癌，細(xì)胞增殖病癥，自身免疫疾病。
背景技術(shù)：
：Thl型和Th2型免疫應(yīng)答最初被定義為是由分泌兩組不同的細(xì)胞因子的兩種不同的CD4+T細(xì)胞(輔助T細(xì)胞-Th)亞群介導(dǎo)的免疫應(yīng)答。X寸于新近的綜述，請(qǐng)參見(jiàn)Berkers禾卩Ovaa，TrendsPharmacol.Sci.，2005，26(5):252-257以及其中所引述的文獻(xiàn)。Thl細(xì)胞分泌Thl型細(xì)胞因子，包括干擾素-Y(IFN-力和白細(xì)胞介素12(IL-12)。Thl型細(xì)胞因子的主要功能是支持細(xì)胞介導(dǎo)的免疫，通過(guò)刺激噬菌細(xì)胞介導(dǎo)的防御并提高CD8+T細(xì)胞(細(xì)胞毒性T細(xì)胞)和自然殺傷(NK)細(xì)胞的活性，導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞、病毒和其它胞內(nèi)病原體的消除。另外，Thl細(xì)胞因子抑制B細(xì)胞的免疫球蛋白合成的轉(zhuǎn)換，并抑制某些免疫球蛋白同種型如IgGl和IgE的產(chǎn)生，后者對(duì)于引起變應(yīng)性特別重要。IL-12主要由包括樹(shù)狀細(xì)胞(DC)和巨噬細(xì)胞在內(nèi)的抗原呈遞細(xì)胞(APC)分泌，并且活化CD8+T細(xì)胞和NK細(xì)胞。Th2細(xì)胞分泌Th2型細(xì)胞因子，包括IL-4、IL-5、IL-10和IL-13。Th2型細(xì)胞因子的主要功能是支持體液免疫(例如刺激IgE和嗜曙紅細(xì)胞/肥大細(xì)胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng))和下調(diào)Thl型免疫應(yīng)答。在Thl型和Th2型免疫應(yīng)答之間的平衡發(fā)生調(diào)節(jié)異常引起疾病。許多類型的癌以顯著的Th2型應(yīng)答為特征，并且許多病原體通過(guò)產(chǎn)生10使Thl-Th2平衡向Th2模式移動(dòng)的細(xì)胞因子而避開(kāi)免疫系統(tǒng)(Wilson和Delovitch，2003,Nat.Rev.Immunol"3:211—222;Dredge,CancerImmunol.Immunother.，2002，51:521-531;Servet禾口Zitvogel，CurrMol.Med.,2002,2:739-756;Pinto，Pediatrics,2006,Apr.17[印刷之前有電子公開(kāi)])。許多自身免疫疾病如哮喘也以Thl-Th2平衡向Th2模式移動(dòng)為特征。相反地，自身免疫疾病如1型糖尿病和多發(fā)性硬化由自身致病性(autopathogenic)Thl細(xì)胞介導(dǎo)并且以弱應(yīng)答性Th2細(xì)胞為特征，其導(dǎo)致Thl樣細(xì)胞因子模式(Hayakawa等，2004,Curr.Med.Chem.,11:241-252;Wilson禾口Delovitch,2003,Nat.Rev.Immunol"3:211-222;VanKaer,2004,Immunol.CellBiol"82:315—322)。自然殺傷T(NKT)細(xì)胞在調(diào)節(jié)Thl型和Th2型免疫應(yīng)答中具有關(guān)鍵性的作用。NKT細(xì)胞是獨(dú)特的淋巴細(xì)胞群，它們與半恒定的T細(xì)胞受體(TCR)—起共表達(dá)NK細(xì)胞的標(biāo)記物。在小鼠中，大部分NKT細(xì)胞的TCR由恒定的Va鏈(由Val4和Jal8基因片段編碼)和與之配對(duì)的一組可變的VP鏈(主要由Vp8.2、V|37或V|32基因片段編碼)組成。該TCR能夠使得NKT細(xì)胞識(shí)別主要組織相容性復(fù)合體(MHC)I類樣分子CDld，其能夠呈遞疏水性分子如脂質(zhì)和疏水性肽到NKT細(xì)胞。到目前為止，只有少數(shù)分子顯示活化NKT細(xì)胞。在這些分子中，最初從沖繩海綿中提取的一種糖脂a-半乳糖神經(jīng)酰胺(a-GalCer)(Natori等，Tetrahedron,50:2771-2784,1994)被充分地表征。a-GalCer的合成類似物，KRN7000(2S,3S，4R)-l-O-(a-D-吡喃半乳糖)_2_(N_二十六垸?；被?-1,3,4-，-十八垸三醇可以得自KirinBrewery的PharmaceuticalResearchLaboratories(Gumna,曰本)或者如Morita等，J.Med.Chem"1995,38:2176-2187中所述合成。其它的a陽(yáng)GalCer衍生物在美國(guó)專利5,780,441(Kirin)中描述。在由Kirin最初公開(kāi)之后，ot-GalCer在治療若干疾病中顯示了潛力，所述疾病包括原發(fā)瘤及其轉(zhuǎn)移，感染如瘧疾和乙型肝炎，以及幾種自身免疫疾病如糖尿病和哮喘(參見(jiàn)Hayakawa等，2004，Curr.Med.Chem,11:241-252;Wilson禾口Delovitch,2003，Nat.Rev.Immunol"3:211隱222;Taniguchi等，2003,A畫.Rev.Immunol"21:483-513;VanKaer2004,Immunol.CellBiol.82:315-322)。還已經(jīng)闡述了a-GalCer可作為能夠增強(qiáng)由其它抗原誘導(dǎo)的保護(hù)性免疫應(yīng)答和/或延長(zhǎng)其持續(xù)時(shí)間的助劑(參見(jiàn)US2003-0157135禾BGonzalez-Aseguinolaza等，JExpMed"2002,195:617-24)。a-GalCer可以在體外和體內(nèi)活化NKT細(xì)胞(Kawano等，1997，Science,278:1626-1629;Burdin等，1998，J.Immunol.,161:3271-3281;Spada等，1998,J.Exp.Med.,188:1529-1534;Brossay等，1998,J.Exp.Med.188:1521-1528)。如圖1所示，a-GalCer當(dāng)通過(guò)APC如單核細(xì)胞、單核細(xì)胞由來(lái)的未成熟的樹(shù)狀細(xì)胞和巨噬細(xì)胞與CDld存在時(shí)，與NKT細(xì)胞的TCR相互作用，這隨后活化了NKT細(xì)胞和APC二者，并導(dǎo)致NKT細(xì)胞產(chǎn)生Thl型細(xì)胞因子IFN-y和Th2型細(xì)胞因子IL-4。然后在NKT細(xì)胞的細(xì)胞表面上的IL-12受體活化，并同時(shí)地，由活化的APC產(chǎn)生IL-12。由APC產(chǎn)生的IL-12誘導(dǎo)第二波的從NKT細(xì)胞產(chǎn)生IFN-y和活化NK細(xì)胞來(lái)同樣地產(chǎn)生IFN-y(Hayakawa等，2004，Curr.Med.Chem，11:241-252;Kawano等，1997，Science,278,1626-1629;Godfrey等，2000，Immunol.Today,21:573-583;Wilson等，2002,TrendsMol.Med.,8:225—231;Matsuda等，2000，J.Exp.Med.，192:741-753)。由a-GalCer引起的NKT細(xì)胞活化因此可導(dǎo)致幾種其它細(xì)胞類型(包括NK細(xì)胞、B細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞、樹(shù)狀細(xì)胞和骨髓細(xì)胞)的二次活化，并導(dǎo)致CD4+T細(xì)胞分化成Thl細(xì)胞或Th2細(xì)胞。已經(jīng)闡述了對(duì)小鼠給用a-GalCer迅速地產(chǎn)生強(qiáng)的抗瘧活性，抑制鼠瘧寄生蟲(chóng)P.yoeli和P.berghei發(fā)展為肝細(xì)胞內(nèi)階段(Gonzalez-Aseguinolaza等，2000,Proc.Natl.Acad.Sci.USA，97:8461-8466)。a-GalCer不能在缺乏IFN-y或IFN-y受體的小鼠中抑制寄生蟲(chóng)發(fā)展到肝臟中，表明糖脂的抗瘧活性主要由IFN-Y介導(dǎo)。由a-Gal-Cer刺激的IL-4允許糖脂緩解多種不同的自身免疫疾病，包括自身免疫性1型糖尿病和自身免疫性腦脊髓炎(Wilson等，2002，Trends12Mol.Med.,8:225-231)。重要地是，除了a-GalCer能夠刺激免疫應(yīng)答之外，還表明了a-GalCer在嚙齒類動(dòng)物和猴子中與其劑量無(wú)關(guān)地不誘導(dǎo)毒性(Nakagawa等，1998,CancerRes.，58:1202-1207)。然而，a-GalCer治療的有效性受到伴隨的Thl型和Th2型細(xì)胞因子(即IFN國(guó)y，IL-12和IL-4)的刺激的嚴(yán)重限制(Pal等，2001,J.Immunol"166:662—668;Berkers禾口Ovaa,TrendsPharmacol.Sci.，2005,26:252-257)。實(shí)際上，在I期實(shí)體瘤患者中的研究中，使用cx-GalCer觀察到很小作用(Giaccone等，2002,Clin.CancerRes.,8:3702-3709)。使用a-GalCer的治療已經(jīng)表明，如果NKT細(xì)胞的細(xì)胞因子模式被移動(dòng)，例如通過(guò)給用CDld-脈沖的樹(shù)狀細(xì)胞而向Thl型移動(dòng)的話，則該治療更有效。(Fujii等，2002,Nat.Immunol"3:867—874)。因此，可以選擇性誘導(dǎo)Thl型或Th2型免疫應(yīng)答的a-GalCer類似物將具有更有前途的治療潛力。最近已開(kāi)發(fā)了幾種a-C-GalCer類似物，其中碳原子替換了糖苷鍵中的氧原子。例如，參見(jiàn)美國(guó)專利6,635,622;Schmieg等，2003,J.Exp.Med,198(11):1631-1641;Chen等，OrgLett.,2004,6:4077-80;Yang等，AngewChemIntEdEngl.，2004，43:3818-22,和共同擁有的美國(guó)專利申請(qǐng)10/462,21l(US2004-0127429);11/193，852(US2006-0019246);11/096,340(US2005-0222048)。這些類似物耐受去糖基化并因此具有更長(zhǎng)的儲(chǔ)存期限(Bertozzi等,.C-糖苷的合成O-糖苷鍵的穩(wěn)定的模擬物(SynthesisofC國(guó)glycosides:stablemimicsofO-glycosidiclinkages),在ModernMethodsinCarbohydrateSynthesis中，Khan禾卩O'Neill編，HarwoodAcademicPublishers,London,UK,1996,第316—351頁(yè)；Bertozzi等,1992.J.Am.Chem.Soc.,114:10639-10641;Levy和Tang,TheChemistryofC-Glycosides，ElsevierScience編，1995;Postema,C-GlycosideSynthesis,CRCPress,Inc.,1995)。a-C-GalCerCRONY101是第一個(gè)C-糖苷的例子，與其O-糖苷相應(yīng)物相比，a-C-GalCerCRONY101具有顯著改善的治療潛力。如Schmieg等(2003,J.Exp.Med.,198:1631—1641)和Yang等(2004，Angew.Chem.Int.Ed.Engl.,43:3818-3822)所述，體內(nèi)給用CRONY101導(dǎo)致Th2型細(xì)胞因子IL-4的產(chǎn)生減少(與(x-GalCer相比)，并增強(qiáng)、延長(zhǎng)Thl型細(xì)胞因子IFN-y和IL-12的生成，產(chǎn)生對(duì)黑素瘤轉(zhuǎn)移和瘧疾的分別為100倍和IOOO倍的活性改善。Thl型細(xì)胞因子IL-12最近引起大量關(guān)注，因?yàn)槠湓谕ㄟ^(guò)調(diào)節(jié)炎性應(yīng)答的先天免疫性分支和適應(yīng)性免疫性分支與對(duì)抗感染和癌的先天抗性之間的相互作用中的基本作用(綜述參見(jiàn)Colombo和Trinchieri,CytokineGrowthFactorRev.,2002,13:155-68;Watford，CytokineGrowthFactorRev.,2003,14:361-368)。內(nèi)源性IL-12是抵抗許多病原體和腫瘤所需要的。實(shí)際上，在實(shí)驗(yàn)?zāi)[瘤模型中，重組IL-12治療對(duì)可移植腫瘤、化學(xué)誘導(dǎo)的腫瘤和在基因修飾小鼠中自然出現(xiàn)的腫瘤具有驚人的抗腫瘤作用。如上所述的，IL-12主要地由各種APC如樹(shù)狀細(xì)胞和巨噬細(xì)胞分泌，并有助于Thl型免疫應(yīng)答(Roitt,Brostoff,Male,Immunology,Mosby編，6thed.;Ma禾口Trinchieri，AdvImmunol.,2001，79:55-92;Hilkens,Blood，1997，90:1920-1926;Szabo,A畫.Rev.Immunol"2003,21:713-58)。IFN-y以及由IL-12誘導(dǎo)的其它的二級(jí)和三級(jí)促炎性細(xì)胞因子的級(jí)聯(lián)對(duì)被感染細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞具有直接的毒性作用，或者可活化潛在的抗血管生成機(jī)制。IL-12對(duì)抗原特異性免疫的刺激活性主要地依賴于其確定或加強(qiáng)Thl和細(xì)胞毒性T細(xì)胞應(yīng)答的能力。因?yàn)镮L-12的這一能力，其在癌和其它疫苗中具有強(qiáng)力的輔助活性。在抗腫瘤免疫療法的臨床前模型中獲得的有前途的資料已經(jīng)帶來(lái)了大量的希望，艮P，IL-12是強(qiáng)力的抗癌治療劑。然而，在IL-12臨床試驗(yàn)中觀察到的過(guò)度14毒性顯示以局部方式而非系統(tǒng)方式實(shí)現(xiàn)IL-12活化的必要性。
發(fā)明內(nèi)容從上述的
背景技術(shù)：
部分可知，本領(lǐng)域非常需要新的免疫刺激化合物，其具有低的體內(nèi)，高的體內(nèi)穩(wěn)定性，并能夠選擇性地誘導(dǎo)Thl型免疫應(yīng)答，特別是與增加局部IL-12產(chǎn)生有關(guān)的Thl型免疫應(yīng)答。本發(fā)明通過(guò)提供新型的合成C-糖脂解決了本發(fā)明的這些問(wèn)題并滿足了其它需要。本發(fā)明的化合物可以治療要求控制Th-l型應(yīng)答的疾病，包括但不限于各種感染，癌，增殖病癥和自身免疫疾病。這些化合物還可加強(qiáng)哺乳動(dòng)物中抗原的免疫原性。本發(fā)明的C-糖脂包括式(I)所示的化合物3XR5o9;lqHNOH(CH2)13CH3(I)其中X是0或NH;Y是-CH2-CH2-或-CI^CH-;當(dāng)Y是-CH2-CH2-時(shí)，Q是C23-C33烯基或-RL0-R2;當(dāng)Y是-CI^CH-時(shí)，Q是C27-C32烷基，C23-C32烯基，-R^O-R2,或被苯基取代的C6-C8烷基；W和W是被取代的或未被取代的垸基或烯基，從而組合的W和R2含23-32個(gè)碳原子；R"是-OH或單糖和W是H，或R是H和I^是-OH或單糖；和W是氫或單糖，及其可藥用的鹽或酯。15在優(yōu)選的實(shí)施方案中；Y是反式或順式構(gòu)型的-CHHCH-。更優(yōu)選地，Y是反式構(gòu)型的-CI^CH-。優(yōu)選那些刺激IL-12分泌增加的化合物。這些化合物包括反式-(A-l),順式(A-1),(上面描述的是脂肪酸Q鏈的反式和順式構(gòu)象異構(gòu)體[還分別稱作GCK109和GCK151]。在每種情況下，基團(tuán)Y是反式-乙烯。及其可藥用的鹽和酯。與CRONY相比，這些化合物提供了具有優(yōu)異特異性的Thl型應(yīng)答并具有優(yōu)異的藥代動(dòng)力學(xué)模式。不束縛于任何特定的理論，這些化合物被認(rèn)為提供了由樹(shù)狀細(xì)胞分泌IL-12和由NKT或NK細(xì)胞分泌IFN之間的平衡分泌的改善，其進(jìn)一步表現(xiàn)應(yīng)答的特異性并改善了化合物的安全性。這些化合物還實(shí)質(zhì)上不刺激由NKT或NK細(xì)胞分泌IL-4。本發(fā)明的另外的C-糖脂包括下式所示的化合物其中Y是-CH2-CH2-;X是O，R5是H，R3是OH，R4是H;禾口Q是國(guó)(CH2)27-CH3，及其可藥用的鹽和酯。本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案是藥物組合物，其包含如上定義的化合物以及可藥用載體。該藥物組合物可進(jìn)一步包括抗原。本發(fā)明的又一個(gè)實(shí)施方案是在哺乳動(dòng)物中刺激NKT細(xì)胞的特異性Thl型應(yīng)答和活化樹(shù)狀細(xì)胞的方法，該方法包括對(duì)哺乳動(dòng)物給用有效量的本發(fā)明的化合物。本發(fā)明的化合物選擇性地和有效地誘導(dǎo)Thl型免疫應(yīng)答，從而使得它們?cè)谥苯邮褂没蛟谧鳛橹鷦┡c疾病特異性抗原結(jié)合使用時(shí)在治療中都是有效的。因此，本發(fā)明的又一個(gè)實(shí)施方案是在有需要的哺乳動(dòng)物中治療要求控制Th-l型應(yīng)答的疾病的方法，該方法包括對(duì)哺乳動(dòng)物給用有效量的式(I)的化合物。要求控制Th-l型應(yīng)答的疾病的非限制性例子包括感染，癌，細(xì)胞增殖病癥和Th2型自身免疫疾病。在優(yōu)選的17實(shí)施方案中，要求控制Th-l型應(yīng)答的疾病是感染性病毒病，如人類免疫缺陷病毒(HIV)感染，丙型肝炎病毒(HCV)感染，乙型肝炎病毒(HBV)感染，皰疹病毒感染或呼吸道合胞病毒(RSV)感染。在另一個(gè)優(yōu)選方案中，疾病是癌，如實(shí)體瘤如前列腺癌或乳癌。在另一個(gè)仍舊優(yōu)選的方案中，疾病是哮喘。本發(fā)明的又一個(gè)實(shí)施方案是通過(guò)使用抗原并結(jié)合使用包括式(I)的化合物的助劑使哺乳動(dòng)物免疫而加強(qiáng)哺乳動(dòng)物的抗原的免疫原性的方法。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，抗原具有HIV特異性，瘧疾特異性或前列腺癌特異性。本發(fā)明的又一個(gè)實(shí)施方案是制備本文所述的式(I)化合物的方法。不同的實(shí)施方案是制備式(I)化合物的方法其中X是0或NH;Y是-CH2-CH2-或-CI^CH-;當(dāng)Y是-CH2-CH2-時(shí)，Q是C23-C32烯基或-RJ-0-R2;當(dāng)Y是-CH^CH-時(shí)，Q是C27-C32垸基，C23-C32烯基，-R'-O-R2,或被苯基取代的C6-C8烷基；W和W是被取代的或未被取代的垸基或烯基，從而組合的W和112含23-32個(gè)碳原子；RS是-OH或單糖和I^是H，或R是H和I^是-OH或單糖；和RS是氫或單糖；及其可藥用鹽或酯。該方法包括以下步驟(a)使式(II)的化合物反應(yīng):<formula>formulaseeoriginaldocumentpage19</formula>(n)以首先除去Pgl，然后用式(III)的對(duì)硝基苯基酯處理:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage19</formula>(III)其中Q如上定義；和(b)隨后將Pg2和Pg3脫保護(hù)，和任選地將與環(huán)狀基團(tuán)鄰接的碳-碳雙鍵氫化以形成式(I)化合物。根據(jù)一個(gè)優(yōu)選方案，式(II)化合物是<formula>formulaseeoriginaldocumentpage19</formula>圖1是o-糖脂和c-糖脂活化細(xì)胞因子和免疫細(xì)胞的略圖。圖2A-C描述了當(dāng)對(duì)BALB/c(圖2A)和C57BL/6(圖2B-C)小鼠給藥本發(fā)明的化合物或?qū)φ栈衔飼r(shí)釋放的Thl型細(xì)胞因子IFN-y的動(dòng)力學(xué)模式。圖中表示的化合物是AH七合物(反式-A-1)，BH七合物(A-2)，C-化合物(A-3)，DH七合物(A-4)，E-化合物(A-5)，Z-對(duì)照(單獨(dú)的PBS)，CRONY=a-C-GalCer，KRN=a-GalCer，GCK109(A-1反式-構(gòu)象異構(gòu)體)，GCK151(A-1順式構(gòu)象異構(gòu)體)和GCK152[A-7]。通過(guò)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(ELISA)測(cè)定給藥所述化合物后在0、2、6、12、24、48和72小時(shí)的血清中的IFN-y的水平。數(shù)據(jù)用兩種不同的混合血清的稀釋物的平均值+A標(biāo)準(zhǔn)偏差(SD)表示。圖3A-C描述了當(dāng)對(duì)BALB/c(圖3A)和C57BL/6(圖3B-C)小鼠給用本發(fā)明的化合物或?qū)φ栈衔飼r(shí)釋放的Thl型細(xì)胞因子IL-12的動(dòng)力學(xué)模式。圖中表示的化合物是AH七合物(反式-A-1)，B二化合物(A-2)，C-化合物(A-3)，DH七合物(A-4)，E—七合物(A-5)，Z-對(duì)照(單獨(dú)的PBS)，CRONY=a-C-GalCer，KRN=a-GalCer，GCK109(反式陽(yáng)A-1)，GCK151(順式A-l)和GCK152[A-7]。通過(guò)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(ELISA)測(cè)量給藥所述化合物后在O、2、6、12、24、48和72小時(shí)的血清中的IL-12的水平。數(shù)據(jù)用兩種不同的混合血清的稀釋物的平均值+A標(biāo)準(zhǔn)偏差(SD)表示。圖4A-C描述了當(dāng)對(duì)BALB/c(圖4A)和C57BL/6(圖4B-C)小鼠給用本發(fā)明的化合物或?qū)φ栈衔飼r(shí)釋放的Th2型細(xì)胞因子IL-4的動(dòng)力學(xué)模式。圖中表示的化合物是A-化合物(反式-A-l)，B-化合物(A-2)，C-化合物(A-3)，DH七合物(A-4)，EH七合物(A-5)，Z-對(duì)照(單獨(dú)的PBS)，CRONY=a-C-GalCer，KRN=a-GalCer，GCK109(反式-A-1)，GCK151(順式A-l)和GCK152[A-7]。通過(guò)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(ELISA)測(cè)量給藥所述化合物后在0、2、6、4、24、48和72小時(shí)的血清中的IL-4的水平。數(shù)據(jù)用兩種不同的混合血清的稀釋物的平均值+Z-標(biāo)準(zhǔn)偏差(SD)表示。圖5A和5B描述了在實(shí)驗(yàn)性人體外NKT細(xì)胞體系中通過(guò)ELISA測(cè)量的本發(fā)明化合物的細(xì)胞因子水平。在各種糖脂(即，GCK109[反式-A-l]，GCK151[順式A-l]，GCK127[A-2]，GCK152[A-7]和對(duì)照CRONY=a-C-GalCer和KR!S^a-GalCer)存在的條件下，在與同基因CD14-外周血單核細(xì)胞(PBMC)共培養(yǎng)18小時(shí)的未成熟的樹(shù)狀細(xì)胞(DC)的培養(yǎng)上清液中，通過(guò)ELISA測(cè)量IFN-Y或IL-4的濃度。圖6A和6B描述了在實(shí)驗(yàn)性人體外NKT細(xì)胞體系中通過(guò)ELISPOT測(cè)量的當(dāng)與本發(fā)明化合物溫育時(shí)分泌細(xì)胞因子的PBMC的數(shù)目。在各種糖脂(即，GCK142A[A匿6]GCK109[反式-A麗l]，GCK151[順式A-l]，20GCK127[A-2]，GCK152[A-7]和對(duì)照化合物CRONY=a-C-GalCer和KRN=a-GalCer)存在的條件下，通過(guò)在ELISPOT板中與同基因CD14-PBMC共培養(yǎng)22-26小時(shí)后的未成熟的DC進(jìn)行ELISPOT測(cè)定，測(cè)量分泌IFN-y或IL-4的PBMC的數(shù)目。發(fā)明的詳細(xì)說(shuō)明定義本文使用的術(shù)語(yǔ)"Thl型免疫應(yīng)答"和"Th2型免疫應(yīng)答"是指分別由ThlCD4+輔助T細(xì)胞和Th2CD4+輔助T細(xì)胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答。術(shù)語(yǔ)"Thl型細(xì)胞因子"和"Th2型細(xì)胞因子"是指分別由Thl細(xì)胞和Th2細(xì)胞產(chǎn)生的細(xì)胞因子。Thl型細(xì)胞因子包括但不限于IFN-y和IL-12。Th2型細(xì)胞因子的非限制性例子是IL-4。術(shù)語(yǔ)"要求控制Th-1型應(yīng)答的疾病"是指以Th2型免疫應(yīng)答和Th2型細(xì)胞因子模式占優(yōu)勢(shì)為特征的疾病。這種疾病的例子包括但不限于感染性病毒病，如HIV感染，HCV感染，HBV感染，皰疹病毒感染和RSV感染；癌，如前列腺癌或乳癌；和Th2型自身免疫疾病，如哮喘和變態(tài)反應(yīng)。本文使用的術(shù)語(yǔ)"選擇性誘導(dǎo)Thl型免疫應(yīng)答"是指誘導(dǎo)和/或增強(qiáng)和/或增加Thl型免疫應(yīng)答的持續(xù)時(shí)間而不同時(shí)發(fā)生誘導(dǎo)和/或增強(qiáng)Th2型免疫應(yīng)答和/或增加其持續(xù)時(shí)間。對(duì)于本發(fā)明的化合物，選擇性誘導(dǎo)Thl型免疫應(yīng)答反映在IL-12分泌增強(qiáng)和樹(shù)狀細(xì)胞的活化升高(與現(xiàn)有技術(shù)的化合物相比)，其不同時(shí)發(fā)生IL-4分泌的增強(qiáng)。術(shù)語(yǔ)"單糖"是指醛形式(醛糖)或酮形式(酮糖)并具有3-10個(gè)碳原子的鏈的糖分子。本發(fā)明中可使用的適當(dāng)?shù)膯翁前ㄌ烊粏翁呛秃铣蓡翁恰＿m當(dāng)?shù)膯翁堑姆窍拗菩岳影ū侨绺视吞呛投u丙酮；丁糖如赤蘚糖和赤蘚酮糖；戊糖如木糖、阿拉伯糖、核糖、木酮糖、核酮糖；甲基戊糖(6-脫氧己糖)，如鼠李糖和海藻糖己糖，如葡萄糖、甘露糖、半乳糖、果糖和山梨糖；和庚糖，如葡庚糖、半乳甘露庚糖(galamannoheptose)、景天庚酮糖(sedoheptulose)和甘露庚酮糖(mannoheptulose)。優(yōu)選的單糖包括但不限于己糖。.化合物的用于治療疾病例如癌，感染或自身免疫疾病的"有效量"是指導(dǎo)致包括人的哺乳動(dòng)物中的疾病的至少一種癥狀或參數(shù)有可測(cè)量的緩解的量。本文使用的術(shù)語(yǔ)"其可藥用的鹽或酯"是指本發(fā)明的化合物的那些鹽(例如羧酸鹽，氨基酸加成鹽)和酯，其在合理的醫(yī)學(xué)判斷范圍內(nèi)適于接觸患者的組織而無(wú)不適當(dāng)?shù)亩拘?，刺激，變態(tài)反應(yīng)等，與合理的利益/風(fēng)險(xiǎn)比相稱，并有效地用于其預(yù)定用途，并且當(dāng)可能時(shí)還包括本發(fā)明化合物的兩性離子的形式。本文使用的術(shù)語(yǔ)"治療"是指預(yù)防受試者的疾病或減輕或緩解受試者的疾病的至少一種癥狀。在本發(fā)明的含義內(nèi)，術(shù)語(yǔ)"治療"還是指延長(zhǎng)前開(kāi)放性(prepatency)，目卩，延長(zhǎng)在疾病的感染和臨床表現(xiàn)之間的時(shí)段。應(yīng)用于劑量或量的術(shù)語(yǔ)"治療有效的"是指一定量的化合物或藥物組合物，當(dāng)其被給用到有需要的哺乳動(dòng)物中時(shí)足夠產(chǎn)生所需的活性。術(shù)語(yǔ)"可藥用的"和"生理學(xué)可接受的"可互換使用，并且在與本發(fā)明的組合物關(guān)聯(lián)使用時(shí)，是指該組合物中的分子實(shí)體和其它成分，其具有生理學(xué)相容性并且當(dāng)給用到人時(shí)通常不產(chǎn)生不良反應(yīng)。優(yōu)選地，本文使用的術(shù)語(yǔ)"可藥用的"是指由聯(lián)邦政府或州政府的管理機(jī)構(gòu)審批的或列于美國(guó)藥典或其它通常被認(rèn)可的藥典中的，供哺乳動(dòng)物，更特別人使用的。22術(shù)語(yǔ)"載體"是指與本發(fā)明的化合物給藥時(shí)的稀釋劑、賦形劑或媒介物。這種藥物載體可以是無(wú)菌的液體如水和油，包括石油、動(dòng)物、植物或合成來(lái)源的，諸如花生油，大豆油，礦物油，芝麻油等。水或含水溶液，鹽溶液，和含水的葡萄糖和甘油溶液優(yōu)選用作載體，特別用于注射液。適當(dāng)?shù)乃幬镙d體在E.W.Martin的"Remington'sPharmaceuticalSciences",E.W.Martin,18thEdition中描述。術(shù)語(yǔ)"助劑"和"免疫佐劑"在本文中可互換使用并且是指當(dāng)單獨(dú)被給用到寄主時(shí)可以是非免疫原性的，但是當(dāng)其與抗原結(jié)合被給用時(shí)，其加強(qiáng)了宿主對(duì)該抗原的免疫應(yīng)答。本文使用的術(shù)語(yǔ)"聯(lián)合給藥"是指兩種藥劑的給藥，諸如免疫佐劑和抗原的聯(lián)合給藥，聯(lián)合給藥在一個(gè)組合物中同時(shí)進(jìn)行，或者在不同的組合物同時(shí)進(jìn)行，或者在不同的組合物中順序地進(jìn)行。然而，對(duì)于被認(rèn)為是"聯(lián)合"的順序給藥，抗原和助劑必須以仍允許助劑加強(qiáng)對(duì)抗原的免疫應(yīng)答的時(shí)間間隔分開(kāi)給藥。例如，當(dāng)抗原是多肽時(shí)，抗原和助劑在同一天被給用，優(yōu)選彼此在1小時(shí)內(nèi)被給用，并且最優(yōu)選同時(shí)被給用。然而，當(dāng)核酸被遞送到受試者并且多肽抗原由受試者的細(xì)胞表達(dá)時(shí)，優(yōu)選在核酸給藥24小時(shí)內(nèi)給用助劑，更優(yōu)選在核酸給藥6小時(shí)內(nèi)給用助劑。本文使用的術(shù)語(yǔ)"受試者"是指具有免疫系統(tǒng)的動(dòng)物，優(yōu)選哺乳動(dòng)物。本發(fā)明適用的受試者包括但不限于牛，馬，羊，豬，禽(例如小雞)，羊，貓，狗，嚙齒類動(dòng)物(例如倉(cāng)鼠，小鼠，大鼠，兔)，猴，靈長(zhǎng)類動(dòng)物，和人。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，受試者是人。術(shù)語(yǔ)"約"是指特定值的可由本領(lǐng)域普通技術(shù)人員確定的容許誤差范圍，其部分地依賴于該值的測(cè)量方法或測(cè)定方法，即測(cè)量系統(tǒng)的測(cè)量極限。例如，根據(jù)本領(lǐng)域的實(shí)踐，"約"可以是指在l個(gè)或大于1個(gè)標(biāo)準(zhǔn)偏差的范圍內(nèi)?；蛘?，"約"可以是指給定值的最高20%，優(yōu)選最高10%，更優(yōu)選最高5%，和更優(yōu)選最高1%的范圍?；蛘?，特別是對(duì)于生物系統(tǒng)或生物方法而言，該術(shù)語(yǔ)可以是指在數(shù)量級(jí)內(nèi)，優(yōu)選在特定值的5倍內(nèi)，更優(yōu)選在特征值的2倍內(nèi)。當(dāng)特殊值在說(shuō)明書(shū)和權(quán)利要求書(shū)中進(jìn)行描述時(shí)，除非另有說(shuō)明，否則應(yīng)當(dāng)認(rèn)為術(shù)語(yǔ)"約"是指在特殊值的容許誤差范圍內(nèi)。根據(jù)本發(fā)明，可采用本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的常規(guī)的分子生物學(xué)，微生物學(xué)和重組DNA技術(shù)。這些技術(shù)是公知的并且在文獻(xiàn)中進(jìn)行說(shuō)明。例如，參見(jiàn)Sambrook，F(xiàn)ritsch禾口Maniatis，MolecularCloning:ALaboratoryManual,第二版(1989)ColdSpringHarborLaboratoryPress,ColdSpringHarbor,NewYork(本文中稱作"Sambrook等，1989，，)；DNACloning:APracticalApproach,第I和II巻(D.N.Glover編，1985);OligonucleotideSynthesis(M丄Gait編，1984》NucleicAcidHybridization[B.D.Hames&S丄Higgins編，(1985)];TranscriptionAndTranslation[B.D.Hames&S.J.Higgins編，(1984)];AnimalCellCulture[R丄Freshney編，(1986)];ImmobilizedCellsAndEnzymes[IRLPress,(1986)];B.Perbal,APracticalGuideToMolecularCloning(1984);F.M.A體bel等(編),CurrentProtocolsinMolecularBiology,JohnWiley&Sons,Inc.(1994)。本發(fā)明的化合物優(yōu)選其中X是O，Rs是H，R3是OH且R4是H的式(I)的化合物。優(yōu)選地，本發(fā)明的化合物在脂肪側(cè)鏈(即基團(tuán)Q)中具有至少一個(gè)親核鍵。每個(gè)親核鍵優(yōu)選是醚鍵(即，Q是-R、0-R、或雙鍵(即，Q是烯基)。親核鍵優(yōu)選位于從側(cè)鏈Q(jìng)的末端碳原子起的至少第六個(gè)碳原子處。例如，雙鍵可以位于從側(cè)鏈Q(jìng)的未端碳原子起第6到22個(gè)碳原子的任何位置處。根據(jù)一個(gè)實(shí)施方案，Q是包含23到32個(gè)碳原子、優(yōu)選25到3224個(gè)碳原子、更優(yōu)選28到32個(gè)碳原子并具有一個(gè)、兩個(gè)或三個(gè)雙鍵的C23-C32烯基。優(yōu)選地，Q只具有一個(gè)雙鍵。優(yōu)選地，雙鍵位于C7到d2之間(從與羰基連接的Q基團(tuán)的末端起算)并更優(yōu)選位于C7到Cu)之間(例如在C9和do之間)。優(yōu)選地，Q是-C8H!6陽(yáng)CP^CH-Q8H37。具體的化合物類別是當(dāng)Q是C23-Q2烯基和Y是-CH《H-，優(yōu)選為反式構(gòu)型。在另一個(gè)實(shí)施方案中，Q是-R^O-R2。氧原子可位于Q基團(tuán)內(nèi)的任何位置處，但是優(yōu)選位于Ci到C25之間(從與羰基結(jié)合的Q基團(tuán)的末端起算)(例如在d和C2之間，或在C9和Cio之間)，更優(yōu)選在C18至UC25之間(例如在C19和C20之間)。例如，Q可以是-C19H38-0-C6H13。具體的化合物類別是當(dāng)Q是-R、0-R2和Y是-CH2-CH2Jt。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，Q是-R^-0-ie且W和W都是垸基。在又一個(gè)實(shí)施方案中，Q是-R、0-R2并且R1和R2中至少之一是烯基。Q基團(tuán)優(yōu)選包含l-3個(gè)雙鍵，更優(yōu)選只包含一個(gè)雙鍵。雙鍵和氧原子可以位于Q基團(tuán)內(nèi)的任何位置處。優(yōu)選地，Ri是烯基，更優(yōu)選R1是烯基和112是垸基。當(dāng)Q包含一個(gè)雙鍵時(shí)，該雙鍵優(yōu)選位于C7到Cu之間(從與羰基結(jié)合的Q基團(tuán)的末端起算)，更優(yōu)選在C7到Cn)之間，更優(yōu)選在C9和Cn)之間。氧原子優(yōu)選位于d到<:25之間(從與羰基結(jié)合的Q基團(tuán)的末端起算)(例如在Q和C2之間，或在C9和C1Q之間)，更優(yōu)選在Cw到(:25之間(例如在C^和C20之間)。例如，Q可以是C8H16-CH=CH-C9H18-0-C6Hi3°根據(jù)另一個(gè)優(yōu)選方案，Y是-CH《H-和Q是C27-C32垸基，優(yōu)選C27或C28烷基。根據(jù)另一個(gè)優(yōu)選方案，Y是-CH《H-和Q是-R、0-R2，其中W和W的定義如上所述。優(yōu)選地，Q包含23到32個(gè)碳原子，更優(yōu)選25到32個(gè)碳原子，甚至更優(yōu)選28到32個(gè)碳原子。例如，Q可以是C19H38-O-C6Hu。本發(fā)明的優(yōu)選化合物包括但不限于HOOH反式-(A-l)，(式(A-1),反式-(A-2)，(A隱3)，(A-4)，26<formula>formulaseeoriginaldocumentpage27</formula>說(shuō)明書(shū)第19/70頁(yè)表B<table>tableseeoriginaldocumentpage28</column></row><table>本發(fā)明的不同的化合物是下式所示的化合物:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage28</formula>或其可藥用的鹽或酯。治療用途本發(fā)明的化合物可用于治療任何的將受益于Thl型免疫應(yīng)答的選擇性誘導(dǎo)，特別是受益于與IL-12分泌增強(qiáng)和抗原呈遞細(xì)胞(APC)如樹(shù)狀細(xì)胞活化升高有關(guān)的Thl型免疫應(yīng)答的疾病，在Thl型免疫應(yīng)答的選擇性誘導(dǎo)的同時(shí)不實(shí)質(zhì)上發(fā)生IL-4分泌的增強(qiáng)。不束縛于任何具體理論，本發(fā)明人相信本發(fā)明的化合物通過(guò)與APC的TCR結(jié)合，這活化NKT細(xì)胞并導(dǎo)致NKT細(xì)胞分泌IFN-y而介導(dǎo)Th-l免疫應(yīng)答的選擇性誘導(dǎo)。然而，如此被活化的NKT細(xì)胞不實(shí)質(zhì)上分泌顯著量的IL-4。活化的NKT細(xì)胞進(jìn)一步通過(guò)CD40配體與抗原遞呈細(xì)胞(APC)如樹(shù)狀細(xì)胞結(jié)合，導(dǎo)致IL-12的局部分泌增強(qiáng)。這種IL-12的局部釋放使得避免了與IL-12毒性有關(guān)的消極作用，并允許產(chǎn)生非常高效率的和特異性的Thl型免疫應(yīng)答，例如針對(duì)腫瘤或病原體的Thl型免疫應(yīng)答。本發(fā)明人還相信本發(fā)明的化合物間接地作用于樹(shù)狀細(xì)胞并當(dāng)與a-GalCer或a-C-GalCer(CRONY)相比時(shí)具有更小的二級(jí)NK細(xì)胞活化作用。NK細(xì)胞的非特異性活化因此在實(shí)質(zhì)上受到限制，這使得本發(fā)明的化合物相對(duì)于現(xiàn)有技術(shù)具有改善的安全性和耐受性。這些性質(zhì)使得本發(fā)明的化合物可特別地用于治療要求控制Th-l型應(yīng)答的疾病。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的化合物可用于治療癌，例如，作為抗腫瘤劑用于抑制腫瘤的生長(zhǎng)，和用于治療細(xì)胞增殖病癥。本發(fā)明的化合物可單獨(dú)使用，或者與化學(xué)療法，放射療法或免疫療法聯(lián)合使用。更具體地說(shuō)，本發(fā)明的化合物可用于治療多種包括但不限于以下的癌癌諸如膀胱癌，乳癌，結(jié)腸癌，腎癌，肝癌，肺癌(包括小細(xì)胞肺癌，非小細(xì)胞肺癌)，食管食管癌，膽囊癌，卵巢癌，胰腺癌，睪丸癌，胃癌，腎癌，肝癌，宮頸癌，甲狀腺癌，前列腺癌和皮膚癌(包括鱗狀細(xì)胞癌);淋巴系統(tǒng)系譜的造血性腫瘤，包括白血病，急性淋巴細(xì)胞性白血病，急性淋巴母細(xì)胞性白血病，B細(xì)胞淋巴瘤，T細(xì)胞淋巴瘤，霍奇金淋巴瘤，非霍奇金淋巴瘤，毛細(xì)胞淋巴瘤和伯克特淋巴瘤；脊髓系譜的造血性腫瘤，包括急性和慢性的粒性白血病，脊髓發(fā)育異常綜合征和早幼粒細(xì)胞白血??；間充質(zhì)由來(lái)的腫瘤，包括纖維肉瘤和橫紋肌肉瘤；中央和周圍神經(jīng)系統(tǒng)的腫瘤，包括星形細(xì)胞瘤，神經(jīng)母細(xì)胞瘤，神經(jīng)膠質(zhì)瘤和神經(jīng)鞘瘤；其它腫瘤，包括黑素瘤，精原細(xì)胞瘤，惡性畸胎瘤，骨肉瘤，著色性干皮病，keratoctanthoma，甲狀腺小囊癌和皮膚多發(fā)性出血性肉瘤。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，癌是實(shí)體瘤，諸如前列腺癌或乳癌?；衔锟捎糜诘募?xì)胞增殖病癥包括但是不限于良性前列腺增生，家族性腺瘤病息肉，神經(jīng)纖維瘤病，牛皮癬，與動(dòng)脈粥樣硬化相關(guān)的血管平滑肌細(xì)胞增殖，肺纖維化，關(guān)節(jié)炎，腎小球腎炎，和術(shù)后狹窄和再狹窄。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的化合物還可用于治療感染性疾病，包括病毒感染和非病毒感染二者。例如，化合物可用于治療由以下引起的病毒感染反轉(zhuǎn)錄病毒科(例如人類免疫缺陷病毒，諸如HIV-1(還稱為HTLV-III,LAV或HTLV-III/LAV，或HIV-III));和其它分離物，如HIV-LP;小核糧核酸病毒(例如脊髓灰質(zhì)炎病毒，甲型肝炎病毒；腸道病毒，人柯薩奇病毒，鼻病毒，艾柯病毒)；杯狀病毒科(例如導(dǎo)致胃腸炎的菌株；披膜病毒科(例如馬腦炎病毒，風(fēng)疹病毒)；黃病毒科(例如登革熱病毒，腦炎病毒，黃熱病毒)；冠狀病毒科(例如冠狀病毒)；彈狀病毒科(例如水泡性口膜炎病毒，狂犬病毒)；絲狀病毒科(例如埃博拉病毒)；副粘病毒(例如副流感病毒，腮腺炎病毒，麻疹病毒，呼吸道合胞病毒)；正黏液病毒科(例如流感病毒)；布尼亞病毒科(例如漢坦病毒，寄生性野菰病毒，phlebo病毒和Nairo病毒)；呼腸孤病毒科(例如呼腸孤病毒，環(huán)狀病毒和輪狀病毒)；雙RNA病毒科；肝病毒科(乙型肝炎病毒)；細(xì)小病毒科(細(xì)小病30毒)；多空病毒科(乳頭狀瘤病毒，多形瘤病毒)；腺病毒科(大部分腺病毒)；皰疹病毒科(單純皰疹病毒(HSV)l和2，水痘帶狀皰疹病毒，巨細(xì)胞病毒(CMV)，皰疹病毒)；痘病毒科(天花病毒，牛痘病毒，痘病毒);和虹彩病毒科(例如非洲豬瘟病毒)；和無(wú)類別病毒(例如海綿狀腦病的病原體，5肝炎的病原體(被認(rèn)為是乙型肝炎病毒的缺失性衛(wèi)星)，非甲非乙型肝炎的病原體(1類=內(nèi)部傳播;2類=非腸道傳播(目卩，丙型肝炎);諾羅病毒和相關(guān)病毒，和星狀病毒))。本發(fā)明的化合物還可用于治療由以下引起的細(xì)菌感染幽門螺旋桿菌，伯氏螺旋體菌，嗜肺軍團(tuán)菌，分枝桿菌(例如結(jié)核分枝桿菌，鳥(niǎo)分枝桿菌，胞內(nèi)分枝桿菌，堪薩斯氏分枝桿菌，戈特氏分枝桿菌)，金黃色葡萄球菌，淋病奈瑟氏球菌，腦膜炎奈瑟氏球菌，單核細(xì)胞增生利斯特氏菌，化膿性鏈球菌(鏈球菌A群)，無(wú)乳鏈球菌(鏈球菌B群)，鏈球菌(草綠色鏈球菌群)，糞鏈球菌，牛鏈球菌，鏈球菌(厭氧鏈球菌)，肺炎鏈球菌，致病性彎曲桿菌，腸球菌，假單胞菌，肺炎球菌，披衣菌，流感嗜血桿菌，炭疽芽孢桿菌，白喉棒狀桿菌，棒狀桿菌屬，紅斑丹毒絲菌，產(chǎn)氣莢膜梭狀芽孢桿菌，破傷風(fēng)桿菌，產(chǎn)氣腸桿菌，肺炎克雷白桿菌，出血敗血性巴司德氏菌，類桿菌，核粒梭桿菌，念珠狀鏈桿菌，蒼白密螺旋體，螺旋體，鉤端螺旋體，以色列放線菌和土拉熱弗朗西絲氏菌。由新型隱球菌、莢膜組織胞漿菌、粗球孢子菌、皮炎芽生菌、沙眼衣原體、白色念珠菌引起的真菌和原蟲(chóng)感染。本發(fā)明的化合物還可用于治療由其它傳染性生物體諸如原生生物(包括)瘧原蟲(chóng)，利什曼蟲(chóng)，血吸蟲(chóng)和弓形蟲(chóng)以及酵母和其它真菌引起的感染。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明的化合物可用于治療由人類免疫缺陷病毒(HIV)，丙型肝炎病毒(HCV)，乙型肝炎病毒(HBV)，皰疹病毒，呼吸道合胞病毒(RSV)，或瘧疾引起的感染。31在其它實(shí)施方案中，本發(fā)明的化合物可用于治療要求控制Th-l型應(yīng)答的自身免疫疾病如哮喘和變態(tài)反應(yīng)。本發(fā)明的治療和預(yù)防方法可與其它療法聯(lián)合使用。例如，使用本發(fā)明化合物的抗癌療法可以與化學(xué)治療和/或放射治療聯(lián)合使用。使用本發(fā)明化合物的抗病毒治療可與IFN-(X治療組合使用。連同本發(fā)明的方法，本發(fā)明還提供了藥物和疫苗組合物，其包括免疫原性有效量的式(I)的化合物和任選的另外的免疫刺激劑、載體或賦形劑(優(yōu)選都是可藥用的)。給藥方式本發(fā)明的化合物和組合物的給藥方式包括但不限于經(jīng)口、經(jīng)腸。靜脈內(nèi)、肌肉內(nèi)、腫瘤內(nèi)、皮下、透皮、鼻內(nèi)、經(jīng)粘膜(包括經(jīng)直腸和經(jīng)頰)和吸入方式。優(yōu)選地，使用經(jīng)口、透皮、皮下，或吸入途徑或鼻內(nèi)途徑(例如，分別借助固體或液體口服制劑，皮膚貼片或鼻噴霧劑進(jìn)行)。有時(shí)候，化合物可以用同基因樹(shù)狀細(xì)胞進(jìn)行脈沖，然后被靜脈內(nèi)轉(zhuǎn)移到患者中。也就是說(shuō)，樹(shù)狀細(xì)胞可與化合物進(jìn)行溫育，以允許樹(shù)狀細(xì)胞通過(guò)其CDld分子與化合物結(jié)合。這些負(fù)載有化合物的樹(shù)狀細(xì)胞然后可被靜脈內(nèi)轉(zhuǎn)移到患者中，靜脈內(nèi)的轉(zhuǎn)移可以是局部的或系統(tǒng)的。藥物組合物用于本發(fā)明的化合物和組合物的經(jīng)口給藥的固體劑型包括膠囊、片劑、丸劑、粉劑、顆粒劑和栓劑。在這種固體劑型中，本發(fā)明的活性化合物可與至少一種惰性的常用賦形劑(或載體)諸如枸櫞酸鈉或磷酸二鈣；或與以下的物質(zhì)混合；(a)填充劑或補(bǔ)充劑，諸如例如淀粉，乳糖，蔗糖，葡萄糖，甘露醇和硅酸；(b)粘合劑，諸如例如羧甲纖維素，藻酸鹽，明膠，聚乙烯吡咯垸酮，蔗糖和阿拉伯膠；(c)濕潤(rùn)劑，諸如例如甘油；(d)崩解劑，諸如例如瓊脂，碳酸鈣，馬鈴薯淀粉或木薯淀粉，海藻酸，某些復(fù)合硅酸鹽，和碳酸鈉；(e)溶解延遲劑，諸如例如石蠟；(f)吸收促進(jìn)劑，諸如例如季銨化合物；(g)潤(rùn)濕劑，諸如例如鯨蠟醇和單硬脂酸甘油酯；(h)吸附劑，諸如例如白陶土和皂土；和(i)潤(rùn)滑劑，諸如例如滑石，硬脂酸鈣，硬脂酸鎂，固體聚乙二醇，十二烷基硫酸鈉，或其混合物。在膠囊、片劑和丸劑的情況中，劑型還可包括緩沖劑。與上面所述類似的這種固體組合物或固體組合物可以作為填充劑用在軟明膠膠囊和硬明膠膠囊中，所述膠囊使用賦形劑如乳糖或乳、糖、以及高分子量聚乙二醇等。固體劑型如片劑、糖衣丸劑、膠囊、丸劑和顆粒劑可以使用包衣和外殼如腸溶衣或其它適當(dāng)?shù)陌禄蛲鈿ぶ苽洹追N這些包衣和/或外殼是本領(lǐng)域的公知，并且可包含遮光劑，并且可以是這樣的組合物，該組合物在腸道的某一部分內(nèi)以延遲方式釋放一種或多種活性化合物?？墒褂玫陌窠M合物的例子是聚合物物質(zhì)和蠟。如果合適的話，活性化合物還可以與上述賦形劑中的一種或多種以微囊封的形式使用。用于經(jīng)口給藥的液體劑型包括可藥用的乳劑，溶液劑，懸浮劑，糖漿劑和酏劑。除了活性化合物之外，液體劑型還可包含本領(lǐng)域常用的惰性稀釋劑，諸如水或其它溶劑、增溶劑和乳化劑，諸如例如乙醇，異丙醇，碳酸乙酯，乙酸乙酯，苯甲醇，苯甲酸芐酯，聚乙二醇，1,3-丁二醇，二甲基甲酰胺，油，特別是棉子油，花生油，玉米胚油，橄欖油，蓖麻油和芝麻油，甘油，四氫糠醇，聚乙二醇和山梨聚糖的脂肪酸酯或這些物質(zhì)的混合物，等等。如果希望，組合物還可包括助劑，諸如潤(rùn)濕劑，乳化劑和助懸劑，甜味劑，調(diào)味劑和/或芳香劑。組合物可包括本文定義的載體。適當(dāng)?shù)妮d體包括可溶于循環(huán)系統(tǒng)內(nèi)并且是本文定義的生理學(xué)可接受的大分子。載體優(yōu)選在循環(huán)系統(tǒng)中相對(duì)穩(wěn)定，具有可接受的血漿清除半衰期。這些大分子包括但不限于大豆磷脂，油酸和三油酸山梨坦，優(yōu)選三油酸山梨坦。除了活性化合物之外，懸浮劑可包含助懸劑，諸如乙氧基化異硬脂醇，聚氧乙烯山梨醇和山梨糖醇酐酯，微晶纖維素，偏氫氧化鋁，皂土，瓊脂，黃蓍膠等。如果希望，可以使用助懸劑的混合物。用于直腸給藥的組合物優(yōu)選是栓劑，其可通過(guò)將本發(fā)明的化合物與適當(dāng)?shù)姆谴碳ば缘馁x形劑或載體如可可脂、聚乙二醇或栓劑蠟混合制備，所述賦形劑或載體在通常溫度下是固體但是在體溫下是液體，因此，它們?cè)谥蹦c或陰道腔內(nèi)熔融并釋放活性成分。適用于非腸道注射的組合物可包括生理學(xué)可接受的無(wú)菌的含水或非水的溶液劑，分散劑，懸浮劑或乳劑，以及用于重建成無(wú)菌的可注射溶液或分散液的無(wú)菌粉劑。適當(dāng)?shù)暮头撬妮d體、稀釋劑、溶劑或媒介物的例子包括水，乙醇，多元醇(丙二醇、聚乙二醇、甘油等等)，其適當(dāng)?shù)幕旌衔铮参镉?如橄欖油)和可注射的有機(jī)酯如油酸乙酯?？梢酝ㄟ^(guò)例如使用包衣如卵磷脂，在分散劑的情況下通過(guò)保持所需的粒度和通過(guò)使用表面活性劑保持適當(dāng)?shù)牧鲃?dòng)性。用于本發(fā)明的化合物的局部給藥的劑型包括膏劑，粉劑，噴霧劑和吸入劑?；钚猿煞挚梢栽谶m當(dāng)條件下(如無(wú)菌條件下)根據(jù)需要與生理學(xué)可接受的載體和任何防腐劑、緩沖劑或發(fā)射劑混合。眼科用制劑、眼膏、粉劑和溶液劑也被包含在本發(fā)明的范圍內(nèi)。本發(fā)明的化合物可有利地被配制成適于通過(guò)吸入或鼻內(nèi)給藥的形式，這些形式當(dāng)治療哮喘或過(guò)敏性呼吸系統(tǒng)疾病時(shí)特別有用。在這些制劑中，特定賦形劑的選擇根據(jù)所需劑型的不同而異，即，根據(jù)是否在滴劑中使用溶液或是否作為噴霧劑(氣霧劑)或作為懸浮劑、膏劑或施用在鼻腔內(nèi)的凝膠劑的不同而異?？蔀榇四康氖褂脷忪F劑或加壓包裝。這種氣霧劑包括極細(xì)小的液體或固體顆粒，其通過(guò)加壓氣體推進(jìn)劑被運(yùn)送到治療應(yīng)用部位。當(dāng)在本發(fā)明中采用藥物氣霧劑時(shí)，氣霧劑包含治療活性化合物，其可溶解、34分散或乳化在流體載體和推進(jìn)劑的組合物中。氣霧劑可以是溶液劑、懸浮劑、乳劑、粉劑或半固體制劑的形式。在本發(fā)明中采用的氣霧劑意在用于作為細(xì)小的固體顆粒或作為液體霧通過(guò)患者的呼吸道進(jìn)行給藥?？梢允褂帽绢I(lǐng)域技術(shù)人員已知的各種類型的發(fā)射劑。適當(dāng)?shù)陌l(fā)射劑的例子包括但不限于烴或其它適當(dāng)?shù)臍怏w。在加壓氣霧劑的情況中，劑量單位可通過(guò)提供用于遞送計(jì)量的量的闊來(lái)確定。本發(fā)明還使用噴霧器進(jìn)行，噴霧器是這樣一種裝置，其產(chǎn)生在氣體中具有實(shí)質(zhì)上均一大小的及細(xì)小的液體顆粒。優(yōu)選地，包含本發(fā)明化合物的液體作為小滴被分散。該小滴可以通過(guò)空氣流被運(yùn)送通過(guò)噴霧器的出口管。得到的霧滲透進(jìn)入患者的呼吸道內(nèi)。或者，包含本發(fā)明化合物的粉末組合物，該粉末組合物有或者沒(méi)有潤(rùn)滑劑、載體或推進(jìn)劑，可以對(duì)需要治療的哺乳動(dòng)物給藥。本發(fā)明的該實(shí)施方案可以使用常規(guī)的用于通過(guò)吸入給藥粉末藥物的容器進(jìn)行。例如，化合物和適當(dāng)?shù)姆勰┗|(zhì)如乳糖或淀粉的粉末混合物可以單位劑型的形式存在，例如為囊或筒的形式，例如為明膠或泡罩包裝，粉末可以在吸入器的幫助下從該單位劑型被給藥。對(duì)于氣霧劑給藥，本發(fā)明的化合物可以是具有約1到約20微米，優(yōu)選約3到IO微米大小的微粒化粒子的形式。在具體的實(shí)施方案中，本發(fā)明的化合物通過(guò)脂質(zhì)體或膠束粒子的形式被遞送。當(dāng)非腸道給藥時(shí)，通過(guò)靜脈內(nèi)、皮下或肌肉內(nèi)途徑給藥時(shí)，脂質(zhì)體可以提供被囊封的藥物在延長(zhǎng)時(shí)段內(nèi)的受控的"儲(chǔ)庫(kù)"釋放，并通過(guò)限制在血流中的游離藥物濃度而降低藥物的副作用。脂質(zhì)體可以治療有利的方式改變藥物的組織分布和吸收，并且可通過(guò)降低藥物的給藥頻率而提高治療的便利性。當(dāng)通過(guò)吸入給藥時(shí)，脂質(zhì)體可以根據(jù)脂肪組合物進(jìn)行定制，以在所需的釋放速度下釋放被捕獲的藥物，其半衰期從幾小時(shí)到幾天不等。另外，就藥物在脂質(zhì)體內(nèi)被截留的程度而言，與被迅速吸收進(jìn)入呼吸道和血流有關(guān)的副作用被降低。脂質(zhì)體用于向粘膜組織遞送藥物的附加益處是脂質(zhì)體表面可以經(jīng)過(guò)改性以提供組織粘著性，從而增強(qiáng)脂質(zhì)體在目標(biāo)組織部位的停留時(shí)間。已知幾種制備具有被截留藥物的脂質(zhì)體的方法。在一個(gè)方法中，在燒瓶側(cè)壁上淀積薄膜形式的成泡脂質(zhì)，并通過(guò)添加含水緩沖液進(jìn)行慢慢地再水合。待捕獲的藥物可被包含在脂肪薄膜中(在親脂性藥物的情況中)或含水水合介質(zhì)中(在親水藥物的情況中)。形成多層小泡(MLV)的脂質(zhì)體具有在約0.05到IO微米之間的非均一的大小。MLV可隨后經(jīng)過(guò)加工，一般地通過(guò)均化、聲處理，或膜擠出處理，以產(chǎn)生尺寸更小的和更均一的懸浮液。脂質(zhì)體大小降低到約0.2-0.4微米通常是優(yōu)選的。在該粒度范圍內(nèi)的脂質(zhì)體可以通過(guò)0.45微米厚度過(guò)濾器進(jìn)行過(guò)濾，具有更低的聚集傾向，以及當(dāng)靜脈內(nèi)給藥時(shí)(加比宗)顯示更有利的器官分布。在制備了脂質(zhì)體制劑之后，其可經(jīng)過(guò)凍干，優(yōu)選在脂質(zhì)體的內(nèi)部和外部介質(zhì)中都使用防凍劑。這些防凍劑可選自糖如蔗糖，海藻糖，乳糖，麥芽糖，甘露醇，環(huán)糊精及其衍生物。這些防凍劑還可是聚合物，諸如聚乙二醇，右旋糖酐，聚乙烯吡咯烷酮或羥乙基淀粉。這些防凍劑單獨(dú)或組合使用。當(dāng)冷凍干燥脂質(zhì)體制劑時(shí)還可使用氨基酸。在制備空的脂質(zhì)體期間，通過(guò)使用在水合介質(zhì)中溶解的防凍劑將這些防凍劑引入到脂質(zhì)體內(nèi)的水層中。在外部，在完成藥物負(fù)載過(guò)程之后進(jìn)行過(guò)濾期間引入防凍劑，所需的防凍劑還可通過(guò)借助透濾法進(jìn)行的任何脂質(zhì)體懸浮劑的外部緩沖液交換來(lái)進(jìn)行。脂質(zhì)體懸浮劑被填裝到小瓶中并凍干。也可對(duì)包括本發(fā)明化合物的其它的非脂質(zhì)體制劑進(jìn)行冷凍干燥。助劑應(yīng)用本發(fā)明進(jìn)一步提供了在哺乳動(dòng)物中加強(qiáng)抗原的免疫原性的方法，該方法包括聯(lián)合使用抗原和包括式I化合物的助劑使哺乳動(dòng)物免疫。根據(jù)本發(fā)明，式I化合物作為助劑的使用使得由抗原誘導(dǎo)的保護(hù)性免疫增強(qiáng)和/或持續(xù)時(shí)間延長(zhǎng)。例如，如本文公開(kāi)的，式I化合物與對(duì)應(yīng)于腫瘤或病毒抗原的T細(xì)胞或B細(xì)胞表位或表達(dá)這些抗原的DNA構(gòu)造的肽的聯(lián)合給藥增強(qiáng)了抗原特異性免疫應(yīng)答。式I的助劑可以與抗原，特別是得自感染劑或腫瘤的任何抗原聯(lián)合給藥。如上所述的，本發(fā)明化合物的附著活性至少部分地歸于它們?cè)鰪?qiáng)和/或延長(zhǎng)NKT介導(dǎo)的和樹(shù)狀細(xì)胞介導(dǎo)的抗原特異性Thl型T細(xì)胞應(yīng)答和CD8+T細(xì)胞應(yīng)答的能力。與現(xiàn)有技術(shù)的化合物(包括KRN7000和CRONYIOI)相比，本發(fā)明化合物實(shí)現(xiàn)Thl型免疫應(yīng)答的選擇性誘導(dǎo)(即，實(shí)現(xiàn)NKT細(xì)胞系統(tǒng)的有效率的、特異性的和局部化的活化，特別是IL-12的分泌增強(qiáng)和樹(shù)狀細(xì)胞的有效率的和局部化的二級(jí)活化，而不發(fā)生IL-4分泌增強(qiáng)的情況)，使得在缺乏非特異性細(xì)胞毒性的條件下活化的NKT細(xì)胞的局部化細(xì)胞毒性增加，使得本發(fā)明的化合物在增強(qiáng)各種以低免疫原性為特征的腫瘤和感染性抗原中非常有效。另外，本發(fā)明化合物使NKT細(xì)胞活化依靠CDld分子，該分子在個(gè)體中是單一同態(tài)(monomorphic)的(Porcelli,Adv.Immunol.,59:1-98，1995)，表明本發(fā)明的助劑可用于所有的患者，與MHC單倍型(haplotype)無(wú)關(guān)。根據(jù)本發(fā)明，將抗原和包括式(I)化合物的助劑聯(lián)合給藥?？乖椭鷦┑慕o藥方式包括但不限于經(jīng)口，經(jīng)腸，靜脈內(nèi)，肌肉內(nèi)，腫瘤內(nèi)，皮下，透皮，鼻內(nèi)，經(jīng)粘膜(包括經(jīng)直腸和經(jīng)頰)和吸入方式。優(yōu)選地，使用經(jīng)口，透皮，皮下和吸入或鼻內(nèi)途徑(例如，分別借助固體或液體經(jīng)口制劑，皮膚貼片，或鼻噴霧劑)。靜脈內(nèi)轉(zhuǎn)移可以是局部的或者系統(tǒng)的。包括本發(fā)明化合物的助劑以及抗原的同時(shí)給藥是優(yōu)選的，并通常允許最有效率的免疫刺激。如果包含在兩個(gè)不同的組合物中，則助劑和本發(fā)明的抗原優(yōu)選在相同部位被給藥，并且優(yōu)選在彼此不超過(guò)1厘米內(nèi)的位置給藥。因?yàn)楸景l(fā)明的助劑與多個(gè)不同的抗原結(jié)合發(fā)揮其免疫刺激活性，因?yàn)榭捎糜陬A(yù)防或治療應(yīng)用。因此，在另外的方面，本發(fā)明提供了在哺乳動(dòng)物中治療要求控制Th-l型應(yīng)答的疾病的預(yù)防和/或治療方法，包括對(duì)所述哺乳動(dòng)物聯(lián)合給藥抗原和包括式(I)化合物的助劑。該方法可用于例如預(yù)防和/或治療各種感染以及用于治療各種贅生性疾病。一個(gè)實(shí)施方案是在哺乳動(dòng)物中通過(guò)對(duì)哺乳動(dòng)物給用病毒特異性抗原和助劑(式(I)化合物)增強(qiáng)對(duì)人類免疫缺陷病毒(HIV)感染，丙型肝炎病毒(HCV)感染，乙型肝炎病毒(HBV)感染，皰疹病毒感染，或呼吸道合胞病毒(RSV)感染的免疫應(yīng)答的方法。另一個(gè)實(shí)施方案是在哺乳動(dòng)物中通過(guò)對(duì)哺乳動(dòng)物聯(lián)合給用癌特異性抗原和助劑(式(I)化合物)增強(qiáng)對(duì)前列腺癌或乳癌的免疫應(yīng)答的方法。本發(fā)明的治療和預(yù)防方法可與其它療法聯(lián)合使用。例如，使用腫38瘤特異抗原和本發(fā)明助劑的抗癌療法可與化學(xué)療法和/或放射療法聯(lián)合使用。包括本發(fā)明的助劑的抗病毒疫苗可與IFN-a療法聯(lián)合使用。結(jié)合本發(fā)明的方法，本發(fā)明提供了藥物和疫苗組合物，其包括致免疫有效量的抗原和致免疫有效量的包括式(I)化合物的助劑，以及任選的附加的免疫刺激劑、載體或賦形劑(優(yōu)選所有都是可藥用的)。所述抗原和助劑可以被配制成單一的組合物或配制成兩個(gè)分開(kāi)的組合物。在本發(fā)明的免疫原性(例如疫苗)組合物中使用的抗原可以得自真核細(xì)胞(例如腫瘤或寄生蟲(chóng)以及酵母和其它真菌)，細(xì)菌細(xì)胞，病毒粒子，或其任何部分。當(dāng)免疫原性應(yīng)答所涉及的材料具有較差的抗原性時(shí)(例如合成抗原或亞單位抗原)，其可另外與載體分子如白蛋白或半抗原結(jié)合，使用標(biāo)準(zhǔn)的共價(jià)鍵合技術(shù)，例如，使用幾種市售的試劑盒之一。其可進(jìn)一步包括特異性分子實(shí)體以誘導(dǎo)特異性地針對(duì)APC，諸如志賀菌毒素的e亞單位，具有特異性樹(shù)狀細(xì)胞親合力的肽(HaicheurN，BismuthE,BossetS，Adotevi0,WarnierG,LacabanneV,RegnaultA,DesaymardC，AmigorenaS，Ricciardi-CastagnoliP，GoudB,FridmanWH，JohannesL,TartourE.TheBsubunitofShigatoxinfusedtoatumorantigenelicitsCTXandtargetsdendriticcellstoallowMHCclassI-restrictedpresentationofpeptidesderivedfromexogenousantigens.JImmunol.2000Sep15;165(6):3301-8.)，與DEC-205受體具有親合性的肽(Sevilla等，J.Exp.Med"2000，192:1249-1260)，抗DC-SIGN的抗體(TackenPJ,deVriesIJ,GijzenK,JoostenB,WuD，RotherRP,FaasSJ,PuntCJ,TorensmaR,AdemaGJ,FigdorCG。EffectiveinductionofnaiveandrecallT-cellresponsesbytargetingantigentohumandendriticcellsviaahumanizedanti-DC-SIGNantibody.Blood.2005Aug15;106(4):1278陽(yáng)85)。本發(fā)明的優(yōu)選抗原的例子包括(i)瘧疾特異性抗原，如被照射的合胞體子孢子或合成肽抗原，包括瘧原蟲(chóng)環(huán)子孢子(CS)蛋白質(zhì)的至少一個(gè)39T細(xì)胞和/或B細(xì)胞表位(參見(jiàn)下文)；(ii)病毒蛋白質(zhì)或肽抗原，諸如得自以下的那些流感病毒(例如表面糖蛋白血凝素(HA)和神經(jīng)氨糖酸苷酶(NA)[如土耳其流感HA或禽流感HA);免疫缺陷病毒(例如貓免疫缺陷病毒(FIV)抗原，猿免疫缺陷病毒(SIV)抗原，或人類免疫缺陷病毒抗原(HIV)如gpl20，gp160，pl8抗原，Gagpl7/p24，Tat，Pol，Nef和Env;皰疹病毒(例如糖蛋白，例如得自貓皰疹病毒、馬泡疹病毒、牛皰疹病毒、偽狂犬病病毒、犬皰疹病毒、單純皰疹病毒(HSV，例如HSVtk，gB，gD)、馬立克氏病病毒、土耳其皰疹病毒(HVT)，或巨細(xì)胞病毒(CMV)，或埃-巴病毒的糖蛋白)；肝炎病毒例如乙型肝炎表面抗原(HBsAg));(iii)細(xì)菌抗原，如從革蘭氏陰性細(xì)菌細(xì)胞壁分離出的脂多糖，具有葡萄球菌特異性、鏈球菌特異性、肺炎球菌特異性(例如PspA[參見(jiàn)PCT公報(bào)WO92/14488])、奈瑟氏球菌淋病特異性、疏螺旋體特異性(例如與萊姆病有關(guān)的疏螺旋體的OspA、OspB、OspC抗原，諸如Borreliaburgdorferi,Borreliaafzelli,andBorreliagarinii[例如，參見(jiàn)美國(guó)專利5,523,089;PCT公報(bào)WO90/04411，WO91/09870，WO93/04175，WO96/06165，WO93/08306;PCT/US92/08697;Bergstrom等，Mol.Microbiol"3:479-486，1989;Johnson等，Infect,andImmun.60:1845-1853,1992;Johnson等，Vaccine13:1086-1094,1995;TheSixthInternationalConferenceonLymeBorreliosis:ProgressontheDevelopmentofLymeDiseaseVaccine,Vaccine13:133-135，1995])(iv)和腫瘤特異性蛋白質(zhì)，如ErbB受體MelanA[MARTI]，gplOO，酪氨酸酶，TRP-l/gp75和TRP-2(在黑素瘤中)；MAGE-1和MAGE-3(在膀胱癌、頭頸癌和非小細(xì)胞癌中)；HPVEG和E7蛋白(在宮頸癌中)；粘蛋白[MUC-1](在乳癌、胰腺癌、結(jié)腸癌和前列腺癌中)；前列腺特異性抗原[PSA](在前列腺癌中)；癌胚抗原[CEA](在結(jié)腸癌、乳癌和胃腸癌中)和諸如以下的共有腫瘤特異抗原MAGE-2，MAGE-4，MAGE-6，MAGE-10，MAGE-12，BAGE-1，CAGE-1，2,8，CAGE-3to7，LAGE-1，NY-ESO-l/LAGE-2，NA-88，GnTV，TRP2--INT2和WT-l(Willms，月中瘤基因)。40前述的抗原是示例性的，因?yàn)槭谷烁信d趣的抗原可以來(lái)自任何的動(dòng)物或人的病原體或腫瘤。關(guān)于編碼使人感興趣的病原體由來(lái)的抗原的DNA，可參見(jiàn)例如美國(guó)專利4,722,848;5,174,993;5,338,683;5,494,807;5,503,834;5,505,941;5,514,375;5,529,780;U.K.PatentNo.GB2269820B;禾PPCT公報(bào)WO92/22641;WO93/03145;WO94/16716;WO96/3941;PCT/US94/06652。關(guān)于來(lái)自腫瘤病毒的抗原，也可參見(jiàn)MolecularBiologyofTumorViruses,RNATumorViruses,第2版，由Weiss等編,ColdSpringHarborLaboratoryPress,1982。關(guān)于其它的可用于本發(fā)明組合物中的抗原，參見(jiàn)Stedman'sMedicalDictionary(第24版，1982)。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的組合物提供了抗瘧疾的保護(hù)性免疫，特別是抗約氏瘧原蟲(chóng)(P.yoelii)和主要是人類合胞體惡性瘧原蟲(chóng)(P.falciparum)和間日瘧原蟲(chóng)(P.vivax)的保護(hù)性免疫。這些組合物包括一種或多種以下的組分(i)至少一種的瘧疾特異性肽，其包括優(yōu)選能夠在具有不同的遺傳背景的哺乳動(dòng)物中引發(fā)抗瘧疾的T細(xì)胞應(yīng)答的T細(xì)胞表位(例如，YNRNIVNRLLGDALNGKPEEK[SEQIDNO:1〗或SYVPSAEQI[SEQIDNO:2]約氏癥原蟲(chóng)CS蛋白的T細(xì)胞表位[Renia等，J.Immunol.,22:157-160，1993;Rodrigues等，Int.Immunol.,3:579-585,1991]或(NVDPNANP)n[SEQIDNO:3]或EYLNKIQNSLSTEWSPCSVT[SEQIDNO:4]惡性培原蟲(chóng)CS蛋白的T細(xì)胞表位[Nardin等，Science,246:1603，1989;Moreno等，Int.Immunol"3:997:1991;Moreno等，J.Immunol"151:489，1993]);和/或(ii)至少一種癥疾特異性肽，包括B細(xì)胞表位(例如，(NANP)3[SEQIDNO:5]，B細(xì)胞表位位于falciparum的銫蛋白的重復(fù)區(qū)內(nèi)[Nardin等，J.Exp.Med.,156:20,1982;Nardin等，Ann.Rev.Immunol.,11:687,1993])能夠刺激抗癥疾生成(即使中和)的抗體(例如針對(duì)瘧疾生物體的子孢子階段)。優(yōu)選地，本發(fā)明的免疫原性組合物包括至少一個(gè)B細(xì)胞表位和至少一個(gè)T細(xì)胞表位。B細(xì)胞表位優(yōu)選引發(fā)特異性識(shí)別并結(jié)合癥疾環(huán)子孢子(CS)蛋白的抗體的生成。作為替代或另外地，本發(fā)明的組合物可以包括B細(xì)胞41和/或T細(xì)胞表位，其得自其它瘧疾組分或與其它瘧疾組分反應(yīng)，所述其它瘧疾組分諸如例如間日瘧原蟲(chóng)紅血球分泌性蛋白質(zhì)-1或-2(PvESP-l或PvESP-2)(參見(jiàn)，例如，美國(guó)專利5,874,527)，惡性瘧原蟲(chóng)子孢子表面蛋白叫做被稱作凝血栓蛋白相關(guān)粘著(匿名)蛋白(TRAP)，還叫做子孢子表面蛋白2(SSP2)、LSA-1、hsp70、SALSA、STARP、Hepl7、MSA、RAP-1和RAP-2。在一個(gè)實(shí)施方案中，B細(xì)胞表位和T細(xì)胞表位組分被并入到多樣抗原肽(MAP)中，形成包含高密度表位的合成的大分子多肽。MAP的合成方法是本領(lǐng)域公知的(參見(jiàn)，e.g.,Tam，Proc.Natl.Acad.Sci.USA,85:5409,1988;Tam,Meth.Enzymol.,168:7，1989)。本發(fā)明還包括來(lái)自其它合胞體的B細(xì)胞和T細(xì)胞表位，其它合胞體包括但不限于三日瘧原蟲(chóng)(P.malariae),蛋形瘧原蟲(chóng)(P.ovale),P.reichenowi,諾氏癥原蟲(chóng)(P.knowlesi),食蟹猴瘧原蟲(chóng)(P.cynomolgi),巴西瘧原蟲(chóng)(P.brasilianum),伯氏瘧原蟲(chóng)(P.berghei)和夏氏瘧原蟲(chóng)(P.chabaudi)。這些表位通常包含8到18個(gè)來(lái)自合胞體蛋白的氨基酸殘基。在另一個(gè)具體的實(shí)施方案中，本發(fā)明的優(yōu)選抗原具有p18蛋白的HIV-特異性(諸如T細(xì)胞表位RGPGRAFVTI[SEQIDNO:6])。在具體的實(shí)施方案中，本發(fā)明的抗原可通過(guò)表達(dá)抗原的重組病毒而呈遞。優(yōu)選地，病毒選自重組腺病毒，重組痘病毒，和重組辛德畢斯病毒o當(dāng)用作助劑時(shí)，本發(fā)明的化合物可作為包括抗原的藥物或疫苗組合物的一部分被給藥，或作為單獨(dú)的制劑給藥，單獨(dú)給藥時(shí)，本發(fā)明的化合物與包括抗原的第二組合物聯(lián)合給藥。在任何這些組合物中，本發(fā)明的化合物可以與其它的助劑和/或賦形劑/載體組合使用。這些其它的助劑包括但是不限于油-乳劑和乳化劑基助劑諸如完全弗氏佐劑，弗氏不完全佐劑，MF59，或SAF;礦物凝膠劑，如氫氧化鋁(alum)，42磷酸鋁或磷酸鈣；微生物由來(lái)助劑諸如霍亂菌毒素(CT)，百日咳毒素，大腸桿菌不耐熱腸毒素(LT)，突變毒素(例如LTK63或LTR72)，卡介苗(BCG)，小棒狀桿菌，DNACpG基元，胞壁酰二肽或單磷?；|(zhì)A;微粒助劑如免疫調(diào)節(jié)復(fù)合物(ISCOM)，脂質(zhì)體，可生物降解型微球體或皂角苷(例如QS-21);細(xì)胞因子諸如IFN，，IL-2，IL-12或GM-CSF;合成的助劑諸如非電離的嵌段共聚物，胞壁?；念愃莆?例如N-乙?；?胞壁?；?L-蘇氨?；?D-異谷氨酰胺[thr-MDP]，N-乙?；?去甲-胞壁?；?L-丙氨?；?D-異谷氨酰胺，N-乙?；邗；?L-丙氨?；?D一異谷氨?；?L-丙氨酸2-[l'-2'-二棕櫚?；?sn-甘油基-3-羥基磷?；趸鵠-乙胺)，聚磷腈或合成的多核苷酸，和表面活性物質(zhì)諸如溶血卵磷脂，復(fù)合多元醇，聚陰離子，肽，烴類乳劑，或鑰孔血藍(lán)素(KLH)。優(yōu)選地，這些另外的助劑還可是供人使用為藥學(xué)可接受的。組合物的純度本發(fā)明的化合物優(yōu)選被純化到至少為75%的純度水平，更優(yōu)選地，為至少85%，更優(yōu)選為至少90%，最優(yōu)選為90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%。有效劑量用于治療疾病的有效量可由本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的經(jīng)驗(yàn)方法測(cè)定，諸如通過(guò)確立給藥劑量和給藥頻率的模型，并將一組實(shí)驗(yàn)單位或受試者與模型中的每個(gè)點(diǎn)進(jìn)行比較。確切的對(duì)患者給藥的量將根據(jù)特定的疾病、狀態(tài)和疾病的嚴(yán)重程度，以及患者的物理狀態(tài)的不同而異。任何癥狀或參數(shù)的可測(cè)量的改善可以由本領(lǐng)域的技術(shù)人員進(jìn)行測(cè)定，或者由患者向醫(yī)師報(bào)道。臨床上顯著的緩解或改善意味著對(duì)患者和/或?qū)︶t(yī)師是顯而易見(jiàn)的?？衫斫獾氖?，對(duì)于任何具體患者的具體劑型和劑量水平將根據(jù)包括以下的許多因素的不同而異使用的具體化合物的活性；被治療個(gè)體的年齡、體重、一般健康狀況和性別；給藥時(shí)間和給藥途徑；排泄速率；先前給用的其它藥物；和經(jīng)歷治療的具體疾病的嚴(yán)重程度。藥物的待給藥量可為每次給藥約0.1到約500yg/kg，優(yōu)選每次給藥約0.5到約lOOixg/kg，最優(yōu)選每次給藥約1到約50ug/kg。可理解，本發(fā)明的藥物組合物自身不必包含全部量的有效治療病癥的藥物，因?yàn)檫@些有效量可以通過(guò)給藥多個(gè)劑量的該藥物組合物實(shí)現(xiàn)。例如，本發(fā)明的化合物可被配制成膠囊或片劑，各自優(yōu)選包含0.06-3.00毫克的本發(fā)明的化合物。包含本發(fā)明化合物的組合物的毒性和治療效能可以根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)的藥學(xué)方法在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中測(cè)定，例如，通過(guò)測(cè)定LD50(導(dǎo)致群體半數(shù)死亡的劑量)和ED50(在半數(shù)群體中治療有效的劑量)。毒性效果和治療效果之間的劑量比是治療指數(shù)，并且其以LD50/ED50比表示。更優(yōu)選具有較大治療指數(shù)的組合物。盡管可以使用具有毒性副作用的治療劑(例如，當(dāng)治療幾種類型的癌或危急生命的感染時(shí))，但是在設(shè)計(jì)將該免疫原性組合物對(duì)準(zhǔn)特異性部位(例如介導(dǎo)免疫應(yīng)答的淋巴組織，腫瘤或支持感染復(fù)制的器官)的遞送系統(tǒng)時(shí)應(yīng)當(dāng)小心，從而使得對(duì)其它組織和器官的潛在損害最小化，并從而降低副作用。如上所述的，得自動(dòng)物研究的數(shù)據(jù)可以用于定制供人類使用的劑量范圍。本發(fā)明化合物在人中的治療有效劑量?jī)?yōu)選位于包括ED50的一定范圍的循環(huán)濃度內(nèi)，而有很少的或沒(méi)有毒性。根據(jù)所使用的劑型和給藥途徑的不同，該劑量可以在該范圍內(nèi)變化。理想地，應(yīng)當(dāng)使用單一劑量。實(shí)施例以下實(shí)施例說(shuō)明了本發(fā)明，而不限制本發(fā)明的范圍。I.合成例A.中間體的制備用于形成脂肪鏈-C(O)-Q的中間體可以如以下的合成路線1A和IB中所示制備。路線1AoAO,AlkCB路線IBo02NH、卜0人Alk~~^、AlkD一OH'O-Alk07NCT、Alk-B在路線1A和1B中，每次出現(xiàn)的Alk獨(dú)立的表示垸基鏈，使得脂肪酸鏈中碳原子的總數(shù)為23-32個(gè)碳原子。在路線1A中，在DIC存在的條件下使用對(duì)硝基酚將羧酸(A)轉(zhuǎn)化成對(duì)硝基酚酯(B)。同樣地，使用氫化鈉和適當(dāng)?shù)柠u代垸進(jìn)行處理，將烯醇(E)轉(zhuǎn)化成烯-醚(F)。最后，通過(guò)(B)與適當(dāng)?shù)南┗衔镌诘诙鶪mbbs催化劑存在的條件下反應(yīng)將對(duì)硝基酚酯(B)轉(zhuǎn)化成最終的脂肪酸(D)或(G)。中間體(D)或(G)可以通過(guò)本領(lǐng)域已知的方法純化，諸如通過(guò)硅膠上的柱色譜法純化。45具體的中間體的合成如以下的路線2A-2E中所示。路線2A路線2B路線2C<formula>formulaseeoriginaldocumentpage47</formula>化合物2:向起始的H^—烯酸(4.1g,22.2mmol,1.1當(dāng)量)在無(wú)水DCM(120ml)中的溶液中加入對(duì)硝基酚(2.9g,20.9mmol)，在DIC(3.6ml，1.2當(dāng)量)和4-DMAP(60mg)存在的條件下，反應(yīng)混合物在室溫?cái)嚢柽^(guò)夜，當(dāng)t丄c(PE-EA6:1,Rf:0.52)顯示反應(yīng)完成時(shí)，將懸浮液用DCM稀釋，通過(guò)硅藻土過(guò)濾，濾液經(jīng)過(guò)濃縮，得到殘余物，殘余物通過(guò)閃柱色譜法純化(Petroether-CHCl32:1)，得到酯2(6.23g,98%)。薩R(300MHz,CDC13)8.31(d,J=9.2Hz,2H),7-32(d，J=9.2Hz,2H),5.84(m,1H，H-IO)，5.03(m,2H,H-ll),2.64(t,J=7.5Hz,2H,H陽(yáng)2),2.09(m，2H，H-9)，1.80(m,2H,H-3),1.48-1.35(m,10H,H-4-8),3.96(brs,1H),3.87(dd,J=9.8,2.4Hz，1H),3.51(m,2H),2.50(d,J=2.1Hz,1H).13CNMR(75MHz,CDC13):171.1,155.5,145.2，139.0,125.1，122.3，114.2,34.4，33.8,29.3,29.2,29.1,29.0,24.9.化合物2a:向起始的H^—烯酸在甲醇中的溶液中加入DCC和4-DMAP。反應(yīng)混合物在室溫下攪拌過(guò)夜。化合物4:向化合物2(197mg,0.646mmol)和1-二十烯(850mg,4.2當(dāng)量)在無(wú)水CH2C12(15ml)中的攪拌的溶液中加入第二代Grubbs催化劑(65mg,12mol%)，混合物回流1天，當(dāng)t丄c(PE-DCM1:1，Rf:0.40)顯示酯2耗盡時(shí)，將反應(yīng)真空濃縮，然后使用硅膠進(jìn)行柱色譜純化(PE-DCM2:1)，得到標(biāo)題化合物4(190mg，53%,反式/順式4:1)。!HNMR(500MHz，CDC13)S.27(d，J=9.1Hz，2H),7.28(d,J=9.1Hz,2H),5.35(m,2H，H-IO，H-ll)，2.59(t,J=7.5Hz,2H,H-2),2.02(m，4H，H-9，H-12),1.76(pent.,J=7.5Hz,2H，H-3)，1.42-1.25(m，42H,H-4-8，H-13-H畫28)，0.88(t，J=6.7Hz,3H，H-29).13CNMR(125MHz，CDC13):171.3,155.6,145.3，130.5,130.2,125.2,122.4,34.3,32.6,32.6,31.9,29.7,29.7,29.6，29.5，29.4,29.3,29.2,29.1,29.0，24.7,22.7，14.1.化合物4a:向攪拌的化合物2a和l-二十烯在無(wú)水CH2C12中的溶48液中加入第二代Gmbbs催化劑，混合物回流l天，然后將反應(yīng)真空濃縮，然后經(jīng)歷硅膠柱色譜法，得到標(biāo)題化合物4a?；衔?:在0°C，在10分鐘內(nèi)，向"-H^—碳烯醇(2ml，98%,9.74mmol)在無(wú)7KTHF(15ml)和DMF(5ml)中的溶液中加入氫化鈉(60%的礦物油，584mg，1.5當(dāng)量)，然后加入TBAI(80mg)和1-溴戊垸(1.82ml,1.5當(dāng)量)，回流下攪拌過(guò)夜后，t丄c(PE-EA6:l)顯示醇耗盡，混合物用DCM稀釋，用水淬滅，水相用DCM(3x)提取，用飽和碳酸氫鈉洗滌，然后用鹽水洗滌，有機(jī)相經(jīng)過(guò)干燥(硫酸鈉)，濃縮，殘余物通過(guò)閃柱色譜法純化(石油醚-DCM，3:1)，得到醚6(2.21g,99%,Rf:0.12，使用PE-DCM3:1)。以與6相同的方式制備化合物7，收率為94%。6:腿R(500MHz，CDC13)5.81(m,1H,H-10),4.95(m,2H,H-ll),3.38(t,J=7.0Hz,4H,H-l，H-l，)，2.03(m,2H，H-9),1.56(m,4H,H-2，H-2'),1.37-1.27(m,16H,H-3-8;H-3，-4，)，0.88(t，J=6.9Hz,3H,H-5').13CNMR(125MHz,CDC13):138.9，114.1，71.0，70.6，33.8,31.9,29.8,29.5，29.5，29.4，29.1,28.9,26.2,19.4,14.1.化合物8:向酯2(190mg,0.623mmol)和醚6(200mg,0,833mmol,1.3當(dāng)量)在無(wú)水氯仿(20ml)中的攪拌的溶液中加入第二代Grubbs催化劑(36mg,7mol%)，混合物回流1天，反應(yīng)真空濃縮，并經(jīng)歷硅膠柱色譜法(PE-DCM3:2)，得到標(biāo)題化合物8(174mg,84%,反式/順式4:1,Rf:0.16，使用PE-DCM1:1)。與8相同的方式制備了化合物9,收率為81%。8:力畫R(500MHz,CDC13)8.26(d,J=9.0Hz,2H),7.27(d,J=9.1Hz，2H),5.37(m，2H,H-10,H-ll)，3.38(t,J=6.7Hz,4H，H-20，H-22)，2.58(t，J=7.5Hz，2H,H-2)，1.96(m,4H,H-9，H-12),1.75(pent"J=7.4Hz，2H,H-3)，1.56(m,4H,H-19,H-23),1.39(m，2H,H-4)，1.32-1.25(m,24H,H-5-8,H-13-18,H-24-25),0.88(t，J=6.7Hz，3H,49H-26)."C雇R(125MHz,CDC13):171.1，155.6,145.3，130.5,130.2，125.2,122.4,71.0，34.3,32.6，32.7,29.8，29.7,29.6，29.5,29.3，29.2,29.0，26.2，25.8,24.7，22.6,14.1.化合物13:將化合物4a溶解在DCM/MeOH(l:l)中，向溶液中加入5%的炭載鈀(30摩爾％)。反應(yīng)混合物在氫氣中攪拌，直到反應(yīng)通過(guò)TLC分析測(cè)定完成。然后將反應(yīng)真空濃縮，然后經(jīng)歷硅膠柱色譜法，得到標(biāo)題化合物13?；衔?4:將甲酯13(147mg,0.32mmol)溶解在10mliPrOH/THF(l:l)中，向其中加入在水(2ml)中的100mgNaOH，混合物在6(TC攪拌5小時(shí)，tlc(PE/EA12:1)顯示水解完全。在用2NHC1中和后，溶液直接進(jìn)行真空濃縮，向上述脂肪酸殘余物在DCM(10ml)中的溶液中加入對(duì)硝基酚(160mg，0.5mmol)，在DCC(160mg)和4-DMAP(35mg)存在的條件下，反應(yīng)混合物在室溫?cái)嚢柽^(guò)夜，t丄c(PE-EA10:1)顯示反應(yīng)完成。懸浮液用DCM稀釋，向其中加入少量的硅膠。蒸發(fā)后，將殘余物通過(guò)閃柱色譜法純化(PE/EA20:1)，得到酯14(154mg,86%)。NMR(500MHz,CDC13)8.27(d,J=9.1Hz,2H)，7.28(d,J=9.1Hz，2H),2.59(t，J=7.5Hz,2H,H隱2),1.76(pent.,J=7.5Hz,2H,H-3),1.41(pent"J=7.0Hz,2H，H-4),1.37國(guó)1.22(m,48H,H-5toH-28),0.88(t，J=7.0Hz,3H，H-29).13CNMR(125MHz，CDC13):171.3,155,6，145.3,125.2，122.4，34.4,33.7,31.9，30.2,29.7，29.7,29.6,29.6,29.5,29.4，29.4,29.2,29.2,29.1,26.7，24.8，22.7,14.1.使用Julia-Lythgoe-Kocienski偶聯(lián)化學(xué)法合成具體中間體的備選方法如路線2E中所示。使用該方法，市售的溴代烷18與市售的苯并噻唑硫醇19反應(yīng)，在發(fā)生溴化物位移后形成羧酸20。羧酸20上的硫醚然后用mCPBA氧化形成砜21。砜21然后與醛23(其從市售的醇22，使用例如Swern條件合成)在Julia-Lythgoe-Kocienski條件下在六甲基二硅氮烷鋰存在的條件下反應(yīng)。這將提供烯羧酸24。然后，當(dāng)用對(duì)硝基酚在DCC和DMAP存在的條件下處理時(shí)，羧酸24可被直接轉(zhuǎn)換成不飽和的對(duì)硝基苯基酯4，或者，通過(guò)(l)使用例如5%的炭載鈀在氫存在的條件下進(jìn)行氫化和(2)使用在DCC和DMAP存在的條件下用對(duì)硝基酚處理生成的飽和酸25，羧酸24可轉(zhuǎn)化成對(duì)硝基苯基酯15。路線2E使用Julia-Lythgoe-Kocienski化學(xué)法作為C-C成鍵步驟合成4和14的備選方法。&b、化市售19市售DCCDMAP對(duì)硝基酚B.糖脂的制備本發(fā)明的糖脂可以根據(jù)以下路線3所示的方法制備,UHDMSNTS51路線3在路線3中，Z是-CI^CH-，0，-O-Alk-CH-CH-或-CH-CH墨O-;和每次出現(xiàn)的Alk獨(dú)立地表示烷基鏈，使得脂肪酸鏈中碳原子的總數(shù)為23-32個(gè)碳原子。將化合物(H)脫保護(hù)(即，除去BOC和異亞丙基保護(hù)基)，優(yōu)選用三氟乙酸和三乙基硅烷在二氯甲垸中處理，并與脂肪酸酉旨(D)或(G)反應(yīng)以生成化合物(I)。然后將化合物(I)脫保護(hù)，例如，使用鈉和氨，以生成烯連接的化合物(J)和例如在炭載鈀上使用氫氣進(jìn)行還原以生成烷連接的化合物(K)。化合物可用本領(lǐng)域已知的方法純化，諸如通過(guò)閃柱色譜法?；衔?H)可以使用在堿不穩(wěn)定的糖醛(L)和砜(M)之間的一鍋式Julia-Lythgoe-Kocienski反應(yīng)制備，如下面的路線3a所示。路線3a化合物(H)的-CH2-CH2-連接的類似物化合物(U)的備選合成如下面的路線3b中所示。路線3bTTIP，D-(-)-DfPT,TBHPCH2CI2,-20C,18h在路線3b中，醛(O)來(lái)自烯(N)。通過(guò)Wittig化學(xué)法進(jìn)行同系化，然后將醇還原得到烯丙基醇，用于使用大家公認(rèn)的Sharpless環(huán)氧化的處理得到環(huán)氧化物(Q)，疊氮化鈉開(kāi)環(huán)，并反轉(zhuǎn)，得到被保護(hù)的氨基醇醛(S)，然后進(jìn)行Grignard化學(xué)法得到醇(T)。具體糖脂的合成如下面的路線4所示。53路線4酰胺形成的一般過(guò)程化合物10(53mg,0.054mmol)溶解在DCM(4ml)中，在0。C向其中加入適當(dāng)量的三氟乙酸(0.2ml)和三乙基硅烷(O.lml)，在室溫?cái)嚢?小時(shí)后，混合物直接真空濃縮，向上述殘余物在THF中的溶液中加入脂肪酸4的對(duì)硝基苯基酯4(31mg,1.03當(dāng)量和催化量的DMAP?；旌衔锶缓笤谑覝叵聰嚢?小時(shí)，t丄c(石油醚-EtOAc,2:1)顯示酰胺化完成，混合物被蒸發(fā)并用閃柱色譜法純化(石油醚-EtOAc-CHC13，2.5:1:0.5)，得到化合物11(39mg,兩步收率為58%)?；衔飈l(E-酰胺鏈)&NMR(500MHz,CDC13):7.37-7.23(m，2054H,4Ph)，5.97(dd,1H,Jy=15.3Hz，J2,3=6.7Hz,H-2)，5.89(m,2H，NH，H-l)，5.37(s，2H,H-IO，，，H陽(yáng)ll，，)，4.75和4.53(2d，2H，J=11.9Hz,PhCH2),4.73(t，1H，J3，N=7.0Hz，H-3)，4.66(s,2H,PhCH2)，4.65和4.60(2d,2H,J=12.2Hz,PhCH2),4.57(brs,1H,H-l，)，4.50和4.44(2d,2H,J=11.9Hz,PhCH2)，3.99(brs,2H，H-2，，H-5，)，3.89(s,1H，H-4，)，3.69(dd,1-H,J",6'b=9.2Hz,J6、5=7.3Hz,H-6，a),3.59(dd，1H,Jy,2'=8.2Hz,J3',4，=2.1Hz,H-3，)，3.48(dd,1H,J6'b,6'a=10.3Hz,J6'b,5=4.7Hz，H陽(yáng)6，b),3.45(br,2H，H-4,H-5),2.99(d，1H,J=7.0Hz,OH-4),2.16(t，2H,J2"，3"=7.3Hz，H陽(yáng)2"),1.95(brs，4H,H-9",H-12，，)，1.79(d,J=6.1Hz,OH-5)，1.62(m,2H,2xH-3"),1.42-1.18(m,68H，2xH-4"到2xH-8，，，2xH-13，，到2xH-28",2xH-6至U2xH-18),0.88(t，6H,J=6.9Hz,3xH-19，3xH-26");13C雇R(125MHz，CDC13)173.1,138.4,138.3，138.2，138.0，130.4，130.2,129.8,128.4,128.3,128.1，127.8，127.8,127.7，127.6，127.4，126.2，115.6,78.2,76.9，76.7，74.5,73.6，73.2,73.3，73.1,72.9,68.7，53.7,36.8,33.8,32.6,31.9,29.7,29.7,29.5，29.4，29.2,25.7，25.7,22.7,14.1?；衔?3(E/Z酰胺鏈4:l):!HNMR(500MHz,CDC13):7.34誦7.22(m，20H，4Ph),5.97(dd,1H,J2;1=15.6Hz,J2,3=6.5Hz,H-2),5.91-5.86(m，2H,麗，H-l),5.37(s,2H,H-10",H-ll，，)，4.76禾卩4.54(2d，2H,J=11.6Hz,PhCH2),4.72(t,1H，J3'NH*3,2=7.0Hz,H-3),4.67(s，2H，PhCH2)，4.65禾口4.60(2d,2H，J=12.2Hz，PhCH2)，4.57(brs,1H,H-l，)，4.50禾口4.44(2d,2H,J=11.9Hz，PhCH2),4.00(brs，2H,H-2，，H-5，)，3.90(t,1H,J=2.6Hz,H-4,)，3.69(dd,1-H,J6、6'b=9.9Hz,J6'a,5=7.4Hz，H-6，a),3.59(dd,1H，J3',2'=8.4Hz，J3,,4,=5.9Hz,H-3，)，3.50(dd,1H,J6'b,6'a=10.2Hz,J6'b,5=4.5Hz,H-6，b)，3.46(br，2H，H-4,H-5),3.39(t，4H,J=6.7Hz,H-20，，，H-22"),2.98(brs,1H,OH-4),2.16(t,2H,J2",3"=7.5Hz,H-2"),1.95(brs,4H,H-9",H-12")，1.80(brs，OH-5),1.62(m,2H，2xH陽(yáng)3")，1.56(m，4H,H-19",H-23")，1.42誦1.20(m,54H,2xH-4，，到2xH陽(yáng)8",2xH-13，，至lJ2xH-18，，，2xH-24，，至IJ2xH-26，，，2xH-6至lj2xH-18),0.88(t,6H,J=6.9Hz,3xH-19,3xH-27，，)；"CNMR(125MHz，CDC13)173.1，138.5,138.3,138.2，138.1,130.4,130.3,129.8，128.4128.4,128.3，128.3，128.1，127.8,127.8,127.7,127.6，127.6，127.5，78.2，76.9,76.7，74.7,73.76,73.3,73.2，73.0,71.0,53.8,36.9，33,8,32.6,31.9，31.7，29.8,29.8,29.7,29.7,29.7，29.6,29.6，29.5，29.5,29.4,29.3，29.2,29.2,29.2，26.2，25.9，25.7,22.7,22.6,14.1，14.0?；衔锓词?(A-l):!H畫R(500MHz,口比啶-d5):58.67(d,1H，J=8.7Hz，NH)，6.92(m，2H，H-l,H-2),6.86(brs,1H，2，-0H)，6'57(brs,1H4匿0H),6.52(brs,1H，3，-0H)，6.43(brs，1H，6，-0H),6.35(brs,1H,4，-0H),6.28(brs,1H,5匿OH),5.93(m，1H，H國(guó)3)，5.53(m,2H,H-10",H-ll，，)，5.15(m,1H,H-l，)，4.84(dd,1H,J3'，r=9.1Hz,J=6.1Hz，H-2，)，4'61(brs,1H,H-4，)，4.58(t，1H，J=6.0Hz,H-5，)，4.37(m,2H,H-6a，，H-6b，)，4.28(m,3H，H-3，，H-4,H-5,),2.45(t,2H,J=7.5Hz,H-2"),2.31(m，1H,H-6a),2.06(m,4H，H國(guó)9，'，H陽(yáng)12"),1.93(m,2H，H-7a:H-6b),1.83(m,2H,H-3，，)，1.70(m，1H,H-7b),1.44-1.17(m,62H,H-8到H-18,H-4，，到H-8，，，H隱13，，到H-28"),0.88(t,6H,J=6.8Hz，3xH-19,3xH-29")。A-2:&NMR(500MHz,卩比啶-d5):8.55(d,1H,J=9.5Hz,NH),6.90(m，2H，H-l,H-2),6.71(brs，1H,2，陽(yáng)OH),6.44(brs，1H，4-OH),6.37(brs,1H,3，-OH)，6.29(brs，1H，6，-OH),6.22(d,1H,J=4.0Hz,4，-OH),6.13(brs,1H，5-OH),5.89(m,1H，H-3),5.15(m,1H,H-l，),4.84(m,1H,H-2，)，4.60(brs,1H，H國(guó)4')，4.56(dt,1H,J=5.9Hz，1.7Hz,H-5，)，4.41(m,2H,H-6a，，H-6b，)，4.29(m,3H,H-3，)，4.26(m,2H，H-4,H-5，)，2.45(t,2H,J=7.5Hz,H-2，，)，2.28(m,1H,H隱6a),1.93(m，2H，H-7a，H-6b),l'84(m,2H,H-3"),1.71(m,1H,H-7b)，1.46-1.17(m，72H，H-8至UH-18,H-4"至IJH-28，，)，0.89(t,6H，J=6.9Hz,3xH-19,3xH-29").13CNMR(125MHz,吡啶-d5)175.1,132.4，127.8,78.7,76.8，74.9,73,1,73.0,71.3,70.6，63.0,54.3,37.4，34.9,34.5,32.5,30.9,30.7,30.5，30.5,30.4,30.3,30.3,30.2,30.2,30.2,30.0，27.5，26.9,26.8，23.3,14.6.A-3:MS(ES，m/z):896.7(M+H)+;!HNMR(500MHz,卩比啶-d5):8.39(d,1H，J=8.8Hz,NH)，6.61(d,1H，J=4.0Hz,2,-0H)，6.45(d,1H,J=4.8Hz,4-0H),6.33(m,2H,3'-OH,6'-OH),6.12(d,1H,J=4.1Hz,4'國(guó)OH),5.94(d,1H,J=4.2Hz,5國(guó)OH)，5.53(m，2H,H-ll"，H陽(yáng)12")，5.13(m,1H,H-3)，4.72(m,1H,J3',2'=9.3Hz，H-2')，4.52(m,3H,H-l，,H-4',H陽(yáng)6a，)，4.36(m,1H,H-6b，)，4.23(m,4H,H隱3',H-4,H-5,H-5'),2.72(m，1H，H陽(yáng)2a)，2.58(m，1H，H-la),2.46(m,2H，H-2，')，2.33(m,2H,H-6a,H-lb),2.31(m,1H,H-lb),2.22(m,1H,H-2b),2.06(m,4H,H國(guó)10"，H-13"),1.94(m,2H，H-7a，H-6b)，1.85(m,2H,H-3"),1.71(m,1H,H-7b)1.48-1.17(m,64H，H隱8到H隱18,H-4，，到H陽(yáng)9",H陽(yáng)14，，至UH-28'，),0.89(t,6H,J=6.8Hz,3xH-19,3xH-29，，);13CNMR(125MHz，B比啶-d5)173.8,131.2，131.1,78.9,77.4，74.2,73.1,72.6，71.0，70.8,63.1，53.1,37.4,34.9,33.3,32.5，30.8，30.6，30.5,30.4，30.4，30.3,30.3,30.2，30.2,30.2,30.1,30.0,30.3,29.9,27.0,26.9,26.9,23.3,23.0,14.6.A-5(禾口A-4):&NMR(500MHz，P比啶-d5):58.49(d，1H，J=9.0Hz,NH),6.73(d,1H,J=4.7Hz，2，-OH),6.56(d,1H,J=4.7Hz,4-OH),6.46(m，2H,3'-OH，6'-OH)，6.24(d,1H，J=4.4Hz,4'-OH),6.07(d，1H,J=4.7Hz,5-OH),5.13(m,1H，H-3)，4.72(dd，1H,J3',2'=8.7Hz，J口=5.5Hz,H-2')，4.50(m，3H,H-l，，H-4'，H隱6a，)，4.36(dd,1H,J6a、6b，=11.3Hz,J5',6b'=4.5Hz，H-6b，)，4.23-4.19(m,4H,H-3，，H-4,H-5,H-5'),3.39(m,4H,H隱20",H-22"),2.71(m,1H,H-2a),2.58(m,1H,H-la),2.45(m，2H,H-2'，)，2.30(m,2H,H-6a,H國(guó)lb),2.19(m，1H，H陽(yáng)2b),I.91(m,2H,H-7a，H-6b),1.83(m,2H,H-3")，1.68(m,1H,H-7b),1.60(m,4H,H-19"，H-23")，1.51-1.18(m,56H(or58HforA隱4)，H國(guó)8到H-18，H-4"到H國(guó)18"，H-24"-H國(guó)25，，(or-H-26"forA-4)),0.85(t,6HJ=6.9Hz,3xH-19，3xH誦26，，)；13CNMR(125MHz,批啶匿d5)173.8,572007878.8,77.5,74.1,73.0,72.5,71.3,71.0，70.7，63.1,53.0,37.3,34.8,32.5，32.3，30.7，30.6,30.5,30.4,30.3，30.2,30.2,30.0，27.0,26.9,26.6，23.3,14.6.A-6:使用如上所述關(guān)于化合物A-l的相同的程序制備化合物A-6，不同之處在于化合物10與化合物16反應(yīng)形成被芐基保護(hù)的A-6。然后使用鈉在氨中除去苯甲基，得到標(biāo)題化合物A-6。A-7:使用如上所述關(guān)于化合物A-l的相同的程序制備化合物A-7，不同之處在于化合物10與對(duì)硝基苯基-co-苯基庚酸酯反應(yīng)形成被節(jié)基保護(hù)的A-7。然后使用鈉在氨中除去苯甲基，得到標(biāo)題化合物A-7。對(duì)硝基苯基-co-苯基庚酸酯的制備為將等摩爾量的對(duì)硝基酚與苯基庚酸在二氯甲垸中在一當(dāng)量的DCC和5%DMAP存在的條件下反應(yīng)。在反應(yīng)完成后，濾出雙環(huán)已基脲的沉淀物，真空除去二氯甲垸，然后將物質(zhì)迅速地在硅膠上進(jìn)行色譜法進(jìn)行純化。II.生物實(shí)施例實(shí)施例1:測(cè)定當(dāng)體內(nèi)給藥本發(fā)明化合物時(shí)被釋放的Thl-l型和Th2型細(xì)胞因子的動(dòng)力學(xué)模式。材料和方法供試化合物a-GalCer(KRN7000)由KirinBrewery(Gumma,Japan)合成，a-C-GalCer(CRONYIOI)如SchmiegJ，YangG,FranckRW，TsujiM.2003中所述合成。通過(guò)自然殺傷細(xì)胞配體a-半乳糖苷神經(jīng)酰胺的C-糖苷提供了優(yōu)異的對(duì)瘧疾和黑素瘤的保護(hù)作用。JExpMed198:1631-1641。58<formula>formulaseeoriginaldocumentpage59</formula>其它供試的合成C-糖脂如上所述被合成。體內(nèi)化合物給藥從Taconic購(gòu)買5到6周齡的雌性C57BL/6小鼠和BALB/c小鼠。每個(gè)糖脂在100%DMSO中以lmg/毫升儲(chǔ)存。小鼠靜脈內(nèi)注射在200u1無(wú)菌磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)中稀釋的1iig的每種糖脂。在所示時(shí)間點(diǎn)下，從每只動(dòng)物收集血清，通過(guò)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(ELISA)計(jì)算血清中IFN-y，IL-4禾卩IL-12的濃度。通過(guò)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(ELISA)進(jìn)行細(xì)胞因子評(píng)價(jià)使用ELISA試劑盒(eBioscience，SanDiego，CA)計(jì)算IFN-y，IL-4和IL-12的血清濃度。簡(jiǎn)要地講，根據(jù)制造商指導(dǎo)將96孔平底ELISA板(NUNC)用捕獲抗體涂覆并在4。C下溫育過(guò)夜。板用PBS+0.05%的吐溫20(PBS-T)洗滌，然后使用制造商提供的阻斷液在室溫下溫育1小時(shí)以阻斷非特異性結(jié)合部位。用PBS-T洗滌后，將以1:10稀釋的血清加入到孔中并在室溫下溫育2小時(shí)。然后將板在室溫下與生物素化檢測(cè)抗體進(jìn)行溫育，洗滌，與結(jié)合于辣根過(guò)氧化物酶(HRP)的抗生物素蛋白在室溫下溫育30分鐘，洗滌，并最后與四甲基聯(lián)苯胺底物溶液在黑暗中在室溫下溫育10分鐘?？贵w，抗生物素蛋白-HRP，和底物溶液全部根據(jù)制造商指導(dǎo)進(jìn)行稀釋。使用2.0N的硫酸使反應(yīng)停止，并且通過(guò)將每個(gè)孔內(nèi)在450納米下的吸光度與己知標(biāo)準(zhǔn)樣品比較測(cè)量每個(gè)孔中的細(xì)胞因子的濃度。結(jié)果在兩個(gè)不同的遺傳背景下，即在C57BL/6小鼠和BALB/c小鼠中，測(cè)量Thl型和Th2型細(xì)胞因子的水平。給藥以下的化合物A=化合物(A-1反式-構(gòu)象異構(gòu)體)，B=化合物(A-2)，C=化合物(A-3)，D=化合物(A-4)，E=化合物(A-5)，Z=對(duì)照(單獨(dú)的PBS)，CRONY=a-C-GalCer，KRN=a-GalCer，GCK109(A-1反式-構(gòu)象異構(gòu)體)，GCK151(A-1順式構(gòu)象異構(gòu)體)，GCK152(A-7)。在給藥所述化合物后，在O、2、6、12、24、48和72小時(shí)測(cè)量細(xì)胞因子的水平，Thl型細(xì)胞因子IFN-y和IL-12的水平分別概括在圖2A-C和3A-C中。Th2型細(xì)胞因子IL-4的水平概括在圖4A-C中。相應(yīng)的數(shù)值也被提供在以下的表1-6中。表7提供了關(guān)于各種化合物的IFN-Y/IL-4和IL-12/IL-4的比，其可用作所述化合物具有選擇性刺激Thl型免疫應(yīng)答的能力的指標(biāo)。如同以下圖和表可知的，當(dāng)與a-GalCer(KRN)比較時(shí)，幾種供試的本發(fā)明的合成C-糖脂產(chǎn)生(i)Thl型細(xì)胞因子IFN和IL-12二者的相當(dāng)?shù)幕蚋叩乃胶脱娱L(zhǎng)的分泌，和(ii)低得多的Th2型細(xì)胞因子IL-4的水平。該效果在化合物A-l(反式-構(gòu)象異構(gòu)體)，A-2和A-5的情況中特別明顯。本發(fā)明化合物選擇性誘導(dǎo)高水平的IL-12Thl型細(xì)胞因子而不誘導(dǎo)Th2型細(xì)胞因子的能力表明了這些化合物是Thl型免疫應(yīng)答(其是局部的并與樹(shù)狀細(xì)胞的二級(jí)活化有關(guān))的有效的選擇性刺激物。因此本發(fā)明的化合物當(dāng)直接使用或作為助劑使用時(shí)可用于治療各種要求控制Thl型應(yīng)答的疾病。<table>tableseeoriginaldocumentpage61</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage62</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage63</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage64</column></row><table>200表3:對(duì)BALB/c小鼠給藥糖脂時(shí)的IL-12水平?；衔镄∈笾晷r(shí)試驗(yàn)1試驗(yàn)2平均值SD總計(jì)A-5BALB/c05550274233153.5112.436158717491668114.551312224633672806.5792.66672411017214143.8406248019497137.178772153076.5108.18734949A-3BALB/c055502362118240172.53416135614131384.540.3050912325627653010.5347.18942413418816138.1837748000072015175.5106.77314878A-2BALB/c05550214177494.752316708074237251.5242.5376121160010000108001131.37124454431442.516.2634648013366.594.04521886723442222.5310.41994A-lBALB/c0555020239119.5168.99856706468986981117.379712751364897001724.0773242993133069.89949548000014467209748.568.58936265<table>tableseeoriginaldocumentpage66</column></row><table>表4:對(duì)C57BL/6小鼠給藥糖脂時(shí)的IL-12水平。<table>tableseeoriginaldocumentpage67</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage68</column></row><table>表5:對(duì)BALB/c小鼠給藥糖脂時(shí)的IL-4水平。化合物小鼠株小時(shí)試驗(yàn)1試驗(yàn)2平均值SD總計(jì)A-5BALB/c02727270212219015648.083266607567.510.606612484345.53.535534243943412.828427484139401.414214723.43.43.40382A-3BALB/c027272702273342307.548.790376565354.52.12132124452485.656854244444440484838437.0710687212.2312.2312.230538A-2BALB/c02727270226339733094.7523169016412752.325912485149.52.1213224434845.53.53553448423940.52.12132722220623A-lBALB/c027272702358505431.5103.944768510695.514.84924125250511.41421424404341.52.12132484642442.828427724440696<table>tableseeoriginaldocumentpage70</column></row><table>200780027560.4表6:對(duì)C57BL/6小鼠給藥糖脂時(shí)的IL-4水平化合物小鼠株小時(shí)試驗(yàn)1試驗(yàn)2平均值SD總計(jì)C57BI7A-5604646460228333330835.355346751038919.79899124248454.242641244654505.656854484448462.82842772696064.56.363961649C57BI7A-36046464602398754576251.736598672.519.09188124355498.48528124496657.512.0208248545554.50.707107725462585.656854915C57BI7A-26046464602286600443222.031569512511021.213212456856.516.26346244658528.485281486052565.65685472596461.53.535534826C57BI7A-l604646460291412621088246.073269012810926.870061244665515.5563524575656.50.707107484741444.24264171<table>tableseeoriginaldocumentpage72</column></row><table>表7:供試糖脂的IL-12/IL4和IFN-Y/IL隱4的比(基于表1-6中的值計(jì)算)。<table>tableseeoriginaldocumentpage73</column></row><table>實(shí)施例2:實(shí)施例測(cè)定本發(fā)明的新型的合成C-糖脂抑制瘧疾感染和腫瘤轉(zhuǎn)移的能力對(duì)小鼠i.m.、s.c.、i.v或i.p.給藥單一劑量的本發(fā)明的合成的C-糖脂GCK109(A-1反式-構(gòu)象異構(gòu)體)，GCK151(A-1順式構(gòu)象異構(gòu)體)和GCK127(A-2)或?qū)φ栈衔顲RONY=a-C-GalCer禾卩KRN=a-GalCer。在免疫后2-8周測(cè)定化合物的保護(hù)作用。為了試驗(yàn)對(duì)瘧疾感染的保護(hù)作用，使用從被感染蚊子的解剖唾液腺中獲得約氏瘧原蟲(chóng)子孢子用于攻擊。通過(guò)靜脈內(nèi)(i.v.)注射75個(gè)活的子孢子到尾靜脈內(nèi)攻擊用合成的C-糖脂或?qū)φ栈衔锩庖叩男∈笠詼y(cè)定血液階段瘧疾感染的發(fā)展。在攻擊后4天開(kāi)始直到攻擊后第17天，從每個(gè)小鼠獲得每天的周圍血液涂片并在顯微鏡下檢査血液階段寄生蟲(chóng)的存在。如果在檢査期間觀察到至少一個(gè)一個(gè)血液階段寄生蟲(chóng)，則認(rèn)為小鼠對(duì)于寄生蟲(chóng)血癥呈陽(yáng)性。通過(guò)i.v.注射10,000個(gè)活的子孢子到尾靜脈內(nèi)攻擊用合成的C-糖脂或?qū)φ栈衔锩庖叩男∈?，以測(cè)定肝臟-階段瘧疾感染的發(fā)展。在40-42小時(shí)之后，通過(guò)使用定量實(shí)時(shí)RT-PCR方法測(cè)量小鼠肝臟中的約氏,原蟲(chóng)特異性18SrRNA分子而測(cè)定攻擊的結(jié)果。所述方法如Bmna-Romero等，Int.J.Parasitol.31,1449-1502,2001的教導(dǎo)。簡(jiǎn)短而言，在提取的RNA逆轉(zhuǎn)錄之后，生成cDNA,并且其量通過(guò)在GeneAmp5700序列檢測(cè)系統(tǒng)(PEAppliedBiosystems,FosterCity,CA)中使用的實(shí)時(shí)PCR分析cDNA的量。使用ABIPrism引物表達(dá)軟件(PEBiosystems),使用約氏瘧原蟲(chóng)(17XNL)18SrRNA序列，定制設(shè)計(jì)引物和熒光探針。例如，可使用引物5，-GGGGATTGGTTTTGACGTTTTTGCG國(guó)3，(54nM)[SEQIDNO:7]和5，-AAGCATTAAATAAAGCGAATACATCCTTAT-3，(60nm)[SEQIDNO:8]，以及被引入到PCR反應(yīng)緩沖液(PEBiosystems,FosterCity,CA)中的dsDNA特異性染料SYBRGreenI，以測(cè)定生成的PCR產(chǎn)物。反應(yīng)溫度分布是在95'C持續(xù)10分鐘，然后是35個(gè)循環(huán)的在95'C變性15秒和在6(TC退火/延伸1分鐘。使用從肝臟樣品獲得的CT值以及使用用已知量的質(zhì)粒18ScDNA產(chǎn)生的標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得的CT值，通過(guò)線性回歸分析，測(cè)定在該檢驗(yàn)中被檢測(cè)的寄生蟲(chóng)由來(lái)的18ScDNA分子的確切的量。用合成的C-糖脂或?qū)φ栈衔锩庖叩男∈筢槍?duì)黑素瘤肺轉(zhuǎn)移發(fā)展的防護(hù)水平如下測(cè)定首先靜脈內(nèi)給用5"04個(gè)懸浮在DMEM(補(bǔ)充有10。/。FCS)中的同基因的B16黑素瘤細(xì)胞攻擊小鼠。攻擊后兩周，處死小鼠，取出肺，計(jì)數(shù)轉(zhuǎn)移性的小瘤的數(shù)目，如Fujii等，Natl.Immunol.3，867-874(2002)所述。本發(fā)明所有的合成的C-糖脂在保護(hù)小鼠免受活瘧疾攻擊和黑素瘤轉(zhuǎn)移的侵害中表現(xiàn)有力的活性。實(shí)施例3:測(cè)定本發(fā)明的新型的合成的C-糖脂的助劑作用。對(duì)小鼠i.m.、sx.、i.v或i.p.給藥單一劑量的本發(fā)明的合成的C-糖脂GCK109(A-1反式-構(gòu)象異構(gòu)體)，GCK151(A-1順式構(gòu)象異構(gòu)體)和GCK127(A-2)或?qū)φ栈衔顲RONY二a-C-GalCer和KRN=a-GalCer，以及亞最佳劑量(lx107p.f.u.)的表達(dá)P.yoeliiCS蛋白質(zhì)的重組腺病毒，AdPyCS(Rodrigues等，J.Immunol"158:1268-1274,1997)。在免疫后2-8周，處死一些小鼠，并取出它們的脾以獲得淋巴細(xì)胞，從而通過(guò)ELISPOT測(cè)定法測(cè)量癥疾特異性CD8+T細(xì)胞應(yīng)答的水平。單獨(dú)用AdPyCS免疫的小鼠用作對(duì)照。從用AdPyCS和合成的C-糖脂或?qū)φ栈衔锩庖叩男∈蠡驅(qū)φ招∈?只用AdPyCS免疫)獲得的脾細(xì)胞經(jīng)過(guò)測(cè)定，以確定以下的數(shù)目(i)生成IFN，的CS特異性CD8+T-細(xì)胞(Thl細(xì)胞)和(ii)生成IL-4的CS-特異性CD8+T細(xì)胞(Th2細(xì)胞)。使用ELISPOT測(cè)定法(Miyahira等，J.Immunol.Methods1995;181:45-54)測(cè)定CS特異性CD8+T細(xì)胞的數(shù)目。簡(jiǎn)短而言，將96孔硝化纖維板(Millipone，Bedford,MA)用生物素化的抗小鼠IFN-Y或抗小鼠IL-4單克隆抗體(mAb)涂覆并在室溫下過(guò)夜。在用PBS洗滌幾次后，連續(xù)稀釋的脾細(xì)胞在培養(yǎng)基中在存在或缺乏與CD8+表位對(duì)應(yīng)的肽的條件下在37"C并在5%(302培養(yǎng)箱中在涂有抗小鼠IFN-y或抗小鼠IL-4mAb的板中溫育20-24小時(shí)。在溫育后，將板用PBS-T洗滌。然后將板在室溫下分別與生物素化的抗小鼠IFN-y或抗小鼠IL-4mAb在板中溫育3小時(shí)。將板用PBS-T洗滌，然后加入抗生物素蛋白鏈菌素-AP結(jié)合物并在室溫下溫育1小時(shí)。在另外用PBS-T洗滌后并用蒸餾水洗滌一次后，將斑點(diǎn)用一步BCIP/NPT試劑顯色。使用免疫斑點(diǎn)讀出器(CellularTechnologyLtd.,Cleveland,Ohio)計(jì)數(shù)斑點(diǎn)。通過(guò)i.v.注射活的約氏瘧原蟲(chóng)子孢子攻擊免疫的小鼠后2-8周，測(cè)定達(dá)到的抗疙保護(hù)水平。非免疫小鼠用作對(duì)照。如上面實(shí)施例2所述的，通過(guò)測(cè)量寄生蟲(chóng)血液和肝臟階段測(cè)量保護(hù)水平。用75個(gè)活的約氏瘧原蟲(chóng)子孢子攻擊后從第3-14天每天獲得的Giemsa染色血涂片，通過(guò)顯微鏡檢驗(yàn)監(jiān)控血液階段。用10，000個(gè)約氏瘧原蟲(chóng)子孢子攻擊后第42小時(shí)從小鼠取出肝臟測(cè)量肝臟階段，如上面實(shí)施例2所述，通過(guò)實(shí)時(shí)RT-PCR測(cè)量合胞體rRNA測(cè)定肝臟內(nèi)的寄生蟲(chóng)。本發(fā)明所有的合成的C-糖脂顯示有力的助劑作用。實(shí)施例4:在實(shí)驗(yàn)性的人體外NKT細(xì)胞系統(tǒng)中測(cè)定本發(fā)明化合物的細(xì)胞因子模式。材料和方法不成熟的樹(shù)狀細(xì)胞(DC)和CD14-PBMC的生成。使用與抗CD14單克隆抗體結(jié)合的磁珠(Miltenyibiotec,Auburn,CA)從leukopak分離CD14+細(xì)胞。然后在300U/mlGM-CSF(R&Dsystems,Minneapolis,MN)和100U/mlIL-4(R&Dsystems,Minneapolis,MN)存在的條件下溫育3天后，從CD14+細(xì)胞生成不成熟的樹(shù)狀細(xì)胞(DC)。CD14細(xì)胞用作外周血單核細(xì)胞(PBMC)用于以下實(shí)驗(yàn)。使用PBMC和不成熟的DC進(jìn)行體外IFN和IL-4ELISA。用3000rads照射后，將5X104個(gè)不成熟的樹(shù)狀細(xì)胞與5乂105個(gè)同基因的76CD14-PBMC在以下物質(zhì)的存在下在96孔板中進(jìn)行共同培養(yǎng)糖脂(即，GCK109[A-l反式-構(gòu)象異構(gòu)體]，GCK151[A-l順式構(gòu)象異構(gòu)體]，GCK127[A國(guó)2]，GCK152[A-7]和對(duì)照化合物CRONY=a-C-GalCer和KRN=a-GalCer)。在溫育18小時(shí)后，根據(jù)制造商的指導(dǎo)，通過(guò)ELISA(BDPharmingen，SanDiego，CA)測(cè)定培養(yǎng)物上清液中IFN-y或IL-4的濃度。使用PBMC和不成熟的DC進(jìn)行體外IFN-y禾BIL-4ELISPOT測(cè)定。將96孔硝化纖維板(MilititerHA,Millipore)用包含在75u1PBS中的yg/ml的抗人干擾素YmAb(Mabtech，OH)涂覆。在室溫下溫育過(guò)夜后，將孔反復(fù)洗滌并用培養(yǎng)基在37"阻斷1小時(shí)。在用3000rads照射后，將5乂104個(gè)不成熟的樹(shù)狀細(xì)胞與5X1()S個(gè)同基因的CD14—PBMC在100ng/ml的以下各種糖脂存在的條件下在ELISPOT板中在37'C和5%C02中溫育22-26小時(shí)(即GCK109[A-l反式-構(gòu)象異構(gòu)體]，GCK151[A-l順式構(gòu)象異構(gòu)體]，GCK127[A-2]，GCK152[A-7〗，和對(duì)照化合物CRONY=a-C-GalCer和KRN=ct-GalCer)。在用PBS充分洗滌板后，加入在PBS-T中的0.05%吐溫20(PBST)，1ug/ml的生物素化的抗人干擾素YmAb(Mabtech，OH)，并在4。C下溫育過(guò)夜。在用PBST洗滌后，板與100ul的過(guò)氧化物酶標(biāo)記的抗生物素蛋白鏈菌素(Kirkegaard&PerryLaboratories,根據(jù)制造商的指導(dǎo)進(jìn)行稀釋)溫育。在溫育1小時(shí)后將斑點(diǎn)顯色，通過(guò)添加包含1mg/m的33'二氨基聯(lián)苯胺鹽酸鹽二水合物(DAB)+5yg/10ml的30%H202的50mMTrisHC1pH7.5顯色。10到15分鐘后，使用立體顯微鏡確定相當(dāng)于分泌IFN-Y的細(xì)胞的斑點(diǎn)的數(shù)目。為了確定生成表位特異性IL-4的NKT細(xì)胞的數(shù)目，進(jìn)行了相似的過(guò)程，不同之處在于使用了一對(duì)抗人IL-4mAbs(Mabtech,OH)。結(jié)果在ELISA測(cè)定中，如圖5A-B所示，在與不成熟的DC體外共同培養(yǎng)18小時(shí)后，與KRN(a-GalCer)相比，GCK109(A-1反式-構(gòu)象異構(gòu)體)，GCK151(A-1順式構(gòu)象異構(gòu)體)，GCK127(A-2)和GCK152[A-7]活化PBMC以生成相似水平的IFNa-以及IL-4。在ELISPOT測(cè)定中，如圖6A-B所示，GCK151(A-1順式構(gòu)象異構(gòu)體)和GCK152[A-7]—致地刺激高頻率的PBMC以分泌IFN-y和IL-4，并且被活化的PBMC的頻率類似于被KRN刺激的頻率。GCK109(A-1反式-構(gòu)象異構(gòu)體)和GCK127(A-2)還能夠在與不成熟的DC共同培養(yǎng)后第24小時(shí)刺激相似頻率的PBMC。上述數(shù)據(jù)還證明供試的本發(fā)明的C-糖脂一方面與CDld相互作用，另一方面與恒定的NKT受體相互作用。這是重要的指標(biāo)本發(fā)明的化合物在人體內(nèi)具有活性。然而，有可能所述的人體外細(xì)胞系統(tǒng)不允許以預(yù)測(cè)估計(jì)多種化合物體內(nèi)性能的方式與該多種化合物的活性進(jìn)行比較。例如，這一體外細(xì)胞系統(tǒng)沒(méi)有考慮到一些影響真實(shí)的體內(nèi)生物應(yīng)答的重要因素包括化合物體內(nèi)降解的速率不同，以及化合物效果的不同動(dòng)力學(xué)。另外，在該實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)中被檢驗(yàn)的相互作用限于NKT細(xì)胞與CDld抗原遞呈細(xì)胞。在體內(nèi)，其它DC和NK細(xì)胞回干擾以進(jìn)一步釋放IL-2和IFN。最后，對(duì)照化合物KRN與本發(fā)明的更具親脂性的供試化合物更可溶于含水溶液中，這使得對(duì)照化合物在體外在細(xì)胞培養(yǎng)基中試驗(yàn)時(shí)具有更大的生物利用度，并且這可反映其中供試化合物可具有更延長(zhǎng)的作用的體內(nèi)的情況。承承氺本發(fā)明的范圍不由本文所述的具體實(shí)施方案限制。實(shí)際上，除了本文所述之外，可對(duì)本發(fā)明進(jìn)行多種改進(jìn)對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員而言從上文描述和附圖是顯而易見(jiàn)的。這種改進(jìn)意在屬于權(quán)利要求的范圍內(nèi)。另外可理解的是所有的值是近似值，并且為描述性目的被提供。貫穿本申請(qǐng)使用專利、專利申請(qǐng)、出版物、產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)和方案，其公開(kāi)全文并入本文用于所有目的。權(quán)利要求1.式(I)的化合物及其可藥用鹽或酯，其中X是O或NH；Y是-CH2-CH2-或-CH＝CH-；當(dāng)Y是-CH2-CH2-時(shí)，Q是C23-C32烯基或-R1-O-R2；當(dāng)Y是-CH＝CH-時(shí)，Q是C27-C32烷基，C23-C32烯基，-R1-O-R2或被苯基取代的C6-C8烷基；R1和R2是被取代的或未被取代的烷基或烯基，從而組合的R1和R2含23-32個(gè)碳原子；R3是-OH或單糖和R4是H，或R3是H和R4是-OH或單糖；和R5是氫或單糖。2.權(quán)利要求1的化合物，其中X是O，115是H，ie是OH和R4是H。3.權(quán)利要求1或2的化合物，其中Y是-CH二CH-，并且化合物具有反式構(gòu)型。4.權(quán)利要求3的化合物，其中Q是-CsHw-CHK:H-d8H37。5.權(quán)利要求1或2的化合物，其中Y是-CH二CH-和Q是C27-C28垸基或C28-C32烯基。6.權(quán)利要求5的化合物，其中Q是具有1、2或3個(gè)雙鍵的C28-C32烯基。7.權(quán)利要求6的化合物，其中Q是具有1個(gè)雙鍵的C28-C32烯基。8.權(quán)利要求7的化合物，其中雙鍵位于從羰基起第七個(gè)碳原子到從羰基起第十二個(gè)碳原子之間。9.權(quán)利要求8的化合物，其中雙鍵位于從羰基起第七個(gè)碳原子到從羰基起第十個(gè)碳原子之間。10.權(quán)利要求9的化合物，其中雙鍵位于從羰基起第九個(gè)碳原子到從羰基起第十個(gè)碳原子之間。11.由下式表示的權(quán)利要求1的化合物及其可藥用的鹽和酯<formula>formulaseeoriginaldocumentpage3</formula>12.權(quán)利要求1、2或3的化合物，其中Y是-CH:CH-和Q是陽(yáng)R、0-R2。13.權(quán)利要求12的化合物，其中-RLO-W中的O原子位于從羰基起第一個(gè)碳原子到第二十五個(gè)碳原子之間。14.權(quán)利要求13的化合物，其中-Ri-0-R中的0原子位于從羰基起第十八個(gè)碳原子到第二十五個(gè)碳原子之間。15.權(quán)利要求14的化合物，其中Q是-C!9H38-0-C6H！3。16.由下式表示的權(quán)利要求1的化合物及其可藥用的鹽和酯:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>17.由下式表示的權(quán)利要求1的化合物及其可藥用的鹽和酯:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>18.由下式表示的權(quán)利要求1的化合物及其可藥用的鹽和酯:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>19.由下式表示的權(quán)利要求1的化合物及其可藥用的鹽和酯:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>20.由下式表示的權(quán)利要求1的化合物及其可藥用的鹽和酯:21.藥物組合物，包括權(quán)利要求1到20中任一項(xiàng)的化合物以及可藥用的載體。22.權(quán)利要求21的組合物，其還包括抗原。23.權(quán)利要求22的組合物，其中抗原是病毒抗原或腫瘤抗原。24.選擇性誘導(dǎo)哺乳動(dòng)物中的Thl型免疫應(yīng)答的方法，該方法包括對(duì)哺乳動(dòng)物給用有效量的權(quán)利要求1到20中任一項(xiàng)的化合物。25.權(quán)利要求24的方法，其中化合物誘導(dǎo)IL-12的分泌增強(qiáng)。26.在有需要的哺乳動(dòng)物中治療要求控制Th-l型應(yīng)答的疾病的方法，該方法包括對(duì)哺乳動(dòng)物給用有效量的權(quán)利要求1到20中任一項(xiàng)的化合物。27.權(quán)利要求26的方法，其中疾病選自感染，癌，細(xì)胞增殖病癥和自身免疫疾病。28.權(quán)利要求27的方法，其中疾病是感染性非病毒病。29.權(quán)利要求27的方法，其中疾病是感染性病毒病。30.權(quán)利要求29的方法，其中疾病是HIV感染。31.權(quán)利要求29的方法，其中疾病是HCV感染。32.權(quán)利要求29的方法，其中疾病是HBV感染。33.權(quán)利要求29的方法，其中疾病是瘧疾感染。34.權(quán)利要求27的方法，其中疾病是癌。35.權(quán)利要求34的方法，其中疾病是前列腺癌或黑素瘤。36.權(quán)利要求26的方法，其中疾病是哮喘或變態(tài)反應(yīng)。37.加強(qiáng)哺乳動(dòng)物的抗原的免疫原性的方法，該方法包括聯(lián)合使用抗原以及包括權(quán)利要求1到20中任一項(xiàng)的化合物的助劑使哺乳動(dòng)物免疫。38.權(quán)利要求37的方法，其中抗原和助劑同時(shí)給藥。39.權(quán)利要求38的方法，其中抗原具有HIV特異性。40.權(quán)利要求38的方法，其中抗原具有瘧疾特異性。41.制備式0O的化合物及其可藥用的鹽或酯的方法<formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula>X是O或NH;Y是-CH2-CH2-或-Cr^CH-;當(dāng)Y是-CH2-CH2-時(shí)，Q是C23-C32烯基或-R、0-R2;當(dāng)Y是-CHK:H-吋，Q是C27-C32垸基，C23-C32烯基，-Ri-O-R2或被苯基取代的CVC8垸基；W和W是被取代的或未被取代的垸基或烯基，從而組合的Ri和R2含23-32個(gè)碳原子；RS是-OH或單糖和W是H，或R是H和R4是-OH或單糖；和RS是氫或單糖，該方法包括以下步驟(a)使式(II)的化合物反應(yīng)以首先除去Pgl，其中Q的定義如上所述；和(b)隨后將Pg2和Pg3脫保護(hù)，和任選地將與環(huán)狀基團(tuán)鄰接的碳-碳雙鍵氫化以形成式(I)化合物，并且任選地將得自步驟(b)的化合物轉(zhuǎn)化成其可藥用的鹽或酯。42.權(quán)利要求41的方法，其中式(II)的化合物是然后用式(III)的對(duì)硝基苯基酯處理:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage8</formula>43.由下式表示的化合物及其可藥用鹽或酯:反式-(A-l》44.由下式表示的化合物及其可藥用鹽或酯:成(A-l)45.由下式表示的化合物及其可藥用鹽或酯:(A-2)'46.由下式表示的化合物及其可藥用鹽或酯:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage9</formula>全文摘要本發(fā)明涉及新型的合成C-糖脂，其選擇性地誘導(dǎo)以IL-2分泌增強(qiáng)和樹(shù)狀細(xì)胞活化升高為特征的Th1-th1型免疫應(yīng)答。本發(fā)明的化合物因此可直接使用和作為助劑使用，用于治療感染，癌，細(xì)胞增殖病癥和自身免疫疾病。文檔編號(hào)C07H7/02GK101500580SQ200780027560公開(kāi)日2009年8月5日申請(qǐng)日期2007年5月22日優(yōu)先權(quán)日2006年5月22日發(fā)明者楊廣利,津路森屋,理查德·弗蘭克,陳光武申請(qǐng)人:紐約大學(xué);紐約市立大學(xué)研究基金會(huì);紐約市亞倫戴蒙德艾滋病研究中心