專利名稱：：室溫穩(wěn)定的注射用河豚毒素制劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種用河豚毒素(tetrodotoxin)、穩(wěn)定劑和輔料制成的室溫穩(wěn)定的醫(yī)藥注射用制劑。用河豚毒素作為主要活性成分生產(chǎn)的注射用制劑系從天然產(chǎn)物中開發(fā)出的一種新藥。河豚毒素(tetrodotoxin)，在化學(xué)結(jié)構(gòu)上屬于氨基氫化喹唑啉類化合物，化學(xué)名為八氫-12-(羥甲基)-2-亞氨基-5,9:7,10a-二甲撐基-10a氫-[l，3]-二氧橋-[6，5-d]-嘧啶-4，7，10，ll,12-五醇。其化學(xué)結(jié)構(gòu)式為河豚毒素(TTX)最早是從河飩魚(FuguSpp)分離提取出。目前已知河豚目(Fugu)河豚科(Tetrodontidae)，刺豚科(Triodntiadae),翻車魚科(Molidae)，三刺河豚科(Triodntiade)，幾乎所有近百種河豚魚中都含有河豚毒素，除河豚目種的河豚魚外，也有文獻(xiàn)報(bào)道蝦虎魚、蠑螈、箭毒蛙、章魚地、貝類、螺類、蟹類、鱉類和藻類等均有河豚毒素(TTX)。從天然水生生物提取河豚毒素國(guó)內(nèi)最早由中國(guó)人民解放軍藥物化學(xué)研究所完成，其提取工藝1982年獲得國(guó)家發(fā)明二等獎(jiǎng)[1]。目前已知河豚毒素是自然界中存在不多的一種非蛋白質(zhì)神經(jīng)毒素之一，幾十年來(lái)，它一直在神經(jīng)藥理學(xué)和肌肉生理學(xué)等研究領(lǐng)域中被廣泛使用，實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明，河豚毒素是一種高度選擇的神精細(xì)胞膜鈉離子通道阻斷劑。河豚毒素的毒性極強(qiáng)，據(jù)報(bào)道，平均體重50Kg的成人，肌肉注射30(Hig-500ng即可使人至死。也許正是因?yàn)楹与喽舅貥O其強(qiáng)大的毒性，才使它從發(fā)現(xiàn)到藥用經(jīng)過(guò)了60多年的歷程。從1993年起，發(fā)明人及所在的公司，就發(fā)現(xiàn)了河豚毒素的戒毒[2]、鎮(zhèn)痛、排除人體內(nèi)抗生素殘留物[3]等藥用效果，現(xiàn)在已證實(shí)河豚毒素是一種治療效果顯著，用藥安全的藥品，目前在中國(guó)FSDA按一類新藥申報(bào)藥品。但是在研制河豚毒素的制劑中，因?yàn)楹与喽舅刈⑸湟簩?duì)溫度非常敏感，容易隨溫度升高而發(fā)生差向異構(gòu)體的轉(zhuǎn)化，所以目前研制的河豚毒素注射用制劑，都不能保存在室溫下，而需要放在低溫4'C條件下保存，這給藥廠的生產(chǎn)、貯存、運(yùn)輸、裝卸、批發(fā)、零售和醫(yī)院、診所臨床上使用，增加了許多不方便。為了能更好的使用河豚毒素藥品為人類的健康做出貢獻(xiàn)，必須要研制出一種安全穩(wěn)定，室溫下能長(zhǎng)期貯藏的藥品制劑。本發(fā)明就是研制出了一種可以使河豚毒素藥品在室溫下長(zhǎng)期保存的制劑。實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明，使用本發(fā)明組合物生產(chǎn)的藥品制劑可以在室溫(4(TC)以下長(zhǎng)期保存，它不需要保存在冰箱中。為藥品的生產(chǎn)，貯存，運(yùn)輸和臨床、診所醫(yī)生用藥提供了極為方便使用的制劑。
背景技術(shù)：
：河豚毒素(TTX)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage3</formula>
發(fā)明內(nèi)容藥用河豚毒素制劑，因?yàn)槠渖锘钚愿?，用量?.1-30Pg，所以均采用的是注射劑型，這種注射劑，因?yàn)楹与喽舅乇旧淼奈锢硖匦?，都必須使用有機(jī)酸及其鹽做助溶劑或者是緩沖液。在這種條件下，河豚毒素隨溫度的升高而發(fā)生降解。從表l結(jié)果可以看出，河豚毒素的枸櫞酸緩沖液在模擬室溫4(TC放置一個(gè)月后，河豚毒素的含量開始下降，有關(guān)物質(zhì)超過(guò)3%，到二個(gè)月后，其制劑中河豚毒素含量達(dá)不到藥用質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)要求。從表2結(jié)果可以看出，河豚毒素的枸櫞酸緩沖液在4x:放置三個(gè)月其制劑中河豚毒素含量幾乎沒(méi)有變化，對(duì)比結(jié)果說(shuō)明河豚毒素制劑的水液體與溫度的升高有相關(guān)性。表l河豚毒素枸櫞酸緩沖液在40'C穩(wěn)定性試驗(yàn)(041116)試驗(yàn)條件je藏時(shí)間外觀檢測(cè)含量有關(guān)物質(zhì)備注(%)(%)o天無(wú)色澄明液體99.80.1HPLC測(cè)定恒溫箱一個(gè)月無(wú)色澄明液體95.53.5外標(biāo)法40°C三個(gè)月無(wú)色澄明液體90.39.5六個(gè)月無(wú)色澄明液體88.111.7表2河豚毒素枸櫞酸緩沖液在冰箱(4'C)穩(wěn)定性試驗(yàn)(041116)試驗(yàn)條件ie藏時(shí)間外觀檢測(cè)含量(％)有關(guān)物質(zhì)備注o天無(wú)色澄明液體99.80.0HPLC測(cè)定冰箱一個(gè)月無(wú)色澄明液體99.00.5外標(biāo)法4°C二小日無(wú)色澄明液體98.31.5六個(gè)月無(wú)色澄明液體98.01.6河豚毒素注射液在室溫條件下不穩(wěn)定，在專利CN1568999A中對(duì)其也有論述，該專利申請(qǐng)保護(hù)的是一種河豚毒素的冷凍干燥粉制劑，它并沒(méi)有解決河豚毒素注射液在室溫(4(TC)條件內(nèi)是否穩(wěn)定和如何貯存的問(wèn)題。醫(yī)藥用河豚毒素(tetrodotoxin)純度在85%-98%，河豚毒素(TTX)純品是一種白色粉未或無(wú)定型結(jié)晶，熔點(diǎn)在22(TC以上變黑，易溶于有機(jī)酸，如醋酸，枸櫞酸，酒石酸等，極微溶于水，不溶于有機(jī)溶劑，其毒性小鼠LDs。為7.0-10.0^/kg，在強(qiáng)酸和強(qiáng)堿溶液中其化學(xué)結(jié)構(gòu)容易發(fā)生降解變化，使河豚毒素的毒性顯著降低w。河豚毒素在固態(tài)時(shí)可以室溫長(zhǎng)期保存，而且4(TC以下對(duì)其影響不大。但是將河豚毒素溶解于酸性水溶液時(shí)，其熱穩(wěn)定性較差。目前從化學(xué)結(jié)構(gòu)上分析，有機(jī)化學(xué)者認(rèn)為河豚毒素注射液在室溫條件下不穩(wěn)定是因?yàn)槠浠瘜W(xué)結(jié)構(gòu)中有容易發(fā)生差向異構(gòu)化的官能團(tuán)，如河豚毒素結(jié)構(gòu)中4-位碳上的羥基容易發(fā)生差向異構(gòu)化使河豚毒素轉(zhuǎn)變?yōu)?-表河豚毒素，或者在酸性水溶液條件下，4-表河豚毒素容易進(jìn)一步轉(zhuǎn)化成4,9-脫水河豚毒素和河豚酸等衍生物。如圖所示河豚酸(IV)4，9-脫水河豚毒素(III)如果我們選擇某種化學(xué)成分，能穩(wěn)定河豚毒素化學(xué)結(jié)構(gòu)中各種易發(fā)生差向異構(gòu)體的官能團(tuán)，也就能解決河豚毒素在溶液狀態(tài)時(shí)的穩(wěn)定性問(wèn)題。根據(jù)相似相溶的原理及立體結(jié)構(gòu)化學(xué)的構(gòu)象關(guān)系，同時(shí)必須選擇醫(yī)藥上允許使用的藥用輔料原則，我們使用乳糖和蔗糖做注射用河豚毒素制劑的穩(wěn)定性試驗(yàn)。表3，是使用乳糖作穩(wěn)定劑制成的河豚毒素注射液制劑(每劑量含乳糖50Pg)。從長(zhǎng)期考査試驗(yàn)結(jié)果，可以得出的結(jié)論，使用本發(fā)明的組合物制成的河豚毒素注射液可以在室溫條件下長(zhǎng)期保存。_表3河豚毒素注射液長(zhǎng)期試驗(yàn)的穩(wěn)定性研究(050511)。_<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>表4，是使用蔗糖作穩(wěn)定劑制成的注射用河豚毒素冷凍干燥粉制劑(每劑量含蔗糖4(￥g)。從長(zhǎng)期考査試驗(yàn)結(jié)果，得出的結(jié)論，使用本發(fā)明的組合物制成的注射用河豚毒素制劑可以在室溫條件下長(zhǎng)期保存。<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>室溫平均溫度28.5'C平均溫度31.2°C平均溫度33.8°C平均溫度34.rc平均溫度29.rc平均溫度25.3°C-l不一不月月月月月月天個(gè)個(gè)個(gè)個(gè)個(gè)八l表4注射用河啄毒素長(zhǎng)期試驗(yàn)的穩(wěn)定性研究(050515)?！囼?yàn)條#C藏時(shí)間外觀檢査￥1有關(guān)物質(zhì)—備互(%)(%)室溫平均溫度28.5°C平均溫度31.2'C平均溫度33.8'C平均溫度34.rc平均溫度29.rc平均溫度25.3'C在專利CN1568999A中，也認(rèn)為加入雙糖和聚糖可以提高河豚毒素的穩(wěn)定性，并研究了用河豚毒素藥品制成的冷凍干燥粉制劑。觀察了其在40'C的穩(wěn)定性，證明河豚毒素制成冷凍干粉后可以在室溫條件下長(zhǎng)期保存。但該專利并沒(méi)有對(duì)河豚毒素的注射用水溶液制劑進(jìn)行深入的研究。而河豚毒素制劑在醫(yī)院和診所最方便使用的仍然是注射液制劑。本發(fā)明人，就是發(fā)明了對(duì)注射用河豚毒素制劑在室溫穩(wěn)定性的組合藥物配方。注射用河豚毒素，它包括河豚毒素注射液和注射用河豚毒素凍干粉制劑。從河豚毒素(tetrodotoxin)的化學(xué)結(jié)構(gòu)中可以發(fā)現(xiàn)它的4-位碳羥基是最不穩(wěn)定的基團(tuán),在酸性水溶中，河豚毒素(I)與(II)為互變差向異構(gòu)體。如果隨溫度的升高，4-表河豚毒素(11)，會(huì)轉(zhuǎn)化成4，9脫水河豚毒素(III),4,9-脫水河豚毒素(III)隨時(shí)間和溫度的變化會(huì)進(jìn)一步轉(zhuǎn)化成河豚酸(IV)。因此在制備河豚毒素溶液制劑中，首先是要控制住4-位碳上的羥基，不要讓其發(fā)生差向異構(gòu)化。我們對(duì)河豚毒素立體結(jié)構(gòu)的分析后，發(fā)現(xiàn)醚健(ga1—0~glu)中的氧原子有穩(wěn)定4-位碳羥基的作用，其原理是醚健中的裸氧原子，提供出兩個(gè)負(fù)電子，氧原子上提供的兩個(gè)負(fù)電子與4-位碳上的羥基和鄰位氮原子上的氫原子正好形成一個(gè)氫健式穩(wěn)定構(gòu)形的6園環(huán)，實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)這類醚健以糖甙健中的氧原子為最佳選擇物。qalHO.11考慮到在藥用制劑生產(chǎn)中，所添加的穩(wěn)定劑，助溶劑和輔料等必須符合藥典標(biāo)準(zhǔn)，我們選用藥典中許可使用的含有醚健類的成分作為穩(wěn)定劑，如乳糖、麥芽糖和蔗糖等。在專利CN1568999A中也使用了雙糖、聚糖等作為河豚毒素冷凍干燥粉劑的穩(wěn)定劑，而且也達(dá)到定法法法法法法w夕夕夕夕夕夕￡999999w末末末末末末粉粉粉粉粉粉粉g或或或或或或l狀狀狀狀狀狀J塊塊塊塊塊塊色色色色色色色白白白白白白白月月月月月月個(gè)個(gè)這種氫健形成的河豚毒素溶液，可以非常穩(wěn)定的防止河豚毒素結(jié)構(gòu)發(fā)生各種差向異構(gòu)化，河豚毒素的分子量319.10，乳糖的分子量是360.31兩者相比，1克分子的河豚毒素需要1.13克分子的乳糖。如果將河豚毒素結(jié)構(gòu)中，所有能結(jié)合的官能團(tuán)都讓其形成穩(wěn)定的6園環(huán)，那么1克分子的河豚毒素需要3.4克分子的乳糖穩(wěn)定劑，因此我們?cè)O(shè)計(jì)乳糖的使用量為，0.35-15(Hxg是河豚毒素用量的3.5-5.0倍。根據(jù)實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果，本發(fā)明的注射用河豚毒素制劑的組合物劑量為1、河豚毒素注射液A、河豚毒素5.0PgB、河豚毒素10.0Pg枸櫞酸0.l他枸櫞酸0.15化枸櫞酸鈉0.OlPg乳糖50.0Pg乳糖25.(mg注射用水1.0-2.0ml注射用水1.0-2.0mlC、河豚毒素10.0PgD、河豚毒素15.04g枸櫞酸0.薛g枸櫞酸0.15Pg枸櫞酸鈉0.OlPg蔗糖50.0Hg乳糖50.0Pg注射用水1.0-2.0ml注射用水1.0-2.0mlE、河豚毒素5.0PgF、河豚毒素10.0化枸櫞酸0.l化g枸櫞酸0.15Mg麥芽糖25.0Pg蔗糖50.(^g了室溫長(zhǎng)期貯藏的效果。但是該專利中所使用的穩(wěn)定劑的量，即每劑量為5-100rag。以超出了河豚毒素化學(xué)結(jié)構(gòu)穩(wěn)定時(shí)所需求的量，而且最大的缺點(diǎn)是添加如此大劑量的穩(wěn)定劑，可以嚴(yán)重干擾對(duì)河豚毒素制劑中河豚毒素活性成分含量的檢測(cè)和分析。這樣的組合物缺少實(shí)際使用價(jià)值。我們?cè)谶x擇使用河豚毒素制劑的組合物時(shí)，認(rèn)為添加適量的穩(wěn)定劑是非常重要的，這也是本發(fā)明的一個(gè)主要特征。從河豚毒素的化學(xué)結(jié)構(gòu)判斷，能與糖甙健中的氧形成氫健式穩(wěn)定構(gòu)形的6園環(huán)，有三個(gè)符合條件的官能團(tuán)，如圖所示-注射用水1.0—2.0ml注射用水1.0—2.0ml2、注射用河豚毒素3、河豚毒素枸櫞酸枸櫞酸鈉乳糖甘露醇注射用水5潛g0.14M0.01Pg25.0jig7.5mg1.0—2.0mlb、河豚毒素枸櫞酸乳糖甘露醇注射用水10.0Mg0.15Hg50.0Pg7.5mg1.0-2.0mlc、河豚毒素枸櫞酸枸櫞酸鈉乳糖甘露醇注射用水10.0Pg0.15M0.01化50.O化10.Omg1.0—2.0mld、河豚毒素枸櫞酸蔗糖甘露醇注射用水15.OPg0.歸gso.(mg15.Omg1.0—2.Omle、河豚毒素枸櫞酸麥芽糖甘露醇注射用水5.O^gf、河豚毒素lO.OPg0.l扭g枸櫞酸0.15化25.0Pg蔗糖50.O^g25.Omg甘露醇20.Omg1.0-2.Oml注射用水1.0-2.0ml本發(fā)明所述的一種室溫穩(wěn)定的河豚毒素注射用制劑，即可以是注射液，也可以是注射用冷凍干燥粉，按照上述組合的方式制造成醫(yī)藥用河豚毒素制劑，就是一種可以在室溫下長(zhǎng)期貯藏的藥品。其中所述河豚毒素為醫(yī)藥用其含量在85-98%之間，河豚毒素在本組合物中的用量為每單位或每劑量為0.1-30Pg;其余為助溶劑，穩(wěn)定劑和輔料等。以上所述河豚毒素包括河豚毒素的衍生物，如4，9-脫水河豚毒素，河豚毒素內(nèi)酯，4-表河豚毒素，4，9-脫羥基河豚毒素，河豚酸等。這類活性成可以從生物中提取，如河飩目(Fugu)河豚科(Tetrodontidae),刺豚科(Triodntiadae)，翻車魚科(Molidae),三刺河豚科(Triodntiade)，蝦虎魚、蠑螈、箭毒蛙、章魚地、貝類、螺類、蟹類、鱉類和藻類等，也可以是人工合成物[5]，或者是生物發(fā)酵提取物[6]。在本發(fā)明中使用的河豚毒素因?yàn)闃O微溶解于水，所以為了充分的讓其溶解于水溶液，必須加入助溶劑，而且河豚毒素對(duì)強(qiáng)酸和強(qiáng)堿極不穩(wěn)定，研究發(fā)現(xiàn)用有機(jī)酸是比較好的一種助溶劑，它在l:1比例范圍內(nèi)可以充分將河豚毒素完全溶解，本發(fā)明中使用的助溶劑有，枸櫞酸，醋酸，酒石酸等，其每單位或每劑量為，0.1-20Pg，是河豚毒素的0.1-20倍。實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)在這種條件下，加入助溶劑后河豚毒素水溶液的PH值正好是4.0-7.0之間，也是人體注射使用的最佳PH值。在制備室溫條件下穩(wěn)定的河豚毒素水溶液，必須要加入穩(wěn)定劑，而選擇穩(wěn)定劑的原則是能讓河豚毒素化學(xué)結(jié)構(gòu)形成穩(wěn)定型6圓環(huán)氫健的成分，同時(shí)考慮到藥品制造的要求，所選擇的成分必須符合藥典標(biāo)準(zhǔn)的物質(zhì)，我們實(shí)驗(yàn)研究后選擇使用的是含有糖甙健的成分(glu-O-gal)，如乳糖，蔗糖，和麥芽糖等，因?yàn)樵诤与喽舅鼗瘜W(xué)結(jié)構(gòu)上可以形成穩(wěn)定型6圓環(huán)的構(gòu)形只有三種官能團(tuán)，同時(shí)必須考慮到所加入的穩(wěn)定劑，還不能影響到河豚毒素主成分含量的分析，研究結(jié)果，我們使用的劑量為每單位或每劑量為0.35-150Pg，是河豚毒素的3.5-5倍。在這種條件下，能防止河豚毒素結(jié)構(gòu)發(fā)生各種差向異構(gòu)化，而且又不影響對(duì)主成分河豚毒素的檢測(cè)和分析。在注射用河豚毒素制劑的研究中，根據(jù)醫(yī)院臨床使用和診所醫(yī)生用藥的方便，本發(fā)明中，室溫穩(wěn)定的河豚毒素制劑也可以制成河豚毒素的凍干粉制劑，只需要在水溶液中加入藥用輔料甘露醇即可，其使用劑量，每單位或每劑量為5.0-50mg。在室溫穩(wěn)定的河豚毒素注射液中，使用的水溶液是符合藥典標(biāo)準(zhǔn)的注射用水，每單位或每劑量為0.5-2.5ml。以上所述的室溫穩(wěn)定的注射用河豚毒素注射液，是用藥物活性成分河豚毒素、穩(wěn)定劑、助溶劑和藥用輔料組合物生產(chǎn)的制劑，除用于治療人類疾病，如戒除成癮類藥物依賴癥[2，鎮(zhèn)痛，鎮(zhèn)靜，麻醉，排除人體體內(nèi)抗生素藥物殘留物[3]等外，還可用于清除養(yǎng)殖生物、動(dòng)物體內(nèi)抗生素類藥物的殘留物6]及其毒素7]。用本發(fā)明的組合物生產(chǎn)室溫穩(wěn)定的注射用河豚毒素制劑，具體制備工藝為1、河豚毒素注射液，將定量助溶劑溶解于標(biāo)定量的注射用水中，用磁力攪拌10-15min，將定量的河豚毒素加入助溶劑中，繼續(xù)攪拌10-15min,加入定量的穩(wěn)定劑，繼續(xù)攪拌10-15min,領(lǐng)![PH值，在4.0-7.0范圍，符合標(biāo)準(zhǔn)后，過(guò)0.22Mm的濾膜，再過(guò)分子量為5000的超濾膜除菌，用HPLC法測(cè)河豚毒素含量，將溶液定量灌入2ml安瓿瓶中，封口，檢漏，按藥品標(biāo)準(zhǔn)全檢，產(chǎn)品合格后，印字，包裝，成品貯藏。2、注射用河豚毒素，將定量助溶劑溶解于標(biāo)定量的注射用水中，用磁力攪拌10-15min，將定量的河豚毒素加入助溶劑中，繼續(xù)攪拌10-15min,加入定量的穩(wěn)定劑，繼續(xù)攪拌10-15min，再加入定量支架輔料，繼續(xù)攪拌15-20min,測(cè)PH值，在4.0-7.0范圍，符合標(biāo)準(zhǔn)，過(guò)0,22陶的濾膜，再過(guò)分子量為5000的超濾膜除菌，用HPLC法測(cè)含量,定量灌入2ml西林瓶中，半加塞，4(rc預(yù)凍，照凍干曲線，冷凍，升華，再干燥，壓塞，軋蓋，按藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)全檢，產(chǎn)品合格后，印字，包裝，成品貯藏。與現(xiàn)有技術(shù)相比，現(xiàn)有的河豚毒素注射液必須在冷藏(4-8'C)條件下貯存，否則將會(huì)影響到河豚毒素制劑的質(zhì)量，使產(chǎn)品達(dá)不到藥用質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)要求。這種條件下的制劑給生產(chǎn)，藥品運(yùn)輸，醫(yī)院醫(yī)生用藥都帶來(lái)了極大不方便。高劑量的穩(wěn)定劑和輔料會(huì)影響對(duì)活性成分河豚毒素的檢測(cè)和分析，仍然不能保證河豚毒素制劑質(zhì)量的穩(wěn)定性和藥品安全性。本發(fā)明所取得的技術(shù)實(shí)質(zhì)性的進(jìn)步是1、科學(xué)合理的組合物，使用劑量科學(xué)、加入符合藥品標(biāo)準(zhǔn)的助溶劑，穩(wěn)定劑和輔料保證了河豚毒素制劑質(zhì)量的穩(wěn)定性和產(chǎn)品的安全性，用這種組合物生產(chǎn)的注射用制劑，可以在室溫條件下貯藏，時(shí)間在2年以上，為工廠的生產(chǎn)，醫(yī)藥運(yùn)輸、批發(fā)，節(jié)約了成本。2、科學(xué)合理的組合物，生產(chǎn)出藥品質(zhì)量可靠、用藥安全、室溫穩(wěn)定的注射液，其劑型有注射液和注射用凍干粉，為醫(yī)院、診所醫(yī)生用藥，根據(jù)需要提供了可選擇的產(chǎn)品。其用法可通過(guò)肌肉內(nèi)，皮下，靜脈注射或滴注等。3、用本發(fā)明組合物生產(chǎn)注射用河豚毒素制劑，質(zhì)量穩(wěn)定，重現(xiàn)性好，生產(chǎn)工藝簡(jiǎn)單，檢測(cè)分析快速靈敏，有工業(yè)化大規(guī)模生產(chǎn)的價(jià)值，可滿足社會(huì)的需求。實(shí)施方案一、河豚毒素注射液實(shí)施例1、取枸櫞酸140Mg和其鈉鹽10Mg用注射用水1000rol將其溶解，加入河豚毒素5mg攪拌20min,加入乳糖25mg,繼續(xù)攪拌20min，PH值-5.5，用0.22的濾膜過(guò)濾，再過(guò)分子量為5000的超濾膜除菌，用HPLC測(cè)河豚毒素含量，外標(biāo)法計(jì)算，97.5%，灌入2ml安瓿瓶，每瓶lml，封口，燈檢，按河豚毒素質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行全檢，合格。包裝。穩(wěn)定性考查，稱A配方。實(shí)施例2、取枸櫞酸150Pg用注射用水1000ml將其溶解，加入河豚毒素10mg攪拌20min，加入乳糖50mg,繼續(xù)攪拌20min，PH值-5.0，用0.22的濾膜過(guò)濾，再過(guò)分子量為5000的超濾膜除菌，用HPLC測(cè)河豚毒素含量，外標(biāo)法計(jì)算，95.5%，灌入2ml安瓿瓶，每瓶lml，封口，燈檢，按河豚毒素質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行全檢，合格。包裝。穩(wěn)定性考查，稱B配方。實(shí)施例3、取枸櫞酸150Mg及其枸櫞酸鈉10Pg用注射用水1000ffll將其溶解，加入河豚毒素10mg攪拌20min,加入乳糖50rag,繼續(xù)攪拌20min，PH值=6.0，用0.22的濾膜過(guò)濾，再過(guò)分子量為5000的超濾膜除菌，用HPLC測(cè)河豚毒素含量，外標(biāo)法計(jì)算，99.0%，灌入2ml安瓿瓶，每瓶lml，封口，燈檢，按河豚毒素質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行全檢，合格。包裝。穩(wěn)定性考査，稱C配方。實(shí)施例4、取枸櫞酸150Pg用注射用水1000ml將其溶解，加入河豚毒素15呢?cái)嚢?0min,加入蔗糖50mg,繼續(xù)攪拌25min，PH值:5.2，用0.22的濾膜過(guò)濾，再過(guò)分子量為5000的超濾膜除菌，用HPLC測(cè)河豚毒素含量，外標(biāo)法計(jì)算，105.0%，灌入2rd安瓿瓶，每瓶lml，封口，燈檢，按河豚毒素質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行全檢，合格。包裝。穩(wěn)定性考査，稱D配方。實(shí)施例5、取枸櫞酸140Pg用注射用水1000ml將其溶解，加入河豚毒素5mg攪拌20min,加入麥芽糖25mg,繼續(xù)攪拌15min，PH值-6.5,用0.22的濾膜過(guò)濾，再過(guò)分子量為5000的超濾膜除菌，用HPLC測(cè)河豚毒素含量，外標(biāo)法計(jì)算，95.0%，灌入2ml安瓿瓶，每瓶lml，封口，燈檢，按河豚毒素質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行全檢，合格。包裝。穩(wěn)定性考査，稱E配方。實(shí)施例6、取枸櫞酸150Pg用注射用水1000ml將其溶解，加入河豚毒素10mg攪拌20min，加入蔗糖50mg，繼續(xù)攪拌15min，ffl值-5.5，用0.22的濾膜過(guò)濾，再過(guò)分子量為5000的超濾膜除菌，用HPLC測(cè)河豚毒素含量，外標(biāo)法計(jì)算，108.0%,灌入2ml安瓿瓶，每瓶lml，封口，燈檢，按河豚毒素質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行全檢，合格。包裝。穩(wěn)定性考査，稱F配方。表5所示，各種組合物的河豚毒素注射液在高溫條件下(4(TC)的穩(wěn)定性試驗(yàn)。從結(jié)果證實(shí)，用本發(fā)明的組合物生產(chǎn)的制劑質(zhì)量穩(wěn)定。從表7的長(zhǎng)期穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)觀察結(jié)果證實(shí)，用本發(fā)明的組合物生產(chǎn)的藥品可在室溫條件下長(zhǎng)期貯存，期限在2年以上。二、注射用河豚毒素實(shí)施例7、取枸櫞酸140Pg和其鈉鹽lOPg用注射用水1000ml將其溶解，加入河豚毒素5mg攪拌20min，加入乳糖25mg,繼續(xù)攪拌10min，加入甘露醇7.5g,繼續(xù)攪拌15min，Wl值=6.5,用0.22的濾膜過(guò)濾，再過(guò)分子量為5000的超濾膜除菌，用HPLC測(cè)河豚毒素含量，外標(biāo)法計(jì)算，105.5%，灌入2ml安瓿瓶，每瓶linl，半加塞，4(TC預(yù)凍，從-5(TC凍干24hr曲線升華，lOhr再干燥，壓塞，軋蓋，按河豚毒素藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)全檢，產(chǎn)品合格后，印字，包裝。穩(wěn)定性考査，稱a配方。實(shí)施例8、取枸櫞酸1504g用注射用水1000ml將其溶解,加入河豚毒素10mg攪拌20min，加入乳糖50mg，繼續(xù)攪拌10min，加入甘露醇7.5g,繼續(xù)攪拌15min，PH值=6.0，用0.22的濾膜過(guò)濾，再過(guò)分子量為5000的超濾膜除菌，用HPLC測(cè)河豚毒素含量，外標(biāo)法計(jì)算，100.8W,灌入2ml安瓿瓶，每瓶lml，半加塞，4(TC預(yù)凍，從-5(TC凍干24hr曲線升華，10hr再干燥，壓塞，軋蓋，按河豚毒素藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)全檢，產(chǎn)品合格后，印字，包裝。穩(wěn)定性考査，稱b配方。實(shí)施例9、取枸櫞酸150Pg和其鈉鹽10Hg用注射用水1000ml將其溶解，加入河豚毒素10mg攪拌20min，加入乳糖50mg,繼續(xù)攪拌10min，加入甘露醇10g，繼續(xù)攪拌15min，PH值=6.0，用0.22的濾膜過(guò)濾，再過(guò)分子量為5000的超濾膜除菌，用HPLC測(cè)河豚毒素含量，外標(biāo)法計(jì)算，96.1%，灌入2ml安瓿瓶，每瓶lml，半加塞，-40°<:預(yù)凍，從-5(TC凍干24hr曲線升華，10hr再干燥，壓塞，軋蓋，按河豚毒素藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)全檢，產(chǎn)品合格后，印字，包裝。穩(wěn)定性考査，稱c配方。實(shí)施例10、取枸櫞酸150Pg用注射用水1000ml將其溶解，加入河豚毒素15rag攪拌20min，加入蔗糖50mg,繼續(xù)攪拌10min，加入甘露醇15g,繼續(xù)攪拌15邁in，PH值-6.8，用0.22的濾膜過(guò)濾，再過(guò)分子量為5000的超濾膜除菌，用HPLC測(cè)河豚毒素含量，外標(biāo)法計(jì)算，103.1%，灌入2ml安瓿瓶，每瓶lml，半加塞，-40^預(yù)凍，從-50'C凍干24hr曲線升華，10hr再干燥，壓塞，軋蓋，按河豚毒素藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)全檢，產(chǎn)品合格后，印字，包裝。穩(wěn)定性考査，稱d配方。實(shí)施例11、取枸櫞酸14Cmg用注射用水1000ml將其溶解，加入河豚毒素5mg攪拌20min,加入麥芽糖25mg,繼續(xù)攪拌10min，加入甘露醇25g，繼續(xù)攪拌15min，PH值=6.7，用0.22的濾膜過(guò)濾，再過(guò)分子量為5000的超濾膜除菌，用HPLC測(cè)河豚毒素含量,外標(biāo)法計(jì)算，94.2%，灌入2ml安瓿瓶，每瓶lml，半加塞，4(TC預(yù)凍，從-5(TC凍干24hr曲線升華，10hr再干燥，壓塞，軋蓋，按河豚毒素藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)全檢，產(chǎn)品合格后，印字，包裝。穩(wěn)定性考査，稱e配方。實(shí)施例12、取枸櫞酸150Pg用注射用水1000ml將其溶解，加入河豚毒素10mg攪拌20min,加入蔗糖50mg，繼續(xù)攪拌10min，加入甘露醇20g，繼續(xù)攪拌15min，PH值:6.1，用0.22的濾膜過(guò)濾，再過(guò)分子量為5000的超濾膜除菌，用HPLC測(cè)河豚毒素含量，外標(biāo)法計(jì)算，99.5%，灌入2ml安瓿瓶，每瓶lml，半加塞，-40°0預(yù)凍，從-50'C凍干24hr曲線升華，10hr再干燥，壓塞，軋蓋，按河豚毒素藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)全檢，產(chǎn)品合格后，印字，包裝。穩(wěn)定性考査，稱f配方。表6所示，各種組合物的注射用河豚毒素制劑在高溫條件下(40°C)的穩(wěn)定性試驗(yàn)。從結(jié)果證實(shí)，用本發(fā)明的組合物生產(chǎn)的制劑質(zhì)量穩(wěn)定。從表8的長(zhǎng)期穩(wěn)定性觀察實(shí)驗(yàn)，結(jié)果證實(shí)用本發(fā)明的組合物生產(chǎn)的藥品制劑可在室溫條件下長(zhǎng)期貯存，期限在2年以上。按本發(fā)明實(shí)施方案生產(chǎn)的藥品，在室溫貯存一年以上，其河豚毒素的含量仍為90-110%，，在標(biāo)示量范圍之內(nèi)，有關(guān)物質(zhì)小于3%，符合藥品質(zhì)量要求。說(shuō)明本發(fā)明使用的穩(wěn)定劑及其在組合物中的使用量對(duì)河豚毒素制劑有顯著的穩(wěn)定作用。參考文獻(xiàn)[1]河北漁業(yè)1982年(Z1)期，P49[2]ZL95190556.2，DE69529156T2，EP0750909Bl，RU2168331C2,US55846975A1[3]CN200610168171[4]Toxicon1985,23,271-276[5]Y.Kishietc,J.Amer.Chem.Soc.,94，9217(1972).[6]CN1552884A[7]CN200610138719.7[8]CN200610150511.7表5，各種組合物河豚毒素注射液在高溫(4CTC)、光照(4500LX)條件下的穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果組方ABCDEF鑒別供試品與對(duì)照品主峰的保留時(shí)間一致供試品與對(duì)照品主峰的保留時(shí)間一致供試品與對(duì)照品主峰的保留時(shí)間一致供試品與對(duì)照品主峰的保留時(shí)間一致供試品與對(duì)照品主峰的保留時(shí)間一致供試品與對(duì)照品主峰的保留時(shí)間一致含量限度(90-110)外標(biāo)法外標(biāo)法外標(biāo)法外標(biāo)法外標(biāo)法外標(biāo)法高溫o天97.595.599.0105.095.0108.0高溫5天97.195.398.3104.094.5107.0高溫10天97.095.097.5103.394.1106.8光照o天97.595.699.0105.095.0108,0光照5天97.095.498.0104.594.0106.5光照10天96.794.197.0103.693.7106.0表6、各種組合物注射用河豚毒素在高溫(40°C)、光照(4500LX)條件下的穩(wěn)定的性試驗(yàn)結(jié)果組方bcd6f鑒別供試品與對(duì)照品主峰的保留時(shí)間一致供試品與對(duì)照品主峰的保留時(shí)間一致供試品與對(duì)照品主峰的保留時(shí)間一致供試品與對(duì)照品主峰的保留時(shí)間一致供試品與對(duì)照品主峰的保留時(shí)間一致供試品與對(duì)照品主峰的保留時(shí)間一致含量限度(90-110)外標(biāo)法外標(biāo)法外標(biāo)法外標(biāo)法外標(biāo)法外標(biāo)法高溫0天105.5跳896.1103.194.299.5高溫5大104.198.395.3103.094.099.0高溫10天104.098.094.5102.394.098.8光照o天105.5100.896.1103.194.299.5光照5大105.098.496.0102.593.098.5光照10天104.398.195.5102.693.797.0表7不同組合物河豚毒素注射液在室溫條件下穩(wěn)定性試驗(yàn)研究，分析方法HPLC法，外標(biāo)法標(biāo)定。<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>表8不同組合物注射用河豚毒素在室溫條件下穩(wěn)定性試驗(yàn)研究，分析方法HPLC法，外標(biāo)法標(biāo)定<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>權(quán)利要求1.一種室溫穩(wěn)定的注射用河豚毒素制劑，其特征在于它含有藥用活性成分河豚毒素(tetrodotoxin)、穩(wěn)定劑乳糖和助溶劑枸櫞酸等的藥物組合物。所述的河豚毒素為醫(yī)藥用其含量在85-98％在本組合物中的用量為每單位或每劑量為0.1-30μg；乳糖為0.35-150μg；枸櫞酸為0.1-20μg。2、根據(jù)權(quán)利要求1所述的室溫穩(wěn)定的注射用河豚毒素制劑，其特征在于所述的河豚毒素包括其天然或者是人工合成的衍生物或類似物，如4，9-脫水河豚毒素，河豚毒素內(nèi)酯，4-表河豚毒素，4，9-脫羥基河豚毒素,河豚酸等。3、根據(jù)權(quán)禾j要i1所述的穩(wěn)定劑，其特征在于穩(wěn)定河豚毒素注射用制劑讓河豚毒素在室溫下不發(fā)生差向異構(gòu)體的成分是含有糖甙健(gal-O-glu)類的藥用輔料成分，如乳糖、麥芽糖、庶糖等。4、根據(jù)S利要求1所述的助溶劑，其特征在于，在所述的室溫穩(wěn)定注射用河豚毒素制劑中，溶解河豚毒素的助溶劑系枸櫞酸，醋酸，酒石酸等有機(jī)酸系列。加入有機(jī)酸后其注射用河豚毒素制劑溶液的PH值在4.0-7.0之間。5、根據(jù)權(quán)利1要求所述的室溫穩(wěn)定的注射用河豚毒素制劑，其特征在于所述的河豚毒素、穩(wěn)定劑和助溶劑組成的藥物組合物，按藥典標(biāo)準(zhǔn)制成注射用制劑，可以是注射用冷凍干燥粉末和注射液，這種制劑可以用于肌肉內(nèi)、皮下或者靜脈注射、滴注等。所用的水溶液為符合藥典標(biāo)準(zhǔn)的注射用水，其用量每單位或每劑量為0.5-2.5ml。6、根據(jù)權(quán)利5要求所述的一種室溫穩(wěn)定的注射用冷凍干燥粉末，其特征在于所述的河豚毒素、穩(wěn)定劑、助溶劑的藥物組合物中，按藥典允許注射用冷凍干燥粉末制劑加入支架輔料,如甘露醇等，其用量每單位或每劑量為5.0-50mg。7、一種如權(quán)利要求1所述的室溫穩(wěn)定的注射用河豚毒素制劑的制備方法，其特征在于(1)將河豚毒素用助溶劑枸櫞酸水溶液溶解后，與穩(wěn)定劑乳糖水溶液混合，加入注射用水到標(biāo)定量，用無(wú)菌過(guò)濾法滅菌，測(cè)PH值，測(cè)河豚毒素含量，當(dāng)其符合質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)后，定量灌裝于安瓿瓶中，封口。即可得到室溫穩(wěn)定的河豚毒素注射液制劑。(2)將河豚毒素用助溶劑枸櫞酸溶解后，與穩(wěn)定劑乳糖和支架輔料甘露醇水溶液混合，加入注射用水到標(biāo)定量，用無(wú)菌過(guò)濾法滅菌，測(cè)PH值，測(cè)河豚毒素含量，當(dāng)其符合質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)后，定量灌裝于西林瓶中，半加塞，凍干，升華，再干燥，壓塞、封口。即可得到室溫穩(wěn)定的注射用河豚毒素冷凍干燥粉。8、根據(jù)權(quán)利1要求所述的一種室溫穩(wěn)定的注射用河豚毒素制劑，其特征在于所述的河豚毒素、穩(wěn)定劑、助溶劑的藥物組合物，除用于治療人類疾病，如戒除成癮類藥物依賴癥，鎮(zhèn)痛，鎮(zhèn)靜，麻醉，排除人體體內(nèi)抗生素藥物殘留物等外，還可用于清除養(yǎng)殖生物、動(dòng)物體內(nèi)抗生素類藥物的殘留物及其毒素。全文摘要本發(fā)明涉及河豚毒素Tetrodotoxin及其衍生物藥品生產(chǎn)。特別是涉及河豚毒素藥品制劑中穩(wěn)定性的組合物。本發(fā)明提供了一種使河豚毒素類成分在制劑產(chǎn)品中穩(wěn)定的制備方法，其制備方法是使用藥典允許的輔料，助溶劑和穩(wěn)定劑制造出注射用河豚毒素制劑。用本發(fā)明組合物的制造方法生產(chǎn)的注射用河豚毒素制劑，可以在室溫條件下長(zhǎng)期貯存，解決了河豚毒素制劑在室溫條件下不穩(wěn)定的問(wèn)題。文檔編號(hào)A61K31/529GK101264063SQ20071008656公開日2008年9月17日申請(qǐng)日期2007年3月15日優(yōu)先權(quán)日2007年3月15日發(fā)明者邱芳龍申請(qǐng)人:深圳市宏錦天生物科技有限公司