專利名稱：一種復(fù)方香菇多糖制劑及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種復(fù)方香菇多糖制劑及其制備方法，該復(fù)方香菇多糖制劑同時(shí)具有抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)和提高機(jī)體免疫力的功效，在癌癥的治療中能起到協(xié)同的治療作用，屬于藥品復(fù)方制劑的技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
隨著人類生活環(huán)境、生活水平和生活方式的變化以及醫(yī)學(xué)的進(jìn)步，人類疾病譜發(fā)生了顯著的變化，一般性傳染病逐漸被控制，而惡性腫瘤則成為日益常見且嚴(yán)重威脅人類生命和生活質(zhì)量的主要疾病之一。世界衛(wèi)生組織統(tǒng)計(jì)資料表明，世界癌癥每年發(fā)病1000萬人，死亡700萬人，是僅次于心血管病的人類第2大殺手。
尋找有效的抗癌藥物與方法，徹底攻克癌癥，是世界醫(yī)學(xué)界重要的研究課題?；?、放療、手術(shù)治療是當(dāng)今治療腫瘤的主要手段，但毒副作用較大。能否找到既能殺傷腫瘤細(xì)胞，毒副作用又比較小的藥物及治療方法，在腫瘤的治療中顯得尤其重要。
斑蝥酸鹽是由鞘翅目芫菁科昆蟲斑蝥的抗癌有效成分斑蝥素經(jīng)水解成鹽而得。研究報(bào)道〔王浴生等.中藥藥理與應(yīng)用.北京人民衛(wèi)生出版社，1983111〕斑蝥酸鈉能抑制Hela細(xì)胞株、人食管鱗癌CaEs-17細(xì)胞株及人肝癌BEL-7402細(xì)胞株。用電鏡觀察到3H-斑蝥酸鈉可以直接進(jìn)入小鼠腹水型肝癌細(xì)胞的核及核仁。另?yè)?jù)報(bào)道〔Wang GS.Medical uses of mylabris in ancient and recentstudies.Journal of Ethno pharmacology，1989，26147〕斑蝥酸鈉的抗癌作用可能與降低cAMP磷酸二酯酶活性從而提高癌細(xì)胞內(nèi)cAMP水平有關(guān)。斑蝥酸鹽還能改善癌細(xì)胞和荷瘤小鼠的能量代謝，提高過氧化氫酶的活力，即降低荷瘤小鼠的癌毒素水平，但因斑蝥酸鹽作用機(jī)制單一以及抗瘤譜窄等原因，在臨床使用中常常受到限制。
香菇多糖系從人工培養(yǎng)的傘菌科真菌香菇[Lentinus edodes(Berk)Sing]子實(shí)體中提取分離純化獲得的均一組分的多糖。香菇多糖(Lentinan)是一種免疫調(diào)節(jié)型靜脈給藥的抗腫瘤藥物，具有劑量低，療效好，毒副作用小等優(yōu)點(diǎn)。臨床上主要應(yīng)用于不能手術(shù)的癌癥病人，能顯著延長(zhǎng)患者的存活時(shí)間，以及防止手術(shù)后癌癥的復(fù)發(fā)。1966年日本首先從香菇子實(shí)體中獲得香菇多糖，20世紀(jì)70年代應(yīng)用于臨床。我國(guó)于1988年從日本進(jìn)口，取得良好的療效。但進(jìn)口價(jià)格十分昂貴。1994年我國(guó)研制成功與日本香菇多糖同樣劑型的香菇多糖凍干粉針劑并投產(chǎn)。香菇多糖一般與化療藥物聯(lián)合使用。對(duì)于復(fù)發(fā)的胃癌和結(jié)腸癌患者的III期臨床4年跟蹤觀察，1，2，3和4年存活率分別較單獨(dú)使用化療藥物提高〔Tsuburs E.Rationale of Biological Response modifiers in cancer treatment.AmsterdanExcerpta Medica.1985151〕。香菇多糖的毒副作用與通常化療藥物比較，由于輕微，故可忽略不計(jì)。在實(shí)際應(yīng)用中，香菇多糖主要表現(xiàn)為免疫增強(qiáng)作用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種同時(shí)具有抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)和提高機(jī)體免疫力的復(fù)方香菇多糖制劑及其制備方法，該復(fù)方香菇多糖制劑，在癌癥的治療中兩者能起到協(xié)同的治療作用，使用方便。
為實(shí)現(xiàn)以上目的，本發(fā)明的技術(shù)方案是提供一種復(fù)方香菇多糖制劑，其特征在于，該制劑中有效成分重量比為1份香菇用5-200份斑蝥酸鹽，適于臨床應(yīng)用的藥物劑型包括粉針劑、凍干粉針劑、水針劑、輸液劑。
一種復(fù)方香菇多糖制劑的制備方法，其特征在于，將香菇多糖的免疫增強(qiáng)作用與抗腫瘤藥物斑蝥酸聯(lián)合使用，其制備方法為(1).按重量計(jì)稱取香菇多糖1份，放入容器中用0.3-1mol/L的氫氧化鈉水溶液溶解；(2).在步驟(1)溶解液中加入斑蝥酸或斑蝥酸藥學(xué)上可接受的鹽5-200份，然后用酸液調(diào)pH至6-10，加入1-20份的抗氧劑，0.5-1份離子絡(luò)合劑，攪拌溶解，過濾，按照中藥水針劑的操作要求制得復(fù)方香菇多糖水針劑，其中的抗氧劑為亞硫酸鹽、亞硫酸氫鹽，阿魏酸、二巰基丙醇中的一種或幾種，其中的離子絡(luò)合劑為EDTA；(3).或在步驟(1)溶解液中加入10-100份的賦形劑，攪拌溶解，再加入斑蝥酸或斑蝥酸藥學(xué)上可接受的鹽5-200份，用酸液調(diào)pH至6-10，過濾，按照中藥凍干粉針劑的操作要求制得復(fù)方香菇多糖凍干粉針劑；(4).或在步驟(1)溶解液中加入斑蝥酸或斑蝥酸藥學(xué)上可接受的鹽5-200份，再加0.9％氯化鈉溶液稀釋，然后用氫氧化鈉溶液或鹽酸溶液調(diào)pH至6-10，過濾，按照中藥輸液劑的操作要求制得復(fù)方香菇多糖輸液劑。
所述的抗氧劑為亞硫酸鹽、亞硫酸氫鹽，阿魏酸、二巰基丙醇中的一種或幾種，其中的離子絡(luò)合劑為EDTA所述的賦形劑為右旋糖酐、甘露醇、葡萄糖、水解明膠、聚乙烯吡咯烷酮、β-環(huán)糊精、羥丙基-β-環(huán)糊精中的一種或幾種；所述的斑蝥酸鹽為斑蝥酸鈉。
本發(fā)明的香菇多糖是指從香菇子實(shí)體[Lentinus edodes(Berk)Sing]提取、精制的，符合國(guó)家藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)WS-320(X-263)-94的注射用香菇多糖；本發(fā)明的斑蝥酸鹽結(jié)構(gòu)為 在復(fù)方香菇多糖制劑的研究過程中發(fā)現(xiàn)，水針劑和輸液劑的pH若低于6，則斑蝥酸鹽會(huì)轉(zhuǎn)化為斑蝥素而導(dǎo)致產(chǎn)品澄明度不合格；若pH大于10，則制劑使用時(shí)刺激性大，故應(yīng)控制水針劑和輸液劑的pH在6-10。
本發(fā)明的有益效果是提供的復(fù)方制劑不但同時(shí)發(fā)揮斑蝥酸鹽的抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)及香菇多糖增強(qiáng)機(jī)體免疫力的功效，而且在癌癥的治療中兩者起到協(xié)同的治療作用。
本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是同時(shí)具有抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)和提高機(jī)體免疫力的功效，在癌癥的治療中能起到協(xié)同的治療作用。
具體實(shí)施例方式
以下結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說明。
實(shí)施例1取注射用香菇多糖0.5克，放入容器中用0.6mol/L的氫氧化鈉水溶液700ml室溫溶解。溶解后加入普通10％甘露醇注射液400ml，攪勻，加入斑蝥酸鈉10克，溶解后用1mol/L的檸檬酸溶液調(diào)溶液pH至9，過濾，減壓濃縮至1000ml，無菌過濾，消毒，測(cè)含量，分裝，1ml/瓶，冷卻干燥，封口，得復(fù)方香菇多糖凍干粉針。
實(shí)施例2取注射用香菇多糖0.5克，放入容器中用0.8mol/L的氫氧化鈉水溶液600ml室溫溶解，溶解后加入普通10％甘露醇注射液400ml及右旋糖酐1.6克，攪勻，加入斑蝥酸鈉10克，溶解后用1mol/L的檸檬酸溶液調(diào)溶液pH至9，過濾，減壓濃縮至1000ml，無菌過濾，消毒，測(cè)含量，分裝，1ml/瓶，冷卻干燥，封口，得復(fù)方香菇多糖凍干粉針。
實(shí)施例3取注射用香菇多糖0.5克，放入容器中用0.Smol/L的氫氧化鈉水溶液500ml室溫溶解。溶解后加入10％羥丙基-β-環(huán)糊精水溶液100ml，攪勻，加入斑蝥酸鈉10克，溶解后用1mol/L的檸檬酸溶液調(diào)溶液pH至9，過濾，加注射用水至1000ml，無菌過濾，消毒，測(cè)含量，分裝，1ml/瓶，冷卻干燥，封口，得復(fù)方香菇多糖凍干粉針。
實(shí)施例4取注射用香菇多糖0.6克，放入容器中用0.2mol/L的氫氧化鈉水溶液700ml室溫溶解。溶解完全后，加入斑蝥酸鈉12克，溶解后用0.3mol/L的檸檬酸溶液調(diào)溶液pH至9，加入5g的亞硫酸氫鈉，0.5gEDTA，過濾，加注射用水至1200ml，無菌過濾，消毒，1ml/瓶分灌于適當(dāng)容器中，封口，即得復(fù)方香菇多糖水針劑。
實(shí)施例5取注射用香菇多糖0.6克，放入容器中用0.2mol/L的氫氧化鈉水溶液700ml室溫溶解。溶解完全后，加入斑蝥酸鈉20克，溶解后用0.3mol/L的檸檬酸溶液調(diào)溶液pH至9，加入5g的亞硫酸氫鈉，0.5gEDTA，過濾，加注射用水至1200ml，無菌過濾，消毒，1ml/瓶分灌于適當(dāng)容器中，封口，即得復(fù)方香菇多糖水針劑。
實(shí)施例6取注射用香菇多糖0.1克，斑蝥酸鈉2克，溶解后加入0.9％氯化鈉溶液稀釋到20000ml，再用鹽酸溶液調(diào)pH至8.5，過濾，無菌過濾，滅菌，100ml/瓶分灌于適當(dāng)容器中，即得復(fù)方香菇多糖輸液劑。
本發(fā)明進(jìn)行了復(fù)方香菇多糖水針劑對(duì)腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制試驗(yàn)以驗(yàn)證并對(duì)比其抗腫瘤作用，試驗(yàn)以市售斑蝥酸鈉注射液為陽性對(duì)照。以早幼粒白血病HL-60細(xì)胞和QGY7703肝癌細(xì)胞為實(shí)驗(yàn)對(duì)象。在96孔細(xì)胞培養(yǎng)板每孔加入100μL HL-60細(xì)胞5×104個(gè)或QGY7703細(xì)胞1×104個(gè)，37℃CO2溫箱中過夜。去掉培養(yǎng)基，然后加入100μL系列量的復(fù)方香菇多糖水針劑、香菇多糖注射液和斑蝥酸鈉注射液，每一受試藥品每一劑量為三復(fù)孔，實(shí)驗(yàn)陰性對(duì)照為無藥培養(yǎng)液(含藥物最大濃度時(shí)的相應(yīng)溶劑量)。細(xì)胞在37℃孵箱中孵育72h后，用MTT法(四甲基偶氮唑鹽比色法)測(cè)定細(xì)胞數(shù)，即結(jié)束前4h棄去細(xì)胞培養(yǎng)上清液(HL-60細(xì)胞需先離心)，加入100μL新鮮配制含0.2mg/ml的MTT無血清培養(yǎng)基，混勻，37℃繼續(xù)孵育4h，再棄去上清液(HL-60細(xì)胞需離心)，加入100DMSO，混勻后用MR700酶標(biāo)儀測(cè)定570nm吸收值。計(jì)算細(xì)胞存活率％＝(實(shí)驗(yàn)孔測(cè)定值/對(duì)照孔測(cè)定值)×100％。MTT法結(jié)果表明，復(fù)方香菇多糖水針劑早幼粒白血病HL-60細(xì)胞和QGY7703肝癌細(xì)胞均有較強(qiáng)的抑制作用，且經(jīng)組間t檢驗(yàn)，復(fù)方香菇多糖水針劑組的細(xì)胞存活率低于斑蝥酸鈉注射液組和香菇多糖注射液組。結(jié)果表明復(fù)方香菇多糖水針劑對(duì)上述腫瘤細(xì)胞的抑制強(qiáng)于斑蝥酸鈉注射液和香菇多糖注射液。復(fù)方香菇多糖水針劑與斑蝥酸鈉注射液、香菇多糖注射液抑制癌細(xì)胞作用對(duì)比表

權(quán)利要求
1.一種復(fù)方香菇多糖制劑，其特征在于，該制劑中有效成分重量比為香菇多糖1份，斑蝥酸鹽的5-200份，適于臨床應(yīng)用的藥物劑型有粉針劑、凍干粉針劑、水針劑、輸液劑。
2.一種復(fù)方香菇多糖制劑的制備方法，其特征在于，將香菇多糖的免疫增強(qiáng)作用與抗腫瘤藥物斑蝥酸聯(lián)合使用，其制備方法為(1).按重量計(jì)稱取香菇多糖1份，放入容器中用0.3-1mol/L的氫氧化鈉水溶液溶解；(2).在步驟(1)溶解液中加入斑蝥酸或斑蝥酸藥學(xué)上可接受的鹽5-200份，然后用酸液調(diào)pH至6-10，加入1-20份的抗氧劑，0.5-1份離子絡(luò)合劑，攪拌溶解，過濾，按照中藥水針劑的操作要求制得復(fù)方香菇多糖水針劑；(3).或在步驟(1)溶解液中加入10-100份的賦形劑，攪拌溶解，再加入斑蝥酸或斑蝥酸藥學(xué)上可接受的鹽5-200份，用酸液調(diào)pH至6-10，過濾，按照中藥凍干粉針劑的操作要求制得復(fù)方香菇多糖凍干粉針劑；(4).或在步驟(1)溶解液中加入斑蝥酸或斑蝥酸藥學(xué)上可接受的鹽5-200份，再加0.9％氯化鈉溶液稀釋，然后用氫氧化鈉溶液或鹽酸溶液調(diào)pH至6-10，過濾，按照中藥輸液劑的操作要求制得復(fù)方香菇多糖輸液劑。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種復(fù)方香菇多糖制劑的制備方法，其特征在于，所述的斑蝥酸鹽為斑蝥酸鈉。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種復(fù)方香菇多糖制劑的制備方法，其特征在于，所述的抗氧劑為亞硫酸鹽、亞硫酸氫鹽，阿魏酸、二巰基丙醇中的一種或幾種。
5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種復(fù)方香菇多糖制劑的制備方法，其特征在于，所述的離子絡(luò)合劑為EDTA；
6.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種復(fù)方香菇多糖制劑的制備方法，其特征在于，所述的賦形劑為右旋糖酐、甘露醇、葡萄糖、水解明膠、聚乙烯吡咯烷酮、β-環(huán)糊精、羥丙基-β-環(huán)糊精中的一種或幾種。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種復(fù)方香菇多糖制劑及其制備方法，其特征在于，按重量計(jì)稱取香菇多糖，用氫氧化鈉水溶液溶解，在溶解液中加入斑蝥酸或斑蝥酸藥學(xué)上可接受的鹽，然后用酸液調(diào)pH值，加入抗氧劑和離子絡(luò)合劑，無菌過濾，按照中藥水針劑的操作要求制得復(fù)方香菇多糖水針劑；或在溶解液中加入藥物輔料，攪拌溶解，再加入斑蝥酸或斑蝥酸藥學(xué)上可接受的鹽，用酸液調(diào)pH值，無菌過濾，按照中藥凍干粉針劑的操作要求制得復(fù)方香菇多糖凍干粉針劑；或在溶解液中加入斑蝥酸或斑蝥酸藥學(xué)上可接受的鹽，然后用0.9％氯化鈉溶液稀釋，再用鹽酸溶液調(diào)pH值，無菌過濾，按照中藥輸液劑的操作要求制得復(fù)方香菇多糖輸液劑。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是同時(shí)具有抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)和提高機(jī)體免疫力的功效，在癌癥的治療中能起到協(xié)同的治療作用。
文檔編號(hào)A61K47/22GK101032510SQ200710039260
公開日2007年9月12日 申請(qǐng)日期2007年4月9日 優(yōu)先權(quán)日2007年4月9日
發(fā)明者金幸 , 湯磊, 陳林祥, 王琰, 朱益鋒, 周卓 申請(qǐng)人:上海慈瑞醫(yī)藥科技有限公司