專利名稱：：一種阻斷uPA與uPAR相互作用的化合物及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明屬于生物制藥領(lǐng)域，涉及一種能阻斷尿激酶型纖溶酶原激活劑(urokinaseplasminogenactivator，uPA)與它的受體(urokinaseplasminogenactivatorreceptor，uPAR)相互作用的化合物，本發(fā)明還涉及該化合物在制備預(yù)防或治療動(dòng)脈粥樣硬化藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：動(dòng)脈粥樣硬化是一種脂質(zhì)物質(zhì)堆積在動(dòng)脈血管壁上引起炎性疾病，Lusis，Nature，407233-241(2000)。美國(guó)約有1200萬(wàn)的動(dòng)脈粥樣硬化病患者，英國(guó)有39％的死亡是由動(dòng)脈粥樣硬化引起。尿激酶纖溶酶原激活劑(uPA)通過(guò)與其受體(uPAR)結(jié)合促進(jìn)炎癥細(xì)胞的粘附與遷移[Guetal.，J.CellPhysiol.，204(1)73-82]。在ApoE缺陷小鼠(一種動(dòng)脈粥樣硬化小鼠模型)中，uPAR與uPA協(xié)同作用可促進(jìn)巨噬細(xì)胞穿過(guò)內(nèi)皮細(xì)胞進(jìn)入血管壁[Guetal.，J.CellPhysiol.，204(1)73-82(2005)]。進(jìn)入血管壁的巨噬細(xì)胞可轉(zhuǎn)化成泡沫細(xì)胞，泡沫細(xì)胞過(guò)量表達(dá)的uPA在動(dòng)脈粥樣硬化損傷處的累積加速了動(dòng)脈粥樣硬化的形成[Cozenetal.，Circulation，109(17)2129-35(2004)]。所有這些研究表明過(guò)量表達(dá)的uPA與uPAR在動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)展過(guò)程的作用。但是，ApoE小鼠中uPA基因缺失對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化損傷的形成沒(méi)有影響[Carmelietetal.，Nat.Genet.，17(4)439-44(1997)；Dengetal.，CircRes.，92(5)510-517(2003)]。目前，沒(méi)有文獻(xiàn)報(bào)導(dǎo)正常表達(dá)的uPA和uPAR對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化的形成具有何種影響。uPA的氨基末端片段(aminoterminalfragment，ATF)是uPA與uPAR的結(jié)合區(qū)域，研究表明ATF和抗ATF抗體能有效治療腫瘤，Lietal.，Hum.GeneTher.，16(10)1157-67；Mazaretal.，U.S.PatentApplication2005/0232924。但沒(méi)有ATF和抗ATF抗體能夠預(yù)防或治療動(dòng)脈粥樣硬化的報(bào)道。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供一種通過(guò)阻斷uPA與uPAR相互作用而發(fā)揮預(yù)防或治療動(dòng)脈粥樣硬化的化合物。本發(fā)明另一個(gè)目的是提供上述化合物在制備預(yù)防或治療動(dòng)脈粥樣硬化藥物中的應(yīng)用。發(fā)明人研究發(fā)現(xiàn)，采用一種阻斷uPA與uPAR相互作用的物質(zhì)(例如ATF或其片段，抗ATF的抗體，uPAR或其片段，抗uPAR抗體)能有效預(yù)防或治療動(dòng)脈粥樣硬化。ATF或其片段既能與uPAR結(jié)合，從而競(jìng)爭(zhēng)性阻斷uPA與uPAR相互作用，同時(shí)，又能引發(fā)針對(duì)ATF的免疫反應(yīng)，產(chǎn)生的抗體與uPA競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合，也能阻斷阻斷uPA與uPAR的相互作用，并且，這種阻斷uPA與uPAR相互作用的效應(yīng)可預(yù)防或治療動(dòng)脈粥樣硬化，因而提出以下技術(shù)方案一種阻斷uPA與uPAR相互作用的化合物，該化合物包括ATF、ATF片斷、uPAR片斷、抗ATF的抗體、或者抗uPAR的抗體；其中ATF是uPA的ATF。所述的化合物，其中ATF是氨基酸序列為SEQIDNO1的多肽，或者是氨基酸序列與SEQIDNO1至少有70％同源性的多肽，較好的是至少有80％同源性的多肽，更好的是至少有95％同源性的多肽，尤其是至少有98％同源性的多肽，最好是至少有99％同源性的多肽；且該多肽具有抗動(dòng)脈粥樣硬化活力。ATF可能是天然的也可能是人工合成的，例如ATF可以從哺乳類動(dòng)物(如人、狒狒、小鼠、大鼠、牛、豬)或者非哺乳類動(dòng)物(如雞)中獲得；ATF可能是人ATF的變體，例如與人ATF(SEQIDNO1)氨基酸序列有70％，80％，90％，95％或者99％相同的多肽；也可以是嵌合型的人ATF，例如將人ATF與其受體的結(jié)合區(qū)域用其它物種(如狒狒、小鼠、大鼠、牛、豬或雞)的ATF與其受體的結(jié)合區(qū)域代替。SEQIDNO1為人的uPA的ATF氨基酸序列。所述的化合物，該化合物是人ATF與其受體的結(jié)合區(qū)域被其它物種的ATF與其受體結(jié)合區(qū)域所替代的嵌合型的人ATF。其他物種為哺乳動(dòng)物或非哺乳動(dòng)物；其中哺乳動(dòng)物優(yōu)選狒狒、小鼠、大鼠、兔、?；蜇i；非哺乳動(dòng)物優(yōu)選雞。所述的化合物，其中ATF以及ATF片斷中含有SEQIDNO.3～55中任一序列的氨基酸殘基，該化合物具有較強(qiáng)的免疫原性。本發(fā)明的化合物包括含有上述任一多肽的藥用制劑，該制劑能引發(fā)病人體內(nèi)的免疫反應(yīng)，本發(fā)明的化合物還包括與上述這些多肽專一性地結(jié)合的抗體。所述的化合物，其中抗ATF的抗體的氨基酸序列包含SEQIDNO2中任一片段的多肽，該片段包括至少一個(gè)ATF結(jié)合位點(diǎn)。SEQIDNO2為人的uPAR氨基酸序列(＞gi|8050815|gb|AAF71751.1|urokinase-typeplasminogenactivatorreceptor；UPAR[Homosapiens])。所述的化合物，其中該片段至少由8個(gè)氨基酸組成；優(yōu)選該片段至少由15個(gè)氨基酸組成。本發(fā)明的化合物還包括專一性與這些片段結(jié)合的抗體。所述的化合物，其中抗ATF的抗體中包括的ATF結(jié)合位點(diǎn)手相當(dāng)于SEQIDNO2的下列結(jié)合位點(diǎn)中的一個(gè)或多個(gè)T8，R25，V29，L31，L40，R53，L55，Y57，L66，E68，R137，K139，R142，H143，R145，H166，H251，L252，D254，或A255。所述的化合物與能延長(zhǎng)其在病人身體中半衰期的物質(zhì)偶聯(lián)；通常采用該化合物與聚乙二醇(PEG)共價(jià)連接；或者該化合物與鑰孔蟲(chóng)戚血藍(lán)素(KLH)共價(jià)連接。該化合物可與白蛋白的單獨(dú)混合使用；也可與PEG及白蛋白混合使用，或者與KLH及白蛋白混合使用。表達(dá)權(quán)利要求1所述化合物的核苷酸序列。一種藥物組合物，含有治療有效量的上述的化合物及藥學(xué)上允許的輔料。上述的任一化合物在制備治療動(dòng)脈粥樣硬化藥物中的應(yīng)用。制劑可以給予病人如靜脈途徑單劑量或多次劑量，可能在病人動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生之前，之中和之后使用。本發(fā)明提供的藥用制劑中可以包括佐劑。本發(fā)明還提供篩選阻斷uPA與uPAR相互作用的化合物的方法，篩選能阻斷相互作用(如兩個(gè)多肽結(jié)合反應(yīng))的方法是已知的。經(jīng)典的方法包括如下步驟(a)假如第一個(gè)多肽包含了能與uPAR結(jié)合的ATF片段(如受體結(jié)合區(qū)域)，第二個(gè)多肽包含了能與uPA結(jié)合片段(如包含一個(gè)或多個(gè)ATF結(jié)合位點(diǎn))，在一定的條件下，這二個(gè)多肽可以相互作用。(b)讓受試化合物與第一和第二多肽接觸。(c)測(cè)定受試化合物是否使第一、第二個(gè)多肽的結(jié)合水平下降，如果二者的結(jié)合水平下降則表明受試化合物能夠阻斷uPA和uPAR相互作用。本發(fā)明的范圍包括采用能夠阻斷uPA與uPAR結(jié)合的物質(zhì)(如ATF或其片段，抗ATF的抗體，uPAR或其片段，抗uPAR的抗體)制造治療動(dòng)脈粥樣硬化的藥物制劑?！坝行┝俊焙汀爸委熡行А笔侵冈谝欢螘r(shí)間(包括急性或慢性使用、階段性或連續(xù)性地使用)使用的物質(zhì)的量或濃度在受試者的體內(nèi)產(chǎn)生預(yù)期的效果或有生理學(xué)變化。本發(fā)明中采用的ATF和抗uPAR的抗體的有效劑量包括能有效阻止或抑制有動(dòng)脈粥樣硬化傾向的病人的動(dòng)脈粥樣硬化，或者緩解病人的動(dòng)脈粥樣硬化癥狀。“病人”是指用本發(fā)明的方法治療的動(dòng)物，人或者非人類。本發(fā)明可以明確的預(yù)見(jiàn)其醫(yī)牲畜的應(yīng)用，該術(shù)語(yǔ)包括但不限于鳥(niǎo)類，爬行類，兩棲類和哺乳類(如人類，其它靈長(zhǎng)類，豬，牛，馬，狗，綿羊和山羊)，嚙齒類(如小鼠，大鼠，兔，豚鼠，沙土鼠)等?！皠?dòng)脈粥樣硬化”是由于動(dòng)脈粥樣斑塊形成導(dǎo)致的動(dòng)脈硬化或增厚，如脂質(zhì)物質(zhì)在動(dòng)脈管血管壁內(nèi)和血管壁上的堆積。參見(jiàn)http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/ency/article/000171.htm患者動(dòng)脈粥樣硬化的病人是指至少有一個(gè)能用日常醫(yī)學(xué)方法檢測(cè)的動(dòng)脈粥樣斑塊。該患者由于斑塊破裂和(或)或動(dòng)脈狹窄表現(xiàn)的出某一器官的供血不足。如果動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生在通往心臟的的動(dòng)脈，患者會(huì)有胸痛的癥狀；如果是發(fā)生在股動(dòng)脈上則會(huì)產(chǎn)生腿疼。具有動(dòng)脈粥樣硬化傾向的病人是指具有一個(gè)或多個(gè)動(dòng)脈粥樣硬化的誘因，例如有個(gè)人或家族心臟病史，高脂肪飲食習(xí)慣，抽煙，肥胖，高血壓和(或)血液中的高膽固醇。“治療動(dòng)脈粥樣硬化”(除非特指)是指緩解動(dòng)脈粥樣硬化的癥狀，逆轉(zhuǎn)、改善或抑制動(dòng)脈粥樣硬化的進(jìn)程，或者阻止動(dòng)脈粥樣斑塊的形成。以下對(duì)本發(fā)明作更詳細(xì)的說(shuō)明1.用ATF蛋白質(zhì)治療動(dòng)脈粥樣硬化a.ATF蛋白質(zhì)ATF是指uPA與相同物種的受體uPAR結(jié)合的N-末端結(jié)構(gòu)域。與uPA具有絲氨酸蛋白水解酶活性的C-末端不同，ATF沒(méi)有催化活性。ATF蛋白質(zhì)可以是全長(zhǎng)的ATF，也可以是能與uPAR結(jié)合的ATF片段，也可以是能誘導(dǎo)抗ATF的免疫反應(yīng)的ATF片段。ATF可以是天然提取的或人工合成的。ATF蛋白質(zhì)的一個(gè)例子是人ATF，它包括人尿激酶的Ser1～Lys135的氨基酸殘基，人ATF的氨基酸序列見(jiàn)SEQIDNO1。ATF蛋白質(zhì)的另一個(gè)例子是人ATF的變體，倘若該變體與人ATF功能相同，即它可與至少一個(gè)物種的uPAR結(jié)合并具有抗動(dòng)脈粥樣硬化活力。該變體的氨基酸序列與人ATF(SEQIDNO1)至少具有40％的同源性，如有70％、80％、90％的同源性更好，最好是具有95％或99％的同源性。人ATF變體可能來(lái)源于其它物種的ATF。通過(guò)在人ATF中插入突變序列，如保守氨基酸殘基的替換，但這些改變不影響人ATF的功能。本發(fā)明兩個(gè)氨基酸序列中相同殘基的比例的聯(lián)配分值采用的運(yùn)算法則是KarlinandAltschul，Proc.Natl.Acad.Sci.USA872264-2268(1990)，修正版見(jiàn)KarlinandAltschul，Proc.Natl.Acad.Sci.USA905873-5877(1993)。將該運(yùn)算法則編入NBLAST和XBLAST程序Altschuletal.J.Mol.Biol.，215403-410(1990)。運(yùn)行XBLAST程序進(jìn)行BLAST蛋白質(zhì)搜索，score＝50，wordlength＝3，尋找與已知多肽(如SEQIDNO1)同源的氨基酸序列。為得到可以相互對(duì)照的序列圖，采用了GappedBLAST參見(jiàn)Altschuletal.，NucleicAcidsRes.，253389-3402(1997)。當(dāng)運(yùn)行BLAST和GAPPEDBLAST程序時(shí)，采用了相似程序(如XBLAST和NBLAST)的默認(rèn)參數(shù)。ATF蛋白質(zhì)的另一個(gè)例子是從非人類的物種獲得的，諸如鳥(niǎo)類(如雞)、爬行類或哺乳類(如猴，狒狒，小鼠，大鼠，兔，?；蜇i)。如圖1所示，許多物種(如人，狒狒，小鼠，大鼠，牛，豬或雞)的尿激酶的ATF結(jié)構(gòu)域是十分相似的。給出不同物種間ATF結(jié)構(gòu)相似性，本領(lǐng)域技術(shù)人員通過(guò)將具有未知ATF結(jié)構(gòu)域的尿激酶氨基酸序列與已知ATF結(jié)構(gòu)域的尿激酶氨基酸序列比較，能很容易地確定ATF結(jié)構(gòu)域。本發(fā)明所用的ATF蛋白質(zhì)還可以是嵌合型的ATF，即包含了不同物種的ATF片段。嵌合ATF的一個(gè)例子就是一個(gè)物種的ATF的天然受體結(jié)合區(qū)域被另一物種的受體結(jié)合區(qū)域取代。ATF的受體結(jié)合區(qū)域是指直接與uPAR結(jié)合的結(jié)構(gòu)域見(jiàn)圖1和2。本領(lǐng)域技術(shù)人員通過(guò)將具有未知受體結(jié)合區(qū)域的ATF氨基酸序列與一已知受體結(jié)合區(qū)域的ATF氨基酸序列比較便能很容易地確定ATF受體結(jié)合區(qū)域。如人的ATF或小鼠的ATF。一種嵌合型ATF可能是人ATF的受體結(jié)合區(qū)域(VSNKYFSIHW)被其它物種的受體結(jié)合區(qū)域所替代，如小鼠(VSYKYFSRIRR)、大鼠(VSYKYFSSIRR)、牛(VTYKYFSNIQR)、豬(VSYKYFSNIQR)、兔(VTYKYFSNIWR)或雞(ITYRFFSQIKR)。除了上述所有的全長(zhǎng)ATF外，ATF蛋白質(zhì)還包括這些全長(zhǎng)ATF的片段，ATF片段可以與uPAR結(jié)合，或者抑或同時(shí)具有能引起T細(xì)胞反應(yīng)的II型MHC結(jié)合結(jié)構(gòu)域。II型MHC結(jié)合結(jié)構(gòu)域可以通過(guò)已知的方法預(yù)測(cè)，參見(jiàn)Singhetal.，Bioinformatics，17(12)1236-37。另一種ATF片段的例子是包括一個(gè)抗體的抗原決定簇足以引發(fā)病人的抗體反應(yīng)，超過(guò)8個(gè)氨基酸的多肽通常就能誘導(dǎo)抗體反應(yīng)。ATF蛋白質(zhì)治療動(dòng)脈粥樣硬化的作用機(jī)制可能通過(guò)下述兩種途徑第一，ATF蛋白質(zhì)與內(nèi)源性u(píng)PA競(jìng)爭(zhēng)，與uPAR的結(jié)合，從而阻斷uPA與uPAR的相互作用，這種相互作用對(duì)于動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)展是重要的。第二，ATF蛋白質(zhì)作為抗原誘導(dǎo)免疫反應(yīng)而引起抗動(dòng)脈粥樣硬化作用，如ATF蛋白質(zhì)誘導(dǎo)的抗ATF抗體可阻止內(nèi)源性的uPA和uPAR的結(jié)合。ATF誘導(dǎo)的T細(xì)胞反應(yīng)也可在抗動(dòng)脈粥樣硬化中起了一定的作用。b.ATF蛋白質(zhì)的制備ATF蛋白質(zhì)可以是用重組技術(shù)生產(chǎn)或從天然原料中分離，例如可以用文獻(xiàn)Stoppellietal.，Proc.Natl.Acad.Sci.，824939-4943(1985)，所述的方法用尿激酶制備ATF。ATF的片段也可以用重組技術(shù)生產(chǎn)或化學(xué)合成。ATF蛋白質(zhì)另外一種考慮還可以是部分為天然的部分為化學(xué)合成的。ATF蛋白質(zhì)還可以是經(jīng)過(guò)修飾以延長(zhǎng)其在病人體內(nèi)的半衰期。其中一個(gè)例子，多肽與其它物質(zhì)(如聚乙二醇或白蛋白)一起(共價(jià)連接或融合)能夠用已知的方法延長(zhǎng)其半衰期；另外一個(gè)例子，ATF蛋白質(zhì)還可以進(jìn)行化學(xué)修飾。ATF或ATF片段的化學(xué)修飾物包含并不限制于側(cè)鏈的修飾，肽的合成過(guò)程中為了控制肽及其類似物的構(gòu)象而引入非自然氨基酸及/或它們的衍生物。側(cè)鏈修飾的例子包含對(duì)氨基的修飾，例如通過(guò)NaBH4與一個(gè)醛類化合物反應(yīng)得到還原烷化后的氨基酸，甲基亞氨乙酸酯對(duì)氨基的酰氨化修飾，乙酸酐對(duì)氨基的?；揎?。氰酸鹽對(duì)氨基的氨基甲?；揎?，TNBS(2，4，6-三硝基苯磺酸)對(duì)氨基的三硝基苯基化修飾，琥珀酸酐與四氫鄰苯二甲酸酐對(duì)氨基的?；揎?，還有如通過(guò)]5’-磷酸吡哆醛與賴氨酸反應(yīng)，在NaBH4的還原下得到的賴氨酸的吡哆衍生物。精氨酸的側(cè)鏈胍基可以與2，3-丁二酮，苯基乙二醛和乙二醛進(jìn)行縮合反應(yīng)得到各種雜環(huán)產(chǎn)物。羧基的修飾可以包括如與碳二酰亞胺類的活化試劑反應(yīng)形成O-?；愲宓闹虚g體，中間體可以與許多活性官能團(tuán)反應(yīng)，如與氨基形成酰氨鍵。氨基酸上的巰基可以通過(guò)很多方式進(jìn)行修飾，如可以與碘乙酸，碘乙酰氨反應(yīng)得到巰基的羧基甲?；c氨基甲?；a(chǎn)物；可以被過(guò)甲酸氧化為磺基；與其他硫醇化合物形成各種混合二硫化物；與馬來(lái)酰亞胺，馬來(lái)酸酐以及其各種取代物反應(yīng)；與各種含汞試劑如4-氯汞基安息香酸，4-氯汞基苯磺酸，苯基氯化汞，2-氯苯基-4-硝基苯酚以及其他含汞試劑生成含汞衍生物；與氰酸鹽在pH堿性條件下形成氨基甲?；a(chǎn)物。色氨酸可以被N-溴基琥珀酰亞胺氧化或者與2-羥基5-硝基苯基溴或磺?；u化物反應(yīng)生成吲哚環(huán)上的烷化物。酪氨酸可以與四硝基甲烷發(fā)生硝基置換反應(yīng)轉(zhuǎn)變?yōu)?-硝基酪氨酸衍生物。組氨酸的咪唑環(huán)可以通過(guò)與碘乙酸衍生物進(jìn)行烷基化，也可以與焦碳酸二乙酯生成N-乙酯基化衍生物。在肽的合成過(guò)程中引入的非自然氨基酸及其衍生物包含并不限制于正亮氨酸，4-氨基丁酸，4-氨基-3-羥基-5-苯基戊酸，6-氨基己酸，叔丁基甘氨酸，正纈氨酸，苯基甘氨酸，鳥(niǎo)氨酸，肌氨酸，4-氨基-3-羥基-6-甲基戊酸，2-吩噻基丙氨酸以及各種D構(gòu)型的氨基酸。c.含有ATF蛋白質(zhì)藥用制劑的制備ATF蛋白質(zhì)可以做成藥用制劑，例如免疫原性組合物。其中一個(gè)例子，該制劑中包含藥用可接受的載體、稀釋劑、輔料或賦形劑?！翱山邮艿摹笔侵冈撦d體、稀釋劑、輔料或賦形劑與制劑中的活性成分是可配伍的(最好是能夠穩(wěn)定活性成分)，并對(duì)病人無(wú)害?？梢允褂靡环N或多種的增溶劑做載體，如膠態(tài)二氧化硅、硬脂酸鎂鹽、纖維素、十二烷基硫酸鈉和10#D&C黃色染料(D&CYellow#10)。另一個(gè)例子是制劑中除了ATF或其片段外，還包括佐劑，如卵磷脂、油脂、表面活性劑或它們的組合，一種合適的佐劑包括載體的水溶液，如磷酸鹽緩沖液(PBS，DulbeccoPBS)制劑中的卵磷脂可以是0.25-12.5％(v/v)，較好是0.5-5％，最好是0.5-1.25％；油脂的含量可以是1％-23％(v/v)，較好的是3.5-10％，最好是4.5％；兩親型表面活性劑的含量可以是1.5-6％(v/v)，較好是1.5-4％，最好是2％。上述制劑中的佐劑可以多于一個(gè)。如佐劑包含了二種兩親型表面活性劑，如表面活性劑TWEEN3和SPAN3，在制劑中一個(gè)主要分布在水相(如TWEEN803)，另一個(gè)主要分布在油相(如SPAN803)，當(dāng)TWEEN803和SPAN803同時(shí)作為表面活性劑時(shí)，TWEEN803DE濃度約為1/2至SPAN803濃度的三倍，最適宜的是二倍。另一個(gè)例子，佐劑包含了卵磷脂的油脂的混合物(DRAKEOL35LtMineralOil)，卵磷脂可按專利CentralSoya，F(xiàn)ortWayne，Ind.SeealsoU.S.Pat.No.5,084,269的方法獲得，表面活性劑TWEEN3和SPAN3從VanWatersandRogers，Omaha，Nebr.購(gòu)買。其它已知的佐劑如油乳劑，氫氧化鋁，氫氧化鋅，氫氧化鈣，吡啶，油和皂化物，也可作為上述藥用制劑的配方。含有ATF或其片段的藥用制劑可以通過(guò)傳統(tǒng)的方法制備，如混合，溶解，造粒，糖丸制作，捻成細(xì)粉，乳化，膠囊，包埋或凍干。d.ATF蛋白質(zhì)藥用制劑的給藥途徑已知的傳統(tǒng)給藥方式均可用于上述的藥用制劑，如口服，皮下注射，靜脈注射或肌肉注射，另外，本制劑還可通過(guò)注射貯存途徑(iniectabledepotroute)給藥，如采用1、3或6個(gè)月長(zhǎng)效或生物降解的物質(zhì)和方法。制劑注射型長(zhǎng)效處方包括許多種載體如植物油、DMF、乳酸乙脂、碳酸乙酯、乙基碳酸異丙酯、乙醇、多元醇(甘油、聚乙二醇、液體聚乙二醇等等)。對(duì)于靜脈注射劑量可以采用制劑的水溶液的點(diǎn)滴方式，即含有多肽(ATF或其片段)的藥劑用生理上可以接受的輔料溶解。生理上可接受的輔料包括5％葡萄糖，0.9％的生理鹽水，Ringer′s溶液或其它適宜的輔料。蛋白質(zhì)制劑也可以是粉末的形式，臨用前用適合的溶液如注射用水復(fù)溶。制劑還可以做成儲(chǔ)存的形式，這些長(zhǎng)效的配方可以通過(guò)植入法給藥(如皮下包埋或肌肉包埋)或者肌肉注射，因此，在制劑的配方中加入適宜的多聚物或疏水物質(zhì)(如用適宜的油做成的乳化劑)或離子交換樹(shù)脂或微溶的衍生物(如微溶鹽類)另外，制劑還可做成口服形式?？诜钠瑒┩ǔ０ㄟm宜的載體或輔料，諸如玉米、淀粉、明膠、乳糖、蔗糖、纖維素、高嶺土、甘露醇、磷酸鹽、碳酸鈣、氯化鈉或藻酸。崩解劑包括(但不限于)微甘醇酸酯和藻酸。片劑的粘合劑可以包括明膠、甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉、聚乙、羥丙基、蔗糖、淀粉和乙基纖維素。潤(rùn)滑劑可以使用硬脂酸鎂、硬脂酸、硅流體、滑石粉、蠟、石油和二氧化硅。經(jīng)設(shè)計(jì)的固體制劑可保證在小腸中釋放。例如復(fù)合物在固相亞單位或由微囊多聚物組成的相對(duì)獨(dú)立基質(zhì)、壁或腔的膠囊中，到達(dá)大腸或小腸后因PH的改變?nèi)芙饣蚪到?，而將藥物釋放出?lái)。適宜的多聚物如前所述，也可參見(jiàn)專利U.S.Pat.NO.5,705,189。另外，還可以采用其它的藥物傳遞系統(tǒng)。脂質(zhì)體和乳化物是常見(jiàn)的用來(lái)傳輸多肽制劑的載體。一些有機(jī)溶劑如二甲基亞砜(DMSO)雖然具有較大的毒性也會(huì)使用。再者，還可以做成緩釋劑，如將復(fù)合物裝入半滲透的固體聚合物中，很多不同的緩釋物質(zhì)均為已知的。根據(jù)緩釋膠囊的天然化學(xué)性質(zhì)不同，可以花費(fèi)幾周到100天緩慢釋放制劑的活性成分如ATF或它的片段。制劑也可通過(guò)吸入法給藥?！拔搿笔侵笍谋乔缓涂谇晃耄梢杂脗鹘y(tǒng)的技術(shù)制備成適當(dāng)?shù)膭┝啃问?，如氣溶液配方或劑量吸氣器。確定制劑有效劑量的方法是已知的，特別是根據(jù)本文所詳細(xì)描述的的方法。按如上所述的方法給入有效劑量的制劑后能夠緩解病人的動(dòng)脈粥樣硬化癥狀，逆轉(zhuǎn)、改善或抑制動(dòng)脈粥樣硬化進(jìn)程，阻止動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的形成。有效劑量的確定最初是通過(guò)體外測(cè)定。例如，可以在動(dòng)脈粥樣硬化動(dòng)物模型如兔主動(dòng)脈球囊損傷模型或ApoE缺陷小鼠模型中得到一個(gè)抗動(dòng)脈粥樣硬化的有效劑量，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以根據(jù)本文所述的結(jié)果逐步優(yōu)化所有物種的給藥方法。分別摸索給藥劑量和給藥頻率。例如含有40-100mgATF和適當(dāng)佐劑的制劑在1-2月內(nèi)靜脈給藥2次或2-3月內(nèi)靜脈給藥3次，如果病人體內(nèi)的抗ATF抗體滴度低于1∶10000時(shí)應(yīng)間歇性的增加一次。制劑可以在病人動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生前或后給予一次或多次?！皠?dòng)脈粥樣硬化發(fā)生前”是指用日常的醫(yī)學(xué)方法未檢測(cè)到動(dòng)脈粥樣硬化的斑塊?！皠?dòng)脈粥樣硬化發(fā)生后”是指可以檢測(cè)到動(dòng)脈粥樣硬化斑塊，病人已經(jīng)或正在出現(xiàn)動(dòng)脈粥樣硬化癥狀。當(dāng)病人多次給藥時(shí)，可以在不同的給藥時(shí)間通過(guò)不同的途徑給藥。2.用抗uPAR抗體治療動(dòng)脈粥樣硬化本方法所描述的是給病人使用能與uPAR專一性結(jié)合的抗體。抗uPAR抗體包括但不限于多抗，單抗，抗體片段(如抗體的單鏈或Fab)，嵌合抗體和人源化抗體，典型的抗uPAR抗體的靶點(diǎn)是uPAR上的uPA結(jié)合位點(diǎn)。a用來(lái)生產(chǎn)抗uPAR抗體的抗原全長(zhǎng)的uPAR蛋白質(zhì)可以用作生產(chǎn)抗uPAR抗體的抗原。例如人的uPAR，其氨基酸序列(SEQIDNO2)如圖3所示。uPAR可以是從天然原料中純化的也可以是重組技術(shù)生產(chǎn)的，或者是天然的和人工合成的結(jié)合體。uPAR的片段也能用來(lái)作為抗原誘導(dǎo)產(chǎn)生抗uPAR抗體，uPAR片段可能包括至少8個(gè)氨基酸殘基，還可另加一個(gè)uPA結(jié)合位點(diǎn)。例如一個(gè)15個(gè)氨基酸的uPAR片段含有至少一個(gè)氨基酸殘基直接與uPA相互作用。某些uPAR蛋白質(zhì)(如人的uPAR)直接與uPA的作用位點(diǎn)的氨基酸殘基是已知的，如圖3所示，人uPAR包括三個(gè)結(jié)構(gòu)域(結(jié)構(gòu)域I，結(jié)構(gòu)域II，結(jié)構(gòu)域III)與人的uPA(它的ATF區(qū)域)相互作用。根據(jù)rhATF-uPAR復(fù)合物的三維結(jié)構(gòu)Huai，etal.，Science311656-659(2006)。下述uPAR的氨基酸殘基直接與人的ATF結(jié)合T8，R25，V29，L31，L40，R53，L55，Y57，L66，andE68(inDomainI)；R137，K139，R142，H143，R145，andH166(inDomainII)；andH251，L252，D254，andA255(inDomainIII)。其它物種的uPAR與uPA相互作用的氨基酸殘基可以通過(guò)比較已知uPA結(jié)合位點(diǎn)的uPAR(如人uPAR)與未知uPAR結(jié)合位點(diǎn)的uPA結(jié)合位點(diǎn)的uPA的結(jié)構(gòu)來(lái)確定。b.抗uPAR抗體的制備用動(dòng)物制備單抗、多抗及其片段的方法是已知的。參見(jiàn)HarlowandLane，(1988)AntibodiesALaboratoryManual，ColdSpringHarborLaboratory，NewYork?！翱贵w”是包括完整的抗體分子及其片段，如Fab，F(xiàn)(ab′)2，F(xiàn)V，scFV(單鏈抗體)和dAb(抗體結(jié)構(gòu)域，Ward，et.al.(1989)Nature，341，544)。通常生產(chǎn)多肽的抗體，多肽可與載體蛋白如KLH偶聯(lián)，與佐劑混合注射到宿主動(dòng)物上，動(dòng)物產(chǎn)生的抗體用多肽親和層析柱純化。常用的宿主動(dòng)物有兔、小鼠、豚鼠和大鼠。根據(jù)不同的宿主動(dòng)物可以選擇不同的佐劑增強(qiáng)免疫反應(yīng)，包括弗氏佐劑(完全和不完全)、礦物油如氫氧化鋁、表面活性物質(zhì)如卵磷脂，多元醇、聚陰離子(polyanions)、乳化油、鑰孔蟲(chóng)戚血藍(lán)素(KLH)、二硝基酚。有效的人用佐劑有卡介苗(BCG)和微小棒狀桿菌素(coryhebacterinmparvum)。包含一組異質(zhì)的抗體的多抗存在于免疫動(dòng)物的血清中，單一抗體成分的單抗可用經(jīng)典的雜交瘤技術(shù)制備參見(jiàn)Kohleretal.(1975)Nature256，495；Kohleretal.(1976)Eur.J.Immunol.6，511；Kohleretal.(1976)EurJImmunol6，292；andHammerlingetal.(1981)MonoclonalAntibodiesandTCellHybridomas，Elsevier，N.Y.。特別是單抗可以通過(guò)培養(yǎng)能生產(chǎn)抗體分子的穩(wěn)定細(xì)胞株的獲得，參見(jiàn)Kohleretal.(1975)Nature256，495andU.S.PatentNo.4,376,110；人B細(xì)胞雜交瘤技術(shù)參見(jiàn)Kosboretal.(1983)ImmunolToday4，72；Coleetal.(1983)Proc.Natl.Acad.Sci.USA80，2026。EBV-雜交瘤技術(shù)參見(jiàn)Coleetal.(1983)MonoclonalAntibodiesandCancerTherapy，AlanR.Liss，Inc.，pp.77-96)。這些抗體可能是任何一類免疫球蛋白，包括IgG，IgM，IgE，IgA，IgD和它們的亞型。雜交瘤技術(shù)生產(chǎn)單抗可以是體內(nèi)培養(yǎng)也可以是體外培養(yǎng)。能夠通過(guò)活體生產(chǎn)高滴度的單抗是特別有用的生產(chǎn)方法。生產(chǎn)嵌合抗體的技術(shù)參見(jiàn)Morrisonetal.(1984)Proc.Natl.Acad.Sci.USA81，6851；Neubergeretal.(1984)Nature312，604；andTakedaetal.(1984)Nature314452。嵌合抗體是指分子的不同部分來(lái)源于不同的物種，如具有鼠源單抗的可變區(qū)和人源免疫球蛋白的不變區(qū)。生產(chǎn)單鏈抗體的技術(shù)(參見(jiàn)U.S.PatentNos.4,946,778and4,704,692)同樣適用于生產(chǎn)噬菌體文庫(kù)的單鏈FV抗體。抗體片段可由已知的技術(shù)生產(chǎn)。例如這樣的片段包括的但不限于由胃蛋白酶水解抗體分子得到的F(ab′)2的片段，還原F(ab′)2片段的二硫鍵得到的Fab片段，抗體還可以通過(guò)已知的方法人源化。例如，具有所需要結(jié)合專一性的單抗可被商業(yè)性地人源化(參見(jiàn)Scotgene，Scotland；andOxfordMolecular，PaloAlto，Calif)。由轉(zhuǎn)基因動(dòng)物生產(chǎn)的人源抗體也屬于本發(fā)明的范疇(參見(jiàn)Greenetal.(1994)NatureGenetics7，13；andU.S.PatentNos.5,545,806and5,569,825)。c.制備和使用含抗uPAR抗體的藥用制劑如上所述的抗uPAR抗體可以按前文所述的方法(1.c)做成藥劑給病人使用。抗uPAR抗體在治療動(dòng)脈粥樣硬化中的作用機(jī)制包括但不限于是通過(guò)干擾uPA和uPAR的結(jié)合而有效地治療動(dòng)脈粥樣硬化。3.用其它物質(zhì)治療動(dòng)脈粥樣硬化除了ATF蛋白質(zhì)和抗uPAR抗體，其它能阻斷uPA和uPAR相互作用的物質(zhì)也能用于本發(fā)明，可以阻斷uPA和uPAR結(jié)合的物質(zhì)包括但不限于抗ATF抗體，uPAR，能與uPA結(jié)合的uPAR，表達(dá)ATF蛋白質(zhì)、uPAR、uPA結(jié)合片段的核苷酸，小分子有機(jī)化合物(如非多肽類分子)。通常本方法所用的小分子的有機(jī)化合物的分子量小于2500道爾頓(Da)，小分子可能從至少100Da到2000Da，這些分子能夠與uPAR的uPA結(jié)合位點(diǎn)(如結(jié)構(gòu)域I，結(jié)構(gòu)域II，結(jié)構(gòu)域III)結(jié)合或uPA的uPAR結(jié)合位點(diǎn)(如ATF或受體結(jié)合區(qū)域)結(jié)合，其親和常數(shù)至少約2×104M-1，例如105M-1、106M-1、107M-1和108M-1?？梢杂靡阎姆椒ㄈ绺咄亢Y選來(lái)確定能阻斷uPA與uPAR相互作用的物質(zhì)。其中一個(gè)例子是，假設(shè)有多肽1和多肽2，多肽1是可能是uPA或其能與uPAR的結(jié)合的片段(如ATF或受體結(jié)合區(qū)域)，多肽2是uPAR或其能與uPA結(jié)合的片段(如包括一個(gè)或多個(gè)ATF結(jié)合位點(diǎn)的片段)。多肽1，多肽2和受試物質(zhì)相互接觸，測(cè)定未標(biāo)記的多肽上的標(biāo)記量，多肽1和多肽2之間相互作用的減少通過(guò)測(cè)定結(jié)合的標(biāo)記量確定，從而判定該物質(zhì)抑制uPA與uPAR相互作用的有效性。高通量篩選是指能方便快捷地篩選大量的受試物質(zhì)的方法。例如許多受試物質(zhì)與多肽1和多肽2接觸，不同的受試物質(zhì)可以同時(shí)或分別與其它的多肽接觸。又如，這種方法可以篩選待測(cè)物質(zhì)文庫(kù)，文庫(kù)包括天然產(chǎn)物文庫(kù)，有機(jī)化合物文庫(kù)，聯(lián)合化合物文庫(kù)(combinatorialchemicallibraries)，多肽文庫(kù)，經(jīng)修飾多肽文庫(kù)(如包括D型氨基酸，非常用氨基酸或N端取代氨基酸)。這些文庫(kù)能適用與多孔板(如96孔板)篩選。這些分析特別適用于由計(jì)算機(jī)控制機(jī)器人操作的自動(dòng)執(zhí)行程序，文庫(kù)還可用于其它方式如人工合成化合物文庫(kù)與固體支持物相連可以得到微滴。除了治療動(dòng)脈粥樣硬化，抗ATF抗體和抗uPAR抗體還可用于檢測(cè)或純化uPA和uPAR。用抗體檢測(cè)和(或)純化蛋白質(zhì)的方法是已知的。本發(fā)明的有益效果本發(fā)明提供的化合物可以阻斷uPA和uPAR的相互作用，可抑制動(dòng)脈粥樣硬化的形成并能改善動(dòng)脈粥樣硬化，可用于制備預(yù)防或治療動(dòng)脈粥樣硬化藥物。具體實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)詳見(jiàn)實(shí)施例。圖1是人、狒狒、小鼠、大鼠、牛、豬和雞的ATF的氨基酸序列及序列比較。圖2是兔、人、小鼠的ATF受體結(jié)合的環(huán)狀區(qū)域。圖3是人uPAR的氨基酸序列及與人uPA結(jié)合的結(jié)構(gòu)域。圖4是重組人ATF-人uPAR復(fù)合物的三維結(jié)構(gòu)。圖5是兔主動(dòng)脈球囊損傷術(shù)后動(dòng)脈粥樣硬化損傷的形成與時(shí)間的關(guān)系。圖6是兔主動(dòng)脈的顯微照片說(shuō)明靜脈注射重組人ATF的抗動(dòng)脈粥樣硬化作用。圖7是兔主動(dòng)脈的顯微照片說(shuō)明用重組人ATF免疫的抗動(dòng)脈粥樣硬化作用。圖8是兔主動(dòng)脈的顯微照片說(shuō)明皮下注射兔抗重組人ATF多抗的抗動(dòng)脈粥樣硬化作用。圖9是兔主動(dòng)脈的顯微照片說(shuō)明重組人ATF免疫加靜脈注射重組人ATF的抗動(dòng)脈粥樣硬化作用。圖10A是ApoE缺陷小鼠的動(dòng)脈粥樣硬化損傷形成與時(shí)間的關(guān)系。圖10B和10C分別是雄性和雌性ApoE缺陷小鼠主動(dòng)脈弓和主動(dòng)脈瓣的動(dòng)脈粥樣硬化損傷的顯微照片。圖11A和11B分別是雄性和雌性ApoE缺陷小鼠主動(dòng)脈弓和主動(dòng)脈瓣的動(dòng)脈粥樣硬化損傷的顯微照片，顯示重組人ATF免疫的抗動(dòng)脈粥樣硬化效果。圖11C和11D分別是雄性和雌性ApoE缺陷小鼠主動(dòng)脈弓和主動(dòng)脈瓣的動(dòng)脈粥樣硬化損傷的顯微照片，顯示靜脈注射重組人ATF的抗動(dòng)脈粥樣硬化效果。圖11E和11F分別是是雄性和雌性ApoE缺陷小鼠主動(dòng)脈弓和主動(dòng)脈瓣的動(dòng)脈粥樣硬化損傷的顯微照片，顯示皮下注射重組人ATF的抗動(dòng)脈粥樣硬化效果。圖10B～圖11F中均為主動(dòng)脈弓(左)和主動(dòng)脈瓣(右)處的動(dòng)脈粥樣硬化損傷的油紅O(ORO)染色圖。圖12用重組人ATF處理的兔的抗重組人ATF的抗體滴度。處死時(shí)rhATF免疫兔的抗體滴度(V)和rhATF免疫加靜脈注射rhATF(V+A)約為1∶200,000。兩組的抗體滴度沒(méi)有顯著差異。圖13抗重組人ATF的抗體對(duì)尿激酶激活纖溶酶原活性的影響。所有圖中相同的符號(hào)代表相同的意思。C代表對(duì)照組。具體實(shí)施例方式以下通過(guò)實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的闡述。實(shí)施例1重組人ATF(rhATF)的制備按照文獻(xiàn)(汪晶等，重組人尿激酶原氨基末端片段的制備及活性測(cè)定，南京大學(xué)學(xué)報(bào)，2004年1月，第40卷第1期，p64～74)的記載，從人臍帶靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC)中純化總RNA，經(jīng)RT-PCR獲得人的ATF基因，將ATF基因克隆到大腸桿菌表達(dá)載體PET-29a(+)中，并轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21(DE3)宿主菌。發(fā)酵液中表達(dá)的rhATF經(jīng)變復(fù)性，再經(jīng)CM柱和SuperdexG-75柱純化，得到的樣品純度大于95％。獲得rhATF能夠阻止uPA與uPAR的結(jié)合。實(shí)施例2兔主動(dòng)脈球囊損傷模型中的動(dòng)脈粥樣硬化損傷形成取健康雄性新西蘭白兔(2.8-3.5Kg)進(jìn)行下述實(shí)驗(yàn)經(jīng)耳緣靜脈注射戊巴比妥鈉(30mg/kg)麻醉兔，仰臥位固定，切開(kāi)右股動(dòng)脈，插入4FFogarty導(dǎo)管20cm至腹主動(dòng)脈，球囊中注入0.85ml生理鹽水充盈，溫和的拉動(dòng)充盈球囊10cm，反復(fù)四次確保內(nèi)皮完全損傷，取出導(dǎo)管，縫合傷口，在傷口處涂抹200,000IU青霉素的生理鹽水預(yù)防感染。術(shù)后，立即給兔用高脂飼料(HFD，普通飼料中按重量百分比加入1％膽固醇，5％豬油和7.5％蛋黃粉)喂養(yǎng)7、10、14天。動(dòng)物處死后，用下述步驟觀察受損主動(dòng)脈處的動(dòng)脈粥樣硬化損傷的形成。先將兔深度麻醉后頸動(dòng)脈取血，待兔死亡后，從主動(dòng)脈弓到股動(dòng)脈分叉的動(dòng)脈條剝離，截?cái)啵糜图tO(ORO)染色。用Image-ProPlus5.1(MediaCybernetics，Inc.)圖像分析系統(tǒng)確定損傷面積的百分比。用高脂飼料喂養(yǎng)7天的兔在其受損主動(dòng)脈處有明顯的動(dòng)脈粥樣硬化損傷的形成。見(jiàn)圖5。圖5顯示主動(dòng)脈球囊損傷術(shù)后損傷面積的百分?jǐn)?shù)(Lesionareapercentage)隨著時(shí)間的延長(zhǎng)而增加。12只新西蘭兔接受主動(dòng)脈球囊損傷術(shù)后分別在第7、10和14天處死。結(jié)果用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差(n＝4)表示，p＜0.05表示有顯著性差異。(*p＜0.05；**p＜0.01)。實(shí)施例3靜脈注射rhATF阻止兔受損動(dòng)脈的動(dòng)脈粥樣硬化損傷形成在施予動(dòng)脈球囊損傷術(shù)后，實(shí)驗(yàn)組即靜脈注射1mgrhATF，每日一次，共七天；對(duì)照組中靜脈給予PBS。在此期間喂育高脂飼料(HFD)。在動(dòng)脈球囊損傷術(shù)后的第七天處死，觀察兔受損主動(dòng)脈處的動(dòng)脈粥樣硬化損傷的形成。本實(shí)驗(yàn)的結(jié)果見(jiàn)如圖6及表1，與注射PBS的對(duì)照組相比靜脈注射rhATF的實(shí)驗(yàn)組兔受損主動(dòng)脈處的動(dòng)脈粥樣硬化損傷減少了約50％。表1實(shí)施例4rhATF免疫阻止兔受損動(dòng)脈的動(dòng)脈粥樣硬化損傷形成用rhATF(2mg/只)與完全弗氏佐劑混合免疫兔，每周一次共二次，在第二次免疫的第7天用ELISA測(cè)定每只免疫動(dòng)物的抗體滴度。ELISA測(cè)定抗體滴度的方法簡(jiǎn)述如下用rhATF(1ug/well)包被酶標(biāo)板，4℃過(guò)夜。用含0.1％Tween-20和5％脫脂奶粉的PBS室溫封閉2小時(shí)，稀釋經(jīng)免疫動(dòng)物的血清，將稀釋后的血清及對(duì)照組的血清分別加入各孔后孵育2小時(shí)，然后每孔加入100ul辣根過(guò)氧化物酶(HRP)標(biāo)記的驢抗兔的二抗(1∶10000倍稀釋，Pierce公司產(chǎn)品)并孵育30min，再在每孔中加入四甲基聯(lián)苯胺(TMB)底物，用酶標(biāo)儀測(cè)OD450nm。樣品孔OD450nm的值大于4倍的對(duì)照孔的最大稀釋度即為該抗體的滴度。如圖12所示用rhATF免疫后的兔抗rhATF抗體滴度高于1∶100000。測(cè)定抗體滴度后，對(duì)免疫兔施予主動(dòng)脈球囊損傷術(shù)，高脂飼料喂育7天后處死，觀察受損動(dòng)脈處的動(dòng)脈粥樣硬化損傷的形成。結(jié)果見(jiàn)圖7及表2，與用PBS免疫的對(duì)照組相比，rhATF免疫組中動(dòng)脈粥樣硬化損傷減少了約50％。表2實(shí)施例5皮下注射兔抗rhATF的多抗治療主動(dòng)脈球囊損傷兔兔抗rhATF的多抗是用protein-A親和層析柱純化rhATF免疫的兔血清制備得到。試驗(yàn)組每只兔皮下注射10mg兔抗rhATF多抗，每周一次，連續(xù)四周，對(duì)照組注射PBS。在第三周的第3天施予主動(dòng)脈球囊損傷術(shù)，高脂飼料喂育7天后處死，觀察受損動(dòng)脈處的動(dòng)脈粥樣硬化損傷的形成。如圖8及表3所示，與對(duì)照組相比，用兔抗rhATF多抗治療組的動(dòng)脈粥樣硬化損傷的減少不明顯。再如圖7所示，兔抗rhATF多抗治療動(dòng)脈粥樣硬化的效果，也比rhATF直接免疫的效果差，因此由rhATF免疫誘發(fā)的全面的免疫反應(yīng)對(duì)抗動(dòng)脈粥樣硬化治療是重要的。表3實(shí)施例6rhATF免疫和靜脈注射rhATF聯(lián)合治療主動(dòng)脈球囊損傷兔如前所述先免疫兔，測(cè)定抗體滴度后施予主動(dòng)脈球囊損傷術(shù)。以高脂飼料喂育，靜脈注射rhATF(每只兔1mg，每天一次)，7天后處死，觀察受損動(dòng)脈處的動(dòng)脈粥樣硬化損傷的形成。如圖9及表4所示，與PBS治療的對(duì)照組相比，rhATF免疫和靜脈注射rhATF聯(lián)合使用的試驗(yàn)組動(dòng)脈粥樣硬化損傷的形成有顯著減少。rhATF免疫和靜脈注射rhATF聯(lián)合使用中動(dòng)脈粥樣硬化損傷形成的減少比單獨(dú)的靜脈注射rhATF或rhATF免疫的更明顯(見(jiàn)圖6和7)。表4實(shí)施例7運(yùn)用ApoE缺陷小鼠模型治療動(dòng)脈粥樣硬化雄性和雌性的C57BL/6J背景的ApoE雜合系小鼠從Jackson實(shí)驗(yàn)室購(gòu)得(BarHarbar，ME)。在SPF級(jí)動(dòng)物房飼養(yǎng)和繁殖，子代小鼠的基因型用JacksonLaboratory提供(UnderkofflerLAetal.，BiolProcedOnline.2003；5116-122)的PCR方法鑒定，根據(jù)基因鑒定的結(jié)果選擇ApoE缺陷小鼠(ApoE-/-)小鼠飼養(yǎng)在明暗各12小時(shí)的空調(diào)房間里(溫度為20-22℃，相對(duì)濕度40-70％)自由飲水進(jìn)食。ApoE缺陷小鼠分別于12，16，19.5，和22周齡時(shí)處死，用下述步驟觀察動(dòng)脈弓處的動(dòng)脈粥樣硬化損傷的形成。小鼠深度麻醉后，用含0.38％檸檬酸三鈉的PBS進(jìn)行心臟灌流，剝離動(dòng)脈弓，用油紅O(ORO)染色。將主動(dòng)脈瓣切成5μm厚的冰凍切片，置于加拿大樹(shù)膠處理的玻片上，ORO染色。顯微鏡下觀察，主動(dòng)脈瓣上ORO染色處即為粥樣硬化斑塊區(qū)域。用Image-ProPlus5.1圖像分析系統(tǒng)分析，計(jì)算主動(dòng)脈瓣處的動(dòng)脈粥樣硬化損傷面積。如圖10A所示，主動(dòng)脈弓和主動(dòng)脈瓣的動(dòng)脈粥樣硬化損傷在19.5周齡的ApoE-/-小鼠上開(kāi)始形成。ApoE-/-小鼠生長(zhǎng)至9周齡時(shí)，隨機(jī)分組。A組用rhATF1mg/ml，與完全弗氏佐劑按體積比1∶1混合，每只小鼠多點(diǎn)皮下注射共0.2ml，每周一次，連續(xù)免疫兩周。用ELISA方法檢測(cè)，免疫小鼠抗rhATF抗體滴度高于1∶100,000，見(jiàn)表5。通過(guò)加強(qiáng)免疫的方法使抗體滴度在ApoE-/-小鼠19.5周齡前都維持在1∶100,000以上。19.5周齡時(shí)處死小鼠，觀察主動(dòng)脈和主動(dòng)脈瓣處粥樣硬化損傷的情況。表5.ATF免疫治療的ApoE-/-小鼠血清抗原滴度注由于抗rhATF抗體滴度產(chǎn)生較低，444號(hào)和445號(hào)小鼠在11周齡時(shí)追加一次免疫；455號(hào)和456號(hào)小鼠在13周齡時(shí)追加一次免疫；454號(hào)和455號(hào)在15周齡時(shí)追加一次免疫。B組12周齡時(shí)，靜脈注射rhATF(每只小鼠每天2.8μg)；C組12周齡時(shí)，皮下注射rhATF(每只小鼠每天2.8μg)。19.5周齡處死小鼠，觀察主動(dòng)脈和主動(dòng)脈瓣動(dòng)脈粥樣硬化損傷的情況。A組，B組和C組小鼠的實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表6A和6B及圖11A-11F。簡(jiǎn)言之，在接受治療的三組中抗動(dòng)脈粥樣硬化作用最強(qiáng)的是rhATF免疫治療的A組小鼠。靜脈給藥組(B組)動(dòng)脈粥樣硬化損傷的減少較皮下給藥組(C組)明顯。該結(jié)果可能是由于皮下注射rhATF降解或者吸收不足造成的。在三組動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中，雄性抗粥樣硬化作用均較雌性明顯。該性別差異與ApoE-/-小鼠表現(xiàn)出的性別在動(dòng)脈粥樣硬化形成中的作用一致，見(jiàn)圖11A。在兔動(dòng)脈球囊損傷模型中也觀察到性別在動(dòng)脈粥樣硬化中的作用，并與上述結(jié)果一致。表6A.19.5周齡雄性ApoE-/-小鼠ORO染色的主動(dòng)脈瓣粥樣硬化損傷情況.表6B.19.5周齡雌性ApoE-/-小鼠ORO染色的主動(dòng)脈瓣粥樣硬化斑塊情況實(shí)施例8rhATF與uPAR(兔/小鼠)的結(jié)合試驗(yàn)用3.8％枸櫞酸鈉收集兔或小鼠外周血，用PBS按體積比1∶1稀釋。稀釋后的血液按體積比2∶1小心地加入到淋巴細(xì)胞分離液(皓揚(yáng)生物科學(xué)技術(shù)有限公司，中國(guó))上，2000rpm，19℃離心20分鐘。收集單核細(xì)胞層(PBMCs)，PBS洗兩次。用含0.1MNaCl的1ml甘氨酸-鹽酸緩沖液(50mM，pH3.0)室溫孵育細(xì)胞3分鐘以洗去uPA，再用1mlPBS中和。用甘氨酸-鹽酸緩沖液處理后，用含0.1％BSA的RPMI1640培養(yǎng)液洗細(xì)胞4次，在同樣培養(yǎng)基中與10nM的125I-rhATF4℃孵育1.5小時(shí).離心除去未結(jié)合的125I-rhATF后，用PBS洗3次，隨后產(chǎn)生的射線用γ計(jì)數(shù)器檢測(cè)。上述測(cè)定結(jié)果顯示125I-rhATF能夠結(jié)合兔uPAR，而不能與小鼠uPAR結(jié)合。該實(shí)驗(yàn)結(jié)果與結(jié)構(gòu)分析的結(jié)論是一致的，重組人ATF在結(jié)構(gòu)上與兔ATF比小鼠的更為相似。rhATF在治療小鼠動(dòng)脈粥樣硬化有效，其抗粥樣硬化效應(yīng)可能是由于rhATF誘導(dǎo)產(chǎn)生抗體，能同時(shí)與人和小鼠uPAs(ATFs)作用。實(shí)施例9動(dòng)脈粥樣硬化損傷處的uPA的檢測(cè)兔和小鼠動(dòng)脈粥樣硬化模型見(jiàn)上述方法。稱取粥樣硬化損傷組織樣品的重量，用2×SDS緩沖液提取，用10％聚丙烯酰胺平板Laemmli緩沖系統(tǒng)電泳分離。根據(jù)Granelli-Piperno等(Granelli-Pipernoetal.，J.Exp.Med.，148223-234，1978)和Vassalli等(Vassallietal.，J.Exp.Med.，1591653-68，1984)描述的方法進(jìn)行酶譜(Zymography)分析。通常，電泳后的凝膠先用2.5％TritonX-100洗45分鐘，再用0.1Tris-HCl洗1小時(shí)，以去除SDS。然后，將凝膠放置在一個(gè)含0.0125g/ml瓊脂糖，0.02g/ml酪蛋白和10mg/ml纖溶酶原的酪蛋白平板上，37℃孵育過(guò)夜。uPA的量根據(jù)酪蛋白平板中溶解區(qū)域的大小進(jìn)行半定量推測(cè)，參考文獻(xiàn)見(jiàn)Lietal.，ThrombosisResearch，103221-232(2001)。在ApoE-/-小鼠粥樣硬化斑塊中檢測(cè)到uPA，而在ATF免疫的小鼠未檢測(cè)到。在兔動(dòng)脈球囊損傷模型中，經(jīng)rhATF免疫的動(dòng)物uPA水平比對(duì)照組明顯降低。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明rhATF免疫是通過(guò)抑制uPA和其受體uPAR的結(jié)合在治療動(dòng)脈粥樣硬化中發(fā)揮作用。實(shí)施例10靜脈注射rhATF和rhATF免疫副作用的研究1.血清中uPA的水平rhATF免疫的動(dòng)物血清中uPA按實(shí)施例9的方法進(jìn)行測(cè)定。實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組動(dòng)物的血清uPA水平無(wú)明顯差別，提示rhATF免疫不影響血液中uPA的水平。2.尿激酶的催化活性按下述方法用底物S2444(L-焦谷氨酰-甘氨酰-L-精氨酸-p-硝基苯胺鹽酸鹽)和纖溶酶原檢測(cè)抗rtATF抗體對(duì)尿激酶催化活性的影響。首先，尿激酶(10nmol/L)分別與兔抗rhATF多抗(3μmol/L)或者兔抗(3μmol/L)孵育1小時(shí)后，加入生色底物S2444(0.3mmol/L)。用酶標(biāo)儀測(cè)定波長(zhǎng)410nm(參考波長(zhǎng)490nm)的光吸收(OD值)隨時(shí)間的增長(zhǎng)得到反應(yīng)速率Liu，etal.，Blood，81980-7(1993)。其次，先將尿激酶(0.5nmol/L或0.05nmol/L)與抗rhATF多抗或兔IgG混合，再加入H-D-纈氨酰-亮氨酰-L-賴氨酸-對(duì)硝基苯胺二鹽酸鹽(S2251，0.3mmol/L)和纖溶酶原(2μmol/L)，在0.05％磷酸鈉，0.15mol/L氯化鈉，0.2％牛血清白蛋白，0.01％吐溫-80，pH7.8緩沖液中，室溫孵育1小時(shí)。用酶標(biāo)儀測(cè)定波長(zhǎng)410nm(參考波長(zhǎng)490nm)的光吸收(OD值)隨時(shí)間的增長(zhǎng)得到反應(yīng)速率。該實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示兔抗rhATF多克隆抗體對(duì)尿激酶水解生色底物S2444和纖溶酶原激活的活性均沒(méi)有影響。見(jiàn)表7和圖13。表7.抗rhATF抗體(Ab)對(duì)尿激酶水解生色底物S2444作用的影響3.血液分析收集兔或ApoE-/-小鼠治療中或處死時(shí)的檸檬酸鹽血。使用自動(dòng)血細(xì)胞計(jì)數(shù)儀計(jì)數(shù)血細(xì)胞的種類和數(shù)目，結(jié)果見(jiàn)表8～表10.rhATF處理的動(dòng)物中未見(jiàn)明顯的血液學(xué)參數(shù)變化。表8.靜脈注射rhATF7天的兔血常規(guī)注每組4只兔，用平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示。表9.rhATF免疫的小鼠和對(duì)照組的血液學(xué)參數(shù)注對(duì)照組的值用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。括號(hào)中數(shù)目為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物數(shù)目。表10.靜脈注射rhATF的小鼠和對(duì)照組血液學(xué)參數(shù)注小鼠自12周齡始靜脈注射rhATF(每只每天2.8μg)，用平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示。4.血脂分析治療動(dòng)物的膽固醇，三甘油，高密度脂蛋白和低密度脂蛋白水平在南京大學(xué)醫(yī)院中心實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)。如表11所示，在rhATF治療的兔中未見(jiàn)明顯的血脂濃度變化。但是，靜脈注射rhATF和rhATF免疫聯(lián)合使用的動(dòng)物中三甘油和低密度脂蛋白-膽固醇水平比對(duì)照組和單獨(dú)靜脈注射rhATF組低。以上數(shù)據(jù)表明靜脈注射rhATF和rhATF免疫對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的纖維蛋白溶解、血液學(xué)參數(shù)和血脂水平?jīng)]有影響。表11.rhATF免疫或靜脈注射治療的兔血脂濃度注V+A，rhATF免疫和靜脈注射聯(lián)合使用；單位為mmol/L；用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示；每組4只動(dòng)物.；*p＜0.05；**p＜0.01。實(shí)施例11ATFs結(jié)構(gòu)中的MHCII型分子的結(jié)合部位根據(jù)Singh等描述的方法(Singhetal.，Bioinformatics，17(12)1236-37)得到人、狒狒、大鼠、牛、豬和雞ATFs中的MHCII類分子結(jié)合位點(diǎn)。結(jié)果見(jiàn)表12A～表12G。表12A.人ATF表12B.狒狒ATF表12C.小鼠ATF表12D.大鼠ATF表12E.牛ATF表12F.豬ATF表12G.雞ATF實(shí)施例12人類動(dòng)脈粥樣硬化的治療需要采取該治療措施的動(dòng)脈粥樣硬化病人是指有可檢測(cè)到的動(dòng)脈粥樣硬化斑塊，或者是有動(dòng)脈粥樣硬化癥狀的人。此外，具有一個(gè)或多個(gè)前文所述的動(dòng)脈粥樣硬化誘因的病人也可以采用本治療方案。藥用制劑包含ATF和載體或佐劑，并根據(jù)上面描述的方法制備而成。動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生之前或發(fā)生后給予病人靜脈注射劑量為40-100mgATF，一到兩個(gè)月內(nèi)兩次。若患者血液中抗ATF抗體滴度低于1∶10,000應(yīng)追加注射。如果病人已經(jīng)發(fā)生了動(dòng)脈粥樣硬化，應(yīng)每天注射含40-100mgATF的藥劑。序列表<110>劉建寧<120>一種阻斷uPA與uPAR相互作用的化合物及其應(yīng)用<160>55<210>1<211>135<212>PRT<213>天然序列，來(lái)源于人。<400>1SerAsnGluLeuHisGlnValProSerAsnCysAspCysLeuAsn151015GlyGlyThrCysValSerAsnLysTyrPheSerAsnIleHisTrp202530CysAsnCysProLysLysPheGlyGlyGlnHisCysGluIleAsp354045LysSerLysThrCysTyrGluGlyAsnGlyHisPheTyrArgGly505560LysAlaSerThrAspThrMetGlyArgProCysLeuProTrpAsn657075SerAlaThrValLeuGlnGlnThrTyrHisAlaHisArgSerAsp808590AlaLeuGlnLeuGlyLeuGlyLysHisAsnTyrCysArgAsnPro95100105AspAsnArgArgArgProTrpCysTyrValGlnValGlyLeuLys110115120ProLeuValGlnGluCysMetValHisAspCysAlaAspGlyLys125130135<210>2<211>322<212>PRT<213>天然序列，來(lái)源于人<400>2MetGlyHisProProLeuLeuProLeuLeuLeuLeuLeuHisThr151015CysValProAlaSerTrpGlyLeuArgCysMetGlnCysLysThr202530AsnGlyAspCysArgValGluGluCysAlaLeuGlyGlnAspLeu354045CysArgThrThrIleValArgLeuTrpGluGluGlyGluGluLeu505560GluLeuValGluLysSerCysThrHisSerGluLysThrAsnArg657075ThrLeuSerTyrArgThrGlyLeuLysIleThrSerLeuThrGlu808590ValValCysGlyLeuAspLeuCysAsnGlnGlyAsnSerGlyArg95100105AlaValThrTyrSerArgSerArgTyrLeuGluCysIleSerCys110115120GlySerSerAspMetSerCysGluArgGlyArgHisGlnSerLeu125130135GlnCysArgSerProGluGluGlnCysLeuAspValValThrHis140145150TrpIleGlnGluGlyGluGluGlyArgProLysAspAspArgHis155160165LeuArgGlyCysGlyTyrLeuProGlyCysProGlySerAsnGly170175180PheHisAsnAsnAspThrPheHisPheLeuLysCysCysAsnThr185190195ThrLysCysAsnGluGlyProIleLeuGluLeuGluAsnLeuPro200205210GlnAsnGlyArgGlnCysTyrSerCysLysGlyAsnSerThrHis215220225GlyCysSerSerGluGluThrPheLeuIleAspCysArgGlyPro230235240MetAsnGlnCysLeuValAlaThrAspThrHisGlyProLysAsn245250255GlnSerTyrMetValArgGlyCysAlaThrAlaSerMetCysGln260265270HisAlaHisLeuGlyAspAlaPheSerMetAsnHisIleAspVal275280285SerCysCysThrLysSerGlyCysAsnHisProAspLeuAspVal290295300GlnTyrArgSerGlyAlaAlaProGlnProGlyProAlaHisLeu305310315SerLeuThrIleThrLeuLeu320<210>3<211>9<212>PRT<213>天然序列<400>3TyrArgGlyLysAlaSerThrAspThr15<210>4<211>9<212>PRT<213>天然序列<400>4TrpCysTyrValGlnValGlyLeuLys15<210>5<211>9<212>PRT<213>天然序列<400>5ValGlyLeuLysProLeuValGlnGlu15<210>6<211>9<212>PRT<213>天然序列<400>6TyrValGlnValGlyLeuLysProLeu15<210>7<211>9<212>PRT<213>天然序列<400>7MetValHisAspCysAlaAspGlyLys15<210>8<211>9<212>PRT<213>天然序列<400>8TrpAsnSerAlaThrValLeuGlnGln15<210>9<211>9<212>PRT<213>天然序列<400>9TyrValGlnValGlyLeuLysGlnArg15<210>10<211>9<212>PRT<213>天然序列<400>10ValGlyLeuLysGlnArgValGlnGlu15<210>11<211>9<212>PRT<213>天然序列<400>11TyrArgGlyLysAlaAsnThrAspThr15<210>12<211>9<212>PRT<213>天然序列<400>12PheGlnCysGlyGlnLysAlaLeuArg15<210>13<211>9<212>PRT<213>天然序列<400>13PheSerArgIleArgArgCysSerCys15<210>14<211>10<212>PRT<213>天然序列<400>14TrpCysTyrValGlnIleGlyLeuArgIle1510<210>15<211>9<212>PRT<213>天然序列<400>15IleArgArgCysSerCysProArgLys15<210>16<211>9<212>PRT<213>天然序列<400>16TyrValGlnIleGlyLeuArgGlnPhe15<210>17<211>9<212>PRT<213>天然序列<400>17ValGlnIleGlyLeuArgGlnPheVal15<210>18<211>9<212>PRT<213>天然序列<400>18TyrLysTyrPheSerArgIleArgArg15<210>19<211>9<212>PRT<213>天然序列<400>19MetValHisAspCysSerLeuSerLys15<210>20<211>9<212>PRT<213>天然序列<400>20TyrPheSerArgIleArgArgCysSer15<210>21<211>9<212>PRT<213>天然序列<400>21PheSerSerIleArgArgCysSerCys15<210>22<211>9<212>PRT<213>天然序列<400>22TrpCysTyrValGlnIleGlyLeuLys15<210>23<211>9<212>PRT<213>天然序列<400>23IleArgArgCysSerCysProLysLys15<210>24<211>9<212>PRT<213>天然序列<400>24TrpAsnSerProAlaValLeuGlnGln15<210>25<211>9<212>PRT<213>天然序列<400>25TyrPheSerSerIleArgArgCysSer15<210>26<211>9<212>PRT<213>天然序列<400>26TyrValGlnIleGlyLeuLysGlnPhe15<210>27<211>9<212>PRT<213>天然序列<400>27TyrLysTyrPheSerSerIleArgArg15<210>28<211>9<212>PRT<213>天然序列<400>28MetValGlnAspCysSerLeuSerLys15<210>29<211>9<212>PRT<213>天然序列<400>29PheSerAsnIleGlnArgCysSerCys15<210>30<211>9<212>PRT<213>天然序列<400>30TyrPheSerAsnIleGlnArgCysSer15<210>31<211>9<212>PRT<213>天然序列<400>31TyrLysTyrPheSerAsnIleGlnArg15<210>32<211>9<212>PRT<213>天然序列<400>32TyrArgGlyLysAlaAsnArgAspLeu15<210>33<211>9<212>PRT<213>天然序列<400>33ValGlnPheCysMetValGlnAspCys15<210>34<211>9<212>PRT<213>天然序列<400>34ValGlnIleGlyLeuLysGlnPheVal15<210>35<211>9<212>PRT<213>天然序列<400>35MetValGlnAspCysSerValGlyLys15<210>36<211>9<212>PRT<213>天然序列<400>36LeuLysMetTyrHisAlaHisArgSer15<210>37<211>9<212>PRT<213>天然序列<400>37PheSerAsnIleGlnArgCysSerCys15<210>38<211>9<212>PRT<213>天然序列<400>38TyrArgGlyLysAlaAsnThrAsnThr15<210>39<211>9<212>PRT<213>天然序列<400>39TrpCysTyrValGlnValGlyLeuLys15<210>40<211>9<212>PRT<213>天然序列<400>40TrpAsnSerAlaThrValLeuLeuAsn15<210>41<211>9<212>PRT<213>天然序列<400>41ValGlyLeuLysGlnLeuValGlnGlu15<210>42<211>9<212>PRT<213>天然序列<400>42TyrPheSerAsnIleGlnArgCysSer15<210>43<211>9<212>PRT<213>天然序列<400>43TyrValGlnValGlyLeuLysGlnLeu15<210>44<211>9<212>PRT<213>天然序列<400>44TyrLysTyrPheSerAsnIleGlnArg15<210>45<211>9<212>PRT<213>天然序列<400>45ValTyrIleArgGlnTyrTyrLysLeu15<210>46<211>9<212>PRT<213>天然序列<400>46ValIleArgTrpGlyAspTyrHisAla15<210>47<211>9<212>PRT<213>天然序列<400>47TyrTyrLysLeuSerHisLysHisArg15<210>48<211>9<212>PRT<213>天然序列<400>48TyrHisAlaAspLeuLysAsnAlaLeu15<210>49<211>9<212>PRT<213>天然序列<400>49TrpCysTyrThrLysArgArgTyrSer15<210>50<211>9<212>PRT<213>天然序列<400>50PhePheSerGlnIleLysArgCysLeu15<210>51<211>9<212>PRT<213>天然序列<400>51LeuYyrTrpAspHisProSerValIle15<210>52<211>9<212>PRT<213>天然序列<400>52TyrArgPhePheSerGlnIleLysArg15<210>53<211>9<212>PRT<213>天然序列<400>53TyrSerIleGlnGluThrProCysSer15<210>54<211>9<212>PRT<213>天然序列<400>54IleArgGlnTyrTyrLysLeuSerHis15<210>55<211>9<212>PRT<213>天然序列<400>55TyrLysTyrPheSerAsnIleTrpArg1權(quán)利要求1.一種阻斷uPA與uPAR相互作用的化合物，其特征在于該化合物包括ATF、ATF片斷、uPAR片斷、抗ATF的抗體、或者抗uPAR的抗體；其中ATF是uPA的ATF。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物，其特征在于ATF是氨基酸序列為SEQIDNO1的多肽，或者是氨基酸序列與SEQIDNO1至少有70％同源性的多肽，較好的是至少有80％同源性的多肽，更好的是至少有95％同源性的多肽，尤其是至少有98％同源性的多肽，最好是至少有99％同源性的多肽；且該多肽具有抗動(dòng)脈粥樣硬化活力。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物，其特征在于該化合物是人ATF與其受體的結(jié)合區(qū)域被其它物種的ATF與其受體結(jié)合區(qū)域所替代的嵌合型的人ATF。4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的化合物，其特征在于其他物種為哺乳動(dòng)物或非哺乳動(dòng)物；其中哺乳動(dòng)物優(yōu)選狒狒、小鼠、大鼠、兔、?；蜇i；非哺乳動(dòng)物優(yōu)選雞。5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物，其特征在于ATF以及ATF片斷中含有SEQIDNO.3～55中任一序列的氨基酸殘基。6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物，其特征在于抗ATF的抗體的氨基酸序列包含SEQIDNO2中任一片段的多肽，該片段包括至少一個(gè)ATF結(jié)合位點(diǎn)。7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的化合物，其特征在于該片段至少由8個(gè)氨基酸組成；優(yōu)選該片段至少由15個(gè)氨基酸組成。8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的化合物，其特征在于ATF結(jié)合位點(diǎn)相當(dāng)于SEQIDNO2的下列結(jié)合位點(diǎn)中的一個(gè)或多個(gè)T8，R25，V29，L31，L40，R53，L55，Y57，L66，E68，R137，K139，R142，H143，R145，H166，H251，L252，D254，或A255。9.權(quán)利要求1所述的化合物與能延長(zhǎng)其在病人身體中半衰期的物質(zhì)偶聯(lián)或融合；通常采用該化合物與聚乙二醇(PEG)共價(jià)連接；或者該化合物與鑰孔蟲(chóng)戚血藍(lán)素(KLH)共價(jià)連接；或者該化合物與白蛋白單獨(dú)混合使用；或者該化合物與PEG及白蛋白混合使用，或者該化合物與KLH及白蛋白混合使用。10.表達(dá)權(quán)利要求1所述化合物的核苷酸序列。11.一種藥物組合物，其特征在于含有治療有效量的權(quán)利要求1所述的化合物及藥學(xué)上允許的輔料。12.權(quán)利要求1～10所述的任一化合物在制備治療動(dòng)脈粥樣硬化藥物中的應(yīng)用。全文摘要本發(fā)明公開(kāi)了一種阻斷uPA與uPAR相互作用的化合物及其應(yīng)用。該化合物包括ATF、ATF片斷、uPAR片斷、抗ATF的抗體、或者抗uPAR的抗體；其中ATF是uPA的ATF。該化合物可阻斷uPA與uPAR的相互作用，可用于制備預(yù)防或治療動(dòng)脈粥樣硬化藥物。文檔編號(hào)A61P9/10GK101050237SQ20071002043公開(kāi)日2007年10月10日申請(qǐng)日期2007年2月26日優(yōu)先權(quán)日2007年2月26日發(fā)明者劉建寧申請(qǐng)人:劉建寧