專利名稱：一種制備咪喹莫特殼聚糖納米粒的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及咪喹莫特納米載藥系統(tǒng)，特別涉及咪喹莫特殼聚糖納米粒的制備方法。 采用該方法制備的納米粒子，粒徑小，載藥量及包封率較高。
技術(shù)背景咪喹莫特(Imiquimod)，化學(xué)名為l-異丁基-lH-咪唑[4， 5-C]喹啉-4-胺，它是免 疫調(diào)節(jié)劑，也是干擾素誘導(dǎo)劑。最初由美國的Ricker Labs研制開發(fā)，后轉(zhuǎn)讓3M公司 和日本第一制藥公司。1997年3M公司提出的新藥申請被美國FDA批準(zhǔn)，IO月在美國 上市，上市商品名為Aldara，是250mg單劑量包裝的5%咪喹莫特霜?jiǎng)?，用于治療病?感染如I型和II型單純性皰疹感染和尖銳濕疣。納米粒作為一個(gè)新型的皮膚載體給藥系 統(tǒng)，可與皮膚表面結(jié)合，改變角質(zhì)層的分配系數(shù)而促進(jìn)藥物轉(zhuǎn)運(yùn)。 發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供一種制備咪喹莫特殼聚糖納米粒的新方法，該方法可以實(shí)現(xiàn)納 米粒子粒徑小、分布均勻、載藥量及包封率均較高的特點(diǎn)。本發(fā)明的技術(shù)方案的原理是選用的微乳體系是肉豆蔻酸異丙酯、司盤20-吐溫80-1， 2-辛二醇、水。殼聚糖、咪喹莫特溶解于醋酸溶液中，作為微乳液的水相。三聚 磷酸鈉作為另一微乳體系的水相。兩微乳體系混合后發(fā)生殼聚糖交聯(lián)反應(yīng)，即離子凝膠 化反應(yīng)后，可均勻控制產(chǎn)物顆粒尺寸，并使顆粒尺寸控制在1000nm以內(nèi)，并獲得較高 的載藥量和包封率。由于咪喹莫特難溶于水和常用有機(jī)溶劑，無法采用乳液聚合法和液中干燥法等常規(guī) 方法制備納米粒。制備納米粒的高分子材料很多，但多數(shù)存在生物相容性不好及有一定 毒性等問題。殼聚糖是目前公認(rèn)的很有發(fā)展前途的天然高分子化合物，殼聚糖與醋酸等結(jié)合可溶于水而形成凝膠，形成凝膠后可包裹藥物，且對藥物有良好的透過性；殼聚糖 無皮膚刺激性，與人體有很好的相容性；殼聚糖和咪喹莫特的分子結(jié)構(gòu)中都含有堿性氨 基，能溶于醋酸溶液中，故采用咪喹莫特為模型藥物，在微乳液中采用殼聚糖交聯(lián)法制 備咪喹莫特納米粒。與文獻(xiàn)報(bào)道的不在微乳液中的殼聚糖交聯(lián)法制備的咪喹莫特納米粒 相比，具有粒度分布均勻，包封率及載藥量均較高的特點(diǎn)。本發(fā)明的咪喹莫特殼聚糖納米粒的制備方法，其制備步驟如下，其中所述的配比為 重量百分比(I)按司盤20 :吐溫80 : 1， 2-辛二醇=28 : 42 : 30，稱取司盤20、吐溫80、 1， 2-辛二
醇置于容器中，攪拌混合0.5 1.0小時(shí)，配得表面活性劑；
(2) 配制殼聚糖醋酸水溶液，取咪喹莫特用醋酸溶解后加入所述殼聚糖水溶液中使pH值 為4±0.2，另配制三聚磷酸鈉水溶液；
(3) 按肉豆蔻酸異丙酯步驟(1)所配得的表面活性劑=6.5 : 3.5，稱取肉豆蔻酸異丙酯 及步驟(1)所配得的表面活性劑各兩份，分別置于容器I、 n中；
(4) 于容器I中在不斷攪拌的條件下滴入步驟(2)中所配制的pH值為4土0.2的咪喹莫 特殼聚糖水溶液，使成帶淡藍(lán)色乳光的透明的微乳液(I );于容器H中在不斷攪拌的條 件下滴入步驟(2)中所配制的三聚磷酸鈉水溶液，使成帶淡藍(lán)色乳光的透明的微乳液
(II);
(5)在不斷攪拌的條件下，將微乳液(I )滴入微乳液(II)中，反應(yīng)》4小時(shí)，離心， 沉淀用吐溫80水溶液分散溶解，離心，濾除上清液，沉淀烘千，即得咪喹莫特殼聚糖納 米粒目標(biāo)物。
上述制備步驟(2)中配制的殼聚糖醋酸水溶液的殼聚糖濃度為0.75-3.25mg/ml;配 制的三聚磷酸鈉水溶液濃度為0.375-1.25mg/tnl;咪喹莫特用醋酸溶解配制成濃度為 lmg/ml溶液。
所述步驟(4)中微乳液(I )、微乳液(II)中水相的量為30% 60% (重量百分
比)；
所述步驟(5)中的離心轉(zhuǎn)速為4000轉(zhuǎn)/分。 所述步驟(5)中吐溫80水溶液為1%的吐溫水溶液。
所得咪喹莫特殼聚糖納米粒載藥量的測定精密稱定重量W2，加冰醋酸適量，超聲 提取1分鐘，離心分離，取上清液，重復(fù)操作3次，合并上清液，適當(dāng)稀釋，于紫外分 光光度儀上測定吸收度A，計(jì)算咪喹莫特含量(W,)，則載藥量為W,/W2X100y。。 采用HPLC法測定咪喹莫特的包封率，包封率最高達(dá)66. 5%，
本發(fā)明的方法制備的咪喹莫特殼聚糖納米粒的載藥量最高41.0%，激光粒度儀測定平 均粒徑為150nm左右，多分散系數(shù)為0. 4。
具體實(shí)施方式
實(shí)施例1
咪喹莫特殼聚糖納米粒的制備 1、在一個(gè)50ml燒杯中，分別加入2.8g司盤20、 4. 2g吐溫80、 3.0gl,2-辛二醇,此
時(shí)司盤20 :吐溫80 : i， 2-辛二醇=28 : 42 : 30，攪拌l小時(shí)，配得表面活性劑；2、 在I、 II兩個(gè)150ml燒杯中，分別加入肉豆蔻酸異丙酯6.5g，在攪拌的條件下分 別將上述表面活性劑各3.5g滴入I、 II兩個(gè)燒杯中，攪拌l小時(shí)；3、 稱取37.5mg三聚磷酸鈉溶于100ml水溶液中，超聲使溶解，在不斷攪拌的條件下 緩慢滴入燒杯I中，使燒杯I中液體略帶淡藍(lán)色乳光，此時(shí)水含量為30%;4、 稱取75mg殼聚糖，置于100ml量瓶中，稱取10mg咪喹莫特溶于10ml醋酸中， 將此咪喹莫特醋酸溶液加入上述盛有75mg殼聚糖的100ml量瓶中，用醋酸溶液稀釋至刻 度，并調(diào)pH值約為4，將此殼聚糖咪喹莫特醋酸溶液在不斷攪拌的條件下緩慢滴入燒杯 II中，使燒杯II中液體略帶淡藍(lán)色乳光，此時(shí)水含量為30%;5、 將燒杯i中略帶淡藍(lán)色乳光的液體在不斷攪拌的情況下滴入燒杯n中，反應(yīng)4小時(shí)，此時(shí)水相含量為30%，然后離心30分鐘，轉(zhuǎn)速4000轉(zhuǎn)/分，濾去上清液，沉淀用1% 吐溫水溶液超聲分散溶解，再離心30分鐘，轉(zhuǎn)速4000轉(zhuǎn)/分，濾去上清液，干燥沉淀，即 得咪喹莫特殼聚糖納米粒。所得咪喹莫特殼聚糖納米粒用1%吐溫水溶液溶解后，置激光粒度儀中，測得平均粒 徑為155nm,紫外分光光度法測得載藥量為38.6%，高效液相色譜法測得包封率為65%。 實(shí)施例2咪喹莫特殼聚糖納米粒的制備 1、在一個(gè)50ml燒杯中，分別加入2.8g司盤20、 4. 2g吐溫80、 3.0gl，2辛二醇，此時(shí)司盤20 :吐溫so : i， 2-辛二醇=28: 42 :30，攪拌l小時(shí)，配得表面活性劑；2、 在I 、 II兩個(gè)150ml燒杯中，分別稱取肉豆蔻酸異丙酯6.5g，在攪拌的條件下 分別將上述表面活性劑各3.5g滴入I 、 II兩個(gè)燒杯中，攪拌1小時(shí)-,3、 稱取75mg三聚磷酸鈉溶于100ml水溶液中，超聲使溶解，在不斷攪拌的條件下 緩慢滴入燒杯I中，使燒杯I中液體略帶淡藍(lán)色乳光，此時(shí)體系水含量為30%:4、 稱取250mg殼聚糖，置于100ml量瓶中，稱取10mg咪喹莫特溶于10ml醋酸中， 將此咪喹莫特醋酸溶液加入上述盛有250mg殼聚糖的100ml量瓶中，用醋酸溶液稀釋至刻 度，并調(diào)pH值約為4，將此殼聚糖咪喹莫特醋酸溶液在不斷攪拌的條件下緩慢滴入燒杯 II中，使燒杯II中液體略帶淡藍(lán)色乳光，此時(shí)體系水含量為30%;5、 將燒杯i中略帶淡藍(lán)色乳光的液體在不斷攪拌的情況下滴入燒杯n中，反應(yīng)4小時(shí)，體系水含量為30%，然后離心30分鐘，轉(zhuǎn)速4000轉(zhuǎn)/分，濾去上淸液，沉淀用1%吐 溫水溶液分散溶解，再離心30分鐘，轉(zhuǎn)速4000轉(zhuǎn)/分，濾去上清液，沉淀干燥，即得咪喹 莫特殼聚糖納米粒。
所得咪喹莫特殼聚糖納米粒用1%吐溫水溶液超聲分散使溶解后，置激光粒度儀中， 測得平均粒徑為169 nm，紫外分光光度法測得載藥量為41.0%,高效液相色譜法測得包封 率為66.5%。實(shí)施例3咪喹莫特殼聚糖納米粒的制備 1、在一個(gè)50ml燒杯中，分別加入2.8g司盤20、 4. 2g吐溫80、 3. Ogl, 2辛二醇，此時(shí)司盤20 :吐溫80 : i， 2-辛二醇=28 : 42: 30,攪拌i小時(shí)，配得表面活性劑；2、 在I、 II兩個(gè)150ml燒杯中，分別稱取肉豆蔻酸異丙酯6.5g，在攪拌的條件下分 別將上述表面活性劑各3.5g滴入I 、 II兩個(gè)燒杯中，攪拌1小時(shí)；3、 稱取125mg三聚磷酸鈉溶于100ml水溶液中，超聲使溶解，在不斷攪拌的條件下 緩慢滴入燒杯I中，使燒杯I中液體略帶淡藍(lán)色乳光，此時(shí)體系水含量為30%;4、 稱取325mg殼聚糖，置于100ml量瓶中，稱取10mg咪喹莫特溶于10ml醋酸中， 將此咪喹莫特醋酸溶液加入上述盛有250mg殼聚糖的100ml量瓶中，用醋酸溶液稀釋至刻 度，并調(diào)pH值約為4，將此殼聚糖咪喹莫特醋酸溶液在不斷攪拌的條件下緩慢滴入燒杯 II中，使燒杯II中液體略帶淡藍(lán)色乳光，此時(shí)體系水含量為30%;5、 將燒杯I中略帶淡藍(lán)色乳光的液體在不斷攪拌的情況下滴入燒杯II中，反應(yīng)4小 時(shí)，體系水含量為30。/。，然后離心30分鐘，轉(zhuǎn)速4000轉(zhuǎn)/分，濾去上清液，沉淀用1%吐 溫水溶液分散溶解，再離心30分鐘，轉(zhuǎn)速4000轉(zhuǎn)/分，濾去上清液，沉淀干燥，即得咪喹 莫特殼聚糖納米粒。所得咪喹莫特殼聚糖納米粒用1%吐溫水溶液超聲分散使溶解后，置激光粒度儀中， 測得平均粒徑為156 nm，紫外分光光度法測得載藥量為40.4%，高效液相色譜法測得包封 率為61.2%。實(shí)施例4咪喹莫特殼聚糖納米粒的制備 1、在一個(gè)50ml燒杯中，分別加入2.8g司盤20、 4.2g吐溫80、 3. Ogl, 2辛二醇,此 時(shí)司盤20 :吐溫80 : 1， 2-辛二醇=28 : 42 : 30，攪拌1小時(shí)，配得表面活性劑；2、 在I、 n兩個(gè)150ml燒杯中，分別稱取肉豆蔻酸異丙酯6.5g，在攪拌的條件下 分別將上述表面活性劑各3.5g滴入I 、 II兩個(gè)燒杯中，攪拌1小時(shí)；3、 稱取75mg三聚磷酸鈉溶于100ml水溶液中，超聲使溶解，在不斷攪拌的條件下 緩慢滴入燒杯I中，使燒杯I中液體略帶淡藍(lán)色乳光，此時(shí)體系水含量為40%;
4、 稱取250mg殼聚糖，置于100ml量瓶中，稱取lOmg咪喹莫特溶于10ml醋酸中， 將此咪喹莫特醋酸溶液加入上述盛有250mg殼聚糖的100ml量瓶中，用醋酸溶液稀釋至刻 度，并調(diào)pH值約為4，將此殼聚糖咪喹莫特醋酸溶液在不斷攪拌的條件下緩慢滴入燒杯 II中，使燒杯II中液體略帶淡藍(lán)色乳光，此時(shí)體系水含量為40%;
5、 將燒杯i中略帶淡藍(lán)色乳光的液體在不斷攪拌的情況下滴入燒杯n中，反應(yīng)4小
時(shí)，體系水含量為50%，然后離心30分鐘，轉(zhuǎn)速4000轉(zhuǎn)/分，濾去上清液，沉淀用1%吐 溫水溶液分散溶解，再離心30分鐘，轉(zhuǎn)速4000轉(zhuǎn)/分，濾去上清液，沉淀干燥，即得咪喹 莫特殼聚糖納米粒。
所得咪喹莫特殼聚糖納米粒用1%吐溫水溶液超聲分散使溶解后，置激光粒度儀中， 測得平均粒徑為148 nm，紫外分光光度法測得載藥量為38.6%，高效液相色譜法測得包封 率為58.4%。 實(shí)施例5
咪喹莫特殼聚糖納米粒的制備
1、在一個(gè)50ml燒杯中，分別加入2.8g司盤20、 4. 2g吐溫80、 3.0gl,2辛二醇,此
時(shí)司盤20 :吐溫80 : i， 2-辛二醇=28 : 42 :30，攪拌i小時(shí)，配得表面活性劑；
2、 在I 、 II兩個(gè)150ml燒杯中，分別稱取肉豆蔻酸異丙酯6.5g，在攪拌的條件下 分別將上述表面活性劑各3.5g滴入I 、 II兩個(gè)燒杯中，攪拌1小時(shí)；
3、 稱取75mg三聚磷酸鈉溶于100ml水溶液中，超聲使溶解，在不斷攪拌的條件下 緩慢滴入燒杯I中，使燒杯I中液體略帶淡藍(lán)色乳光，此時(shí)體系水含量為50%;
4、 稱取250mg殼聚糖，置于100ml量瓶中，稱取10mg咪喹莫特溶于10ml醋酸中， 將此咪喹莫特醋酸溶液加入上述盛有250mg殼聚糖的100ml量瓶中，用醋酸溶液稀釋至刻 度，并調(diào)pH值約為4，將此殼聚糖咪喹莫特醋酸溶液在不斷攪拌的條件下緩慢滴入燒杯 II中，使燒杯II中液體略帶淡藍(lán)色乳光，此時(shí)體系水含量為50%;
5、 將燒杯I中略帶淡藍(lán)色乳光的液體在不斷攪拌的情況下滴入燒杯II中，反應(yīng)4小 時(shí)，體系水含量為50%,然后離心30分鐘，轉(zhuǎn)速4000轉(zhuǎn)/分，濾去上清液，沉淀用1%吐 溫水溶液分散溶解，再離心30分鐘，轉(zhuǎn)速4000轉(zhuǎn)/分，濾去上清液，沉淀干燥，即得咪喹 莫特殼聚糖納米粒。
所得咪喹莫特殼聚糖納米粒用1%吐溫水溶液超聲分散使溶解后，置激光粒度儀中， 測得平均粒徑為151nm，紫外分光光度法測得載藥量為32.4%，高效液相色譜法測得包封 率為56.9%。
實(shí)施例6
咪喹莫特殼聚糖納米粒的制備
1、 在一個(gè)50ml燒杯中，分別加入2.8g司盤20、 4. 2g吐溫80、 3.0gl，2辛二醇,此
時(shí)司盤20 :吐溫80 : i， 2-辛二醇=28: 42 :30，攪拌l小時(shí)，配得表面活性劑；
2、 在I、 II兩個(gè)150ml燒杯中，分別稱取肉豆蔻酸異丙酯6.5g，在攪拌的條件下分 別將上述表面活性劑各3.5g滴入I、 II兩個(gè)燒杯中，攪拌l小時(shí)；
3、 稱取75mg三聚磷酸鈉溶于100ml水溶液中，超聲使溶解，在不斷攪拌的條件下 緩慢滴入燒杯I中，使燒杯I中液體略帶淡藍(lán)色乳光，此時(shí)體系水含量為60%;
4、 稱取250mg殼聚糖，置于100ml量瓶中，稱取10mg咪喹莫特溶于10ml醋酸中， 將此咪喹莫特醋酸溶液加入上述盛有250mg殼聚糖的100ml量瓶中，用醋酸溶液稀釋至刻 度，并調(diào)pH值約為4，將此殼聚糖咪喹莫特醋酸溶液在不斷攪拌的條件下緩慢滴入燒杯 II中，使燒杯II中液體略帶淡藍(lán)色乳光，此時(shí)體系水含量為60%;
5、 將燒杯I中略帶淡藍(lán)色乳光的液體在不斷攪拌的情況下滴入燒杯II中，反應(yīng)4小時(shí)， 體系水含量為60%，然后離心30分鐘，轉(zhuǎn)速4000轉(zhuǎn)/分，濾去上清液，沉淀用1%吐溫水 溶液分散溶解，再離心30分鐘，轉(zhuǎn)速4000轉(zhuǎn)/分，濾去上清液，沉淀干燥，即得咪喹莫特 殼聚糖納米粒。
所得咪喹莫特殼聚糖納米粒用1%吐溫水溶液超聲分散使溶解后，置激光粒度儀中， 測得平均粒徑為152mn，紫外分光光度法測得載藥量為28.7%，高效液相色譜法測得包封 率為50.4%。
權(quán)利要求
1、一種咪喹莫特殼聚糖納米粒的制備方法，其特征在于所述的咪喹莫特殼聚糖納米粒的制備步驟如下，其中所述的配比為重量百分比，(1)按司盤20∶吐溫80∶1，2-辛二醇＝28∶42∶30，稱取司盤20、吐溫80、1，2-辛二醇置于容器中，攪拌混合0.5～1.0小時(shí)，配得表面活性劑；(2)配制殼聚糖醋酸水溶液，取咪喹莫特用醋酸溶解后加入所述殼聚糖水溶液中，使pH值為4±0.2，另配制三聚磷酸鈉水溶液；(3)按肉豆蔻酸異丙酯∶步驟(1)所配得的表面活性劑＝6.5∶3.5，稱取肉豆蔻酸異丙酯及步驟(1)所配得的表面活性劑各兩份，分別置于容器I、II中；(4)于容器I中在不斷攪拌的條件下滴入步驟(2)中所配制的pH值為4±0.2的咪喹莫特殼聚糖水溶液，使成帶淡藍(lán)色乳光的透明的微乳液(I)；于容器II中在不斷攪拌的條件下滴入步驟(2)中所配制的三聚磷酸鈉水溶液，使成帶淡藍(lán)色乳光的透明的微乳液(II)；(5)在不斷攪拌的條件下，將微乳液(I)滴入微乳液(II)中，反應(yīng)≥4小時(shí)，離心，沉淀用吐溫80水溶液分散溶解，離心，濾除上清液，沉淀烘干，即得咪喹莫特殼聚糖納米粒。
2、 如權(quán)利要求1所述的咪喹莫特殼聚糖納米粒的制備方法，其特征在于步 驟(2)中配制的殼聚糖醋酸水溶液的殼聚糖濃度為0.75-3.25mg/ml。
3、 如權(quán)利要求1所述的咪喹莫特殼聚糖納米粒的制備方法，其特征在于步 驟(2)中配制的三聚磷酸鈉水溶液濃度為0.375-1.25mg/ml。
4、 如權(quán)利要求1所述的咪喹莫特殼聚糖納米粒的制備方法，其特征在于步 驟(2)中咪喹莫特用醋酸溶解配制的溶液的濃度為lmg/ml，
5、 如權(quán)利要求1所述的咪喹莫特殼聚糖納米粒的制備方法，其特征在于所 述步驟(4)中微乳液(I )和微乳液(II )中增溶水相的量為重量30% 60%。
6、 如權(quán)利要求1所述的咪喹莫特殼聚糖納米粒的制備方法，其特征在于， 所述步驟(5)中的離心轉(zhuǎn)速為4000轉(zhuǎn)/分。
7、 如權(quán)利要求1所述的咪喹莫特殼聚糖納米粒的制備方法，其特征在于， 所述步驟(5)中吐溫80水溶液為1%的吐溫水溶液。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種咪喹莫特殼聚糖納米粒子制備方法，該方法是以微乳為模板，分別選擇肉豆蔻酸異丙酯-司盤20、吐溫80、1，2-辛二醇-三聚磷酸鈉水溶液為微乳體系I，肉豆蔻酸異丙酯-司盤20、吐溫80、1，2-辛二醇-殼聚糖咪喹莫特醋酸水溶液為微乳體系II，其中司盤20-吐溫80-1，2-辛二醇重量比＝28∶42∶30，肉豆蔻酸異丙酯∶司盤20-吐溫80-1，2-辛二醇重量比＝6.5∶3.5，微乳體系I及微乳體系II中水含量為重量30～60％的。在不斷攪拌的條件下，將微乳I滴入微乳II，兩微乳體系發(fā)生離子凝膠化反應(yīng)制備咪喹莫特殼聚糖納米粒子，反應(yīng)時(shí)間4小時(shí)，最終獲得了粒徑小、載藥率及包封率較高的納米粒子。
文檔編號A61K9/14GK101129373SQ20071005296
公開日2008年2月27日 申請日期2007年8月16日 優(yōu)先權(quán)日2007年8月16日
發(fā)明者梅 左, 靖 程 申請人:華中師范大學(xué)