專利名稱：：2,4,6－三氨基－1,3,5－三嗪衍生物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及醫(yī)藥品，特別涉及以具有BEC1鉀通道抑制作用的物質(zhì)為有效成分的抗癡呆藥，較好是具有BEC1鉀通道抑制作用的物質(zhì)為2，4，6-三氨基-1，3，5-三嗪衍生物或其制藥學(xué)上容許的鹽的癡呆藥，以及新穎的2，4，6-三氨基-1，3，5-三嗪衍生物或其制藥學(xué)上容許的鹽。
背景技術(shù)：
：鉀通道存在于細胞的質(zhì)膜上，是讓鉀離子選擇性通過的蛋白質(zhì)，被認為對細胞的膜電位的控制起著重要作用。特別通過調(diào)節(jié)神經(jīng)、肌肉細胞中動作電位的頻度和持續(xù)性等，對中樞、未梢神經(jīng)的傳導(dǎo)機制、心臟起搏、肌肉收縮等有作用。根據(jù)通道的開閉機制分類，至今已鑒別出電位依賴性鉀通道、內(nèi)向整流型鉀通道、鈣依賴性鉀通道或受體偶聯(lián)型鉀通道等。其中，電位依賴性鉀通道具有在膜電位去極化時開啟的特點。通常，鉀離子以細胞外約5mM、細胞內(nèi)約150mM的非平衡狀態(tài)存在。因此，如電位依賴性鉀通道通過去極化而開啟，鉀離子就從細胞內(nèi)流出至細胞外，結(jié)果引起膜電位的恢復(fù)(復(fù)極化)。因此，隨著電位依賴性通道的開啟，會引起神經(jīng)、肌肉細胞興奮性的降低(非專利文獻1)。便電位依賴性通道的開啟發(fā)生改變的化合物，通過調(diào)整神經(jīng)、肌肉細胞等的興奮性，可能調(diào)整種種生理現(xiàn)象，可能作為各種疾病的治療藥。例如，已知在神經(jīng)細胞中發(fā)現(xiàn)的A型電位依賴性鉀通道的抑制劑4-氨基吡啶會提高神經(jīng)的興奮性而引起癲癇(非專利文獻3)。此外，在電位依賴性鉀通道方面，在心臟中發(fā)現(xiàn)的HERG鉀通道的抑制劑多非利特(Dofetilide)，根據(jù)其可控制心肌細胞的興奮性，而被用作抗心律失常藥(非專利文獻4)。美國專利第6326168號(對應(yīng)專利國際公開小冊子WO99/37677號)(專利文獻1)的實施例1中序列編號2所記載的鉀通道(以下稱BEC1或BEC1鉀通道)是局部地在腦中表達分布的電位依賴性鉀通道。在海馬和大腦皮質(zhì)中其表達特別顯著。海馬是與記憶、學(xué)習(xí)有很強關(guān)聯(lián)性的部位(非專利文獻5)。其中，尤其是發(fā)現(xiàn)有該鉀通道表達的齒狀回的顆粒細胞，CA1及CA3錐體細胞形成神經(jīng)回路，各種記憶輸入從齒狀回的顆粒細胞經(jīng)CA1錐體細胞傳導(dǎo)到CA3錐體細胞，它們是通過以谷氨酸作神經(jīng)遞質(zhì)的興奮性突觸傳導(dǎo)的。在各種突觸發(fā)現(xiàn)的長期增強、長期受抑的突觸傳導(dǎo)效率的長期變化，被認為和記憶、學(xué)習(xí)有很大的關(guān)系。這些長期變化通過神經(jīng)細胞的興奮頻度和興奮強度進行調(diào)節(jié)。而電位依賴性鉀通道通常有可能控制神經(jīng)細胞的興奮性。因此，認為BEC1通過神經(jīng)細胞興奮性的控制參與記憶、學(xué)習(xí)的形成，但至今尚未具體證實。目前，已知有多種2，4，6-三氨基-1，3，5-三嗪衍生物，已揭示其作為抗HIV藥(非專利文獻6)、腺苷A3拮抗劑(專利文獻2)、抗菌藥(非專利文獻7、非專利文獻8、非專利文獻9及專利文獻3)的用途。至今雖報道了多種鉀通道抑制劑和2，4，6-三氨基-1，3，5-三嗪衍生物(專利文獻3，非專利文獻10)，但尚無關(guān)于BEC1鉀通道抑制作用的報告和暗示。本發(fā)明的課題是提供以具有BEC1鉀通道抑制作用的物質(zhì)(以下稱為BEC1鉀通道抑制劑)為有效成分的抗癡呆藥，較好的是BEC1鉀通道抑制劑為2，4，6-三氨基-1，3，5-三嗪衍生物或其制藥學(xué)上容許的鹽的抗癡呆藥，具有BEC1鉀通道抑制作用的新穎的2，4，6-三氨基-1，3，5-三嗪衍生物或其制藥學(xué)上容許的鹽，以及由該新穎的衍生物或其制藥學(xué)上容許的鹽形成的醫(yī)藥品。本發(fā)明者為完成上述課題進行了研究，發(fā)現(xiàn)BEC1鉀通道抑制劑可作為抗癡呆藥使用。進一步意外地發(fā)現(xiàn)具有2，4，6-三氨基-1，3，5-三嗪結(jié)構(gòu)的化合物具備BEC1鉀通道抑制作用，從而完成了本發(fā)明。(非專利文獻1)·Hille，B.(ed)lonicChannelsofExcitableMembranes(SinauerAssociates，Sunderland，1992(非專利文獻2)·Catterall，W.A.，Chandy，K.G.&Gutman，G.A.(eds)TheIUPHARCompendiumofvoltage-gatedionchannels(IUPHARMedia，Leeds，UK2002(非專利文獻3)·Yamaguchi，S.andRogawski，M.A.EpilepsyRes.119-16(1992)(非專利文獻4)·Gwilt，M.，Arrowsmith，J.E.，Blackburn，K.J.，Burges，R.A.，Cross，P.E.，Dalrymple，H.W.andHiggins，A.J.J.Pharmacol.Exp.Ther.256318-324(1991)(非專利文獻5)·Levitan，I.B.andKaczmarekL.K.(1991)TheNeuronCellandMolecularBiology，OxfordUniversityPress，NewYork，NY(非專利文獻6)·Bioorg.Med.Chem.Lett.(2001)11，2229-2234(非專利文獻7)·ActaCienc.Indica，Chem.(1992)18(4)，405-406(非專利文獻8)ActaCienc.Indica，Chem.(1985)11(1)，66-70(非專利文獻9)·J.IndianChemicalSociety(1987)64(12)，770-771(非專利文獻10)·J.Inst.Chem.(India)(1987)59(4)，183-185(專利文獻1)·美國專利第6326168號(專利文獻2)·日本專利特開平11-158073號(專利文獻3)·國際公開小冊子WO99/1442發(fā)明的揭示本發(fā)明涉及以具有BEC1鉀通道抑制作用的物質(zhì)為有效成分的抗癡呆藥。較好的是具有BEC1鉀通道抑制作用的物質(zhì)為式(I)所示的2，4，6-三氨基-1，3，5-三嗪衍生物或其制藥學(xué)上容許的鹽的抗癡呆藥。式中符號含義如下所述。R1或R2相同或不同，H，OH，烷基-O-，芳基-CO-，H2N，可被OH取代的烷基-NH，(烷基)2N，可被取代的烴基，可被取代的雜環(huán)，或R1、R2及相鄰的N可一起形成含氮雜環(huán)，該環(huán)可被取代。R3、R4、R5及R6相同或不同，(i)H，(ii)CN，(iii)NO2，(iv)鹵素，(v)可被(1)CN，(2)鹵素或(3)OH取代的低級烷基，(vi)環(huán)烷基，(vii)可被低級烷基取代的芳基，(ix)可被低級烷基取代的雜環(huán)，(x)R7R8N-(R7及R8相同或不同，(1)H，(2)可被芳基或R9-O-CO-取代的低級烷基(R9(1)H或可被芳基取代的低級烷基)，(xi)R10-T1-(R10(1)H，(2)可被芳基、HO-C1-10亞烷基-O-或HO取代的低級烷基，或(3)芳基，T1O或S)，或(xii)R11-T2-(R11(1)OH，(2)R7R8N-，(3)低級烷基-O-，(4)低級烷基，(5)芳基，或(6)雜環(huán)(T2CO或SO2))。而且，R3、R4及相鄰的C或者R5、R6及相鄰的C可一起形成雜環(huán)、環(huán)狀烴環(huán)，與苯環(huán)稠合。本發(fā)明的另一形式是以上式(I)所示的2，4，6-三氨基-1，3，5-三嗪衍生物或其制藥學(xué)上容許的鹽為有效成分的序列編號2所記載的BEC1鉀通道抑制劑。此外，本發(fā)明的另一形式是以式(II)所示的2，4，6-三氨基-1，3，5-三嗪衍生物或其制藥學(xué)上容許的鹽。式中符號含義如下所述。R1或R2相同或不同，H，OH，烷基-O-，芳基-CO-，H2N，可被OH取代的烷基-NH，(烷基)2H，可被取代的烴基，可被取代的雜環(huán)，或R1、R2及相鄰的N可一起形成含氮雜環(huán)，該環(huán)可被取代。R3、R4、R5及R6相同或不同，(i)H，(ii)CN，(iii)NO2，(iv)鹵素，(v)可被(1)CN，(2)鹵素或(3)OH取代的低級烷基，(vi)環(huán)烷基，(vii)可被低級烷基取代的芳基，(ix)可被低級烷基取代的雜環(huán)，(x)R7R8N-(R7及R8相同或不同，(1)H，(2)可被芳基或R9-O-CO-取代的低級烷基(R9(1)H或可被芳基取代的低級烷基)，(xi)R10-T1-(R10(1)H，(2)可被芳基、HO-C1-10亞烷基-O-或HO取代的低級烷基，或(3)芳基，T1O或S)，或(xii)R11-T2-(R11(1)OH，(2)R7R8N-，(3)低級烷基-O-，(4)低級烷基，(5)芳基或(6)雜環(huán)(T2CO或SO2))。而且，R3、R4及相鄰的C或者R5、R6及相鄰的C可一起形成雜環(huán)、環(huán)狀烴環(huán)，與苯環(huán)稠合。但下列情況除外，上式(II)中R1及R2相同或不同，為(i)H，NH2，環(huán)己基，可被取代的苯基，Ra-(CH2)2-(RaHS，HO，R7R8N，COOH，乙氧基，CN，嗎啉基，氯)，可被以下①至⑤的取代基取代的烷基(①HOOC，②烷基-O-CO-，③可被取代的苯基，④R7R8NCONHCO，或⑤R7R8NCONHCO-)，鏈烯基，苯基-S-，苯基-SO2-，可被取代的苯基NHCS-，可被取代的苯基NHCO-，烷基-O-CO-，H2NCS，氯-COCH2-，可被取代的1，3，4-二唑-2-基甲基，或R1、R2及相鄰的C一起形成吡唑-1-基，吲哚-1-基，吲唑-2-基，哌啶-1-基或嗎啉-4-基，且R3、R4、R5及R6相同或不同，為H、鹵素、NO2、乙?；?、HO、低級烷基-O-、HOOC-、低級烷基-O-CO-、H2NSO2-或低級烷基。下同。此外，本發(fā)明的另一形式是由上式(II)記載的2，4，6-三氨基-1，3，5-三嗪衍生物或其制藥學(xué)上容許的鹽制成的醫(yī)藥品。本發(fā)明的較好形式是式(I)或式(II)中的取代基如下所述的2，4，6-三氨基-1，3，5-三嗪衍生物或其制藥學(xué)上容許的鹽。①R1及R2不同，為H及可被取代的烴基，較好的是烴基為烷基，更好的是可被取代的雜環(huán)取代烷基，②R1及R2不同，為H及可被取代的雜環(huán)，較好的是該雜環(huán)為含1～2個選自S及O的雜原子的4～6元單環(huán)，③R3、R4、R5及R6為H，④R3、R4、R5及R6相同或不同，為H及鹵素，⑤R3、R4、R5及R6相同或不同，為H及可被[(1)鹵素或(2)OH]取代的低級烷基，⑥R3、R4、R5及R6相同或不同，為H、鹵素及可被[(1)鹵素或(2)OH]取代的低級烷基，⑦R3、R4、R5及R6相同或不同，為H及R10-T1-，或⑧R3、R4、R5及R6相同或不同，為H、鹵素及R10-T1-。特別好的是將上述①～②的任一項與③～⑧的任一項組合的2，4，6-三氨基-1，3，5-三嗪衍生物或其制藥學(xué)上容許的鹽。較好的化合物為下表所示的任一2，4，6-三氨基-1，3，5-三嗪衍生物或其制藥學(xué)上容許的鹽。表1(上式中的數(shù)字2～6表示基團R3及R5各自的結(jié)合位置。)(表中的符號如下所述。Ph苯基，Py吡啶，Bzl芐基)本發(fā)明的另一形式是給患者服用上述BEC1抑制劑的癡呆癥的治療方法。還有一個形式是使供試化合物與表達BEC1鉀通道的細胞接觸，通過篩選法獲得能抑制該通道活性的化合物，由該化合物制成的醫(yī)藥品，特別是癡呆治療用醫(yī)藥組合物的配制法。以下，本說明書中的符號表示同樣意義。如下進一步說明通式(I)或(II)表示的化合物。在本說明書的通式的定義中，如無特別說明，“低級”一詞表示碳原子數(shù)1～6的直鏈或支鏈的碳鏈?！胞u素”可列舉氟、氯、溴或碘原子?！盁N基”是碳原子數(shù)1～15，較好是碳原子數(shù)1～10的直鏈或支鏈烴基，或碳原子數(shù)3～15的環(huán)狀烴基。作為直鏈或支鏈烴基，包括“烷基”、“鏈烯基”或“炔基”。具體的“烷基”是甲基、乙基、異丙基、己基、癸基、十四碳烷基或十五碳烷基等?！版溝┗笔侵辽儆?個以上的雙鍵的烴基，有乙烯基、丙烯基、烯丙基、異丙烯基或己烯基等?！叭不笔侵辽儆?個以上的三鍵的烴基，有乙炔基、丙炔基或丁炔基等。環(huán)狀烴基是“環(huán)烷基”、“環(huán)烯基”或“芳基”。具體地說，“環(huán)烷基”是單環(huán)式飽和環(huán)，有環(huán)丙基、環(huán)戊基、環(huán)己基、環(huán)辛基和環(huán)癸基等。該環(huán)烷基可以交聯(lián)，也可與苯稠合。例如較好的是以下所示的C3-10環(huán)烷基?！碍h(huán)烯基”是有1個以上雙鍵的烴環(huán)，該環(huán)烯基可以和雜環(huán)、芳基或C3-10環(huán)烷基稠合。例如較好的是以下所示的C3-8環(huán)烯基?！胺蓟北硎痉枷阈詿N基，例如C6-14芳基，即苯基、萘基或蒽基等。該芳基可和雜環(huán)、C3-10環(huán)烯基、C3-10環(huán)烷基或苯并環(huán)烷基稠合。例如較好的是以下所示的2～3環(huán)式。特別是R3、R4及相鄰的C或者R5、R6及相鄰的C一起與苯環(huán)稠合的2～3環(huán)式芳基可以被取代。其取代基可列舉氧代(＝O)、低級烷基、芳基、OH-芳基、低級烷基-O-芳基?！半s環(huán)”是含有1～4個選自N、S及O的雜原子的4～7元單環(huán)式，2環(huán)式或3環(huán)式的脂腦族環(huán)或芳香族環(huán)。該環(huán)可以交聯(lián)，并可與C3-10環(huán)烷基或芳基稠合。例如較好的具體例子是以下所示的雜環(huán)。上述雜環(huán)中，芳香族含氮雜環(huán)的環(huán)上的氮原子可季銨化或形成N-氧化物?！昂s環(huán)”是至少含有1個氮原子的上述雜環(huán)?！翱杀蝗〈臒N基”的取代基，較好可列舉下述a組的取代基?！翱杀蝗〈碾s環(huán)”及“R1、R2及相鄰的N一起形成的含氮雜環(huán)”的取代基，較好可列舉下述b組的取代基。a組(i)CN，(ii)NO2，(iii)鹵素，(iv)R7R8N-(R7及R8相同或不同，(1)H，(2)可被芳基或R9-O-CO-取代的低級烷基(R9(1)H，或可被芳基取代的低級烷基)，(3)可被CN或低級烷基取代的芳基，(4)雜環(huán)，(5)低級烷基-CO-，(6)低級烷基-O-CO-，(7)可被HS-或低級烷基-S-取代的環(huán)烷基，(8)可被NO2取代的芳基-SO2-或(9)雜環(huán)-SO2-)，(v)R10-T1-(R10(1)H，(2)可被芳基，HO-C1-10亞烷基-O-或HO取代的低級烷基，或(3)芳基，T1O或S)，(vi)R11-T2-(R11(1)OH，(2)R7R8N-，(3)低級烷基-O-，(4)低級烷基，(5)芳基，或(6)雜環(huán)(T2CO或SO2))，(vii)可被下述(1)～(6)的取代基取代的低級烷基((1)鹵素，(2)CN，(3)OH，(4)R10CO-，(5)R7R8N-或(6)芳基)，(viii)可被低級烷基取代的環(huán)烷基，(ix)環(huán)烯基，(x)環(huán)炔基，(xi)可被下述(1)～(5)的取代基取代的芳基((1)鹵素，(2)NO2，(3)R12-T1-(R12可被R10或OH取代的低級烷基-芳基)，(4)H2NO2S-，或(5)可被鹵素或OH取代的低級烷基)，或(xii)可被下述(1)～(9)的取代基取代的雜環(huán)((1)鹵素，(2)氧代(＝O)，(3)NO2，(4)可被[R7R8N-、R10-T1-、可被(OH、鹵素或低級烷基-O-)取代的芳基]取代的低級烷基，(5)可被鹵素取代的芳基，(6)OH，(7)低級烷基-O-，(8)R7R8N-，或(9)雜環(huán))?！癇EC1”及“BEC1鉀通道”的意思是序列編號2所示的全長的蛋白質(zhì)，或具有與該蛋白質(zhì)相同功能的該蛋白質(zhì)的片斷，或者可置換、缺失、插入1個以上氨基酸的該蛋白質(zhì)片斷或全長的蛋白質(zhì)?！熬哂蠦EC1鉀通道抑制作用的物質(zhì)”是將供試化合物用具有代表性的篩選法，例如美國專利第6,326,168號記載的方法篩選而得到的物質(zhì)。a)利用電壓鉗法的篩選方法BEC1鉀通道蛋白質(zhì)的通道活性可用全細胞電壓鉗法測定。表達該通道蛋白質(zhì)的細胞用全細胞電壓鉗法使膜電位固定，測定全細胞電流。細胞外液用含145mMNaCl、5.4mMKCl、2mMCaCl2、0.8mMMgCl2的溶液，細胞內(nèi)液(膜片電極液)用含155mMKCl的溶液等。通過在供試藥物存在下和不存在下比較去極化刺激，即將膜電位從維持電位(例如-70mV)變?yōu)槿O化側(cè)(例如-80mV)而產(chǎn)生的外向電流，可篩選出修飾BEC1鉀通道蛋白質(zhì)的活性的化合物和肽。b)利用Rb+離子釋放的篩選方法通常Rb+離子可與K+離子同樣通過鉀通道，故可利用放射性同位素86Rb+的釋放作為指標測定通道的活性。通過將表達新穎的鉀通道蛋白質(zhì)的細胞與86RbCl一起培養(yǎng)(例如18小時，37℃)，可使86Rb+進入該細胞內(nèi)。細胞以低濃度K+生理鹽水(例如4.5mMK+)洗滌后，懸浮于同一溶液。在細胞懸液中添加高濃度K+溶液(例如最終濃度100mM)，使細胞的膜電位去極化，鉀通道被激活。因此，細胞內(nèi)的86Rb+被釋放至細胞外，所以可用細胞外液的放射活性作為通道活性的指標。比較在供試藥物存在和不存在下添加高濃度K+溶液時釋放至細胞外的放射活性，可能篩選出修飾BEC1鉀通道蛋白質(zhì)的活性的化合物和肽。c)利用膜電位敏感性色素和細胞內(nèi)K+檢測色素的篩選方法膜電位敏感性色素和細胞內(nèi)K+檢測色素可用光學(xué)方法檢測由于鉀通道開啟引起的膜電位或細胞內(nèi)K+濃度。膜電位敏感性色素可用RH155、WW781、Di-4-ANEPPS或它們的衍生物等。而Shaker型膜電位依賴性鉀通道的C端的細胞內(nèi)區(qū)域插入綠色熒光蛋白的氨基酸序列的嵌合蛋白質(zhì)可用于膜電位的檢測(Siegel，M.S.和Isacoff，E.Y.(1997)Neuron19，735-741)。細胞內(nèi)K+檢測色素可用K+結(jié)合的苯并呋喃間苯二甲酸酯等。通過使用這些色素可測定BEC1鉀通道的通道活性，比較供試藥物存在和不存在下的變化量，可篩選出修飾BEC1鉀通道蛋白質(zhì)的活性的化合物和肽。較好的篩選方法是下述以86Rb離子釋放量作指標的化合物的BEC1抑制活性測定法。此外，通過代表性的本發(fā)明化合物實施例13與供試化合物對BEC1鉀通道的競爭性抑制，可得到具有該作用的物質(zhì)。具體來講，供試化合物具有該抑制活性的都可用，可列舉市售品或化學(xué)文獻登錄的公知的化合物，用組合化學(xué)技術(shù)得到的化合物群、微生物培養(yǎng)上清液、來自植物和海洋生物的天然成分、動物組織提取物或者抗體和顯性失活的蛋白質(zhì)。此外，還可舉出本領(lǐng)域普通技術(shù)人員通過常規(guī)的化學(xué)變換法對該物質(zhì)進行取代基等修飾而獲得的物質(zhì)。本發(fā)明化合物根據(jù)基因的種類，存在光學(xué)異構(gòu)體(旋光異構(gòu)體、非對映異構(gòu)體等)。此外，本發(fā)明化合物包括具有酰胺鍵和雙鍵的化合物，存在基于酰胺鍵的互變異構(gòu)體和幾何異構(gòu)件。本發(fā)明中包括這些異構(gòu)體的分離體或者混合物。本發(fā)明化合物可與酸或堿形成鹽。與酸形成的鹽可列舉與鹽酸、氫溴酸、氫碘酸、硫酸、硝酸、磷酸等無機酸，與甲酸、乙酸、丙酸、草酸、丙二酸、琥珀酸、富馬酸、馬來酸、乳酸、蘋果酸、檸檬酸、酒石酸、碳酸、苦味酸、甲磺酸、乙磺酸、谷氨酸等有機酸的酸加成鹽。與堿形成的鹽可列舉與鈉、鉀、鎂、鈣、鋁等無機堿，與甲胺、乙胺、葡甲胺、乙醇胺等有機堿，或與賴氨酸、精氨酸、鳥氨酸等堿性氨基酸形成的鹽和銨鹽。此外，本發(fā)明化合物可形成水合物、與乙醇等的溶劑合物，以及多晶形。而且，本發(fā)明的有效成分或本發(fā)明化合物也包括所有在機體內(nèi)可代謝轉(zhuǎn)化的化合物，即所謂的前體藥物。形成本發(fā)明的前體藥物的基團可列舉Prog.Med.，5，2157-2161(1985)和“醫(yī)藥品的開發(fā)”第7卷(廣川書店，1990年)分子設(shè)計163-198頁記載的基團等。(制造法)本發(fā)明化合物及其制藥學(xué)上容許的鹽可利用基于其基本骨架或取代基的種類的特征，用各種公知的合成法制造。例如氧化、還原、氨化、烷基化、酰胺化、磺酰胺化、酯化及脲化等反應(yīng)，可參考日本化學(xué)會編“實驗化學(xué)講座”第4版(1991)(丸善)等文獻記載的條件進行。這時，根據(jù)官能團的種類，在原料乃至中間體階段該官能團用適當(dāng)?shù)谋Ｗo基(容易轉(zhuǎn)化成該官能團的基)置換，有時在制造技術(shù)上是有效的。這樣的官能團例如有氨基、OH(羥基)及COOH(羧基)等，它們的保護基可例舉Greene及Wuts著的“ProtectiveGroupsinOrganicSynthesis(第3版)”所記載的保護基等，它們可根據(jù)反應(yīng)條件適當(dāng)選擇使用。用這樣的方法引入該保護基進行反應(yīng)后，可根據(jù)需要除去保護基，得到所要求的化合物。以下，詳述本發(fā)明化合物的原料及本發(fā)明化合物的制造法。本發(fā)明化合物可通過公知的方法，例如Bull.Soc.Chim.Fr.，6，2112(1973)等記載的方法或其改良法等制造，以下說明代表性的制造法。(式中，L1、L2及L3表示離去基。)作為離去基可列舉(i)鹵素、(ii)甲磺?；?iii)甲亞磺?；?iv)可被1～3個鹵素原子取代的C1-6烷基磺酰氧基(例如甲磺酰氧基、三氟甲磺酰氧基等)，或(v)可被1～4個C1-6烷基或鹵素取代的C6-10芳基磺酰氧基，例如，對甲苯磺酰氧基、對溴苯磺酰氧基等。制法A本發(fā)明化合物的原料化合物(IV)或(VII)可按Agric.Biol.Chem.，51，9，2563(1989)、J.Am.Chem.Soc.，116，4326(1994)記載的公知方法或參考這些方法合成。制法B本發(fā)明化合物的原料化合物(V)、(VII)或(VIII)可根據(jù)J.Am.Chem.Soc.，116，2382(1994)、美國專利第2476548號(USP-2476548)、J.Chem.Soc.，561，(1948)有機合成化學(xué)協(xié)會志，18卷，332頁(1960年)記載的公知方法或參考這些方法合成。制法C本制法是使化合物(IV)、(V)、(VI)或(VIII)與胺化合物(IX)或苯胺化合物(X)或(XI)反應(yīng)，得到本發(fā)明化合物(I-a)或(I-b)的方法。反應(yīng)在無溶劑條件或苯、甲苯或二甲苯等芳香族烴類，乙醚、四氫呋喃(THF)或二烷等醚類，二氯甲烷、1，2-二氯乙烷或氯仿等鹵化烴類，N，N-二甲基甲酰胺(DMF)、N，N-二甲基乙酰胺(DMA)、N-甲基吡咯烷酮、乙酸乙酯或乙腈等對反應(yīng)呈惰性的溶劑中，使用等摩爾或一方過量的化合物(IV)、(V)、(VI)或(VIII)和化合物(XI)、(X)或(XI)，在冷卻乃至加熱回流下進行。反應(yīng)溫度可根據(jù)化合物適當(dāng)決定。根據(jù)化合物，有時較好是在有機堿(較好為二異丙基乙胺、N-甲基嗎啉、吡啶、4-(N，N-二甲基氨基)吡啶)或金屬鹽類堿(較好為氫化鈉、碳酸鉀、碳酸鈉、碳酸氫鈉、氫氧化鈉、氫氧化鉀)的存在下進行。此外，根據(jù)化合物，在堿不存在時反應(yīng)，可使反應(yīng)順利進行，較為有利。本發(fā)明化合物(I)可用公知的手段，例如溶劑提取、液性變換、轉(zhuǎn)溶、析晶、重結(jié)晶、色譜等分離精制?；衔?III)、(IV)、(V)、(VI)、(VII)或(VIII)的原料化合物或其制藥學(xué)上容許的鹽，可用與上述相同的公知的手段等分離精制，但也可不經(jīng)分離而直接以反應(yīng)混合物作為下一工序的原料。上述制造法不受式中的取代基限定，而廣泛適用于本發(fā)明化合物有同樣取代基的場合。這樣制造的本發(fā)明化合物，可以游離形式，或作為其制藥學(xué)上容許的鹽分離、精制。分離、精制可用提取、濃縮、蒸餾、結(jié)晶、過濾、重結(jié)晶、各種色譜等通常的化學(xué)操作進行。各種異構(gòu)體的制造，可選擇適當(dāng)?shù)脑匣衔铮蚶卯悩?gòu)體之間的物理性質(zhì)差異加以分離。例如光學(xué)異構(gòu)體，可選擇適當(dāng)?shù)脑?，或通過外消旋化合物的拆分法(例如制得與一般光學(xué)活性堿的非對映異構(gòu)鹽進行拆分的方法等)，得到立體化學(xué)上的純異構(gòu)體。產(chǎn)業(yè)上利用的可能性本發(fā)明涉及以BEC1鉀通道抑制劑為有效成分的抗癡呆藥。準備海馬、大腦皮質(zhì)中BEC1鉀通道高表達的轉(zhuǎn)基因小鼠、分析其行動，結(jié)果表明該小鼠在下述Morris型水迷路學(xué)習(xí)試驗、被動回避學(xué)習(xí)試驗及恐怖條件學(xué)習(xí)試驗中，學(xué)習(xí)能力低下。此外，使用BEC1鉀通道的抗體，進行阿爾茨海默病患者的腦免疫染色試驗，提示其在海馬、大腦皮質(zhì)的神經(jīng)細胞上的表達增加，以上結(jié)果提示，阿爾茨海默病患者的海馬、大腦皮質(zhì)中的BEC1鉀通道的表達增加，通過使神經(jīng)細胞的興奮性降低，可能抑制與記憶學(xué)習(xí)有關(guān)的神經(jīng)傳導(dǎo)。進一步進行深入研究的結(jié)果是，發(fā)現(xiàn)BEC1鉀通道抑制劑，如代表性化合物實施例744所示的化合物，在小鼠被動回避學(xué)習(xí)試驗中對電驚厥休克(ECS)誘發(fā)的學(xué)習(xí)障礙顯示改善作用。以上證明，BEC1鉀通道抑制劑具有學(xué)習(xí)障礙改善作用，作為一般認為BEC1鉀通道參與的疾病，較好是癡呆的預(yù)防或治療劑是有用的。含有BEC1鉀通道抑制劑或其制藥學(xué)上容許的鹽的1種或2種以上為有效成分的制劑，可用通常制劑常用的載體或賦形劑、其他添加劑配制。作為制劑用載體或賦形劑，固體或液體均可，可列舉乳糖、硬脂酸鎂、淀粉、滑石粉、明膠、瓊脂、果膠、阿拉伯膠、橄欖油、麻油、可可脂、乙二醇等和其他常用的種類。給藥時可以是用片劑、丸劑、膠囊劑、顆粒劑、散劑、溶液劑等口服，或用靜注、肌注等注射劑、栓劑、經(jīng)皮等非經(jīng)口給藥的任一形態(tài)。劑量可考慮癥狀、患者年齡、性別等，根據(jù)每人情況適當(dāng)決定，通常成人每人1日1～1000mg，較好在50～200mg的范圍內(nèi)，每日1次或分數(shù)次口服，或成人每人1日1～500mg的范圍，每日1次或分數(shù)次靜脈注射，或1日1～24小時范圍內(nèi)靜脈內(nèi)連續(xù)給藥。當(dāng)然如前所述，由于劑量隨各種條件而變動，有時用少于上述劑量范圍的量已經(jīng)足夠。本發(fā)明的口服固體組合物，可采用片劑、散劑、顆粒劑等劑型。這樣的固體組合物中，1種或以上的活性物質(zhì)與至少1種惰性稀釋劑，例如乳糖、甘露醇、葡萄糖、羥丙纖維素、微晶纖維素、淀粉、聚乙烯吡咯烷酮、硅鋁酸鎂混合。根據(jù)常法，組合物還可含有惰性稀釋劑以外的添加劑，如硬酯酸鎂等潤滑劑、纖維素乙醇酸鈣類崩解劑、乳糖等穩(wěn)定劑、谷氨酸或天冬氨酸等助溶劑。片劑或丸劑根據(jù)需要也可包以蔗糖、明膠、羥丙纖維素、羥丙甲纖維素鄰苯二甲酸酯等的糖衣或胃溶性或腸溶性物質(zhì)的膜。口服的液體組合物，包括藥劑上容許的乳劑、溶液劑、懸浮劑、糖漿劑、酏劑等，含有一般所用的惰性稀釋劑，例如精制水、乙醇。這些組合物也可含有惰性稀釋劑以外的濕潤劑、懸浮劑等助劑、甜味劑、調(diào)味劑、芳香劑、防腐劑。非口服的注射劑包含無菌的水性或非水性的溶液劑、懸浮劑、乳劑。水性溶液劑、懸浮劑含有注射用蒸餾水及生理鹽水。非水性溶液劑、懸浮劑，含有丙二醇，聚乙二醇，橄欖油等植物油，乙醇等醇類，吐溫80等。這樣的組合物還可含有防腐劑、濕潤劑、乳化劑、分散劑、穩(wěn)定劑(例如乳糖)、助溶劑(例如谷氨酸、天冬氨酸)等助劑。它們例如可通過除菌濾器過濾、配合殺菌劑或照射而滅菌。此外，也可制造無菌的固體組合物，在使用前以無菌水或無菌的注射用溶劑溶解后使用。實施發(fā)明的最佳方式(實施例)下面通過實施例更詳細地說明本發(fā)明，但本發(fā)明并不受這些實施例限制。此外，實施例所用的原料化合物的制造方法作為參考例說明。以下記載的％，無特別說明時表示重量百分數(shù)。本文中所用的其他符號表示下列意義。表中符號的含義如下所述。Ex實施例編號Ref參考例編號F氟，Cl氯，NO2硝基，OH羥基，CN氰基，Me甲基，Et乙基，Ph苯基，Py吡啶，Py-2-ylCH2NH吡啶-2-基甲基氨基，Py-3-ylCH2NH吡啶-3-基甲基氨基，Py-4-ylCH2NH吡啶-4-基甲基氨基，CF3三氟甲基，iPr異丙基，Pen戊基，cPr環(huán)丙基，cHex環(huán)己基，Bzl芐基，Bz苯甲酰基，diMePhNH二甲基苯基氨基，diMeOPhNH二甲氧基苯基氨基，diClPhNH二氯苯基氨基，diCF3PhNH二(三氟甲基苯基氨基)，Ac乙?；?，AcOEt乙酸乙酯，free游離體。NMR核磁共振譜(以四甲基硅烷(TMS)作內(nèi)標測定(以ppm表示))。1H-NMR譜，用TMS作內(nèi)標時的化學(xué)位移值表示，用下列略語表示信號。S單峰，d雙峰，t三重峰，q四重峰，br寬，m多重峰。m.p.熔點(℃)(熔點用柳本制熔點測定器YanakoMP-S3測定，未經(jīng)校正)。MSFAB-MS，MASSESI-MS，HPLCrtHPLC保留時間測定裝置HPLCWATERS制2790分離組件MSmicromass制ZMDPDA檢測器WATERS制996光電二極管陣列檢測器測定條件柱為和光純藥工業(yè)制的WAKOSIL-25C18AR型，2.0mm，I.D.×30mm。柱溫35℃流動相A液＝5mm三氟乙酸水溶液，B液＝甲醇檢測波長254nm或210nm進樣量5μl流速1.2ml/min流動相的混合比，初期溶劑條件為10％流動相B，其后4分鐘內(nèi)以線性梯度增加到100％流動相B，繼續(xù)0.5分鐘用100％流動相B。用參考例說明原料化合物。參考例1將2，4-二氯-6-苯胺基-1，3，5-三嗪2.41g溶于乙腈20ml，在其中加二異丙基乙胺2.09ml，對氟苯胺1.23g，于室溫攪拌過夜。在反應(yīng)液中加水后，用乙酸乙酯提取，有機層用1M鹽酸和飽和食鹽水洗滌后，以無水硫酸鎂干燥。對減壓蒸除溶劑所得的殘渣進行硅膠柱色譜分離，以乙酸乙酯∶正己烷(1∶9)洗脫，所得粗品用苯結(jié)晶化，得白色固體6-氯-N-(4-氟苯基)-N′-苯基-1，3，5-三嗪-2，4-二胺2.25g。與參考例1同樣合成下表4所示參考例2～5的化合物。參考例6將4，5-二氯-N-(4-氟苯基)-1，3，5-三嗪2.59g溶于乙腈20ml，在其中加二異丙基乙胺2.09ml，對甲苯胺1.18g，于室溫攪拌過夜。在反應(yīng)液中加水后，以乙酸乙酯提取，有機層用1M鹽酸和飽和食鹽水洗滌后，以無水硫酸鎂干燥。對減壓蒸除溶劑所得殘渣進行硅膠柱色譜分離，以乙酸乙酯∶正己烷(1∶9)洗脫。所得粗品用苯結(jié)晶，得白色固體6-氯-N-(4-氟苯基)-N′-(4-甲基苯基)-1，3，5-三嗪-2，4-二胺2.74g。與參考例6同樣合成下表4所示的參考例7～12的化合物。實施例1將6-氯-N，N′-二苯基-1，3，5-三嗪-2，4-二胺200mg溶于乙腈10.0ml，在其中加4-(氨基甲基)吡啶145mg和二異丙基乙胺0.585ml，于80℃攪拌過夜。反應(yīng)液冷卻至室溫后，加水，以氯仿提取。有機層以5％檸檬酸水溶液、飽和食鹽水洗滌，以無水硫酸鎂干燥。對減壓蒸除溶劑所得的殘渣進行硅膠柱色譜分離，以乙酸乙酯∶正己烷(2∶1)洗脫，所得粗品用乙酸乙酯/正己烷結(jié)晶，得淡紅色結(jié)晶N，N′-二苯基-N″-(4-吡啶基甲基)-1，3，5-三嗪-2，4，6-三胺107mg。與實施例1同樣，合成下表5～7，下表28～35所示實施例2～38及實施例740～815的化合物。實施例39將(4，6-二氯-1，3，5-三嗪-2-基)異丙胺207mg溶于乙腈10.0mg，在其中加4-甲氧基苯胺369mg，于80℃攪拌3日。將反應(yīng)液冷卻至室溫后，加水以乙酸乙酯提取。有機層用1M鹽酸水溶液、飽和食鹽水洗滌，以無水硫酸鎂干燥。對減壓蒸除溶劑所得的殘渣用硅膠柱色譜進行分離，以乙酸乙酯∶正己烷(2∶1)洗脫，得粗品。將粗品溶于乙酸乙酯，在其中加4M鹽酸乙酸乙酯溶液，對減壓蒸除溶劑所得殘渣由乙酸乙酯結(jié)晶化，得無色結(jié)晶N-異丙基-N′，N″-雙(4-甲氧基苯基)-1，3，5-三嗪-1，3，5-三胺鹽酸鹽332mg。與實施例39同樣，合成下表7所示實施例40～44的化合物。實施例45將參考例1合成的6-氯-N-(4-氟苯基)-N′-苯基-1，3，5-三嗪-2，4-二胺316mg溶于乙腈10.0ml，在其中加二異丙基乙胺0.523ml、異丙胺0.170ml，于80℃攪拌過夜。將反應(yīng)液冷卻至室溫后，加水以乙酸乙酯提取。有機層用5％檸檬酸水溶液、飽和食鹽水洗滌，以無水硫酸鎂干燥。對減壓蒸除溶劑所得的殘渣進行硅膠柱色譜分離，以乙酸乙酯∶正己烷(2∶1)洗脫，得粗品。將該粗品溶于乙酸乙酯，在其中加4M鹽酸乙酸乙酯溶液，對減壓蒸除溶劑所得的殘渣由乙酸乙酯結(jié)晶化，得無色結(jié)晶N-(4-氟苯基)-N′-異丙基-N″-苯基-1，3，5-三嗪-2，4，6-三胺鹽酸鹽327mg。與實施例45同樣合成下表8所示的實施例46～50的化合物。實施例51(組合化學(xué)合成例)在6-氯-N，N′-二苯基-1，3，5-三嗪-2，4-二胺8.9mg(30μmol)的乙腈400μl和N-甲基吡咯烷酮120μl的混合溶液中，加入對氟芐胺7.5mg(60μmol)和二異丙基乙胺52μl，于80℃攪拌3小時。將反應(yīng)液過濾后，注入分離用LC-MS裝置，收集含所要求的分子量的部分。蒸除溶劑，得N，N′-二苯基-N″-(4-氟芐基)-1，3，5-三嗪-2，4，6-三胺6.1mg(收率45％)。用分析用LC-MS，測得保留時間為2.77分鐘，純度為93％。與實施例51同樣，合成下表9～18所示的實施例52～418的化合物。實施例419在6-氯-N，N′-二苯基-1，3，5-三嗪-2，4-二胺8.9mg(30μmol)的乙腈400μl和N-甲基吡咯烷酮120μl的混合溶液中，加入2-氟苯胺6.7mg(60μmol)，于80℃攪拌3小時。將反應(yīng)液過濾后，注入分離用LC-MS裝置，收集含所要求的分子量的部分。蒸除溶劑，得N，N′-二苯基-N″-(2-氟苯基)-1，3，5-三嗪-2，4，6-三胺6.0mg(收率54％)。用分析用LC-MS，確定保留時間為3.01分鐘，純度為94％。與實施例419同樣，合成下表19～22所示的實施例420～583的化合物。實施例584將2，6-二氯-N-異丙基-1，3，5-三嗪-4-胺10mg溶于N-甲基-2-吡咯烷酮600μl，在其中加2-氟苯胺的0.5mMN，N-二甲基甲酰胺溶液400μl、二異丙基乙胺26μl，于120℃攪拌3日。加Algonote公司的PS-trisamine(4.27mmol/g)50mg，再于120℃攪拌7小時。將反應(yīng)液冷卻至50℃后，加入Algonote公司的PS-苯甲醛(1.53mmol/g)50mg，再于50℃攪拌16小時。將反應(yīng)液冷卻至室溫后，加飽和碳酸氫鈉水溶液及氯仿，攪拌。將溶液過濾后，有機層用無水硫酸鈉干燥，減壓蒸除溶劑，得褐色樹脂狀物質(zhì)N，N′-二-(2-氟苯基)-N″-異丙基-1，3，5-三嗪-2，4，6-三胺7mg。與實施例584同樣，合成下表23～24所示的實施例585～636的化合物。實施例637將6-氯-N-異丙基-N′-苯基-1，3，5-三嗪-2，4-二胺14mg溶于N-甲基-2-吡咯烷酮800μl，在其中加2-氟苯胺的0.5mMN，N-二甲基甲酰胺溶液200μl、4M鹽酸/二烷50μl，于80℃攪拌7小時。反應(yīng)冷卻至60℃后，在反應(yīng)液中加Algonote公司的PS-trisamine(4.27mmol/g)50mg和PS-苯甲醛(1.53mmol/g)50mg，再于60℃攪拌16小時。將反應(yīng)液冷卻至室溫后，加飽和碳酸氫鈉水溶液和氯仿。攪拌。將溶液過濾后有機層用無水硫酸鈉干燥，減壓蒸除溶劑，得褐樹脂狀物質(zhì)N-(2-氟苯基)-N′-異丙基-N″-苯基-1，3，5-三嗪-2，4，6-三胺13mg。與實施例637同樣，合成下表24～27所示的實施例638～739所示的化合物。實施例816在實施例753合成的N-(4-氟苯基)-N′-[(6-甲氧基吡啶-3-基)甲基]-N″-苯基-1，3，5-三嗪-2，4，6-三胺鹽酸鹽565mg中加25％氫溴酸乙酸溶液5ml及48％氫溴酸水溶液1ml，于80℃攪拌6小時。減壓蒸除反應(yīng)溶液后，依次加入乙酸乙酯及碳酸氫鈉水溶液，以乙酸乙酯提取。有機層用飽和食鹽水洗滌，以無水硫酸鎂干燥。對減壓蒸除溶劑所得的殘渣進行硅膠柱色譜分離，以氯仿∶甲醇(99∶1)洗脫，得粗品。將該粗品溶于乙酸乙酯，在其中加4M的鹽酸乙酸乙酯溶液，濾出并干燥生成的結(jié)晶，得無色結(jié)晶5-[({4-苯胺基-6-[(4-氟苯基)氨基]-1，3，5-三嗪-2-基}氨基)甲基]吡啶-2(1H)-酮鹽酸鹽195mg。與實施例816同樣，合成下表35所示的實施例817及818的化合物。實施例819將實施例758合成的{6-[({4-苯胺基-6-[(4-氟苯基)氨基]-1，3，5-三嗪-2-基}氨基)甲基]吡啶-2-基}氨基甲酸叔丁酯鹽酸鹽250mg溶于乙酸乙酯10.0ml，在其中加4M的鹽酸乙酸乙酯溶液10.0ml，于室溫攪拌4小時。濾出并干燥生成的淡黃色結(jié)晶，得淡黃色結(jié)晶N-[(6-氨基吡啶-2-基)甲基]-N′-(4-氟苯基)-N″-苯基-1，3，5-三嗪-2，4，6-三胺鹽酸鹽190mg。實施例820將實施例767合成的N-(4-氟苯基)-N′-{[1-(4-甲氧基芐基)-1H-1，2，4-三唑-5-基]甲基}-N″-苯基-1，3，5-三嗪-2，4，6-三胺鹽酸鹽360mg溶于三氟乙酸5ml，于70℃攪拌過夜。減壓蒸除反應(yīng)溶液后，依次加乙酸乙酯及碳酸氫鈉水溶液，以乙酸乙酯提取。有機層用飽和食鹽水洗滌，以無水硫酸鎂干燥。對減壓蒸除溶劑所得的殘渣進行硅膠柱色譜分離，以氯仿∶甲醇(92∶8)洗脫，得粗品。將粗品溶于乙酸乙酯，在其中加4M的鹽酸乙酸乙酯溶液，濾出并干燥所生成的結(jié)晶，得無色結(jié)晶N-(4-氟苯基)-N′-苯基-N″-(1H-1，2，4-三唑-3-基甲基)-1，3，5-三嗪-2，4，6-三胺鹽酸鹽268mg。實施例821將[(1-三苯甲基-1H-咪唑-4-基)甲基]胺678mg溶于乙腈10.0ml，在其中加入二異丙基乙胺0.52ml及參考例1合成的6-氯-N-(4-氟苯基)-N′-苯基-1，3，5-三嗪-2，4，6-二胺316mg，于80℃攪拌3日。將反應(yīng)液冷卻至室溫后，加水，以乙酸乙酯提取。有機層用檸檬酸水溶液、飽和食鹽水洗滌，以無水硫酸鎂干燥。對減壓蒸除劑所得的殘渣進行硅膠柱色譜分離，以氯仿∶甲醇(99∶1)洗脫，得粗品。該粗品溶于乙酸9ml和水1，于70℃攪拌2小時。將反應(yīng)溶液減壓蒸除后，依次加乙酸乙酯和碳酸氫鈉水溶液，用乙酸乙酯提取。有機層以飽和食鹽水洗滌，用無水硫酸鎂干燥。對減壓蒸除溶劑所得的殘渣進行硅膠柱色譜分離，用氯仿∶甲醇(90∶10)洗脫，得粗品。將此粗品溶于乙酸乙酯，在其中加4M的鹽酸乙酸乙酯溶液，濾出并干燥生成的結(jié)晶，得無色結(jié)晶N-(4-氟苯基)-N′-(1H-咪唑-4-基甲基)-N″-苯基-1，3，5-三嗪-2，4，6-三胺鹽酸鹽306mg。在以下表4～35中表示參考例及實施例化合物的結(jié)構(gòu)及物理性質(zhì)值。此外，與前述實施例同樣可合成下表36～39中所示的化合物。表中的符號No表示化合物編號。實施例822(試驗法)以86Rb離子釋放量作為指標的化合物的BEC1抑制活性測定法參照WO99/37677記載的方法，以表達BEC1的細胞釋放的放射性同位素86Rb離子作為指標，測定BEC1通道的活性。即，把攝入86Rb離子的表達BEC1的細胞以100mMKCl刺激時，由該細胞釋放的放射活性作為BEC1的通道活性。讓穩(wěn)定表達BEC1的細胞于86RbCl(0.5μCi/ml)存在下培養(yǎng)(3小時，37℃)，使86Rb離子被攝入細胞，用HEPES緩沖生理鹽水(pH7.4，2.5mMKCl)洗滌3次，除去未被攝入的86Rb離子。將該細胞用含供試化合物的HEPES緩沖生理鹽水于室溫培養(yǎng)15分鐘，然后用含相同化合物并含100mMKCl的HEPES緩沖液(pH7.4)于室溫再培養(yǎng)5分鐘。回收細胞外液后，殘留的細胞用0.1NNaOH溶解回收。分別測定細胞外液與細胞溶解的切倫科夫放射活性，將其和作為總放射活性。86Rb離子釋放量以細胞外液放射活性對總放射活性的百分比表示。將化合物存在時得到的值作為測定值，將化合物不存在時得到的值作為對照值，將不用100mMKCl刺激時得出的值作為空白值。化合物的抑制作用用抑制％，即(對照值一測定值)×100/(對照值-空白值)表示，或用抑制％求得的IC50值表示。代表性化合物的試驗結(jié)果如下表2及3所示，確認該化合物具有BEC1鉀通道抑制作用。表達BEC1的細胞采用以中國田鼠卵巢細胞二氫葉酸還原酶(dhfr)缺陷株參照WO99/37677記載的方法準備的BEC1穩(wěn)定表達細胞。試驗結(jié)果供試化合物的濃度為3μM時顯示的抑制率實施例823用電生理學(xué)方法評價化合物引起的BEC1電流抑制活性用全細胞電壓鉗法將表達BEC1的細胞的膜電位固定，測定全細胞電流，細胞外液用140mMNaCl，5.4mMKCl，2mMCaCl2，0.8mMMgCl2，15mM葡萄糖，10mMHEPES(添加NaOH，pH＝7.4)，細胞內(nèi)液(膜片電極液)用125mMKCl，1mMCaCl2，2mMMgCl2，11mMEGTA，10mMHEPES(添加KOH，pH＝7.2)。通過去極化，使膜電位從-90mV變?yōu)?mV，引起連續(xù)的外向電流。比較在藥物不存在時的外向電流的強度(對照值)與供試化合物給予時的電流強度(測定值)，求出抑制％[(測定值/對照值)×100]。試驗結(jié)果結(jié)果表明，實施例13的化合物在1mM的濃度顯示50％以上的抑制。實施例824轉(zhuǎn)基因小鼠的制作<制作BEC1過度表達的轉(zhuǎn)基因小鼠時所用導(dǎo)入基因的構(gòu)建>用于制作有序列編號2記載的氨基酸序列的BEC1過度表達的轉(zhuǎn)基因小鼠的導(dǎo)入基因，由α-鈣調(diào)蛋白依賴性激酶II基因啟動子域的下游連結(jié)具有5’內(nèi)含子和加poly(A)信號的BEC1CDNA(序列編號1)的基因構(gòu)成。α-鈣調(diào)蛋白依賴性激酶II的啟動子域，是通過以C57BL/6小鼠基因組DNA作模板進行PCR，作為具有相互重疊的部分的兩片斷取得的。C57BL/6小鼠的基因組DNA是從該小鼠的血液用基因組DNA提取試劑盒(QIAampDNABloodMidiKit，QIAGEN公司)精制的。引物是根據(jù)基因數(shù)據(jù)庫GenBank登錄的序列(登記號AJ222796)為基礎(chǔ)設(shè)計的。正向引物是使用序列編號3表示的堿基序列構(gòu)成的寡核苷酸，得到4.6Kb的基因片斷。AatII識別序列被加到上述正向引物的5’端。再使用序列編號5表示的堿基序列構(gòu)成的寡核苷酸作正向引物，使用序列編號6表示的堿基序列構(gòu)成的寡核苷酸作反向引物，得到3.7Kb的基因片斷。在上述反向引物的5’端加上SalI識別序列。各自的PCR，用DNA聚合酶(PfuTurbo，Stratagene公司)于99℃(1分鐘)熱變性后，經(jīng)99℃(15秒)、58℃(15秒)，75℃(10分)45循環(huán)，或95℃(1分鐘)熱變性后，經(jīng)95℃(15秒)、62℃(15秒)、75℃(8分)40循環(huán)，所得的基因片斷克隆到克隆載體(pCR-XL-TOPO質(zhì)粒，Invitrogen公司)。在4.6Kb片斷與3.7Kb片斷的重疊部分存在內(nèi)源性XmaI識別序列。用限制酶AatII及XmaI消化4.6Kb片斷，用限制酶XmaI及SalI消化3.7Kb片斷。將所得的各片斷連結(jié)，利用AatII及SalI識別序列克隆至質(zhì)粒pUC18(東洋紡績株式會社)。用以上操作得到目標的α-鈣調(diào)蛋白依賴性激酶II啟動子域。另一方面，BEC1CDNA(序列編號1)，作為含內(nèi)含子和加polyA信號的片斷，通過以表達鉀通道的載體pME-E1(WO99/37677記載)作模板經(jīng)PCR得到。設(shè)計用序列編號7表示的堿基序列組成的寡核苷酸作正向引物，設(shè)計用序列編號8表示的堿基序列組成的寡核苷酸作反向引物，它們是分別從5’內(nèi)含子的上游序列和加polyA信號的下游序列設(shè)計的。上述正向引物中加上SalI識別序列，反向引物中加上KpnI和NotI識別序列。PCR的實施是用DNA聚合酶(PfuTurbo，Stratagene公司)96℃(1分鐘)熱變性后，經(jīng)96℃(15秒)、60℃(15秒)、75℃(8分)30循環(huán)。所得的3.7Kb片斷克隆至克隆載體(pCR-XL-TOPO質(zhì)粒，Invitrogen公司)。同一片斷利用SpeI識別序列和KpnI識別序列亞克隆入質(zhì)粒pUC18(東洋紡績株式會社)，再在其上游利用AatII識別序列和SalI識別序列亞克隆至上述α-鈣調(diào)蛋白依賴性激酶II的啟動子域。經(jīng)以上操作，得到帶有制作最終的BEC1過度表達的轉(zhuǎn)基因小鼠用的導(dǎo)入基因(12kb)的質(zhì)粒(命名為pCM-E1質(zhì)粒)。<BEC1過度表達的轉(zhuǎn)基因小鼠的制作與鑒定>制作BEC1過度表達的轉(zhuǎn)基因小鼠用的導(dǎo)入基因(12kb)用AatII和NotI限制酶從pCM-E1切下后分離精制。所得的該基因顯微注射到C57BL/6和DBA2小鼠的F1雜交小鼠的受精卵283個中，將該受精卵移植入假親ICR小鼠的輸卵管(Hogan，B.等(1986).Manipulatingthemouseembryoalaboratorymanual，Plainview，NewYorkColdHarborPress)。讓妊娠小鼠自然分娩，對所得的仔小鼠81只進行轉(zhuǎn)基因小鼠的鑒定。為鑒定轉(zhuǎn)基因小鼠，將從仔鼠尾部分離的基因組DNA作為模板，進行PCR。用來自小鼠尾部的基因組DNA提取試劑盒(MagExtractor-Genome-，東洋紡績株式會社)精制基因組DNA。從BEC1CDNA序列(序列編號1)設(shè)計序列編號9表示的堿基序列組成的寡核苷酸作正向引物，序列編號10表示的堿基序列組成的寡核苷酸作反向引物，如用它們進行PCR，來自導(dǎo)入基因的245-bp片斷、來自小鼠基因組DNA的小鼠BEC1作為含有93-bp內(nèi)含子的338-bp片斷會擴增。用相同的引物，對來自所得到的仔鼠的基因組DNA進行PCR。PCR是使用DNA聚合酶(AmpliTaq，Roche公司)，于94℃(1分鐘)進行熱變性后，經(jīng)94℃(15秒)、60℃(15秒)、72℃(30秒)35循環(huán)。其結(jié)果是，鑒定出81只仔鼠中16只為轉(zhuǎn)基因小鼠。<BEC1mRNA的定量>為確認導(dǎo)入的基因?qū)嶋H發(fā)揮功能，BEC1mRNA過度表達，分析轉(zhuǎn)基因小鼠腦中BEC1mRNA的表達。為得到摘出腦所用的F1代小鼠，使轉(zhuǎn)基因小鼠16只中的11只與C57BL/6小鼠交配。結(jié)果確認5只轉(zhuǎn)基因小鼠其F1代小鼠的導(dǎo)入基因播散。從所得的F1代轉(zhuǎn)基因小鼠(4周齡)摘出前腦和小腦，分別分離RNA。各RNA為防止基因組DNA混入，以DNase(Promega公司)消化。用PRISM770(ABI公司)和熒光試劑SYBRGreen(MolecularProbes公司)通過實時PCR對所得的RNA中的BEC1mRNA拷貝數(shù)進行定量。采用由各RNA以逆轉(zhuǎn)錄酶-聚合酶鏈式反應(yīng)試劑盒(AdvantageRT-for-PCRKit，Clontech公司)合成的單鏈CDNA，作為實時PCR的模板。從導(dǎo)入基因人BEC1和大鼠及小鼠BEC1的共同序列設(shè)計由序列編號11表示的堿基序列組成的寡核苷酸作為正向引物，由序列編號12表示的堿基序列組成的寡核苷酸作為反向引物。實時PCR的結(jié)果，發(fā)現(xiàn)5個系統(tǒng)的轉(zhuǎn)基因小鼠中有3個系統(tǒng)(#6-5，#7-7，#9-5)存在前腦選擇性的BEC1mRNA過度表達，約為野生型的10倍。選擇系統(tǒng)#9-5，再對腦內(nèi)各部位(大腦皮質(zhì)、海馬、紋狀體、下丘腦、丘腦、中腦、腦干、小腦)的BEC1mRNA表達量，將野生型小鼠和轉(zhuǎn)基因小鼠加以比較。結(jié)果確認轉(zhuǎn)基因小鼠的BEC1mRNA過度表達，在野生型也發(fā)現(xiàn)表達的大腦皮質(zhì)、海馬、紋狀體較為顯著。實施例825<BEC1過度表達的轉(zhuǎn)基因小鼠在Morris式水迷路試驗中的學(xué)習(xí)行為分析>為分析BEC1過度表達對學(xué)習(xí)行為的作用，比較了#9-5系統(tǒng)的轉(zhuǎn)基因小鼠和野生型小鼠在Morris式水迷路中的學(xué)習(xí)行為。用出生后10周齡的雄性轉(zhuǎn)基因小鼠(12只)和野生型小鼠(15只)。在直徑100cm的圓形水池中盛放用顏料使之變白濁的水，水面下5mm的位置設(shè)置直徑10cm的圓形平臺。實驗時室溫及水溫為23℃。放入水池的小鼠的游泳軌跡用水迷路圖像解析裝置(NIHimage-小原醫(yī)科產(chǎn)業(yè))記錄分析，測定到達平臺的時間、將水池分成4區(qū)時在每一區(qū)的滯留時間，每次訓(xùn)練70秒，在5天內(nèi)每天進行3次訓(xùn)練。在訓(xùn)練第一天兩組到達平臺所需時間幾乎相同，而訓(xùn)練開始第3天以后轉(zhuǎn)基因小鼠所需時間比野生型延長。而訓(xùn)練的最后一天，到達平臺所需時間(平均值±標準誤差)，野生型為6.9±1.0秒，轉(zhuǎn)基因小鼠為18.1±6.4秒，統(tǒng)計學(xué)上有顯著差異(p＜0.05二元配置方差分析)。訓(xùn)練結(jié)束后，將小鼠放入已除去平臺的水池40秒鐘，測定小鼠在平臺存在區(qū)域的滯留時間。結(jié)果轉(zhuǎn)基因小鼠的滯留時間比野生型短，且具統(tǒng)計意義(p＜0.01Studentt檢驗)。以上結(jié)果表明轉(zhuǎn)基因小鼠記憶學(xué)習(xí)平臺位置的能力低下。實施例826<BEC1過度表達的轉(zhuǎn)基因小鼠在被動回避試驗中的學(xué)習(xí)行為分析>用出生后8周齡的雌性#9-5系統(tǒng)轉(zhuǎn)基因小鼠(6只)和野生型小鼠(8只)。將小鼠放入小鼠用明暗實驗裝置(小原醫(yī)科產(chǎn)業(yè))的明箱部分，在小鼠進入暗箱的時間點給予60V、2秒鐘的恒電壓刺激。24小時后再將小鼠放入明箱，測定這時的進入暗箱的潛伏期。結(jié)果，轉(zhuǎn)基因小鼠進入暗箱的潛伏期為167秒(中位值)，而野生型小鼠為600秒(中位值)，明顯較短(p＜0.05Wilecoxon秩和檢驗)。表明轉(zhuǎn)基因小鼠經(jīng)常與暗箱有關(guān)的電刺激的學(xué)習(xí)能力低下。實施例827電驚厥休克(ECS)誘導(dǎo)的學(xué)習(xí)障礙(小鼠被動回避反應(yīng)試驗)參考文獻(EurJPharmacology，321273-278，1997)如下進行評價。動物用ddY系雄性小鼠(SLC，訓(xùn)練時間5周齡)以31～32只作一組。(實驗步驟)藥品配制將甲基纖維素溶解于生理鹽水中，濃度為0.5％(以下稱0.5％甲基纖維素溶液)，使供試化合物懸浮于其中。給藥容量為每1kg體重10ml。對照組每kg體重給予10ml0.5％甲基纖維素溶液(以下稱載體)。訓(xùn)練(1)實驗第1日將小鼠在實驗室放置1小時以上。(2)將小鼠放入被動回避反應(yīng)試驗實驗裝置的明室，放置30秒鐘。其后打開閘門。如小鼠進入暗室，便受到電擊(強度60V，延遲1秒，持續(xù)3秒)，如返回明室，關(guān)住閘門，在明室中放置30秒鐘。(3)取出小鼠，迅速(1分鐘以內(nèi))插入角膜電極，讓其電驚厥休克(ECS，50Hz，間隔20ms，持續(xù)10ms，幅度20mA，開啟(gate)1秒)。(4)腹腔內(nèi)給予供試化合物。(5)將其放回飼養(yǎng)籠中。(6)訓(xùn)練結(jié)束后，在實驗室放置60分鐘以上，然后送回飼養(yǎng)室。試驗(訓(xùn)練24小時后)(1)將動物在實驗室放置1小時以上。(2)將小鼠放入明室，放置30秒鐘后，開啟閘門。(3)記錄小鼠在打開閘門后直到穿過暗室的傳感器的時間(step-throughlatency)。最長測定時間為600秒。(4)采用step-throughlatency作為學(xué)習(xí)形成的指標。供試化合物的學(xué)習(xí)障礙改善作用根據(jù)(ECS負荷+給予載體)組與(ECS負荷+給予供試化合物)組的多組間雙側(cè)steel檢驗比較進行判定。p＜0.05認為有顯著差異。實施例744所示化合物腹腔內(nèi)給予的場合的最小有效劑量為3mg/kg。以上結(jié)果確認代表性化合物即實施例744所示的化合物具有BEC1鉀通道抑制活性，且在小鼠被動回避學(xué)習(xí)試驗中顯示改善電驚厥休克誘發(fā)的學(xué)習(xí)障礙的作用。表4(上式中的數(shù)字2～6表示R3及R5各自的結(jié)合位置。)表5(上式中的數(shù)字2～6表示R3及R5各自的結(jié)合位置。)表6(續(xù)表5)表7(續(xù)表6)表8(續(xù)表7)實施例41的化合物數(shù)據(jù)1鹽酸鹽m.p.184-1861H-NMR1.20(6H，d，J＝6.8Hz)，3.85-4.40(1H，m)，6.02(4H，s)，6.77-7.07(4H，m)，7.10-7.55(2H，m)，8.55(1H，brs)，9.85-10.85(2H，m)/DMSO-d6表9表10(續(xù)表9)表11(續(xù)表10)表12(續(xù)表11)表13(續(xù)表12)表14表15(續(xù)表14)表16表17(續(xù)表16)表18(續(xù)表17)表19表20(續(xù)表19)表21(續(xù)表20)表22表23表24(續(xù)表23)表25表26表27表28(上式中的數(shù)字2～6表示R3及R5各自的結(jié)合位置。)表29(續(xù)表28)表30(續(xù)表29)表31(續(xù)表30)表32(續(xù)表31)表33(續(xù)表32)表34(續(xù)表33)表35(續(xù)表34)表36(上式中的數(shù)字2～6表示R3及R5各自的結(jié)合位置。)表37(上式中的數(shù)字2～6表示R3及R5各自的結(jié)合位置。)表38(上式中的數(shù)字2～6表示R3及R5各自的結(jié)合位置。)表38(上式中的數(shù)字2～6表示R3及R5各自的結(jié)合位置。)序列表<110>山之內(nèi)制藥株式會社<120>2，4，6-三氨基-1，3，5-三嗪衍生物<130>Y0307-PCT<150>JP2002-028844<151>2002-2-5<160>12<170>PatentInversion3.0<210>1<211>3252<212>DNA<213>智人(Homosapiens)<220><221>CDS<222>(1)..(3252)<400>1atgccggccatgcggggcctcctggcgcctcagaacaccttcctggac48MetProAlaMetArgGlyLeuLeuAlaProGlnAsnThrPheLeuAsp151015accatcgctacgcgcttcgacggcacgcacagtaacttcgtgctgggc96ThrIleAlaThrArgPheAspGlyThrHisSerAsnPheValLeuGly202530aacgcccaggtggcggggctcttccccgtggtctactgctctgatggc144AsnAlaGlnValAlaGlyLeuPheProValValTyrCysSerAspGly354045ttctgtgacctcacgggcttctcccgggctgaggtcatgcagcggggc192PheCysAspLeuThrGlyPheSerArgAlaGluValMetGlnArgGly505560tgtgcctgctccttcctttatgggccagacaccagtgagctcgtccgc240CysAlaCysSerPheLeuTyrGlyProAspThrSerGluLeuValArg65707580caacagatccgcaaggccctggacgagcacaaggagttcaaggctgag288GlnGlnIleArgLysAlaLeuAspGluHisLysGluPheLysAlaGlu859095ctgatcctgtaccggaagagcgggctcccgttctggtgtctcctggat336LeuIleLeuTyrArgLysSerGlyLeuProPheTrpCysLeuLeuAsp100105110gtgatacccataaagaatgagaaaggggaggtggctctcttcctagtc384ValIleProIleLysAsnGluLysGlyGluValAlaLeuPheLeuVal115120125tctcacaaggacatcagcgaaaccaagaaccgagggggccccgacaga432SerHisLysAspIleSerGluThrLysAsnArgGlyGlyProAspArg130135140tggaaggagacaggtggtggccggcgccgatatggccgggcacgatcc480TrpLysGluThrGlyGlyGlyArgArgArgTyrGlyArgAlaArgSer145150155160aaaggcttcaatgccaaccggcggcggagccgggccgtgctctaccac528LysGlyPheAsnAlaAsnArgArgArgSerArgAlaValLeuTyrHis165170175ctgtccgggcacctgcagaagcagcccaagggcaagcacaagctcaat576LeuSerGlyHisLeuGlnLysGlnProLysGlyLysHisLysLeuAsn180185190aagggggtgtttggggagaaaccaaacttgcctgagtacaaagtagcc624LysGlyValPheGlyGluLysProAsnLeuProGluTyrLysValAla195200205gccatccggaagtcgcccttcatcctgttgcactgtggggcactgaga672AlaIleArgLysSerProPheIleLeuLeuHisCysGlyAlaLeuArg210215220gccacctgggatggcttcatcctgctcgccacactctatgtggctgtc720AlaThrTrpAspGlyPheIleLeuLeuAlaThrLeuTyrValAlaVal225230235240actgtgccctacagcgtgtgtgtgagcacagcacgggagcccagtgcc768ThrValProTyrSerValCysValSerThrAlaArgGluProSerAla245250255gcccgcggcccgcccagcgtctgtgacctggccgtggaggtcctcttc816AlaArgGlyProProSerValCysAspLeuAlaValGluValLeuPhe260265270atccttgacattgtgctgaatttccgtaccacattcgtgtccaagtcg864IleLeuAspIleValLeuAsnPheArgThrThrPheValSerLysSer275280285ggccaggtggtgtttgccccaaagtccatttgcctccactacgtcacc912GlyGlnValValPheAlaProLysSerIleCysLeuHisTyrValThr290295300acctggttcctgctggatgtcatcgcagcgctgccctttgacctgcta960ThrTrpPheLeuLeuAspValIleAlaAlaLeuProPheAspLeuLeu305310315320catgccttcaaggtcaacgtgtacttcggggcccatctgctgaagacg1008HisAlaPheLysValAsnValTyrPheGlyAlaHisLeuLeuLysThr325330335gtgcgcctgctgcgcctgctgcgcctgcttccgcggctggaccggtac1056ValArgLeuLeuArgLeuLeuArgLeuLeuProArgLeuAspArgTyr340345350tcgcagtacagcgccgtggtgctgacactgctcatggccgtgttcgcc1104SerGlnTyrSerAlaValValLeuThrLeuLeuMetAlaValPheAla355360365ctgctcgcgcactgggtcgcctgcgtctggttttacattggccagcgg1152LeuLeuAlaHisTrpValAlaCysValTrpPheTyrIleGlyGlnArg370375380gagatcgagagcagcgaatccgagctgcctgagattggctggctgcag1200GluIleGluSerSerGluSerGluLeuProGluIleGlyTrpLeuGln385390395400gagctggcccgccgactggagactccctactacctggtgggccggagg1248GluLeuAlaArgArgLeuGluThrProTyrTyrLeuValGlyArgArg405410415ccagctggagggaacagctccggccagagtgacaactgcagcagcagc1296ProAlaGlyGlyAsnSerSerGlyGlnSerAspAsnCysSerSerSer420425430agcgaggccaacgggacggggctggagctgctgggcggcccgtcgctg1344SerGluAlaAsnGlyThrGlyLeuGluLeuLeuGlyGlyProSerLeu435440445cgcagcgcctacatcacctccctctacttcgcactcagcagcctcacc1392ArgSerAlaTyrIleThrSerLeuTyrPheAlaLeuSerSerLeuThr450455460agcgtgggcttcggcaacgtgtccgccaacacggacaccgagaagatc1440SerValGlyPheGlyAsnValSerAlaAsnThrAspThrGluLysIle465470475480ttctccatctgcaccatgctcatcggcgccctgatgcacgcggtggtg1488PheSerIleCysThrMetLeuIleGlyAlaLeuMetHisAlaValVal485490495tttgggaacgtgacggccatcatccagcgcatgtacgcccgccgcttt1536PheGlyAsnValThrAlaIleIleGlnArgMetTyrAlaArgArgPhe500505510ctgtaccacagccgcacgcgcgacctgcgCgactacatccgcatccac1584LeuTyrHisSerArgThrArgAspLeuArgAspTyrIleArgIleHis515520525cgtatccccaagcccctcaagcagcgcatgctggagtacttccaggcc1632ArgIleProLysProLeuLysGlnArgMetLeuGluTyrPheGlnAla530535540acctgggcggtgaacaatggcatcgacaccaccgagctgctgcagagc1680ThrTrpAlaValAsnAsnGlyIleAspThrThrGluLeuLeuGlnSer545550555560ctccctgacgagctgcgcgcagacatcgccatgcacctgcacaaggag1728LeuProAspGluLeuArgAlaAspIleAlaMetHisLeuHisLysGlu565570575gtcctgcagctgccactgtttgaggcggccagccgcggctgcctgcgg1776ValLeuGlnLeuProLeuPheGluAlaAlaSerArgGlyCysLeuArg580585590gcactgtctctggccctgcggcccgccttctgcacgccgggcgagtac1824AlaLeuSerLeuAlaLeuArgProAlaPheCysThrProGlyGluTyr595600605ctcatccaccaaggcgatgccctgcaggccctctactttgtctgctct1872LeuIleHisGlnGlyAspAlaLeuGlnAlaLeuTyrPheValCysSer610615620ggctccatggaggtgctcaagggtggcaccgtgctcgccatcctaggg1920GlySerMetGluValLeuLysGlyGlyThrValLeuAlaIleLeuGly625630635640aagggcgacctgatcggctgtgagctgccccggcgggagcaggtggta1968LysGlyAspLeuIleGlyCysGluLeuProArgArgGluGlnValVal645650655aaggccaatgccgacgtgaaggggctgacgtactgcgtcctgcagtgt2016LysAlaAsnAlaAspValLysGlyLeuThrTyrCysValLeuGlnCys660665670ctgcagctggctggcctgcacgacagccttgcgctgtaccccgagttt2064LeuGlnLeuAlaGlyLeuHisAspSerLeuAlaLeuTyrProGluPhe675680685gccccgcgcttcagtcgtggcctccgaggggagctcagctacaacctg2112AlaProArgPheSerArgGlyLeuArgGlyGluLeuSerTyrAsnLeu690695700ggtgctgggggaggctctgcagaggtggacaccagctccctgagcggc2160GlyAlaGlyGlyGlySerAlaGluValAspThrSerSerLeuSerGly705710715720gacaatacccttatgtccacgctggaggagaaggagacagatggggag2208AspAsnThrLeuMetSerThrLeuGluGluLysGluThrAspGlyGlu725730735cagggccccacggtctccccagccccagctgatgagccctccagcccc2256GlnGlyProThrValSerProAlaProAlaAspGluProSerSerPro740745750ctgctgtcccctggctgcacctcctcatcctcagctgccaagctgcta2304LeuLeuSerProGlyCysThrSerSerSerSerAlaAlaLysLeuLeu755760765tccccacgtcgaacagcaccccggcctcgtctaggtggcagagggagg2352SerProArgArgThrAlaProArgProArgLeuGlyGlyArgGlyArg770775780ccaggcagggcaggggctttgaaggctgaggctggcccctctgctccc2400ProGlyArgAlaGlyAlaLeuLysAlaGluAlaGlyProSerAlaPro785790795800ccacgggccctagaggggctacggctgccccccatgccatggaatgtg2448ProArgAlaLeuGluGlyLeuArgLeuProProMetProTrpAsnVal805810815cccccagatctgagccccagggtagtagatggcattgaagacggctgt2496ProProAspLeuSerProArgValValAspGlyIleGluAspGlyCys820825830ggctcggaccagcccaagttctctttccgcgtgggccagtctggcccg2544GlySerAspGlnProLysPheSerPheArgValGlyGlnSerGlyPro835840845gaatgtagcagcagcccctcccctggaccagagagcggcctgctcact2592GluCysSerSerSerProSerProGlyProGluSerGlyLeuLeuThr850855860gttccccatgggcccagcgaggcaaggaacacagacacactggacaag2640ValProHisGlyProSerGluAlaArgAsnThrAspThrLeuAspLys865870875880cttcggcaggcggtgacagagctgtcagagcaggtgctgcagatgcgg2688LeuArgGlnAlaValThrGluLeuSerGluGlnValLeuGlnMetArg885890895gaaggactgcagtcacttcgccaggctgtgcagcttgtcctggcgccc2736GluGlyLeuGlnSerLeuArgGlnAlaValGlnLeuValLeuAlaPro900905910cacagggagggtccgtgccctcgggcatcgggagaggggccgtgccca2784HisArgGluGlyProCysProArgAlaSerGlyGluGlyProCysPro915920925gccagcacctccgggcttctgcagcctctgtgtgtggacactggggca2832AlaSerThrSerGlyLeuLeuGlnProLeuCysValAspThrGlyAla930935940tcctcctactgcctgcagcccccagctggctctgtcttgagtgggact2880SerSerTyrCysLeuGlnProProAlaGlySerValLeuSerGlyThr945950955960tggccccaccctcgtccggggcctcctcccctcatggcaccctggccc2928TrpProHisProArgProGlyProProProLeuMetAlaProTrpPro965970975tggggtcccccagcgtctcagagctccccctggcctcgagccacagct2976TrpGlyProProAlaSerGlnSerSerProTrpProArgAlaThrAla980985990ttctggacctccacctcagactcagagccccctgcctcaggagacctc3024PheTrpThrSerThrSerAspSerGluProProAlaSerGlyAspLeu99510001005tgctctgagcccagcacccctgcctcccctcctccttctgaggaa3069CysSerGluProSerThrProAlaSerProProProSerGluGlu101010151020ggggctaggactgggcccgcagagcctgtgagccaggctgaggct3114GlyAlaArgThrGlyProAlaGluProValSerGlnAlaGluAla102510301035accagcactggagagcccccaccagggtcagggggcctggccttg3159ThrSerThrGlyGluProProProGlySerGlyGlyLeuAlaLeu104010451050ccctgggacccccacagcctggagatggtgcttattggctgccat3204ProTrpAspProHisSerLeuGluMetValLeuIleGlyCysHis105510601065ggctctggcacagtccagtggacccaggaagaaggcacaggggtc3249GlySerGlyThrValGlnTrpThrGlnGluGluGlyThrGlyVal107010751080tga3252<210>2<211>1083<212>PRT<213>智人(Homosapiens)<400>2MetProAlaMetArgGlyLeuLeuAlaProGlnAsnThrPheLeuAsp151015ThrIleAlaThrArgPheAspGlyThrHisSerAsnPheValLeuGly202530AsnAlaGlnValAlaGlyLeuPheProValValTyrCysSerAspGly354045PheCysAspLeuThrGlyPheSerArgAlaGluValMetGlnArgGly505560CysAlaCysSerPheLeuTyrGlyProAspThrSerGluLeuValArg65707580GlnGlnIleArgLysAlaLeuAspGluHisLysGluPheLysAlaGlu859095LeuIleLeuTyrArgLysSerGlyLeuProPheTrpCysLeuLeuAsp100105110ValIleProIleLysAsnGluLysGlyGluValAlaLeuPheLeuVal115120125SerHisLysAspIleSerGluThrLysAsnArgGlyGlyProAspArg130135140TrpLysGluThrGlyGlyGlyArgArgArgTyrGlyArgAlaArgSer145150155160LysGlyPheAsnAlaAsnArgArgArgSerArgAlaValLeuTyrHis165170175LeuSerGlyHisLeuGlnLysGlnProLysGlyLysHisLysLeuAsn180185190LysGlyValPheGlyGluLysProAsnLeuProGluTyrLysValAla195200205AlaIleArgLysSerProPheIleLeuLeuHisCysGlyAlaLeuArg210215220AlaThrTrpAspGlyPheIleLeuLeuAlaThrLeuTyrValAlaVal225230235240ThrValProTyrSerValCysValSerThrAlaArgGluProSerAla245250255AlaArgGlyProProSerValCysAspLeuAlaValGluValLeuPhe260265270IleLeuAspIleValLeuAsnPheArgThrThrPheValSerLysSer275280285GlyGlnValValPheAlaProLysSerIleCysLeuHisTyrValThr290295300ThrTrpPheLeuLeuAspValIleAlaAlaLeuProPheAspLeuLeu305310315320HisAlaPheLysValAsnValTyrPheGlyAlaHisLeuLeuLysThr325330335ValArgLeuLeuArgLeuLeuArgLeuLeuProArgLeuAspArgTyr340345350SerGlnTyrSerAlaValValLeuThrLeuLeuMetAlaValPheAla355360365LeuLeuAlaHisTrpValAlaCysValTrpPheTyrIleGlyGlnArg370375380GluIleGluSerSerGluSerGluLeuProGluIleGlyTrpLeuGln385390395400GluLeuAlaArgArgLeuGluThrProTyrTyrLeuValGlyArgArg405410415ProAlaGlyGlyAsnSerSerGlyGlnSerAspAsnCysSerSerSer420425430SerGluAlaAsnGlyThrGlyLeuGluLeuLeuGlyGlyProSerLeu435440445ArgSerAlaTyrIleThrSerLeuTyrPheAlaLeuSerSerLeuThr450455460SerValGlyPheGlyAsnValSerAlaAsnThrAspThrGluLysIle465470475480PheSerIleCysThrMetLeuIleGlyAlaLeuMetHisAlaValVal485490495PheGlyAsnValThrAlaIleIleGlnArgMetTyrAlaArgArgPhe500505510LeuTyrHisSerArgThrArgAspLeuArgAspTyrIleArgIleHis515520525ArgIleProLysProLeuLysGlnArgMetLeuGluTyrPheGlnAla530535540ThrTrpAlaValAsnAsnGlyIleAspThrThrGluLeuLeuGlnSer545550555560LeuProAspGluLeuArgAlaAspIleAlaMetHisLeuHisLysGlu565570575ValLeuGlnLeuProLeuPheGluAlaAlaSerArgGlyCysLeuArg580585590AlaLeuSerLeuAlaLeuArgProAlaPheCysThrProGlyGluTyr595600605LeuIleHisGlnGlyAspAlaLeuGlnAlaLeuTyrPheValCysSer610615620GlySerMetGluValLeuLysGlyGlyThrValLeuAlaIleLeuGly625630635640LysGlyAspLeuIleGlyCysGluLeuProArgArgGluGlnValVal645650655LysAlaAsnAlaAspValLysGlyLeuThrTyrCysValLeuGlnCys660665670LeuGlnLeuAlaGlyLeuHisAspSerLeuAlaLeuTyrProGluPhe675680685AlaProArgPheSerArgGlyLeuArgGlyGluLeuSerTyrAsnLeu690695700GlyAlaGlyGlyGlySerAlaGluValAspThrSerSerLeuSerGly705710715720AspAsnThrLeuMetSerThrLeuGluGluLysGluThrAspGlyGlu725730735GlnGlyProThrValSerProAlaProAlaAspGluProSerSerPro740745750LeuLeuSerProGlyCysThrSerSerSerSerAlaAlaLysLeuLeu755760765SerProArgArgThrAlaProArgProArgLeuGlyGlyArgGlyArg770775780ProGlyArgAlaGlyAlaLeuLysAlaGluAlaGlyProSerAlaPro785790795800ProArgAlaLeuGluGlyLeuArgLeuProProMetProTrpAsnVal805810815ProProAspLeuSerProArgValValAspGlyIleGluAspGlyCys820825830GlySerAspGlnProLysPheSerPheArgValGlyGlnSerGlyPro835840845GluCysSerSerSerProSerProGlyProGluSerGlyLeuLeuThr850855860ValProHisGlyProSerGluAlaArgAsnThrAspThrLeuAspLys865870875880LeuArgGlnAlaValThrGluLeuSerGluGlnValLeuGlnMetArg885890895GluGlyLeuGlnSerLeuArgGlnAlaValGlnLeuValLeuAlaPro900905910HisArgGluGlyProCysProArgAlaSerGlyGluGlyProCysPro915920925AlaSerThrSerGlyLeuLeuGlnProLeuCysValAspThrGlyAla930935940SerSerTyrCysLeuGlnProProAlaGlySerValLeuSerGlyThr945950955960TrpProHisProArgProGlyProProProLeuMetAlaProTrpPro965970975TrpGlyProProAlaSerGlnSerSerProTrpProArgAlaThrAla980985990PheTrpThrSerThrSerAspSerGluProProAlaSerGlyAspLeu99510001005CysSerGluProSerThrProAlaSerProProProSerGluGlu101010151020GlyAlaArgThrGlyProAlaGluProValSerGlnAlaGluAla102510301035ThrSerThrGlyGluProProProGlySerGlyGlyLeuAlaLeu104010451050ProTrpAspProHisSerLeuGluMetValLeuIleGlyCysHis105510601065GlySerGlyThrValGlnTrpThrGlnGluGluGlyThrGlyVal107010751080<210>3<211>40<212>DNA<213>人工的<220><223>人工序列的描述人工合成的引物序列<400>3attcgacgtcgatcttttttccgtaaactcaataccaggc40<210>4<211>20<212>DNA<213>鼠(Mussp.)<400>4gcgggcatcaaggagtcaag20<210>5<211>20<212>DNA<213>鼠(Mussp.)<400>5ctcctgtccctcccgttgac20<210>6<211>29<212>DNA<213>人工的<220><223>人工序列的描述人工合成的引物序列<400>6acgcgtcgacctgcccgtgctcctgagtg29<210>7<211>29<212>DNA<213>人工的<220><223>人工序列的描述人工合成的引物序列<400>7acgcgtcgacccaagctctgaaaaaccag29<210>8<211>36<212>DNA<213>人工的<220><223>人工序列的描述人工合成的引物序列<400>8ggggtaccgcggccgcggggatccagacatgataag36<210>9<211>20<212>DNA<213>智人(Homosapiens)<400>9cgaggcaaggaacacagaca20<210>10<211>18<212>DNA<213>智人(Homosapiens)<400>10ggggctgcaggcagtagg18<210>11<211>20<212>DNA<213>智人(Homosapiens)<400>11agtcacttcgccaggctgtg20<210>12<211>18<212>DNA<213>智人(Homosapiens)<400>12ggggctgcaggcagtagg18權(quán)利要求1.以具有BEC1鉀通道抑制作用的物質(zhì)為有效成分的抗癡呆藥。2.具有BEC1鉀通道抑制作用的物質(zhì)是式(I)所示的2，4，6-三氨基-1，3，5-三嗪衍生物或其制藥學(xué)上容許的鹽的抗癡呆藥，式中符號含義如下所述R1或R2相同或不同，H，OH，烷基-O-，芳基-CO-，H2N，可被OH取代的烷基-NH，(烷基)2H，可被取代的烴基，可被取代的雜環(huán)，或R1、R2及相鄰的N可一起形成含氮雜環(huán)，該環(huán)可被取代，R3、R4、R5及R6相同或不同，(i)H，(ii)CN，(iii)NO2，(iv)鹵素，(v)可被(1)CN，(2)鹵素或(3)OH取代的低級烷基，(vi)環(huán)烷基，(vii)可被低級烷基取代的芳基，(ix)可被低級烷基取代的雜環(huán)，(x)R7R8N-(R7及R8相同或不同，(1)H，(2)可被芳基或R9-O-CO-取代的低級烷基(R9(1)H或可被芳基取代的低級烷基)，(xi)R10-T1-(R10(1)H，(2)可被芳基、HO-C1-10亞烷基-O-或HO取代的低級烷基，或(3)芳基，T1O或S)，或(xii)R11-T2-(R11(1)OH，(2)R7R8N-，(3)低級烷基-O-，(4)低級烷基，(5)芳基，或(6)雜環(huán)(T2CO或SO2))，而且，R3、R4及相鄰的C或者R5、R6及相鄰的C可一起形成雜環(huán)、環(huán)狀烴環(huán)，與苯環(huán)稠合。3.以式(I)表示的2，4，6-三氨基-1，3，5-三嗪衍生物或其制藥學(xué)上容許的鹽為有效成分的序列編號2所記載的BEC1鉀通道抑制劑。4.式(II)所示的2，4，6-三氨基-1，3，5-三嗪衍生物或其制藥學(xué)上容許的鹽，式中符號含義如下所述R1或R2相同或不同，H，OH，烷基-O-，芳基-CO-，H2N，可被OH取代的烷基-NH，(烷基)2N，可被取代的烴基，可被取代的雜環(huán)，或R1、R2及相鄰的N可一起形成含氮雜環(huán)，該環(huán)可被取代，R3、R4、R5及R6相同或不同，(i)H，(ii)CN，(iii)NO2，(iv)鹵素，(v)可被(1)CN，(2)鹵素或(3)OH取代的低級烷基，(vi)環(huán)烷基，(vii)可被低級烷基取代的芳基，(ix)可被低級烷基取代的雜環(huán)，(x)R7R8N-(R7及R8相同或不同，(1)H，(2)可被芳基或R9-O-CO-取代的低級烷基(R9(1)H或可被芳基取代的低級烷基)，(xi)R10-T1-(R10(1)H，(2)可被芳基、HO-C1-10亞烷基-O-或HO取代的低級烷基，或(3)芳基，T1O或S)，或(xii)R11-T2-(R11(1)OH，(2)R7R8N-，(3)低級烷基-O-，(4)低級烷基，(5)芳基，或(6)雜環(huán)(T2CO或SO2))，而且，R3、R4及相鄰的C或者R5、R6及相鄰的C可一起形成雜環(huán)、環(huán)狀烴環(huán)，與苯環(huán)稠合，但下列情況除外，上式(II)中R1及R2相同或不同，為(i)H，NH2，環(huán)己基，可被取代的苯基，Ra-(CH2)2-(RaHS，HO，R7R8N，COOH，乙氧基，CN，嗎啉基，氯)，可被以下①至⑤的取代基取代的烷基(①HOOC，②烷基-O-CO-，③可被取代的苯基，④R7R8NCONHCO，或⑤R7R8NCONHCO-)，鏈烯基，苯基-S-，苯基-SO2-，可被取代的苯基NHCS-，可被取代的苯基NHCO-，烷基-O-CO-，H2NCS，氯-COCH2-，可被取代的1，3，4-二唑-2-基甲基，或R1、R2及相鄰的C一起形成吡唑-1-基，吲哚-1-基，吲唑-2-基，哌啶-1-基或嗎啉-4-基，且R3、R4、R5及R6相同或不同，為H、鹵素、NO2、乙?；O、低級烷基-O-、HOOC-、低級烷基-O-CO-、H2NSO2-或低級烷基。5.由權(quán)利要求4所述的2，4，6-三氨基-1，3，5-三嗪衍生物或其制藥上容許的鹽形成的醫(yī)藥組合物。全文摘要本發(fā)明涉及以BEC1鉀通道抑制劑為有效成分的抗癡呆藥。已證明BEC1鉀通道抑制劑具有改善學(xué)習(xí)障礙的作用，作為被認為有BEC1鉀通道參與的疾病，較好是作為癡呆癥的預(yù)防或治療藥有用的。具體證明BEC1鉀通道抑制劑在體內(nèi)試驗中顯示改善學(xué)習(xí)障礙的作用。并發(fā)現(xiàn)具有2，4，6－三氨基－1，3，5－三嗪的化合物具備BEC1鉀通道抑制作用。文檔編號A61P25/28GK1939307SQ20061009589公開日2007年4月4日申請日期2003年2月3日優(yōu)先權(quán)日2002年2月5日發(fā)明者久保田秀樹,鈴木健師,三浦理憲,中居英一,八尋清,三宅哲,望月忍,中藤和博申請人:安斯泰來制藥有限公司