專利名稱：一種簡便的敵鼠和氯敵鼠測定的熒光分析方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及分析化學(xué)領(lǐng)域，尤其涉及一種靈敏的痕量敵鼠和氯敵鼠測定的熒光光度分析方法。
背景技術(shù)：
敵鼠(diphacinone)和氯鼠酮(chlorophacinone)的化學(xué)結(jié)構(gòu)式如下 敵鼠氯敵鼠他們均屬于抗凝血類高毒鼠藥，被公認(rèn)為是防治家鼠最重要的藥物，也是我國目 前主要使用的滅鼠藥物，大量用于糧食倉儲滅鼠、農(nóng)田滅鼠、森林防護(hù)滅鼠及家庭滅鼠等。 由于管理的不夠完善和使用的太過廣泛，人畜誤食或自殺、投毒的中毒案例每年都有大量 報(bào)道，群體中毒也常有發(fā)生，如04年發(fā)生在四川的8人集體敵鼠鈉中毒案件[范清連， 等.一家族8例敵鼠鈉鹽中毒報(bào)告.西南國防醫(yī)藥，2004，14(2) :208 209]，92年發(fā)生在 河南商丘的2144人重大群體敵鼠鈉中毒案件[王燕，等.一起重大敵鼠鈉鹽食物中毒的調(diào) 查.中國食品衛(wèi)生雜志，1994，6 (2) :33 34]等。目前關(guān)于敵鼠和氯敵鼠的痕量檢測主要有紫外導(dǎo)數(shù)分光光度法、熒光分光光度 法、高效液相色譜紫外檢測法及液/質(zhì)聯(lián)用法等。高效液相色譜法和液質(zhì)聯(lián)用法由于涉及 大型儀器設(shè)備難以在基層單位推廣應(yīng)用；紫外導(dǎo)數(shù)分光光度法因靈敏度低，選擇性差，也 難以滿足臨床中毒檢測及環(huán)境殘留分析的要求；王磊等[王磊，等.銪-敵鼠-DL-組氨 酸-十六烷基三甲基溴化銨熒光體系及其應(yīng)用.分析化學(xué)，1998，26 (9) :1052 1055.]報(bào) 道的熒光光度法采用稀土元素銪-敵鼠形成的絡(luò)合體系進(jìn)行測定，盡管使用了十六烷基三 甲基溴化銨(CTMAB)做為協(xié)同配位體，但由于沒有使用絡(luò)合物熒光增敏劑及更有效的協(xié)同 配位體聚乙烯吡咯烷酮，致使敵鼠的檢測靈敏度受到較大的影響，實(shí)際使用該法檢測時(shí)，敵 鼠的最低檢出限為20. Omg/L,當(dāng)將該法推廣應(yīng)用至空間位阻相對較大的氯敵鼠時(shí)，其檢測 靈敏度更差，其最低檢出限為50. 0mg/L，難以滿足敵鼠和氯敵鼠的臨床中毒診斷和環(huán)境殘 留分析需要。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于針對現(xiàn)有痕量敵鼠和氯敵鼠熒光檢測技術(shù)的不足，提供一種簡 便的敵鼠和氯敵鼠測定的熒光分析方法。本發(fā)明的目的是通過以下技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)的一種簡便的敵鼠和氯敵鼠測定的熒 光分析方法，該方法為在比色管中，依次加入待測溶液，NH3-NH4Cl緩沖溶液、10. Omg/L三 價(jià)銪離子溶液，0. lg/L DL-組氨酸溶液，20. Omg/L三價(jià)釔離子標(biāo)準(zhǔn)溶液和0. 5g/L聚乙烯吡 咯烷酮溶液各l.OmL，用蒸餾水稀釋至10mL。放置3 IOmin后用石英熒光比色皿，采用 F-96型熒光分光度計(jì)，以λ ex330nm為激發(fā)波長，以發(fā)射波長λ em612nm進(jìn)行熒光檢測。本發(fā)明的有益效果是本發(fā)明簡便的敵鼠和氯敵鼠測定的熒光分析方法靈敏可靠，可用于敵鼠和氯敵鼠的臨床毒物診斷分析和環(huán)境痕量殘留分析等。
具體實(shí)施例方式本發(fā)明采用敵鼠和氯敵鼠在氨性緩沖溶液中與三價(jià)銪離子及DL-組氨酸絡(luò)合形 成三元絡(luò)合物，以表面活性劑聚乙烯吡咯烷酮為協(xié)同配位體，以三價(jià)釔為熒光增敏劑，實(shí)現(xiàn) 了痕量敵鼠和氯敵鼠的熒光光度法測定，保證了環(huán)境中痕量敵鼠和氯敵鼠的殘留分析和臨 床毒物分析的需求。本發(fā)明簡便的敵鼠和氯敵鼠測定的熒光分析方法如下在IOml比色管中，依次 加入待測溶液，NH3-NH4Cl緩沖溶液、10. Omg/L三價(jià)銪離子溶液，0. lg/LDL-組氨酸溶液， 20. Omg/L三價(jià)釔離子標(biāo)準(zhǔn)溶液和0. 5g/L聚乙烯吡咯烷酮溶液各1. OmL，用蒸餾水稀釋 至10mL，混合后放置3 IOmin后用Icm石英熒光比色皿，采用F-96型熒光分光度計(jì)，以 λ ex330nm為激發(fā)波長，以發(fā)射波長λ effl612nm進(jìn)行熒光檢測。NH3-NH4Cl緩沖溶液的pH為8. 5 9. 5，優(yōu)選為pH9. O ；三價(jià)銪離子選自以下化合 物中的一種硝酸銪、硫酸銪和氯化銪，優(yōu)選為硝酸銪，其濃度在0. 5mg/L 50. 0mg/L范圍， 優(yōu)選為10. 0mg/L ；DL-組氨酸溶液其濃度在0. lg/L 10g/L范圍，優(yōu)選為0. lg/L ；三價(jià)釔 離子選自以下化合物中的一種硝酸釔、硫酸釔和氯化釔，優(yōu)選為硝酸釔，其濃度在l.Omg/ L 100. 0mg/L范圍，優(yōu)選為20. 0mg/L ；聚乙烯吡咯烷酮溶液其濃度在0. lg/L 30g/L范 圍，優(yōu)選為0. 5g/L ；顯色溫度為室溫；混合后靜置時(shí)間為3 lOmin，優(yōu)選為5min，激發(fā)波長 優(yōu)選為Xex330nm，檢測波長優(yōu)選為λ em612nm。本發(fā)明涉及的試劑溶液的配制三價(jià)銪離子溶液稱取0. 2240g硝酸銪(優(yōu)質(zhì)純)，加入少量蒸餾水溶解后轉(zhuǎn)移到 IOOmL容量瓶中，然后用蒸餾水定容至刻度，此溶液即為1.0g/L的三價(jià)銪離子貯備液。臨用 時(shí)，用蒸餾水稀釋至10. 0mg/L的三價(jià)銪離子溶液。三價(jià)釔離子溶液稱取0. 3090g硝酸釔(優(yōu)質(zhì)純)，加入少量蒸餾水溶解后轉(zhuǎn)移到 IOOmL容量瓶中，然后用蒸餾水定容至刻度，此溶液即為1.0g/L的三價(jià)釔離子貯備液。臨用 時(shí)，用蒸餾水稀釋至20. 0mg/L的三價(jià)釔離子溶液。敵鼠和氯敵鼠標(biāo)準(zhǔn)溶液稱取0. IOOOg敵鼠或氯敵鼠，用IOmL無水乙醇溶解，用蒸 餾水定容至IOOmL,濃度為1.0g/L。臨用時(shí)，用蒸餾水稀釋至一定濃度的敵鼠或氯敵鼠溶液。DL-組氨酸溶液稱取1. Og DL-組氨酸，用蒸餾水溶解并定容至IOOmL,此溶液即 為10g/L的DL-組氨酸溶液。臨用時(shí)，用蒸餾水稀釋至0. lg/L的DL-組氨酸溶液。
聚乙烯吡咯烷酮溶液稱取1. Og聚乙烯吡咯烷酮，加入少量蒸餾水溶解后轉(zhuǎn)移到 IOOmL容量瓶中，此溶液即為10g/L的聚乙烯吡咯烷酮溶液。臨用時(shí)，用蒸餾水稀釋至0. 5g/ L的聚乙烯吡咯烷酮溶液。NH3-NH4Cl 緩沖溶液(pH = 9. 0)把 1. Omol/L 氯化銨與 1. Omol/L 氨水以 2 :1 比
例混合均勻。以下實(shí)施例用于進(jìn)一步理解本發(fā)明，但不限于本實(shí)施的范圍。實(shí)施例1儀器與 條件熒光分光光度計(jì)F_96型；石英比色皿1cm;靜置反應(yīng)時(shí)間5min ；靈敏度4 ；激發(fā)波長Xex :330nm;發(fā)射波長λ em掃描范圍550nm 650nm。實(shí)驗(yàn)步驟取濃度為1. Omg/L的敵鼠標(biāo)準(zhǔn)溶液，作為供試品溶液。分別取試劑空白溶液和供 試品溶液，按上述操作分別加入NH3-NH4Cl緩沖溶液、三價(jià)銪離子，DL-組氨酸溶液，三價(jià)釔 離子溶液和聚乙烯吡咯烷酮溶液，按上述條件操作并測定。另外，選擇λεχ330ηπι為激發(fā)波 長，在550nm 650nm范圍進(jìn)行掃描，溶液的最大熒光發(fā)射波長λ em為612nm。在上述條件 下敵鼠-銪-DL-組氨酸三元絡(luò)合物具有很好的熒光強(qiáng)度，可以滿足痕量敵鼠的熒光光度法 檢測，滿足其中毒檢測和殘留分析的要求。實(shí)施例2儀器與條件熒光分光光度計(jì)F_96型；石英比色皿1cm;靜置反應(yīng)時(shí)間5min ；靈敏度4 ；激發(fā)波長Xex :330nm;發(fā)射波長λ em掃描范圍550nm 650nm。實(shí)驗(yàn)步驟取濃度為1. Omg/L的氯敵鼠標(biāo)準(zhǔn)溶液，作為供試品溶液。分別取試劑空白溶液和 供試品溶液，按上述操作分別加入NH3-NH4Cl緩沖溶液、三價(jià)銪離子，DL-組氨酸溶液，三價(jià) 釔離子溶液和聚乙烯吡咯烷酮溶液，按上述條件操作并測定。另外，選擇Xex330nm為激發(fā) 波長，在550nm650nm范圍進(jìn)行掃描，溶液的最大熒光發(fā)射波長λ em為612nm。在上述條件 下氯敵鼠-銪-DL-組氨酸三元絡(luò)合物具有很好的熒光強(qiáng)度，可以滿足痕量敵鼠的熒光光度 法檢測，滿足其中毒檢測和殘留分析的要求。實(shí)施例3儀器與條件熒光分光光度計(jì)F_96型；
石英比色皿1cm;靜置反應(yīng)時(shí)間5min ；靈敏度4 ；激發(fā)波長Xex :330nm;發(fā)射波長Xem :612nm。實(shí)驗(yàn)步驟
取濃度為1. 0 20. Omg/L的敵鼠標(biāo)準(zhǔn)系列溶液，作為供試品溶液。分別取試劑空 白溶液和供試品溶液，按上述操作分別加入NH3-NH4Cl緩沖溶液、三價(jià)銪離子，DL-組氨酸溶 液，三價(jià)釔離子溶液和聚乙烯吡咯烷酮溶液，按上述條件操作，選擇Xex330nm為激發(fā)波長， 選擇熒光發(fā)射波長λΜ*612ηπι進(jìn)行檢測，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。同時(shí)，取一含有一定量敵鼠的溶 液作為供試品，按上述操作進(jìn)行檢測，結(jié)果溶液中的含量為2. 5mg/L。實(shí)施例4儀器與條件熒光分光光度計(jì)F_96型；石英比色皿1cm;靜置反應(yīng)時(shí)間5min ；靈敏度4 ；激發(fā)波長Xex :330nm;發(fā)射波長Xem :612nm。實(shí)驗(yàn)步驟取濃度為1. 0 20. Omg/L的氯敵鼠標(biāo)準(zhǔn)系列溶液，作為供試品溶液。分別取試劑 空白溶液和供試品溶液，按上述操作分別加入NH3-NH4Cl緩沖溶液、三價(jià)銪離子，DL-組氨酸 溶液，三價(jià)釔離子溶液和聚乙烯吡咯烷酮溶液，按上述條件操作，選擇λ ex330nm為激發(fā)波 長，選擇熒光發(fā)射波長λ *612ηπι進(jìn)行檢測，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。同時(shí)，取一含有一定量氯敵 鼠的溶液作為供試品，按上述操作進(jìn)行檢測，結(jié)果溶液中的含量為3. 7mg/L。上述實(shí)施例用來解釋說明本發(fā)明，而不是對本發(fā)明進(jìn)行限制，在本發(fā)明的精神和 權(quán)利要求的保護(hù)范圍內(nèi)，對本發(fā)明作出的任何修改和改變，都落入本發(fā)明的保護(hù)范圍。
權(quán)利要求
一種簡便的敵鼠和氯敵鼠測定的熒光分析方法，其特征在于，該方法為在比色管中，依次加入待測溶液，NH3-NH4Cl緩沖溶液、10.0mg/L三價(jià)銪離子溶液，0.1g/L DL-組氨酸溶液，20.0mg/L三價(jià)釔離子標(biāo)準(zhǔn)溶液和0.5g/L聚乙烯吡咯烷酮溶液各1.0mL，用蒸餾水稀釋至10mL。放置3～10min后用石英熒光比色皿，采用F-96型熒光分光度計(jì)，以λex330nm為激發(fā)波長，以發(fā)射波長λem612nm進(jìn)行熒光檢測。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述熒光分析方法，其特征在于，所述三價(jià)銪離子選自以下化合物 中的一種或幾種的混合硝酸銪、硫酸銪和氯化銪。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述熒光分析方法，其特征在于，所述三價(jià)釔離子選自以下化合物 中的一種或幾種的混合硝酸釔、硫酸釔和氯化釔。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述熒光分析方法，其特征在于，所述放置時(shí)間為5min。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種簡便的敵鼠和氯敵鼠測定的熒光分析方法，本發(fā)明采用稀土元素銪、釔與敵鼠或氯敵鼠在表面活性劑聚乙烯吡咯烷酮存在下形成穩(wěn)定的強(qiáng)熒光性配合物這一特性，通過熒光比色法快速測定痕量敵鼠和氯敵鼠，可用于敵鼠和氯敵鼠的臨床中毒診斷和環(huán)境殘留分析等領(lǐng)域。
文檔編號G01N21/64GK101865845SQ201010200858
公開日2010年10月20日 申請日期2010年6月11日 優(yōu)先權(quán)日2010年6月11日
發(fā)明者金米聰, 陳曉紅 申請人:寧波市疾病預(yù)防控制中心