專利名稱：：肉桂提取物的制備方法、肉桂提取物、其組合物以及用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種中藥提取物、其制備方法和組合物以及在制備藥物或保健品中的用途。具體地說(shuō)，本發(fā)明涉及肉桂提取物的制備方法、由該方法制得的肉桂提取物、含有該提取物的組合物和該提取物在制備治療具有降血糖和降血脂的雙重功效且具有保護(hù)肝功能的藥物中的用途。
背景技術(shù)：
：糖尿病是一種非常古老的疾病，中醫(yī)稱之為"消渴"，即消瘦煩渴之意。現(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)為它是一種常見(jiàn)的內(nèi)分泌疾病，是由于人體內(nèi)胰島素絕對(duì)或相對(duì)缺乏而引起的。胰島素由人體胰臟中的胰腺P細(xì)胞分泌，它能使血中的葡萄糖順利進(jìn)入人的各器官組織的細(xì)胞中，為這些細(xì)胞提供能量。因此，正常人血糖濃度雖然隨進(jìn)餐有所波動(dòng)，但在胰島素的調(diào)節(jié)下，能使這種波動(dòng)保持在一定的范圍內(nèi)。而如果缺少胰島素或是胰島素不能正常工作時(shí)，就會(huì)使血中的葡萄糖無(wú)法進(jìn)入細(xì)胞提供能量，血糖因此會(huì)升高并引起糖尿病。糖尿病通常分為1型糖尿病和2型糖尿病兩種。l型糖尿病，約占糖尿病病人總數(shù)的10%，常發(fā)生于兒童和青少年，病因是患者體內(nèi)胰腺產(chǎn)生胰島素的細(xì)胞已經(jīng)徹底損壞，從而完全失去了產(chǎn)生胰島素的功能。2型糖尿病，約占糖尿病病人總數(shù)的90%，發(fā)病年齡多數(shù)在35歲以后。起病緩慢、隱匿，部分病人是在健康檢查或檢查其他疾病時(shí)發(fā)現(xiàn)的。隨著糖尿病得病時(shí)間的延長(zhǎng)，身體內(nèi)的代謝紊亂如得不到很好地控制，會(huì)進(jìn)一步發(fā)展并引起全身各種嚴(yán)重急、慢性并發(fā)癥，直接危及生命。到目前為止，糖尿病的病因及發(fā)病機(jī)理還沒(méi)有完全弄清楚，主要與遺傳因素；肥胖(2型糖尿病人中約60%是體重超重或肥胖)；年齡(有一半的2型糖尿患者多在55歲以后發(fā)病)；以及現(xiàn)代的生活方式(吃高熱量的食物和運(yùn)動(dòng)量的減少)有關(guān)。隨著現(xiàn)代人類勞動(dòng)強(qiáng)度顯著下降和飲食習(xí)慣的改變，糖尿病的發(fā)病率迅速上升。據(jù)世界衛(wèi)生組織最新統(tǒng)計(jì)，全世界有糖尿病患者1.25億，平均每分鐘就有6人因患糖尿病死亡，糖尿病造成的死亡，已居當(dāng)今世界死亡原因的第5位。世界衛(wèi)生組織已將糖尿病與癌癥、心血管疾病列為三大疑難病之一，并把每年的11月14日定為世界糖尿病日。在我國(guó)，糖尿病患者正在逐年增加。目前，我國(guó)已有糖尿病患者約4000萬(wàn)人。據(jù)世界衛(wèi)生組織預(yù)測(cè)，到2025年我國(guó)糖尿病人將達(dá)5000萬(wàn)，同時(shí)糖尿病人群的發(fā)展正趨于低齡化。由于糖尿病是一種長(zhǎng)期的慢性代謝綜合癥，而且有很多并發(fā)癥，如高血脂、高血壓、冠性病等，世界各國(guó)每年用于治療糖尿病的費(fèi)用高達(dá)數(shù)千億美元，中國(guó)目前每年用于治療糖尿病的費(fèi)用是一千七百億人民幣。糖尿病給世界各國(guó)帶來(lái)了沉重的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)，同時(shí)也嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量，尤其是對(duì)于中國(guó)這樣一個(gè)提前進(jìn)入老齡化的，糖尿病高發(fā)的發(fā)展中國(guó)家來(lái)說(shuō)更是不堪重負(fù)，直接影響國(guó)民經(jīng)濟(jì)的發(fā)展和人民生活水平的提高，延緩了加入世界發(fā)達(dá)國(guó)家的行列。所以如何找到一個(gè)經(jīng)濟(jì)、有效、簡(jiǎn)單、快捷的預(yù)防和治療糖尿病的方法事關(guān)重大，迫在眉睫。2002年5月第五屆國(guó)際糖尿病聯(lián)盟大會(huì)形成了綱領(lǐng)性決議消除胰島素抵抗，提高胰島素的敏感性是世界糖尿病治療的新方向。所謂胰島素抵抗即耙細(xì)胞(肌肉、脂肪、肝臟)對(duì)胰島素的敏感性下降，機(jī)體需要更多的胰島素，才能維持正常的血糖濃度。胰島素抵抗是糖尿病發(fā)病的前奏，增加機(jī)體對(duì)胰島素的敏感性不僅可以降低血糖，而且可以減輕P細(xì)胞的負(fù)荷，防止p細(xì)胞過(guò)量凋亡，防止病情的惡化。過(guò)氧化物酶增殖體激活受體(peroxisomeproliferator-activatedreceptors,PPAR)是一組在葡萄糖代謝和脂肪細(xì)胞分化中具有重要作用的核受體轉(zhuǎn)錄因子。PPAR的亞型PPARa主要在肝臟表達(dá)，調(diào)控脂代謝，它的激動(dòng)劑貝特類藥是目前市場(chǎng)上的一線口服降血脂藥。PPAR的另一個(gè)亞型PPARy主要在脂肪表達(dá)，調(diào)控糖代謝，它的激動(dòng)劑噻唑烷二酮類藥(羅格列酮等)是目前市場(chǎng)上的主要口服降血糖藥，通過(guò)增加胰島素的敏感性，消除胰島素抵抗來(lái)降血糖。但是羅格列酮有明顯的副作用如水腫、體重增加、肝毒性、心力衰竭等，而且價(jià)格曰蟲(chóng)卬貝肉桂(C/""amom,Ze;;/am'ciw2)為樟樹(shù)科植物，主要生長(zhǎng)在熱帶地區(qū)，我國(guó)主要分布在兩廣、云南和福建等地區(qū)，其中以兩廣最多。它的樹(shù)皮具有藥用價(jià)值，是一種傳統(tǒng)中藥，具有補(bǔ)火助陽(yáng)，引火歸源，散寒止痛，活血通經(jīng)等功效，在我國(guó)已有數(shù)千年的使用歷史。在肉桂作為中藥使用的歷史中，無(wú)副作用的報(bào)道，而且中國(guó)是肉桂的產(chǎn)地，取材廣泛，加工簡(jiǎn)單，價(jià)格低廉。近年來(lái)，美國(guó)和德國(guó)的科學(xué)家發(fā)現(xiàn)肉桂具有治療糖尿病的作用，在小鼠和人體身上均取得了成功，但作用機(jī)理迄今為止仍不明了。綜上所述，在糖尿病的預(yù)防和治療中，迫切需要開(kāi)發(fā)出一種能消除胰島素抵抗，提高胰島素的敏感性、副作用低、具有多重效果且成本低的天然藥物。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的正是提供一種制備同時(shí)兼具低副作用、高效而多效，且制藥成本低的肉桂提取物的方法。本發(fā)明的另一目的在于提供肉桂提取物。本發(fā)明的另一目的在于提供包含本發(fā)明肉桂提取物的組合物。本發(fā)明的另一目的在于提供本發(fā)明肉桂提取物在制備藥物或保健品中的用途。在本發(fā)明的第一方面，提供了一種肉桂提取物的制備方法，其包括以下步驟a)將肉桂原料與水性溶劑混勻；b)抽提由步驟a)所得的混合物；c)分離去除殘?jiān)?，得到肉桂提取物。在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方式中，所述方法還包括將步驟c)中所得肉桂提取物濃縮干燥的步驟。在本發(fā)明的另一優(yōu)選實(shí)施方式中，所述濃縮干燥是冷凍干燥。在上述的制備方法，所述水性溶劑選自水；水可混溶的溶劑與水組成的混合溶劑體系；或者，有助于提取肉桂中水溶性活性成分的酸性或堿性水溶液。在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方式中，所述水性溶劑為水，所得提取物為肉桂水提取物。所述水可混溶的溶劑包括但不限于乙醇等。所述混合溶劑體系中水的體積為30-99.9%，優(yōu)選50-95%，更優(yōu)選75-90%。在上述的制備方法中，肉桂原料與水性溶劑的混合比例為l-20g肉桂原料50-200ml溶劑；優(yōu)選5-15g肉桂原料80-150ml溶劑；更優(yōu)選10g肉桂原料100ral溶劑。在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方式中，所述抽提是在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中進(jìn)行的。在本發(fā)明的另一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方式中，所述抽提步驟的溫度低于6(TC，更優(yōu)選低于45。C。在本發(fā)明的另一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方式中，所述抽提步驟的時(shí)間為1-24小時(shí)，優(yōu)選2-12小時(shí)，更優(yōu)選3-6小時(shí)。在本發(fā)明的第二方面提供了按照上述制備方法制得的肉桂提取物。所述的肉桂提取物中含有肉桂醇、肉桂酸、肉桂醛、丁香酚，其水溶液為黃色澄明液體，pH為2.0-6.0，優(yōu)選3.5-5.5，較優(yōu)選4.0-5.0，最優(yōu)選4.6左右。在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方式中，所述肉桂提取物在如下的高效液相色譜條件下的圖譜如圖l所示色譜柱C18Zorbaxextend(4.6mmX250mm，5陶)；流動(dòng)相為水與甲醇的梯度混合第0-5分鐘，0%甲醇；第5-20分鐘，0-100%甲醇；第20-25分鐘，100%甲醇，第25-26分鐘，100-0%甲醇；流速0.5ml/分鐘；柱溫25°C;檢測(cè)波長(zhǎng)270nm。在本發(fā)明的第三發(fā)明，提供了一種組合物，它包含上述的肉桂提取物。在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方式中，所述組合物為包含有效量所述肉桂提取物的藥物組合物。在本發(fā)明的另一優(yōu)選實(shí)施方式中，所述組合物為包含有效量所述肉桂提取物的保健組合物。在上述的組合物中還可包含可接受的載體、賦形劑或稀釋劑。在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方式中，所述載體為鹽水、緩沖液、葡萄糖、水、甘油、乙醇或其組合。在本發(fā)明的另一優(yōu)選實(shí)施方式中，所述載體為藥學(xué)上可接受的載體、賦形劑或稀釋劑。在本發(fā)明的另一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方式中，所述藥物組合物或保健品組合物，為顆粒劑、片劑、凍干粉、栓劑、膠囊、舌下含片或口服液或其它合適的形狀。在上述的組合物中，肉桂提取物的含量為組合物總重量的1-99%。在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方式中，所述肉桂提取物的含量為組合物總重量的2-95%，優(yōu)選為5-90%，更優(yōu)選10-80%。在本發(fā)明的第四方面，提供了上述肉桂提取物在制備用于治療或預(yù)防糖尿病且治療或預(yù)防高血脂的藥物或保健品中的用途。在本發(fā)明的第五方面，提供了上述的肉桂提取物在制備用于治療或預(yù)防高血脂癥藥物或保健品中的用途。本發(fā)明的肉桂提取物具有增加胰島素的敏感性，改善胰島素抵抗，降低血糖的作用，同時(shí)還具有降低血脂和改善肝功能的作用。圖1是按實(shí)施例1所述制備的肉桂水提取物的HPLC圖譜。圖2是實(shí)施例1的CE對(duì)3T3-L1細(xì)胞分化的影響。其中A為對(duì)照；B為僅加入DM(正常分化液)誘導(dǎo)分化；C為加入DM+CE(0.2mg/ml);D為加入DM+CE(0.6mg/ml)。圖3A是實(shí)施例l的CE作用后的3T3-Ll細(xì)胞中PPARa、PPARy以及它們的耙基因ap2、CD36、FAS、ACO、LPL和GLUT4的基因表達(dá)。圖3B為實(shí)施例1的CE作用后的3T3-L1細(xì)胞中PPARy蛋白水平，其中l(wèi)為對(duì)照；2為僅加入DM;3為加入DM+lpM羅格列酮；4為加入DM+0.2mg/ml的CE;5為DM+0.6mg/ml的CE。圖4是用實(shí)施例1的CE刺激24小時(shí)后的用含PPARa、PPARy報(bào)告基因的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染的293T細(xì)胞中PPARa、PPARY報(bào)告基因的活性。圖中對(duì)照是指陰性對(duì)照；Tro為PPARY陽(yáng)性對(duì)照；WY14643為PPARa陽(yáng)性對(duì)照。A為轉(zhuǎn)染全長(zhǎng)的PPARY的報(bào)告基因活性圖；B為轉(zhuǎn)染配體結(jié)合域的PPARY的報(bào)告基因活性圖；C為轉(zhuǎn)染全長(zhǎng)的PPARa的報(bào)告基因活性圖；D為轉(zhuǎn)染配體結(jié)合域的PPARa的報(bào)告基因活性圖。圖5是不同濃度實(shí)施例1的CE以及CE加胰島素對(duì)由3T3-L1細(xì)胞分化成的脂肪細(xì)胞葡萄糖吸收的影響。其中，陽(yáng)性對(duì)照為胰島素。圖6是實(shí)施例1的CE對(duì)AKT磷酸化的影響。其中，l為陰性對(duì)照；2為陽(yáng)性對(duì)照胰島素；3為0.2mg/ml的CE;4為0.6mg/ml的CE;5為1.2mg/ml的CE。圖7是實(shí)施例1的CE對(duì)飲食導(dǎo)致的糖尿病肥胖小鼠(DIO)的影響。其中，圖7A為灌胃3周后CE對(duì)DIO小鼠空腹血糖的影響，NF對(duì)照為普通飼料喂養(yǎng)的正常小鼠；HF對(duì)照為DIO小鼠對(duì)照；Ros為羅格列酮陽(yáng)性對(duì)照；CE為肉桂水抽提物。圖7B為灌胃3周后CE對(duì)DIO小鼠葡萄糖耐量的影響。圖8是實(shí)施例l的CE對(duì)遺傳導(dǎo)致的糖尿病小鼠db/db鼠的影響。其中，圖8A為灌胃2周后CE對(duì)db/db鼠空腹血糖的影響，Ros為羅格列酮陽(yáng)性對(duì)照；CE為肉桂水抽提物。圖8B為灌胃2周后CE對(duì)db/db小鼠葡萄糖耐量的影響。具體實(shí)施例方式本發(fā)明人經(jīng)長(zhǎng)期而深入的研究，研制出了肉桂提取物，并以肉桂提取物作為研究對(duì)象，以3T3-L1作為細(xì)胞模型，D10小鼠和db/db小鼠作為動(dòng)物模型，證實(shí)了本發(fā)明肉桂提取物在治療糖尿病和高血脂中的作用及其機(jī)制肉桂是一種天然的PPARa和PPARY的雙重激動(dòng)劑，不僅具有增加胰島素的敏感性，改善胰島素抵抗，降低血糖的作用，同時(shí)還具有降低血脂和改善肝功能的作用。具體而言，本發(fā)明的肉桂提取物是從中藥肉桂中提取而成，具有副作用低、制備成本低廉的優(yōu)點(diǎn)。它是一種天然的PPARs的雙重激動(dòng)劑，具有降血糖和降血脂的雙重功效，而且具有保護(hù)肝功能的作用。與目前國(guó)外文獻(xiàn)上報(bào)道的類似物相比，本發(fā)明肉桂提取物的作用機(jī)制清楚，降血糖降血脂作用穩(wěn)定，療效顯著，功能更多。例如，與目前市場(chǎng)上廣泛使用的降血糖藥(PPARy的激動(dòng)劑)羅格列酮相比而言，羅格列酮只能降血糖，而且副作用明顯，如低血糖、水腫、體重增加、肝功能損傷等，本發(fā)明降血糖作用溫和，同時(shí)還具有降血脂和保護(hù)肝功能的功效，尤其對(duì)于高脂飲食導(dǎo)致的肥胖而引起的2型糖尿病效果更佳。又例如，與目前市場(chǎng)上普遍使用的降血脂藥(PPARa的激動(dòng)劑)貝特類藥相比而言，貝特類藥只能降低血脂，本發(fā)明除了具有降低血脂的作用外，同時(shí)還能降低血糖，療效穩(wěn)定，持久?？s寫除非另有說(shuō)明，本發(fā)明所用縮寫的含義如表l所示。表l:縮寫說(shuō)明<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>CD36fattyacidtransporter月旨肪酸轉(zhuǎn)運(yùn)子DIOdietinducedobesity高脂餐誘導(dǎo)的肥胖FFAfreefattyacids游離脂肪酸GTTglucosetolerancetest葡萄糖耐量試驗(yàn)HDL-Chigh-densitylipoproteincholesterol高密度脂蛋白膽固醇LDL-Clow-densitylipoproteincholesterol低密度脂蛋白膽固醇PPARperoxisomeproliferator國(guó)activated過(guò)氧化物酶體增殖物激活receptor受體TCtotalcholesterol總膽固醇TGtriglyceride甘油三酉旨ASTaspartateaminotransferase谷草轉(zhuǎn)氨酶ALTalanineaminotransferase谷丙轉(zhuǎn)氨酶LBD_ligandbindingdormain_酉己體結(jié)合域_肉桂提取物及其制備方法在本發(fā)明中，術(shù)語(yǔ)"肉桂提取物"、"本發(fā)明的提取物"和"本發(fā)明的活性成分"可互換使用，均表示根據(jù)本發(fā)明從肉桂原料中提取出的具有降血糖和降血脂作用的活性物質(zhì)。術(shù)語(yǔ)"肉桂水提取物"、"CE"可互換使用，均指用本發(fā)明的方法，以水為溶劑提取而得的肉桂提取物。在本發(fā)明的實(shí)施例中，CE尤指根據(jù)實(shí)施例1所述的方法制得的肉桂水提取物。在本發(fā)明中，所用的肉桂原料可以是市售的常規(guī)肉桂原藥材，優(yōu)選為粉末形式。其具體例子是由上海中藥飲片廠生產(chǎn)的肉桂粉?？赏ㄟ^(guò)如下步驟制備本發(fā)明的肉桂提取物a)將肉桂原料與水性溶劑混勻；b)抽提由步驟a)所得的混合物；c)分離去除殘?jiān)?，得到肉桂提取物。在本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式中，所述方法還包括將步驟c)中所得肉桂提取物濃縮干燥的步驟。所述濃縮干燥可采用本領(lǐng)域已知的任何方法，例如旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)法、冷凍干燥法等，優(yōu)選采用冷凍干燥法。在本發(fā)明的實(shí)施方式中，所述肉桂原料與溶劑的混合比例為1-20g肉桂原料50-200ml溶劑；優(yōu)選5-15g肉桂原料80-150ml溶劑；最優(yōu)選10g肉桂原料100ml溶劑。所述水性溶劑選自水或水可混溶的溶劑與水組成的混合溶劑，優(yōu)選為水。所述水可混溶的溶劑可為乙醇、丙酮等本領(lǐng)域常用溶劑。在本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式中，所述水性溶劑為水，所得提取物為肉桂提取物。本發(fā)明的抽提溫度一般低于6(TC，更優(yōu)選低于45°C。本發(fā)明所用的抽提時(shí)間為1-24小時(shí)，優(yōu)選2-12小時(shí)，更優(yōu)選3-6小時(shí)。在本發(fā)明的提取中可采用本領(lǐng)域常用的提取方法，例如(但不限于)浸漬法、滲濾法、真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)法等。應(yīng)理解的是，本領(lǐng)域的技術(shù)人員可在根據(jù)具體的制備要求來(lái)選擇上述的抽提條件和方法。所述分離去除殘?jiān)牟襟E，可采用本領(lǐng)域常用的技術(shù)進(jìn)行，例如采用濾紙、紗布等進(jìn)行過(guò)濾等。本發(fā)明的肉桂提取物是一種含有肉桂醇、肉桂酸、肉桂醛、丁香酚等多種有機(jī)化合物的混合物，其水溶液為黃色澄明液體，pH為2.0-6.0,優(yōu)選3.5-5.5，較優(yōu)選4.0-5.0，最優(yōu)選4.6左右，微酸，有特殊香味，味道清淡略甜。組合物本發(fā)明還提供了含有本發(fā)明肉桂提取物的組合物。在本發(fā)明中，可用常規(guī)方法將本發(fā)明的肉桂提取物與可接受的載體、賦形劑或稀釋劑相混合，形成本發(fā)明組合物。所述組合物可為藥物組合物或保健品組合物。所述載體包括(但并不限于)鹽水、緩沖液、葡萄糖、水、甘油、乙醇、及其組合。本發(fā)明的組合物可以為固態(tài)(如顆粒劑、片劑、凍干粉、栓劑、膠囊、舌下含片)或液態(tài)(如口服液)或其他合適的形狀。本發(fā)明活性成分的含量通常為組合物重量的1-99%,較佳地為2-95%，更佳地為5-90%,最佳地10-80%。本發(fā)明的組合物，可以為單劑或多劑形式。按施用劑量計(jì)，通常含有1-1000mg/劑，較佳地約2-500rag/劑，更佳地5-100mg/劑。本發(fā)明的合物可以通過(guò)常規(guī)形式使用，其中包括(但并不限于)口服、肌注、皮下注射等。優(yōu)選口服。本發(fā)明組合物的施用量，按活性物質(zhì)計(jì)算，通常為每天約0.01-500mg/kg體重，較佳地約0.1-50mg/kg體重。藥物/保健組合物及其用途本發(fā)明還提供了一種藥物/保健組合物，它含有(a)有效量的本發(fā)明的肉桂提取物；以及(b)藥學(xué)上可接受的載體、稀釋劑或賦形劑。如本文所用，術(shù)語(yǔ)"本發(fā)明的組合物"包括藥物/保健組合物，只要其含有本發(fā)明的肉桂提取物作為降血糖、降血脂或保護(hù)肝功能的活性成分。本發(fā)明中，術(shù)語(yǔ)"含有"表示各種成分可一起應(yīng)用于本發(fā)明的混合物或組合物中。因此，術(shù)語(yǔ)"主要由...組成"和"由...組成"包含在術(shù)語(yǔ)"含有"中。本發(fā)明中，"藥學(xué)上可接受的"成分是適用于人和/或動(dòng)物而無(wú)過(guò)度不良副反應(yīng)(如毒性、刺激和變態(tài)反應(yīng))，即有合理的效益/風(fēng)險(xiǎn)比的物質(zhì)。本文所用的術(shù)語(yǔ)"有效量"指治療劑治療、緩解或預(yù)防目標(biāo)疾病或狀況的量，或是表現(xiàn)出可檢測(cè)的治療或預(yù)防效果的量。對(duì)于某一對(duì)象的精確有效量取決于該對(duì)象的體型和健康狀況、病癥的性質(zhì)和程度、以及選擇給予的治療劑和/或治療劑的組合。因此，預(yù)先指定準(zhǔn)確的有效量是沒(méi)用的。然而，對(duì)于某給定的狀況而言，可以用常規(guī)實(shí)驗(yàn)來(lái)確定該有效量，臨床醫(yī)師是能夠判斷出來(lái)的。為了本發(fā)明的目的，有效的劑量為給予個(gè)體約0.01毫克/千克至500毫克/千克，較佳地0.05毫克/千克至200毫克/千克體重的本發(fā)明活性物質(zhì)。此外，本發(fā)明的活性物質(zhì)還可與其他治療劑一起使用。藥物組合物還可含有藥學(xué)上可接受的載體。術(shù)語(yǔ)"藥學(xué)上可接受的載體"指用于治療劑給藥的載體。應(yīng)理解的是，"藥學(xué)上可接受的載體"也包括可用于保健品中的各種載體，它們符合如下條件本身不誘導(dǎo)產(chǎn)生對(duì)接受該組合物的個(gè)體有害的抗體，且給藥后或給予保健品后沒(méi)有過(guò)分的毒性。這些載體是本領(lǐng)域普通技術(shù)人員所熟知的。在《雷明頓藥物科學(xué)》(Remington'sPharmaceuticalSciences,MackPub.Co.，N.J.1991年)中可找到關(guān)于藥學(xué)上可接受的載體的充分討論。這類載體包括(但并不限于)鹽水、緩沖液、葡萄糖、水、甘油、乙醇、佐劑、及其組合。治療性組合物中藥學(xué)上可接受的載體可含有液體，如水、鹽水、甘油和乙'醇。另外，這些載體中還可能存在輔助性的物質(zhì)，如潤(rùn)濕劑或乳化劑、pH緩沖物質(zhì)等。所述化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽及其組合物可通過(guò)口服以及靜脈內(nèi)、肌內(nèi)或皮下等途徑給藥；優(yōu)選的是口服給藥。固態(tài)載體包括淀粉、乳糖、磷酸二f丐、微晶纖維素、蔗糖和白陶土，而液態(tài)載體包括無(wú)菌水、聚乙二醇、非離子型表面活性劑和食用油(如玉米油、花生油和芝麻油)，只要適合活性成分的特性和所需的特定給藥方式。在制備藥物組合物中通常使用的佐劑也可有利地被包括，例如調(diào)味劑、色素、防腐劑和抗氧化劑如維生素E、維生素C、BHT和BHA。本發(fā)明的組合物及其藥物組合物也可儲(chǔ)存在適宜于注射或滴注的消毒器具中。通常，在本發(fā)明的藥物組合物中，肉桂提取物作為活性成分占總重量的1-99%，較佳地2-95%，較佳地5-90%,更佳為10-80%,其余為藥學(xué)上可接受的載體以及其他添加劑等物質(zhì)。給藥方式和劑型本發(fā)明的藥物/保健組合物可以通過(guò)常規(guī)方法制成任何常規(guī)的制劑形式。本發(fā)明所述的藥物/保健組合物的劑型可以是多種多樣的，只要是能耗夠使活性成分有效地到達(dá)哺乳動(dòng)物體內(nèi)的劑型都是可以的。組合物可以制成適合所需給藥方式的各種形式。例如，藥物組合物可以制成片劑、丸劑、粉劑、錠劑、袋劑、扁囊劑、酏劑、懸浮劑、乳劑、溶液、糖漿、氣霧劑(作為固體或在液體基質(zhì)中)、油膏、軟凝膠和硬凝膠膠囊、栓劑、無(wú)菌可注射液、無(wú)菌包裝的粉末等。本發(fā)明的肉桂提取物較佳為存在于適宜的固體或液體的載體或稀釋液中。本發(fā)明的肉桂提取物組合物優(yōu)選口服給藥，口服形式包括但不限于片劑、膠囊、可分散的粉末、顆粒或懸浮液(含有如約0.05-5%懸浮劑)、糖漿(含有如約10-50%糖)、和酏劑(含有約20-50%乙醇)，或者以無(wú)菌可注射溶液或懸浮液形式(在等滲介質(zhì)中含有約0.05-5%懸浮劑)進(jìn)行非腸胃給藥。例如，這些藥物制劑可含有與載體混合的約25-90%，通常約為5-60%(重量)的活性成分。一旦配成本發(fā)明的組合物，可將其直接給予對(duì)象。待預(yù)防或治療的對(duì)象可以是動(dòng)物；尤其是人。含本發(fā)明活性物質(zhì)的藥物組合物，可以經(jīng)口服、皮下、皮內(nèi)、靜脈注射等方式應(yīng)用。治療劑量方案可以是單劑方案或多劑方案。本發(fā)明的肉桂提取物及其組合物也可經(jīng)腸胃外或腹腔內(nèi)給藥。也可在適當(dāng)混合有表面活性劑(如羥丙基纖維素)的水中制備這些活性物質(zhì)的溶液或懸浮液。還可在甘油、液體、聚乙二醇及其在油中的混合物中制備分散液。在常規(guī)儲(chǔ)存和使用條件下，這些制劑中含有防腐劑以防止微生物的生長(zhǎng)。適應(yīng)于注射的藥物形式包括無(wú)菌水溶液或分散液和無(wú)菌粉(用于臨時(shí)制備無(wú)菌注射溶液或分散液)。在所有情況中，這些形式必須是無(wú)菌的且必須是流體以易于注射器排出流體。在制造和儲(chǔ)存條件下必須是穩(wěn)定的，且必須能防止微生物(如細(xì)菌和真菌)的污染影響。載體可以是溶劑或分散介質(zhì)，其中含有如水、醇(如甘油、丙二醇和液態(tài)聚乙二醇)、它們的適當(dāng)混合物和植物油。所用的活性成分的有效劑量可隨給藥的模式和待治療的疾病的嚴(yán)重程度而變化。然而，通常當(dāng)本發(fā)明提取楊每天以約1-300mg/kg動(dòng)物體重的劑量給予時(shí)，能得到令人滿意的效果，較佳地每天以1-3次分開(kāi)的劑量給予，或以緩釋形式給藥。對(duì)大部分大型哺乳動(dòng)物而言，每天的總劑量約為5-1000mg，較佳地約為10-500mg。適用于內(nèi)服的劑量形式，包含與固態(tài)或液態(tài)藥學(xué)上可接受的載體密切混合的約l-200mg的活性成分?？烧{(diào)節(jié)此劑量方案以提供最佳治療應(yīng)答。例如，由治療狀況的迫切要求，可每天給予若千次分開(kāi)的劑量，或?qū)┝堪幢壤販p少。本發(fā)明的組合物或藥物還可與其它活性成分或抗糖尿病或抗高血脂藥物聯(lián)合給藥。抗糖尿病藥物可為例如(但不限于)胰島素敏感性增強(qiáng)劑、葡萄糖吸收抑制劑、雙胍、胰島素分泌增強(qiáng)劑、SGLT2抑制劑、胰島素或胰島素類似物、胰高血糖素受體拮抗劑、胰島素受體激酶刺激劑等。所述抗高血脂藥物可為例如(但不限于)他汀類藥物(阿托伐他汀、辛伐他汀、洛伐他汀、普伐他汀和氟伐他汀)、降脂寧、樂(lè)脂平等。當(dāng)兩種或兩種以上的藥物聯(lián)合給藥時(shí)，一般具有優(yōu)于兩種藥物分別單獨(dú)給藥的效果。優(yōu)選地，聯(lián)合施用的藥物或其它制劑不干擾本發(fā)明肉桂提取物的治療活性。本發(fā)明的主要優(yōu)點(diǎn)是(1)成本低一線降糖藥和降血脂藥均是進(jìn)口藥，價(jià)格昂貴，本發(fā)明的肉桂提取物來(lái)自中藥，來(lái)源廣泛，加工簡(jiǎn)單，成本低廉。(2)具有雙重功效本發(fā)明的肉桂提取物是PPARa和PPARy的雙重激動(dòng)劑，既能降糖又能降脂，這對(duì)糖尿病人尤其重要，因?yàn)樘悄虿∪送瑫r(shí)伴有高血脂，心血管疾病的發(fā)病率明顯高于正常人，目前市場(chǎng)上的藥物要么只能降血糖要么只能降血脂，還沒(méi)有具有雙重功能的類似藥物。(3)副作用小目前一線口服降糖藥PPARY的激動(dòng)劑噻唑烷二酮類藥(羅格列酮等)副作用明顯水腫、體重增加、心力衰竭、肝功能損傷。經(jīng)實(shí)驗(yàn)證明，本發(fā)明的肉桂提取物不僅基本無(wú)副作用，而且還具有保護(hù)肝功能的作用。下面結(jié)合具體實(shí)施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。應(yīng)理解，這些實(shí)施例僅用于說(shuō)明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。下列實(shí)施例中未注明具體條件的實(shí)驗(yàn)方法，通常按照常規(guī)條件，例如Sambrook等人的《分子克隆實(shí)驗(yàn)室手冊(cè)》(NewYork:ColdSpringHarborLaboratoryPress,1989)中所述的條件，或按照制造廠商所建議的條件。實(shí)驗(yàn)材料和儀器以下實(shí)施例中的細(xì)胞、動(dòng)物、試劑等材料及其來(lái)源如表2所示。表2:實(shí)施例中所用實(shí)驗(yàn)材料<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>*動(dòng)物飼養(yǎng)的條件SPF清潔級(jí)實(shí)施例中所用的實(shí)驗(yàn)儀器如下日立7020全自動(dòng)生化分析儀；TheraSense血糖儀；OLYMPUSCKX41顯微鏡；OLYMPUSC5060數(shù)碼相機(jī)；1450MICROBETAJET液體閃爍計(jì)數(shù)器；mqlONMR核磁共振分析儀；TanonEPS300電泳槽；ABI7500實(shí)時(shí)定量PCR儀；LMAXII熒光化學(xué)發(fā)光酶標(biāo)儀。實(shí)施例1.肉桂水提取物的制備肉桂水提取物的工藝流程將肉桂原料和雙蒸水以一定比例混勻(10g+100ml)，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器在真空條件下進(jìn)行抽提，水溫控制在45'C，抽提6小時(shí)后用定性濾紙過(guò)濾，將殘?jiān)鼮V掉，得到肉桂水提取物50ral，所得濃度為0.2g/ml。肉桂水提取物的理化性質(zhì)肉桂水提取物是一種含有肉桂醇、肉桂酸、肉桂醛、丁香酚等多種有機(jī)化合物的混合物，外觀為黃色澄明液體，pH為4.6，微酸，有特殊香味，味道清淡略甜。HPLC圖譜本發(fā)明肉桂水提取物的HPLC圖譜如圖1所示。本實(shí)施例所用的色譜條件為色譜儀AgilentIIOO高效液相色譜系統(tǒng)；色譜柱C18Zorbaxextend(4.6mmX250mm，5Pm);流動(dòng)相為水和甲醇的梯度混合第0-5分鐘，0%甲醇；第5-20分鐘，0-100%甲醇；第20-25分鐘，100%甲醇；第25-26分鐘，100-0%甲醇；進(jìn)樣量柱溫25°C;檢測(cè)波長(zhǎng)270nm;流速O.5ral/分鐘。實(shí)施例2肉桂-乙醇/水(10:90，v/v)提取物的制備如實(shí)施例1的工藝流程制備肉桂乙醇提取物，區(qū)別在于將雙蒸水換為乙醇/水(10:卯，v/v)的混合溶劑體系，抽提溫度為4(TC。干燥后的提取物為微黃的粉末，溶于水后得到黃色澄明的液體，pH為4.3。以下實(shí)施例中使用了實(shí)施例1中制備的肉桂水提取物(以CE表示)。實(shí)驗(yàn)中分別將1^1、3nl、6^1實(shí)施例1的提取物加入24孔細(xì)胞培養(yǎng)板中，細(xì)胞培養(yǎng)液為lffll，所得濃度分別為0.2mg/ml、0.6rag/ml、1.2mg/ml。實(shí)施例3.肉桂水提取物對(duì)3T3-L1細(xì)胞向脂肪細(xì)胞分化的誘導(dǎo)將3T3-L1細(xì)胞接種在24孔板中，培養(yǎng)2天后用DM(10)ig/ml胰島素、lpM地塞米松、0.5mM環(huán)腺甘酸抑制劑)誘導(dǎo)分化，同時(shí)加入不同濃度的CE(0.2mg/ml、0.6mg/ml)。5天后用油紅染色，并在顯微鏡下觀察。觀察結(jié)果如圖2所示。結(jié)果表明CE能顯著促進(jìn)3T3-L1細(xì)胞向脂肪細(xì)胞分化。由于PPAR丫是脂肪細(xì)胞分化的充分和必要條件，推測(cè)CE有可能刺激了PPARy的表達(dá)。實(shí)施例4.CE誘導(dǎo)的由3T3-L1細(xì)胞分化的脂肪細(xì)胞中的基因表達(dá)將3T3-L1細(xì)胞接種在24孔板中，培養(yǎng)2天后用DM誘導(dǎo)分化，同時(shí)加CE0.6mg/ml。第5天收集細(xì)胞，提取RNA，反轉(zhuǎn)錄成cDNA，進(jìn)行實(shí)時(shí)定量PCR，檢測(cè)PPARa、PPARy以及它們的靶基因ap2、CD36、FAS、ACO、LPL和GLUT4，結(jié)果如圖3A所示。還檢測(cè)了PPARy的蛋白水平，結(jié)果如圖3B所示。結(jié)果顯示CE顯著促進(jìn)了以上基因的表達(dá)，且提高了PPARy的蛋白水平。實(shí)施例5.CE對(duì)用含PPARa、PPARY報(bào)告基因質(zhì)粒轉(zhuǎn)染的293T細(xì)胞基因表達(dá)的影響用含有PPARa、PPARY報(bào)告基因的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞。24小時(shí)后加入CE(0.2mg/ml、0.6mg/ml)刺激24小時(shí)，收集細(xì)胞用酶標(biāo)儀檢測(cè)報(bào)告基因的活性。結(jié)果如圖4所示。A為轉(zhuǎn)染全長(zhǎng)的PPARy的報(bào)告基因活性圖；B為轉(zhuǎn)染配體結(jié)合域的PPARY的報(bào)告基因活性圖；C為轉(zhuǎn)染全長(zhǎng)的PPARa的報(bào)告基因活性圖；D為轉(zhuǎn)染配體結(jié)合域的PPARa的報(bào)告基因活性圖。結(jié)果表明CE顯著增加了PPARa、PPARY的報(bào)告基因的活性，證明CE是PPARa、PPARy的雙重激動(dòng)劑。實(shí)施例6.CE對(duì)由3T3-L1細(xì)胞分化成的脂肪細(xì)胞葡萄糖吸收及AKT磷酸化的影響在由3T3-L1細(xì)胞分化成的脂肪細(xì)胞中加入不同濃度的CE(0.2mg/ml、0.6mg/ml、1.2mg/ml)或CE(0.2mg/ml)與100nM胰島素的組合，進(jìn)行葡萄糖吸收實(shí)驗(yàn)，以lOOnM的胰島素作為陽(yáng)性對(duì)照。結(jié)果如圖5所示。結(jié)果顯示CE單獨(dú)作用于脂肪細(xì)胞能促進(jìn)葡萄糖吸收，且該作用呈濃度依賴性。CE和胰島素同時(shí)作用于脂肪細(xì)胞時(shí)，對(duì)細(xì)胞吸收葡萄糖的作用超過(guò)了胰島素單獨(dú)作用與CE單獨(dú)作用的效果，并超過(guò)兩者效果的加合，證實(shí)了CE與胰島素有協(xié)同作用。進(jìn)一步檢測(cè)了AKT的磷酸化，結(jié)果如圖6所示。結(jié)果表明CE能增強(qiáng)AKT的磷酸化，從而引起GLUT4的上膜對(duì)葡萄糖吸收的增加，由此起到降血糖的作用。綜上所述，本發(fā)明的肉桂提取物不僅可以通過(guò)激動(dòng)PPARY來(lái)增加對(duì)胰島素的敏感性，還可以直接磷酸化AKT從而導(dǎo)致GLUT4的上膜來(lái)增加對(duì)葡萄糖的吸收，并能與胰島素協(xié)同增加周圍組織對(duì)葡萄糖的吸收，由此體現(xiàn)出肉桂水抽提物降糖機(jī)制的多樣性。實(shí)施例7.C57BL/6J小鼠實(shí)驗(yàn)高脂飲食肥胖和糖尿病模型小鼠的建立將20只C57BL/6J小鼠隨機(jī)分成4組，每組5只，一組以普通飼料飼養(yǎng)，其余三組以高脂飼料飼養(yǎng)。飼養(yǎng)5個(gè)月后的體重和血糖濃度比較如表3所示。表3:高脂飼料飼養(yǎng)組與普通飼料飼養(yǎng)組小鼠的體重及血糖比較(飼養(yǎng)5個(gè)月后)飼養(yǎng)5個(gè)月后體重(g)血糖濃度(mmol/L)NF小鼠24.19±1.819.275±2.02HF小鼠36.75±6.08**9.51±2.03NF:普通飼料；HF:高月旨飼料；*P<0.05;**P<0.01結(jié)果顯示，飼養(yǎng)5個(gè)月后，高脂飼料飼養(yǎng)的小鼠比普通飼料飼養(yǎng)的小鼠體重增加了1.5倍，并且有明顯的胰島素抵抗，可用以模擬高脂飲食導(dǎo)致的肥胖和糖尿病。21天強(qiáng)飼實(shí)驗(yàn)用200mg/kg的CE每天l次對(duì)小鼠進(jìn)行灌胃，連續(xù)3周。以10mg/kg羅格列酮(rosiglitazone)為陽(yáng)性對(duì)照，雙蒸水作為陰性對(duì)照。分別測(cè)定強(qiáng)飼藥物對(duì)小鼠體重、食物攝入以及脂肪/體重(BW)的影響，結(jié)果如表4所示。表4:21天強(qiáng)飼對(duì)C57BL/6J小鼠體重(BW)、食物攝入(FI)以及脂肪/體重的影響NF對(duì)照HF對(duì)照羅格列酮CE(H20)(H20)(10mg/kg)(200mg/kg)BW(第1天)24.19土1.81g36.75土6.08g36.7士6.3g36.7土8.69gBW(第21天)23.25土0.7g33.5士4.43g35.5土4.43g35.5士7.73gFI(第1天)3.12g2.1g2g2.5gFI(第21天)3.06g1.4g1.6g2.1g脂肪/BW(第l天)0.12±0.020.36±0.050.37±0.050.34±0.04脂肪/BW(第21天)0.12±0.020.31±0.050.37±0.050.34±0.04NF對(duì)照普通飼料喂養(yǎng)小鼠的對(duì)照HF對(duì)照高脂飼料喂養(yǎng)小鼠的對(duì)照表5:21天強(qiáng)飼對(duì)C57BL/6J小鼠空腹血淸指標(biāo)的影響NF對(duì)照HF對(duì)照CE(H20)(H20)(200mg/kg)FFA(mmol/L)--1.67±0.151.08±0.08**TCHO(mmol/L)1.46±0.152.39±0.332.22±0.31TG(mmol/L)0.13±0.080.14±0.030.11±0.07HDL(mmol/L)1.14±0.142.04±0.272.04±0.24LDL(mmol/L)0.20±0.030.26±0.070.16±0.08*ALT(IU/L)23.28±10.886.43±49.560.31±15.99AST(IU/L)164.6±83.7330.8±152.4128.3±27.4"*P<0.05;**P<0.01已有文獻(xiàn)表明羅格列酮具有明顯的肝毒性。而本實(shí)驗(yàn)的結(jié)果則顯示CE改善了小鼠血脂代謝，顯著降低血清FFA、LDL-c、AST、ALT，證實(shí)了CE不僅能顯著改善血脂，還能改善肝功能。由圖7A和圖7B可以看出CE明顯改善了胰島素抵抗，其效果甚至超過(guò)了陽(yáng)性對(duì)照組羅格列酮。綜上所述，本發(fā)明的CE相對(duì)于羅格列酮，具有副作用低、效果好的優(yōu)勢(shì)。實(shí)施例8.db/db小鼠實(shí)驗(yàn)本實(shí)施例中采用了db/db小鼠，這是一種基因缺陷鼠。11周至13周的db/db鼠的血糖和體重有顯著的增加，可用來(lái)模擬遺傳引起的糖尿病。將15只db/db小鼠分成3組，每組5只。用200mg/kg的CE每天l次對(duì)小鼠進(jìn)行灌胃，連續(xù)2周。將10mg/kg羅格列酮作為陽(yáng)性對(duì)照，雙蒸水作為陰性對(duì)照。在第15天將db/db鼠禁食6小時(shí)后進(jìn)行GTT，腹腔注射2g/kg葡萄糖，在0、15、30、60、120、240分鐘時(shí)測(cè)定血糖。然后心臟釆血，取血清測(cè)FFA、TG、TCHO、HDL-c、LDL-c。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表6所示。表6:15天強(qiáng)飼對(duì)db/db小鼠空腹血清指標(biāo)的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table>*P<0.05;**P<0.01結(jié)果表明在db/db小鼠模型中CE還能顯著降低血清FFA、LDL，明顯改善了脂代謝。圖8顯示CE不僅顯著降低了db/db鼠的空腹血糖(圖8A)，而且明顯改善了胰島素抵抗(圖8B)。以上結(jié)果進(jìn)一步證實(shí)了本發(fā)明的治療效果，不僅對(duì)飲食導(dǎo)致的肥胖，糖尿病有顯著療效，而且對(duì)遺傳導(dǎo)致的糖尿病也有顯著效果。在本發(fā)明提及的所有文獻(xiàn)都在本申請(qǐng)中引用作為參考，就如同每一篇文獻(xiàn)被單獨(dú)引用作為參考那樣。此外應(yīng)理解，在閱讀了本發(fā)明的上述講授內(nèi)容之后，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以對(duì)本發(fā)明作各種改動(dòng)或修改，這些等價(jià)形式同樣落于本申請(qǐng)所附權(quán)利要求書(shū)所限定的范圍。權(quán)利要求1.一種肉桂提取物的制備方法，其包括以下步驟a)將肉桂原料與水性溶劑混勻；b)抽提由步驟a)所得的混合物；c)分離去除殘?jiān)玫饺夤鹛崛∥铩?.如權(quán)利要求l所述的制備方法，其特征在于，所述水性溶劑選自水；水可混溶的溶劑與水組成的混合溶劑體系；或者，酸性或堿性水溶液。3.如權(quán)利要求l所述的制備方法，其特征在于，所述肉桂原料與所述水性溶劑的混合比例為l-20g肉桂原料50-200ral溶劑；優(yōu)選5-15g肉桂原料80-150ml溶劑；更優(yōu)選10g肉桂原料100ml溶劑。4.由權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)所述的制備方法制得的肉桂提取物。5.如權(quán)利要求4所述的肉桂提取物，其特征在于，其中含有肉桂醇、肉桂酸、肉桂醛、丁香酚，其水溶液為黃色澄明液體，pH為4.6左右。6.—種組合物，其特征在于，它包含權(quán)利要求4或5所述的肉桂提取物。7.如權(quán)利要求8所述的組合物，其特征在于，其還包含可接受的載體、賦形劑或稀釋劑。8.如權(quán)利要求6或7所述的組合物，其特征在于，其中所述肉桂提取物的含量為組合物總重量的1-99%;優(yōu)選上述肉桂提取物的含量為組合物總重量的2-95%，較優(yōu)選為5-90%，更優(yōu)選10-80%。9.權(quán)利要求4或5所述的肉桂提取物在制備用于治療或預(yù)防糖尿病或高血脂癥的藥物或保健品中的用途。10.權(quán)利要求4或5所述的肉桂提取物在制備用于治療或預(yù)防糖尿病且治療或預(yù)防高血脂癥的藥物或保健品中的用途。全文摘要本發(fā)明涉及肉桂提取物的制備方法，由此制得的肉桂提取物以及含有該提取物的組合物和該提取物在制藥或制備保健品中的用途。所述制備方法包括以下步驟a)將肉桂原料與水性溶劑混勻；b)抽提由步驟a)所得的混合物；c)分離殘?jiān)?，得到肉桂提取物。所得肉桂提取物中含有肉桂醇、肉桂酸、肉桂醛、丁香酚等，外觀為黃色澄明液體，pH為4.6左右。本發(fā)明還提供了含有該提取物的組合物。本發(fā)明的肉桂提取物可用于制備治療具有降血糖和降血脂的雙重功效且具有保護(hù)肝功能的藥物或保健品。文檔編號(hào)A61K36/54GK101167802SQ20061011751公開(kāi)日2008年4月30日申請(qǐng)日期2006年10月25日優(yōu)先權(quán)日2006年10月25日發(fā)明者盛小燕,瑩秦申請(qǐng)人:中國(guó)科學(xué)院上海生命科學(xué)研究院