專利名稱：：一種通過氫解反應(yīng)生產(chǎn)多肽混合物的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種生產(chǎn)多肽混合物的方法，具體涉及一種通過氫解反應(yīng)生產(chǎn)多肽混合物的方法。
背景技術(shù)：
：醋酸格拉替雷(Glatiraineracetate,GA)是一種被批準(zhǔn)用于治療多發(fā)性硬化癥(multiplesclerosis,MS)的多肽混合物。C0PAX0NE⑧是含有醋酸格拉替雷為活性成分的藥物組合物的商品名，它含有合成多肽的醋酸鹽，這些合成多肽醋酸鹽含有4種天然氨基酸:L-谷氨酸、L一丙氨酸、L—酪氨酸和L一賴氨酸，它們各自的摩爾數(shù)為0.141，0.427，0.095和0.338。醋酸格拉替雷的平均分子量范圍是4700-11000道爾頓?；瘜W(xué)上，醋酸格拉替雷是含有L一丙氨酸、L一酪氨酸、L一賴氨酸的L-谷氨酸聚合物醋酸鹽，它的結(jié)構(gòu)式如下(Glu，Ala，Lys,Tyr)xCH3C00H(C5H9N(VC3H7N02'C6H14N202GHuNCQx'XC2H4O2CAS—147245-92-9("Copaxone",Physician'sDeskReference,(2000)，MedicalEconomicsCo.，Inc.，(Montvale，NJ)，3115.)制備包括醋酸格拉替雷在內(nèi)的這類多肽的方法已在美國專利(No.3，849,550，1974.11.19頒予Teitelbaum等)、美國專利(No.5，800，808，1998,9.1頒予Konfino等)和PCT申請(WO00/05250，2000.2.3，Aharoni等)中公開。這些文獻(xiàn)以引用的方式并入本申請中。例如，這類多肽酪氨酸、丙氨酸、谷氨酸Y-芐酯和e-N-三氟乙酰賴氨酸的N-羧酸酐制成。聚合反應(yīng)在室溫、含二乙胺作為引發(fā)劑的無水二氧雜環(huán)已垸溶劑中進(jìn)行。谷氨酸的Y-羧基用溴化氫的冰醋酸溶液脫保護(hù)，然后用1M哌啶脫除賴氨酸殘基的三氟乙?；?美國專利No.3,849，550，1974.11.19頒予Teitelba腿等)。谷氨酸的Y-羧基脫保護(hù)需要耗費(fèi)大量的溴化氫/冰醋酸，從而產(chǎn)生了大量酸性廢物。這些酸性廢物的處理困難而且成本高。為了解決酸性廢物的問題，急需開發(fā)出生產(chǎn)這些多肽的替代制備方法。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明提供了一種制備多肽醋酸鹽混合物的方法，、每種多肽均由谷氨酸、丙氨酸、酪氨酸和賴氨酸組成，其中，該混合物具有目的峰分子量，包含下列步驟a)用0.01重量％—20重量％的引發(fā)劑，在合適溫度下，使酪氨酸、丙氨酸、谷氨酸Y-芐酯和三氟乙酰賴氨酸的N-羧酸酐聚合適當(dāng)?shù)臅r(shí)間，生成受保護(hù)的多肽混合物，該多肽混合物的無保護(hù)形式具有第一峰分子量；b)通過使受保護(hù)的多肽混合物與氫解催化劑、氫氣接觸，，脫去受保護(hù)多肽混合物上的芐基保護(hù)基，生成三氟乙酰保護(hù)的多肽混合物，該多肽混合物的無保護(hù)形式具有第一峰分子量；c)通過使三氟乙酰保護(hù)的多肽混合物與有機(jī)堿溶液反應(yīng)，脫去三氟乙酰保護(hù)的多肽混合物上的三氟乙酰保護(hù)基團(tuán)，生成多肽混合物，該多肽混合物的無保護(hù)形式具有第一峰分子量；d)通過超濾作用，除去游離的三氟乙酰基和低分子量雜質(zhì)，獲得多肽混合物，每種多肽均由谷氨酸、丙氨酸、酪氨酸和賴氨酸組成；e)將每種多肽均由谷氨酸、丙氨酸、酪氨酸和賴氨酸組成的多肽混合物和醋酸水溶液混合，生成各由谷氨酸、丙氨酸、酪氨酸和賴氨酸組成的多肽醋酸鹽的混合物，該混合物具有目的峰分子量。本發(fā)明還提供了一種制備三氟乙酰基保護(hù)的多肽混合物的方法，每種多肽均由谷氨酸、丙氨酸、酪氨酸和三氟乙酰賴氨酸組成，其多肽混合物的無保護(hù)形式具有第一峰分子量，包含下列步驟a)用0.01重量％—20重量％的引發(fā)劑，在合適溫度下，使酪氨酸、丙氨酸、谷氨酸Y-芐酯和三氟乙酰賴氨酸的N-羧酸酐聚合適當(dāng)?shù)臅r(shí)間，生成受保護(hù)的多肽混合物，該多肽混合物的無保護(hù)形式具有第一峰分子量；b)通過使受保護(hù)的多肽混合物與氫解催化劑和氫氣接觸，脫去受保護(hù)多肽混合物上的芐基保護(hù)基，生成三氟乙酰保護(hù)的多肽混合物，該混合物的每一種多肽均由谷氨酸、丙氨酸、酪氨酸和賴氨酸組成，該多肽混合物的無保護(hù)形式具有第一峰分子量。具體實(shí)施方式本發(fā)明提供了一種制備多肽醋酸鹽混合物的方法，每種多肽均由谷氨酸、丙氨酸、酪氨酸和賴氨酸組成，其中，該混合物具有目的峰分子量，本方法包含下列步驟a)用0.01重量％—20重量％的引發(fā)劑，在合適溫度下，酪氨酸、丙氨酸、谷氨酸Y-芐酯和三氟乙酰賴氨酸的N-羧酸酐聚合適當(dāng)?shù)臅r(shí)間，生成受保護(hù)多肽混合物，該多肽混合物的無保護(hù)形式具有第一峰分子量；b)通過使多肽與氫解催化劑和氫氣接觸，脫去受保護(hù)多肽混合物的芐基保護(hù)基，生成三氟乙?；Ｗo(hù)的多肽混合物，該多肽混合物的無保護(hù)形式具有第一峰分子量；c)通過使多肽與有機(jī)堿溶液反應(yīng)，脫去三氟乙?；Ｗo(hù)的多肽混合物的三氟乙酰保護(hù)基，生成多肽混合物，該多肽混合物的無保護(hù)形式具有第一峰分子量；d)通過超濾作用，除去游離的三氟乙?；偷头肿恿侩s質(zhì)，獲得多肽的混合物，每一種多肽各由谷氨酸、丙氨酸、酪氨酸和賴氨酸組成；e)將每種多肽均由谷氨酸、丙氨酸、酪氨酸和賴氨酸組成的多肽的混合物和醋酸水溶液混合，生成每種多肽均由谷氨酸、丙氨酸、酪氨酸和賴氨酸組成的多肽的醋酸鹽的混合物，該混合物具有目的峰分子量。在一個(gè)實(shí)施例中，第一峰分子量可以是2000道爾頓_40000道爾頓，或2000道爾頓_20000道爾頓或4000道爾頓-8600道爾頓或4000道爾頓-8000道爾頓或6250道爾頓-8400道爾頓或2000道爾頓-13000道爾頓或4700道爾頓_13000道爾頓或10000道爾頓-25000道爾頓或15000道爾頓_25000道爾頓或18000道爾頓-25000道爾頓或20000道爾頓-25000道爾頓，或4700道爾頓-11000道爾頓或7000道爾頓或13000道爾頓-18000道爾頓或15000道爾頓或12500道爾頓。在一個(gè)實(shí)施例中，目的峰分子量可以是2000道爾頓-40000道爾頓或2000道爾頓_20000道爾頓或4000道爾頓-8600道爾頓或4000道爾頓-8000道爾頓或6250道爾頓_8400道爾頓或2000道爾頓-13000道爾頓或4700道爾頓_13000道爾頓或10000道爾頓_25000道爾頓或15000道爾頓-25000道爾頓或18000道爾頓-25000道爾頓或20000道爾頓-25000道爾頓或4700道爾頓-11000道爾頓，或7000道爾頓或13000道爾頓-18000道爾頓或15000道爾頓或12500道爾頓。在一個(gè)實(shí)施例中，氫解催化劑選自鈀/碳、蘭尼鎳、鉑、鉑/碳、氧化鉑、氫氧化鉑、銠/炭或RhCl(PPh3)3。在另一個(gè)實(shí)施例中，氫解催化劑為鈀/碳。在另一個(gè)實(shí)施例中，受保護(hù)的多肽與催化劑鈀/碳的重量比為10:1。在一個(gè)實(shí)施例中，多肽和氫解催化劑間反應(yīng)步驟中所采用的溶劑選自甲醇、乙醇或異丙醇。在另一個(gè)實(shí)施例中，上述溶劑為甲醇。在一個(gè)實(shí)施例中，引發(fā)劑選自伯胺、二烷基胺或甲醇鈉。在另一個(gè)實(shí)施例中，引發(fā)劑為二乙基胺。在另一個(gè)實(shí)施例中，引發(fā)劑用量為0.05重量％-19重量％，或O.1重量％-17重量％，或0.5重量％-15重量％，或1重量％-10重量％，或2重量％-5重量％，或2重量％，或5重量％。在一個(gè)實(shí)施例中，在步驟c中所述的有機(jī)堿為水性有機(jī)堿。在另一個(gè)實(shí)施例中，上述水性有機(jī)堿選自伯胺、仲胺、叔胺或甲醇氨。在另一個(gè)實(shí)施例中，上述水性有機(jī)堿為哌啶。本發(fā)明還提供了一種通過上述方法制備的多肽醋酸鹽混合物。本發(fā)明進(jìn)一步提供了一種含有上述多肽醋酸鹽混合物和藥學(xué)上可接受的載體的藥物組合物。本發(fā)明更進(jìn)一步提供了一種制備藥物組合物的方法，包含將上述混合物與藥學(xué)上可接受的載體進(jìn)行混合。本發(fā)明還提供了一種制備藥物組合物的方法，該藥物組合物含有每種多肽均由谷氨酸、丙氨酸、酪氨酸和賴氨酸組成的多肽的醋酸鹽的水性混合物，其中，該混合物具有目的峰分子量.本發(fā)明的改進(jìn)包括通過前述任何一種工藝制備多肽醋酸鹽的混合物。本發(fā)明還提供了一種制備三氟乙酰基保護(hù)的多肽混合物的方法，每種多肽均由谷氨酸、丙氨酸、酪氨酸和三氟乙酰賴氨酸組成，其中多肽混合物的無保護(hù)形式具有第一峰分子量，包含下列步驟a)用0.01重量％_20重量％的引發(fā)劑，在合適溫度下，使酪氨酸、丙氨酸、谷氨酸Y-芐酯和三氟乙酰賴氨酸的N-羧酸酐聚合適當(dāng)時(shí)間，生成受保護(hù)的多肽混合物，該多肽混合物的無保護(hù)形式具有第一峰分子量；b)通過使受保護(hù)的多肽混合物與氫解催化劑和氫氣接觸，脫去受保護(hù)多肽混合物的芐基保護(hù)基，生成三氟乙?；Ｗo(hù)的各由谷氨酸、丙氨酸、酪氨酸和三氟乙酰賴氨酸組成的多肽的混合物，，該多肽混合物的無保護(hù)形式具有第一峰分子量。在一個(gè)實(shí)施例中，氫解催化劑選自鈀/碳、蘭尼鎳、鉬、鉑/碳、氧化鉑、氫氧化鉑、銠/炭或RhCl(PPh3)3。在另一個(gè)實(shí)施例中，氫解催化劑為鈀/碳。在另一個(gè)實(shí)施例中，受保護(hù)的多肽與氫解催化劑鈀/碳的重量比為10:1。在一個(gè)實(shí)施例中，多肽和氫解催化劑反應(yīng)的步驟中所采用的溶劑選自甲醇、乙醇或異丙醇。在另一個(gè)實(shí)施例中，上述溶劑為甲醇。在另一個(gè)實(shí)施例中，引發(fā)劑選自伯胺、二垸基胺或甲醇鈉。在一個(gè)實(shí)施例中，引發(fā)劑為二乙基胺。在另一個(gè)實(shí)施例中，引發(fā)劑用量為0.05重量％_19重量％，或O.1重量％-17重量％，或0.5重量％-15重量％，或1重量％-10重量％，或2重量％_5重量％，或2重量％，或5重量％。在一個(gè)實(shí)施例中，第一峰分子量選自2000道爾頓-40000道爾頓，或2000道爾頓-20000道爾頓或4000道爾頓_8600道爾頓或4000道爾頓-8000道爾頓或6250道爾頓-8400道爾頓或2000道爾頓-13000道爾頓或4700道爾頓-13000道爾頓或10000道爾頓-25000道爾頓或15000道爾頓-25000道爾頓或18000道爾頓-25000道爾頓或20000道爾頓-25000道爾頓，或4700道爾頓-11000道爾頓或7000道爾頓或13000道爾頓-18000道爾頓或15000道爾頓或12500道爾頓。本發(fā)明還提供了一種三氟乙?；Ｗo(hù)的多肽的混合物，每種多肽由谷氨酸、丙氨酸、酪氨酸和三氟乙酰賴氨酸組成，可由上述任何一種方法制備。本發(fā)明提還供了一種制備多肽醋酸鹽混合物的方法，每種多肽均由谷氨酸、丙氨酸、酪氨酸和賴氨酸組成，其中該混合物具有目的峰分子量，本方法包含下列步驟a)用有機(jī)堿溶液處理上述多肽混合物；b)通過超濾作用，除去游離的三氟乙?；偷头肿恿侩s質(zhì)，獲得多肽的混合物，每一種均由谷氨酸、丙氨酸、酪氨酸和賴氨酸組成；c)將多肽混合物和醋酸水溶液混合，生成具有所需的值峰分子量的，每一種多肽均由谷氨酸、丙氨酸、酪氨酸和賴氨酸組成的多肽醋酸鹽的混合物。在上述方法的一個(gè)實(shí)施例中，有機(jī)堿為水性有機(jī)堿。在上述方法的另一個(gè)實(shí)施例中，水性有機(jī)堿選自伯胺、仲胺、叔胺或甲醇氨。在上述方法的另一個(gè)實(shí)施例中，水性有機(jī)堿為哌啶。具體實(shí)施例實(shí)施例1合成聚[5-芐基-L-谷氨酸，N6-三氟乙酰-L-賴氨酸，L-丙氨酸，L-酪氨酸]7.43gL-酪氨酸N-羧酸酐加入到260ml二氧雜環(huán)已垸中，加熱至60°C，20分鐘，然后過濾；34.61gN6-三氟乙酰-L-賴氨酸N-羧酸酐加入到630ml二氧雜環(huán)已垸中，溶液20-25'C攪拌15分鐘，然后過濾；21.25gL-丙氨酸N-羧酸酐加入到395ml二氧雜環(huán)已垸中，溶液20-25i:攪拌15分鐘，然后過濾；14.83g5-芐基L-谷氨酸酯N-羧酸酐加入到260ml二氧雜環(huán)已烷中，溶液20-25。C攪拌15分鐘，然后過濾。在一個(gè)帶機(jī)械攪拌器的2LErlenmeyer燒瓶中，將這些溶液混合攪拌5分鐘；向反應(yīng)混合液中加入3.9g二乙基胺，23-27。C攪拌24小時(shí)。然后反應(yīng)混合液加入到5L去離子水中。過濾固體反應(yīng)產(chǎn)物、清洗、60°C真空干燥。收獲65.6g白色/本白色固體粉末。實(shí)施例2[聚[5-芐基基L-谷氨酸，N6-三氟乙酰-L-賴氨酸，L-丙氨酸，L-酪氨酸]脫保護(hù)(氫解)轉(zhuǎn)化為[L-谷氨酸，N6-三氟乙酰-L-賴氨酸，L-丙氨酸，L-酪氨酸]18g按實(shí)施例l所述合成的固體產(chǎn)物懸浮于540ml甲醇中；加入1.8g濕鈀/碳(10%鈀在87L型碳粉上，JohnsonMatthey-PreciousMetalsDivision);H2在2個(gè)氣壓下，以氣泡通入混合液，氫解反應(yīng)7小時(shí)，然后過濾，濃縮至270ml，加入600ml水中；混合液攪拌1小時(shí)、過濾、干燥，進(jìn)而得到14g白色/本白色粉末。實(shí)施例3脫除三氟乙?；?，形成聚[L-谷氨酸，L-賴氨酸，L-丙氨酸，L-酪氨酸]9g按實(shí)施例2所述合成的固體產(chǎn)物溶于540ml水；然后加入60ml哌啶；混合液室溫?cái)嚢?4小時(shí)，過濾，獲得清澈的黃棕色的濾液；濾液通過5千道爾頓濾膜超濾，以除去全部低分子量雜質(zhì)；6個(gè)超濾循環(huán)后，濾液用醋酸調(diào)節(jié)到pH4.0;濾液補(bǔ)加水，并超濾，直至pH值達(dá)到5.5;濾液經(jīng)濃縮、60小時(shí)的凍干；獲得4.7g白色的聚[L-谷氨酸，L-賴氨酸，L-丙氨酸，L-酪氨酸]凍干塊。實(shí)施例4分子量分析通過帶紫外檢測器的瓊脂糖12HR凝膠滲透高效液相色譜柱分析實(shí)施例3產(chǎn)物的分子量。采用pH1.5磷酸緩沖液作為流動(dòng)相。通過采用1ml水稀釋的20011l丙酮，確定柱的總保留時(shí)間；參考美國專利(No.6，514，938，2003.2.4頒予Gad，等人)，(特別見實(shí)施例2)(全文參考結(jié)合在此)中公開的Millennium計(jì)算法，采用TV分子量標(biāo)記物標(biāo)度色譜柱。經(jīng)過校準(zhǔn)后，制備5mg/ml實(shí)施例3的產(chǎn)物溶液。測定峰極大的保留時(shí)間，從而得出峰分子量為12700道爾頓。12實(shí)施例5水解反應(yīng)和氨基酸含量測定將10mg來自實(shí)施例3的多肽加到精氨酸內(nèi)標(biāo)對照溶液，從而制備好樣品溶液。在N2氣氛、110。C下，樣品溶液用含線苯酚(w/v)的濃鹽酸進(jìn)行水解24小時(shí)。制備各含谷氨酸、丙氨酸、酪氨酸和賴氨酸鹽酸之一的氨基酸對照液并水解。樣品溶液和對照溶液都用鄰苯二醛衍生化。樣品溶液和對照溶液采用帶紫外檢測器的7um柱(MerckLiChrosorbRP18)分析。流動(dòng)相為pH2.5磷酸緩沖液/乙腈梯度液。多肽樣品中氨基酸的摩爾分?jǐn)?shù)根據(jù)峰面積來測算。<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>實(shí)施例6醋酸鹽制備任何一種來自實(shí)施例1-3的產(chǎn)物與醋酸水溶液反應(yīng)，生成多肽醋酸鹽。本發(fā)明的發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，氫解反應(yīng)能有效地脫除受保護(hù)的多肽的谷氨酸殘基的芐基。特別是，本發(fā)明的發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，采用鈀/碳催化劑的氫解反應(yīng)能有效地脫除谷氨酸殘基的芐基，，生成三氟乙?；嚯模窃谫嚢彼釟埢蝗阴；鶊F(tuán)保護(hù)的。催化劑，例如鈀/碳能再生并重復(fù)利用，從而避免浪費(fèi)。通過哌啶，隨后去除賴氨酸殘基上的三氟乙?；Ｆ渌臍浣夥磻?yīng)催化劑也能有效地除去谷氨酸殘基的芐基。眾所熟知的氫解反應(yīng)催化劑有蘭尼鎳、鈾、鉑/碳、氧化鉑、氫氧化鉑、銠/炭或RhCl(PPh3)3和其他過渡金屬催化劑。在溫度20。C-100°C、1atm-100atm壓力下，進(jìn)行氫解反應(yīng)。然而，用氫解反應(yīng)替代溴化氫/冰醋酸去除芐基，會造成進(jìn)一步的復(fù)雜化。在使用溴化氫/冰醋酸的時(shí)候，它發(fā)揮去除谷氨酸殘基的芐基和裂解多肽達(dá)到所需的平均分子量的混合物的雙重功能。然而但是，氫解反應(yīng)不會裂解多肽。因此，本發(fā)明的發(fā)明人進(jìn)一步改良了工藝，通過采用特定量的聚合反應(yīng)引發(fā)劑，來達(dá)到目的峰分子量。通?？刹捎玫囊l(fā)劑有n-己胺和其它的伯胺、二乙胺、和其他二烷基胺，或甲醇鈉或引發(fā)劑的任何組合。美國專利(No.5，800，808，1998.9.1頒予Konfino等人)中公開了一種在室溫下，以0.1-0.2%二乙胺作為引發(fā)劑，也使用溴化氫反應(yīng)24小時(shí)的獲得5000-9000道爾頓分子量范圍的多肽混合物的方法。相反地，，在他們的實(shí)施例中，申請者用3.9g二乙胺作引發(fā)劑和7.43gL-酪氨酸N-羧酸酐、34.61gN6-三氟乙酰-L-賴氨酸N-羧酸酐、21.25gL-丙氨酸N-羧酸酐、14.83g5-芐基L-谷氨酸酯N-羧酸酐，在23。C-27。C下，反應(yīng)24小時(shí)，獲得了平均分子量12700道爾頓的多肽混合物。該多肽混合物的峰分子量也受反應(yīng)時(shí)間和反應(yīng)溫度的影響。在本發(fā)明的任一實(shí)施例中，多肽混合物的峰分子量的測定可在多肽聚合后，但是在芐基保護(hù)基或三氟乙?；Ｗo(hù)基脫除之前進(jìn)行。或者，在本發(fā)明的任一實(shí)施例中，多肽混合物的峰分子量可在去除芐基保護(hù)基之后，但在去除三氟乙?；Ｗo(hù)基之前進(jìn)行測定。甚至于一種情況是，本發(fā)明的任一實(shí)施例中，多肽混合物的峰分子量的測定在除去多肽的2種保護(hù)基團(tuán)之后進(jìn)行。多肽混合物的峰分子量的調(diào)整可類似地在本方法的步驟中，通過公知技術(shù)如層析分離、過濾、超濾透析、酶水解或沉淀來實(shí)現(xiàn)。本發(fā)明提供了一種制備多肽醋酸鹽混合物的方法，每種多肽醋酸鹽均由谷氨酸、丙氨酸、酪氨酸和賴氨酸組成。該方法能減少水性廢液的產(chǎn)生，改進(jìn)對多肽醋酸鹽混合物的峰分子量的控制。權(quán)利要求1.一種制備多肽醋酸鹽混合物的方法，每種多肽均由谷氨酸、丙氨酸、酪氨酸和賴氨酸組成，其中，該混合物具有目的峰分子量，包含下列步驟a)用0.01重量％－20重量％的引發(fā)劑、在合適溫度條件下，酪氨酸、丙氨酸、谷氨酸γ-芐酯和三氟乙酰賴氨酸的N-羧酸酐聚合適當(dāng)?shù)臅r(shí)間，生成受保護(hù)的多肽混合物，該多肽混合物的無保護(hù)形式具有第一峰分子量；b)通過使多肽與氫解催化劑和氫氣接觸，，脫去受保護(hù)的多肽混合物的芐基保護(hù)基，生成三氟乙?；Ｗo(hù)的多肽混合物，該多肽混合物的無保護(hù)形式具有第一峰分子量；c)通過使多肽與有機(jī)堿溶液反應(yīng)，脫去三氟乙酰保護(hù)的多肽混合物的的三氟乙酰保護(hù)基，生成多肽混合物，該多肽混合物的無保護(hù)形式具有第一峰分子量；d)通過超濾作用，除去游離的三氟乙?；偷头肿恿侩s質(zhì)，獲得每種多肽均由谷氨酸、丙氨酸、酪氨酸和賴氨酸組成的多肽的混合物；e)將每種多肽均由谷氨酸、丙氨酸、酪氨酸和賴氨酸組成的多肽混合物和醋酸水溶液混合，生成具有目的峰分子量的、每種多肽均由谷氨酸、丙氨酸、酪氨酸和賴氨酸組成的多肽醋酸鹽的混合物。2.如權(quán)利要求1所述的方法爾頓-40000道爾頓。3.如權(quán)利要求2所述的方法爾頓-11000道爾頓。4.如權(quán)利要求2所述的方法爾頓。5.如權(quán)利要求1所述的方法爾頓-40000道爾頓。6.如權(quán)利要求5所述的方法爾頓-11000道爾頓。7.如權(quán)利要求5所述的方法爾頓。8.如權(quán)利要求l所述的方法，其特征在于，所述氫解催化劑選自鈀/碳、蘭尼鎳、鉑、鉑/碳、氧化鉑、氫氧化鉑、銠/炭或RhCl(PPh3)3。，其特征在于，所述第一峰分子量為2000道，其特征在于，所述第一峰分子量為4700道，其特征在于，所述第一峰分子量為12500道，其特征在于，所述目的峰分子量為2000道，其特征在于，所述目的峰分子量為4700道，其特征在于，所述目的峰分子量為12500道9.如權(quán)利要求8所述的方法，其特征在于，所述氫解催化劑為鈀/碳。10.如權(quán)利要求9所述的方法，其特征在于，所述受保護(hù)的多肽和氫解催化劑鈀/碳的重量比為10:1。11.如權(quán)利要求l所述的方法，其特征在于，所述多肽和氫解催化劑反應(yīng)步驟中所采用的溶劑選自甲醇、乙醇或異丙醇。12.如權(quán)利要求ll所述的方法，其特征在于，所述的溶劑為甲醇。13.如權(quán)利要求l所述的方法，其特征在于，所述引發(fā)劑選自伯胺、二烷基胺或甲醇鈉。14.如權(quán)利要求13所述的方法，其特征在于，所述引發(fā)劑為二乙基胺。15.如權(quán)利要求l所述的方法，其特征在于，所述引發(fā)劑用量為1重量％-10重量％。16.如權(quán)利要求15所述的方法，其特征在于，所述引發(fā)劑用量為2重量％-5重量％。17.如權(quán)利要求16所述的方法，其特征在于，所述引發(fā)劑用量為2重量％。18.如權(quán)利要求15所述的方法，其特征在于，所述引發(fā)劑用量為5重量％。19.如權(quán)利要求l所述的方法，其特征在于，步驟c)中的有機(jī)堿為水性有機(jī)堿。20.如權(quán)利要求19所述的方法，其特征在于，所述水性有機(jī)堿選自伯胺、仲胺、叔胺或甲醇氨。21.如權(quán)利要求20所述的方法，其特征在于，所述水性有機(jī)堿為哌啶。22.—種按權(quán)利要求1-21任一項(xiàng)所述的方法制備的多肽醋酸鹽混合物。23.—種含有權(quán)利要求22所述的多肽醋酸鹽混合物和藥學(xué)上可接受的載體的藥物組合物。24.—種制備含有權(quán)利要求22所述的藥物組合物的方法，包含將權(quán)利要求22所述的藥物組合物和藥學(xué)上可接受的載體進(jìn)行混合。25.在一種用于制備含有多肽醋酸鹽的水性混合物的藥物組合物的方法中，其中每一種多肽均由谷氨酸、丙氨酸、酪氨酸和賴氨酸組成，其中混合物具有目的峰分子量，其改進(jìn)包括通過權(quán)利要求1-21任一項(xiàng)所述的方法制備多肽醋酸鹽的混合物。26.—種用于制備三氟乙?；Ｗo(hù)的多肽的混合物的方法，每種多肽均由谷氨酸、丙氨酸、酪氨酸和三氟乙酰賴氨酸組成，其中，該多肽混合物的無保護(hù)形式具有第一峰分子量，本方法包含下列步驟a)用0.01重量％—20重量％的引發(fā)劑，在合適溫度下，使酪氨酸、丙氨酸、谷氨酸Y-芐酯和三氟乙酰賴氮酸的N-羧酸酐聚合適當(dāng)?shù)臅r(shí)間，生成受保護(hù)的多肽混合物，該多肽混合物的無保護(hù)形式具有第一峰分子量；b)通過使受保護(hù)的多肽混合物與氫解催化劑和氫氣接觸，脫去受保護(hù)多肽混合物的芐基保護(hù)基，生成三氟乙?；Ｗo(hù)的多肽混合物，該混合物的每一種多肽均由谷氨酸、丙氨酸、酪氨酸和三氟乙酰賴氨酸組成，該多肽混合物的無保護(hù)形式具有第一峰分子量。27.如權(quán)利要求26所述的方法，其特征在于，所述的氫解催化劑選自鈀/碳、蘭尼鎳、鉑、鉑/碳、氧化鉑、氫氧化鉑、銠/炭或RhCl(PPh3)3。28.如權(quán)利要求27所述的方法，其特征在于，所述氫解催化劑為鈀/碳。29.如權(quán)利要求28所述的方法，其特征在于，所述受保護(hù)的多肽和氫解催化劑鈀/碳的重量比為10:1。30.如權(quán)利要求26所述的方法，其特征在于，所述多肽和氫解催化劑反應(yīng)步驟中所采用的溶劑選自甲醇、乙醇或異丙醇。31.如權(quán)利要求30所述的方法，其特征在于，所述的溶劑為甲醇。32.如權(quán)利要求26所述的方法，其特征在于，所述的引發(fā)劑選自伯胺、二垸基胺或甲醇鈉。33.如權(quán)利要求32所述的方法，其特征在于，所述引發(fā)劑為二乙基胺。34.如權(quán)利要求26所述的方法，其特征在于，所述引發(fā)劑用量為1重量％-10重量％。35.如權(quán)利要求34所述的方法，其特征在于，所述引發(fā)劑用量為2重量％-5重量％。36.如權(quán)利要求35所述的方法，其特征在于，所述引發(fā)劑用量為2重量％。37.如權(quán)利要求35所述的方法，其特征在于，所述引發(fā)劑用量為5重量％。38.如權(quán)利要求26所述的方法，其特征在于，所述第一峰分子量為2000道爾頓-40000道爾頓。39.如權(quán)利要求38所述的方法，其特征在于，所述第一峰分子量為4700道爾頓-11000道爾頓。40.如權(quán)利要求39所述的方法，其特征在于，所述第一峰分子量為12500道爾頓。41.一種按權(quán)利要求26-40任一項(xiàng)所述的方法制備的三氟乙?；Ｗo(hù)的多肽的混合物，混合物的每一種多肽均由谷氨酸、丙氨酸、酪氨酸和三氟乙酰賴氨酸組成。42.—種制備多肽醋酸鹽混合物的方法，每種多肽均由谷氨酸、丙氨酸、酪氨酸和賴氨酸組成，其中，該混合物具有目的峰分子量，包含下列步驟a)用有機(jī)堿溶液處理如權(quán)利要求41所述的多肽混合物；b)通過超濾作用，除去游離的三氟乙?；偷头肿恿侩s質(zhì)，獲得多肽的混合物，每一種多肽均由谷氨酸、丙氨酸、酪氨酸和賴氨酸組成；c)將多肽混合物和醋酸水溶液混合，生成多肽醋酸鹽的混合物，每種多肽均由谷氨酸、丙氨酸、酪氨酸和賴氨酸組成，該混合物具有目的峰分子量。43.如權(quán)利要求42所述的方法，其特征在于，所述有機(jī)堿為水性有機(jī)堿。44.如權(quán)利要求43所述的方法，其特征在于，所述水性有機(jī)堿選自伯胺、仲胺、叔胺或甲醇氨。45.如權(quán)利要求44所述的方法，其特征在于，所述水性有機(jī)堿為哌啶。全文摘要本發(fā)明涉及一種制備由谷氨酸、丙氨酸、酪氨酸和賴氨酸組成的用于治療多發(fā)性硬化癥的多肽醋酸鹽的混合物的改進(jìn)方法。文檔編號A61K31/74GK101111252SQ200680003522公開日2008年1月23日申請日期2006年1月20日優(yōu)先權(quán)日2005年2月2日發(fā)明者本-澤恩·道里茲凱申請人:泰華制藥工業(yè)有限公司