專利名稱：一種水溶性蜂膠制品的制備方法及用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種蜂膠中有效成分的提取方法，特別是將蜂膠中的有效成份處理轉(zhuǎn)化為水溶性的方法，以及這種水溶性蜂膠制品的用途。
背景技術(shù)：
蜂膠是蜜蜂采集植物的樹脂分泌物與蜂蠟等經(jīng)咀嚼調(diào)制而成的一種樹脂狀物質(zhì)。蜂膠在世界各地都有著很長的應(yīng)用歷史。近年來國內(nèi)外對蜂膠的化學(xué)組成，生理藥理作用有許多研究，發(fā)現(xiàn)蜂膠具有抗菌、抗病毒、抗炎癥、降血脂、降血糖以及增強(qiáng)免疫等作用。
目前，國內(nèi)外的蜂膠制品基本上都是通過酒精浸提獲取有效成分，但蜂膠的醇提液不易溶于水，吸收利用度低，且仍混有一定的雜質(zhì)蜂蠟成分。目前，雖然有利用改變蜂膠提取液酸堿性(如發(fā)明專利97111643所公開的)，或用甘油、聚乙二醇加熱浸泡蜂膠醇提物(如發(fā)明專利03141394.3、94118328.9所公開的)以及用多種表面活性劑助溶(如發(fā)明專利03150648.8所公開的)的方法來制備水溶性蜂膠。在現(xiàn)有技術(shù)中所得的水溶性蜂膠并公開其生理活性。在現(xiàn)有技術(shù)中還有使用了非天然的助溶成分以改善蜂膠的水溶性。由保加利亞Niklova等發(fā)明的水溶性蜂膠制備方法是用8％的氨基酸(L-賴氨酸)并加熱來溶解乙醇或甲醇粗提過的蜂膠，獲得水溶性蜂膠粉。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供一種將天然蜂膠轉(zhuǎn)化為水溶性蜂膠制品的方法，特別是更為純凈的水溶性蜂膠制品，以及這種制品的用途。
本發(fā)明的方法是將天然蜂膠粉碎后加入水中，經(jīng)充分?jǐn)嚢韬筮M(jìn)行浸泡提取，然后進(jìn)行固液分離，再將固體用石油醚進(jìn)行回流提取，在除去蜂蠟后，對提取液再用乙醇與丙酮混合溶液進(jìn)行回流提取，其中的乙醇與丙酮可以是任意比例，將經(jīng)乙醇、丙酮混合液回流提取的提取液進(jìn)行蒸餾干燥處理，所得固體按每克100毫升的比例溶入L-精氨酸或者L-賴氨酸的水溶液中，其水溶液中L-精氨酸或L-賴氨酸與水的質(zhì)量比為3～5％，待固體溶解平衡后濾出液體，再將溶液冷凍干燥處理。
本發(fā)明的方法中乙醇與丙酮的最佳體積比為1比1，乙醇、丙酮混合液回流固體提取物最好是溶入含3％(質(zhì)量比)的L-精氨酸水溶液中。
本發(fā)明的制備方法中將固體溶于氨基酸中時(shí)可以將體系加熱到30～80度。
本發(fā)明方法所得到制品可用于制備增強(qiáng)記憶功能的藥物。
本發(fā)明方法所得到制品可用于制備治療老年癡呆癥的藥物。
采用本發(fā)明的方法制得的蜂膠制品其純度高于現(xiàn)有技術(shù)，其有效成份也高于現(xiàn)有技術(shù)，以蜂膠中所含總黃酮含量為例，現(xiàn)有技術(shù)的制品其總黃酮含量(以槲皮素標(biāo)準(zhǔn)品計(jì))一般在15％左右；而本發(fā)明中以水浸取蜂膠除去水溶性雜質(zhì)(約占總質(zhì)量4％)、農(nóng)藥殘留及重金屬離子；石油醚熱回流除蠟(35％左右)；乙醇和丙酮熱回流提取精制蜂膠(約占總質(zhì)量40％)，其最終制品的總黃酮含量仍以槲皮素標(biāo)準(zhǔn)品計(jì))可高達(dá)28.6％。另一方面，本發(fā)明區(qū)別于現(xiàn)有技術(shù)中加入強(qiáng)酸強(qiáng)堿來改變蜂膠溶解性的做法，可有效地富集濃縮蜂膠中包含總黃酮在內(nèi)的各有效成份，并保持其天然有效成分。
實(shí)驗(yàn)表明本發(fā)明中采用L-精氨酸水溶液可以顯著提高水溶性蜂膠制品產(chǎn)率。
根據(jù)對比的試驗(yàn)表明，本發(fā)明的制品有特殊的活性，可用于制備增強(qiáng)記憶的藥物和治療老年性癡呆癥的藥物。
具體實(shí)施例方式
以下結(jié)合具體實(shí)施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。
取蜂膠原料，粉碎后加入蒸餾水中，室溫下攪拌過夜；靜置后過濾，濾渣轉(zhuǎn)入索氏回流提取器中，先以石油醚為溶劑熱回流6小時(shí)除去蜂蠟；之后以乙醇(或乙醇∶丙酮以任意比例混合溶劑)熱回流提取12小時(shí)，提取液經(jīng)減壓蒸餾，得到精制蜂膠。
對比實(shí)驗(yàn)表明采用3％的L-賴氨酸水溶液溶解前述所得精制蜂膠，或者采用總量為3％的L-賴氨酸與L-精氨酸混合的水溶液時(shí)溶解前述所得精制蜂膠，可提高水溶性蜂膠制品的收率，參見表1。

因此本發(fā)明的最佳實(shí)施例應(yīng)當(dāng)是取前述精制蜂膠10克，加入1000毫升3％的L-精氨酸水溶液中，加熱至30～80℃并持續(xù)攪拌；待溶解完全后，過濾；濾液冷凍干燥后可得36.2克褐色干粉狀水溶性蜂膠制品。
本發(fā)明用于改善學(xué)習(xí)記憶功能的實(shí)例氫溴酸東莨菪堿是一種中樞神經(jīng)抗膽堿能藥，連續(xù)給予小鼠一定劑量的氫溴酸東莨菪堿可造成小鼠中樞神經(jīng)抑制，空間學(xué)習(xí)記憶能力下降，在水迷宮測試中表現(xiàn)為給藥小鼠通過相同訓(xùn)練找到水中隱藏平臺(tái)的能力與正常小鼠相比明顯下降，所需時(shí)間延長。由氫溴酸東莨菪堿所致小鼠學(xué)習(xí)記憶能力障礙的實(shí)驗(yàn)也是研究神經(jīng)藥物常用的行為學(xué)模型之一。
水迷宮實(shí)驗(yàn)取健康成年小鼠(雄性，25～30克)60只，隨機(jī)平均分為6組。即正常組，損傷組，陽性對照組，精氨酸對照組，蜂膠小劑量組，蜂膠大劑量組。除正常組外，其余各組均從第一天起腹腔注射氫溴酸東莨菪堿(0.1毫克/千克體重·天)，正常組則注射等體積生理鹽水。每天注射開始前30分鐘，給予治療藥物，正常組、損傷組灌胃生理鹽水，陽性對照組灌胃腦復(fù)康(臨床用吡拉西坦，100毫克/千克體重*天)，精氨酸對照組灌胃L-精氨酸(100毫克/千克體重·天)，蜂膠小劑量組灌胃本發(fā)明所得水溶性蜂膠制品(50毫克/千克體重*天)，蜂膠大劑量組灌胃本發(fā)明所得水溶性蜂膠制品(100毫克/千克體重*天)。注射結(jié)束后30分鐘開始水迷宮測試。測試共進(jìn)行4天，測試前對每只小鼠編號標(biāo)記，觀察紀(jì)錄其在每天的2次測試中找到水中隱藏平臺(tái)的時(shí)間(以秒為單位)，取平均值作為該樣本的觀測數(shù)據(jù)，標(biāo)準(zhǔn)誤差和方差分析則來自每組的10個(gè)樣本。結(jié)果如表2顯示

*方差分析是通過給藥各組與損傷組相比較得到*表示p值小于0.05，差異顯著；**表示p值小于0.01，差異極顯著。
以上結(jié)果顯示，本發(fā)明所得水溶性蜂膠制品(100毫克/千克體重)給予小鼠后，可顯著改善由氫溴酸東莨菪堿所造成的小鼠學(xué)習(xí)記憶障礙，可能對老年性癡呆等癥狀有一定的治療和改善作用。其效果優(yōu)于吡拉西坦。本發(fā)明制品的作用可能由蜂膠中活性成分產(chǎn)生，也可能由蜂膠中活性成分與L-精氨酸協(xié)同作用產(chǎn)生。但單純使用L-精氨酸在相關(guān)的實(shí)驗(yàn)中并未觀察到有與本發(fā)明所得水溶性蜂膠制品相同的作用。
現(xiàn)代腦科學(xué)的研究表明，乙酰膽堿作為一種主要的神經(jīng)遞質(zhì)參與哺乳動(dòng)物的學(xué)習(xí)記憶活動(dòng)。因此，動(dòng)物腦中調(diào)控乙酰膽堿水平的重要水解酶—乙酰膽堿酯酶活性就在一定程度上反映了動(dòng)物學(xué)習(xí)記憶的能力。一般而言，動(dòng)物的學(xué)習(xí)記憶能力與乙酰膽堿酯酶活力在一定程度上呈負(fù)相關(guān)?，F(xiàn)已知腦內(nèi)乙酰膽堿含量與記憶密切相關(guān)，老年或癡呆病人腦內(nèi)乙酰膽堿量減少。研究認(rèn)為，肌堿酯酶抑制劑可延遲乙酰膽堿的代謝分解，從而延長突觸后受體的興奮。因此膽堿酯酶抑制劑被認(rèn)為是一種緩解老年或癡呆病人的有效藥物。
在哺乳動(dòng)物的腦中，存在幾個(gè)重要的部位，與學(xué)習(xí)和記憶有著密切的關(guān)系，其中位于兩側(cè)大腦半球面的結(jié)構(gòu)—海馬和杏仁體是記憶過程中的關(guān)鍵結(jié)構(gòu)。而在哺乳動(dòng)物的顯性記憶過程中，海馬起著重要的作用，海馬具有顯性記憶需要的可塑性。因此，檢測海馬和某些腦組織中乙酰膽堿酯酶水平的變化，可有效驗(yàn)證本發(fā)明制品改善東莨菪堿損傷小鼠學(xué)習(xí)記憶能力的生理生化機(jī)制，并與水迷宮實(shí)驗(yàn)所的結(jié)果相對應(yīng)。
酶活性測定實(shí)驗(yàn)取健康成年小鼠(雄性，25±2克)12只，隨機(jī)平均分為2組。損傷組灌胃生理鹽水，蜂膠組灌胃本發(fā)明所得水溶性蜂膠制品(100毫克/千克體重*天)，給藥后全部實(shí)驗(yàn)小鼠腹腔注射氫溴酸東莨菪堿(0.1毫克/千克體重*天)。連續(xù)給藥四天后，處死小鼠，剝?nèi)⌒∈竽X組織，分離腦海馬區(qū)和大腦皮層部分，組織勻漿后分別測量各部分乙酰膽堿酯酶水平及對應(yīng)的蛋白含量。以每毫克腦組織蛋白能夠水解特異性底物碘代乙酰膽堿(Acetylcholine iodide)從而引起光吸收(OD值)在410nm處的變化來表示酶活性的高低。
結(jié)果如表2所示

*(***表示p值小于0.001，差異極顯著)。
以上結(jié)果表明，給予小鼠一定劑量本發(fā)明所得水溶性蜂膠制品(100毫克/千克體重)后，可以顯著抑制由東莨菪堿引起的小鼠大腦關(guān)鍵記憶部位—海馬區(qū)的乙酰膽堿酯酶水平的升高。這也表明本發(fā)明所得水溶性蜂膠制品可以改善健忘癥小鼠的學(xué)習(xí)記憶能力，也可作為一種治療或緩解老年性癡呆癥的藥物。
權(quán)利要求
1.一種水溶性蜂膠制品的制備方法，其特征在于將天然蜂膠粉碎后加入水中，經(jīng)充分?jǐn)嚢韬筮M(jìn)行浸泡提取，然后進(jìn)行固液分離，再將固體用石油醚進(jìn)行回流提取，在除去蜂蠟后，對提取液再用乙醇與丙酮混合溶液進(jìn)行回流提取，其中的乙醇與丙酮可以是任意比例，將經(jīng)乙醇、丙酮混合液回流提取的提取液進(jìn)行蒸餾干燥處理，所得固體按每克100毫升的比例溶入L-精氨酸或L-賴氨酸的水溶液中，其中L-精氨酸或L-賴氨酸與水的質(zhì)量比為3～5％，待固體溶解平衡后濾出液體，再將溶液冷凍干燥處理。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種水溶性蜂膠制品的制備方法，其特征在于乙醇與丙酮的體積比為1比1，乙醇、丙酮混合液回流提取的提取液蒸餾干燥所得固體溶入L-精氨酸水溶液中，L-精氨酸與水的質(zhì)量比為3％。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述一種水溶性蜂膠制品的制備方法，其特征在于固體溶于L-精氨酸或L-賴氨酸的水溶液的過程中可以將體系加熱到30～80度。
4.根據(jù)權(quán)利要求1至4所述的任一方法制得制品物用于制備增強(qiáng)記憶功能的藥物。
5.根據(jù)權(quán)利要求1至4所述的任一方法制得制品用于制備治療老年癡呆癥的藥物。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種蜂膠中有效成分的提取方法以及這種水溶性蜂膠制品的用途。本發(fā)明的方法是將天然蜂膠粉碎后加入水中，經(jīng)充分?jǐn)嚢韬筮M(jìn)行浸泡提取，然后進(jìn)行固液分離，再將固體用石油醚進(jìn)行回流提取，在除去蜂蠟后，對提取液再用乙醇與丙酮混合溶液進(jìn)行回流提取，將經(jīng)乙醇、丙酮混合液回流提取的提取液進(jìn)行蒸餾干燥處理，所得固體按每克100毫升的比例溶入L－精氨酸或者L－賴氨酸的水溶液中，待固體溶解平衡后濾出液體，再將溶液冷凍干燥處理。
文檔編號A61P25/28GK1839890SQ20061000399
公開日2006年10月4日 申請日期2006年1月27日 優(yōu)先權(quán)日2006年1月27日
發(fā)明者王銳, 隴源, 陳強(qiáng), 陳娟 申請人:蘭州大學(xué)