專利名稱：：含有腎素抑制劑與葉酸類化合物的藥物組合物及其用途的制作方法
技術(shù)領域：
：本發(fā)明涉及一種含有腎素抑制劑與葉酸類化合物的藥物組合物及其用途，屬于藥學領域。
背景技術(shù)：
：腎素-血管緊張素系統(tǒng)(RAS)是最重要的血壓調(diào)節(jié)系統(tǒng)之一，它由一系列激素及相應的酶組成，通過對血容量和外周阻力的控制，調(diào)節(jié)人體血壓、水和電解質(zhì)平衡。RAS不僅存在于血液循環(huán)系統(tǒng)，許多組織中存在有局部RAS，在許多生理和病理過程中起著重要作用?？筊AS的藥物包括腎素抑制劑、血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑(ACEI)、血管緊張素受體拮抗劑(ARB)、酸固酮受體拮抗劑。ACEI已被大規(guī)模的臨床試驗證實具有降低血壓，逆轉(zhuǎn)心室肥厚的作用，降低心肌梗死及充血性心力衰竭病死率。ARB阻斷RAS的最后一個環(huán)節(jié)，臨床試驗證實能夠降低血壓，減輕大血管動脈粥樣硬化和降低心血管病的發(fā)生率和病死率。但是，由于ACEI和ARB均不能完全阻斷RAS，且ACEI對RAS的特異性不高，可能影響緩激肽和前列腺素的代謝，可引起咳嗽等不良反應，因此，研究RAS的第一環(huán)節(jié)——腎素阻滯藥有著重要意義。腎素(門冬氨酸蛋白酶)催化RAS的始動環(huán)節(jié)，并且對血管緊張肽原有高度的特異性，即血管緊張肽原為其唯一的催化底物，所以腎素抑制劑長期被作為一個研究的目標。早期的腎素阻滯藥，如依那吉侖(enalkiren)，瑞米吉侖(remikiren)，依那吉侖(enalkiren)，瑞米吉侖(remikiren)，地特吉侖(ditekiren),特拉吉侖(terlakiren),占吉侖(zankiren)。2001年Ho.mann-LaRoche研制的SPP600系列和2005年Speedel研制的SPP800系列屬非月太類第二代腎素抑制劑，由于充分利用了基于結(jié)構(gòu)的藥物設計理論，化合物活性和藥動學特性得到很大改善,在動物實驗中具有較高的生物利用度。阿利吉侖(Aliskiren,SPP100)也是第二代口服非肽類腎素抑制劑，能有效降低血壓和治療相關心血管疾病。阿利吉侖與內(nèi)源性腎素競爭性地緊密結(jié)合，作用機制主要為阿利吉侖呈劑量依賴性地降低腎素活性，阻止AngI和AngII的生成，不會引起血管緊張肽原水平的增高;降低血漿和尿中的酸固酮水平；促進尿鈉排泄，而尿鉀排泄不變。阿利吉侖結(jié)構(gòu)在EP678503A中被詳細公開，具有以下化學式(1):<formula>formulaseeoriginaldocumentpage3</formula>式(I)的腎素抑制劑化學名稱為2(S),4(S),5(S)，7(S)-N-(3-氨基-2，2-二甲基-3-氧代丙基)-2，7-二(1-甲基乙基)-4-羥基-5-氨基-8-[4-甲氧基-3-(3-甲氧基-丙氧基)苯基]-辛酰胺，優(yōu)選其半富馬酸鹽。有關含有阿利吉侖腎素抑制劑的專利情況如下公開號為CN1655819A的專利公開了一種包含腎素抑制劑、鈣通道阻滯劑和利尿藥的藥物組合物，申請人為諾瓦提斯公司；公開號為CN1656058A的專利公開了一種腎素抑制劑與ARB，ACEI,e受體阻滯劑，鈣通道阻滯劑，醛固酮合成酶抑制劑，醛固酮受體拮抗劑，利尿劑的聯(lián)用組合；公開號為CN1882528A的專利公開了一種有機化合物，涉及腎素抑制劑與降糖藥，降脂藥，減肥藥，降壓藥的聯(lián)用組合；公開號為CN1474690A的專利公開了一種用于治療心血管疾病的含有腎素抑制劑的協(xié)同性藥物聯(lián)合形式，涉及一種腎素抑制劑或其可藥用鹽的聯(lián)合形式，包含腎素抑制劑與ATr受體拮抗劑，HMG-Co-A還原酶抑制劑，ACEI,鈣通道阻滯劑，醛固酮合酶抑制劑，醛固酮拮抗劑，利尿劑的聯(lián)用組合。阿利吉侖在治療高血壓及其相關疾病中還存在不足之處，阿利吉侖單用治療會刺激一種代償性反射，部分抵消血壓降低，從而阻礙血壓降低到理想值。阿利吉侖最常見的不良反應為乏力、胃腸道反應或頭痛。阿利吉侖對靶器官保護方面的療效也有待提高。由于治療高血壓病人的主要目的是最大限度地降低心血管病的死亡和病殘的總危險，適當?shù)陌⒗獊鰪头街苿┎粌H可以減少阿利吉侖的不良反應，提高降壓療效，還可提高阿利吉侖對高血壓患者的靶器官保護作用，降低高血壓引起的心腦血管事件的風險性。因此，開發(fā)適當組方的阿利吉侖復方制劑具有重要的臨床意義。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是克服腎素抑制劑降壓藥存在的上述不足，提供一種在靶器官保護方面優(yōu)于腎素抑制劑的復方降壓藥，而副作用不增加的藥物組合物。為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案一種藥物組合物，包括(1)藥用劑量的腎素抑制劑；(2)藥用劑量的葉酸類化合物；(3)藥劑學上可接受的載體。上述腎素抑制劑為阿利吉侖(Aliskiren)，地特吉侖(ditekiren)，特拉吉侖(terlakiren)，占吉侖(zankiren),SPP600,或SPP800。上述腎素抑制劑優(yōu)選阿利吉侖。上述腎素抑制劑的藥用劑量為100600mg。上述藥用劑量的葉酸類化合物為葉酸、亞葉酸鈣或左旋亞葉酸鈣，劑量為0.2-1.6mg,優(yōu)選0.4-1.Omg。我們運用本發(fā)明藥物對高血壓治療的研究過程中，著重針對靶器官保護和降低心腦血管事件危險性方面。這是因為若高血壓不進行有效控制，持續(xù)幾年后可引起全身細小動脈硬化，變得僵硬且缺乏彈性，管腔變窄，輸送至組織的血流速度減慢，造成心、腦、腎、眼等重要臟器損害而不能正常工作。高血壓引起的靶器官損害，包括左室肥厚、良性小動脈性腎硬化癥、惡性小動脈性腎硬化癥、腎功能衰竭、視網(wǎng)膜動脈硬化、或高血壓眼底病變。心腦血管事件包括心絞痛、心肌梗死、心力衰竭、腦梗塞、或腦出血，其中腦梗塞和腦出血合稱腦卒中。血壓控制不好，會出現(xiàn)靶器官損害，如果血壓得不到進一步的控制，嚴重時導致心腦血管事件的發(fā)生。因此，治療高血壓病人的主要目的是最大限度地降低心腦血管病的死亡和病殘的總危險，靶器官保護與降壓并舉，是高血壓治療的核心。研究發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明提供的藥物組合物不僅具有降壓作用還具有靶器官保護作用；當將腎素抑制劑與葉酸類化合物合用時，能協(xié)同增強靶器官保護作用，且其保護作用強于單用腎素抑制劑降壓藥，也強于單用葉酸類化合物，差異均具有統(tǒng)計學意義。進一步，在實驗中，我們發(fā)現(xiàn)，當將腎素抑制劑與葉酸類化合物合用時，能協(xié)同降低心腦血管事件危險性，且其作用強于單用腎素抑制劑降壓藥，也強于單用葉酸類化合物，差異均具有統(tǒng)計學意義。因此，本發(fā)明提供了上述藥用劑量的腎素抑制劑和藥用劑量的葉酸類化合物組成的藥物組合物在制備用于預防、治療或延緩高血壓的藥物中的用途；本發(fā)明提供該藥物組合物在制備用于預防、治療或延緩高血壓引起的靶器官損害的藥物中的用途，高血壓引起的靶器官損害，包括左室肥厚、良性小動脈性腎硬化癥、惡性小動脈性腎硬化癥、腎功能衰竭、視網(wǎng)膜動脈硬化、或高血壓眼底病變。本發(fā)明還提供該藥物組合物在制備用于降低高血壓引起的心腦血管事件危險性的藥物中的用途；其中降低心腦血管事件危險性是指降低心絞痛、心肌梗死、心力衰竭、腦梗塞、或腦出血的發(fā)生率，降低心腦血管事件危險性還指降低腦卒中的發(fā)生率。該藥物組合物中還含有藥劑學可接受的載體，可制成普通口服制劑，包括普通片劑、膠囊、顆粒劑等，制成片劑時所述藥學上可接受的載體包括有助于將活性化合物配制成藥用制劑的賦形劑和輔藥，如淀粉、微晶纖維素、無機鹽類、蔗糖、糊精、乳糖、糖粉、葡萄糖、氯化鈉、半胱氨酸、檸檬酸和亞硫酸鈉等的一種或幾種物質(zhì)的組合物，屬于本領域常識。該藥物組合物的劑型包括但不限于普通片劑、雙層片劑、多層片劑、緩釋片劑、單室控釋片劑、雙室控釋片劑、微孔型控釋片劑、舌下含片、口腔速崩片、分散片、腸溶片、顆粒劑、丸劑、腸溶膠囊、延遲釋放片、定時/位釋放片、普通膠囊、緩釋膠囊、控釋膠囊、含有微丸或小片的膠囊、含有微丸或小片的PH依賴型膠囊、顆粒劑、口服液、膜劑或貼劑等劑型，其中優(yōu)選片劑、膠囊或顆粒劑。根據(jù)本發(fā)明，藥物組合物也可以是指含有兩個獨立藥物的藥盒。當"藥物組合物"是指含有兩個獨立藥物的藥盒時，上述"組合藥盒"是一種盒狀容器，內(nèi)置多種劑量形式的藥物組合，及其服用說明書，"組合藥盒"更適用于個體化用藥；第一個藥物為腎素抑制劑，第二個藥物中含有葉酸類化合物。該藥盒中的兩個獨立的藥物可以伴隨給藥，也可以在同一種藥物制劑中或者在不同的藥物制劑中按順序給藥。本發(fā)明的有益效果是本發(fā)明提供的藥物組合物具有明顯協(xié)同作用，其協(xié)同作用在于能協(xié)同保護高血壓引起的靶器官損害及協(xié)同降低心腦血管事件危險性。因此，本發(fā)明提供了上述藥用劑量的腎素抑制劑和藥用劑量的葉酸類化合物組成的藥物組合物在制備用于預防、治療或延緩高血壓、高血壓引起的靶器官損害的藥物中的用途，本發(fā)明還提供該藥物組合物在制備用于降低高血壓引起的心腦血管事件危險性的藥物中的用途。通過本發(fā)明的實施，提供給患者這種特定用途的藥物組合物可以提高患者依從性，使患者服藥方便，降低醫(yī)療費用，具有較好市場前景。下面結(jié)合具體實施方式對本發(fā)明做進一步說明，藥理作用的實驗支持詳見以下具體實施方式。具體實施例方式實施例1:阿利吉侖+葉酸對自發(fā)性高血壓大鼠(SHR)降壓及靶器官損害的保護作用Sffil大鼠，體重150180g，平均分為6組，每組20只，分別為模型組、阿利吉侖+葉酸(15+0.04mg/kg)組、阿利吉侖+葉酸(15+0.08mg/kg)組、阿利吉侖+葉酸(15+0.16mg/kg)組、阿利吉侖(15mg/kg)組、葉酸(0.08mg/kg)組，另取20只正常大鼠作為正常對照組。給予等容量0.5%CMC溶液，每周稱重一次，根據(jù)體重調(diào)整藥量，連續(xù)給藥20周。檢測指標-(1)分別測定給藥前和給藥后不同時間鼠尾收縮壓，比較各組間血壓差別。(2)收集尿液，用比濁法測定尿蛋白、放免法測定24h尿al微球蛋白；取血，測定血肌酐、計算肌酐清除率(Ccr)。(3)心肌羥脯氨酸測定取左心室游離壁心肌組織，制備成10%的心肌組織勻漿，按羥脯氨酸測試盒說明書，消化法測定心肌羥脯氨酸含量，按膠原蛋白含量二羥脯氨酸含量X7.46，換算成膠原蛋白含量。(4)心肌組織常規(guī)切片，天狼星紅-苦味酸染色，測量心肌膠原容積分數(shù)(CVF)和心肌血管周圍膠原面積(PVCA)。CVF為膠原面積與心肌總面積的比值，其中膠原面積不包括血管周圍膠原面積，隨機分析5個視野，取其均值。PVCA為每一標本測量4支呈橫切面的壁內(nèi)小動脈的周圍面積與管腔面積的比值，取其均值。(5)腎內(nèi)小動脈觀察經(jīng)腹主動脈插管，0.1mg/ml硝普鈉充分擴張血管后，用10%的甲醛溶液在1012kPa下灌注固定，分離左腎，自腎門處剪下腎臟，置于4%甲醛中固定，常規(guī)脫水、石蠟包埋、橫切片、HE染色。光學顯微鏡下選取外徑為50100um的腎內(nèi)小動脈，測量腎內(nèi)小動脈內(nèi)徑、壁厚，計算壁厚內(nèi)徑比。每個標本測量4支呈橫切面的壁內(nèi)小動脈，取其平均值。計量資料用又±s表示，數(shù)據(jù)統(tǒng)計學處理采用SPSS10.0統(tǒng)計軟件包，兩組間比較采用t檢驗。結(jié)果(1)阿利吉侖+葉酸對SHR高血壓大鼠血壓的影響第20周末，與正常組大鼠比較，模型組大鼠收縮壓顯著升高；與模型組比較，葉酸組大鼠收縮壓有所改善，阿利吉侖組及阿利吉侖(15mg/kg)+不同劑量葉酸(0.040.16mg/kg)組大鼠收縮壓均顯著降低但與阿利吉侖單方組比較，阿利吉侖+不同劑量葉酸組大鼠收縮壓的降壓幅度沒有顯著改變。見表l。(2)阿利吉侖+葉酸對SHR高血壓大鼠腎功能的影響與正常組大鼠比較，模型組大鼠尿24ha1-微球蛋白、尿蛋白顯著升高，Ccr明顯降低。與模型組比較，阿利吉侖組大鼠尿24hci1-微球蛋白、尿蛋白顯著降低，Ccr顯著升高。與阿利吉侖組比較，阿利吉侖+不同劑量葉酸(0.040.16mg/kg)組大鼠Ccr進一步升高，24hal-微球蛋白、尿蛋白進一步降低。表明阿利吉侖對SHR高血壓大鼠出現(xiàn)的早期腎功能損害具有保護作用，葉酸與阿利吉侖合用，對S服高血壓大鼠的腎功能保護作用顯著增強，見表2。表l阿利吉侖+葉酸對S服高血壓大鼠收縮壓(咖Hg)的影響(X士SD)<table>complextableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>與正常組比較，*P<0.05,**P<0.01;與模型組比較，AP<0.05,"P<0.01表2阿利吉侖+葉酸對SHR高血壓大鼠腎功能的影響(X±SD)<table>complextableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>與正常組比較，'卞〈0.01;與模型組比較'AP<0.05，"P〈0.01;與阿利吉侖組比較，*P<0.05(3)阿利吉侖+葉酸對SHR高血壓大鼠心肌膠原蛋白含量及心肌膠原容積分數(shù)(CVF)和心肌血管周圍膠原面積(PVCA)的影響與正常組大鼠比較，模型組大鼠心肌膠原蛋白含量,心肌間質(zhì)纖維化指標CVF、心肌血管周圍纖維化指標PVCA均顯著增加，CVF與PVCA升高幾乎同步，表明心肌間質(zhì)纖維化參與了高血壓大鼠心臟重構(gòu)的病理過程。與模型組比較，阿利吉侖組大鼠心肌膠原蛋白含量、心肌CVF、PVCA均顯著降低。與阿利吉侖(15mg/kg)組比較，阿利吉侖(15mg/kg)十不同劑量葉酸(0.040.16mg/kg)組大鼠心肌膠原蛋白含量及心肌CVF、PVCA進一步降低，與阿利吉侖(15mg/kg)單方組比較有顯著性差異。表明葉酸與阿利吉侖合用，對高血壓大鼠心肌保護作用增強。見表3。表3阿利吉侖+葉酸對SHR高血壓大鼠心肌膠原蛋白含量、心肌膠原容積分數(shù)(CVF)和心肌血管周圍膠原面積(PVCA)的影響(X土SD)<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>與正常組比較，"P〈0.01;與模型組比較，AP<0.05,"P〈0.01;與阿利吉侖組比較，"*P<0.05(4)阿利吉侖+葉酸對SHR高血壓大鼠腎內(nèi)小動脈的影響高血壓大鼠的血管改變，主要表現(xiàn)為血管壁外膜的纖維化，管壁中層增厚(由平滑肌細胞增生、肥厚和細胞間質(zhì)增多所致)；內(nèi)膜玻璃樣變，內(nèi)皮細胞增生，上述變化使血管壁厚度/管腔比值減小。與正常組大鼠比較，模型組大鼠腎小動脈壁厚增加，內(nèi)徑減小，壁厚/內(nèi)徑比增加。與模型組比較，阿利吉侖組大鼠腎小動脈壁厚降低、壁厚/內(nèi)徑比增加，阿利吉侖+葉酸組大鼠腎小動脈壁厚進一步降低、壁厚/內(nèi)徑比進一步增加，與阿利吉侖組比較有顯著性差異。見表4。表4阿利吉侖+葉酸對SHR高血壓大鼠腎內(nèi)小動脈的影響(X士SD)<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>與正常組比較，"P〈0.01;與模型組比較，"P〈0.01;與阿利吉侖組比較，*P<0.05，"P<0.01實施例2:阿利吉侖+葉酸對卒中易感型自發(fā)性高血壓(SHR-SP)大鼠的保護作用8周齡左右雄性SHR-SP大鼠共60只，結(jié)合血壓數(shù)值，分為模型組、阿利吉侖+葉酸(30+0.08rag/kg)組、阿利吉侖(30mg/kg)組。飼養(yǎng)條件室溫22土2'C;相對濕度50%;固形飼料和墊料均由中國醫(yī)學科學院實驗動物繁育場提供；飲用水為純凈水。另設WKY對照組，每組20只。灌胃給藥，每天1次，每周稱重一次，根據(jù)體重調(diào)整藥量，連續(xù)8周。觀察指標(1)每日觀察動物飲食、存活情況及行為活動，于8周記錄各組動物腦卒中發(fā)生情況。(2)神經(jīng)功能分級參照Bederson的神經(jīng)功能分級標準(Bederson,JB，Pitts,LH，Tsuji.M,etal.Ratmiddlecerebralarteryocclusion:Evaluationofthemodelanddevelopmentaeurologicexamination[J]Stroke,1986,17(3):472-476.)，分為如下5級，每周觀察一次。0級(正常)無神經(jīng)功能缺損癥狀。l級(輕微)前肢蜷縮或屈曲，主要是持續(xù)性腕屈曲或肩內(nèi)收伴肘部伸展。2級(中度)前肢持續(xù)性蜷縮或屈曲，可見腕、肘全部屈曲、肩部內(nèi)收或內(nèi)旋。3級(嚴重)持續(xù)性肢體蜷縮或屈曲，一側(cè)肢體推力體抗持續(xù)性減弱，自主活動時不伴肢體劃圈行為。4級(甚重)雙側(cè)肢體持續(xù)性蜷縮或屈曲，一側(cè)肢體推力體抗持續(xù)性減弱，自主活動時出現(xiàn)肢體劃圈行為。(3)病理學觀察所有存活動物及死亡后可取得病理組織的大鼠均取腦組織，切片、HE染色，觀察腦出血、腦梗塞或混合性腦卒中，計算各組大鼠腦卒中發(fā)生率。模型組有2只，復方組有1只，單方組中有l(wèi)只動物死亡后被其他動物食掉，未能取得腦組織進行病理檢査。結(jié)果本實驗過程中，模型組大鼠卒中后出現(xiàn)明顯精神萎靡，嗜睡，毛發(fā)蓬松、干枯或脫落、無光澤，體重下降，主動活動明顯減少，行動遲緩，肢體呈不同程度癱瘓，部分大鼠發(fā)病同時伴有抽搐、腹瀉、小便失禁、眼球出血等癥狀，病情嚴重者數(shù)小時內(nèi)死亡。治療組的大部分動物神經(jīng)功能缺損較模型組輕微，精祌狀態(tài)明顯優(yōu)于模型組，自主活動增加，主動覓食、飲水，體重下降不明顯，毛發(fā)也較模型組順滑有光澤。模型組20只大鼠中有14只發(fā)生腦卒中，其中死亡5只，除2只動物于夜間死亡后未能及時取得組織外，其他18只動物均進行了病理組織學觀察，共16只有腦卒中發(fā)生，其中腦出血5只，腦梗死6只，混合性中風5只。腦卒中灶及周圍均可見小動脈透明變性或纖維素樣壞死，管壁增厚，管腔狹窄，有的管腔內(nèi)可見微血栓形成，管周滲血。阿利吉侖對照組20只大鼠有12只發(fā)生腦卒中，其中死亡3只，1只動物未能取得病理組織，其他19只動物均進行了病理組織學觀察，共14只有腦卒中發(fā)生，與模型組比較未見顯著差異。阿利吉侖+葉酸組20只大鼠有8只發(fā)生腦卒中，于實驗結(jié)束時死亡2只，其中1只動物未能取得病理組織，其他19只動物均進行了病理組織學觀察，共7只有腦卒中發(fā)生，其腦卒中發(fā)生率明顯降低，且與模型對照組比較差異具有顯著性(P〈0.05),詳見表5。4周及8周時觀察，發(fā)現(xiàn)給予復方阿利吉侖葉酸(30+0.08mg/kg)可明顯改善大鼠的神經(jīng)功能分級(P<0.05)，詳見表6及表7。表5阿利吉侖+葉酸連續(xù)給藥8周對S服-SP大鼠腦卒中的影響(X土SD)iHi動物數(shù)腦卒中發(fā)生數(shù)~~病理組織學觀察組別(mg/kg)(試驗始/末)(發(fā)生率)發(fā)生數(shù)與發(fā)生率正常組一20/200(0%)1(590模型組一20/159(70%)'16(88.89%)**阿利吉侖+葉酸30+0.0820/186(40%)▲8(42.阿利吉侖3020/179(60%)14(73.7%)乂2檢驗，與正常組比較，"P〈0.01;與模型組比較，"〈0.05;模型組2只，復方組l只，單方組l只動物死亡后未能取得腦組織進行病理檢査，統(tǒng)計中未計算入內(nèi)。表6阿利吉侖+葉酸連續(xù)給藥4周對SHR-SP大鼠腦卒中神經(jīng)功能分級比較(只)iUil~~3"iTiTi4級(mg/kg)數(shù)對照組=20(100%)0(0%)0(0%)0(0%)0(0%)~模型組"一181(5.6%)1(5.6%)2(11.1W6(33.3%)8(44.4%)阿利吉侖+葉酸i30+0.081910(52.6%)3(15.8%)3(15.8%)2(10.5%)1(5.390阿利吉侖30195(26.3%)2(10.5%)3(15.8%)4(21.1%)5(26.3%)乂2檢驗，與正常組比較，"P〈0.01;與模型組比較，▲P<0.05;表7阿利吉侖+葉酸連續(xù)給藥8周對SHR-SP大鼠腦卒中神經(jīng)功能分級比較(只)組別劑量動物0級l級2級3級4級(mg/kg)數(shù)對照組一2020(100D0(0%)0(0%)0(0%)0(0%)模型組**一151(6.7%)1(6.7%)1(6.7%)5(33.3%)7(46.7%)阿利吉侖+葉酸A30+0.081810(55.6%)3(16.7%)2(11.1%)2(11.1%)1(5.6%)阿利吉侖30174(23.5%)2(11.8W3(17.6%)4(23.5%)4(23.5%)乂2檢驗，與正常組比較，"P〈0.01;與模型組比較，AP<0.05;實施例3:阿利吉侖+亞葉酸鈣對雙轉(zhuǎn)基因大鼠(dTGR)的降壓及靶器官保護作用6周齡人腎素，血管緊張素雙轉(zhuǎn)基因大鼠(dTGR)60只，根據(jù)血壓水平及24小時尿蛋白情況將大鼠分為模型組，阿利吉侖+亞葉酸鈣(15+0.10mg/kg)組，阿利吉侖(15mg/kg)組，緦沙坦Umg/kg)對照組，實驗過程中均喂以1%鹽水。另設正常對照組15只。正常對照組、模型組給予等容量0.5y。CMC溶液，每周稱重一次，根據(jù)體重調(diào)整藥量，連續(xù)給藥3周。檢測指標(1)一般狀態(tài)及給藥前后各組動物尾動脈收縮壓。(2)試驗結(jié)束時解剖取心臟及腎臟，計算臟器系數(shù)。(3)收集尿液，測尿蛋白、24h尿al微球蛋白；取血，測定血肌酐、計算肌酐清除率(Ccr)。結(jié)果(1)dTGR大鼠隨年齡的增長，血壓不斷升高。模型組動物于9周齡時死亡率為100%,因而本試驗中設計中加入纈沙坦(lmg/kg)對照組用于第9周時代替模型組同其他各組進行比較，該劑量僅能最小程度地起到降壓及靶器官保護，是做為降低動物死亡率的一種措施。第9周末試驗結(jié)束時，該組15只動物中死亡4只，存活11只。給予阿利吉侖(15呢/kg)及阿利吉侖+亞葉酸鈣(15+0.lmg/kg)治療的大鼠及正常大鼠存活率為100%。阿利吉侖單方及復方組血壓均可顯著降低，與單方組相比，復方組降壓作用未見顯著性差異，見表8。表8阿利吉侖+亞葉酸鈣連續(xù)給藥3周對dTGR大鼠血壓(咖Hg)的影響(X土SD)<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>與正常組比較，"P〈0.01;與模型組比較，"P〈0.01;與纈沙坦代模型組比較，*P<0.05(2)對dTGR大鼠臟器系數(shù)的影響纈沙坦模型組大鼠心，腦，腎臟器系數(shù)均較正常組動物明顯增加，給予阿利吉侖(15mg/kg)及阿利吉侖+亞葉酸鈣(15+0.lmg/kg)，對dTGR大鼠的心、腦、腎臟器系數(shù)均有明顯的減低作用，單方與復方組未見明顯差異，見表9。表9阿利吉侖+亞葉酸鈣連續(xù)給藥3周對dTGR大鼠臟器系數(shù)(g/100g)的影響(X土SD)<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>與正常組比較，'P〈0.05;與纈沙坦代模型組比較，AP<0.05(3)對dTGR大鼠腎功能的影響與正常組大鼠比較，纈沙坦模型組大鼠尿24ha「微球蛋白、尿蛋白顯著升高，Ccr明顯降低。與本組比較，阿利吉侖組大鼠尿24ha「微球蛋白、尿蛋白顯著降低，Ccr顯著升高。與亞葉酸鈣合用組大鼠Ccr進一步升高，24hai-微球蛋白、尿蛋白進一步降低。表明阿利吉侖對dTGR大鼠出現(xiàn)的早期腎功能損害具有保護作用，亞葉酸鈣與阿利吉侖合用，對腎功能保護作用顯著增強，見表io。表10阿利吉侖+亞葉酸鈣連續(xù)給藥3周對dTGR大鼠腎功能的影響a土SD)<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>與正常組比較，"P〈0.01;與纈沙坦模型組比較，"P〈0.01;與阿利吉侖組比較，<0.05實施例4:特拉吉侖+葉酸對自發(fā)性高血壓大鼠(S服)降壓及靶器官損害的保護作用SHR大鼠，體重150180g，平均分為6組，每組20只，分別為模型組、特拉吉侖+葉酸(30+0.04mg/kg)組、特拉吉侖+葉酸(30+0.08呢/kg)組、特拉吉侖+葉酸(30+0.16mg/kg)組、特拉吉侖(30呢/kg)組、葉酸(0.08mg/kg)組，另取20只正常大鼠作為正常對照組。給予等容量0.5%CMC溶液，每周稱重一次，根據(jù)體重調(diào)整藥量，連續(xù)給藥20周。檢測指標(1)分別測定給藥前和給藥后不同時間鼠尾收縮壓，比較各組間血壓差別。(2)收集尿液，用比濁法測定尿蛋白、放免法測定24h尿al微球蛋白；取血，測定血肌酐、計算肌酐清除率(Ccr)。(3)心肌羥脯氨酸測定取左心室游離壁心肌組織，制備成10%的心肌組織勾漿，按羥脯氨酸測試盒說明書，消化法測定心肌羥脯氨酸含量，按膠原蛋白含量^羥脯氨酸含量X7.46，換算成膠原蛋白含量。(4)心肌組織常規(guī)切片，天狼星紅-苦味酸染色，測量心肌膠原容積分數(shù)(CVF)和心肌血管周圍膠原面積(PVCA)。CVF為膠原面積與心肌總面積的比值，其中膠原面積不包括血管周圍膠原面積，隨機分析5個視野，取其均值。PVCA為每一標本測量4支呈橫切面的壁內(nèi)小動脈的周圍面積與管腔面積的比值，取其均值。(5)腎內(nèi)小動脈觀察經(jīng)腹主動脈插管，0.1mg/ml硝普鈉充分擴張血管后，用10%的甲醛溶液在1012kPa下灌注固定，分離左腎，自腎門處剪下腎臟，置于4%甲醛中固定，常規(guī)脫水、石蠟包埋、橫切片、HE染色。光學顯微鏡下選取外徑為50100um的腎內(nèi)小動脈，測量腎內(nèi)小動脈內(nèi)徑、壁厚，計算壁厚內(nèi)徑比。每個標本測量4支呈橫切面的壁內(nèi)小動脈，取其平均值。計量資料用I±s表示，數(shù)據(jù)統(tǒng)計學處理采用SPSSIO.O統(tǒng)計軟件包，兩組間比較采用t檢驗。結(jié)果(1)特拉吉侖+葉酸對SHR高血壓大鼠血壓的影響第20周末，與正常組大鼠比較，模型組大鼠收縮壓顯著升高；與模型組比較，葉酸組大鼠收縮壓有所改善，特拉吉侖組及特拉吉侖(30mg/kg)+不同劑量葉酸(0.040.16mg/kg)組大鼠收縮壓均顯著降低；但與特拉吉侖單方組比較，特拉吉侖+不同劑量葉酸組大鼠收縮壓的降壓幅度沒有顯著改變。見表ll。(2)特拉吉侖+葉酸對SHR高血壓大鼠腎功能的影響與正常組大鼠比較，模型組大鼠尿24hdl-微球蛋白、尿蛋白顯著升高，Ccr明顯降低。與模型組比較，特拉吉侖組大鼠尿24hal-微球蛋白、尿蛋白顯著降低，Ccr顯著升高。與特拉吉侖組比較，特拉吉侖+不同劑量葉酸(0.040.16呢/kg)組大鼠Ccr進一步升高，24hal-微球蛋白、尿蛋白進一步降低。表明特拉吉侖對S服高血壓大鼠出現(xiàn)的早期腎功能損害具有保護作用，葉酸與特拉吉侖合用，對SHR高血壓大鼠的腎功能保護作用顯著增強。見表12。(3)特拉吉侖+葉酸對SHR高血壓大鼠心肌膠原蛋白含量及心肌膠原容積分數(shù)(CVF)和心肌血管周圍膠原面積(PVCA)的影響與正常組大鼠比較，模型組大鼠心肌膠原蛋白含量，心肌間質(zhì)纖維化指標CVF、心肌血管周圍纖維化指標PVCA均顯著增加，CVF與PVCA升高幾乎同步，表明心肌間質(zhì)纖維化參與了高血壓大鼠心臟重構(gòu)的病理過程。與模型組比較，特拉吉侖組大鼠心肌膠原蛋白含量、心肌CVF、PVCA均顯著降低。與特拉吉侖(15mg/kg)組比較，特拉吉侖(15mg/kg)+不同劑量葉酸(0.040.16mg/kg)組大鼠心肌膠原蛋白含量及心肌CVF、PVCA進一步降低，與特拉吉侖(15mg/kg)單方組比較有顯著性差異。表明葉酸與特拉吉侖合用，對高血壓大鼠心肌保護作用增強。見表13。表ll特拉吉侖+葉酸對S服高血壓大鼠收縮壓(mmHg)的影響(X士SD)<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>與正常組比較，*P<0.05，林P〈0.01;與模型組比較，"<0.05，"P<0.01表12特拉吉侖+葉酸對SHR高血壓大鼠腎功能的影響(X±SD)<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>與正常組比較，"P〈0.01;與模型組比較，<0.05,"P〈0.01;與特拉吉侖組比較，*P<0.05表13特拉吉侖+葉酸對Sffi高血壓大鼠心肌膠原蛋白含量、心肌膠原容積分數(shù)(CVF)和心肌血管周圍膠原面積(PVCA)的影響(X±SD)<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>與正常組比較，"P〈0.01;與模型組比較，"<0.05,"P〈0.01;與特拉吉侖組比較，*P<0.05(4)特拉吉侖+葉酸對SHR高血壓大鼠腎內(nèi)小動脈的影響高血壓大鼠的血管改變，主要表現(xiàn)為血管壁外膜的纖維化，管壁中層增厚(由平滑肌細胞增生、肥厚和細胞間質(zhì)增多所致)；內(nèi)膜玻璃樣變，內(nèi)皮細胞增生，上述變化使血管壁厚度/管腔比值減小。與正常組大鼠比較，模型組大鼠腎小動脈壁厚增加，內(nèi)徑減小，壁厚/內(nèi)徑比增加。與模型組比較，特拉吉侖組大鼠腎小動脈壁厚降低、壁厚/內(nèi)徑比增加，特拉吉侖+葉酸組大鼠腎小動脈壁厚進一步降低、壁厚/內(nèi)徑比進一步增加，與特拉吉侖組比較有顯著性差異。見表14。表14特拉吉侖+葉酸對SHR高血壓大鼠腎內(nèi)小動脈的影響(X土SD)組別劑量(mg/kg)N壁厚(nm)內(nèi)徑(lim)壁厚/內(nèi)徑(％)正常組—204.3±0.961.2±11.68.4±1.1模型組一1513.1±2.2"48.5±9.T'21.7±7.1"特拉吉侖+葉酸30+0.04178.4±1.7"53.2±9.516.1±3.2"*30+0.08187.7±1.8"55.5±5.814.l士4,6""30+0.16196.7±2.3"63.6±7.111.5±3.7"*特拉吉侖30189.8±2.2"58.2±7.018.6±3.4"葉酸0.081711.4±2.850.9±8.524.2±5.6與正常組比較，"P〈0.01;與模型組比較，"P〈0.01;與特拉吉侖組比較，*P<0.05,**P<0.01實施例5:阿利吉侖150mg/葉酸0.2mg膠囊的制備處方阿利吉侖150.0g葉酸0.2g微晶纖維素80.0g交聯(lián)聚維酮44.0g聚乙烯吡咯酮K12.0g5%聚維酮k-30水溶液適量硬脂酸鎂_5_制成1000粒制備工藝將阿利吉侖150g、葉酸0.2g、微晶纖維素80g、交聯(lián)聚維酮44g、聚乙烯吡咯酮K12g粉碎、過篩后混合均勻，與適量的5免聚維酮k-30水溶液混合制成軟材后制粒、干燥、加入約1%的硬脂酸鎂混合均勻，按常規(guī)方法裝膠囊1000粒即得。實施例6:阿利吉侖300mg/葉酸1.6mg膠囊的制備處方阿利吉侖300.0g葉酸1.6g微晶纖維素160.0g交聯(lián)聚維酮88.0g聚乙烯吡咯酮K16.0g5%聚維酮k-30水溶液適量硬脂酸鎂_適量制成1000粒制備工藝同實施例5。實施例7:阿利吉侖150mg/葉酸0.4mg片的制備處方阿利吉侖150.0g葉酸0.4g微晶纖維素80.0g交聯(lián)聚維酮44.0g聚乙烯吡咯酮K12.0g泊洛薩姆F68l.Og水適量硬脂酸鎂適量制成1000片制備工藝葉酸過80目篩，其他輔料分別過100目篩后75'C干燥2小時，備用；精密稱定處方量的阿利吉侖、微晶纖維素、交聯(lián)聚維酮和聚乙烯吡咯酮K過篩混勻，備用；取處方量的葉酸和泊洛薩姆F68加入少量水，充分混合均勻后等量遞增加入預混好的阿利吉侖、微晶纖維素、交聯(lián)聚維酮和聚乙烯吡咯酮K，加入粘合劑制軟材，30目篩制粒，60。C干燥3h;30目整粒，加入適量硬脂酸鎂混勻，含量測定后壓片，包裝。實施例8:阿利吉侖150mg/葉酸0.8mg片的制備處方阿利吉侖150.0g葉酸0.8g微晶纖維素80.0g交聯(lián)聚維酮44.0g聚乙烯吡咯酮K12.0g泊洛薩姆F68l.Og水適量硬脂酸鎂_適量制成1000片制備工藝同實施例7。實施例9:阿利吉侖300mg/葉酸0.4mg片的制備處方阿利吉侖300.0g葉酸0.4g乳糖120.0g微晶纖維素30.0g預膠化淀粉8.0g膠態(tài)二氧化硅l.Og交聯(lián)聚維酮3.0g硬脂酸鎂適量水適量制成1000片制備工藝葉酸過80目篩，其他輔料分別過IOO目篩后75'C干燥2小時，備用；精密稱定處方量的阿利吉侖、乳糖、微晶纖維素、預膠化淀粉、交聯(lián)聚維酮等過篩混勻，加入粘合劑制軟材，30目篩制粒，6(TC干燥3h;30目整粒，加入適量硬脂酸鎂混勻，含量測定后壓片，包裝。實施例10:阿利吉侖300mg/葉酸0.8mg片的制備處方阿利吉侖300.0g葉酸0.8g乳糖120.0g微晶纖維素30.0g預膠化淀粉8.0g膠態(tài)二氧化硅1.0g交聯(lián)聚維酮3.0g硬脂酸鎂適量水適量制成1000片制備工藝同實施例9。當阿利吉侖每日需要用量為600mg時，可以一次服用如實施例6、9、或10的300rag阿利吉侖制劑規(guī)格兩片/粒。實施例"處方阿利吉侖100mg/葉酸0.2mg膠囊的制備阿利吉侖葉酸簡.0g0.2g50.0g26.0g22.0g適量適量微晶纖維素交聯(lián)聚維酮聚維酮十二烷基硫酸鈉硬脂酸鎂制成1000粒制備工藝將阿利吉侖、葉酸、微晶纖維素、交聯(lián)聚維酮、聚維酮粉碎、過篩后混合均勻，與適量的十二垸基硫酸鈉混合制成軟材后制粒、干燥、加入約1%的硬脂酸鎂混合均勻，按常規(guī)方法裝膠囊iooo粒即得。實施例12:特拉吉侖300mg/葉酸0.4mg膠囊的制備處方特拉吉侖葉酸微晶纖維素交聯(lián)聚維酮聚乙烯吡咯酮K5%聚維酮k-30水溶液硬脂酸鎂300.0g0.4g160.0g88.0g16.0g適量適量制成1000粒制備工藝同實施例5。實施例13處方占吉侖250mg/葉酸0.4mg膠囊的制備鹽酸占吉侖葉酸250.0g0.4g150.0g88.0g16.0g適量適量微晶纖維素交聯(lián)聚維酮聚乙烯吡咯酮K5%聚維酮k-30水溶液硬脂酸鎂制成1000粒制備工藝同實施例5。權(quán)利要求1.一種藥物組合物，包括(1)藥用劑量的腎素抑制劑；(2)藥用劑量的葉酸類化合物；(3)藥劑學上可接受的載體。2.如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于所述腎素抑制劑為阿利吉侖、地特吉侖、特拉吉侖、占吉侖、SPP600、或SPP800。3.如權(quán)利要求2所述的藥物組合物，其特征在于所述腎素抑制劑是阿利吉侖。4.如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于所述腎素抑制劑的藥用劑量為100600mg。5.如權(quán)利要求l所述的藥物組合物，其特征在于所述藥用劑量的葉酸類化合物為葉酸、亞葉酸鈣或左旋亞葉酸鈣，所述劑量為O.21.6mg。6.如權(quán)利要求5所述的藥物組合物，其特征在于所述劑量是0.41.0mg。7.如權(quán)利要求16中任一所述的藥物組合物，其特征在于所述藥物組合物的制藥劑型為口服制劑，包括片劑、膠囊或顆粒劑。8.權(quán)利要求16中任一所述的藥物組合物在制備用于預防、治療或延緩高血壓的藥物中的用途。9.權(quán)利要求16中任一所述的藥物組合物在制備用于預防、治療或延緩高血壓引起的靶器官損害的藥物中的用途。10.如權(quán)利要求9所述的用途，其特征在于所述的靶器官損害包括左室肥厚、良性小動脈性腎硬化癥、惡性小動脈性腎硬化癥、腎功能衰竭、視網(wǎng)膜動脈硬化、或高血壓眼底病變。11.權(quán)利要求16中任一所述的藥物組合物在制備用于降低高血壓引起的心腦血管事件危險性的藥物中的用途。12.如權(quán)利要求11所述的用途，其特征在于所述降低高血壓引起的心腦血管事件危險性是指降低心絞痛、心肌梗死、心力衰竭、腦梗塞、或腦出血的發(fā)生率。13.如權(quán)利要求11所述的用途，其特征在于所述降低高血壓引起的心腦血管事件危險性是指降低腦卒中的發(fā)生率。全文摘要本發(fā)明涉及一種含有腎素抑制劑與葉酸類化合物的藥物組合物及其用途，屬于藥學領域。此藥物組合物包括藥用劑量的腎素抑制劑、藥用劑量的葉酸類化合物、和藥劑學上可接受的載體。本發(fā)明提供了含有腎素抑制劑與葉酸類化合物的藥物組合物在制備用于預防、治療或延緩高血壓、高血壓引起的靶器官損害的藥物中的用途，本發(fā)明還提供該藥物組合物在制備用于降低高血壓引起的心腦血管事件危險性的藥物中的用途。通過本發(fā)明的實施，提供給患者這種特定用途的藥物組合物可以提高患者依從性，使患者服藥方便，降低醫(yī)療費用，具有較好市場前景。文檔編號A61K31/519GK101347434SQ20071012001公開日2009年1月21日申請日期2007年8月7日優(yōu)先權(quán)日2007年8月7日發(fā)明者多于,徐希平,燕王,王琳琳,陳光亮,陳明俠申請人:北京奧薩醫(yī)藥研究中心有限公司