專利名稱：：蟾皮總堿及其制備和分析方法以及其制劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種蟾皮總堿，該提取物的制備方法、所述蟾皮總堿加入藥用輔料后制成的治療慢性乙型肝炎和抗腫瘤的各種中藥制劑、同時(shí)涉及蟾皮總堿及其制劑中蟾蜍噻寧的含量測(cè)定方法。
背景技術(shù)：
：蟾皮為蟾蜍科動(dòng)物中華大蟾蜍BufobufogargarizansCantor或黑眶蟾蜍BufomelanostictusSchneider的干燥全皮。蟾皮的化學(xué)成分主要有華蟾酥毒基，脂蟾毒配基，蟾毒靈等，以及由它們與琥珀酸，丁二酸，精氨酸等形成的酯類，如蟾毒靈-3-丁二酰精氨酸酯，蟾毒它靈-3-丁二酰精氨酸酯，華蟾毒精-3-丁二酰精氨酸酯，脂蟾毒配基-3-丁二酰精氨酸酯等。還含有吲哚類生物堿，如5-羥色胺，蟾蜍色胺，蟾蜍季胺，蟾蜍噻寧和脫氫蟾蜍色胺等，另外尚含氨基酸、多肽及甾醇類化合物。蟾皮具有清熱解毒，利水清脹功效，用于治療癰疽、腫毒、瘰疬、腫瘤，疳積腹脹，慢性氣管炎等。目前，蟾皮提取物制劑主要有華蟾素注射液、華蟾素片劑、華蟾素口服液等，，其中華蟾素注射液更是一種傳統(tǒng)的生物藥制劑、廣泛用于臨床，具有解毒、消腫、止痛的功效，臨床上主要用于治療中晚期腫瘤、慢性乙型肝炎，還用于治療頑固性呃逆、扁平疣及銀屑病等癥。目前相關(guān)的報(bào)導(dǎo)有“一種華蟾素膠囊及其制備方法”(專利申請(qǐng)?zhí)?8103562)其蟾皮提取工藝為水提醇沉法，工藝簡(jiǎn)單，雜質(zhì)較多，有效成分含量低?！耙环N納米華蟾素制劑藥物及其制備方法”(專利申請(qǐng)?zhí)?0136668)該法雖用微波萃取，但未經(jīng)分離，仍然雜質(zhì)較多，有效成分含量低。同時(shí)該方法對(duì)于工藝設(shè)備要求嚴(yán)格，目前難以實(shí)施。還有一種“華蟾素凍干粉針劑及其制備方法”(專利申請(qǐng)?zhí)?00410083994.4)，工藝中蟾皮雖經(jīng)乙醇提取，大孔吸附樹(shù)脂純化，其出膏率仍比較高，1.20％～1.38％(w/w)，所含雜質(zhì)量仍比較多，“一種新的華蟾素凍干粉針及其制備方法和質(zhì)量控制方法”(專利申請(qǐng)?zhí)?00510061288.4)，其中蟾皮提取物為水提醇沉法，出膏率大，雜質(zhì)含量多，有效成分含量低。“一種華蟾素凍干粉針的制備方法”(專利申請(qǐng)?zhí)?00510115451.0)，其中蟾皮提取物仍為水提醇沉法，有效成分提取不完全，出膏率大，雜質(zhì)含量多，有效成分含量低。作為目前市場(chǎng)上蟾皮的主要產(chǎn)品，華蟾素注射液，其蟾皮提取物為水提醇沉，出膏率大，雜質(zhì)含量高，其中吲哚類總生物堿含量?jī)H為7.0％～10.0％，華蟾酥毒基和脂蟾毒配基總量?jī)H為0.001％～0.005％。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明是為避免上述現(xiàn)有技術(shù)所存在的不足之處，旨在提供一種蟾皮總堿制備方法、蟾皮總堿藥物制劑及含量測(cè)定方法。所要解決的技術(shù)問(wèn)題是在保證藥效的前提下，盡可能提高蟾皮總堿中吲哚類總生物堿含量，并使其中的一種生物堿含量較高。本發(fā)明所稱的蟾皮總堿，是自干蟾皮中提取得到的提取物，其特征是所述提取物中吲哚類總生物堿的含量為50％～95％，生物堿有效成分之一的蟾蜍噻寧含量為20％～50％。本發(fā)明蟾皮總堿中藥制劑，其特征是以所述蟾皮總堿為有效成分，加入藥用輔料后制成的注射劑或輸液劑或粉針劑或滴丸或膠囊劑或片劑或軟膠囊或顆粒劑或口服液等。本發(fā)明蟾皮總堿的制備方法，以干蟾皮為原料，包括浸泡、提取、分離、純化，與現(xiàn)有技術(shù)的區(qū)別在于首先將洗凈的蟾皮用80～90％體積比的甲醇或乙醇或丙酮浸泡2～3小時(shí)，然后回流提取至少一次，分離得到濾液或合并的濾液；將濾液減壓脫溶至無(wú)溶劑味，加入1～3倍量的水?dāng)嚢枞芙?，靜置、分離，得到水溶液；水溶液上大孔吸附樹(shù)脂柱，先水洗脫，后用50％～60％乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，減壓濃縮得到浸膏；將浸膏與柱用氧化鋁粉混合均勻后干燥得到粉末；將粉末上中性或堿性氧化鋁柱，用不同配比的混合有機(jī)溶劑分段洗脫并分段收集；將前段和中段洗脫液合并，經(jīng)脫溶、干燥后得到吲哚總生物堿含量80％～95％、其中蟾蜍噻寧含量≥35％的蟾皮總堿，將前、中、后三段洗脫液合并，經(jīng)脫溶干燥后得到吲哚總生物堿含量50％～80％、其中蟾蜍噻寧含量≥25％的蟾皮總堿；所述的混合有機(jī)溶劑為氯仿-甲醇，體積比為10∶1～1∶10，或者氯仿-乙酸乙酯-甲醇，體積比為7∶3∶1～1∶3∶7，或者乙酸乙酯-甲醇，體積比為15∶1～1∶10。所述的大孔吸附樹(shù)脂為聚苯乙烯型或交聯(lián)丙烯樹(shù)脂類的中極性或極性大孔吸附樹(shù)脂，包括HPD-400或HPD-600或DM301，粒度為0.3mm～1.25mm。具體操作步驟如下a、取干蟾皮，洗凈，加6～7倍量85％(v/v)甲醇或乙醇或丙酮，浸泡2小時(shí)，回流提取1小時(shí)，冷卻，過(guò)濾，殘?jiān)?～6倍85％(v/v)甲醇或乙醇或丙酮回流提取50分鐘，冷卻，過(guò)濾，合并濾液；b、步驟a所得濾液經(jīng)減壓濃縮至無(wú)溶劑味，加入相當(dāng)于藥材量1-2倍量的水溶解，靜置24小時(shí)后過(guò)濾，c、步驟b所得濾液上大孔吸附樹(shù)脂柱，采用中極性或極性大孔吸附樹(shù)脂，先用2～4倍柱體積水洗脫，再用3～5倍柱體積50％～65％乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，減壓濃縮，至60℃時(shí)比重為1.10～1.25的浸膏。d、步驟c所得浸膏加入10～30倍量中性或堿性氧化鋁(100～200目)，拌勻，60℃以下干燥，加入填充好的中性或堿性氧化鋁(100～200目)柱上，用氯仿-甲醇(10∶1～1∶10)或氯仿-乙酸乙酯-甲醇(7∶3∶1～1∶3∶7)或乙酸乙酯-甲醇(15∶1～1∶10)洗脫，分段收集，分別得到前段洗脫液、中段洗脫液和后段洗脫液。將所述前段洗脫液和中段洗脫液合并濃縮后，在低于60℃條件下真空干燥，得吲哚類總生物堿含量達(dá)80％～95％(重量百分比，下同)的蟾皮總堿，其中蟾蜍噻寧的含量≥35％。將所述前段洗脫液、中段洗脫液和后段洗脫液合并濃縮后，得吲哚類總生物堿含量達(dá)50％～80％的蟾皮總堿，其中蟾蜍噻寧含量≥25％。分析表明，在上述得到的提取物中，除吲哚類總生物堿外還含有華蟾酥毒基和脂蟾毒配基，總含量為0.06～0.08％。吲哚類總生物堿的含量測(cè)定按照華蟾素注射液部頒標(biāo)準(zhǔn)(WS3-B-3045)進(jìn)行。以5-羥色胺為對(duì)照品，對(duì)二甲氨基苯甲醛為顯色劑，用紫外分光光度法進(jìn)行測(cè)定。華蟾酥毒基和脂蟾毒配基的含量按照中國(guó)藥典2005年版一部蟾酥項(xiàng)下，以華蟾酥毒基和脂蟾毒配基為對(duì)照品，用高效液相色譜法進(jìn)行測(cè)定。為有效控制中藥制劑中蟾蜍噻寧的含量，申請(qǐng)人建立了反相高效液相色譜法，使用C8或C18色譜柱為固定相，以乙腈—水體積比90∶10～10∶90，或甲醇—水體積比50∶50～10∶90，為流動(dòng)相，并以磷酸二氫鈉或磷酸二氫鉀及磷酸調(diào)至pH2～4，檢測(cè)波長(zhǎng)225nm或293nm，對(duì)照品為蟾蜍噻寧，測(cè)定蟾皮總堿及其制劑中蟾蜍噻寧的含量。本發(fā)明的有益效果體現(xiàn)在1、本發(fā)明蟾皮總堿采用85％甲醇或乙醇或丙酮為溶劑提取，經(jīng)大孔吸附樹(shù)脂初步分離后，采用中性或堿性氧化鋁柱色譜分離，使吲哚類總生物堿含量達(dá)到50％～95％。其中蟾蜍噻寧含量20～50％，提高了蟾皮總堿及其制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。2、本發(fā)明在使用反相高效液相色譜法測(cè)定了蟾皮總堿及其不同制劑中指標(biāo)性有效成分蟾蜍噻寧的含量，為蟾皮總堿及其制劑的質(zhì)量制定提供了可靠、實(shí)用的測(cè)定方法。3、本發(fā)明可以滿足腫瘤和乙肝患者對(duì)不同劑型的需求。以下藥理實(shí)驗(yàn)結(jié)果闡明其藥效作用1、抗乙型肝炎病毒實(shí)驗(yàn)研究1日齡雄性麻鴨，體重45g±5g；鴨乙型肝炎病毒DHBV-DNA強(qiáng)陽(yáng)性血清，采自上海麻鴨，-70℃保存。取1日齡麻鴨，經(jīng)腿脛靜脈注射上海麻鴨DHBV-DNA陽(yáng)性血清，每只0.2ml。DHBV感染第13天，將雛鴨隨機(jī)分成3組對(duì)照組、華蟾素注射液組、蟾皮總堿組，每組10只。每日自麻鴨腿脛按2ml/kg體重靜脈注射給藥，每日1次，連續(xù)10天，陽(yáng)性對(duì)照組給與等量生理鹽水。以上各組分別在給藥前(即感染第13天)、給藥后第5天、給藥后第10天、停藥后第2天自鴨腿靜脈采血，分離血清，-70℃保存?zhèn)溆?。取上述血清點(diǎn)于NC膜，按缺口翻譯試劑盒說(shuō)明書(shū)操作，用32P標(biāo)記DHBV-DNA探針，作鴨血清斑點(diǎn)雜交，放射自顯影膜片斑點(diǎn)，在酶標(biāo)儀上測(cè)定D值(濾光片波長(zhǎng)為490nm)，計(jì)算血清DHBV-DNA光密度。結(jié)果如下表1蟾皮總堿在鴨體內(nèi)對(duì)DHBV-DNA的抑制作用()<tablesid="table1"num="001"><tablewidth="754">組別劑量D(490nm)給藥前給藥5天給藥10天停藥3天對(duì)照組華蟾素注射液組蟾皮總堿組1.32±0.371.37±0.351.36±0.291.21±0.311.19±0.291.13±0.410.93±0.410.70±0.27*Δ0.59±0.24*Δ0.89±0.340.54±0.20*Δ0.43±0.13**Δ</table></tables>與自身給藥前比較*P＜0.05，**P＜0.01；與對(duì)照組相比ΔP＜0.05。2、對(duì)小鼠移植性腫瘤S180的生長(zhǎng)抑制作用選取接種S180瘤細(xì)胞后7天的小鼠，脫頸處死，無(wú)菌抽取腹水，用生理鹽水調(diào)細(xì)胞濃度至1×107個(gè)/mL。以每只小鼠0.2mL接種于小鼠有腋下皮下，制備荷瘤小鼠模型。將荷瘤小鼠隨機(jī)分成3組對(duì)照組、華蟾素注射液組、蟾皮總堿組，每組8只。每日小鼠尾靜脈注射給藥一次，按0.2ml/只給藥，每日1次，連續(xù)10天，陽(yáng)性對(duì)照組給與等量生理鹽水。于第11日處死小鼠，小心剝離瘤塊，稱瘤重，計(jì)算抑瘤率。結(jié)果見(jiàn)表2。表2蟾皮總堿對(duì)S180荷瘤小鼠瘤重的影響()<tablesid="table2"num="002"><tablewidth="568">組別平均瘤重抑瘤率(％)對(duì)照組華蟾素注射液組蟾皮總堿組2.23±0.571.14±0.33**0.89±0.27**---48.960.1</table></tables>與對(duì)照組比較*P＜0.05，**P＜0.01。四圖1蟾蜍噻寧13C-NMR圖譜。圖2蟾蜍噻寧1H-NMR圖譜。圖3蟾蜍噻寧對(duì)照品HPLC圖譜。圖4蟾蜍總堿HPLC圖譜。五具體實(shí)施例方式對(duì)于蟾皮總堿的制備，具體操作過(guò)程如下1、取干蟾皮，洗凈，加6～7倍量85％甲醇或乙醇或丙酮浸泡2小時(shí)，回流提取60分鐘，放冷，過(guò)濾，殘?jiān)?～6倍量85％甲醇或乙醇或丙酮回流提取50分鐘，放冷，過(guò)濾，合并濾液。2、濾液減壓濃縮至無(wú)溶劑味。加入相當(dāng)于藥材量1～3倍量水溶解，放置24小時(shí)，過(guò)濾。3、濾液上大孔樹(shù)吸附樹(shù)脂柱，先用2～4倍柱體積水洗脫，再用3～5倍柱體積50％～60％乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液減壓濃縮至60℃時(shí)比重1.10～1.25的浸膏。4、步驟3所得浸膏加入10～30倍量中極性或堿性氧化鋁(100～200目)，拌勻，60℃以下干燥，加入填充好的中性或堿性氧化鋁(100～200目)柱上，用氯仿-甲醇(10∶1～1∶10)或氯仿-乙酸乙酯-甲醇(7∶3∶1～1∶3∶7)或乙酸乙酯-甲醇(15∶1～1∶10)洗脫，分段收集，分別得到前段洗脫液、中段洗脫液和后段洗脫液。將所述前段洗脫液和中段洗脫液合并濃縮后，在低于60℃條件下真空干燥，得吲哚類總生物堿含量達(dá)80％～95％的蟾皮提取物。將所述前段洗脫液、中段洗脫液和后段洗脫液合并濃縮后，在低于60℃條件下真空干燥，得吲哚類總生物堿含量達(dá)50％～80％的蟾皮總堿。實(shí)施例1取干蟾皮1kg，洗凈，加6倍量85％乙醇浸泡2小時(shí)，回流提取60分鐘，放冷，過(guò)濾，殘?jiān)?倍量85％乙醇回流提取50分鐘，放冷過(guò)濾，合并濾液。濾液減壓濃縮至無(wú)醇味，加入相當(dāng)于藥材2倍量水溶解，放置24小時(shí)，過(guò)濾。濾液加于HPD-400型大孔吸附樹(shù)脂柱，先用3倍柱體積水洗脫，再用4倍柱體積50％乙醇洗脫，收集50％乙醇洗脫液，減壓濃縮至60℃時(shí)比重1.15的浸膏。加入10倍量色譜用中性氧化鋁，拌勻，60℃以下干燥，加于填充好的色譜用中性氧化鋁柱上，用氯仿—甲醇(6∶1)洗脫收集8個(gè)柱體積，再用氯仿—甲醇(2∶1)洗脫，收集6個(gè)柱體積，氯仿—甲醇(1∶3)洗脫，收集5個(gè)柱體積，將氯仿—甲醇(6∶1)、(2∶1)洗脫液合并，濃縮，于60℃以下真空干燥，得蟾皮總堿A。將氯仿—甲醇(6∶1)、(2∶1)、(1∶3)洗脫液合并，濃縮，于60℃以下真空干燥，得蟾皮總堿B。蟾皮總堿A收得率為0.12％。A中吲哚類總生物堿的含量為92.7％。其中蟾蜍噻寧含量為46.3％。蟾皮總堿B收得率為0.21％，B中吲哚類總生物堿的含量為71.3％，其中蟾蜍噻寧含量為35.5％。實(shí)施例2取干蟾皮1kg，洗凈，加7倍量85％甲醇浸泡2小時(shí)，回流提取60分鐘，放冷，過(guò)濾，殘?jiān)?倍量85％甲醇回流提取50分鐘，放冷，過(guò)濾，合并濾液。濾液減壓濃縮至無(wú)醇味，加入相當(dāng)于藥材1.5倍量水，溶解，放置24小時(shí)，過(guò)濾。濾液加于HPD-600型大孔吸附樹(shù)脂柱，先用2.5倍柱體積水洗脫，再用3.5倍柱體積55％乙醇洗脫，收集55％乙醇洗脫液，減壓濃縮至60℃時(shí)比重為1.20的浸膏，加入15倍量色譜用堿性氧化鋁，拌勻，60℃以下干燥，加于填充好的色譜用堿性氧化鋁柱上，用氯仿—乙酸乙酯—甲醇(3∶1∶1)洗脫，收集7個(gè)柱體積，再用氯仿—乙酸乙酯—甲醇(1∶0.5∶1.5)洗脫，收集5個(gè)柱體積，改用氯仿—乙酸乙酯—甲醇(0.5∶0.5∶3)洗脫，收集6個(gè)柱體積。將氯仿—乙酸乙酯—甲醇(3∶1∶1)、(1∶0.5∶1.5)洗脫液合并，濃縮，于60℃以下真空干燥，得蟾皮總堿A。將氯仿—乙酸乙酯—甲醇(3∶1∶1)、(1∶0.5∶1.5)、(0.5∶0.5∶3)洗脫液合并，濃縮，于60℃以下真空干燥，得蟾皮總堿B。蟾皮總堿A收得率為0.11％，A中吲哚類總生物堿含量為95.1％，其中蟾蜍噻寧含量為37.8％。蟾皮總堿B收得率為0.23％，B中吲哚類總生物堿含量為66.5％，其中蟾蜍噻寧含量為26.7％。實(shí)施例3取干蟾皮1kg，洗凈，加6倍量85％丙酮浸泡2小時(shí)，回流提取60分鐘，放冷過(guò)濾，殘?jiān)?倍量85％丙酮回流提取50分鐘，放冷過(guò)濾，合并濾液。濾液減壓濃縮至無(wú)丙酮味，加入相當(dāng)于藥材2.5倍量水溶解，放置24小時(shí)，過(guò)濾。濾液加于DM-301大孔吸附樹(shù)脂柱，先用2.5倍柱體積水洗脫，再用3倍柱體積60％乙醇洗脫，收集60％乙醇洗脫液，減壓濃縮至60℃時(shí)比重為1.25的浸膏。加入18倍量色譜用堿性氧化鋁，拌勻，60℃以下干燥，加于填充好的色譜用堿性氧化鋁柱上，用乙酸乙酯—甲醇(7∶1)洗脫，收集6個(gè)柱體積，改用乙酸乙酯—甲醇(1∶1)洗脫，收集5個(gè)柱體積。再用乙酸乙酯—甲醇(0.5∶2.5)洗脫，收集6個(gè)柱體積。將乙酸乙酯—甲醇(7∶1)、(1∶1)洗脫液合并，濃縮，于60℃以下真空干燥，得蟾皮總堿A。將乙酸乙酯—甲醇(7∶1)、(1∶1)、(0.5∶2.5)洗脫液合并，濃縮，于60℃以下真空干燥，得蟾皮總堿B。蟾皮總堿A收得率為0.15％，A中吲哚類總生物堿含量為90.5％，其中蟾蜍噻寧含量為47.7％。蟾皮總堿B收得率為0.25％，B中吲哚類總生物堿含量為64.8％，其中蟾蜍噻寧含量為28.4％。實(shí)施例4蟾皮總堿注射液組成蟾皮總堿A1.0～5.0g氯化鈉9g注射用水1000ml制備過(guò)程取上述蟾皮總堿A及藥用輔料，加新煮沸過(guò)的注射用水溶解，并稀釋至規(guī)定體積，調(diào)節(jié)pH5.0～8.0，用3號(hào)垂熔玻璃漏斗過(guò)濾，灌封，每安瓿裝2ml，滅菌，即得。實(shí)施例5蟾皮總堿輸液組成蟾皮總堿A1.0～5.0g氯化鈉45g注射用水5000ml制備過(guò)程取上述蟾皮總堿A及藥用輔料，加新煮沸過(guò)的注射用水溶解，并稀釋至規(guī)定體積，調(diào)節(jié)pH5.0～8.0，用0.20～0.80μm微孔濾膜過(guò)濾，灌裝，每瓶裝100ml，滅菌，即得。實(shí)施例6蟾皮總堿凍干粉針組成蟾皮總堿A1.0～5.0g甘露醇100～200g泊絡(luò)沙姆2～8g制備過(guò)程取上述蟾皮總堿A及藥用輔料，加新煮沸過(guò)的注射用水溶解，并稀釋至2000ml，調(diào)節(jié)pH5.0～8.0，用0.20～0.80μm微孔濾膜過(guò)濾，灌裝500個(gè)西林瓶中，冷凍干燥，即得。實(shí)施例7蟾皮總堿片組成蟾皮總堿1.0～5.0g糊精90g微晶纖維素105g低取代羥丙甲纖維素15g70％的乙醇溶液15ml硬脂酸鎂1g制備過(guò)程蟾皮總堿、糊精、硬脂酸鎂、低取代羥丙甲纖維素分別粉碎過(guò)80目篩；將蟾皮總堿與糊精、2/3量的低取代羥丙甲纖維素及70％的乙醇溶液混合研磨，使均勻，制軟材；再20目篩制顆粒，干燥，整粒后加入剩余的低取代羥丙甲纖維素，混勻，再加入硬脂酸鎂混勻，壓1000片；檢驗(yàn)合格后包裝。實(shí)施例8蟾皮總堿滴丸組成蟾皮總堿1.0～5.0gPEG400015～25gPEG600015～25g制備過(guò)程將PEG4000、PEG6000加熱，再將熔融蟾皮總堿加入其中，充分?jǐn)嚢?，使藥物充分分散于介質(zhì)中；將上述藥液轉(zhuǎn)移至滴丸機(jī)上，70℃～80℃密閉保溫10～20分鐘，用無(wú)水甲基硅油作冷卻劑，10℃～20℃梯度冷卻，用30～60滴/分速度進(jìn)行滴制，即得成型丸粒。再收集滴丸，用無(wú)水石油醚洗滌2次，晾干，包裝即可。實(shí)施例9蟾皮總堿軟膠囊組成蟾皮總堿1.0～5.0g蜂臘10g食用植物油150g明膠10g甘油3g水13g制備過(guò)程稱取蟾皮總堿與經(jīng)過(guò)加熱滅菌、澄清的食用植物油及蜂臘熔融物混合，充分?jǐn)噭蚣吹媚倚奈铩Ｈ∶髂z加入適量水使其膨脹；另將甘油及余下的水置煮膠鍋中加熱至70℃～80℃，混合均勻，加入膨脹的明膠攪拌，熔化，保溫1～2小時(shí)，靜置，使泡沫上浮，出去上浮的泡沫，用潔凈白布濾過(guò)，保溫待用。將已制好的明膠液，置明膠液貯槽中控制溫度在60℃左右，將蟾皮總堿放入藥液貯槽內(nèi)；液體石臘溫度以10℃～25℃為宜，室溫10℃～20℃，滴頭溫度30℃～60℃，開(kāi)始滴丸。滴出的膠丸先均勻地?cái)傆诩喚W(wǎng)上，在10℃以下低溫吹風(fēng)4小時(shí)以上，再用擦丸機(jī)擦去表面的石臘，然后再低溫(10℃以下)吹風(fēng)20小時(shí)以上，于40℃～50℃干燥約24小時(shí)。取出干燥的膠丸，燈檢，除去廢丸后，用95％乙醇洗滌，再在40℃～50℃以下吹干，經(jīng)質(zhì)量檢查合格后，即可包裝。實(shí)施例10蟾皮總堿膠囊組成蟾皮總堿1.0～5.0g淀粉50g糊精50g15％PVP乙醇溶液適量制備過(guò)程將淀粉、蟾皮總堿混勻，過(guò)80目篩，加入適量的70％乙醇，制軟材，再用20目篩制顆粒，干燥，整粒，裝膠囊，共制成1000粒，每粒含蟾皮總堿5～100mg即可。實(shí)施例11蟾皮總堿顆粒劑組成蟾皮總堿1.0～5.0g糊精50～100g糖粉10g50％乙醇(體積分?jǐn)?shù))適量制備過(guò)程將蟾皮總堿、糊精、糖粉分別過(guò)100目篩，按等體積遞增混研法將蟾皮總堿與輔料混勻，再將酒石酸溶于50％乙醇(體積分?jǐn)?shù))中，一次加入上述混合物中，混勻，制軟材，過(guò)16目尼龍篩，60℃以下干燥，整粒后用塑料袋包裝，每袋2g，含蟾皮總堿50～500mg。實(shí)施例12蟾皮總堿口服液組成蟾皮總堿1.0～5.0g煉蜜30g山梨酸5g香精1ml水適量制備過(guò)程將蟾皮總堿溶于水中，加入煉蜜、山梨酸、香精混勻，制成1000ml，封裝，即得。以上實(shí)施例僅為了對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說(shuō)明，而本發(fā)明范圍不受所舉實(shí)施例的局限。權(quán)利要求1.一種蟾皮總堿，是自干蟾皮中提取得到的提取物，其特征在于所述提取物中吲哚類總生物堿的含量為50％～95％，其中，蟾蜍噻寧含量為20％～50％。2.由權(quán)利要求1所述的蟾皮總堿的制備方法，以干蟾皮為原料，包括浸泡、提取、分離、純化，其特征在于將洗凈的蟾皮先用80％～90％體積比的甲醇或乙醇或丙酮浸泡2～3小時(shí)，然后回流提取至少一次，分離得到濾液或合并的濾液；將濾液減壓脫溶至無(wú)溶劑味，加入1～3倍量的水?dāng)嚢枞芙狻㈧o置、分離，得到水溶液；水溶液上大孔吸附樹(shù)脂柱，先用水洗脫，后用50％～60％乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，減壓濃縮得到浸膏；將浸膏與10～30倍量的柱用氧化鋁粉混合均勻后干燥得到粉末；粉末上中性或堿性氧化鋁柱，用不同配比的混合有機(jī)溶劑分段洗脫并分段收集；將前段和中段洗脫液合并，經(jīng)脫溶、干燥后得到吲哚類總生物堿含80％～95％、其中蟾蜍噻寧含量≥35％的蟾皮總堿，將前、中、后三段洗脫液合并，經(jīng)脫溶、干燥后得到吲哚類總生物堿含量50％～80％、其中蟾蜍噻寧含量≥25％的蟾皮總堿；所述的混合溶劑為氯仿-甲醇，體積比為10∶1～1∶10，或者氯仿-乙酸乙酯-甲醇，體積比為7∶3∶1～1∶3∶7，或者乙酸乙酯-甲醇，體積比為15∶1～1∶10。3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的蟾皮總堿的制備方法，其特征在于所述的大孔吸附樹(shù)脂為中極性或極性聚苯乙烯型或交聯(lián)丙烯樹(shù)脂類大孔吸附樹(shù)脂，包括HPD-400或DM301或HDP-600。4.由權(quán)利要求1所述蟾皮總堿中蟾蜍噻寧的分析方法是反相液相色譜法，其特征在于固定相為C8或C18柱，流動(dòng)相為pH2～4的乙腈-水、體積比為90∶10～10∶90，或者pH2～4的甲醇-水、體積比為50∶50～10∶90，檢測(cè)波長(zhǎng)225nm或293nm。5.由權(quán)利要求1所述蟾皮總堿的中藥制劑，其特征在于所述中藥制劑是以所述蟾皮總堿為藥物有效成分，加入藥用輔料后制成的注射劑或輸液劑或粉針劑或滴丸或膠囊劑或片劑或軟膠囊或顆粒劑或口服液。全文摘要本發(fā)明提供了一種蟾皮總堿的制備方法，蟾皮總堿中吲哚類總生物堿含量為50％～95％，華蟾酥毒基和脂蟾毒配基總量為0.02％～0.08％，蟾蜍噻寧含量為20％～50％。同時(shí)提供了所述蟾皮總堿中有效成份蟾蜍噻寧的含量測(cè)定方法，還提供了所述蟾皮總堿作為有效成分，加入藥用輔料后制成的注射劑、輸液劑、粉針劑、滴丸、膠囊劑、片劑、軟膠囊、顆粒劑、口服液等及其制備方法。文檔編號(hào)A61K9/14GK101019891SQ200710020339公開(kāi)日2007年8月22日申請(qǐng)日期2007年2月14日優(yōu)先權(quán)日2007年2月14日發(fā)明者周亞球,劉金旗申請(qǐng)人:周亞球,劉金旗