專利名稱：：一種丹參丹酚酸a的注射制劑及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及中藥
技術(shù)領(lǐng)域：
，具體涉及一種丹參丹酚酸A的注射制劑及其制備方法。
背景技術(shù)：
：中藥注射劑，是指在中醫(yī)傳統(tǒng)用藥和民間驗(yàn)方、單方的基礎(chǔ)上，根據(jù)藥材性質(zhì)所含成分和臨床需要，采用現(xiàn)代科學(xué)方法加工制備的滅菌制劑，主要用于急、重癥的臨床治療，是我國(guó)獨(dú)創(chuàng)的新劑型，具有化學(xué)藥產(chǎn)品不可替代的獨(dú)特功效，具有中藥其他劑型難以具備的優(yōu)勢(shì)，中藥注射劑將是我國(guó)制藥產(chǎn)業(yè)未來(lái)開(kāi)拓國(guó)際市場(chǎng)頗具潛在優(yōu)勢(shì)的項(xiàng)目，我國(guó)研究與生產(chǎn)中藥注射劑已有六十多年的歷史，已有國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)的中藥注射劑達(dá)105種，主要的應(yīng)用領(lǐng)域?yàn)樾哪X血管疾病、腫瘤、細(xì)菌和病毒感染，在臨床應(yīng)用中以其優(yōu)良的療效而被廣發(fā)使用。傳統(tǒng)中藥注射劑成分復(fù)雜，有效物質(zhì)不清楚，質(zhì)量不均一、不穩(wěn)定、不可控，臨床療效不穩(wěn)定，不良反應(yīng)較多，難于適應(yīng)中藥現(xiàn)代化與國(guó)際化的要求，隨著科技的進(jìn)步和科研工作者對(duì)中藥有效物質(zhì)基礎(chǔ)研究的深入，即從中藥有效部位至標(biāo)準(zhǔn)有效成分的研究不斷深入，療效物質(zhì)越來(lái)越清晰，以組分有效部位、標(biāo)準(zhǔn)有效部位、有效成分與有效成分群為基礎(chǔ)的中藥注射劑開(kāi)發(fā)，將是今后中藥注射劑的發(fā)展方向，中藥注射劑質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)也將更加系統(tǒng)精準(zhǔn)，不僅對(duì)有效成分進(jìn)行精確定量，還應(yīng)對(duì)其中的有關(guān)物質(zhì)/有害物質(zhì)進(jìn)行定性和定量研究與控制，使產(chǎn)品的質(zhì)量均一，療效穩(wěn)定，以保障中藥注射劑在臨床應(yīng)用上的安全可靠。
發(fā)明內(nèi)容基于上述原因，北京本草天源藥物研究院的科研人員通過(guò)創(chuàng)新性研究，成功得到了含量大于等于卯^的丹參丹酚酸A，總雜質(zhì)含量控制在10%以內(nèi)，對(duì)總雜質(zhì)進(jìn)行深入的分析，確定含量最大的兩個(gè)雜質(zhì)分別是丹參丹酚酸F和丹參丹酚酸C;原料藥中含量較大的雜質(zhì)得到確定，得到標(biāo)準(zhǔn)中藥有效成分，制備成注射制劑后，繼續(xù)對(duì)制劑進(jìn)行深入的研究，確定制劑中含量最大的雜質(zhì)依然是丹參丹酚酸F和丹參丹酚酸C，同時(shí)對(duì)兩個(gè)雜質(zhì)進(jìn)行定量控制，這樣優(yōu)點(diǎn)是將丹參丹酚酸A的注射制劑的雜質(zhì)研究清楚，特別是將含量較大的雜質(zhì)進(jìn)行研究，有助于我們清楚的了解有效成分丹參丹酚酸A的物質(zhì)基礎(chǔ)，在藥物上市后，發(fā)生不良反應(yīng)或副作用時(shí)，有利于我們進(jìn)行有效的追蹤根源，并且可以在研究中對(duì)雜質(zhì)再進(jìn)行深入的研究有效雜質(zhì)或協(xié)同作用雜質(zhì)應(yīng)該進(jìn)行定量控制，無(wú)效雜質(zhì)應(yīng)該進(jìn)行含量限定，有毒雜質(zhì)或有害雜質(zhì)應(yīng)該進(jìn)一步去除，或者含量限定到對(duì)人體無(wú)害的范圍(比如小于10PPM)，因此，對(duì)中藥注射制劑中的雜質(zhì)進(jìn)行深入的研究，是具有深遠(yuǎn)的意義的；我們的科研人員對(duì)注射制劑的有關(guān)物質(zhì)(雜質(zhì))進(jìn)行研究時(shí)，沒(méi)有采用傳統(tǒng)的指紋圖譜的方法，這是因?yàn)楸旧暾?qǐng)的注射制劑原料藥丹參丹酚酸A是單一的有效成分，雜質(zhì)含量很低，在指紋圖譜中雜質(zhì)的峰太小，無(wú)法進(jìn)行指紋圖譜確定，而是釆用"主成分自身對(duì)照法"，有效的對(duì)有關(guān)物質(zhì)(雜質(zhì))進(jìn)行檢測(cè)，達(dá)到了產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定的要求；在制劑制備過(guò)程中，特別是凍干制劑中，藥用輔料只加入抗氧劑，不加入任何賦形劑，制備的凍干粉，符合藥劑學(xué)要求。本發(fā)明通過(guò)以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的。一種丹參丹酚酸A的注射制劑，原料藥丹參丹酚酸A含量大于等于90%且小于100%，雜質(zhì)含量小于10%，其特征在于原料藥丹參丹酚酸A中的雜質(zhì)包括丹參丹酚酸F和丹參丹酚酸C，制備制劑后，注射制劑的雜質(zhì)包括丹參丹酚酸F和丹參丹酚酸C。一種丹參丹酚酸A的注射制劑，進(jìn)行高效液相色譜法測(cè)定，其中注射制劑的雜質(zhì)丹參丹酚酸F峰面積與丹參丹酚酸A的峰面積的比大于0且小于0.015。一種丹參酚酸A的注射制劑，進(jìn)行高效液相色譜法測(cè)定，其中注射制劑的雜質(zhì)丹參丹酚酸C峰面積與丹參丹酚酸A的峰面積的比大于0且小于0.015。一種丹參丹酚酸A的注射制劑，進(jìn)行高效液相色譜法測(cè)定，其中注射制劑的雜質(zhì)的峰面積之和與丹參丹酚酸A的峰面積的比大于0且小于0.05。注射制劑的制備方法為丹參用水或乙醇溶液提取得到水提取液或醇提取液，醇提液濃縮乙醇至盡，調(diào)PH值至3.5—6.0、110—130。C溫度、表壓0.05MPa—0.17MPa壓強(qiáng)，加熱l一6小時(shí)；溶液進(jìn)行過(guò)濾，濾液經(jīng)非極性或弱極性大孔樹(shù)脂柱層析分離，所述大孔樹(shù)脂柱為HPD-IOO、HPD畫(huà)100A、HPD陽(yáng)300、HPD-400、HPD-400A、HPD-450、DlOl、1300-1、1400或AB-8，先用水、10—30%稀乙醇洗脫，除去雜質(zhì)，再用30—70%濃度的乙醇洗脫，洗脫液回收乙醇至盡；濃縮液用葡聚糖凝膠LH-20或聚酰胺層析柱分離，先用水、20_50%乙醇溶液洗脫，棄去洗脫液，再用50—95%乙醇溶液洗脫，洗脫液回收乙醇至盡；濃縮液液調(diào)PH值至2—5，經(jīng)有機(jī)溶劑乙酸乙酯、乙酸丙酯、乙酸丁酯、正丁醇、異丙醇中的一種萃取，分離有機(jī)溶劑相，得含藥溶液，濃縮，干燥或冷凍干燥，得到干燥物干燥物加水溶解，重結(jié)晶，得到丹參丹酚酸A;取1/2量的抗氧劑加入注射用水中，攪拌使溶解，取丹參丹酚酸A加入，攪拌溶解，調(diào)pH值，加入活性炭，攪拌吸附后除去活性炭；將余下的l/2量的抗氧劑加入藥液中，調(diào)節(jié)pH值，灌裝，冷凍干燥，制備成凍干粉針劑；或取1/2量的抗氧劑加入注射用水中，攪拌使溶解，取丹參丹酚酸A加入，攪拌溶解，調(diào)pH值，加入活性炭，攪拌吸附后除去活性炭；將余下的l/2量的抗氧劑加入藥液中，調(diào)節(jié)pH值，灌裝，制備成水針劑；或取1/2量的抗氧劑加入注射用水中，攪拌使溶解，取丹參丹酚酸A加入，攪拌溶解，加入葡萄糖或氯化鈉，調(diào)pH值，加入活性炭，攪拌吸附后除去活性炭；將余下的1/2量的抗氧劑加入藥液中，調(diào)節(jié)pH值，灌裝，制備成輸液劑。其中抗氧劑為亞硫酸鈉、亞硫酸氫鈉、焦亞硫酸鈉、硫代硫酸鈉和維生素C中的一種。一、制劑有效成分的檢測(cè)分析實(shí)驗(yàn)方法色譜柱C^反相色譜柱，NUCLEODUR，250*4.6mm，ODS;色譜條件與系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn)以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；流速1.0ml/min;柱溫35。C;檢測(cè)波長(zhǎng)286nm;理論板數(shù)按丹酚酸A計(jì)應(yīng)不低于60000;以乙腈-0.2%醋酸水溶液為流動(dòng)相，按下述梯度洗脫條件進(jìn)行梯度洗脫，運(yùn)行卯分鐘0-15分鐘時(shí)，乙腈的比例由10%升至20%，0.2%醋酸水溶液的比例由90%降至80%;15-55分鐘時(shí)，乙腈的比例由20%升至30%，0.2%醋酸水溶液的比例由80%降至70%;55-65分鐘時(shí)，乙腈的比例由30%升至50%，0.2%醋酸水溶液的比例由70%降至50%;65-72分鐘時(shí)，乙腈的比例由50%升至80%，0.2%醋酸水溶液的比例由50%降至20%;72-77分鐘時(shí)，乙腈的比例80%，0.2%醋酸水溶液的比例20%;77-80分鐘時(shí)，乙腈的比例由80%降至10%，0.2%醋酸水溶液的比例由20%升至90%;80-90分鐘時(shí)，保持乙腈-0.2%醋酸水溶液以10:90的比例進(jìn)行洗脫；丹參丹酚酸A對(duì)照品溶液的配制精密稱取丹酚酸A對(duì)照品到容量瓶中，加甲醇溶解搖勻，并稀釋至刻度；供試品溶液的配制精密稱取或量取樣品到容量瓶中加甲醇溶解搖勻，并稀釋至刻度；測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各，注入液相色譜儀，記錄90分鐘的色譜圖，采用按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，即得。實(shí)驗(yàn)結(jié)果:本申諾丹參丹酚酸A注射制劑中有效成分丹參丹酚酸A的含量為標(biāo)示量的90%—110%。二、制劑中有關(guān)物質(zhì)(雜質(zhì))的檢測(cè)分析色譜柱C18反相色譜柱，NUCLEODUR，250*4.6mm，ODS;色譜條件與系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn)以十八垸基硅烷鍵合硅膠為填充劑；流速1.0ml/min;柱溫35。C;檢測(cè)波長(zhǎng)286nm;理論板數(shù)按丹酚酸A計(jì)應(yīng)不低于60000;以乙腈-0.2%醋酸水溶液為流動(dòng)相，按下述梯度洗脫條件進(jìn)行梯度洗脫，運(yùn)行卯分鐘0-15分鐘時(shí)，乙腈的比例由10%升至20%，0.2%醋酸水溶液的比例由90%降至80%;15-55分鐘時(shí)，乙腈的比例由20%升至30%，0.2%醋酸水溶液的比例由80%降至70%;55-65分鐘時(shí)，乙腈的比例由30%升至50%，0.2%醋酸水溶液的比例由70%降至50%;65-72分鐘時(shí)，乙腈的比例由50%升至80%，0.2%醋酸水溶液的比例由50%降至20%;72-77分鐘時(shí)，乙腈的比例80%，0.2%醋酸水溶液的比例20%;77-80分鐘時(shí)，乙腈的比例由80°/。降至10%，0.2%醋酸水溶液的比例由20%升至90%;80-90分鐘時(shí)，保持乙腈-0.2%醋酸水溶液以10:90的比例進(jìn)行洗脫；對(duì)照品溶液的配制和供試品溶液的配制及檢測(cè)對(duì)照品溶液的配制和供試品溶液的配制取注射制劑(水針劑、輸液劑干燥)，用乙醇溶解并分次轉(zhuǎn)移至量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液；精密量取量瓶的1/50，再置量瓶中，加乙醇稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照溶液；照上述色譜條件，取對(duì)照溶液注入液相色譜儀，調(diào)節(jié)檢測(cè)靈敏度，使主成分色譜峰的峰高為記錄儀滿量程的10%—20%;精密量取供試品溶液與對(duì)照溶液，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖。實(shí)驗(yàn)結(jié)果丹參丹酚酸A的注射制劑的雜質(zhì)丹參丹酚酸F峰面積與丹參丹酚酸A的峰面積的比大于0且小于0.015;丹參酚酸A的注射制劑的雜質(zhì)丹參丹酚酸C峰'面積與丹^丹酚酸A的峰面積的比大于0且小于0.015;丹參丹酚酸A的注射制劑的雜質(zhì)的峰面積之和與丹參丹酚酸A的峰面積的比大于0且小于0.05。表l丹參丹酚酸A和有關(guān)物質(zhì)的保留時(shí)間批號(hào)flffl^A保鋼司(min)月參i^KF保鋼司(min)艘iWC保,司(min)146,1932.7662.82246,3832.963.09347.0332.6063.10446.8932.6862.94546.8232.5163.11645.8232.5162.33745.3432.1661.91845.3432.1661.55945.7232.4762.501045.4432.1461.78三、丹參丹酚酸A結(jié)構(gòu)確證資料取丹參丹酚酸A原料藥，進(jìn)行結(jié)構(gòu)確證實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下丹酚酸A('HNMR，D-丙酮，ppm，Hz):6.83(1H，d，J=8.7Hz，A-5)，7.21(1H，d，J=8.4Hz，A-6),8.06(1H，d，J=15.8Hz，A-7)，6.33(1H，d，J=15.8Hz，A-8)，6.82(1H，d，J=2.4Hz，B隱2)，6.71(1H，d，J=8.0Hz，B陽(yáng)5)，6.62(IH，dd,J=2.0、8.0Hz，B-6)，3.10(1H，dd，J=4.2、14.3Hz，B-7a)，2.99(1H，dd，J=8.7、14.3Hz，B隱7p)，5.21(1H，dd，J=4.2、8.7Hz，B-8)，7.13(1H，d，J=2.0Hz，C-2)，6.85(1H，d，J=8.4Hz，C-5)，6'93(1H，dd，J=1.9、8.2Hz，C-6)，7.16(IH，d，J-16.4Hz，C-7)，6.72(1H，d，J，16.4Hz，C-8)。(13CNMR，D-丙酮，ppm，Hz):125.9(A-l)，130.9(A-2)，146.1(A-3)，147.4(A-4)，116.0(A-5)，121.7(A-6)，145.8(A-7)，116.1(A-8)，166.9(A隱9)，129.1(B陽(yáng)l)，117.1(B-2)，144,7(B-3)，143.9(B-4)，114.8(B-5)，120.3(B-6),37.5(B-7)，73.7(B-8)，171.1(〗3隱9)，127.6(C-l)，(C-2)，145.7(C-3)，146.4(C-4)，113.7(C-5)，120.2(C-6)，137.4(C-7)，116.2(C畫(huà)8)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果通過(guò)上述實(shí)驗(yàn)表明，本原料藥是丹參丹酚酸A。四、丹參丹酚酸F結(jié)構(gòu)確證資料取丹參丹酚酸A原料藥和丹參丹酚酸A的注射制劑，經(jīng)過(guò)硅膠柱層析分離，結(jié)合高效液相色譜液法，將含量較大的兩個(gè)雜質(zhì)、丹參丹酚酸A分別分離，分別得到雜質(zhì)單體，進(jìn)行結(jié)構(gòu)確證，確證資料如下表2'HNMR譜測(cè)定數(shù)據(jù)<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>表3CNMR譜測(cè)定數(shù)據(jù)<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>C-4'145.2<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>實(shí)驗(yàn)結(jié)論通過(guò)上述實(shí)驗(yàn)表明，本申請(qǐng)?jiān)纤幒妥⑸渲苿┲泻枯^大雜質(zhì)之一是丹參丹m酸F。五、丹參丹酚酸C結(jié)構(gòu)確證資料取丹參丹酚酸A原料藥和丹參丹酚酸A的注射制劑，經(jīng)過(guò)硅膠柱層析分離，結(jié)合高效液相色譜液法，將含量較大的兩個(gè)雜質(zhì)、丹參丹酚酸A分別分離，分別得到雜質(zhì)單體，進(jìn)行結(jié)構(gòu)確證，確證資料如下表4'HNMR譜測(cè)定數(shù)據(jù)<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>C-8_______________222實(shí)驗(yàn)結(jié)論通過(guò)上述實(shí)驗(yàn)表明，本申請(qǐng)l(料藥和注片制劑中含量較大雜質(zhì)之是丹參丹酚酸C。六、丹參丹酚酸A凍干粉藥用輔料選擇實(shí)驗(yàn)方法按照表6的實(shí)驗(yàn)處方，對(duì)凍干賦形劑進(jìn)行實(shí)驗(yàn)表6凍干賦形劑劑的篩選處方組別處方1處方2處方3處方4處方5處方6處方7丹酚酸Al.Ogl.Og].Ogl.Ogl.Ogl.Ogl,Og抗氧劑0.05g0.05g0.05g0.05g0.05g0.05g甘露醇l.Og_一一一—右旋粽酐40一—0.5g一——葡萄糖——_一一氫氧化鈉適量適量適量適量適量適量適量注射用水至100ml至100ml至100ml至100ml至100ml至100ml至100ml制成50支50支50支50支50支50支50支制備方法按照本申請(qǐng)凍干粉針劑的制備方法進(jìn)行制備，實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下:表7注射用丹酚酸A半成品、成品含量測(cè)定結(jié)果處方半成品主藥含量(mg/2ml)成品含量(mg)含量變化(％)處方l19.6119.21-2.05處方219.5319,17-1.87處方319.5419.27-1,40處方419.3019.01-1.51處方519.4319.22-1.08處方619.3819,16-1.16處方719.4919.11-1.94表8各處方注射用丹酚酸A成型及相關(guān)指標(biāo)考察結(jié)果處方1處方2處方3處方4處方5處方6處方7外觀性狀黃色疏松塊狀物13116.3121.938.074.8173.8119.6114.9146.0146.7113.4126.3159.45670OQS1234367誦i陽(yáng)■ii墨匿■墨iiBBBBBCCCCCCC<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>實(shí)驗(yàn)結(jié)論:依各處方及制備工藝，制備成注射用丹酚酸/、含量略有降低，下降低于2.1%。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明甘露醇作為賦形劑，成型性良好，但成品可見(jiàn)異物檢查不符合規(guī)定，不能使用；右旋糖酐40或葡萄糖成型性良好，成品可見(jiàn)異物檢查合格，復(fù)溶迅速，復(fù)溶5分鐘后有白點(diǎn)生成；處方中不添加凍干賦形劑，成型效果仍然良好，成品可見(jiàn)異物檢查合格，復(fù)溶迅速，復(fù)溶5分鐘后有澄清。添加凍干賦形劑右旋糖酐40或葡萄糖與處方中不添加凍干賦形劑比較，對(duì)成型性基本無(wú)影響。為提高產(chǎn)品的安全性，并考慮制劑成本的降低，確定注射用丹酚酸A不添加凍干賦形劑。六、藥理實(shí)驗(yàn).實(shí)驗(yàn)l對(duì)麻醉大鼠心肌缺血再灌注損傷的保護(hù)作用實(shí)驗(yàn)方法取健康SD大鼠，體重240-260g，隨機(jī)分為9組空白對(duì)照組、假手術(shù)組、模型組、注射用丹參多酚酸鹽對(duì)照組、鹽酸地爾硫卓注射液對(duì)照組、本申請(qǐng)丹參丹酚酸A注射制劑組劑量1組(16mg/kg)、本申請(qǐng)丹參丹酚酸A注射制劑組劑量2組(8mg/kg)，本申請(qǐng)丹參丹酚酸A注射制劑組劑量3組(4mg/kg)及本申請(qǐng)丹參丹酚酸A注射制劑組劑量4組(2mg/kg)。置于相同環(huán)境預(yù)飼養(yǎng)2天，自由飲食。預(yù)詞養(yǎng)結(jié)束后，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，動(dòng)物稱重，20。/。烏拉坦按0.6ml/100g腹腔注射，待麻醉滿意后，仰臥固定于鼠板上，氣管插管，接呼吸機(jī)，按1012ml潮氣量，70次/分的頻率給予呼氣，持續(xù)正壓呼'吸，吸呼比為i:i。根據(jù)呼吸頻率及深度調(diào)整呼吸參數(shù)。隨后接心電圖機(jī)，測(cè)正常心電圖。剪去胸前手術(shù)區(qū)毛，碘酒消毒，剪開(kāi)皮膚、皮下組織、胸前肌肉及筋膜34cm，用18#血管鉗沿第三肋間鈍性分離肋間肌3cm長(zhǎng)，打開(kāi)胸腔及心包膜，記錄心電圖，撐開(kāi)3、4肋骨，用左手四指托住大鼠右側(cè)胸腔，助手用眼科鑷將胸腺向上推，在左心耳與肺動(dòng)脈圓惟之間找到結(jié)扎標(biāo)志血管左冠狀靜脈，在左心耳下方2mm處用無(wú)創(chuàng)小圓針帶6-0絲線穿線，進(jìn)針深度為11.5mm，寬23mm，穿線后記錄心電圖，經(jīng)尾靜脈給予相應(yīng)藥液，給藥10min后記錄心電圖，并用一帶凹槽的小塑料管墊在結(jié)扎部位，兩端線頭在其上結(jié)扎。結(jié)扎后即刻記錄心電圖，以左室前壁呈紫紺或II導(dǎo)聯(lián)S-T段弓背向上抬高大于O.lmv并持續(xù)0.5h以匕為結(jié)扎成功標(biāo)志(S-T段無(wú)改變者淘汰)。結(jié)扎后10min再次記錄心電圖，結(jié)扎30min后剪開(kāi)結(jié)扎線，實(shí)現(xiàn)再灌注，并記錄再灌注即刻心電圖，清除胸腔內(nèi)積血后逐層縫合胸壁，撤呼吸機(jī)，動(dòng)物恢復(fù)自主呼吸，氣管切口不做處理。再灌即刻、10min、20min、40min、lh、2h、3h分別記錄心電圖。再灌3小時(shí)，經(jīng)腹主動(dòng)脈取血，4000rpm離心10min取血清，采用全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)LDH、CK及CK-MB活性，并采用相應(yīng)試劑盒檢測(cè)血清SOD、MDA(以上指標(biāo)具體檢測(cè)步驟詳見(jiàn)說(shuō)明書(shū))，解剖取心臟，冰生理鹽水洗去殘血，剪去心房及右心室，立即放入冰箱中冷凍。將心臟在冰箱中冷凍10min后，自心尖向心底平行房室溝方向?qū)⒆笫仪谐上嗟群穸鹊?片，放入1%TTC染液中，37。C染色10min，未壞死區(qū)為暗紅色，壞死區(qū)呈灰白色。數(shù)碼相機(jī)拍照。將壞死區(qū)和非壞死區(qū)分別稱重，計(jì)算壞死區(qū)占左心室重量的百分比，即梗死范圍。梗死范H(%)=壞死區(qū)心臟重量/壞死區(qū)+非壞死區(qū)心臟重量xioo%檢測(cè)指標(biāo)分別為，心肌梗死范圍。實(shí)驗(yàn)結(jié)果詳見(jiàn)表9:—表9本申請(qǐng)丹參丹酚酸A注射制劑組對(duì)結(jié)扎/再通大鼠左冠狀動(dòng)脈前降支所致心肌缺血/再灌注損傷心肌梗死范圍(％)的影響(X±S)__組別劑量(mg/kg)心肌梗死范圍(％)"""SM^26.71±11.90本申請(qǐng)丹參丹酚酸A注射制劑組劑量1167.74±2.15***本申請(qǐng)丹參丹酚酸A注射制劑組劑量288.21±1.14***本申請(qǐng)丹參丹酚酸A注射制劑組劑量349.87±2.10***本申請(qǐng)丹參丹酚酸A注射制劑組劑量4216.22±4.99AA注射用丹參多酚酸鹽4014.48±7.38**_鹽酸地爾硫i;t注射液26.17士1.98***~~^UT莫型組相比，；po.oi7^^.oi,""Fo.oorr與注身iTir丹參多酚酸去iI"相比'Ap〈—0.05,、Tp〈0.01"▲PO.001;與鹽峻地爾硫卓注射液組相比，AP<0.05,AAP<0.01,AAAP<0.001實(shí)驗(yàn)2對(duì)大鼠大腦中動(dòng)脈缺血再灌注損傷保護(hù)作用的研究實(shí)驗(yàn)方法動(dòng)物隨機(jī)分組空白對(duì)照組、注射用丹參多酚酸組、本申請(qǐng)方案組，各劑量組連續(xù)給藥3天，第4天藥后20分鐘用改良線栓法制成大腦中動(dòng)脈阻塞(MCAO)模型。大鼠麻醉后，將其仰臥固定。分離右側(cè)頸總動(dòng)脈(CCA)、頸內(nèi)動(dòng)脈(ICA)及頸外動(dòng)脈(ECA)，結(jié)扎ECA與CCA，用動(dòng)脈夾夾閉ICA遠(yuǎn)心端后，迅速于ECA與ICA分叉處作一切口，插入一端加熱成光滑球形并涂了0.1%多聚賴氨酸的尼龍線(直徑為0.25mm，距球端18mm處作標(biāo)記，插入前沾肝素溶液)，插入深度為18mm，實(shí)現(xiàn)大腦中動(dòng)脈阻塞導(dǎo)致腦缺血。結(jié)扎入口處，尼龍線外留約lcm，縫合皮膚。2小時(shí)后輕輕提拉所留線頭至略有阻力，實(shí)現(xiàn)大腦中動(dòng)脈再灌注，造模完成。在缺血2h和再灌注lh內(nèi)用電熱毯維持大鼠的體溫，體溫維持在肛溫36.537.5°C。動(dòng)物入選標(biāo)準(zhǔn)，按Longa五級(jí)評(píng)分法，取神經(jīng)功能行為評(píng)分為1、2、3、4分的動(dòng)物，(0分:無(wú)神經(jīng)缺損癥狀；1分對(duì)側(cè)前肢不能完全伸直；2分向?qū)?cè)旋轉(zhuǎn)；3分向?qū)?cè)傾倒；4分不能自己行走或昏迷)。腦梗塞范圍測(cè)定，模型大鼠再灌注24h，行為學(xué)評(píng)分后，斷頭取腦，去掉嗅球、小腦和低位腦干，剩余部分在一20。C冰箱冷凍10min，在冰盤上冠狀切成6片，迅速將腦片置于TTC染液中，37r避光溫孵lh，取出后置于10X甲醛液中避光保存24h。經(jīng)染色后非缺血區(qū)為玫瑰紅色，梗塞區(qū)為白色。將白色組織仔細(xì)挖下稱重，以梗塞組織重量占全腦重量百分比作為腦梗塞范圍。腦含水量測(cè)定TTC染色稱重后，將大腦置于120"C真空干燥器內(nèi)烘干12h稱干重。軀:含水量氣胸'濕重-腦干重)/腦濕重x]OOM。實(shí)驗(yàn)結(jié)果詳見(jiàn)表IO。表io對(duì)大阮大腦中動(dòng):;永缺血再站:注損傷大鼠腦梗塞范圍及腦水含量的影響(x士s)^_,劑量(mg/^r"""7垴缺血范f:i百分比Ti73""""""1^水含量百分E7^7""空白對(duì)照組—44.50±10.2489.07±6.32本申請(qǐng)水針劑組827.81±4.81**#73.20±3.94**#本申請(qǐng)輸液劑組827.78±4.75**#73.01±3.81**#本申請(qǐng)凍干粉針劑組827.66±5.02**#73.11±4.04**#_注射用丹參多酚酸g^『59±7.30*79.59±8.31*~~注:ij《A對(duì)照組相比，*p<0.05,**PO.01;'d注W州,J參多酚酸鹽比較SP0.05。~~本申請(qǐng)丹參丹酚酸A注射制劑組同樣具有治療和/或預(yù)防心腦血管疾病、肝損傷、肝纖維化、肺纖維化、腫瘤、衰老等疾病的作用。實(shí)驗(yàn)3毒性實(shí)驗(yàn)研究本申請(qǐng)丹參丹酚酸A注射制劑的小鼠單次靜脈給藥急性毒性實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，其LD冗約為550mg/kg，折合成人用等效劑量約為3.7g/人。本申請(qǐng)丹參丹酚酸A注射制劑大鼠腹腔給藥3個(gè)月長(zhǎng)期毒性實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，當(dāng)給藥劑量為50mg/kg時(shí)，未見(jiàn)明顯毒副反應(yīng)，折合成人用等效劑量約為500mg/人；本申請(qǐng)丹參丹酚酸A注射制劑組犬靜脈給藥3個(gè)月長(zhǎng)期毒性實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，當(dāng)給藥劑量為25mg/kg時(shí)，未見(jiàn)明顯毒副反應(yīng)，折合成人用等效劑量約為780mg/人。實(shí)驗(yàn)結(jié)論通過(guò)上述藥理實(shí)驗(yàn)表明，本申請(qǐng)注射制劑具有很好的藥理作用，充分說(shuō)明本申請(qǐng)制劑具有實(shí)際意義。六、實(shí)施例實(shí)施例1丹參用水提取得到水提取、;:支，調(diào)PH1'直至3.5，ll(TC溫度，表壓0.05MPa壓強(qiáng)，加熱l小時(shí)；溶液進(jìn)行過(guò)濾，濾液經(jīng)HPI:-100大孔樹(shù)脂柱層析分離，先/目水、10%稀乙醇洗脫，除去雜質(zhì)，再用30%濃度的乙醇洗脫，收集含有丹酚酸A部分，洗脫液濃縮至無(wú)醇味；濃縮液用聚酰胺層析柱分離，先用水、20%乙醇溶液洗脫，洗脫液棄去，再用95%乙醇溶液洗脫，收集洗脫液，濃縮乙醇至盡；濃縮液調(diào)PH值至2，經(jīng)乙酸乙酯萃取，分離有機(jī)溶劑相，得含藥溶液，濃縮，干燥或冷凍干燥，干燥物加水溶解，重結(jié)晶，得到丹參丹酚酸A。取0.5克的抗氧劑硫代硫酸鈉加入注射用水中，攪拌使溶解，取20克丹參丹酚酸A加入，攪拌溶解，調(diào)pH值，加入活性炭，攪拌吸附后除去活性炭；將余下的0.5克的抗氧劑硫代硫酸鈉加入藥液中，調(diào)節(jié)pH值，灌裝，冷凍干燥，制備成凍干粉針劑1000瓶；或取0.5克的抗氧劑硫代硫酸鈉加入注射用水中，攪拌使溶解，取20克丹參丹酚酸A加入，攪拌溶解，調(diào)pH值，加入活性炭，攪拌吸附后除去活性炭；將余下的0.5克的抗氧劑硫代硫酸鈉加入藥液中，調(diào)節(jié)pH值，灌裝，制備成水針劑1000瓶；或取0.5克的抗氧劑硫代硫酸鈉加入注射用水中，攪拌使溶解，取20克丹參丹酚酸A加入，攪拌溶解，調(diào)pH值，加入活性炭，攪拌吸附后除去活性炭；將余下的0.5克的抗氧劑硫代硫酸鈉加入藥液中，調(diào)節(jié)pH值，灌裝，制備成輸液劑1000瓶。上述注射制劑進(jìn)行有關(guān)物質(zhì)檢測(cè)，雜質(zhì)丹參丹酚酸F峰面積與丹參丹酚酸A的峰面積的比大于0且小于0.015;丹參酚酸A的注射制劑的雜質(zhì)丹參丹酚酸C峰面積y丹參丹酚酸A的峰面積的比大于0且小于0.015;丹參丹酚酸A的注對(duì)制劑的雜質(zhì)的峰面積之和與丹參丹酚酸A的峰面積的比大于0且小于0.05。實(shí)施例2丹參用乙醇溶液提取得到醇提取液，濃縮乙醇至盡，調(diào)PH值至6.0，130°C溫度，表壓0.17MPa壓強(qiáng)，加熱6小時(shí)；溶液進(jìn)行過(guò)濾，濾液HPD-100A大孔樹(shù)脂柱層析分離，先用水、30%稀乙醇洗脫，除去雜質(zhì)，再用70%濃度的乙醇洗脫，收集含有丹酚酸A部分，洗脫液濃縮至無(wú)醇味；濃縮液用葡聚糖凝膠LH-20，先用水、20%乙醇溶液洗脫，洗脫液棄去，再用95%乙醇溶液洗脫；收集洗脫液，濃縮乙醇至盡；濃縮液調(diào)PH值至5，經(jīng)有機(jī)溶劑乙酸丙酯萃取，分離有機(jī)溶劑相，得含藥溶液，濃縮，干燥或冷凍干燥，干燥物加水溶解，重結(jié)晶，得到丹參丹酚酸A。取0.5克的抗氧劑焦亞硫酸鈉加入注射用水中，攪拌使溶解，取20克丹參丹酚酸A加入，攪拌溶解，調(diào)pH值，加入活性炭，攪拌吸附后除去活性炭；將余下的0.5克的抗氧劑焦亞硫酸鈉加入藥液中，調(diào)節(jié)pH值，灌裝，冷凍干燥，制備成凍干粉針劑1000瓶；或取0.5克的抗氧劑焦亞硫酸鈉加入注射用水中，攪拌使溶解，取20克丹參丹酚酸A加入，攪拌溶解，調(diào)pH值，加入活性炭，攪拌吸附后除去活性炭；將余下的0.5克的抗氧劑焦亞硫酸鈉加入藥液中，調(diào)節(jié)pH值，灌裝，灌裝，制備成水針劑1000瓶；或取0.5克的抗氧劑焦亞硫酸鈉加入注射用水中，攪拌使溶解，取20克丹參丹酚酸A加入，攪拌溶解，調(diào)pH值，加入活性炭，攪拌吸附后除去活性炭；將余下的0.5克的抗氧劑焦亞硫:駿鈉加入藥液中，調(diào)節(jié)pfl值，灌裝，制備成輸液劑1C00瓶。上述注射制劑進(jìn)行有關(guān)物質(zhì)檢測(cè)，雜質(zhì)丹參丹酚酸F峰面積與丹參丹酚酸A的峰面積的比大于0且小于0.015;丹參酚酸A的注射制劑的雜質(zhì)丹參丹酚酸C峰面積與丹參丹酚酸A的峰面積的比大于0且小于0.015;丹參丹酚酸A的注射制劑的雜質(zhì)的峰面積之和與丹參丹酚酸A的峰面積的比大于0且小于0.05。實(shí)施例3丹參用水提取得到水提取液，調(diào)PH值至5.0，12(TC溫度，表壓0.10MPa壓強(qiáng)，加熱4小時(shí)；溶液進(jìn)行過(guò)濾，濾液經(jīng)HPD-300大孔樹(shù)脂柱層析分離，先用水、20%稀乙醇洗脫，除去雜質(zhì)，再用50%濃度的乙醇洗脫，收集含有丹酚酸A部分，洗脫液濃縮至無(wú)醇味；濃縮液用聚酰胺層析柱分離，先用水、35%乙醇溶液洗脫，洗脫液棄去，再用75%乙醇溶液洗脫，濃縮乙醇至盡；濃縮液調(diào)PH值至3，經(jīng)有機(jī)溶劑乙酸丁酯萃取，分離有機(jī)溶劑相，得含藥溶液，濃縮，干燥或冷凍干燥，干燥物加水溶解，重結(jié)晶，得到丹參丹酚酸A。取0.5克的抗氧劑維生素C加入注射用水中，攪拌使溶解，取20克丹參丹酚酸A加入，攪拌溶解，調(diào)pH值，加入活性炭，攪拌吸附后除去活性炭；將余下的0.5克的抗氧劑維生素C加入藥液中，調(diào)節(jié)pH值，灌裝，冷凍干燥，制備成凍干粉針劑1000瓶；或取0.5克的抗氧劑維生素C加入注射用水中，攪拌使溶解，取20克丹參丹酚酸A加入，攪拌溶解，調(diào)pH值，加入活性炭，攪拌吸附后除去活性炭；將余下的0.5克的抗氧劑維生素C加入藥液中，調(diào)節(jié)pH值，灌裝，灌裝，制備成水針劑1000瓶；或取0.5克的抗鏡劑維生素C鈉加入注射用水中，攪摔使溶解，取20克丹參丹酚酸A加入，攪拌溶解，調(diào)pH值，加入活忭炭，攪拌吸附后除去活性炭；將余下的0.5克的抗氧劑維生素C加入藥液中，調(diào)節(jié)pH值，灌裝，制備成輸液劑IOOO瓶。上述注射制劑進(jìn)行有關(guān)物質(zhì)檢測(cè)，雜質(zhì)丹參丹酚酸F峰面積與丹參丹酚酸A的峰面積的比大于0且小于0.015;丹參酚酸A的注射制劑的雜質(zhì)丹參丹酚酸C峰面積與丹參丹酚酸A的峰面積的比大于0且小于0.015;丹參丹酚酸A的注射制劑的雜質(zhì)的峰面積之和與丹參丹酚酸A的峰面積的比大于0且小于0.05。實(shí)施例4丹參用水提取得到水提取液，調(diào)PH值至4.0、115。C溫度、表壓0.09MPa壓強(qiáng)，加熱2小時(shí)；溶液進(jìn)行過(guò)濾，濾液經(jīng)D101大孔樹(shù)脂柱層析分離，先用水、15%稀乙醇洗脫，除去雜質(zhì)，再用35%濃度的乙醇洗脫，收集含有丹酚酸A部分，洗脫液濃縮至無(wú)醇味；濃縮液用葡聚糖凝膠LH-20分離，先用水、25%乙醇溶液洗脫，洗脫液棄去，再用65%乙醇溶液洗脫，收集洗脫液，濃縮乙醇至盡；濃縮液調(diào)PH值至2.5，經(jīng)有機(jī)溶劑乙酸乙酯萃取，分離有機(jī)溶劑相，得含藥溶液，濃縮，干燥或冷凍干燥，干燥物加水溶解，重結(jié)晶，得到丹參丹酚酸A。取5克的抗氧劑焦亞硫酸鈉加入注射用水中，攪拌使溶解，取200克丹參丹酚酸A加入，攪拌溶解，調(diào)pH值，加入活性炭，攪拌吸附后除去活性炭；將余下的5克的抗氧劑焦亞硫酸鈉加入藥液中，調(diào)節(jié)pH值，灌裝，冷凍干燥，制備成凍干粉針劑10000瓶；或取5克的抗氧劑焦亞硫酸鈉加入注射用水中，攪拌使溶解，取200克丹參丹酚酸A加入，攪拌溶解，調(diào)pH值，加入活性炭，攪拌吸附后除去活性炭；將余下的5克的抗氧劑焦亞硫酸鈉加入藥液中，調(diào)節(jié)pH值，灌裝，灌裝，制備成水針劑10000瓶；或取5克的抗氧劑焦亞硫酸鈉加入注射用水中，攪拌使溶解，取200克丹參丹酚酸A加入，攪拌溶解，調(diào)pH值，加入活性炭，攪拌吸附后除去活性炭；將余下的5克的抗氧劑焦亞硫酸鈉加入藥液中，調(diào)節(jié)pH值，灌裝，制備成輸液劑10000瓶。上述注射制劑進(jìn)行有關(guān)物質(zhì)檢測(cè)，雜質(zhì)丹參丹酚酸F峰面積與丹參丹酚酸A的峰面積的比大于0且小于0.015;丹參酚酸A的注射制劑的雜質(zhì)丹參丹酚酸C峰面積與丹參丹酚酸A的峰面積的比大于0且小于0.015;丹參丹酚酸A的注射制劑的雜質(zhì)的峰面積之和與丹參丹酚酸A的峰面積的比大于0且小于0.05。實(shí)施例5丹參用乙醇溶液提取得到醇提取液，濃縮乙醇至盡，調(diào)PH值至5.5、125。C溫度、表壓0.15MPa壓強(qiáng)，加熱5.5小時(shí)；溶液進(jìn)行過(guò)濾，濾液經(jīng)1300-1大孔樹(shù)脂柱層析分離，先用水、25%稀乙醇洗脫，除去雜質(zhì)，再用65%濃度的乙醇洗脫，收集含有丹酚酸A部分，洗脫液濃縮至無(wú)醇味；濃縮液用葡聚糖凝膠LH-20層析柱分離，先用水、45%乙醇溶液洗脫，棄去洗脫液，再用90%乙醇溶液洗脫，收集洗脫液，濃縮乙醇至盡；濃縮液調(diào)PH值至4.5，經(jīng)有機(jī)溶劑乙酸丙酯萃取，分離有機(jī)溶劑相，得含藥溶液，濃縮，干燥或冷凍干燥，干燥物加水溶解，重結(jié)晶，得到丹參丹酚酸A。取l克的抗氧劑焦亞硫酸氫鈉加入注射用水中，攪拌使溶解，取40克丹參丹酚酸A加入，攪拌溶解，調(diào)pH值，加入活性炭，攪拌吸附后除去活性炭；將余下的1克的抗氧劑焦亞硫酸鈉加入藥液中，調(diào)節(jié)pH佰，灌裝，冷凍干燥，制備成凍干粉針劑2000瓶；或取l克的抗氧劑焦亞硫酸氫鈉加入注射用水中，攪拌使溶解，取40克丹參丹酚酸A加入，攪拌溶解，調(diào)pH值，加入活性炭，攪拌吸附后除去活性炭；將余下的l克的抗氧劑焦亞硫酸鈉加入藥液中，調(diào)節(jié)pH值，灌裝，灌裝，制備成水針劑2000瓶；或取l克的抗氧劑焦亞硫酸鈉加入注射用水中，攪拌使溶解，取40克丹參丹酚酸A加入，攪拌溶解，調(diào)pH值，加入活性炭，攪拌吸附后除去活性炭；將余下的1克的抗氧劑焦亞硫酸鈉加入藥液中，調(diào)節(jié)pH值，灌裝，制備成輸液劑2000瓶。上述注射制劑進(jìn)行有關(guān)物質(zhì)檢測(cè)，雜質(zhì)丹參丹酚酸F峰面積與丹參丹酚酸A的峰面積的比大于0且小于0.015;丹參酚酸A的注射制劑的雜質(zhì)丹參丹酚酸C峰面積與丹參丹酚酸A的峰面積的比大于0且小于0.015;丹參丹酚酸A的注射制劑的雜質(zhì)的峰面積之和與丹參丹酚酸A的峰面積的比大于0且小于0.05。實(shí)施例6丹參用水提取得到水提取液，調(diào)PH值至4.0、125。C溫度、表壓0.15MPa壓強(qiáng)，加熱5.5小時(shí)；溶液進(jìn)行過(guò)濾，濾液經(jīng)HPD-100A大孔樹(shù)脂柱層析分離，先用水、15%稀乙醇洗脫，除去雜質(zhì)，再用60%濃度的乙醇洗脫，收集含有丹酚酸A部分，洗脫液濃縮至無(wú)醇味；濃縮液用葡聚糖凝膠LH-20分離，先用水、45%乙醇溶液洗脫，棄去洗脫液，再用55%乙醇溶液洗脫，濃縮乙醇至盡；濃縮液調(diào)PH值至2.5，經(jīng)有機(jī)溶劑異丙醇萃取，分離有機(jī)溶劑相，得含藥溶液，濃縮，干燥或冷凍干燥，干燥物加水溶解，重結(jié)晶，得到丹參丹酚酸A。取0.5克的抗氧劑維生素C加入注射用水中，攪拌使溶解，取20克丹參丹酚酸A加入，攪拌溶解，調(diào)pH值，加入活性炭，攪拌吸附后除去活性炭；將余下的0.5克的抗氧劑維生素C加入藥液中，調(diào)節(jié)pH值，灌裝，冷凍干燥，制備成凍干粉針劑1000瓶；或取0.5克的抗氧劑維生素C加入注射用水中，攪拌使溶解，取20克丹參丹酚酸A加入，攪拌溶解，調(diào)pH值，加入活性炭，攪拌吸附后除去活性炭；將余下的0.5克的抗氧劑維生素C加入藥液中，調(diào)節(jié)pH值，灌裝，灌裝，制備成水針劑1000瓶；或取0.5克的抗氧劑維生素C加入注射用水中，攪拌使溶解，取20克丹參丹酚酸A加入，攪拌溶解，調(diào)pH值，加入活性炭，攪拌吸附后除去活性炭；將余下的0.5克的抗氧劑維生素C加入藥液中，調(diào)節(jié)pH值，灌裝，制備成輸液劑IOOO瓶。上述注射制劑進(jìn)行有關(guān)物質(zhì)檢測(cè)，雜質(zhì)丹參丹酚酸F峰面積與丹參丹酚酸A的峰面積的比大于0且小于0.015;丹參酚酸A的注射制劑的雜質(zhì)丹參丹酚酸C峰面積與丹參丹酚酸A的峰面積的比大于0且小于0.015;丹參丹酚酸A的注射制劑的雜質(zhì)的峰面積之和與丹參丹酚酸A的峰面積的比大于0且小于0.05。實(shí)施例7丹參用水提取得到水提取液，調(diào)PH值至5.0、12(TC溫度、表壓0.10MPa壓強(qiáng)，加熱3.5小時(shí)；溶液進(jìn)行過(guò)濾，濾液經(jīng)AB-8大孔樹(shù)脂柱層析分離，先用水20%稀乙醇洗脫，除去雜質(zhì)，再用45%濃度的乙醇洗脫，收集含有丹酚酸A部分，洗脫液濃縮至無(wú)醇味；濃縮液用聚酰胺層析柱分離，先用》.'X、35%乙醇^液洗脫，洗脫液棄去，再用85%乙醇溶液洗脫，濃縮乙醇至盡；洗脫液調(diào)PH值，:3，經(jīng)有機(jī)溶劑乙酸r酯萃取，分離有機(jī)溶劑相，得含藥溶液，濃縮，干燥或冷凍干燥，千燥物加水溶解，重結(jié)晶，得到丹參丹酚酸A。取0.5克的抗氧劑亞硫酸氫鈉加入注射用水中，攪拌使溶解，取20克丹參丹酚酸A加入，攪拌溶解，調(diào)pH值，加入活性炭，攪拌吸附后除去活性炭；將余下的0.5克的抗氧劑亞硫酸氫鈉加入藥液中，調(diào)節(jié)pH值，灌裝，冷凍干燥，制備成凍干粉針劑1000瓶；或取0.5克的抗氧劑亞硫酸氫鈉加入注射用水中，攪拌使溶解，取20克丹參丹酚酸A加入，攪拌溶解，調(diào)pH值，加入活性炭，攪拌吸附后除去活性炭；將余下的0.5克的抗氧劑亞硫酸氫鈉加入藥液中，調(diào)節(jié)pH值，灌裝，灌裝，制備成水針劑1000瓶；或取0.5克的抗氧劑亞硫酸氫鈉加入注射用水中，攪拌使溶解，取20克丹參丹酚酸A加入，攪拌溶解，調(diào)pH值，加入活性炭，攪拌吸附后除去活性炭；將余下的0.5克的抗氧劑亞硫酸氫鈉加入藥液中，調(diào)節(jié)pH值，灌裝，制備成輸液劑1000瓶。上述注射制劑進(jìn)行有關(guān)物質(zhì)檢測(cè)，雜質(zhì)丹參丹酚酸F峰面積與丹參丹酚酸A的峰面積的比大于0且小于0.015;丹參酚酸A的注射制劑的雜質(zhì)丹參丹酚酸C峰面積與丹參丹酚酸A的峰面積的比大于0且小于0.015;丹參丹酚酸A的注射制劑的雜質(zhì)的峰面積之和與丹參丹酚酸A的峰面積的比大于0且小于0.05。實(shí)施例8丹參用乙醇溶液提取街到醇提取液，醇提液濃縮乙醇至盡，調(diào)PH々'[至4.5、115。C溫度、表壓0.08MPa壓強(qiáng)，加熱5小吋；溶液進(jìn)行過(guò)濾，濾液經(jīng)HPD-400大孔樹(shù)脂柱層析分離，先用水、15%稀乙醇洗脫，除去雜質(zhì)，再用35%濃度的乙醇洗脫，洗脫液回收乙醇至盡；濃縮液用聚酰胺層析柱分離，先用水、45%乙醇溶液洗脫，棄去洗脫液，再用85%乙醇溶液洗脫，洗脫液回收乙醇至盡；濃縮液液調(diào)PH值至2.5，經(jīng)有機(jī)溶劑異丙醇中萃取，分離有機(jī)溶劑相，得含藥溶液，濃縮，干燥或冷凍干燥，干燥物加水溶解，重結(jié)晶，得到丹參丹酚酸A。取0.5克的抗氧劑亞硫酸氫鈉加入注射用水中，攪拌使溶解，取20克丹參丹酚酸A加入，攪拌溶解，調(diào)pH值，加入活性炭，攪拌吸附后除去活性炭；將余下的0.5克的抗氧劑亞硫酸氫鈉加入藥液中，調(diào)節(jié)pH值，灌裝，冷凍干燥，制備成凍干粉針劑1000瓶；或取0.5克的抗氧劑亞硫酸氫鈉加入注射用水中，攪拌使溶解，取20克丹參丹酚酸A加入，攪拌溶解，調(diào)pH值，加入活性炭，攪拌吸附后除去活性炭；將余下的0.5克的抗氧劑亞硫酸氫鈉加入藥液中，調(diào)節(jié)pH值，灌裝，灌裝，制備成水針劑1000瓶；或取0.5克的抗氧劑亞硫酸氫鈉加入注射用水中，攪拌使溶解，取20克丹參丹酚酸A加入，攪拌溶解，調(diào)pH值，加入活性炭，攪拌吸附后除去活性炭；將余下的0.5克的抗氧劑亞硫酸氫鈉加入藥液中，調(diào)節(jié)pH值，灌裝，制備成輸液劑1000瓶。上述注射制劑進(jìn)行有關(guān)物質(zhì)檢測(cè)，雜質(zhì)丹參丹酚酸F峰面積與丹參丹酚酸A的峰面積的比大于0且小于0.015;丹參酚酸A的注射制劑的雜質(zhì)丹參丹酚酸C峰面積S丹參丹酚酸A的峰面積的比大于0且小于0.015;丹參丹酚酸A"注射制劑的雜質(zhì)的峰面積之和與丹參丹酚酉》A的峰面積的比大于0且小于0.05。實(shí)施例9丹參用水提取得到水提取液，調(diào)PH值至5.5、125"C溫度、表壓0.14MPa壓強(qiáng)，加熱2小時(shí)；溶液進(jìn)行過(guò)濾，濾液經(jīng)HPD-400A大孔樹(shù)脂柱層析分離，先用水、25%稀乙醇洗脫，除去雜質(zhì)，再用65%濃度的乙醇洗脫，洗脫液回收乙醇至盡；濃縮液用葡聚糖凝膠LH-20分離，先用水、25%乙醇溶液洗脫，棄去洗脫液，再用60%乙醇溶液洗脫，洗脫液回收乙醇至盡；濃縮液液調(diào)PH值至4.5，經(jīng)有機(jī)溶劑乙酸乙酯萃取，分離有機(jī)溶劑相，得含藥溶液，濃縮，干燥或冷凍干燥，干燥物加水溶解，重結(jié)晶，得到丹參丹酚酸A。取0.5克的抗氧劑焦亞硫酸鈉加入注射用水中，攪拌使溶解，取20克丹參丹酚酸A加入，攪拌溶解，調(diào)pH值，加入活性炭，攪拌吸附后除去活性炭；將余下的0.5克的抗氧劑焦亞硫酸鈉加入藥液中，調(diào)節(jié)pH值，灌裝，冷凍干燥，制備成凍干粉針劑1000瓶；或取0.5克的抗氧劑焦亞硫酸鈉加入注射用水中，攪拌使溶解，取20克丹參丹酚酸A加入，攪拌溶解，調(diào)pH值，加入活性炭，攪拌吸附后除去活性炭；將余下的0.5克的抗氧劑焦亞硫酸鈉加入藥液中，調(diào)節(jié)pH值，灌裝，灌裝，制備成水針劑1000瓶；或取0.5克的抗氧劑焦亞硫酸鈉加入注射用水中，攪拌使溶解，取20克丹參丹酚酸A加入，攪拌溶解，調(diào)pH值，加入活性炭，攪拌吸附后除去活性炭；將余下的0.5克的抗氧劑焦亞硫酸鈉加入藥液中，調(diào)節(jié)pH伯:，灌裝，制備成輸液劑1000瓶。丄述注射制劑進(jìn)行W關(guān)物質(zhì)檢測(cè)，雜質(zhì)丹參丹酚酸F峰面積，丹參丹酚酸A的峰面積的比大于0且小于0.015;丹參酚酸A的注射制劑的雜質(zhì)丹參丹酚酸C峰面積與丹參丹酚酸A的峰面積的比大于0且小于0.015;丹參丹酚酸A的注射制劑的雜質(zhì)的峰面積之和與丹參丹酚酸A的峰面積的比大于0且小于0.05。實(shí)施例10丹參用乙醇溶液提取得到醇提取液，醇提液濃縮乙醇至盡，調(diào)PH值至5.0、12(TC溫度、表壓O.llMPa壓強(qiáng)，加熱3小時(shí)；溶液進(jìn)行過(guò)濾，濾液經(jīng)HPD-450大孔樹(shù)脂柱層析分離，先用水、20%稀乙醇洗脫，除去雜質(zhì)，再用50%濃度的乙醇洗脫，洗脫液回收乙醇至盡；濃縮液用聚酰胺層析柱分離，先用水、35%乙醇溶液洗脫，棄去洗脫液，再用75%乙醇溶液洗脫，洗脫液回收乙醇至盡；濃縮液液調(diào)PH值至3.5，經(jīng)有機(jī)溶劑乙酸丁酯萃取，分離有機(jī)溶劑相，得含藥溶液，濃縮，干燥或冷凍干燥，干燥物加水溶解，重結(jié)晶，得到丹參丹酚酸A。取0.5克的抗氧劑維生素C加入注射用水中，攪拌使溶解，取20克丹參丹酚酸A加入，攪拌溶解，調(diào)pH值，加入活性炭，攪拌吸附后除去活性炭；將余下的0.5克的抗氧劑維生素C加入藥液中，調(diào)節(jié)pH值，灌裝，冷凍干燥，制備成凍干粉針劑1000瓶；或取0.5克的抗氧劑維生素C加入注射用水中，攪拌使溶解，取20克丹參丹酚酸A加入，攪拌溶解，調(diào)pH值，加入活性炭，攪拌吸附后除去活性炭；將余下的0.5克的抗氧劑維生素C加入藥液中，調(diào)節(jié)pH值，灌裝，灌裝，制備成水針劑1000瓶;或f又0.5克的坑氧劑維生素C加入注射用水巾，攪拌使溶解，取20克丹參丹酚酸A加入，攪拌溶解，調(diào)pH值，加入活性炭，攪拌吸附后除去活性炭；將余下的0.5克的抗氧劑維生素C加入藥液中，調(diào)節(jié)pH值，灌裝，制備成輸液劑1000瓶。上述注射制劑進(jìn)行有關(guān)物質(zhì)檢測(cè)，雜質(zhì)丹參丹酚酸F峰面積與丹參丹酚酸A的峰面積的比大于0且小于0.015;丹參酚酸A的注射制劑的雜質(zhì)丹參丹酚酸C峰面積與丹參丹酚酸A的峰面積的比大于0且小于0.015;丹參丹酚酸A的注射制劑的雜質(zhì)的峰面積之和與丹參丹酚酸A的峰面積的比大于0且小于0.05。實(shí)施例11丹參用乙醇溶液提取得到醇提取液，醇提液濃縮乙醇至盡，調(diào)PH值至5.0、12(TC溫度、表壓0.11MPa壓強(qiáng)，加熱3小時(shí)；溶液進(jìn)行過(guò)濾，濾液經(jīng)1400大孔樹(shù)脂柱層析分離，先用水、20%稀乙醇洗脫，除去雜質(zhì)，再用50%濃度的乙醇洗脫，洗脫液回收乙醇至盡；濃縮液用葡聚糖凝膠LH-20分離，先用水、35%乙醇溶液洗脫，棄去洗脫液，再用75%乙醇溶液洗脫，洗脫液回收乙醇至盡；濃縮液液調(diào)PH值至3.5，經(jīng)有機(jī)溶劑乙酸丁酯萃取，分離有機(jī)溶劑相，得含藥溶液，濃縮，干燥或冷凍干燥，十燥物加水溶解，重結(jié)晶，得到丹參丹酚酸A。取0.5克的抗氧劑維生素C加入注射用水中，攪拌使溶解，取20克丹參丹酚酸A加入，攪拌溶解，調(diào)pH值，加入活性炭，攪拌吸附后除去活性炭；將余下的0.5克的抗氧劑維生素C加入藥液中，調(diào)節(jié)pH值，灌裝，冷凍干燥，制備成凍干粉針劑1000瓶；或取0.5克的抗氧劑維生素C加入注射用水中，攪拌使溶解，取20克丹參丹酚酸A加入，攪拌溶解，調(diào)pH值，加入活性炭，攪拌吸附后除去活性炭；將余下的0.5克的抗氧劑維生素C加入藥液中，調(diào)節(jié)pH值，灌裝，辨:裝，制備成水針劑1000瓶；或取0.5克的抗氧劑維生素C加入注射用水中，攪拌使溶解，取20克丹參丹酚酸A加入，攪拌溶解，調(diào)pH值，加入活性炭，攪拌吸附后除去活性炭；將余下的0.5克的抗氧劑維生素C加入藥液中，調(diào)節(jié)pH值，灌裝，制備成輸液劑IOOO瓶。上述注射制劑進(jìn)行有關(guān)物質(zhì)檢測(cè)，雜質(zhì)丹參丹酚酸F峰面積與丹參丹酚酸A的峰面積的比大于0且小于0.015;丹參酚酸A的注射制劑的雜質(zhì)丹參丹酚酸C峰面積與丹參丹酚酸A的峰面積的比大于0且小于0.015;丹參丹酚酸A的注射制劑的雜質(zhì)的峰面積之和與丹參丹酚酸A的峰面積的比大于0且小于0.05。實(shí)施例12丹參用乙醇溶液提取得到醇提取液，醇提液濃縮乙醇至盡，調(diào)PH值至5.0、125t:溫度、表壓0.14MPa壓強(qiáng)，加熱2.5小時(shí)；溶液進(jìn)行過(guò)濾，濾液經(jīng)D101大孔樹(shù)脂柱層析分離，先用水、20%稀乙醇洗脫，除去雜質(zhì)，再用50%濃度的乙醇洗脫，洗脫液回收乙醇至盡；濃縮液用聚酰胺層析柱分離，先用水、30%乙醇溶液洗脫，棄去洗脫液，再用60%乙醇溶液洗脫，洗脫液回收乙醇至盡；濃縮液液調(diào)PH值至3.5，經(jīng)有機(jī)溶劑異丙醇萃取，分離有機(jī)溶劑相，得含藥溶液，濃縮，干燥或冷凍干燥，干燥物加水溶解，重結(jié)晶，得到丹參丹酚酸A。取0.5克的抗氧劑亞硫酸鈉加入注射用水中，攪拌使溶解，取20克丹參丹酚酸A加入，攪拌溶解，調(diào)pH值，加入活性炭，攪拌吸附后除去活性炭；將余下的0.5克的抗氧劑亞硫酸鈉加入藥液中，調(diào)節(jié)pH值，灌裝，冷凍干燥，制備成凍干粉針劑1000瓶；或取0.5克的抗氧劑亞硫酸鈉加入注射用水中，攪拌使溶解，取20克丹參丹酚酸A加入，攪拌溶解，調(diào)pH值，加入活性炭，攪拌吸附后除去活性炭；將余下的0.5克的抗氧劑亞硫酸鈉加入藥液中，調(diào)節(jié)pH值，灌裝，灌裝，制備成水針劑1000瓶;或取0.5克的抗氧劑亞硫酸鈉加入注射用水中，攪拌使溶解，取20克丹參丹酚酸A加入，攪拌溶解，調(diào)pH值，加入活性炭，攪拌吸附后除去活性炭；將余下的0.5克的抗氧劑亞硫酸鈉加入藥液中，調(diào)節(jié)pH值，灌裝，制備成輸液劑1000瓶。上述注射制劑進(jìn)行有關(guān)物質(zhì)檢測(cè)，雜質(zhì)丹參丹酚酸F峰面積與丹參丹酚酸A的峰面積的比大于0且小于0.015;丹參酚酸A的注射制劑的雜質(zhì)丹參丹酚酸C峰面積與丹參丹酚酸A的峰面積的比大于0且小于0.015;丹參丹酚酸A的注射制劑的雜質(zhì)的峰面積之和與丹參丹酚酸A的峰面積的比大于0且小于0.05。注:本發(fā)明所要求保護(hù)的具體技術(shù)方案，不限于上述實(shí)施例所表達(dá)的技術(shù)方案的具體組合。權(quán)利要求1、一種丹參丹酚酸A的注射制劑，原料藥丹參丹酚酸A含量大于等于90％且小于100％，雜質(zhì)含量小于10％，其特征在于原料藥丹參丹酚酸A中的雜質(zhì)包括丹參丹酚酸F和丹參丹酚酸C，制備制劑后，注射制劑的雜質(zhì)包括丹參丹酚酸F和丹參丹酚酸C。2、根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種丹參丹酚酸A的注射制劑，進(jìn)行高效液相色譜法測(cè)定，其中注射制劑的雜質(zhì)丹參丹酚酸F峰面積與丹參丹酚酸A的峰面積的比大于0且小于0.015。3、根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種丹參酚酸A的注射制劑，進(jìn)行高效液相色譜法測(cè)定，其中注射制劑的雜質(zhì)丹參丹酚酸C峰面積與丹參丹酚酸A的峰面積的比大于0且小于0.015。4、根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種丹參丹酚酸A的注射制劑，進(jìn)行高效液相色譜法測(cè)定，其中注射制劑的雜質(zhì)的峰面積之和與丹參丹酚酸A的峰面積的比大于0且小于0.05。5、根據(jù)權(quán)利要求l、2、3和4任一項(xiàng)所述的一種丹參丹酚酸A的注射制劑的制備方法為丹參用水或乙醇溶液提取得到水提取液或醇提取液，醇提液濃縮乙醇至盡，調(diào)PH值至3.5—6.0、110—130。C溫度、表壓0.05MPa—0.17MPa壓強(qiáng)，加熱1一6小時(shí)；溶液進(jìn)行過(guò)濾，濾液經(jīng)非極性或弱極性大孔樹(shù)脂柱層析分離，所述大孔樹(shù)脂柱為HPD-100、HPD-100A、HPD-300、HPD-400、HPD-400A、HPD-450、D101、1300-1、1400或AB-8，先用水、10—30%稀乙醇洗脫，除去雜質(zhì)，再用30_70%濃度的乙醇洗脫，洗脫液回收乙醇至盡；濃縮液用葡聚糖凝膠LH-20或聚酰胺層析柱分離，先用水、20—50%乙醇溶液洗脫，棄去洗脫液，再用50—95%乙醇溶液洗脫，洗脫液回收乙醇至盡；濃縮液液調(diào)PH值至2—5，經(jīng)有機(jī)溶劑乙酸乙酯、乙酸丙酯、乙酸丁酯、正丁醇、異丙醇中的一種萃取，分離有機(jī)溶劑相，得含藥溶液，濃縮，干燥或冷凍干燥，得到干燥物，干燥物加水溶解，重結(jié)晶，得到丹參丹酚酸A;取1/2量的抗氧劑加入注射用水中，攪拌使溶解，取丹參丹酚酸A加入，攪拌溶解，調(diào)pH值，加入活性炭，攪拌吸附后除去活性炭；將余下的l/2i丄的抗氧劑加入藥液中，調(diào)節(jié)pH值，灌裝，冷凍干燥，制備成凍干粉針劑；或取1/2量的抗氧劑加入注射用水中，攪拌使溶解，取丹參丹酚酸A加入，攪拌溶解，調(diào)pH值，加入活性炭，攪拌吸附后除去活性炭；將余下的l/2量的抗氧劑加入藥液中，調(diào)節(jié)pH值，灌裝，制備成水針劑；或取1/2量的抗氧劑加入注射用水中，攪拌使溶解，取丹參丹酚酸A加入，攪拌溶解，加入葡萄糖或氯化鈉，調(diào)pH值，加入活性炭，攪拌吸附后除去活性炭；將余下的l/2量的抗氧劑加入藥液中，調(diào)節(jié)pH值，灌裝，制備成輸液劑。6、根據(jù)權(quán)利要求2、3或4所述的一種丹參丹酚酸A的注射制劑，其中高效液相色譜法為色譜柱C18反相色譜柱，NUCLEODUR，250*4.6mm，ODS;色譜條件與系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn)以十八垸基硅烷鍵合硅膠為填充劑；流速l.Oml/min;柱溫35匸；檢測(cè)波長(zhǎng)286nm;理論板數(shù)按丹酚酸A計(jì)應(yīng)不低于60000;以乙腈-0.2%醋酸水溶液為流動(dòng)相，按下述梯度洗脫條件進(jìn)行梯度洗脫，運(yùn)行90分鐘0-15分鐘時(shí)，乙腈的比例由10%升至20%，0.2%醋酸水溶液的比例由90%降至80%;15-55分鐘時(shí)，乙腈的比例由20%升至30%，0.2%醋酸水溶液的比例由80%降至70%;55-65分鐘時(shí)，乙腈的比例由30%升至50%,0.2%醋酸水溶液的比例由70%降至50%;65-72分鐘時(shí)，乙腈的比例由50%升至80%，0.2%醋酸水溶液的比例由50%降至20%;72-77分鐘時(shí)，乙腈的比例80%，0.2%醋酸水溶液的比例20%;77-80分鐘時(shí)，乙腈的比例由80%降至10%，0.2%醋酸水溶液的比例由20%升至90%;80-90分鐘時(shí)，保持乙腈-0.2%醋酸水溶液以10:90的比例進(jìn)行洗脫；對(duì)照品溶液的配制和供試品溶液的配制及檢測(cè)取注射制劑，用乙醇溶;W并分次轉(zhuǎn)移至量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液；精密量取量瓶的1/50溶液，再置量瓶中，加乙醇稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照溶液；照上述色譜條件，取對(duì)照溶液注入液相色譜儀，調(diào)節(jié)檢測(cè)靈敏度，使主成分色譜峰的峰高為記錄儀滿量程的10%—20%;精密量取供試品溶液與對(duì)照溶液，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖。7、根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種丹參丹酚酸A注射制劑的制備方法，其中抗氧劑為亞硫酸鈉、亞硫酸氫鈉、焦亞硫酸鈉、硫代硫酸鈉和維生素C中的一種。全文摘要本發(fā)明公開(kāi)了一種丹參丹酚酸A注射制劑及其制備方法，其特征在于原料藥丹參丹酚酸A中的雜質(zhì)包括丹參丹酚酸F和丹參丹酚酸C，制備制劑后，注射制劑的雜質(zhì)包括丹參丹酚酸F和丹參丹酚酸C，進(jìn)行高效液相色譜法測(cè)定，注射制劑的雜質(zhì)丹參丹酚酸F峰面積與丹參丹酚酸A的峰面積的比大于0且小于0.015；其中雜質(zhì)丹參丹酚酸C峰面積與丹參丹酚酸A的峰面積的比大于0且小于0.015；其中注射制劑的雜質(zhì)的峰面積之和與丹參丹酚酸A的峰面積的比大于0且小于0.05；藥理實(shí)驗(yàn)表明，本申請(qǐng)注射制劑具有很好的藥理作用。文檔編號(hào)A61K9/19GK101361728SQ200710120048公開(kāi)日2009年2月11日申請(qǐng)日期2007年8月8日優(yōu)先權(quán)日2007年8月8日發(fā)明者李志剛,林治榮,渠守峰,米長(zhǎng)江,金治剛,阮愛(ài)華,群顧申請(qǐng)人:正大青春寶藥業(yè)有限公司