專利名稱：：含有抗igf-1受體抗體的組合物和獲得所述抗體的方法含有抗IGF-1受體抗體的組合物和獲得所述抗體的方法參考相關(guān)申請本申請要求2004年12月22日提交的美國臨時專利申請系列60/638，961的利益,且在此引用作為參考。發(fā)明領(lǐng)域本申請?zhí)峁┝松婕翱笽GF-1受體抗體的組合物和方法。發(fā)明背景胰島素樣生長因子1和2(分別為IGF-1和IGF-2)促進多種哺乳動物細胞類型的分化和增殖。IGF-1和IGF-2兩者隨血漿廣泛地在整個身體中循環(huán)。其通過結(jié)合并激活I(lǐng)GF-1受體(IGF-1R)來對細胞產(chǎn)生其作用。IGF-IR是酪氨酸激酶生長因子受體家族的成員。其氨基酸序列與胰島素受體的氨基酸序列具有大約70%的同一性。異常的IGF-1、IGF-2、和/或IGF-IR的活性與許多醫(yī)學(xué)狀況相關(guān)聯(lián)，所述醫(yī)學(xué)狀況包括不同類型的癌癥、生長缺陷(例如，肢端肥大癥、巨人癥和身材矮小癥(smallstature))、牛皮褲、動脈粥樣硬化、血管成形術(shù)后血管的平滑肌再狹窄(restonsis)、糖尿病、孩史血管增生、神經(jīng)病變、肌肉質(zhì)量減少(lossofmusclemass)和骨質(zhì)疏松癥。附圖概述圖1提供了編碼輕鏈可變結(jié)構(gòu)域L1至L52和重鏈可變結(jié)構(gòu)域H1至H52的核苷酸序列。圖2提供了輕鏈可變結(jié)構(gòu)域L1至L52的氨基酸序列。CDR和FR區(qū)被標(biāo)示o圖3提供了重鏈可變結(jié)構(gòu)域H1至H52的氨基酸序列。CDR和FR被標(biāo)示。圖4提供了輕鏈可變結(jié)構(gòu)域L1至L52的輕鏈CDR1區(qū)的氨基酸序列。也提供了成組的相關(guān)CDR序列的共有序列。圖5提供了輕鏈可變結(jié)構(gòu)域L1至L52的輕鏈CDR2區(qū)的氨基酸序列。也提供了成組的相關(guān)CDR序列的共有序列。圖6提供了輕鏈可變結(jié)構(gòu)域L1至L52的輕鏈CDR3區(qū)域的氨基酸序列。也提供了成組的相關(guān)CDR序列的共有序列。圖7提供了重鏈可變結(jié)構(gòu)域H1至H52的重鏈CDR1區(qū)的氨基酸序列。也提供了成組的相關(guān)CDR序列的共有序列。圖8提供了重鏈可變結(jié)構(gòu)域H1至H52的重鏈CDR2區(qū)的氨基酸序列。也提供了成組的相關(guān)CDR序列的共有序列。圖9提供了重鏈可變結(jié)構(gòu)域H1至H52的重鏈CDR3區(qū)的氨基酸序列。也提供了成組的相關(guān)CDR序列的共有序列。圖IO提供了融合至人IgGlFc區(qū)域(下劃線標(biāo)示的)的人IGF-1R細胞外結(jié)構(gòu)域的氨基酸序列，其具有caspace-3切割位點(粗體)。圖11提供了融合至人IgGlFc區(qū)域(下劃線標(biāo)示的)的人胰島素受體的細胞外結(jié)構(gòu)域的氨基酸序列。圖12提供了在C末端與雞抗生物蛋白融合的人IGR-1R細胞外結(jié)構(gòu)域(包括信號肽)的蛋白序列。在該圖中，將IGF-1RECD中的起始!^et指定為位置1。圖13提供了人K輕鏈抗體恒定區(qū)和人IgGl重鏈抗體恒定區(qū)的多肽序列。圖14提供了舉例說明4個噬菌體展示的抗體對IGF-1R-Fc分子的結(jié)合顯著好于其對胰島素受體-Fc或鼠類Fc的結(jié)合的圖。圖15提供了舉例說明某些抗體與IGF-1和IGF-2竟?fàn)帉GF-1R的結(jié)合的能力的圖。圖16提供了舉例說明某些抗體抑制32DhuIGF-1R+IRS-1細胞本長的能力的圖。圖17提供了舉例說明某些抗體抑制Balb/C3T3huIGF-1R細胞生長的能力的圖。發(fā)明概述在一個方面，本發(fā)明提供了分離的抗原結(jié)合蛋白，其包含a.包貪選自下列序列的輕鏈CDR3:i.與選自圖6中所示Ll-L52的輕鏈CDR3^列的CDR3序列相差不超過總共2個氨基酸的添加、置換和/或缺失的輕鏈CDR3序列；ii.MXJ^XJsPXJ;iii.QQX8X9X10XPX12T;和iv.QSYX13X14X15NX16X17X18;b.包含選自下列序列的重鏈CDR3:i.與選自圖9中所示的H1-H52的重鏈CDR3序列的CDR3序列相差不超過總共3個氨基酸的添加、置換和/或缺失的重鏈CDR3序列；iLX19X20X21X22X23X24X25X26X27FDI5iiiX28X29X30X31X32X33X34X35X36X37X38MDV;iv.DSSX39;或c.(a)的輕鏈CDR3序列和(b)的重鏈CDR3序列；其中Xi是谷氨酰胺殘基或谷氨酸殘基，X2是丙氨酸殘基、甘氨酸殘基、蘇氨酸殘基或絲氨酸殘基，X3是亮氨酸殘基、苯丙氨酸殘基或蘇氨酸殘基，L是谷氨酰胺殘基、谷氨酸殘基或組氨酸殘基，X5是蘇氨酸殘基、甲硫氨酸殘基、色氨酸殘基或纈氨酸殘基，Xs是甘氨酸殘基、丙氨酸殘基、纈氨酸殘基、亮氨酸殘基、異亮氨酸殘基、脯氨酸殘基、苯丙氨酸殘基、甲硫氨酸殘基、色氨酸殘基或半胱氨酸殘基，l是蘇氨酸殘基、丙氨酸殘基或絲氨酸殘基，Xs是精氨酸殘基、輯氨酸殘基、亮氨酸殘基或丙氨酸殘基，X,是天冬酰胺殘基、絲氨酸，基或組氨酸殘基，X^是天冬酰胺殘基或絲氨酸殘基，X"是色氨酸殘基、纈氨酸殘基、酪氨酸殘基、脯氨酸殘基或苯丙氨酸殘基，Xu是亮氨酸殘基、酪氨酸殘基或異亮氨酸殘基，Xu是天冬氨酸殘基或谷氨酰騰殘基，X"是絲氨酸殘基或脯氨酸殘基，X^是絲氨酸殘基、酪氨酸殘基、天冬氨酸殘基或丙氨酸殘基，Xi6是谷氨酰胺殘基、精氨酸殘基、纈氨酸殘基或色氨酸殘基，Xn是精氨酸殘基、纈氨酸殘基、異亮氨酸殘基或無殘基，Xw是纈氨酸殘基或無殘基，Xw是谷氨酸殘基或無殘基，X2。是酪氨酸殘基、甘氨酸殘基、絲氨酸殘基或無殘基，L是絲氨酸殘基、天冬酰胺殘基、色氨酸殘基、谷氨酸殘基、天冬氨酸殘基或無殘基，Xn是絲氨酸殘基、天冬氨酸殘基、色氨酸殘基、丙氨酸殘基、精氨酸殘基、蘇氨酸殘基、谷氨酰胺殘基、亮氨酸殘基、谷氨酸殘基或無殘基，Xu是絲氨酸殘基、甘氨酸殘基、天冬酰胺殘基、蘇氨酸殘基、色氨酸殘基、纈氨酸殘基、丙氨酸殘基或異亮氨酸殘基，x"是精氨酸殘基、谷氨酰胺殘基、酪氨酸殘基、纈氨酸殘基、丙氨酸殘基、甘氨酸殘基、絲氨酸殘基、苯丙氨酸殘基，或色氨酸殘基，X25是天冬酰胺殘基、亮氨酸殘基、天冬氨酸殘基、蘇氨酸殘基、色氨酸殘基、酪氨酸殘基、纈氨酸殘基、丙氨酸殘基，或組氨酸殘基，X26是天冬氨酸殘基、絲氨酸殘基、天冬酰胺殘基，或谷氨酰胺殘基，Xu是丙氨酸殘基或脯氨酸殘基，&8是丙氨酸殘基或無殘基，XM是谷氨酸殘基、酪氨酸殘基、甘氨酸殘基或無殘基，Lo是精氨酸殘基、絲氨酸殘基或無殘基，Xn是甘氨酸殘基、天冬氨酸殘基、纈氨酸殘基、絲氨酸殘基或無殘基，X32是絲氨酸殘基、天冬氨酸殘基、甘氨酸殘基或無殘基，Xn是苯丙氨酸殘基、天冬氨酸殘基、酪氨酸殘基、甘氨酸殘基、絲氨酸殘基、組氨酸殘基、色氨酸殘基或無殘基，x"是色氨酸殘基、天冬氨酸殘基、酪氨酸殘基、絲氨酸殘基或無殘基，x35是天冬氨酸殘基、谷氨酸殘基、精氨酸殘基、絲氨酸殘基、甘氨酸殘基、酪氨酸殘基，或色氨酸殘基，X"是酪氨酸殘基、賴氨酸殘基、異亮氨酸殘基、亮氨酸殘基或苯丙氨醵殘基，Xn是酪氨酸殘基、絲氨酸殘基、苯丙氨酸殘基、天冬氨酸殘基或甘氨酸殘基，Xw是甘氨酸殘基、天冬酰胺殘基，或酪氨酸殘基，X"是纈氨酸殘基、甘氨酸殘基，或絲氨酸殘基，且所述抗原結(jié)合蛋白特異性地結(jié)合人IGF-1R。在一個實施方案中，所述分離的抗原結(jié)合蛋白包含氨基酸序列，所述序列選自a.與圖4中所示的L1-L52的CDR1凈列相差總共不超過6個氨基酸殘基的添加、置換和/或缺失的輕鏈CDR1序列；b.與圖5中所示的L1-L52的CDR2序列相差總共不超過2個氨基酸殘基的添加、置換和/或缺失的輕鏈CDR2序列；c.與圖6中所示的LI-L52的CDR3序列相差總共不超過3個氨基酸殘基的添加、置換和/或缺失的輕鏈CDR3序列；d.與圖7中所示的H1-H52的CDR1序列相差總共不超過2個氨基酸殘基的添加、置換和/或缺失的重鏈CDR1序列；e.與圖8中所示的H1-H52的CDR2序列相差總共不超過5個氨基酸殘基的添加、置換和/或缺失的重鏈CDR2序列；和f.與圖9中所示的H1-H52的CDR3序列相差總共不超過4個氨基酸殘基的添加、置換和/或缺失的重鏈CDR3序列。在另一個實施方案中，所迷分離的抗原結(jié)合蛋白包含氨基酸序列，所述氨基酸序列選自a.與圖4中所示的LI-L52的CDR1序列相差總共不超過5個氨基酸殘基的添加、置換和/或缺失的輕鏈CDRl序列；b.與圖5中所示的L1-L52的CDR2序列相差總共不超過1個氨基酸殘基的添加、置換和/或缺失的輕鏈CDR2序列；c.與圖6中所示的L1-L52的CDR3序列相差總共不超過2個氨基酸殘基的添加、置換和/或缺失的輕鏈CDR3序列；d.與圖7中所示的H1-H52的CDR1序列相差總共不超過1個氨基酸殘基的添加、置換和/或缺失的重鏈CDRl序列；e.與圖8中所示的H1-H52的CDR2序列相異總共不超過4個氨基酸殘基的添加、置換和/或缺失的重鏈CDR2序列；和f.與圖9中所示的H1-H52的CDR3序列相異總共不超過3個氨基酸殘基的添加、置換和/或缺失的重鏈CDR3序列；在另一個實施方案中，所述分離的抗原結(jié)合蛋白包含氨基酸序列，所述氨基酸序列選自a.與圖4中所示的L1-L52的CDR1序列相異總共不超過4個氨基酸殘基的添加、置換和/或缺失的輕鏈CDRl序列；b.圖5中所示的L1-L52的輕鏈CDR2序列；c.與圖6中所示的L1-L52的CDR3序列相異總共不超過1個氨基酸殘基的添加、置換和/或缺失的輕鏈CDR3序列；d.圖7中所示的H1-H52的重鏈CDR1序列；e.與圖8中所示的H1-H52的CDR2序列相異總共不超過3個氨基酸殘基的添加、置換和/或缺失的重鏈CDR2序列；和f.與圖9中所示的H1-H52的CDR3序列相異總共不超過2個氨基酸殘基的添加、置換和/或缺失的重鏈CDR3序列；在另一個實施方案中，所述分離的抗原結(jié)合蛋白包含氰基酸序列，所述氨基酸序列選自a.與圖4中所示的L1-L52的CDR1序列相異總共不超過3個氨基酸殘基的添加、置換和/或缺失的輕鏈CDR1序列；b.圖6中所示的L1-L52的輕鏈CDR3序列；c.與圖8中所示的HI-H52的CDR2序列相異總共不超過2個氨基酸殘基的添加、置換和/或缺失的重鏈CDR2序列；和d.與圖9中所示的H1-H52的CDR3序列相異總共不超過1個氨基酸的添加、置換或缺失的重鏈CDR3序列。在另一個實施方案中，所述分離的抗原結(jié)合蛋白包含氨基酸序列，所述氨基酸序列選自a.與圖4中所示的L1-L52的CDR1序列相異總共不超過2個氨基酸殘基的添加、置換和/或缺失的輕鏈CDR1序列；b.與圖8中所示的HI-H52的CDR2序列相異總共不超過1個氨基酸的添加、置換或缺失的重鏈CDR2序列；和c.圖9中所示的H1-H52的重鏈CDR3序列。在另一個實施方案中，所述分離的抗原結(jié)合蛋白包含氨基酸序列，所述氨基酸序列選自a.與圖4中所示的L1-L52的PDR1序列相異總共不超過1個氨基酸殘基的添加、置換或缺失的輕鏈CDR1序列；和b.圖8中所示的H1-H52的重鏈CDR2序列。在另一個實施方案中，所述分離的抗原結(jié)合蛋白包含圖4中所示的L1-L52的CDR1序列。在另一個實施方案中，所述分離的抗原結(jié)合蛋白包含序列，所述序列選自a.選自i.RSSQSLLHSNGYNYLD、ii.RASQ(G/S)(I/V)(G/S)X(Y/F)L(A/N)和iii.RSSQS(L/I)XXXXX的輕鏈CDR1序列;b.選自i.LGSNRAS、ii.AASTLQS和iii.EDNXRPS的輕鋒CDR2序列；c.選自i.SS雨S、ii.XYYWS和iii.SYAM(S/H)的重鏈CDR1序列；和d.選自i.;(E/I)(I/V)(Y/N)(H/Y)SGST(N/Y)YNPSLKS;和ii.XIS(G/S)SG(G/S)STYYADSVKG的重鏈CDR2序列;其中，括號內(nèi)包括的氨基酸殘基符號代表序列中相同位置的可選擇的殘基，各X獨立地是任何氨基酸殘基，各Z獨立地是甘氨酸殘基、丙氨酸殘基、纈氨酸殘基、亮氨酸殘基、異亮氨酸殘基、脯氨酸殘基、苯丙氨酸殘基、甲硫舉酸殘基、色氨酸殘基，或半胱氨酸殘基。在另一個實施方案中，所緣分離的抗原結(jié)合蛋白包含重鏈CDR3序列，該序列與圖9中所示的H1-H52的CDR3序列相異總共不超過2個氨基酸的添加、置換和/或缺200580048584.9說明書第7/117頁失。在另一個實施方案中，所述分離的抗原結(jié)合蛋白包含重鏈CDR3序列，該序列與圖9中所示的H1-H52的CDR3序列相異總共不超過1個氨基酸的添加、置換和/或缺失。在另一個實施方案中，所述分離的抗原結(jié)合蛋白包含圖9中所示的H1-H52的重鏈CDR3序列。在另一個實施方案中，所述分離的抗原結(jié)合蛋白包含2個氨基酸序列，所述序列選自a.與圖4中所示的L1-L52的CDR1序列相異總共不超過6個氨基酸的添加、置換和/或缺失的輕鏈CDRl序列；b.與圖5中所示的LI-L52的CDR2序列相異總共不超過2個氨基酸的添加、置換和/或缺失的輕鏈CDR2序列；c.與圖6中所示的L1-L52的CDR3序列相異總共不超過3個氨基酸的添加、置換和/或缺失的輕鏈CDR3序列；d.與圖7中所示的H1-H52的CDR1序列相異總共不超過2個氨基酸的添加、置換和/或缺失的重鏈CDRl序列；e.與圖8中所示的H1-H52的CDR2序列相異總共不超過5個氨基酸的添加、置換和/或缺失的重鏈CDR2序列；和f.與圖9中所示的H1-H52的CDR3序列相異總共不超過4個氨基酸的添加、置換和/或缺失的重鏈CDR3序列。在另一個實施方案中，所述分離的抗原結(jié)合蛋白包含3個氨基酸序列，所述序列選自a.與圖4中所示的L1-L52的CDR1序列相異總共不超過6個氨基酸的添加、置換和/或缺失的輕鏈CDRl序列；b.與圖5中所示的L1-L52的CDR2序列相異總共不超過2個氨基酸的添加、置換和/或缺失的輕鏈CDR2序列；c.與圖6中所示的L1-L52的CDR3序列相異總共不超過3個氨基酸的添加、置換和/或缺失的輕鏈CDR3序列；fi.與圖7中所示的H1-H52的CDR1序列相異總共不超過2個氨基酸的添加、置換和/或缺失的重鏈CDRl序列；e.與圖8中所示的H1-H52的CDR2序列相異總共不超過5個氨基酸的添加、置換和/或缺失的重鏈CPR2序列；和f.與圖9中所示的H1-H52的CDR3序列相異總共不超過4個氨基酸的添加、置換和/或缺失的重鏈CDR3序列。在另一個實施方案中，所述分離的抗原結(jié)合蛋白包含4個氨基酸序列，所述序列選自a.與圖4中所示的L1-L52的CDR1序列相異總共不超過6個氨基酸的添加、置換和/或缺失的輕鏈CDRl序列；b.與圖5中所示27的L1-L52的CDR2序列相異總共不超過2個氨基酸的添加、置換和/或缺失的輕鏈CDR2序列；c.與圖6中所示的L1-L52的CDR3序列相務(wù)總共不超過3個氨基酸的添加、置換和/或缺失的輕鏈CDR3序列；d.與圖7中所示的H1-H52的CDR1序列相異總共不超過2個氨基酸的添加、置換和/或缺失的重鏈CDRl序列；e.與圖8中所示的HI-H52"CDR2序列相異總共不超過5個氨基酸的添加、置換和/或缺失的重鏈CDR2序列；和f.與圖9中所示的H1-H52的CDR3序列相異總共不超過4個氨基酸的添加、置換和/或缺失的重鏈CDR3序列。在另一個實施方案中，所述分離的抗原結(jié)合蛋白包含5個氨基酸序列，所述序列選自a.與圖4中所示的L1-L52的CDR1序列相異總共不超過6個氨基酸的添加、置換和/或缺失的輕鏈CDRl序列；b.與圖5中所示的L1-L52的CDR2序列相異總共不超過2個氨基酸的添加、置換和/或缺失的輕鏈CDR2序列；c.與圖6中所示的L1-L52的CDR3序列相異總共不超過3個氨基酸的添加、置換和/或缺失的輕鏈CDR3序列；d.與圖7中所示的H1-H52的CDR1序列相異總共不超過2個氨基酸的添加、置換和/或缺失的重鏈CDRl序列；e.與圖8中所示的H1-H52的CDR2序列相異總共不超過5個氨基酸的添加、置換和/或缺失的重鋒CDR2序列；和f.與圖9中所示的H1-H52的CDR3序列相異總共不超過4個氨基酸的添加、置換和/或缺失的重鏈CDR3序列。在另一個實施方案中，所述分離的抗原結(jié)合蛋白包含a.與圖4中所示的的CDR1序列相異總共不超過6個氨基酸的添加、置換和/或缺失的輕鏈CDR1序列；b.與圖5中所示的L1-L52的CDR2序列相異總共不超過2個氨基酸的添加、置換和/或缺失的輕鏈CDR2序列；c.與閨6中所示的L1-L52的CDR3序列相異總共不超過3個氨基酸的添加、置換和/或缺失的輕鏈CDR3序列；d.與圖7中所示的H1-H52的CDR1序列相異總共不超過2個氨基酸的添加、置換和/或缺失的重鏈CDR1序列；e.與圖8中所示的H1-H52的CDR2序列相異總共不超過5個氨基酸的添加、置換和/或缺失的重鏈CDR2序列；和f.與圖9中所示的H1-H52的CDR3序列相異總共不超過4個氨基酸的添加、置換和/或缺失的重鏈CDR3序列。在另一個實施方案中，所述分離的抗原結(jié)合吝白包含輕鏈可變結(jié)構(gòu)域，其包含i.圖4中所示的輕鏈CDR1序列；ii.圖5中所示的輕鏈CDR2序列；和iii.圖6中所示的輕鏈6DR3序列；b.重鏈可變結(jié)構(gòu)域，其包含i.圖7中所示的重鏈CDR1序列；ii.圖8中所示的重鏈CDR2序列；和iii.圖9中所示的重鏈CDR3序列；或c.(a)的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域和(b)的重鏈可變結(jié)構(gòu)域。在另一個實施方案中，所述分離的抗原結(jié)合蛋白包含a.輕鏈CDR1、CDR2和CDR3序列，所迷各序列分別與選自L1-L52的相同輕鏈可變結(jié)構(gòu)域序列的CDR1、CDR2和CDR3序列同一；b.各自分別與選自HI-H52的相同重鏈可變結(jié)構(gòu)域序列的CDR1、CDR2和CDR3序列同一的重鏈CDR1、CDR2和CDR3序列；或c.(a)的輕鏈CDRl、CDR2和CDR3序列和(b)的重鏈CDRl、CDR2和CDR3序列。在另一個方面，本發(fā)明提供了分離的抗原結(jié)合蛋白，其包含a.輕鏈可變結(jié)構(gòu)域序列，其選自i.與圖2中所示的L1-L52的輕鏈可變維構(gòu)域序列具有至少80%的同一性的氨基酸序列；ii.包含圖2中所示的LI-L52的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域序列的至少15個連續(xù)氨基酸殘基的氨基酸序列；iii.由與圖1中所示的編碼Ll-L52的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域序列的多核苷酸序列具有至少80%的同一性的多核普酸序列編碼的氨基酸序列；和iv.由多核苷酸序列編碼的氨基酸序列，所述多核苷酸序列在中等嚴緊條件下與由圖1中所示的L1-L52的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域序列組威的多核苷酸的互補序列雜交；b.重鏈可變結(jié)構(gòu)域序列，其選自i.與圖2中所示的H1-H52的重鏈可變結(jié)構(gòu)域序列具有至少80%的同一性的氨基酸序列；U.包含圖2中所示的H1-H52的重鏈可變結(jié)構(gòu)域序列的至少15個連續(xù)氨基酸殘基的氨基酸序列；iii.由與圖1中所示的編碼H1-H52的重鏈可變結(jié)構(gòu)域序列的多核苷酸序列具有至少80%的同一性的多核苷酸序列編碼的氨基酸序列；和iv.由多核苷酸序列編碼的泉基酸序列，所述多核苷酸序列在中等嚴緊條件下與由圖1所示的H1-H52的重鏈可變結(jié)構(gòu)域序列組成的多核苷酸的互補序列雜交；或c.(a)的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域和(b)的重鏈可變結(jié)構(gòu)域；其中所述抗原結(jié)合蛋白結(jié)合人IGF-1R。在一個實施方案中，所述分離的抗原結(jié)合蛋白包舍a.輕鏈可變結(jié)構(gòu)域序列，其選自i.與圖2中所示的LI-L52的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域序列具有至少85%的同一性的氨基酸序列；ii.包含固2中所示的L1-L52的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域序列的至少25個連續(xù)氨基酸殘基的氨基酸序列；iii.由與圖1中所示的編碼L1-L52的輕鏈可變結(jié)抅域序列的多核苷酸序列具有至少85%的同一性的多核苷酸序列編碼的氨基酸序列；和iv.由多核苷酸序列編碼的氨基酸序列，所述多核苷酸序列在高度嚴緊條件下與由圖1所示的LI-L52的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域序列組成的多核苷酸的互補序列雜交；b.重鏈可變結(jié)構(gòu)域序列，其選自i.與圖2中所示的H1-H52的重鏈可變結(jié)構(gòu)域序列具有至少85%的同一性的氨基酸序列；ii.包含圖2中所示的H1-H52的重鏈可變結(jié)構(gòu)域序列的至少25個連續(xù)氨基酸殘基的氨基酸序列；iii.由與圖1中所示的編碼H1-H52的重鏈可變結(jié)構(gòu)域序列的多核苷酸序列具有至少85%的同一性的多核普酸序列編碼的氨基酸序列；和iv.由多核苷酸序列編碼的氨基酸序列，所述多核苷酸序列在高度嚴緊條件下與由圖1中所示的H1-H52的重鏈可變結(jié)構(gòu)域序列組成的多核苷酸的互補序列雜交；或c)(a)的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域和(b)的重鏈可變結(jié)構(gòu)域。在另一個實施方案中，所述分離的抗原結(jié)合蛋白包含a.輕鏈可變結(jié)構(gòu)域序列，其選自i.與圖2中所示的L1-L52的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域序列具有至少90%的同一性的氨基酸序列；ii.包含圖2中所示的L1-L52的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域序列的至少35個連續(xù)氨基酸殘基的氨基酸序列；和iii.由與圖1中所示的編碼L1-L52的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域序列的多核苷酸序列具有至少904的同一性的多核苷酸序列編碼的氨基酸序列；和b.重鏈可變結(jié)構(gòu)域序列，其選自i.與圖2中所示的H1-H52的重鏈可變結(jié)構(gòu)域序列具有至少90%的同一性的氨基酸序列；ii.包含圖2中所示的H1-H52的重鏈可變結(jié)構(gòu)域序列的至少35個連續(xù)氨基酸殘基的氨基酸序列；和iii.由與圖1中所示的編碼H1-H52的重鏈可變結(jié)構(gòu)域序列的多核苷酸序列具有至少90%的同一性的多核苷酸序列編碼的氨基酸序列；或c)(a)的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域和(b)的重鏈可變結(jié)構(gòu)域。在另一個實施方案中，所述分離的抗原結(jié)合蛋白包含a.輕鏈可變結(jié)構(gòu)域序列，其選自i.與圖2中所示的L1-L52的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域序列具有至少95%的同一性的氨基酸序列；U.包含圖2中所示的L1-L52的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域序列的至少50個連續(xù)氨基酸殘基的氨基酸序列；和iii.由與圖1中所示的編碼L1-L52的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域序列的多核苷酸序列具有至少95%的同一性的多核苷酸序列編碼的氨基酸序列；和b.重鏈可變結(jié)構(gòu)域序列，其選自i.與圖2中所示的H1-H52的重鏈可變結(jié)構(gòu)域序列具有至少95%的同一性的氨基酸序列；ii.包含圖2中所示的H1-H52的重鏈可變結(jié)構(gòu)域序列的至少50個連續(xù)氨基酸殘基的氨基酸序列；和iii.由與圖1中所示的編碼H1-H52的重鏈可變結(jié)構(gòu)域序列的多核苷酸序列具有至少95%的同一性的多核苷酸序列編碼的氨基酸序列；或c)(a)的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域和(b)的重鏈可變結(jié)構(gòu)域。在另一個實施方案中，所述分離的抗原結(jié)合蛋白包含a.輕鏈可變結(jié)構(gòu)域序列，其選自i.與圖2中所示的L1-L52的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域序列具有至少97%的同一性的氨基酸序列；ii.包含圖2中所示的L1-L52的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域序列的至少75個連續(xù)氨基酸殘基的氨基酸序列；和iii.由與圖1中所示的編碼L1-L52的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域序列的多核苷酸序列具有至少97%的同一性的多核苷酸序列編碼的氨基酸序列；和|5.重鏈可變結(jié)構(gòu)域序列，其選自i.與圖2中所示的H1-H52的重鏈可變結(jié)辨域序列具有至少9W的同一性的氨基酸序列；ii.包含圖2中所示的H1-H52的重鏈可變結(jié)構(gòu)域序列的至少75個連續(xù)氨基酸殘基的氨基觫序列；和iii.由與圖1中所示的編碼H1-H52的重鏈可變結(jié)構(gòu)域序列的多核苷酸序列具有至少97%的同一性的多核苷酸序列編碼的氨基酸序列；或c)(a)的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域和(b)的重鏈可變結(jié)構(gòu)域。在另r個實施方案中，所述分離的抗原結(jié)合蛋白包含a.輕鏈可變結(jié)構(gòu)域序列，其選自i.與圖2中所示的L1-L52的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域序列具有至少99%的同一性的氨基酸序列；ii.包含圖2中所示的L1-L52的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域序列的至少90個連續(xù)氨基酸殘基的氨基酸序列；和Hi.由與圖1中所示的編碼L1-L52的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域序列的多核苷酸序列具有至少99%的同一性的多核苷酸序列編碼的氨基酸序列；和b.重鏈可變結(jié)構(gòu)域序列，其選自i.與圖2中所示的H1-H52的重鏈可變結(jié)構(gòu)域序列具有至少99%的同一性的氨基酸序列；ii.包含圖2中所示的|1-H52的重鏈可變結(jié)構(gòu)域序列的至少90個連續(xù)氨基酸殘基的氨基酸凈列；和iii.由與圖1中所示的編碼H1-H52的重鏈可變結(jié)構(gòu)域序列.^多核苷酸序列具有至少99%的同一性的多核苷酸序列編碼的氨基酸序列；或c)(a)的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域和(b)的重鏈可變結(jié)構(gòu)域。在另一個實施方案.中，分離的抗原結(jié)合蛋白包含a.輕鏈可變結(jié)構(gòu)域，其選自圖2中所示的Ll-L52;b.選自圖3中所示的H1-H52的重鏈可變結(jié)構(gòu)域序列；或c.(a)的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域和(b)的重鏈可變結(jié)構(gòu)域。在另一個實施方案中，所述分離的抗原結(jié)合蛋白包含選自下列組合的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域和重鏈可變結(jié)構(gòu)域的組合L1H1、L2H2、L3H3、L4H4、L5H5、L6H6、L7H7、L8H8、L9H9、L10H10、LllHll、L12H12、L13H13、pi4H14、L15H15、L16H16、L17H17、L18H18、L19H19、L20、H20、L21H21、L22H22、L23H23、L24H24、L25H25、L26H26、L27H27、L28H28、L29H29、;30H30、L31H31、L32H32、L33H33、L34H34、L35H35、L36H36、L37H37、L38H38、L39H39、L40固、L41H41、L42H42、L43H43、L44H44、L45H45、L46H46、L47H47、L48H48、L49H49、L50H50、L51H51和L52H52。在另一個實施方案中，所述分離的抗原結(jié)合蛋白還包含a.圖13的K輕鏈恒定序列，b.圖13的IgGl重鏈恒定序列或c.圖13的K輕鏈惲定序列和圖13的IgGl重鏈恒定序列。在另一個實施方案中，所述分離的抗原結(jié)合蛋白，當(dāng)結(jié)合IGF-1R時a.抑制IGF-1R;b.激活fGF-lR;c.與參照抗體交叉竟?fàn)帉GF-1R的結(jié)合；d.與所述參照抗體結(jié)合相同的IGF-IR的表位；e.結(jié)合IGF-1R，該結(jié)合具有基本上與所述參照抗體相同的Kd;或f.結(jié)合IGF-1R，其解離率(offrate)基麥上與所述參照抗體相同；其中所述參照抗體包含選自下列組合的輕鏈和重鏈可變結(jié)構(gòu)域序列的組合L1H1、L2H2、L3H3、L4H4、L5H5、L6H6、L7H7、L8H8、L9H9、LIOHIO、LllHll、L12H12、L13H13、L14H14、U5H15、L16H16、L17H17、L18H18、L19H19、L20、H20、L21H21、L22H22、;23H23、L24H24、L25H25、L26H26、L27H27、L28H28、L29H29、L30謂、L31H31、L32H32、L33H33、L34H34、L35H35、L36H36、L37H37、L38H38、L39H39、L40H40、L41H41、L42H42、L43H43、L44H44、L45H45、L46H46、L47H47、L48H48、L49H49、L50H50、L51H51和L52H52。在另一個實施方案中，所述分離的抗原結(jié)合蛋白，當(dāng)與人IGF-1R結(jié)合時，抑制IGF-1和/或IGF-2對所述人IGF-1R的結(jié)合。在另一個實施方案中，所述分離的抗原結(jié)合蛋白在選自血清、IGF-1和GF-2的生長刺激物存在的情況下抑制癌癥的生長高于80%。在另一個實施方案中，所述癌細胞是MCF-7人乳腺癌細胞。在另一個實施方案中，所述分離的抗原結(jié)合蛋白以高于其對于人胰烏素受體的選擇性至少50倍的選擇性結(jié)合人IGF-1R。在另一個實施方案中，所述分離的抗原結(jié)合蛋白在體內(nèi)抑制腫瘤的生長。在另一個實施方案中，所述分離的抗原結(jié)合蛋白抑制IGF-1R介導(dǎo)的酪氨酸磷酸化。在另一個實施方案中，所述分離的批原結(jié)合蛋白特異性地結(jié)合非人靈長類、食蟹猴(cynomologousmonkey)、黑猩猩、非靈長類哺乳動物、嚙齒動物、小鼠、大鼠、侖鼠、豚鼠、貓或狗的IGF-1R。在另一個實施方案中，所述分離的抗原轉(zhuǎn)合蛋白包括a.人抗體；b.人源化抗體；c.嵌合抗體；d.單克隆抗體；e.多克隆抗體；f.重組抗體；g.抗原結(jié)合抗體片段；h.單鏈抗體；i.雙抗體；j.三鏈抗體；k.四鏈抗體(tetrabody);1.Fab片段；m.F(ab，)2片段；n.結(jié)構(gòu)域抗體(domainantibody);o.IgD抗體；p.IgE抗體；q.IgM抗體；r.IgGl抗體；s.IgG2抗體；t.IgG3抗體；u.IgG4抗體；或v.具有至少一個減少形成H鏈內(nèi)二硫鍵的趨勢的鉸鏈區(qū)內(nèi)突變的IgG4抗體。在另一個實施方案中，本發(fā)明提供了分離的多核苷酸，該多核苷酸包含編碼所述抗原結(jié)合蛋白的輕鏈、重鏈或兩者的序列。在一個實裨方案中，所述多核苷酸包含圖1的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域核酸序列和/或圖1的重鏈可變結(jié)構(gòu)域核酸序列。在另一個實施方案中，質(zhì)粒包含所述分離的多核苷酸。在另一個實施方案中，所述質(zhì)粒是表達載體。在另一個實施方案中，分離的細胞包含所述多核苷酸。在另一個實施方案中，所述細胞的染色體包含所述多核苷酸。在另一個實施方案中，所述細胞是雜交瘤細胞。在另一個實施方案中，表達栽體包含所述核酸。在另一個實施方案中，所述細胞是CHO細胞。在另一個實施方案中，本發(fā)明提供了制備結(jié)合人IGF-1R的抗原結(jié)合蛋白的方法，其包括在允許所述分離的細胞表達所述抗原結(jié)合蛋白的條件下溫育所述細胞。在另一個方面，本發(fā)明提供了包含所述抗原結(jié)合蛋白的藥物組合物。在一個實施方案中，本發(fā)明提供了在受試者中治療病癥的方法，其包括給所述受試者施用所述藥物組合物，其中可通過在所述受試者中減少IGF-1R的活性來治療所述病癥。在另一個實施方案中，所述受試者是人類。在另一個實'施方案中，所述病癥是多發(fā)性骨髄瘤、液體腫瘤(liquidtumor)、肝癌、胸腺疾病(thymusdisorder)、T細胞介導(dǎo)的自身免疫疾病、內(nèi)分泌紊亂(endocronologicaldisorder)、局部缺血或神經(jīng)變性疾病(neurodegenerativedisorder)。在另一個實施方案，所述液體腫瘤選自急性淋巴細胞性白血病(ALL)和慢性髓細胞性白血病(CML);其中所述肝癌選自肝癌、肝細胞癌、膽管癌、血管肉瘤、血管肉瘤、肝胚細胞瘤；其中所述胸腺疾病選自胸腺瘤和曱狀腺炎，其中所述T細胞介導(dǎo)的自身免疫疾病選自多發(fā)性硬化癥、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、全身性紅斑狼瘡(SLE)、格雷夫斯病、橋本曱狀腺炎、重癥肌無力、自身免疫性甲狀腺炎、白塞病(Bechet'sDisease)，其中所述內(nèi)分泌紊亂選自II型糖尿病、甲狀腺功能亢進、甲狀腺功能減退、甲狀腺炎、腎上腺皮質(zhì)功能亢進和腎上腺皮質(zhì)功能減退；其中所述局部缺血是心臟梗塞后局部缺血(postcardiacinfarctischemia)，或其中所述神經(jīng)變性病癥是阿耳茨海默氏病。在另一個實施方案中，所述病癥選自肢端肥大癥、膀胱癌、腎母細胞瘤、卵巢癌、胰腺癌、良性前列腺增生癥、乳腺癌、前列腺癌、骨癌、肺癌、結(jié)腸直腸癌、子宮頸癌、滑膜肉瘤、與轉(zhuǎn)移類癌瘤相關(guān)的腹瀉、分泌腸道血管活性肽的腫瘤(vasoactiveintestinalpeptidesecretingtumors)、巨人癥、牛皮癬、動脈粥樣硬化、血管的平滑肌再狹窄、不適當(dāng)?shù)奈⒀茉鲋?、成膠質(zhì)細胞瘤、成神經(jīng)管細胞瘤、頭和頸鱗狀上皮細胞癌、口腔癌、口腔白斑、前列腺上皮內(nèi)瘤形成(prostateintraepithelialneoplasia)、膽門癌、食管癌、胃癌、骨癌、轉(zhuǎn)移癌、真性紅細胞增多癥、與氧化應(yīng)激相關(guān)的良性病癥、早產(chǎn)兒視網(wǎng)膜病、急性呼吸窘迫綜合征、對乙酰氨基酚的過度劑量、支氣管肺發(fā)育異常、嚢性纖維化、肺纖維化和糖尿病性視網(wǎng)膜病。在另一個實施方案中，所述方法還包括給所述受試者施用第二療法。在另一個實施方案中，在給所述受試者施用所述藥物組合物之前和/或與此同時和/或之后施用所述第二療法。在另一個實施方案中，所述第二療法包括放照治療、手術(shù)或第二藥物組合物。在另一個實施方案中，所述第二藥物組合物包含藥劑，所述藥劑選自皮質(zhì)類固醇、止吐藥、鹽酸昂丹司瓊、鹽酸格拉司瓊、甲氧氯普胺(metroclopramide)、多潘立酮、氟派啶醇、賽克利嗪、勞拉西泮、丙氯拉嗪、地塞米松、甲氧異丁溱、托吡西隆、癌癥疫苗、GM-CSF抑制劑、GM-CSFDNA疫苗、基于細胞的疫苗、樹突細胞疫苗、重組病毒疫苗、熱激蛋白(HSP)疫苗、同種異體肺瘤疫苗(allogeneictumorvaccine)、自體腫瘤疫苗、止痛劑、布洛芬、萘普生、三水楊酸膽堿鎂、鹽酸氧可酮、抗血管生成(anti-angiogenicagent)、抗血管劑(anti-vascularagent)、貝伐單抗、抗VEGF抗體、抗VEGF受體抗體、可溶性VEGF受體片段、抗TWEAK抗體、抗TWEAK受體抗體、可溶性TWEAK受體片段、AMG706、掘G386、抗增殖劑、法呢基蛋白轉(zhuǎn)移酶抑制劑(farnesylproteintransferaseinhibitor)、avP3抑制劑、ocvp5抑制劑、p53抑制劑、kit受體抑制劑、ret受體抑制劑、PDGFR抑制劑、生長激素分泌抑制劑、血管生成素抑制劑(angiopoietininhibitor)、腫瘤浸潤性巨噬細胞抑制劑、c-fms抑制劑、抗c-fms抗體、CSF-1抑制劑、批CSF-1抗體、可溶性c-fms片段、培維索孟、吉西他濱、panitumumab、依立替康(irinothecan)、和SN-38。在另一個實施方案中，所述方法包括給所述受試者施用第三療法。在另一個實施方案中，所述病癥是癌癥，所述第二療法包括施用panitumumab，且所述第三療法包括施用吉西他濱。在另一個實施方案中，所述病癥選自肢端肥大癥、膀胱癌、腎母細胞瘤、卵巢癌、胰腺癌、良性前列腺增生、乳腺癌、前列腺癌、骨癌、肺癌、結(jié)腸直腸癌、子宮頸癌、滑膜肉瘤、與轉(zhuǎn)移的類癌瘤相關(guān)的腹瀉、血管活性腸肽分泌型腫瘤、巨人癥、牛皮癬、動脈粥樣硬化、血管的平滑肌再狹窄、不適當(dāng)?shù)奈⒀茉鲋?、成膠質(zhì)細胞瘤、成神經(jīng)管細胞瘤、頭與頸鱗狀上皮細胞癌、口腔癌、口腔白斑癥、前列腺上皮內(nèi)瘤形成、肛門癌、食管癌、胃癌、骨癌、轉(zhuǎn)移癌、真性紅細胞增多癥、涉及氧化應(yīng)激的良性病癥、早產(chǎn)兒視網(wǎng)膜病、急性呼吸窘迫綜合征、對乙酰氨基酚的過量、支氣管肺發(fā)育異常、嚢性纖維化、肺纖維化和糖尿病性視網(wǎng)膜病。在另一個方面，本發(fā)明提供了增加受試者壽命的方法，其包括給所述受試者施用所述藥物組合物。在另一個方面，本發(fā)明提供了在需要其的受試者中減少IGF-1R活性的方法，其包括給所述受試者施用所述藥物組合物。在另一個方面，本發(fā)明提供了在需要其的受試者中減少IGF-1R信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的方法，其包括給所述受試者施用所述藥物組合物。在另一個方面，本發(fā)明提供了在需要其的受試者中抑制IGF-1和/或IGF-2對IGF-1R的結(jié)合的方法，其包括給所述受試者施用所述藥物組合物。泉明詳述本發(fā)明提供了涉及結(jié)合胰島素樣生長因子受體("IGF-1R")的分子的組合物、試劑盒和方法，所述分子包括激動或拮抗IGF-1R的分子，例如抗IGF-1R抗體、抗體片段和抗體衍生物，例如拮抗性抗IGF-1R抗體、抗體片段或抗體衍生物。也提供了包含編碼結(jié)合IGF-1R的多肽的整體或部分的核苷酸序列的核酸及其衍生物和片段(例如編碼抗IGF-1R抗體的整體或部分、抗體片段或抗體衍生物的核酸)、包含這些核酸的質(zhì)粒和載體以及包含這些核酸和/或載體以及質(zhì)粒的細胞或細胞系。提供的方法包括，例如制備、鑒定或分離結(jié)合IGF-1R的分于例如抗IGF-1R抗體的方法，確定分子是否結(jié)合IGF-1R的方法，確定分子是否激動或拮抗IGF-1R的方法，制備包含結(jié)合IGF-1R的分子的組合物例如藥物組合物的方法，和給受試者施用結(jié)合IGF-1R的分子的方法，例如用于治療由IGF-1R介導(dǎo)的病癥的方法，和用于在體內(nèi)或體外激動或拮抗IGF-1R、IGF-1和/或IGF-2的生物學(xué)活性的方法。使用標(biāo)準(zhǔn)的單或三字母縮寫標(biāo)示多核苷酸和多肽序列。除非另外指出，多肽序列在左邊具有其氨基末端，在右邊具有其羧基末端以及單鏈核酸序列，雙鏈核酸序列的上面的鏈在左邊具有其5，末端，在右邊具有其3，末端。也可通過說明其與參照序列的不同之處來描述特定的多肽或多核苷酸序列。特定輕鏈和重鏈可變結(jié)構(gòu)域的多核苷酸和多肽序列示于圖1、2和3中，其中將其標(biāo)記為，例如，Ll("輕鏈可變結(jié)構(gòu)域1")、Hl("重鏈可變結(jié)構(gòu)域1")等。通過組合輕鏈的名稱和重鏈可變結(jié)構(gòu)域的名稱來表示包含來自圖2和3的輕鏈和重鏈的抗體。例如，"L4H7"表示包含L4的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域和H7的重鏈可變結(jié)構(gòu)域的抗體。除非此處另外定義，所用的與本發(fā)明相關(guān)的科學(xué)和技術(shù)術(shù)語將具有由本領(lǐng)域技術(shù)人員通常理解的意思。此外，除非上下文另外要求，羊數(shù)術(shù)語包括復(fù)數(shù)而復(fù)數(shù)術(shù)語包括單數(shù)。一般地，用于此處描述的細胞和組織培養(yǎng)、分子生物學(xué)、免疫學(xué)、微生物學(xué)、遺傳和蛋白質(zhì)以及核酸化學(xué)和雜交的術(shù)語學(xué)和技術(shù)是本領(lǐng)域內(nèi)熟知和常用的術(shù)語和技術(shù)。除非另外說明，通常按照在整個本說明書中引用和描述的本領(lǐng)域熟知的和各種一般和更專業(yè)的參考資料中描述的常規(guī)方法進行本發(fā)明的方法和技術(shù)。參見，例如，Sambrook等人MolecularCloning:ALaboratoryManual,第2版，ColdSpringHarborLaboratoryPress,(oldSpringHarbor,N.Y.(1989)和Ausubel等人，CurrentProtocolsinMolecularBiology,GreenePublishingAssociates(1992)，和HarlowandLaneAntibodies:ALaboratoryManualColdSpringHarborLaboratoryPress,ColdSpringHarbor,N.Y.(1990):其在此引用作為參考。按照廠商說明書進行酶促反應(yīng)和純化技術(shù)，如通常在本領(lǐng)域內(nèi)實現(xiàn)的或如此處所描述的。所用的與此處描述的分析化學(xué)、合成有機化學(xué)和醫(yī)學(xué)和藥物化學(xué)的實驗室方法和技術(shù)相關(guān)的術(shù)語學(xué)是本領(lǐng)域熟知的和常用的術(shù)語學(xué)。可將標(biāo)準(zhǔn)的技術(shù)用于化學(xué)合成、化學(xué)分析、藥物制備、配制和遞送以及患者的治療。下列術(shù)語，除非另外指出，將理解為具有下列意思術(shù)語"分離的分子"(其中所述分子是例如多肽、多核苷酸或抗^)是分子:，依賴于其來源或衍生的來源，所述分子(l)不與在其天然狀態(tài)下天然伴隨其的組分結(jié)合，(2)基本上不含來自相同物種的其他夯子，(3)由來自不同物種的細胞表達或(4)非天然地發(fā)生。因此，子將與其天然結(jié)合的組分"分離"。也可用本領(lǐng)域熟知的純化技術(shù)通過分離使分子基本上不含天然結(jié)合的組分?？赏ㄟ^本領(lǐng)域內(nèi)許多熟知的方法測定分子純度或均質(zhì)性。例如，可使用聚丙烯酰胺凝膠電泳和使用本領(lǐng)域內(nèi)熟知的技術(shù)對凝膠染色以顯示多肽來測定多肽樣品的純度。對于某些目的，可通過HPLC或本領(lǐng)域熟知的用于純化的其他方法來提供更高的分辨率。術(shù)語"IGF-1R抑制劑"和"IGF-1R拮抗劑"可互換使用。各為可檢測地抑制IGF-1R的至少一種功能的分子。相反地，"IGF-1R激動劑"是可檢測地增加IGF-1R的至少一種功能的分子。由IGF-1R抑制劑引起的抑制作用不必是完全的，只要使用測定法可檢測其。可使用IGF-1R功能的任何測定法，此處提供其實例?？赏ㄟ^IGF-1R抑制劑抑制或通過IGF-1R激動劑增加的IGF-1R功能的實例，包括對IGF-1、IGF-12和/或另一種IGF-1R激活分子的結(jié)合、激酶活性、下游信號轉(zhuǎn)導(dǎo)等。IGF-1R抑制劑和IGF-1R激動劑的類型的實例包括，但不限于，IGF-1R結(jié)合多肽例如抗原結(jié)合蛋白(例如，IGF-1R抑制性抗原結(jié)合蛋白)、抗體、抗體片段和抗體衍生物。術(shù)語"肽"、"多肽"和"蛋白"各自指包含兩個或多個通過肽鍵連接的氨基酸殘基的分子。這些術(shù)語包括，例如，天然的和人工的蛋白、蛋白片段和蛋白序列的多肽類似物(例如突變蛋白、變體和融合蛋白)以及翻譯后修飾或共價或非共價修飾的蛋白。肽、多肽或蛋白可以是單體或多聚體。如此處所用的，術(shù)語"多肽片段"是指與對應(yīng)的全長蛋白相比，具有氨基末端和/或羧基末端缺失的多肽。片段在長度上可以是，例如，至少5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、20、50、70、80、90、100、150或200個氨基酸。片段在長度上也可以是例如至多1，000、750、500、250、200、175、150、125、100、90、80、70、60、50、40、30、20、15、14、13、12、11或10個氨基酸。片段還可在其任"末端或兩個末端包含一個或多個額外的氨基酸，例如，來自不同的天然發(fā)生的蛋白(例如，F(xiàn)c或亮氨酸拉鏈結(jié)構(gòu)域)的氨基酸序列或人工氨基酸序列(例如，人工連接體序列)。本發(fā)明的多肽包括已以任何方法和因任何理由修飾的多肽，例如，所述理由是例如(l)減少對蛋白水解的敏感性，(2)減少對氧化的敏感性，(3)改變形成蛋白復(fù)合物的結(jié)合親和力，(4)改變結(jié)合親和力，和(4)賦予或改變其他物化或功能特性。類似物包括多肽的突變蛋白。例如，可在天然發(fā)生的序列中(例如，在形成分子間接觸的結(jié)構(gòu)域以外的多肽部分中)產(chǎn)生單個或多個氨基酸的置換(例如，保守性氨基酸置換)。"保守性氨基酸置換"是基本上不改變親本序列的結(jié)構(gòu)特征的置換(例如，取代氨基酸不應(yīng)當(dāng)傾向于打斷親本序列中發(fā)生的螺旋，或破壞表征親本或其功能性所必需的其他類型的二級結(jié)構(gòu))。在Proteins,StructuresandMolecularPrinciples(Creighton，Ed.，W.H.FreemanandCompany,NewYork(1984));IntroductiontoProteinStructure(C.Branden和J.Tooze，eds.，GarlandPublishing,NewYork,N丄(1991));和Thornton爭乂Nature354:105(1991)中描述了本領(lǐng)域承認的多肽二級結(jié)構(gòu)和三級結(jié)構(gòu)的實例，所述參考資料各自在此引用作為參考。本發(fā)明也提供了IGF-1R結(jié)合多肽的非肽類似物。非肽類似物通常在制藥工業(yè)中用作具有類似于模板肽性質(zhì)的性質(zhì)的藥物。這些類型的非肽化合物稱為"肽才莫擬物(peptidemimetics)"或"擬肽(peptidomimetics)，，。Fauchere，J.Adv.DrugRes.15:29(1986);Veber和FreidingerTINSp.392(1985);和Evans等人J.Med.Chem.30:1229(1987)，其在此引用作為參考。在結(jié)構(gòu)上與治療有用的肽相fe的肽模擬物可用于產(chǎn)生等同的治療或預(yù)防功效。一般地，擬肽在結(jié)構(gòu)上與范例多肽(paradigmpolypeptide)(即，具有想要的生物化學(xué)性質(zhì)或藥理活性的多肽)例如人抗體相似，但任選地通過本領(lǐng)域內(nèi)熟^p的方法使一個或多個肽鍵被選自下列的鍵取代一CH2NH—、—CH2S—、一CH2—CH2--、一CH-CH-(順式和反式)、一C0CH2—、^-CH(0H)CH2—和一CH2S0—。用相同類型的D氨基酸系統(tǒng)性地置換共有序列的一個或多個氨基酸(例如，D賴氨酸取代L賴氨酸)也可用于產(chǎn)生更穩(wěn)定的多肽。此外，可通過本領(lǐng)域已知的方法(Rizo和GieraschAnn.Rev.Biochem.61:387(1992)，此處引用作為參考)例如通過添加能夠形成使肽環(huán)化的分子內(nèi)二硫鍵的內(nèi)部半胱氨酸殘基來產(chǎn)生受限制的肽(constrainedpeptide)，所述肽包含共有序列或基本上相同的共有序列變異。多肽(例如，抗體)的"變體"包含氨基酸序列，在所述氨基酸序列中，相對于另一個多肽序列，一個或多個氨基酸殘基被插入、缺失和/或置換。本發(fā)明的變體包括融合蛋白。多肽的"衍生物"是已通過例如綴合至另一個化學(xué)部分例如聚乙二醇、白蛋白(例如，人血清白蛋白)、磷酸化和糖基化被化學(xué)修飾的多肽(例如抗體)。除非另外指出，術(shù)語"抗體"包括，除了包含兩條全長的重鏈和兩條全長的輕鏈的抗體外，其衍生物、變體、片段和突變蛋白，下面描述了其實例。"抗原結(jié)合蛋白"是包含結(jié)合抗原的部分和任選地支架或構(gòu)架部命的蛋白，所述支架或構(gòu)架部分允許所述抗原結(jié)合部分采取促進所述抗原結(jié)合蛋白對所述抗原結(jié)合的構(gòu)象?？乖Y(jié)合蛋白的實例包括抗體、抗體片段(例如，抗體的抗原結(jié)合部分)、抗體衍生物和抗體類似物?？乖Y(jié)合蛋白可包括，例如，可選擇的蛋白支架或具有移植的CDR或CDR衍生物的人工支架。這些支架包括，但不限于，包含被導(dǎo)入以例如穩(wěn)定所述抗原結(jié)合蛋白的三維結(jié)構(gòu)的突變的抗體來源的支架以及包含例如生物可相容的聚合物的完全合成的支架。參見，例如，Korndorfer等人，2003，Proteins:Structure,Function,andBioinformatics，第53巻，Issue1:121-129;Roque等人，2004，Biotechnol.Prog.20:639-654。此外，可4吏用肽抗體才莫擬物("PAMs")，以及基于使用纖連蛋白組分作為支架的抗體模擬物的支架?？乖Y(jié)合蛋白可具有例如天然發(fā)生的免疫球蛋白的結(jié)構(gòu)。"免疫球蛋白"是四聚體分子。在天然發(fā)生的免疫球蛋白中，各四聚體由兩個相同的多肽鏈對組成，各對具有一個"輕"鏈(大約25kDa)和一個"重"鏈(大約50-70kDa)。各鏈的氨基末端部分包含大約100至110或更多個氨基酸組成的負責(zé)抗原識別的可變區(qū)。各鏈的羧基末端部分界定主要負責(zé)效應(yīng)子作用(effectorfunction)的恒定區(qū)。人輕鏈被分類為k和入輕鏈。重鏈被分類為M、5、y、cx或e，并分別將抗體的同種型確定為IgM、IgD、IgG、IgA和IgE。在輕鏈和重鏈內(nèi)，所述可變區(qū)和恒定區(qū)通過大約12或更多個氨基酸的"j"區(qū)域連接，重鏈也包含大約10或更多個氨基酸的"D"區(qū)域。一般參照，F(xiàn)undamentalImmunologyCh.7(Paul,W.，ed.，第2版，RavenPress,N.Y.(1989))(對于所有目的，以其全文在此引用作為參考)。各輕/重鏈對的可變區(qū)形成了抗體結(jié)合位點，從而使完整的免疫球蛋白具有兩個結(jié)合位點。天然發(fā)生的免疫球蛋白鏈展示了由三個超變區(qū)(也稱作互補決定區(qū)或CDR)連接的相對保守的框架區(qū)(FR)的相同的一般結(jié)構(gòu)。從N端至C端，輕鏈和重鏈都包含結(jié)構(gòu)域FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3和FR4。氨基酸至各結(jié)構(gòu)域的分配Kabat等人在Se^/e/zceso/",rofe//zs0/V/咖"/7o/og/ca//nfere"，第5版，USDept.ofHealthandHumanServices,PHS，NIH，NIHPublicationno.91-3242，1991中的定義一致。除非另外說明，"抗體"是指完整的免疫球蛋白或與所述完整的抗體竟?fàn)幪禺愋越Y(jié)合的其抗原結(jié)合部分。可通過重組DNA技術(shù)或通過完整抗體的酶促或化學(xué)切割產(chǎn)生抗原結(jié)合部分?？乖Y(jié)合部分包括，除其他以外,，可包含免疫球蛋白的至少一部分的Fab、Fab'、F(ab02、Fv、結(jié)構(gòu)域抗體(dAb)和互補決定區(qū)(CDR)片段、單鏈抗體(scFv)、嵌舍抗體、雙抗體、三抗體、四鏈體和多肽，所述一部分足以賦予對該多肽的特異性抗原結(jié)合。Fab片段是具有Vl、Vh、Cl和Ch1結(jié)構(gòu)域的單價片段；F(aV)2片段是具有在鉸鏈區(qū)通過二硫鍵連接的兩個Fab片段的二價片段；Fd片段具有Vh和CJ結(jié)構(gòu)域；Fv片段具有抗體的單臂的Vl和Vh結(jié)枸域；以及dAb片段具有Vh結(jié)枸域、Vl結(jié)枸域，或Vh或VL結(jié)構(gòu)域的抗原結(jié)合片段(美國專利6,846,634、6,696,245，美國申請公開號05/0202512、04/0202995、04/0038291、04/0009507、03/0039958，Ward等人，Nature341:544-5"，1989)。單鏈抗體(scFv)是其中Vl和VH區(qū)域通過連接體(例如，氨基酸殘基的合成序列)連接形成連續(xù)蛋白鏈的抗體，其中所述連接體長度足以允許蛋白鏈自身折疊，從而形成單價抗原結(jié)合位點(參見，例如，Bird等人，1988，Science242:423-26和Huston等人，1988，Proc.Natl.Acad.Sci.USA85:5879-83)。雙抗體是包含兩條多肽鏈的二價抗體，其中各肽鏈包含通過連接體連接的Vh和VL鏈，所述連接體太短以至不能允許相同鏈上的兩個結(jié)構(gòu)域之間形成配對，從而允許各結(jié)構(gòu)域與另T"條多肽鏈上的互補結(jié)構(gòu)域配對(參見，例如，Holliger等人，1993，roc.Natl.Acad.Sci.USA90:6444-48，andPoljak等人，1994，Structure2:1121-23)。如果雙抗體的兩條多肽鏈?zhǔn)窍嗤?，那么由丼配對所得的雙抗體將具有兩個相同的抗原結(jié)合位置。具有不同序列的多肽鏈可用于產(chǎn)生具有兩個不同抗原結(jié)合位點的雙抗體。類似地，三抗體和四鏈體是分別包含三條和四條多肽鏈且形成三個和四個抗原結(jié)合位點的抗體，所述抗原結(jié)合位點可以是相同的或不同的?？墒褂糜蒏abat等人在SequencesofProteinsofImmunologicalInterest,第5版.，USDept.ofHealthandHumanServices,PHS，NIH，NIHPublicationno.91-3242，1991中描述的系統(tǒng)鑒定給定的抗體的互補決定區(qū)(CDR)和構(gòu)架區(qū)(FR)。可將一個或多個CDR共價地或非共價地整合入分子以使其成為抗原結(jié)合蛋白?？乖Y(jié)合蛋白可將CDR整合為更大的多肽鏈的部分，可共價地將CDR連接至另一條多肽鏈，或可非共價地整合CDR。所述CDR允許抗原結(jié)合蛋白特異性地結(jié)合特定的目的抗原。抗原結(jié)合蛋白可具有一個或多個結(jié)合位點。如果存在不止一個結(jié)合位點，結(jié)合位點相互之間可相同或可不同。例如，天然發(fā)生的人免疫球蛋白通常具有兩個相同的結(jié)合位點，而"雙特異性"或"雙功能"抗體具有兩個不同的結(jié)合位點。術(shù)語"人抗體"包括具有一個或多個來源于人免疫球蛋白序列的可變和恒定區(qū)的所有抗體。在一個實施方案中，所有可變和恒定結(jié)構(gòu)域來源于人免疫球蛋白序列(完全的人抗體)?？梢栽S多方法制備這些抗體(其實例在下面進行了描述)，包括通過用目的抗原免疫經(jīng)基因工程改造從而表達來源于人重鏈和/或輕鏈編碼基因的抗體的小鼠制o人源化的抗體具有序列，所述序列與來源于非人物種的抗體的序列差異在于一個或多個氨基酸置換、缺失和/或添加，這樣，和所述非人物種抗體相比，當(dāng)將其給人受試者施用時，人源化抗體不太可能誘導(dǎo)免疫反應(yīng)，和/或誘導(dǎo)較不嚴重的免疫反應(yīng)。在一個實施方案中，對非人物種抗體的重鏈和/或輕鏈的構(gòu)架區(qū)和恒定結(jié)構(gòu)域中的某些氨基酸進行突變以產(chǎn)生人源化抗體。在另一個實施方案中，將來自人抗體的恒定結(jié)構(gòu)域融合至非人物種的可變區(qū)。在另一個實施方案中，改變非人抗體的一個或多個CDR序列的一個或多個氨基酸殘基以減少，當(dāng)給人受試者施用時，非人抗體的可能的免疫原性，其中改變的氨基酸殘基對于抗體對其抗原的免疫特異性結(jié)合不是至關(guān)重要的，或產(chǎn)生的對所述氨基酸序列的改變是保守的改變，這樣人源化抗體對抗原的結(jié)合不會明顯地比非人抗體對抗原的結(jié)合弱?？稍诿绹鴮＠?,054,297、5，886，152和5，877，293中找到如何制備人源化抗體的實例。術(shù)語"嵌合抗體，，是指包含來自一種抗體的一個或多個區(qū)域和來自一種或多種其他抗體的一個或多個區(qū)域的抗體。在一個實施方案中，一個或多個CDR來源于人抗IGF-1R抗體。在另一個實施方案中，所有CDR來源于人抗IGF-1R抗體。在另一個實施方案中，在嵌合抗體中混合和匹配來自不止一個的人抗IGF-1R抗體的CDR。例如，嵌合抗體可包含來自第一人抗IGF-1R抗體的輕鏈的CDR1、來自第二人抗IGF-1R抗體的輕鏈的CDR2和CDR3和來自笫三抗IGF-1R抗體的重鏈的CDR。此外，所述構(gòu)架區(qū)可來源于相同抗IGF-1R抗體中的一個，來源于一個或更多個不同的抗體例如人抗體或來自人源化抗體。在嵌合抗體的一個實例中，重鏈和/或輕鏈的部分與來自特定物種的抗體相同、同源或來源于其或?qū)儆谔囟贵w種類或亞類，而鏈的其余部分與來自另一種物種的抗體相同、同源或來源于其或?qū)儆诹硪环N抗體種類或亞類。也包括展示想要的生物學(xué)活性(即，特異性結(jié)合IGF-1R的能力)的抗體片段。參見，例如，美國專利4,816,567和Morrison,1985，Science229:1202-07。當(dāng)過量的抗IGF-1R抗體減少結(jié)合IGF-1R的IGF-1和/或IGF-2的量至少大約20%(使用實施例9中描述的測定法測量)時，"中和抗體"或"抑制性抗體"是抑制IGF-1R對IGF-1和/或IGF-2的結(jié)合的抗體。在不同的實施方案中，所述抗體減少結(jié)合IGF-1R的IGF-l和/或IGF-2的量至少30%、40%、50%、60%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、97%、99%和99.9%。"激活性抗體"是當(dāng)加入表達IGF-1R的細胞、組織或生物時激活I(lǐng)GF-1R至少大約20%的抗體，其中"100%的激活"是在生理條件下由相同摩爾量的IGF-1和/或IGF-2獲得的激活水平。在不同實施方案中，所述抗體激活I(lǐng)GF-1R的活性至少30%、40°/。、50%、60%、70%、80%、90%、100%、125%、150%、175%、200%、250%、300%、350%、400%、450%、500%、750%或1000°/。?？捎杀绢I(lǐng)域技術(shù)人員按照本說明書的教導(dǎo)和使用本領(lǐng)域熟知的技術(shù)容易地制備抗體的片段或類似物。優(yōu)選的片段或類似物的氨基和羧基末端可發(fā)生在功能結(jié)構(gòu)域的邊界的附近?？赏ㄟ^將核苷酸和/或氨基睬序列數(shù)據(jù)與公共或私人序列數(shù)據(jù)庫比較來鑒定結(jié)構(gòu)和功能結(jié)構(gòu)域?？墒褂糜嬎銠C化的比較方法鑒定在已知結(jié)構(gòu)和/或功能的其他蛋白中發(fā)生的序列基序或預(yù)測的蛋白質(zhì)構(gòu)象結(jié)構(gòu)域。確定折疊成已知三維結(jié)構(gòu)的蛋白序列的方法是已知的。參見，例如，Bowie等人，1991，Science253:164。"CDR移植抗體"是包含來源于特定物種的抗體或同種型的一個或多個CDR和相同或不同物種的另一種抗體或同種型的構(gòu)架區(qū)的抗體。"多特異性抗體"是識別一個或多個抗原上的多于一個表位的抗體?？贵w的該類型的亞類是識別相同或不同抗原上的兩種不同表位的"雙特異性抗體"。如果抗原結(jié)合蛋白以1納摩爾或更少的解離常數(shù)結(jié)合抗原，則抗原結(jié)合蛋白"特異性結(jié)合"抗原(例如，人IGF-1R)。"抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域"、"抗原結(jié)合區(qū)"或"抗原結(jié)合位點"是包含氨基酸殘基(或其他部分)的抗原結(jié)合蛋白的部分，所述氨基酸殘基或其他部分與抗原相互作用并促成抗原結(jié)合蛋白對于所述抗原的特異性和親和力。對于特異性結(jié)合其抗原的抗體，其將包括其CDR結(jié)構(gòu)域的至少一個結(jié)構(gòu)域的至少部分。"表位"是被抗原結(jié)合蛋白(例如，被抗體)結(jié)合的分子的部分。表位可包含分子的非連續(xù)部分(例如，在多肽中，在多肽的一級序列中不連續(xù)但在多肽的三級和四級結(jié)構(gòu)的背景中相互之間充分靠近從而足以被抗原結(jié)合蛋白結(jié)合的氨基酸殘基)。通過使用GAP計算機程序(GCGWisconsinPackage,版本10.3(Accelrys，SanDiego，CA)的部分)，使用其缺省參數(shù)比較序列來確定兩個多核普酸或兩個多肽序列的"百分比同一性"。術(shù)語"多核苷酸，，、"寡核苷酸"和"核酸"可完全互換使用且包括DM分子(例如，cDNA或基因組DNA)、RNA分子(例如，mRNA)、像用核苷酸類似物(例如，肽核酸和非天然發(fā)生的核苷酸類似物)產(chǎn)生的DM或RNA的類似物和其雜合物。核酸分子可以是單鏈或雙鏈。在一個實施方案中，本發(fā)明的核酸分子包含編碼本發(fā)明的抗體或其片段、衍生物、突變蛋白或變體的連續(xù)開放閱讀框架。如果兩個單鏈多核苷酸可以反向平行方向比對以使一條核酸中的每一個核苷酸與另一個多核苷酸中的其互補核苷酸相對而不引入缺口且在任一序列的5，或3，末端上無未配對的核苷酸，則其為相互之間的"互補物，，。如果兩個多核苷酸可在中等嚴緊條件下相互雜交，則多核苷酸與另一個多核苷酸"互補"。因此，多核苷酸可與另一個多核苷酸互補而不為其互補物。"載體"是可用于將另一個連接至其上的核酸導(dǎo)入細胞的核酸。載體的一種類型是"質(zhì)粒"，其是指可將另外的核酸片段連接入其中的線性或環(huán)狀雙鏈DNA分子。載體的另一種類型是病毒載體(例如，復(fù)制缺陷型逆轉(zhuǎn)錄病毒、腺病毒和腺伴隨病毒)，其中可將另外的DNA片段導(dǎo)入病毒基因組。某些載體能夠在其被導(dǎo)入的宿主細胞中自主復(fù)制(例如，包含細菌復(fù)制起點和哺乳動物染色體外載體的細菌載體)。其他載體(例如，非染色體外哺乳動物載體)，在導(dǎo)入宿主細胞后，被整合入宿主細胞的基因組中，從而隨著宿主基因組復(fù)制而復(fù)制。"表達載體"是能夠指導(dǎo)選擇的多核苷酸表達的載體類型。如果調(diào)控序列影響核苷酸序列的表達(例如，表達的水平、時間或位置)那么所述核苷酸序列"有效地連接"至調(diào)控序列。"調(diào)控序列"是影響有效連接至其的核酸的表達(例如表達的水平、時間或位置)的核酸。調(diào)控序列可，例如直接地或通過一種或多種其他分子(例褲加其作用:調(diào)控序列的;例包^^啟動子、增強子和其他表達控制元件(例如，聚腺苷酸化信號)。在例如Goeddel，"90，GeneExpressionTechnology:MethodsinEnzymology185，AcademicPress,SanDiego，CA和Baron爭乂，1995，NucleicAcidsRes.23:3605-06中描述了調(diào)控序列的其他實例。"宿主細胞"是可用于表達核酸，例如本發(fā)明的核酸的細胞。宿主細胞可以是原核生物，例如，大腸桿菌(A.co")，或其可以是真核生物，例如，單細胞真核生物(例如，酵母或其他真菌)、植物細胞(例如，蛔草或番茄植物細胞)、動物細胞(例如，人細胞、猴細胞、倉鼠細胞、大鼠細胞、小鼠細胞或昆蟲細胞)或雜交瘤。宿主細胞的實例包括猴腎細胞的C0S-7細胞系(ATCCCRL1651)(參見Gluz歸n等人，1981，Cell23:175)、L細胞、C127細胞、3T3細胞(ATCCCCL163)、中國倉鼠卵巢(CH0)細胞或其衍生物例如VeggieCH0和在無血清培養(yǎng)基上生長的相關(guān)細胞系(參見Rasmussen等人，1998,Cytotechnology28:31)或CH0品系DX-Bll(參見Urlaub等人，1980，Proc.Natl.Acad.Sci.USA77:4216-20)(所述細胞系在DHFR方面具有缺陷)、HeLa細胞、BHK(ATCCCRL10)細胞系、來源于非洲綠猴腎細胞系CV1(ATCCCCL70)的CV1/EBNA細胞系(參見McMahan等人，1991，EMB0J.10:2821)、人胚胎腎細胞例如293、293EBNAilMSR293、人表皮A431細胞、人Colo205細胞、其他轉(zhuǎn)化的靈長類動物細胞系、正常的二倍體細胞、來源于靈長類動物組織、靈長類動物外植體的體外培養(yǎng)物的細胞品系、HL-60、U937、HaK或Jurkat細胞。一般地，宿主細胞是可用編碼多肽的核酸轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)染的培養(yǎng)細胞，所述核酸因此可在宿主細胞中表達。術(shù)語"重組宿主細胞，，可用于表示已用要表達的核酸轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)染的宿主細胞。如果不將調(diào)控序列導(dǎo)入揮主細胞以使其有效連接核酸，所述宿主細胞也可以是包含所述核酸餌不在想要的水平上表達其的細胞。要理解，術(shù)語宿主細胞不僅是指特定的細胞還指該細胞的后代或潛在的后代。因為例如突變或環(huán)境影^J的原因在連續(xù)世代中可發(fā)生某些修飾，所以所述后代事實上可以不與親本細胞相同，但仍然包括在此處所用的術(shù)語的范圍之內(nèi)。IGF-1RIGF-1R是跨膜受體酪氨酸激酶(Blume-Jensen爭入，2001，Nature411:355-65)。人IGF-1R被合成為1367個氨基酸的前體多肽，所述多肽包括在轉(zhuǎn)運至內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的過程中被除去的30個氨基酸的信號肽(Swiss-Prot:P08069)。所述IGF-1R前受體(proreceptor)在ER-高爾基體中成熟期間被糖基化且在位點708-711(從緊接信號肽序列的笫一個氨基酸算起)被切割，從而導(dǎo)致仍然通過二硫鍵連接的OC鏈(1-707)和P鏈(712-1337)的形成(Bhaumick等人，1981，ProcNatlAcadSciUSA78:4279-83，Cher訓(xùn)sek等人，1981,Biochemistry20:7345-50，Jacobs等人，1983，ProcNatlAcadSciUSA80:1228-31LeBon等人，1986，JBiolChem261:7685-89，Elleman，等人，2000，BiochemJ347:771-79)。存在于細胞表面的IGF-1R(和INSR)的主要形式是經(jīng)蛋白水解加工且被糖基化的(otp)2二聚體，該二聚體通過一個或多個二硫鍵共價連接。IGF-1R的細胞外部分由ot鏈和P鏈(712-905)的191個氨基酸組成。所述受體包含單個跨膜序列(906-929)和包含功能酪氨酸激酶的408個殘基的胞質(zhì)結(jié)構(gòu)域(Rubin等人，1983，Nature305:438-440)。序列比較分析已表明IGF-1R由11個不同的結(jié)構(gòu)基序組成(由Adams等人，2000，CellMolLifeSci57:1050-93，Marino-Buslje等人，1998，F(xiàn)EBSLtrs441:331-36，Ward等人，2001，BMCBioinformatics2:4綜述)。細胞外結(jié)構(gòu)域的N末端那一半包含由富含半胱氨酸(CR)的區(qū)域(152-298)分開的稱為LI(1-151)和L2(299-461)的兩個同源結(jié)構(gòu)域(Ward等人，2001，廚J:)，所述富含半胱氨酸的區(qū)域由幾個具有二硫鍵的結(jié)構(gòu)組件組成，所述結(jié)構(gòu)組件與TNF受體和層粘連蛋白中存在的重復(fù)單位比對(Ward等人，1995，Proteins22:141-53)。已解析了LI—CR-L2結(jié)構(gòu)域的晶體結(jié)構(gòu)(Garrett等人，1998，Nature394:395-99)。L2結(jié)構(gòu)域之后接著是三個纖連蛋白III型結(jié)構(gòu)域(Marino-Buslje等人，1998，~丄，Mulhern等人，1998，TrendsBiochemSci23:465-66，Ward等人，1999，GrowthFactors16:315-22)。第一FnIII結(jié)構(gòu)域(FnIII-l，461-579)長度為118個氨基酸。第二FnIII結(jié)構(gòu)域(FnlII-2，580-798)被長度大約為120個氨基酸的主要插入序列(majorinsertsequence)(ID)打斷。ID結(jié)構(gòu)域包括分離成熟受體的oc和p鏈的弗林蛋白酶切割位點。第三FnIII結(jié)構(gòu)域(FnlII-3)完全位于P鏈(799-901)中，在跨膜序列之前幾個殘基處終止。IGF-1R酪氨酸激酶的催化結(jié)構(gòu)域位于氨基酸位置973-1229之間，且其結(jié)構(gòu)已被解析了(Favelyukis等人，2001，NatureStructuralBiol8:1058-63，Pautsch等人，2001，Structure9:955-65)。所述激酶側(cè)翼連接兩個調(diào)控區(qū)域，細胞膜附近區(qū)域(930-972)和108個氨基酸的C末端尾部(1220-1337)(Surmacz等人,1995，ExperimentalCellRes218:370-80，Hongo等人，1996，Oncogene12:1231-38)。兩個調(diào)控區(qū)域包含當(dāng)被激活的IGF-1R酪氨酸激酶磷酸化時用作信號轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白的停泊位點的酪氨酸殘基(由Baserga(ed.)，1998r力eAecepfor//2)Vior鵬/a/zf/J6/7or/zzfl7CoW/，HormonesandGrowthFactorsinDevelopmentandNeoplasia,Wiley-Liss，Inc.,Adams等人，2000，Cel1MolLifeSci57:1050-93綜述).所述IGF-IR氨基酸序列與胰島素受體(INSR;Swiss-Prot:P06213)具有大約70°/。的同一性。所述受體之間的最高同源性位于酪氨酸激酶結(jié)構(gòu)域(84%);最低同一性在CR區(qū)和C末端。IGF-1R也與胰島素相關(guān)受體(IRR;Swiss-Prot:P14616)高度相關(guān)(大約55%的同一性)。可通過胰島素樣生長因子，IGF-l和IGF-2以及胰島素(INS)激活人IGF-1R(Hill等人，1985，PediatricResearch19:879-86)。IGF-l和IGF-2由非等位基因編碼(Brissenden等人，1984，Nature310:781-8，Bell等人，1985，ProceedingsoftheNationalAcademyofSciencesoftheUnitedStatesofAmerica82:6450-54)，且兩個基因都通過差異RNA剪接和蛋白加工表達可選擇的相關(guān)性蛋白。IGF-l和IGF-2的最常見和研究最充分的成熟形式長度分別為70和67個氨基酸(Jansen等人，1983，Nature306:609-11，Dull等人,1984，Nature310:777-81)。這些蛋白(和其同種型)在11/21位置與胰島素A肽同一，在12/30位置與胰島素B肽同一。IGF-IR在正常成年動物中在除了肝細胞和成熟B細胞外的所有細胞類型中表達。人血漿包含高濃度的IGF-l和IGF-2，且可在大多數(shù)組織中檢測到IGF-1。所述受體是控制器官大小和內(nèi)穩(wěn)態(tài)的生理學(xué)機制的整合組分。不受特定理論的束縛，"生長調(diào)節(jié)素假說"說明兒童和青少年期間生長激素(GH)介導(dǎo)的身體生長依賴于主要由肝產(chǎn)生和分泌的IGF-1的內(nèi)分泌形式(Daughaday，2000，PediatricNephrology14:537-40)。由腦下垂體中響應(yīng)下丘腦GHRH(GH釋放激素)的GH釋放刺激肝IGF-1的合成。在人中，在年齡5-15歲之間IGF-1的血清濃度增加超過IOO倍。IGF-1的生物利用度由IGF結(jié)合蛋白3(IGFBP3)調(diào)控，大約99°/。的生長因子以結(jié)合狀態(tài)被間隔化。由部分基因缺失產(chǎn)生的原發(fā)性IGF-1缺陷，和由于GH產(chǎn)生或信號轉(zhuǎn)導(dǎo)中的缺陷導(dǎo)致的繼發(fā)性IGF-1缺陷不是致死性的(Woods,1999，/7e/7c/e/7C/inContemporaryEndocrinology:TheIGFSystem,R.a.R.Rosenfeld，C.Jr.Totowa，ed.s，HumanaPress,NJ:651-74)。受影響的個體在出生時展現(xiàn)生長遲緩，生長緩慢且可面臨某些CNS異常。IGF-1R信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通過PI3激酶/Akt途徑的IRS接頭蛋白依賴性激活促進細胞的生長和存活。IGF-1R通過IRS-4和She蛋白將信號傳遞至其主要的底物IRS-1(Blakesley等人，1999，rece/7"reFe/"inTheIGFSystem,R.G.a.R.Rosenfeld,Jr.C.T.Totowa,ed.s，HumanaPress,NJ:143-63)。這導(dǎo)致Ras/Raf/MAP激酶和PI3激酶/Akt信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的激活。然而，通過IRS誘導(dǎo)的Akt介導(dǎo)的細胞存活是對大多數(shù)細胞的IGF刺激作出反應(yīng)的主要途徑。參見圖10。抗原結(jié)合蛋白在一個方面，本發(fā)明提供了結(jié)合IGF-1R例如人IGF-1R的抗原結(jié)合蛋白(例如，抗體、抗體片段、抗體衍生物、抗體突變蛋白和抗體變體)。本發(fā)明的抗原結(jié)合蛋白包括抑制IGF-1R的生物學(xué)活性的抗原結(jié)合蛋白。這些生物學(xué)活性的實例包括結(jié)合信號轉(zhuǎn)導(dǎo)分子(例如，IGF-1和/或IGF-2)以及轉(zhuǎn)導(dǎo)響應(yīng)結(jié)合信號轉(zhuǎn)導(dǎo)分子的信號。不同的抗原結(jié)合蛋白可結(jié)合IGF-1R的不同結(jié)構(gòu)域或表位或通過不同的作用機制起作用。實例包括但不限于干擾IGF-1和/或IGF-2對IGF-1R的結(jié)合或抑制信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的抗原結(jié)合蛋白。作用的位點可以在例如細胞內(nèi)(例如，通過干擾細胞內(nèi)信號級聯(lián))或細胞外?？乖Y(jié)合蛋白不需要完全抑制IGF-1和/或IGF-2誘導(dǎo)的活性以用于本發(fā)明；相反地，也可考慮使用減少IGF-1和/或IGF-2的特定活性的抗原結(jié)合蛋白。(此處關(guān)于結(jié)合IGF-1R的抗原結(jié)合蛋白在治療特定疾病中的特定作用機制的描述僅作為舉例說明，此處提供的方法不因此而受到束綽。)已觀察到IGF-1和IGF-2各展示對IGF-1R的兩相性結(jié)合。已報導(dǎo)高親和力結(jié)合具有0.2nM范圍內(nèi)的KD;高親和力結(jié)合，大約超過10倍。因此，在一個實施方案中，本發(fā)明提供了抑制IGF-1和/或IGF-2對IGF-R的高和低親和力結(jié)合的IGF-1R抑制劑。已暗示，GF-l和/或IGF-2對IGF-1R的高親和力結(jié)合，而非低親力結(jié)合，是激活I(lǐng)GF-1R的酪氨酸激酶活性的構(gòu)象改變所必需的。因此，在另一個實施方案中，與低親和力結(jié)合相比，IGF-1R抑制劑優(yōu)選地抑制IGF-1和/或IGF-2對IGF-1R的高親和力結(jié)合。在另一個方面，本發(fā)明提供了包含選自LI至L52的輕鏈可變區(qū)和/或選自H1至H52的重鏈可變區(qū)的抗原結(jié)合蛋白和其片段、衍生物、爽變蛋白和變體(參見圖2和3)?？墒褂妹?LxHy"表示這樣的抗原結(jié)合蛋白，其中如圖2和3中其被標(biāo)記的那樣，"x"對應(yīng)于輕錸可變區(qū)的編號，"y"對應(yīng)于重鏈可變區(qū)的編號。例如，L2H1是指弄有包含L2的氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)和包含H1的氨基酸序列的重鏈可變區(qū)的抗原結(jié)合蛋白，如圖2和3中所示。圖2和3也標(biāo)示了這摯可變結(jié)構(gòu)域序列的各序列的CDR和構(gòu)架區(qū)的位置。也按類型和按序列相似性在圖4至9中將各輕鏈和重鏈的CDR區(qū)分類。本發(fā)明的抗原結(jié)合蛋白包括，例如，具有選自下列組合的輕鏈和重鏈結(jié)構(gòu)域的組合的抗原結(jié)合蛋白L1H1、L2H2、L3H3、L4H4、L5H5、L6H6、L7H7、L8H8、L9H9、L10H10、LllHll、L12H12、L13H13、L14H14、L15H15、L16H16、L17H17、L18H18、L19H19、L20H20、L21H21、L22H22、L23H23、L24H24、L25H25、L26H26、L27H27、L28H28、L29H29、L30H30、L31H31、L32H32、L33H33、L34H34、L35H35、L36H36、L37H37、L38H38、L39H39、L40H40、'L41H41、L42H42、L43H43、L44H44、L45H45、L46H46、L47H47、L48H48、￡49H49、L50H50、L51H51和L52H52。《在一個實施方案中，本發(fā)明提供了包含輕鏈可變結(jié)構(gòu)域的抗原結(jié)合蛋白，所述輕鏈可變結(jié)構(gòu)域包含與選自Ll至L52的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域的序列僅在15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1個殘基上相異的氨基酸序列，其中每一個這樣的序列差異獨立地是一個氨基酸殘基的缺失、插入或置換。在另一個實施方案中，輕鏈可變區(qū)結(jié)構(gòu)域包含與選自Ll至L52的輕鏈可變區(qū)的序列至少70%、75%、80%、85%、90%、95°/。、97%或99%的同一性的氨基酸序列。在另一個實施方案中，輕鏈可變結(jié)構(gòu)域包含核苷酸序列編碼的氨基酸序列，辨述核苷酸序列與編碼選自L1至L52的輕鏈可變區(qū)結(jié)構(gòu)域的核苷酸序列至少70%、75%、80%、85%、90%、95%、97%或99%的同一性。在另一個實施方案中，輕鏈可變結(jié)構(gòu)域包含氨基酸序列，所述氨基酸序列由多核苷酸編碼，所述多核苷酸在中等嚴緊條件下與編碼選自L1至L52的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域的多核苷酸的互補物雜交。在另一個實施方案中，輕鏈可變結(jié)構(gòu)域包含由多核苷酸編碼的氨基酸序列，所述多核苷酸在中等嚴緊條件下與編碼選自Ll至L52的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域的多核苷酸的互補物雜交。在另一個實施方案中，輕鏈可變結(jié)構(gòu)域包含由多核普酸編碼的氨基酸序列，所述多核苷酸在中等嚴緊條件下與選自圖1的輕鋒多核苷酸的互補序列物。在另一個實施方案中，本發(fā)明提供了包含重鏈可變結(jié)構(gòu)域的抗原結(jié)合蛋白，所述重鏈可變結(jié)構(gòu)域包含僅在15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2或1個殘基上與選自Hl至H52的重鏈可變結(jié)構(gòu)域的序列相異的氨基酸序列，其中每一個這樣的序列差異獨立地是一個氨基酸殘基的缺失、插入或置換。在另一個實施方案中，重鏈可變區(qū)包含與選自Hl至H52的重鏈可變區(qū)的序列至少70%、75%、;80%、85%、90%、95°/。、97%或99%同一性的氨基酸序列。在另一個實施方案中，重鏈可變結(jié)構(gòu)域包含由核苷酸序列編碼的氨基酸序列，所述核苷酸序列與編碼選自Hl至H52的重鏈可變結(jié)構(gòu)域的核苷酸序列至少70%、75%、80%、85%、90%、95%、97%或99%的同一性。在另一個實施方案中，重鏈可變結(jié)構(gòu)域包含由多核苷酸序列編碼的氨基酸序列，所述多核苷酸在中等嚴緊條件下與編碼選自H1至H52的重鏈可變結(jié)構(gòu)域的多核苷酸的互補物雜交。在另一個實施方案中，重鏈可變結(jié)構(gòu)域包含由多核苷酸編碼的氛基酸序列，所述多核苷酸在中等嚴緊條件下與編碼選自Hl至H52的重鏈可變結(jié)構(gòu)域的多核苷酸的互補物雜交。在另一個實施方案中，重鏈可變結(jié)構(gòu)域包含由多核苷酸編碼的氨基酸序列，所述多核苷酸在中等嚴緊條件下與選自圖l的重鏈多核苷酸的互補物雜交。本發(fā)明的抗原結(jié)合蛋白的特定實施方案包含一個或多個氨基酸序列，所述序列與圖2至9中舉例說明的一個或多個CDR和/或FR的氨基酸序列同一。在一個實施方案中，抗原結(jié)合蛋白包含圖4中舉例說明的輕鏈CDR1序列。在另一個實施方案中，抗原結(jié)合蛋白包含圖5中舉例說明的輕鏈CDR2序列。在另一個實施方案中，抗原結(jié)合蛋白包含圖6中舉例說明的輕鏈CDR3序列。在另一個實施方案中，抗原結(jié)合蛋白包含圖7中舉例說明的重鏈CDR1序列。在另一個實施方案中，抗原結(jié)合蛋白包含圖8中舉例說明的重鏈CDR2序列。在另一個實施方案中，抗原結(jié)合蛋白包含圖9中舉例說明的重鏈CDR3序列。在另一個實施方案中，抗原結(jié)合蛋白包含圖2中舉例說明的輕鏈FR1序列。在另—個實施方案中，抗原結(jié)合蛋白包含圖2中舉例說明的輕鏈FR2序列。在另一個實施方案中，抗原結(jié)合蛋白包含圖2中舉例說明的輕鏈FR3序列。在另一個實施方案中，抗原結(jié)合蛋白包含圖2中舉例說明的輕鏈FR4序列。在另一個實施方案中，抗原結(jié)合蛋白包含圖3中舉例說明的輕鏈FR1序列。在另一個實施方案中，抗原結(jié)合蛋白包含圖3中舉例說明的重鏈FR2序列。在另一個實施方案中，抗原結(jié)合蛋白包含圖3中舉例說明的重鏈FR3序列。在另一個實施方案中，抗原結(jié)合蛋白包含圖3中舉例說明的重鏈FR4序列。在一個實施方案中，本發(fā)明提供了包含一個或多個CDR序列的抗原結(jié)合蛋白，所述CDR序列與圖2至9中所示的CDR序列相異不超過5、4、3、2或l個氨基酸殘基。在一個實施方案中，本發(fā)明提供了抗原結(jié)合蛋白，所述蛋白包含至少一個來自圖2至9中所示的L1-L52和/或H1-H52的CDR和至少一個來自抗IGF-1R抗體的CDR序列，在美國申請公開號03/0235582、,04/0228859、04/0265307、04/0886503、05/0008642、05/0084906、05/0186203、05/0244408、PCT/〉開號WO03/059951、WO03/100008、WO04/071529A2、WO04/083248、WO04/087756、WO05/016967、WO05/016970或WO05/058967(對于所有目的，其各自在此以其全文引用作為參考)中描述了所述抗IGF-1R抗體，其中所述抗原結(jié)合蛋白結(jié)合IGF-1受體。在另一個實施方案中，所述抗原結(jié)合蛋白包含來自圖2至9中所示的L1-L52和/或H1-H52的2、3、4或5個CDR序列。在另一個實施方案中，所述抗原結(jié)合蛋白包含2、3、4或5個來自美國專利申請公開號03/0235582、04/0228859、04/0265307、04/0886503、05/0008642、05/0084906、05/0186203、05/0244408、PCT/>開號WO03/059951、WO03/100008、WO04/071529A2、WO04/083248、WO04/087756、WO05/016967、WO05/016970、或WOQ5/058967中描述的抗IGF-1R抗體的CDR序列。在另一個實施方案中，至少一個抗原結(jié)合蛋白的CDR3序列是來自如圖2、3、6和9中所，的Ll-L52和/或H1-H52的CDR3序列。在另一個實施方案中，抗原結(jié)合蛋白的輕鏈CDR3序列是來自圖2和6中所示的L1-L52的輕鏈CDR3序列且所述抗原結(jié)合蛋白的重鏈CDR3序列是來自圖3和9中所示的重鏈序列。在另一個實施方案中，所述抗原結(jié)合蛋白包含l、2、3、4或5個CDR序列，所述序列各自獨立地與L1-L52和/或HI-H52的CDR序列相異6、5、4、3、2、1或0個單個氨基酸添加、置換和/或缺失，抗原結(jié)合蛋白還包含l、2、3、4或5個CDR序列，所述各序列獨立地與來自美國申請公開號03/0235582、04/0228859、i)4/0265307、04/0886503、05/0008642、05/0084906、05/0186203、05/0244408、PCT公開號WO03/059951、WO03/100008、WO04/071529A2、WO04/083248、WO04/087756、WO05/016967、WO05/016970或WO05/058967的CDR序列相異6、5、4、3、2、1或0個單個氨基酸的添加、置換和/或缺失。在另一個實施方案中，所述CDR序列來自美國申請公開號03/0235582、04/0228859、04/0265307、04/0886503、05/0008642、05/0084906、05/0186203、05/0244408、PCT公開號WO03/059951、WO03/100008、WO04/071529A2、WO04/083248、WO04/087756、WO05/016967、WO05/016970或WO05/058967。在另一個實施方案中，所述CDR序列來自結(jié)合IGF-1受體的細胞外結(jié)構(gòu)域的L2部分的抗體。在另一個實施方案中，所述抗原結(jié)合蛋白不包含來自美國申請公開號03/0235582、04/0228859、04/0265307、04/0886503、05/0008642、05/0084906、05/0186203、05/0244408、PCT公開號WO03/059951、WO03/100008、WO04/071529A2、WO04/083248、WO04/087756、WO05/016967、WO05/016970或WO05/058967的抗IGF-1R抗體的輕鏈CDR3序列和/或重鏈CDR3序列。在一個實施方案中，本發(fā)明提供了包含輕鏈CDR1的抗原結(jié)合蛋白，所述輕鏈CDR1包含序列RSSQSLLHXAGYNXsIX(SEQIDNO:236)，其中l(wèi)是絲氨酸或蘇氨酸殘基，X2是天冬酰胺、絲氨酸或組氨酸殘基，X3是酪氨酸或苯丙氨酸殘基，X,是天冬氨酸或天冬酰胺殘基。在另一個實施方案中，所述輕鏈CDR1包含序列TRSSGXJX^NYVQ(SEQIDNO:237)，其中X!是絲氨酸或天冬氨酸殘基，X2是丙氨酸或天冬氨酸殘基，X3是絲氨酸或天冬酰胺殘基。在另一個實施方案中，所述輕鏈CDR1包含序列RASQXJ^XJJX(SEQIDNO:238)，其中Xi是甘氨酸或絲氨酸殘基，L是異亮氨酸、纈氨酸或脯氨酸殘基，和X3是絲氨酸、甘氨酸或酪氨酸殘基，X4是任何氨基酸殘基，Xs是苯丙氨酸、酪氨酸、天冬酰胺或色氨酸殘基，X6是丙氨酸或天冬酰胺殘基。在另一個實施方案中，X2是異亮氨酸或纈氨酸殘基，X3是甘氨酸或絲氨酸殘基，X,是精氨酸、絲氨酸、天冬酰胺、絲氨酸、酪氨酸或異亮氨酸殘基，x5是苯丙氨酸或酪氨酸殘基。在一個實施方案中，本發(fā)明提供了包含輕鏈CDR2的抗原結(jié)合蛋白，所述輕鏈CDR2包含序列LXX2X3RX4S(SEQIDNO:239)，其中X!是甘氨酸或纈氨酸殘基，X2是絲氨酸或苯丙氨酸殘基，X3是天冬酰胺、酪氨酸或蘇氨酸殘基，X4是丙氨酸或天冬氨酸殘基。在另一個實施方案中，所述CDR2包含序列AX肌LX3S(SEQIDNO:240)，其中X!是丙氨酸或蘇氨酸殘基，X2是蘇氨酸或甘氨酸殘基，X3是谷氨酰胺或谷氨酸殘基。在另一個實施方案中，所述CDR2包含序列XJ2NX3RPS(SEQIDNO:241)，其中L是谷氨酸、谷氨酰胺或甘氨酸殘基，X2是天冬氨酸或賴氨酸殘基，X;是任何氨基酸。在一個實施方案中，本發(fā)明提供了包含輕鏈CDR3的抗原結(jié)合蛋白，所述輕鏈CDR3包含序列MXJJAXsPXX(SEQIDNO:242)，其中X,是谷氨酰胺或谷氨酸殘基，X2是丙氨酸、甘氨酸、絲氨酸或蘇氨酸殘基，X3是亮氨酸或蘇氨酸殘基，X,是谷氨酰胺、谷氨酸或組氨酸殘基，Xs是蘇氨酸、色氨酸、甲硫氨酸或纈氨酸殘基，X6是非極性側(cè)鏈殘基，X7是蘇氨酸、絲氨酸或丙氨酸殘基。在另一個實施方案中，所述CDR3包含序列QQXJ2X3X4PX5T卿IDNO:243)，其中X!是精氨酸、絲氨酸、亮氨酸或丙氨酸殘基，X2是天冬酰胺、絲氨酸或組氨酸殘基，X3是絲氨酸或天冬酰胺殘基，X4是非極性側(cè)鏈殘基，Xs是亮氨酸、異亮氨酸、酪氨酸或色氨酸殘基。在另一個實施方案中，所述CDR3包含序列QSYXiSXsNX^V(SEQIDNO:244)，其中X,是天冬氨酸或谷氨酰胺殘基，X2是絲氨酸或天冬氨酸殘基，X;是谷氨酰胺、纈氛酸或色氨酸殘基，^是精氨酸殘基或無殘基。,在一個實施方案中，本發(fā)明提供了包含重鏈CDR1的抗原結(jié)合蛋白，所述重鏈CDR1包含序列XJ2X3WS(SEQIDNO:245)，其中X,是絲氨酸殘基或無殘基，X2是絲氨酸或天冬酰胺殘基，X3是天冬酰胺殘基和異亮氨酸殘基。在另一個實施方案中，所述重鏈CDR1包含序列XJ2YWS(SEQIDNO:246)，其中X!是甘氨酸、天冬酰胺或天冬氨酸殘基，X2是酪氨酸或苯丙氨酸殘基。在另一個實施方案中，所述重鏈CDR1包含序列SYXJ2X3(SEQIDNO:247)，其中X,是丙氨酸或甘氨酸殘基，X2是甲硫氨酸或異亮氨酸殘基，X3是絲氨酸或組氨酸殘基。在一個實施方案中，本發(fā)明提供了包含重鏈CDR2的抗原結(jié)合蛋白，所述重鏈CDR2包含序列XJJJJsGXJXJNPSLXsS(SEQIDNO:248)，其中t是谷氨酸、酪氨酸或絲氨酸殘基，X2是異亮氨酸或纈氨酸殘基，X3是酪氨酸、天冬酰胺或絲氨酸殘基，X,是組氨酸、酪氨酸、天冬氨醆或脯氨酸殘基，X5是絲氨酸或精氨酸殘基，X6是絲氨酸或天冬酰胺殘基，X7是天冬酰胺或酪氨酸殘基，X8是賴氨酸或谷氨酸殘基。在另一個實施方案中，所述重鏈CDR2包含序列XilSXJsXJCJJJYADSVKG(SEQIDNO:249)，其中L是蘇氨酸、丙氨酸、纈氨酸或酪氨酸殘基，L是甘氨酸、絲氨酸或酪氨酸殘基，X3是絲氨酸、天冬酰胺或天冬氨酸殘基，X4是甘氨酸或絲氨酸殘基，Xs是甘氨酸、絲氨酸或天冬氨酸殘基，l是絲氨酸、蘇氨酸或天冬酰胺殘基，t是蘇氨酸、賴氨酸或異亮氨酸殘基。在另一個實施方案中，本發(fā)明提供了包含重鏈CDR3的抗原結(jié)合蛋白，所述重鏈CDR3包含序列XJ2X3X4X5X6X7X8X9FDI(SEQIDNO:250)，其中Xi是谷氨酸殘基或無殘基，X2是酪氨酸、甘氨酸或絲氨酸殘基或無殘基，X3是絲氨酸、天冬酰胺、色氨酸或谷氨酸殘基，或無殘基，X4是絲氨酸、天冬氨酸、色氨酸、丙氨酸、精氨酸、蘇氨酸、谷氨酰胺、亮氨酸或谷氨酸殘基或無殘基，Xs是絲氨酸、甘氨酸、天冬酰胺、蘇氨酸、色氨酸、丙氨酸、纈氨酸或異亮氨酸殘基，L是精氨酸、谷氨酰胺、酪氨酸、纈氨酸、丙氨酸、甘氨酸、絲氨酸、苯丙氨酸或色氨酸殘基，X,是亮氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、蘇氨酸、色氨酸、酪氨酸、纈氨酸、丙氨酸或組氨酸殘基，Xs是天冬氨酸、絲氨酸、天冬酰胺或谷氨酰胺殘基，X,是丙氨酸或脯氨酸殘基。在另一個實施方案中，所述重鏈CDR3包含序列XJJJJsXJJJJuXuMDV(SEQIDNO:251)，其中t是丙氨酸殘基或無殘基，X2是谷氨酸、酪氨酸或甘氨酸殘基或無殘基，X3是絲氨酸或精氨酸殘基或無殘基，X4是天冬氨酸、甘氨酸、絲氨酸或纈氨酸殘基或無殘基，Xs是絲氨酸、甘氨酸或天冬氨酸殘基或無殘基，Xs是甘氨酸、苯丙氨酸、天冬氨酸、絲氨酸、色氨酸或酪氨酸殘基或無殘基，x,是酪氨酸、色氨酸、絲氨酸或天冬氨酸殘基或無殘基，Xs是天冬氨酸、精氨酸、絲氨酸、甘氨酸、酪氨酸或色氨酸殘基，X,是酪氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸或賴氨酸殘基，X1Q是酪氨酸、苯丙氨酸、天冬氨酸或甘氨酸殘基，Xn是甘氨酸、酪氨酸或天冬酰胺殘基。在另一個實施方案中，所述重鏈CDR3包含序列XJJJJJJWWWUY(SEQIDNO:252)，其中X！是天冬氨酸或纈氨酸殘基或無殘基，Xz是甘氨酸、酪氨酸、精氨酸或天冬氨酸殘基或無殘基，X3是天冬酰胺、亮氨酸、甘氨酸、異亮氨酸、絲氨酸、纈氨酸、苯丙氨酸或酪氨酸殘基或無殘基，L是亮氨酸、絲氨酸、色氨酸、丙氨酸、酪氨酸、異亮氨酸、甘氨酸或天冬氨酸殘基或無殘基，Xs是甘氨酸、丙氨酸、酪氨酸、絲氨酸、天冬氨酸或亮氨酸殘基，L是纈氨酸、丙氨酸、甘氨酸、蘇氨酸、脯氨酸、組氨酸或谷氨酰胺殘基，X7是谷氨酸、甘氨酸、絲氨酸、天冬氨酸、甘氨酸、纈氨酸、色氨酸、組氨酸或精氨酸殘基，Xs是谷氨酰胺、丙氨酸、甘氨酸、酪氨酸、脯氨酸、亮氨酸、天冬氨酸或絲氨酸殘基，X,是非極性側(cè)鏈殘基，X!。是天冬氨酸或丙氨酸殘基。在另一個實施方案中，所述重鏈CDR3包含序列XJJJJJJJJJJFDXn(SEQIDNO:253)，其中X,是甘氨酸殘基或無殘基，1是脯氨酸殘基或無殘基，X3是精氨酸或天冬氨酸殘基或無殘基，X4是組氨酸或脯氨酸殘基，Xs是精氨酸或甘氨酸殘基，X6是精氨酸、絲氨酸或苯丙氨酸殘基，X7是天冬氨酸或絲氨酸殘基，Xs是甘氨酸、色氨酸或酪氨酸殘基，X9是酪氨酸或丙氨酸殘基，X^是天冬酰胺或色氨酸殘基，Xn是天冬酰胺或亮氨酸殘基。在另一個實施方案中，所述重鏈CDR3包含序列XJJ^DSSXJJJsXJ^XuXu(SEQIDNO:254)，其中X,是苯丙氨酸殘基或無殘基，X2是天冬酰胺或甘氨酸殘基或無殘基，X3是酪氨酸或亮氨酸殘基或無殘基，X,是酪氨酸或甘氨酸殘基或無殘基，Xs是甘氨酸、絲氨酸或纈氨酸殘基，Xe是酪氨酸、萃丙氨酸、色氨酸或谷氨酰胺殘基或無殘基，X7是酪氨酸、甘氨酸或異亮氨酸殘基或無殘基，Xg是酪氨酸、亮氨酸或甘氨酸殘基或無殘基，X,是甲硫氨酸、甘氨酸或苯丙氨酸殘基或無殘基，Xu是天冬氨酸或曱硫氨酸殘基或無殘基，Xu是纈氨酸、天冬氨酸或酪氨酸殘基或無殘基，Xu是纈氨酸殘基或無殘基。在一個實施方案中，本發(fā)明提供了分離的抗原結(jié)合蛋白，其包含a.包含序列的輕鏈CDR3,所述序列選自i.選自圖6中所示的L1-L52的輕鏈CDR3序列的輕鏈CDR3序列；ii.MQALQTPZT;iii.QQ(R/S)(N/S)(S/N)ZPLT;和iv.QSYDSSNXJV;b.包含序列的重鏈CDR3，所述序列選自i.與選自圖9中所示的H1-H52的重鏈CDR3序列的CDR3序列相異不超過總共3個氨基酸添加、置換或缺失的重鏈CDR3序列；ii.SRLDAFDI;iii.SXYDYYGMDV;iv.HRXDXAWYFDL;和v.DSSG;或c.(a)的輕鏈CDR3序列和(b)的重鏈CDR3序列；其中括號內(nèi)的氨基酸殘基符號表示序列中相同位置的可選擇的殘基，各X獨立地是任何氨基酸殘基，各Z獨立地是甘氨酸殘基、丙氨酸殘基、纈氨酸殘基、亮氨酸殘基、異亮氨酸殘基、脯氨酸殘基、苯丙氨酸殘基、甲硫氨酸殘基、色氨酸殘基或半胱氨酸殘基，各J獨立地是谷氨酰胺殘基、精氨酸殘基、纈氨酸殘基或色氨酸殘基，且抗原結(jié)合蛋白結(jié)合人IGF-1R?？赏ㄟ^例如隨機誘變或定點誘變(例如，寡核苷酸引導(dǎo)的位點特異性誘變)以產(chǎn)生與非突變的多核苷酸相比包含一個或多個特定核苷酸置換、缺失或插入的改變的多核苷酸，來改變圖l的核苷酸序列或圖2至9中的氨基酸序列。在Walder等人，1986，Gene42:133;Bauer等人1985，Gene37:73;Craik，BioTechniques,January1985，12-19;Smith等人，1981，(7e;7e〃cf/z^7'/7eer/w尸r/"c/;7esa/2d#e^oc^，PlenumPress;和美國專利4,518,584和4，737，462中描述了用于產(chǎn)生這些改變的技術(shù)的實例。這些技術(shù)和其他方法可用于產(chǎn)生例如抗IGF-1R抗體的衍生物，所述衍生物具有想要的性質(zhì)，例如，與未衍生化的抗體相比，增加的對于IGF-1R的親和力、抗體親抗源性或特異性、增加的體內(nèi)或體外的活性或穩(wěn)定性、或減少的體內(nèi)副作用。本發(fā)明范圍內(nèi)的抗IGF-1R抗體的其他衍生物包括抗IGF-1R抗體或其片段與其他蛋白或多肽的共價或聚集綴合物(aggregativeconjugate),例如通過重組融合蛋白的表達產(chǎn)生的綴合物，所述融合蛋白包含融合至抗IGF-1R抗體多肽的N末端或C末端的異源多肽。例如，綴合的肽可以是異源信號(或前導(dǎo))多肽，例如，酵母oc因子前導(dǎo)序列或肽例如表位標(biāo)簽。包含抗原結(jié)合蛋白的融合蛋白可包含添加的以幫助純化或鑒定抗原結(jié)合蛋白的肽(例如，多組氨酸)?？乖Y(jié)合蛋白也可連接至Hopp等人，^2'o/7bc力/o/(^/6:1204，1988，和美國專利5,011,912中描述的FLAG肽Asp-Tyr-Lys-Asp-Asp-Asp-Asp-Lys(DYKDDDDK)卿IDNO:255)。所述FLAG肽具有高度抗原性且提供由特定單克隆抗體(mAb)可逆地結(jié)合的表位，從而使得能夠快速測定和容易地純化表達的重組蛋白。用于制備其中FLAG肽融合至給定的多肽的融合蛋白的試劑可商購獲得(Sigma，St.Louis,M0)。包含一種或多種抗原結(jié)合蛋白的寡聚體可用作IGF-IR拮抗劑。寡聚體可以以共價連接的或非共價連接的二聚體、三聚體或更高階寡聚體的形式存在。涉及使用包含兩個或多個抗原結(jié)合蛋白的寡聚體，一個例子是同型二聚體。其他寡聚體包括異二聚體、同型三聚體、異三聚體、同型四聚體、異四聚體等。一個實施方案涉及寡聚體，所述寡聚體包含通過融合至抗原結(jié)合蛋白的肽部分之間的共價或非共價相互作用連接的多個抗原結(jié)合蛋白。這些肽可以是具有促進寡聚化的特性的肽連接體(間隔子)或肽。亮氨酸拉鏈和來源于抗體的某些多肽是如下面更詳細描述的可促進附著至其上的抗原結(jié)合蛋白寡聚化的肽。在特定的實施方案中，寡聚體包含兩個至四個抗原結(jié)合蛋白。所述寡聚物的抗原結(jié)合蛋白可以任何形式例如上述形式的任一形式例如變體或片段的形式存在。優(yōu)選地，所述寡聚物包含具有IGF-IR結(jié)合活性的抗原結(jié)令蛋白。在一個實施方案中，使用來源于免疫球蛋白的多肽制備寡聚物。包含融合至抗體來源的多肽的各個部分(包括Fc結(jié)構(gòu)域)的某些異源多肽的融合蛋白的制備已在例如Ashkenazi等人，1991，PNASUSA88:10535;Byrn等人，1990，Nature344:677;和Hollenbaugh等人，1992"ConstructionofImmunoglobulinFusionProteins",inCW"re;3f戶rotoco/s///邁咖/70/0^7，Suppl.4，pages10.19.1-10.19.11中進行了描述。本發(fā)明的一個實施方案涉及包含兩個融合蛋白的二聚體，所述二聚體通過將抗IGF-1R抗體的IGF-1R結(jié)合片段融合至抗體的Fc區(qū)域產(chǎn)生?？蛇@樣產(chǎn)生二聚體，即通過例如將編碼融合蛋白的融合基因插入合適的表達載體，然后在用該重組表達載體轉(zhuǎn)化的宿主細胞中表達該融合基因，并使所表達的融合蛋白象抗體分子一樣進行裝配，從而在Fc部分之間形成鏈間二硫鍵，產(chǎn)生二聚體。如此處所用的，術(shù)語"Fc多肽"包括抗體的Fc區(qū)域的天然形式和從所述區(qū)域衍生的多肽的突變蛋白形式。也包括包含促進二聚化的鉸鏈區(qū)的這些多肽的截短形式。包含F(xiàn)c部分的融合蛋白(和從其形成的寡聚體)提供了使用通過A蛋白或G蛋白柱的親和層析進行容易的純化的有利方面。在PCT申請WO93/10151(此處引用作為參考)中描述的一個合適的Fc多肽是從人IgGl抗體的N末端鉸鏈區(qū)延伸至Fc區(qū)域的天然C本端的單鏈多肽。另一個有用的Fc多肽是美國專利5，457，0"和Baum等人，1994，EMBOJ.13:3992-4001中描述的Fc突變蛋白。該突變蛋白的氨基酸序列，除了氨基酸19已從Leu改變?yōu)锳la、氨基酸20^從Leu改,變成Glu以及氨基酸22已從Gly改變成Ala外，其它與W093/10151提供的天然Fc序列的氨基酸序列相同。所述突變蛋白展示了減少的對于Fc受體的親和力。在其他實施方案中，抗IGF-1R抗體的重鏈和/或輕鏈的可變部分可替代抗體重鏈和/或輕鏈的可變部分?？蛇x擇地，所述寡聚體是包含多個抗原結(jié)合蛋白、具有或不具有肽連接體(間隔肽)的融合蛋白。其中合適的肽連接體可以是美國專利4，751，180和4，935，233中描述的肽連接體。用于制備寡聚抗原結(jié)合蛋白的另一種方法包括使用亮氨酸拉鏈。亮氨酸拉鏈結(jié)構(gòu)域是促進含有其的蛋白寡聚化的肽。亮氨酸拉鏈最初在幾種DNA結(jié)合蛋白中被鑒定(Landschulz等人，1988，Science240:1759)，且從此在許多不同的蛋白中被發(fā)現(xiàn)。在已知的亮氨酸拉鏈.中，其都是天然發(fā)生的二聚化或三聚化的肽和其衍生物。適合于產(chǎn)生可溶性寡聚蛋白的亮氨酸拉鏈的實例描述于PCT申請W094/10308，從肺表面活性劑蛋白D(SPD)衍生的亮氨酸拉鏈描述于Hoppe等人，1994，F(xiàn)EBSLetters344:191，此處引用作為參考。在Fanslow等人，1994，Semin.Immunol.6:267-78中描述了允許融合至其上的異源蛋白的穩(wěn)定三聚化的經(jīng)修飾的亮氨酸拉鏈的用途。在一個方法中，在合適的宿主細胞中表達包含融合至亮氨酸拉鏈肽的抗IGF-1R抗體片段或衍生物的重組融合蛋白，并從培養(yǎng)物上清液回收形成的可溶性寡聚抗IGF-1R抗體片段或衍生物。在一個方面，本發(fā)明提供了干擾IGF-1和/或IGF-2對IGF-1R的結(jié)合的抗原結(jié)合蛋白?？僧a(chǎn)生抗IGF-1R或其片段、變體或衍生物的這些抗原結(jié)合蛋白，并就干擾IGF-1和/或IGF-2對IGF-IR的結(jié)合的能力在常規(guī)測定法中篩選其。合適的測定法的實例是這樣的測定法，所述測定法就抑制IGF-1和/或IGF-2對表達IGF-IR的細胞的結(jié)合的能力檢測抗原結(jié)合蛋白或就減少生物學(xué)或細胞反應(yīng)的能力檢測抗原結(jié)合蛋白，所述反應(yīng)由IGF-1和/或IGF^對細胞表面IGF-1R受體的結(jié)合導(dǎo)致。在另一個方面，本發(fā)明提供了阻止IGF-1和/或IGF-2對IGF-1R的結(jié)合但不顯著地阻止胰島素對胰島素受體(INS-R)的結(jié)合的抗原結(jié)合蛋白。在一個實施方案中，抗原結(jié)合蛋白不結(jié)合INS-R。在另一個實施方案中，抗原結(jié)合以低至其不能有效地阻止胰島素對INS-R的結(jié)合的親和力結(jié)合所述INS-R。在另一個實施方案中，抗原結(jié)合蛋白結(jié)合INS-R，但被抗原結(jié)合蛋白結(jié)合的INS-R仍可結(jié)合胰島素。在另一個實施方案中，抗原結(jié)合蛋白對于IGF-1R的選擇性至少比其對于胰島素受體的選擇性高50倍。在另一個實施方案中，抗原結(jié)合蛋白的選擇性比其對于胰島素受體的選擇性高100倍。在另一個方面，本發(fā)明提供了顯示物種選擇性的抗原結(jié)合蛋白。在一個實施方案中，抗原結(jié)合蛋白結(jié)合一種或多種哺乳動物IGF-1R,例如，結(jié)合人IGF-1R和一種或多種小鼠、大鼠、豚鼠、倉鼠、沙鼠、貓、兔子、狗、山羊、綿羊、牛、馬、駱駝和非人靈長類動物的IGF-1R。在另一個實施方案中，抗原結(jié)合蛋白結(jié)合一種或多種靈長類動物的IGF-1R，例如，結(jié)合人IGF-1R和一種或多種食蟹猴、狨猴、獼猴和黑猩猩的IGF-1R。在另一個實施方案中，抗原結(jié)合蛋白特異性地結(jié)合人、食蟹猴、狨猴、獼猴或黑猩猩的IGF-1R。在另一個實施方案中，抗原結(jié)合蛋白不結(jié)合一種或多種小鼠、大鼠、豚鼠、倉鼠、沙鼠、貓、兔子、狗、山羊、綿羊、牛、馬、駱駝和非人靈長類動物的IGF-1R。在另一個實施方案中，抗原結(jié)合蛋白不結(jié)合NewWorld猴物種例如狨猴的IGF-1R。在另一個實施方案中，抗原結(jié)合蛋白不展示對除了IGF-1R外的任何天然發(fā)生的蛋白的特異性結(jié)合。在另一個實施方案中，抗原結(jié)合蛋白不展示對于除了哺乳動物IGF-1R外的任何天然發(fā)生的蛋白的特異性結(jié)合。在另一個實施方案中，抗原結(jié)合蛋白不展示對除了靈長類動物的IGF-1R外的任何天然發(fā)生的蛋白的特異性結(jié)合。在另一個實施方案中，抗原結(jié)合蛋白不展示對除了人IGF-1R外的任何天然發(fā)朱的蛋白的特異性結(jié)合。在另一個實施方案中，抗原結(jié)合蛋白特異性地結(jié)合小鼠、大鼠、食蟹猴和人IGF-1R。在另一個實施方案中，抗原結(jié)合蛋白以相似的結(jié)合親和力特異性地結(jié)合小鼠、大鼠、食蟹猴和人的IGF-1R。在另一個實施方案中，抗原結(jié)合蛋白阻止人IGF-1和IGF-2與小鼠、大鼠、食蟹猴和人IGF-1R的結(jié)合。在另一個實施方案中，抗原結(jié)合蛋白以相似的Ki阻止人IGF-1和IGF-2與小鼠、大鼠、食蟹猴和人的IGF-1R的結(jié)合。在另一個實施方案中，抗原結(jié)合蛋白以大約0.57和大約0.61nM之間的Ki阻止人IGF-1和IGF-2與小鼠、大鼠、食蟹猴和人的IGF-1R的結(jié)合?？墒褂帽绢I(lǐng)域熟知的方法和按照本說明書的教導(dǎo)確定抗原結(jié)合蛋白對于IGF-1R的選擇性。例如，可使用Western印跡法、FACS、ELISA或RIA確定選擇性。在另一個方面，本發(fā)明提供了結(jié)合IGF-1R的抗原結(jié)合蛋白(例如，批IGF-1R抗體)，所述蛋白具有一種或多種下列特征結(jié)合人和鼠類,的IGF-1R、抑制IGF-1和IGF-2兩者對人IGF-1R的結(jié)合、抑制IGF-1和IGF-2兩,者對鼠類IGF-1R的結(jié)合，優(yōu)選地抑制IGF-1和/或IGF-2對IGF-1R的高親和力結(jié)合、結(jié)合IGF-1R的L2結(jié)構(gòu)域、在17小時的暴露后引起細胞表面表達的IGF-1R的相對小的下調(diào)(與MAB391相比(R&Dsystems,Minneapolis,MN),例如，IGF-1R的量減少不到20%)、在每周一次200微克的劑量進行4周后，在小鼠如MAB391中的Colo-205或MiaPaCa-2異種移植腫瘤細胞上產(chǎn)生下調(diào)的細胞表面表達的IGF-1R的水平?？赏ㄟ^常規(guī)技術(shù)產(chǎn)生本發(fā)明的抗原結(jié)合蛋白的抗原結(jié)合片段。這些片段的實例包括，但不限于，F(xiàn)ab和F(ab')2片段。也涉及由基因工程技術(shù)產(chǎn)生的抗體片段和衍生物。其他實施方案包括嵌合抗體，例如，非人(例如，鼠類)的單克隆抗體的人源化形式。這些人源化抗體可通過已知的技術(shù)制備，且當(dāng)將所述抗體給人施用時，提供了減少的免疫原性的有利方面。在一個實施方案中，人源化單克隆抗體包含鼠類抗體的可變結(jié)構(gòu)域(或其抗原結(jié)合位點的全部或部分)和來源于人抗體的恒定結(jié)構(gòu)域?？蛇x擇地，人源化抗體片段可包含鼠類單克隆抗體的抗原結(jié)合位點和來源于人抗體的可變結(jié)構(gòu)域片段(缺少抗原結(jié)合位點)。用于產(chǎn)生嵌合抗體和經(jīng)碁因工程改造的其他單克隆抗體的方法包括Riechmann等人，l988，Nature332:323，Liu等人，1987,Proc.Nat.Acad.Sci.USA84:3439Larrick等人，1989，Bio/Technology7:934，和Winter等人，1993，TIPS14:139中描述的方法。在一個實施方案中，所述嵌合抗體是CDR移植抗體。用于人源化抗體的技術(shù)在例如美國專利申請?zhí)?0/194,975(2003年2月27日公布)、美國專利號5，869，619、5,225,539、5，821，337、5,859,205，Padlan等人，1995，F(xiàn)ASEBJ.9:133-39，和Tamura等人，2000，J.Immunol.164:1432-41中進行了描述。已發(fā)展了在非人動物中產(chǎn)生人或部分人抗體的方法。例如，已產(chǎn)生了其中通過各種方法使一個或更多個內(nèi)源免疫球蛋白基因失活的小鼠。已將人免疫球蛋白基因?qū)胨鲂∈?，從而置換失活的小鼠基因。動物中產(chǎn)生的抗體整合了由已導(dǎo)入該動物中的人遺傳材料編碼的人免疫球蛋白多肽鏈。在一個實施方案中，用IGF-1R多肽免疫非人動物，例如轉(zhuǎn)基因小鼠，這樣使得在動物中產(chǎn)生抗所述IGF-1R的抗體。合適的免疫原的一個例子是可溶性人IGF-1R，例如包含圖IO的蛋白的細胞外結(jié)構(gòu)域的多肽，或圖IO的蛋白的其他免疫原片段。用于產(chǎn)生和使用用于生產(chǎn)人或部分人抗體的轉(zhuǎn)基因動物的技術(shù)的實例描述于美國專利5,814,318、5,569,825和5，545，806，Davis等人，2003，戶rodi/cfiono/*力wza/7a/2t/6c>i//es尸ro歷fra/3S#e/2/c邁/ceinLo，ed.AntibodyEngineering:MethodsandProtocols,HumanaPress,NJ:191-200，Kellermann等人，2002，CurrOpinBiotechnol.13:593-97，Russel等人，2000，InfectImmun.68:1820-26，Gallo等人，2000，EurJImmun.30:534-40，Davis等人，1999，CancerMetastasisRev.18:421-25，Green,1999，JImmunolMethods.231:11—23,Jakobovits，1998，AdvancedDrugDeliveryReviews31:33-42，Green等人，1998，JExpMed.188:483-95，JakobovitsA，1998，Exp.Opin.Invest.Drugs.7:607-14，Tsuda等人，1997，Genomics.42:413-21，Mendez等人，1997，NatGenet.15:146-56,Jakobovits,1994，CurrBiol.4:761-63，Arbones等人，1994，Immunity.1:247-60，Green等人，1994，NatGenet.7:13-21，Jakobovits等人，1993，Nature.362:255—58，Jakobovits等人，1993,ProcNatlAcadSciUSA.90:2551—55.Chen,J.，M.Trounstine，F(xiàn).W.Alt,F.Young,C.Kurahara，J.Loring,D.Huszar."ImmunoglobulingenerearrangementinBcelldeficientmicegeneratedbytargeteddeletionoftheJHlocus."InternationalImmunology5(1993):647-656，Choi等人，1993，NatureGenetics4:117-23，F(xiàn)ishwild等人，1996，NatureBiotechnology14:845-51，Harding等人，1995，AnnalsoftheNewYorkAcademyofSciences,Unberg等人，1994，Nature368:856-59:Lonberg，1994，rra/7^e//cJ/proacAes〃咖a/#o/oc_/o"a/i4/7〃6ocT/esinHandbookofExperimentalPharmacology113:49-101:Lonberg等人，1995，InternalReviewofImmunology13:65-93，Neuberger,1996，NatureBiotechnology14:826,Taylor等人，1992,NucleicAcidsResearch20:6287-95,Taylor等人，1994，InternationalImmunology6:579-91，Tomizuka等人，1997，NatureGenetics16:133-43，Tomizuka等人，2000，ProceedingsoftheNationalAcademyofSciencesUSA97:722-27，Tuaillon等人，1993:ProceedingsoftheNationalAcademyofSciencesUSA90:3720—24，和Tuaillon等人，1994，JournalofImmunology152:2912-20中。在另一方面，本發(fā)明提供了結(jié)合IGF-1R的單克隆抗體。可使用任何本領(lǐng)域已知的技術(shù)，例如通過永生化脾細胞來產(chǎn)生單克隆抗體，所述脾細胞收獲自完成免疫接種程序后的轉(zhuǎn)基因動物?？墒褂帽绢I(lǐng)域已知的任何技術(shù)使所述脾細胞永生化，例如通過將其與骨髓瘤細胞融合以產(chǎn)生雜交瘤來使其永生化。用于產(chǎn)生雜交瘤的融合方法的骨髓瘤細胞優(yōu)選地是非抗體產(chǎn)生性的，具有高融合效率和酶缺陷的細胞，所述酶缺陷使其不能在某些選擇培養(yǎng)基中生長，所述培養(yǎng)基只支持想要的融合細胞(雜交瘤)生長。用于小鼠融合的合適的細胞系的實例包括Sp-20、P3-X63/Ag8、P3-X63-Ag8.653、NSl/l.Ag41、Sp210-Ag14、0、NS0/U、MPC-ll、MPC11-X45-GTG1.7和S194/5XX0Bul;用于大鼠融合的細應(yīng)系的實例包括R210.RCY3、Y3-Ag1.2.3、IR983F和4B210。用于細胞融合的其他細胞系是U-266、GM1500-GRG2、LICR-L0N-HMy2和UC729-6。在一個實施方案中，用IGF-1R免疫原免疫動物(例如，具有人免疫球蛋白序列的轉(zhuǎn)基因動物)來產(chǎn)生雜交瘤細胞系；收獲來自免疫的動物的脾細胞；將收獲的脾細胞融合至骨髓瘤細胞系，從而產(chǎn)生雜交瘤細胞；從所述雜交瘤細胞建立雜交瘤細胞系，并鑒定產(chǎn)生結(jié)合IGF-1R多肽的抗體的雜交瘤細胞系。這些雜交瘤細胞系和由其產(chǎn)生的抗IGF-1R單克隆抗體包括在本發(fā)明內(nèi)?？墒褂帽绢I(lǐng)域內(nèi)已知的任何技術(shù)純化由雜交瘤細胞系分泌的單克隆抗體?？蛇M一步篩選雜交瘤或mAb以鑒定具有特定性質(zhì)例如阻斷IGF-l和/或IGF-2誘導(dǎo)的活性的能力的mAb。在下面的實施例中提供了這些篩選的實例。抗體結(jié)合位點中心的互補決定區(qū)(CDR)的分子進化也已被用來分離具有增加的親和力的抗體，例如由Schier等人，1996，J.Mol.Biol.263:551描述的具有增加的對于c-erbB-2的親和力的抗體。因此，這些技術(shù)可用于制備抗IGF-1R的抗體。抗IGF-1R的抗原結(jié)合蛋白可用于例如在體外或體內(nèi)檢測IGF-1R多肽存在的測定法中?？乖Y(jié)合蛋白也可用于通過免疫親和層析純化IGF-1R蛋白。這些額外地可阻止IGF-1和/或IGF-2對IGF-1R的結(jié)合的抗原結(jié)合蛋白可用于抑制由這些結(jié)合導(dǎo)致的生物學(xué)活性。阻斷性抗原結(jié)合蛋白可用于本發(fā)明的方法。用作IGF-1和/或IGF-2拮抗劑的這些抗原結(jié)合蛋白可用于治療任何IGF-1和/或IGF-2誘導(dǎo)的病癥，包括但不限于癌癥。在一個實施方案中，由涉及轉(zhuǎn)基因小鼠的免疫的方法產(chǎn)生的人抗IGF-1R單克隆抗體用于治療這些病癥?？稍隗w外方法中使用抗原結(jié)合蛋白，或體內(nèi)施用其以抑制IGF-1和/或IGF-2誘導(dǎo)的生物學(xué)活性。因此可治療由IGF-l和/或IGF-2與細胞表面IGF-1R的相互作用引起或惡化(直接地或間接地)的病癥(上面提供了其實例)。在一個實施方案中，本發(fā)明提供了包括在體內(nèi)以有效地減少IGF-l和/或IGF-2誘導(dǎo)的生物學(xué)活性的量給需要其的哺乳動物施用IGF-1和/或IGF-2阻斷性抗原結(jié)合蛋白的療法。本發(fā)明的抗原結(jié)合蛋白包括抑制IGF-1的生物學(xué)活性并且也抑制IGF-2的生物學(xué)活性的部分人和完全人單克隆抗體。一個實施方案涉及至少部分地阻止IGF-1和IGF-2對表達人IGF-1R的細胞的結(jié)合的人單克隆抗體。在一個實施方案中，通過用IGF-1R免疫原免疫轉(zhuǎn)基因小鼠來產(chǎn)生所述抗體。在另一個實施方案中，所述免疫原是人IGF-1R多肽(例如，包含所有或部分IGF-1R細胞外結(jié)構(gòu)域的可溶性片段)。此處也提供了來源于這些免疫小鼠的雜交瘤細胞系，其中所述雜交瘤分泌結(jié)合IGF-1R的單克隆抗體。盡管人、部分人或人源化的抗體適合于許多應(yīng)用，特別是包括給人受試者施用所述抗體的應(yīng)用，但其他類型的抗原結(jié)合蛋白可適用于某些應(yīng)用。本發(fā)明的非人抗體可以例如來源于任何抗體產(chǎn)生性動物，例如小鼠、大鼠、兔子、山羊、驢或非人靈長類動物(例如猴子(例如，食蟹猴或獼猴)或猿(例如，黑猩猩))。本發(fā)明的非人抗體可用于體外和基于細胞培養(yǎng)的應(yīng)用或其中不發(fā)生對本發(fā)明的抗體的免疫反應(yīng)、所述免疫反應(yīng)不顯著、可被阻止、不被考慮或是想要的任何其他應(yīng)用。在一個實施方案中，給非人受試者施用本發(fā)明的非人抗體。在另一個實施方案中，非人抗體不在非人受試者中引發(fā)免疫反應(yīng)。在另一個實施方案中，所述非人抗體來自與非人受試者相同的物種，例如將本發(fā)明的小鼠抗體給小鼠施用。來自特定物種的抗體可通過例如用想要的免疫原(例如，可溶性IGF-1R多肽)免疫該物種的動物，或使用用于產(chǎn)生該物種的抗體的人工系統(tǒng)(例如，用于產(chǎn)生特定物種的抗體的基于細菌或噬菌體展示的系統(tǒng))、或通過將來自一個物種的抗體轉(zhuǎn)化成來自另一個物種的抗體(通過例如用來自另一個物種的恒定區(qū)置換抗體的恒定區(qū)或通過置換抗體的一個或多個氨基酸殘基以使其與來自另一個物種的抗體序列更相似)來產(chǎn)生。在一個實施方案中，抗體是包含來源于抗體(其來自兩個或更多個不同的物種)的氨基酸序列的嵌合抗體?？赏ㄟ^許多常規(guī)技術(shù)的任一技術(shù)制備抗原結(jié)合蛋白。例如，可使用本領(lǐng)域已知的任何技術(shù)從天然表達其的細胞純化其(例如，可從產(chǎn)生其的雜交瘤中純化抗體)，或在重組表達系統(tǒng)中產(chǎn)生其。參見，例:i口,^Zo/20c/o/2a/^j^r/cfo/z/as.'J^etr"2.邊e/s/anA/o/c^7ca7如a一es，Kennet等人(eds.)，PlenumPress,NewYork(1980);和J/〃6od'w爿Za6c>r"ory#a/7i/fl/，Harlow和Land(eds.)，ColdSpringHarborLaboratoryPress,ColdSpringHarbor:NY，(1988)。可使用本領(lǐng)域已知的任何表達系統(tǒng)生產(chǎn)本發(fā)明的重組多肽。一般地，用包含編碼想要的多肽的DNA的重組表達載體轉(zhuǎn)化宿主細胞。可使用的宿主細胞是原核細胞、酵母或高等真核細胞。原核細胞包括革蘭氏陰性或革蘭氏陽性生物，例如大腸桿菌或芽孢桿菌(bacilli)。高等真核細胞包括昆蟲細胞和已建立的來源于哺乳動物的細胞系。合適的哺乳動物宿主細胞系的實例包括猴腎細胞的C0S-7系(ATCCCRL1651)(Gluzman等人，1981，Cell23:175)、L細胞、293細胞、C127細胞、3T3細胞(ATCCCCL163)、中國倉鼠卵巢(CH0)細胞、HeLa細胞、BHK(ATCCCRL10)細胞系和由McMahan等人，1991，EMB0J.10:2821描述的來源于非洲綠猴腎細胞系CVI(ATCCCCL70)的CVI/EBNA細胞系。由Pouwels等人(C7o///^「e"ors.'J丄a6orafo/y#<3/2wa/，Elsevier,NewYork,1985)描述了用于細菌、真菌、酵母和哺乳動物細胞宿主的合適的克隆和表達載體。可在促進多肽表達的條件下培養(yǎng)轉(zhuǎn)化的細胞，并通過常規(guī)的蛋白純化方法回收所述多肽。一個這樣的純化方法包括在例如具有被結(jié)合至其上的完整或部分(例如，細胞外結(jié)構(gòu)域)的IGF-IR的基質(zhì)上使用親和層析。此處所用的多肽包括基本上均質(zhì)的、基本上不含污染性內(nèi)源材料的重組哺乳動物抗IGF-1R抗體多肽?？赏ㄟ^許多已知的技術(shù)中的任一種技術(shù)制備抗原結(jié)合蛋白，并就想要的性質(zhì)對其進行篩選。某些技術(shù)包括分離編碼目的抗原結(jié)合蛋白(例如，抗IGF-1R抗體)多肽鏈(或其部分)的核酸和通過重組DNA襪術(shù)操作該核酸。例如，可將核酸融合至另一種目的核酸，或改變(例>，通過誘變或其他常規(guī)技術(shù))其以添加、缺失或置換一個或多個氨基酸殘基。在一個方面，本發(fā)明提供了本發(fā)明的抗IGF-1R抗體的抗原結(jié)合片段。這些片段可完全由來源于抗體的序列組成或可包含額外的序列。抗原結(jié)合片段的實例包括Fab、F(ab02、單鏈抗體、雙抗體、三抗體、四鏈體(tetrabody)和結(jié)構(gòu)域抗體。在Lunde等人，2002，Biochem.Soc.Trans.30:500-06中提供了其他實例?？赏ㄟ^氨基酸橋(短肽連接體)連接重鏈和輕鏈可變區(qū)(Fv區(qū)域)片段形成單鏈抗體，產(chǎn)生單個多肽鏈。通過在編碼兩個可變結(jié)構(gòu)域多肽(Vl和VH)的DNA之間融合編碼肽連接體的DNA來制備這樣的單鏈Fvs(scFvs)。儂賴于所述兩個可變區(qū)之間的柔性連接體的長度，所得的多肽自身可折疊回去以形成抗原結(jié)合單體，或其可形成多體(例如，二聚體、三聚體或四聚體)(Kortt等人，1997，Prot.Eng.10:423;Kortt等人，2001，Biomol.Eng.18:95-108)。通過組合不同的包含、和VH的多肽，可形成結(jié)合不同表位的多聚scFvs(Kriangkum等人，2001，Biomol.Eng.18:31-40)。發(fā)展用于產(chǎn)生單鏈抗體的方法包括美國專利4，946，778;Bird,1988，Science242:423;Huston等人，1988，Proc.Natl.Acad.Sci.USA85:5879;Ward等人，1989，Nature334:544，deGraaf等人，2002，MethodsMolBiol.178:379-87中禪述的方法。此處提供的來源于抗體的單鏈抗體包括，但不限于，包含可變結(jié)構(gòu)域組合L1H1、L2H2、L3H3、L4H4、L5H5、L6H6、L7H7、L8H8、[9H9、L10H10、LllHll、L12H12、L13H13、L14H14、L15H15、L16H16、;17H17、L18H18、L19H19、L20H20、L21H21、L22H22、L23H23、L24H24、L25H25、L26H26、L27H27、L28H28、L29H29、L30H30、L31H31、L32H32、P3H33、L34H34、L35H35、L36H36、L37H37、L38H38、L39H39、L40H40、P41H41、L42H42、L43H43、L44H44、L45H45、L46H46、L47H47、L48H48、L49H49、L50H50、L51H51和L52H52的scFvs，其包括于本發(fā)明的范圍之內(nèi)。本發(fā)明的抗原結(jié)合蛋白(例如，抗體、抗體片段和抗體衍生物)可包含本領(lǐng)域已知的任何恒定區(qū)。輕鏈恒定區(qū)可以是例如K或入類型輕鏈恒定區(qū)，例如人K或x類型輕鏈恒定區(qū)。重鏈恒定區(qū)可以是例如，a、5、e、y或ia類型重鏈恒定區(qū)，例3口人oc、5、e、y或M類型重鏈恒定區(qū)。在一個實施方案中，輕鏈或重鏈恒定區(qū)是天然發(fā)生的恒定區(qū)的片段、衍生物、變體或突變蛋白。用于從目的抗體衍生不同亞類或同種型的抗體即亞類轉(zhuǎn)換的技術(shù)是已知的。因此，例如可從IgM抗體衍生IgG抗體，反之亦然。這些技術(shù)允許制備新的抗體，所述新抗體不僅具有給定的抗體(親本抗體)的抗原結(jié)合特性而且還展示與抗體同種型或亞型相關(guān)的但與親本抗體的生物學(xué)特性不同的生物學(xué)特性?？墒褂弥亟MDNA技術(shù)?？稍谶@些方法中使用編碼特定抗體多肽的克隆DNA，例如編碼想要的同種型^體的恒定結(jié)構(gòu)域的DNA。也參見Lantto等人，2002，MethodsMol.Biol.178:303-16。在一個實施方案中，本發(fā)明的抗原結(jié)合蛋白包含圖13的IgGl重鏈結(jié)構(gòu)域或圖13的IgGl重鏈結(jié)構(gòu)域的片段。在另一個實施方案中，本發(fā)明的抗原結(jié)合蛋白包含圖13的K輕鏈恒定鏈區(qū)域或圖13的K輕鏈恒定鏈區(qū)域的片段。在另一個實施方案中，本發(fā)明的抗原結(jié)合蛋白包含圖13的IgGl重鏈結(jié)構(gòu)域或其片段和圖13的K輕鏈結(jié)構(gòu)域或其片段。因此，本發(fā)明的抗原結(jié)合蛋白包括包含例如可變結(jié)構(gòu)域組合L1H1、L2H2、L3H3、L4H4、L5H5、L6H6、L7H7、L8H8、L9H9、L10H10、LllHll、L12H12、L13H13、L14H14、L15H15、L16H16、L17H17、L18H18、L19H19、L20H20、L21H21、L22H22、L23H23、L24H24、L25H25、L26H26、L27H27、L28H28、L29H29、L30H30、L31H31、L32H32、L33H33、L34H34、L35H35、L36H36、L37H37、&38H38、U9H39、L40H40、L41H41、L42H42、L43H43、L44H44、L45H45、L46H46、L47H47、L48H48、L49H49、L50H50、L51H51和L52H52、具有想要的同種型(例如，IgA、IgGl、IgG2、IgG3、IgG4、IgM、IgE和IgD)的抗原結(jié)合蛋白以及其Fab或F(ab')2片段的抗原結(jié)合蛋白。此外，如果IgG4是想要的，那么如Bloom等人，1997，ProteinScience6:407(此處引用作為參考)中所述在鉸鏈區(qū)導(dǎo)入點突變(CPSCP->CPPCP)以減少形成重鏈內(nèi)二硫鍵的趨勢(其可導(dǎo)致IgG4抗體中的不均一性)也是想要的。此外，用于衍生具有不同特性(即，對于其結(jié)合的抗原的不同親和力)的抗原結(jié)合蛋白的技術(shù)也是已知的。一個這樣的技術(shù)，稱作鏈改組(chainshuffling),包括在絲狀噬菌體的表面上展示免疫球蛋.白可變區(qū)基因庫，通常稱作噬菌體展示。已使用鏈改組制備如由Marks等人，1992，BioTechnology,10:779描述的抗半抗原2-苯基嗜,唑-5-酮的高親和力抗體。在特定的實施方案中，本發(fā)明的抗原結(jié)合蛋白具有如實施例中描迷所測量的至少106的對于IGF-1R的結(jié)合親和力(Ka)。在其他實施方案中，所迷抗原結(jié)合蛋白展示了至少107、至少108、至少109或至少l(T的L。在另一個實施方案中，本發(fā)明提供了具有低的與IGF-1R的解離速率的抗原結(jié)合蛋白。在一個實施方案中，所述抗原結(jié)合蛋白具有l(wèi)xl(Ts—或更低的K。ff。在另一個實施方案中，K。ff是5xl(T5s或更低。在另一個實施方案中，所述K。ff基本上與具有重鏈和輕鏈可變區(qū)序列的組合的抗體相同，所述組合選自L1H1、L2H2、L3H3、L4H4、L5H5、L6H6、L7H7、L8H8、L9H9、L10訓(xùn)、LllHll、L12H12、L13H13、L14H14、L15H15、L16H16、L17H17、L18H18、L19H19、L20H20、L21H21、L22H22、L23H23、L24H24、L25H25、L26H26、L27H27、L28H28、L29H29、L30固、L31H31、L32H32、L33H33、L34H34、L35H35、L36H36、L37H37、L38H38、L39H39、L40H40、L41H41、L42H42、L43H43、L44H44、L45H45、L46H46、L47H47、L48H48、L49H49、L50謂、L51H51和L52H52。在另一個實施方案中，抗原結(jié)合蛋白以基本上與包含一個或多個CDR的^體相同的K。ff結(jié)合IGF-1R，所述CDR來自具有輕鏈和重鏈可變區(qū)序列的組合的抗體，所述組合選自L1H1、L2H2、L3H3、L4H4、L5H5、L6H6、L7H7、L8H8、L9H9、LIOHIO、LllHll、L12H12、L13H13、L14H14、L15H15、L16H16、L17H17、L18H18、L19H19、L20H20、L21H21、L22H22、L23H23、L24H24、L25H25、L26H26、L27H27、L28H28、L29H29、L30謂、L31H31、L32H32、L33H33、L34H34、L35H35、L36H36、L37H37、L38H38、L39H39、L權(quán)40、L41H41、L42H42、L43H43、L44H44、L45H45、L46H46、L47H47、L48H48、L49H49、L50H50、L51H51和L52H52。在另一個實施方案中，抗原結(jié)合蛋白以基本上與包含圖2至9中舉例說明的氨基酸序列中的一個序列的抗體相同的K。ff結(jié)合IGF-1R。在另一個實施方案中，抗原結(jié)合蛋白以基本上與包含一個或多個CDR的抗體相同的K。ff結(jié)合IGF-1R，所述CDR來自包含圖2至9中舉例說明的氨基酸序列中的一個序列的抗體。在一個方面，本發(fā)明提供了結(jié)合人IGF-1R的L2結(jié)構(gòu)域的抗原結(jié)合蛋白?？墒褂帽绢I(lǐng)域已知的任何技術(shù)制備結(jié)合所述L2結(jié)構(gòu)域的抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域。例如，可使用全長IGF-1R多肽(例如，在膜結(jié)合制劑中)、IGF-1R的可溶性細胞外結(jié)構(gòu)域片段(實施例1中提供了其實例)、或包含或由L2結(jié)構(gòu)域組成的IGF-1R細胞外結(jié)構(gòu)域的更小片段(實施例IO提供了其實例)分離這些抗原結(jié)合蛋白?？墒褂帽绢I(lǐng)域已知的任何方法(實施例10中提供了其實例)篩選所分離的抗原結(jié)合蛋白以確定其結(jié)合特異性。在另一方面，本發(fā)明提供了結(jié)合細胞表面上表達的人IGF-1R的抗原結(jié)合蛋白，當(dāng)這樣結(jié)合時，其抑制細胞中的IGF-1R信號轉(zhuǎn)導(dǎo)活性而不引起細胞表面上的IGF-1R的量顯著減少?？墒褂么_定或估計細胞表面上和/或內(nèi)部的IGF-1R的量的任何方法。在一個實施方案中，本發(fā)明提供了結(jié)合在細胞表面上表達的人IGF-1R的L2結(jié)構(gòu)域的抗原結(jié)合蛋白，且當(dāng)這樣結(jié)合時，抑制了細胞中的IGF-1R信號轉(zhuǎn)導(dǎo)活性而不顯著地增加細胞表面的IGF-1R的內(nèi)化率。在其他實施方案中，抗原結(jié)合蛋白對表達IGF-1R的細胞的結(jié)合引起低于大約75%、50°/。、40%、30%、20%、15%、10%、5%、1%或0.1%的細胞表面IGF-1R被內(nèi)化。在另一個方面，抗原結(jié)合蛋白對表達IGF-1R的細胞的結(jié)合導(dǎo)致細胞表面上的IGF-1R的量逐漸減少，這樣在將細胞與所述抗原結(jié)合蛋白接觸的數(shù)小時內(nèi)，很少或未檢測到細胞表面IGF-1R的減少，但在細胞暴露于抗原結(jié)合蛋白數(shù)天或數(shù)周后，檢測到細胞表面IGF-1R的明顯減少。在另一個方面，本發(fā)明提供了具有體外或體內(nèi)(例如，當(dāng)給人受試者施用時)至少一天的半衰期的抗原結(jié)合蛋白。在一個實施方案中，所述抗原結(jié)合蛋白具有至少3天的半衰期。在另一個實施方案中，所述抗原結(jié)合蛋白具有4天或更長的半衰期。在另一個實施方案中，抗原結(jié)合蛋白具有8天或更長的半衰期。在另一個實施方案中，衍生或有更長"半衰期。在另一個實施方案-，抗原結(jié)合i白包含一個或多個點突變以增加血清半衰期，例如2000年2月24日公布的WO00/09560(引用作為參考)中所描述的情況。本發(fā)明還提供了多特異性抗原結(jié)合蛋白，例如，雙特異性抗原結(jié)合蛋白，例如，通過兩個不同的抗原結(jié)合位點或區(qū)域結(jié)合兩種不同的IGF-1R的表位或結(jié)合一種IGF-1R的表位和另一種分子的表位的抗原結(jié)合蛋白。此外，此處公開的雙特異性抗原結(jié)合蛋白可包含來自此處描述的抗體中的一種抗體的IGF-1R結(jié)合位點和來自此處描述的抗體的另一種抗體的第二IGF-1R結(jié)合區(qū)域，其包括通過參考其他出版物在此處描述的那些?？蛇x擇地，雙特異性抗原結(jié)合蛋白可包含來自此處描述的抗體的一種抗體的抗原結(jié)合位點和來自本領(lǐng)域已知的另一種IGF-1R抗體或來自通過已知的方法或此處描述的方法制備的抗體的第二抗原結(jié)合位點。制備雙特異性抗體的許多方法在本領(lǐng)域內(nèi)是已知的，且描述于2001年4月20日提交的美國專利申請09/839,632(此處引用作為參考)。這些方法包括使用由Milstein爭入，1983，Nature305:537，和其他資料(美國專利4,474，893、美國專利6，106，833)中描述的雜交瘤和抗體片段的化學(xué)偶聯(lián)(Brennan爭入，1985，Science229:81;Glennie爭入，1987，J.Immunol.139:2367;美國專利6，010，902)。此外，可通過重組方法，例如通過使用亮氨酸拉鏈部分(即，來自優(yōu)選地形成異二聚體的Fos和Jun蛋白；Kostelny爭入，1992，J.Immnol.148:1547)或美國專利5，582，996中描述的其他鎖和鑰匙相互作用結(jié)構(gòu)域結(jié)構(gòu)產(chǎn)生雙特異性抗體。其他有用的技術(shù)包括Kortt爭入，}997，^丄;美國專利5，959，083;和美國專利5，807，706中描述的技術(shù)。在另一個方面，本發(fā)明的抗原結(jié)合蛋白包括抗體的衍生物。所述衍生的抗體可包含給所述抗體提供想要的特性例如特定用途中增加的半衰期的任何分子或物質(zhì)。所述衍生抗體可包含，例如，可檢測的(或，示記的)部分(例如，放射性物質(zhì)、比色物質(zhì)、抗原性分子或酶分子、可檢測小珠(例如磁性或電子致密(例如，金)小珠)、或結(jié)合另一種分子的分子(例如，生物素或鏈霉抗生物素))、治療或診斷部分(例如，放射性、細胞毒性或藥物活性部分)或增加用于特定用途(例如給受試者例如人受試者施用或其他體內(nèi)或體外用途)的抗體的適應(yīng)性約分子?？捎糜谘苌贵w的分子的實例包括白蛋白(例如，人血清白蛋白)和聚乙二醇(PEG)?？墒褂帽绢I(lǐng)域內(nèi)熟知的技術(shù)制備白蛋白偶聯(lián)的抗體和抗體的聚乙二醇化衍生物。在一個實施方案中，將抗體綴合至或連接至運甲狀腺素蛋白(TTR)或TTR變體?？捎美缁瘜W(xué)藥品化學(xué)修飾TTR或TTR變體，所述化學(xué)藥品選自葡聚糖、聚(正乙烯吡咯烷酮)、聚乙二醇、聚丙二醇同聚物、聚氧化丙烯/氧化乙烯共聚物、聚氧乙基化多元醇和聚乙烯醇。美國專利申請20030195154。在另一個方面，本發(fā)明提供了使用本發(fā)明的抗原結(jié)合蛋白篩選結(jié)合IGF-1R的分子的方法?？墒褂萌魏魏线m的篩選技術(shù)。在一個實施方隸中，將與本發(fā)明的抗原結(jié)合蛋白結(jié)合的IGF-1R分子或其片段與本發(fā)明的抗原結(jié)合蛋白和另一種分子接觸，其中如果所述另一種分子減少所述抗原結(jié)合蛋白對IGF-1R的結(jié)合那么其結(jié)合IGF-1R。可使用任何合適的方法例如ELISA檢測抗原結(jié)合蛋白的結(jié)合?？赏ㄟ^如上所述可檢測地標(biāo)記抗原結(jié)合蛋白來簡化抗原結(jié)合蛋白對IGF-1R的結(jié)合的檢測。在一個實施方案中，進一步分析所述IGF-1R結(jié)合分子以確定其是否抑制IGF-1R、IGF-1和/或IGF-2介導(dǎo)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)。核酸在一個方面，本發(fā)明提供了分離的核酸分子。所迷核酸分子包括，例如編碼抗原結(jié)合蛋白的整體或部分(例如，本發(fā)明的抗體的一條或兩條鏈或其片段、衍生物、突變蛋白或變體)的多核苷酸、足以用作雜交探針、PCR引物或用于鑒定、分析、突變或擴增編碼多肽的多核苷酸的測序引物、用于抑制多核苷酸表達的反義核酸和前述序列的互補序列。所述核酸可以是任何長度。其長度可以是例如5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、75、100、125、150、175、200、250、300、350、400、450、500、750、1，000、1，500、3，000、5，000或更多個核苷酸，和/或可包含一個或多個額外的序列，例如調(diào)控序列，和/或可以是更大的核酸例如載體的部分。所述核酸可以是單鏈的或雙鏈的且可包含RNA和/或DM核苷酸，和其人工變體(例如，肽核酸)?？蓮囊延肐GF-1R免疫的小鼠的B細胞分離編碼抗體多肽(例如，重鏈或輕鏈，只為可變結(jié)構(gòu)域或全長)的核酸。可通過常規(guī)的方法例如聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)分離核酸。圖1提供了編碼圖2和圖3中所示的重鏈和輕鏈可變區(qū)的可變區(qū)的核酸序列。本領(lǐng)域技術(shù)人員認識到，由于遺傳密碼子的簡并性的原因，圖2至9中各個多肽序列也由許多其他核酸序列編碼。本發(fā)明提供了編碼本發(fā)明的各抗原結(jié)合蛋白的各簡并核苷酸序列。本發(fā)明還提供了在特定的雜交條件下與其他核酸(例如，包含圖1的核苷酸序列的核酸)雜交的核酸。用于雜交核酸的方法在本領(lǐng)域是熟知的。參見，例如，CurrentProtocolsinMolecularBiology,JohnWiley&Sons,N.Y.(1989)，6.3.1-6.3.6。如此處所定義的，中等嚴緊雜交條件使用包含5X氯化鈉/檸檬酸鈉(SSC)、0.5%SDS、l.OmMEDTA(pH8.0)的預(yù)洗滌液(prewashingsolution)、大約50%的曱酰胺、6XSSC的雜交緩沖液，和551C的雜交溫度(或其他相似的雜交溶液，例如包含大約50%的甲酰胺的溶液，42"的雜交溫度)以及在0.5XSSC、0.1%SDS中在60X:下的洗滌條件。嚴緊雜交條件在6X^SC中在45匸下進行雜交，然后在O.1XSSC、0.2°/。SDS中在"'C下進行一次或多次洗滌。此外，本領(lǐng)域技術(shù)人員可操作雜交和/或洗滌條件以增加或減少雜交的嚴緊度，以使包含相互之間至少65、70、75、80、85、90、95、98或99%的同一性的核苷酸序列的核酸總體上保持相互雜交。在例如Sambrook，F(xiàn)ritsch，和Maniatis(1989，MolecularCloning:ALaboratoryManual,ColdSpringHarborLaboratoryPress,ColdSpringHarbor,N.Y.,chapters9and11;和CurrentProtocolsinMolecularBiology,1995,Ausubel爭入，eds.，JohnWiley&Sons,Inc.，sections2.10and6.3-6.4)中列出了影響雜交條件的選擇的基本參數(shù)和設(shè)計合適的條件的指導(dǎo)，且可通過本領(lǐng)域技術(shù)人員基于例如DNA的長度和/或堿基組成容易地確定所述參數(shù)和指導(dǎo)?？赏ㄟ^突變向核酸導(dǎo)入改變，從而導(dǎo)致其編碼的多肽(例如，抗原結(jié)合蛋白)的氨基酸序列的改變?？墒褂帽绢I(lǐng)域內(nèi)已知的任何技術(shù)導(dǎo)入突變。在一個實施方案中，使用例如定點誘變方案來改變一個或多個特定的氨基酸殘基。在一個實施方案中，使用例如隨機誘變方案改變一個或多個隨機選擇的殘基。然而這使得，可表達突變的多肽并就想要的性質(zhì)(例如，對IGF-1R的結(jié)合或阻止IGF-1和/或IGF-2對IGF-1R的結(jié)合)對其進行篩選?？蓪⑼蛔円牒怂岫伙@著地改變其編碼的多肽的生物學(xué)活性。例如，可進4亍核苷酸置換(nucleotidesubstitution)，從而導(dǎo)致在非必需氨基酸殘基上的氨基酸置換。在一個實施方案中，突變圖1中提供的核苷酸序列或其想要的片段、變體或衍生物以使其編碼氨基酸序列，所述氨基酸序列包含圖2至9中所示的一個或多個氨基酸的缺失或置換，所述氨基酸為兩個或更多個序列在其上相異的殘基。在另一個實施方案中，所述誘變在與圖2至9中所示的一個或多個氨基酸殘基(所述氨基酸為兩個或更多個序列在其上相異的殘基)相鄰的位罩插入氨基酸?？蛇x擇地，可向核酸導(dǎo)入一個或多個突變，所述突變可選擇性地改變由其編碼的多肽的生物學(xué)活性(例如，IGF-1R的結(jié)合，抑制IGF-1和/或IGF-2等)。例如，所述突變可定量或定性地改變生物學(xué)活性。定量改變的實例包括增加、減少或消除所述活性。定性改變的實例包括改變抗原結(jié)合蛋白的抗原特異性。在另一個方面，本發(fā)明提供了適合用作引物或用于檢測本發(fā)明的核酸序列的雜交探針的核酸分子。本發(fā)明的核酸分子可只包含編碼本發(fā)明的全長多肽的核酸序列的部分，例如可用作探針或引物的片段或編碼本發(fā)明的多肽的活性部分(例如，IGF-1R結(jié)合部分)的片段?；诒景l(fā)明的核酸的序列的探針可用于檢測該核酸或相似的核酸，例如編碼本發(fā)明的多肽的轉(zhuǎn)錄物。所述探針可包含標(biāo)記基團，例如，放射性同位素、熒光化合物、酶或酶輔因子(enzymeco-factor)。這些探針可用于鑒定表達多肽的細胞。在另一個方面，本發(fā)明提供了包含編碼本發(fā)明的多肽或其部分的核酸的載體。載體的示例包括，但不限于，質(zhì)粒、病毒載體、非染色體外哺乳動物載體和表達載體，例如重組表達載體。本發(fā)明的重組表達載體可包含以適合于在宿主細胞中表達該核酸的形式存在的本發(fā)明的核酸。重組表達載體包含基于用于表達的宿主細胞選擇的一個或多個調(diào)控序列，所述調(diào)控序列有效地連接至要表達的核酸序列。調(diào)控序列包括在許多類型的宿主細胞中指導(dǎo)核酸序列的組成型表達的調(diào)控序列(例如，SV40早期基因增強子、勞斯肉瘤病毒啟動子和細胞巨化病毒啟動子)、只在某些宿主細胞中指導(dǎo)核苷酸序列表達的調(diào)控序列(例如，組織特異性調(diào)控序列，參見Voss爭入，1986,TrendsBiochem.Sci.11:287，Maniatis爭入，1987，Science236:1237，此處以其全文在此引用作為參考)和在對特定處理或條件的響應(yīng)中指導(dǎo)核酸序列的誘導(dǎo)型表達的調(diào)控序列(例如，哺乳動物細胞中的金屬硫蛋白啟動子和原核和真核系統(tǒng)中的tet反應(yīng)和/或鏈霉素反應(yīng)性啟動子(參見上述)。本領(lǐng)域技術(shù)人員認識到，表達載體的議計可依賴于這些因素如被轉(zhuǎn)化的宿主細胞的選擇、想要的蛋白的表達水平等。可將本發(fā)明的表達載體導(dǎo)入宿主細胞，從而產(chǎn)生蛋白或肽，包括由此處描述的核酸編碼的融合蛋白或肽。在另一個方面，本發(fā)明提供了已將本發(fā)明的重組表達載體導(dǎo)入其中的宿主細胞。宿主細胞可以是任何原核細胞(例如，大腸桿菌)或真核細胞(例如，酵母、昆蟲或哺乳動物細胞(例如，CH0細胞))。可通過常規(guī)的轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)染技術(shù)將載體DNA導(dǎo)入原核或真核細胞。為了穩(wěn)定地轉(zhuǎn)染哺乳動物細胞，已知依賴于所用的表達載體和轉(zhuǎn)染技術(shù)，只有少數(shù)細胞可將外源DNA整合入其基因組中。為了鑒定和選擇這些整合體，一般可將編碼選擇標(biāo)記(例如，對于抗生素的抗性)的基因和目的基因一起導(dǎo)入宿主細胞。優(yōu)選的選擇標(biāo)記包括賦予對藥物例如G418、潮霉素和氨甲蝶呤的抗性的選擇標(biāo)記。除其他方法以外，可通過藥物選擇鑒定穩(wěn)定地轉(zhuǎn)染了導(dǎo)入的核酸的細胞(例如，已整合了標(biāo)記基因的細胞可存活，而其他細胞將死亡)。適應(yīng)癥在一個方面，本發(fā)明提供了治療受試者的方法。所述方法可，例如，對受試者具有一般的增進健康的效應(yīng)，例如，其可增加受試者的預(yù)期壽命?？蛇x擇地，所述方法可，例如，治療、預(yù)防、醫(yī)治、緩解或改善("治療")病變、病癥、癥狀或疾病("病狀")。根據(jù)本發(fā)明治療的病癥是特征在于IGF-1、IGF-2和/或IGF-1R的不恰當(dāng)?shù)谋磉_或活性的病癥。在一些這樣的病癥中，所述表達或活性太高，從而治療包括施用此處描述的IGF-1R拮抗劑。在其他這樣的病癥中，表達或活性水平太低，所述治療包括施用此處描述的IGF-1R激動劑。可使用本發(fā)明的方法和組合物治療的病癥的類型的一個實例是涉及細胞生長的病癥，例如癌性病癥。因此，在一個實施方案中，本發(fā)明提供了用于治療癌癥病癥的組合物和方法。所述癌癥病癥可以是可使用此處包括例如IGF-1R拮抗性抗原結(jié)合蛋白(例如抗IGF-1R抗體、抗體片段或抗體衍生物)的組合物治療的任何癌癥病癥。癌癥病癥的實例包括，例如，急性成淋巴細胞性白血病、腎上腺皮質(zhì)癌、AIDS相關(guān)性癌癥、AIDS相關(guān)性淋巴瘤、肛門癌、兒童小腦星形細胞瘤、兒童大腦星形細胞瘤、基底細胞癌、肝外膽管癌、膀胱癌、骨肉瘤/惡性纖維組織細胞瘤、骨癌、腦腫瘤(例如，腦干神經(jīng)膠質(zhì)瘤、小腦星形細胞瘤、大腦星形細胞瘤/惡性膠質(zhì)瘤、室管膜瘤、成神經(jīng)管細胞瘤、幕上原發(fā)性神經(jīng)外胚層瘤、視通路和下丘腦神經(jīng)膠質(zhì)瘤)、乳腺癌、支氣管腺瘤/類癌瘤、伯基特淋巴瘤、類癌瘤、胃腸類癌瘤、原因不明的原發(fā)性中樞神經(jīng)系統(tǒng)癌(CarcinomaofUnknownPrimary,PrimaryCentralNervousSystem)、小腦星形細胞瘤、大腦星形細胞瘤/惡性神經(jīng)膠質(zhì)瘤、子宮頸癌、兒童期癌癥、慢性淋巴細胞性白血病、慢性髓細胞性白血病、慢性骨髓增生病、結(jié)腸癌、結(jié)腸直腸癌、皮膚T細胞淋巴瘤、子宮內(nèi)膜癌、室管膜瘤、食管癌、尤文家族腫瘤、顱外生殖細胞瘤(ExtracranialGermCellTumor)、性腺外生殖細胞瘤、肝外膽管癌、眼內(nèi)黑色素瘤眼癌、視網(wǎng)膜成神經(jīng)細胞瘤眼癌(RetinoblastomaEyeCancer)、膽嚢癌、胃癌、胃腸類癌瘤、生殖細胞瘤(例如，顱外、'陣腺外和卵巢)、妊娠性滋養(yǎng)層細胞瘤、神經(jīng)膠質(zhì)瘤(例如，成人、兒童腦干、兒童大腦星形細胞瘤、兒童視通道和下丘腦)、毛細胞性白血病、頭與頸癌、肝細胞(肝)癌、何杰金氏淋巴瘤、下咽癌(hypopharyngealcancer)、下丘腦和視通路神經(jīng)膠質(zhì)瘤、目艮內(nèi)黑色素瘤、胰島細胞癌(內(nèi)分泌胰腺)、卡波西氏肉瘤、腎(腎細胞)癌、喉癌、向血病(例如，急性成淋巴細胞的、急性骨髄的、慢性淋巴細胞的、慢性髄細胞性白血病和毛樣細胞白血病)、唇和口腔癌、肝癌、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、淋巴瘤(例如，AIDS相關(guān)性淋巴瘤、伯基特氏淋巴瘤、表皮T細胞淋巴瘤、何杰金氏、非何杰金淋巴瘤和原發(fā)性中樞神經(jīng)系統(tǒng)淋巴瘤)、特發(fā)性巨球蛋白血癥、骨惡性纖維組織細胞瘤/骨肉瘤、成神經(jīng)管細胞瘤、黑色素瘤、眼內(nèi)(眼)黑色素瘤、Merkel細胞癌、間皮瘤、具有隱蔽原發(fā)灶的轉(zhuǎn)移鱗狀頸癌、多發(fā)性內(nèi)分泌腫瘤綜合征、多發(fā)性骨髓瘤/漿細胞贅生物(PlasmaCellNeoplasm)、萆樣霉菌病、骨髄增生異常綜合征、骨髄發(fā)育異常(Myelodysplastic)/骨髓組織增殖病(MyeloproliferativeDiseases)、髄細胞性白血辨、慢性髄細胞樣白血病、多發(fā)性骨髓瘤、慢性骨髓增生病、鼻腔和鼻竇癌(NasalCavityandParanasalSinusCancer)、鼻咽癌、成神經(jīng)細胞瘤、口腔癌、口咽癌、骨肉瘤/骨惡性纖維組織細胞瘤、卵巢癌、卵巢上皮癌、卵巢生殖細胞瘤(OvarianGermCellTumor)、低惡性度卵巢肺瘤(OvarianLowMalignantPotentialTumor)、胰腺癌、胰島細胞胰腺癌(IsletCellPancreaticCancer)、鼻竇和鼻腔癌(ParanasalSinusandNasalCavityCancer)、甲狀旁腺癌、陰莖癌、嗜鉻細胞瘤、成松果體細胞瘤、垂體瘤、漿細胞贅生物(PlasmaCellNeoplasm)/多發(fā)性骨髓瘤、胸膜肺胚細胞瘤(PleuropulmonaryBlastoma)、原發(fā)性中沖區(qū);f申經(jīng)系統(tǒng)、淋巴瘤、前歹'J腺癌、直腸癌、腎細胞(腎)癌、腎盂和輸尿管轉(zhuǎn)移細胞癌(RenalPelvisandUreterTransitionalCellCancer)、視網(wǎng)膜成神經(jīng)細胞瘤、橫紋肌肉瘤、唾液腺癌、軟組織肉瘤、子宮肉瘤、塞扎里氏綜合征、非黑色素瘤皮膚癌、默克爾細胞皮膚癌(MerkelCellSkinCarcinoma)、小腸癌、軟組織肉瘤、鱗狀細胞癌、皮膚T淋巴細胞瘤、睪丸癌、胸腺瘤、胸腺癌、甲狀腺癌、妊娠性滋養(yǎng)層細胞瘤、原發(fā)部位不明癌、原發(fā)部位不明癌、尿道癌、子宮內(nèi)膜癌(EndometrialUterineCancer)、子宮肉瘤、陰道癌、視通路和下丘腦神經(jīng)膠質(zhì)瘤、外陰癌(VulvarCancer)、特發(fā)性巨球蛋白血癥和腎母細胞瘤。4個不同的研究小組通過放射免疫測定法("RIA")或免疫組織化學(xué)法("IHC")已研究了總共425例乳腺癌(大部分是管起源的)和48例正常組織或良性樣品(Papa爭入，1993，CancerResearch53:3736-40，Happerfield爭入，1997，JournalofPathology183:412-17;Ellis爭人，1998，BreastCancerResearch&Treatment52:175-84，Lee爭人，1998，BreastCancerResearch&Treatment47:295-302,Schnarr爭入，2000，InternationalJournalofCancer89:506-13)。這些研究表明提高的IGF-1R表達(5-10倍)與有利的預(yù)后和生物標(biāo)記(ER+PR+)相關(guān)，暗示著雌激素和IGF在良好分化的腫瘤的維持或進展中協(xié)同作用。類似地，已顯示雌激素是ER+MCF-7乳腺癌細胞系的生長和存活所必需的，且在該情況中IGF-IR通過雌激素處理上調(diào)(在Ellis爭乂，1998，BreastCancerResearch&Treatment52:175-84中進行了綜述)。因此，在一個實施方案中，本發(fā)明提供了在需要該治療的受試者中治療乳腺癌的方法，其包括給受試者施用有效量的此處描述的IGF-1R拮抗劑。在另一個實施方案中，所述方法還包括施用激素抑制劑例如雌激素抑制劑。已報導(dǎo)了關(guān)于12個結(jié)腸腺瘤、36個原發(fā)性結(jié)腸直腸腺瘤和27個對應(yīng)的轉(zhuǎn)移灶和34個相鄰的正常組織的匯集的回顧性IGF-1RIHC分析(Hakam爭乂，1999，HumanPathology.30:1128-33)。中度至強IHC染色的頻率似乎隨更高的階段和胂瘤分級度(0°/。正常對93%轉(zhuǎn)移)急劇地增加。該結(jié)果與通過RM酶保護測定法("RPA")(Freier爭乂，1999，Gut44:704-08)進行的RNA分析一致。因此，在一個實施方案中，本發(fā)明提供了在需要該治療的受試者中治療結(jié)腸癌的方法，其包括給所述受試者施用有效量的此處描述的IGF-1R拮抗劑。40-80歲的男性中高血漿IGF-1和減少的IGFbp3與增加的前列腺癌風(fēng)險相關(guān)(Chan爭乂，1998，Science279:563-6)。高IGF-1與其他癌癥的風(fēng)險相關(guān)，所述癌癥包括乳腺癌(Hankinson爭乂，1998，Lancet351:1393-96》、結(jié)腸癌(Ma爭乂，1999，JournaloftheNationalCancerInstitute91:620-25)和肺癌(Yu爭乂，1999，JournaloftheNationalCancerInstitute91:151-56)。在轉(zhuǎn)基因小鼠模型中，IGF-1在各位置中的過表達促進腫瘤發(fā)病率的增加(Bol爭乂，1997，Oncogene14:1725-34;DiGiovanni爭入，2000，CancerResearch60:1561-70;DiGiovanni爭入，2000，ProceedingsoftheNationalAcademyofSciencesoftheUnitedStatesofAmerica97:3455-60，Hadsell爭入，2000，Oncogene19:889-98)。這些小鼠研究涉及血清和基質(zhì)產(chǎn)生的IGF-1的作用。因此，在一些實施方案中，本發(fā)明提供了治療需要該治療的受試者的方法，其包括給所述受試者施用有效量的此處描述的IGF-1R的拮抗劑，其中所述拮抗劑抑制IGF-1對IGF-1R的激活。在另一個實施方案中，所述癌癥是前列腺癌、乳腺癌、結(jié)腸癌或肺癌。已觀察到骨是身體中IGF-1的主要來源。因此，在一個方面，本發(fā)明提供了用于在受試者的骨中抑制IGF-1R的組合物和方法。在一個實施方案中，給受試者施用本發(fā)明的IGF-1R抑制劑，所述受試者在骨中具有腫瘤或處于發(fā)生該腫瘤的風(fēng)險中。所述腫瘤可以是例如，原發(fā)性腫瘤或轉(zhuǎn)移腫瘤。所述治療任選地還包括給受試者施用一種或多種額外的治療性和/或姑息療法，例如抗肺瘤療法(例如，化學(xué)療法、放射療法或抗激素療法)或抑制骨轉(zhuǎn)換(boneturnover)的治療(例如，denosumab(AmgenInc.,Thousand0aks，CA))。IGF-2在許多腫瘤和基質(zhì)組織中過表達。IGF-2的水平在原發(fā)性肝癌(Cariani等人，1988，CancerResearch48:6844-49)和結(jié)腸的腺癌(Freier等人，1999，Gut44:704-08)中表現(xiàn)特別高(高至40倍)。許多過度生長病癥與增加的兒童期腫瘤發(fā)病率相關(guān)。5至10%的具有出生前生長疾病貝克威斯韋德曼氏癥(BWS)或偏側(cè)發(fā)育過度的個體發(fā)生腫瘤例如腎胚細胞瘤、腎上腺癌和成神經(jīng)細胞瘤(由Morison等人，1998，MolecularMedicineToday4:110-05綜述)。這些兒童中的肺瘤易感因素似乎是母體IGF-2基因印跡的嵌合式丟失、或具有IGF-2的親本染色體臂(lip)的加倍。兩種改變都可增加IGF-2的表達水平。也在腎母細胞瘤中檢測到由嵌合式單親二倍體或IGF-2基因印跡的丟失造成的IGF-2過表達。即使IGF-2基因改變也在一些正常的組織中發(fā)生，也沒在這些兒童中觀察到生長病癥，這可能反映受影響的細胞的組織分布。在小鼠中也發(fā)生母體IGF-2基因的印跡，且IGF-2過表達的效應(yīng)與人的狀況一致(Cariani等人，1991，JournalofHepatology13:220-26，Schirmacher等人，1992，CancerResearch52:2549-56;Harris等人，1998，Oncogene16:203-09)。在轉(zhuǎn)基因表達過量IGF-2的的小鼠中，腫瘤和器官巨大癥的發(fā)病率增加(Christofori等人，1994，Nature369:414-18，Ward等人，1994，ProceedingsoftheNationalAcademyofSciencesoftheUnitedStatesofAmerica91:10365-9，Wolf等人，1994，Endocrinology135:1877-86，Bates等人，1995，BritishJournalofCancer72:1189-93，Hassan等人，2000，CancerResearch60:1070-76)。局部IGF-2過表達增加前列腺、乳房、腸、肝和表皮腫瘤的自發(fā)出現(xiàn)。使用肝啟動子的血漿特異性表達提高了肝細胞癌和淋巴瘤。因此，在一個實施方案中，本發(fā)明提供了治療需要該治療的受試者的方法，其包括給受試者施用有效量的此處描述的IGF-IR的拮抗劑，其中所述拮抗劑抑制IGF-2對IGF-1R的激活。在另一個實施方案中，所述受試者具有癌癥。在另一個實施方案中，所述受試者具有腫瘤。在另一個實施方案中，所述受試者具有肝癌、結(jié)腸腺癌、貝克威斯韋德曼氏癥(Beckwith-WeidmannSyndrome)、偏側(cè)發(fā)育過度、腎胚細胞瘤、腎上腺癌、成神經(jīng)細胞瘤、母體IGF-2基因印跡的嵌合式丟失、親本染色體臂(llp)的加倍、增加的IGF-2表達、腫瘤(例如，前列腺瘤、乳腺瘤、腸腫瘤、肝腫瘤、表皮肺瘤或腎母細胞瘤)、器官巨大癥、肝細胞癌或淋巴瘤。在另一個方面，本發(fā)明提供了預(yù)防或抑制癌癥擴散至身體的另一部分或治療已擴散至身體的另一部分的癌癥的方法。在一個實施方案中，癌癥已擴散至局部淋巴結(jié)。在另一個實施方案中，所述癌癥是轉(zhuǎn)移性的。原發(fā)性肺瘤可以是任何種類的腫瘤，例如，腺癌胂瘤(例如，前列腺腺癌腫瘤、乳腺癌腫瘤、或腎細胞癌腫瘤)、非小細胞或小細胞肺癌腫瘤、甲狀腺癌腫瘤等。轉(zhuǎn)移腫瘤的位置可以是身體中的任何位置。其可以在例如骨、淋巴系統(tǒng)、肺、大腦、眼、皮膚、胰腺、或肝中。在一個特定的實施方案中，用有效量的本發(fā)明的IGF-1R抑制性組合物治療具有腫瘤疾病的受試者以阻止原發(fā)性腫瘤轉(zhuǎn)移。在另一個特定的實施方案中，用有效量的本發(fā)明IGF-1R抑制性組合物治療具有原發(fā)性腫瘤的受試者以抑制原發(fā)性腫瘤轉(zhuǎn)移。在另一個特定的實施方案中，用有效量的本發(fā)明的IGF-1R抑制性組合物治療具有轉(zhuǎn)移腫瘤的受試者以抑制繼發(fā)性腫瘤的生長或擴散。在另一個特定的實施方案中，用有效量的本發(fā)明的IGF-1R抑制性組合物治療具有轉(zhuǎn)移腫瘤的受試者以使繼發(fā)性肺瘤的大小減小。在其他特定的實施方案中，原發(fā)性腫瘤是腺癌腫瘤、非小細胞肺腫瘤、小細胞肺腫瘤、或甲狀腺癌。在另一個特定的實施方案中，所述轉(zhuǎn)移腫瘤在骨中。在另一個特定的實施方案中，阻止或抑制轉(zhuǎn)移腫瘤在骨中形成。在另一個明確確定的實施方案中，所述方法包括用本發(fā)明的IGF-1R抑制性組合物和一種或多種其他治療法(例如，殺死或抑制癌細胞生長的治療法，例如放射療法、激素療法或化學(xué)療法，或抑制骨轉(zhuǎn)換的治療劑，例如denosumab)治療受試者，此處提供其非限定性實例。一種或多種其他的療法可包括，例如受試者的特定病癥的護理和/或姑息護理的標(biāo)準(zhǔn)。不束綽于任何特定的理論，腫瘤細胞似乎依賴于PI3激酶/Akt信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑以抗化學(xué)療法、放射療法和抗激素療法的編程性細胞死亡誘導(dǎo)性活性。因此，在一個實施方案中，本發(fā)明提供了治療需要該治療的受試者的方法，其包括給所述受試者施用本發(fā)明的IGF-1R拮抗劑和化學(xué)療法、放射療法和/或抗激素療法。通過反義技術(shù)和顯性失活突變(dominantnegativemutations)，該概念已在細胞培養(yǎng)物模型和嚙齒動物腫瘤模型中通過實驗得到驗證(由Baserga爭入，1997，BiochimicaetBiophysicaActa1332:F105-26，Baserga,2000，Oncogene19:5574-81綜述)。在一個實施方案中，化學(xué)治療劑選自有絲分裂抑制劑、烷化劑、抗代謝物、嵌入性抗生素、生長因子抑制劑、細胞周期抑制劑、酶、拓樸異構(gòu)酶抑制劑、抗存活劑、生物學(xué)反應(yīng)修飾劑、抗激素藥例如抗雄激素和抗血管生成劑?？膳c本發(fā)明的IGF-1受體抑制劑一起施用的化學(xué)治療劑的一個實例是CPT-ll。CPT-ll(鹽酸伊立替康三水合物)是喜樹堿(植物生物堿)的半合成的、水溶性衍生物。CPT-ll和稱為SN38的相關(guān)代謝產(chǎn)物抑制拓樸異構(gòu)酶1(T0P01)。該酶在DM中引入允許解旋從而允許DNA復(fù)制進行的可逆的單鏈斷裂。T0P01的抑制阻止了DNA復(fù)制后單鏈斷裂的再連接，從而導(dǎo)致增加的染色體斷裂。該DM破壞通過由p53和監(jiān)控基因組完整性的其他系統(tǒng)的作用產(chǎn)生的編程性細胞死亡促進細孢死亡。CPT-ll的細胞毒性效應(yīng)通常限制在正在復(fù)制DM(S期)的細胞中。靜息細胞大多不受影響。在另一個實施方案中，本發(fā)明提供了以有效量的本發(fā)明的IGF-1R拮抗劑和有效量的細胞編程性死亡誘導(dǎo)劑治療需要其的受試者的方法。在另一個實施方案中，抗血管生成劑例如醒P-2(基質(zhì)金屬蛋白酶2)抑制劑、羅P-9(基質(zhì)金屬蛋白酶9)抑制劑和/或COX-II(環(huán)加氧酶11)抑制劑與本發(fā)明的化合物一起使用。有用的C0X-II抑制劑的實例包括CELEBREX(alecoxib)、BEXTRA(伐地考昔)和VI0XXTM(羅非考昔)。有用的基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑的實例描述于W096/331"(1996年10月24日公布的)、W096/27583(1996年3月7日公布的)、歐洲專利申請No.97304971.1(1997年7月8日提交的)、歐洲專利申請No.99308617.2(1999年10月29日提交的)、W098/07697(1998年2月26日公布的)、W098/03516(1998年1月29日公布的)、W098/34918(1998年8月13日公布的)、W098/34915(1998年8月13日公布的)、冊98/33768(1998年8月6日公布的)、W098/30566(1998年7月16日公布的)、歐洲專利公開No.606,046(1994年7月13公布的)、歐洲專利公開No.931,788(1999年7月28日公布的)、W090/05719(1990年5月31日公布的)、W099/52910(1999年10月21日公布的)、WO99/52889(1999年10月21日公布的)、WO99/29667(1999年6月17日公布的)、PCT國際申請PCT/IB98/01113(1998年7月21日提交的)、歐洲專利申請No.99302232.1(1999年3月25日提交的)、大不列顛專利申請?zhí)?912961.1(1999年6月31日提交的)、美國臨時申請No.60/148,464(1999年8月12日提交的)、美國專利No.5,863,949(1999年1月26日頒布的)、美國專利No.5,861,510(1999年1月19日頒布的)和歐洲專利公開780，386(1997年6月25日公布的)，其所有在此以其全文引用作為參考。在一個實施方案中，畫P抑制劑是不顯示關(guān)節(jié)痛的抑制劑。在另一個實施方案中，所述廳P抑制劑，相對于其他基質(zhì)金屬蛋白酶(即，醒P-1、醒P-3、顧P-4、麗P-5、醒P-6、MMP-7、證-8、,-10、證-ll、醒P-12和MMP-13)，選擇性地抑制醒P-2和/或麗P-9。用于本發(fā)明的醒P抑制劑的一些特定實例是AG-3340、R032-3555、RS13-0830和下列列表中引述的化合物3-[[4-(4-氟-苯氧基)-苯磺酰]-(l-羥基氨甲?；?環(huán)戊基)-氨基]-丙酸；3-外(exo)-3-[4-(4-氟-苯氧基)-苯磺酰氨基]-8-氧雜-二環(huán)[3.2.1]辛烷-3-羧酸羥基酰胺；(2R，3R)1-[4_(2-氯-4-氟-苯曱^基)一苯磺酰]-3-羥基-3-甲基-哌啶-2-羧酸羥基酰胺;4-[4-(4-氟-苯氧基)一苯磺酰氨基]-四氫-吡喃-4-羧酸羥基酰胺；3-[[4-(4-氟-苯氧基)-苯磺酰-基]-(l-羥基氨曱酰基-環(huán)丁基)-氨基]-丙酸；4-[4-(4-氯-苯氧基)-苯磺酰氨基]-四氫-吡喃-4-羧酸羥基酰胺；(R)3-[4-(4-氯-苯氧基)--苯磺酰氨基]-四氫-吡喃-3-羧酸羥基酰胺；(2R，3R)1-[4-(4-氟-2-甲基-苯甲氧基)-苯磺酰]-3-幾基-3-曱基-哌啶-2-羧酸羥基酰胺；3-[[4-(4-氟-苯氧基)-苯磺酰]-(1-羥基氨甲?；?l-甲基-乙基)-氨基]-丙酸；3-[[4-(4-氟-苯氧基)-苯磺酰]-(4-羥基氨甲?；?四氫-吡喃-4-基)-氨基]-丙酸；3-外_3_[4_(4_氯—苯氧基)一苯磺酰氨基]-8-氧雜-二環(huán)[3.2.1]辛烷-3-羧酸羥基酰胺；3-內(nèi)(endo)-3-[4-(4-氟-苯氧基)-苯磺酰氨基]-8-氧雜-二環(huán)[3.2.1]辛烷-3-羧酸羥基酰胺;和(R)3-[4-(4-氟-苯氧基)-苯磺酰氨基]-四氫-呋喃-3-羧酸羥基酰胺；和所述化合物的藥物可接受的鹽、溶劑化物、衍生物或其他制劑。失活PETN基因產(chǎn)物的散發(fā)性突變在大多數(shù)人癌癥中發(fā)生相對頻繁(Yamada爭乂，2001，JCellSci114:2375-82，Hill爭乂，2002，PharmacolTherapeut93:243-51)。PTEN的丟失通過喪失下調(diào)始于IGF-1R和其他來源的刺激信號的能力保持Akt磷酸化狀態(tài)。p53腫瘤抑制劑的狀態(tài)也影響IGF-1R信號轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)的活性。在基態(tài)，由p53通過間接機制抑制IGF-1R的基礎(chǔ)或組成型轉(zhuǎn)錄。Akt的激活提高了mdm2的磷酸化，該磷酸化的mdm2結(jié)合p53腫瘤抑制子并促進其降解(Mayo爭入，2002，TIBS27:462-67)，從而導(dǎo)致增加的IGF-1R表達。當(dāng)通過突變使p53失活時觀察到相似的結(jié)果。當(dāng)在Saos-2(人骨肉瘤細胞系)和RD(橫紋肌肉瘤細胞系)中短暫表達時，野生型p53能夠抑制共轉(zhuǎn)染的IGF-1R啟動子構(gòu)建體的活性，而來源于腫瘤的p53的突變體形式不具有作用。有人提出增加的IGF-1R水平提高對編程性細胞死亡(該死亡與惡性腫瘤細胞中的p53的丟失相關(guān))的抗性(Werner爭乂，2000，CellMolLifeSci57:932-42)。因此在一個實施方案中，本發(fā)明提供了在需要其的受試者中治療癌癥的方法，其包括給所述受試者施用有效量的此處描述的IGF-IR拮抗劑，其中所述癌癥的特征在于具有減少的P53的表達或活性的細胞。也已顯示W(wǎng)T1(威爾姆氏腎腫瘤抑制子l蛋白)結(jié)合和抑制IGF-IR啟動子。因此，在一個實施方案中，本發(fā)明提供了在需要該治療的受87試者中治療癌癥病癥的方法，其包括給所述受試者施用有效量的此處描述的IGF-1R拮抗劑，其中所述癌癥病癥的特征在于減少的WT1的表達或活性。已顯示在確定的培養(yǎng)條件下，正常成纖維細胞的增殖需要IGF和基質(zhì)生長因子(例如PDGF、EGF)的組合作用以增加Ras/Raf/Map激酶和促進細胞周期進入(G0至G1的轉(zhuǎn)換)。來源于IGF-1R(-/-)小鼠的成纖維細胞不對單獨的生長因子或大多數(shù)致癌基因(例如致癌性Ras)作出反應(yīng)，所數(shù)生長因子或致癌基因激活Ras/Raf/Map激酶途徑。因此，在一個實施方案中，本發(fā)明提供了治療需要該治療的受試者的方法，其包括給所述受試者施用此處描述的IGF-1R拮抗劑和把向生長因子和/或生長因子受體的試劑例如生長因子受體酪氨酸激酶例如EGFR、HER-2、bcr-abl、VEGFR、Kit、raf、inT0R、CDK1/2、VEGFR2、PKCP、Mek和/或KDR。耙向這些生長因子和/或受體的分子的實例包括panitumumab(Abgenix,Fremont,CA/Amgen，Thousand0aks，CA)、HERCEPTIN(Genentech，SouthSanFrancisco,CA)、GLEEVEC(Novartis，EastHanover,NJ)、IRESSA(AstraZeneca，Wilmington,DE)、ERBITUXTM(ImClone，NewYork,NY)、AVASTIN,(Genentech)、PTK787(Novartis)、SU11248(Pfizer,NewYork,NY)、TARCEVA(OSIPharmaceuticals,Melville,NY)、43-9006(Bayer,WestHaven,CT)、CCI-779(Wyeth，Madison,NJ)、RA廳l(Novartis)、BMS-387032(Bristol-MyersSquibb，NewYork,NY)、IMC-1C11(ImClone)、LY333531(EliLilly,Indianapolis,IN)、PD184352(Pfizer)、2C4(Ge織tech)和GW2016(GlaxoSmithKline，ResearchTrianglePark,NC)。已由(Novak爭人，2003，/i3Su///z—Z/ieCro『f力〃e/z/"o_/c^7ca/他/!.^73a/7c/esinInsulin—LikeGrowthFactors,LeRoith爭乂,ed.s，LandesBioscience)等人綜述了IGF-1R在血液惡性腫瘤中的作用。通過例如IGF-1R單克隆抗體阻止培養(yǎng)中的轉(zhuǎn)化細胞生長的能力證明IGF-1R在血液惡性腫瘤中的功能作用。已發(fā)現(xiàn)IGF-I增強新分離的人急性骨髓性白血病和急性成淋巴細胞性白血病胚細胞(acutelymphoblasticleukemiablast)的生長。關(guān)于T細胞惡性腫瘤，已顯示IGF-I影響具有前T細胞表型的鼠類淋巴瘤細胞的生長，發(fā)現(xiàn)未成熟和成熟的原代人T語系急性成淋巴細胞性白血病鈿胞表達大量的IGF-1R。因此，在一個實施方案中，本發(fā)明提供了在需要其的受試者中治療血液惡性腫瘤的方法，其包括給所述受試者施用此處描迷的IGF-IR的拮抗劑。在另一個實施方案中，所述惡性腫瘤是急性骨髓性白血病、急性成淋巴細胞性白血病或T細胞惡性腫瘤。在另一個方面，本發(fā)明提供了鑒定更可能從使用本發(fā)明的組合物和/或方法的治療中受益的受試者的方法。這些方法可使護理人員更好地對特定受試者的需要制定治療方案和減少無效或反效果療程的可能性。在一個實施方案中，本發(fā)明提供了確定受試者是否是使用此處描述的組合物或方法進行治療的候選者的方法，所述方法包括確定所述受試者中的靶細胞類型是否表達IGF-1R，其中如果所述靶細胞類型表達IGF-IR,那么所述受試者是療法的候選者。在另一個實施方案中，本發(fā)明包括確定每靶細胞中IGF-IR分子的近似平均數(shù)，其中每細胞102、103、l(T、105或106個IGF-IR表明受試者是療法的候選者。可使用本領(lǐng)域已知的任何技術(shù)，例如通過用IGF-IR結(jié)合分子對包含所述靶細胞類型的細胞的樣品進行染色，然后檢測結(jié)合至樣品的IGF-IR結(jié)合分子的量來確定每靶細胞中IGF-1R分子的近似平均數(shù)目，其中所檢測的IGF-1R結(jié)合分子的量與樣品中IGF-1R分子的平均數(shù)目成比例。在另一個實施方案中，所述方法包括將每靶細胞IGF-IR分子的近似平均數(shù)目與參照標(biāo)準(zhǔn)進行比較，其中如果每靶細胞IGF-IR分子的近似平均數(shù)目比參照標(biāo)準(zhǔn)大時，那么所述受試者更可能從使用本發(fā)明的組合物和/或方法的治療中受益。在另一個實施方案中，所述靶細胞是癌細胞類型。在另一個實施方案中，所述靶細胞類型是結(jié)腸癌細胞類型、乳腺癌細胞類型、NSCLC細胞類型或白血病細胞類型。在另一個實施方案中，通過檢測靶細胞類型或靶細胞類型層(stratum)中的IGF-1和/或IGF-2來鑒定作為治療的候選者的受試者。在另一個實施方案中，所述靶細胞類型是癌細胞類型。在另一個實施方案中，所述靶細胞類型是結(jié)腸癌細胞類型、乳腺癌細胞類型、NSCLC細胞類型或白血病細胞類型。在另一個實施方案中，通過在靶細胞類型中檢測IGF-1R介導(dǎo)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的活性鑒定作為治療的候選者的受試者，其中靶細胞類型中的IGF-1R介導(dǎo)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)表明所述受試者是治療的候選者?？删虸GF-1R依賴性變化而被監(jiān)控的分子的實例顯示于圖10中，所述分子是例如PI3/Akt途徑中的分子，例如IGF-1R、IRS接頭(adapter)、Akt等?？删屠缌姿峄癄顟B(tài)例如磷酸化的增加對這些分子進行監(jiān)控。已充分發(fā)展了識別這些蛋白標(biāo)記的激活形式的磷酸特異性抗體(Phosphospecificantibody)，并且已證明這些試劑對于實驗系統(tǒng)中的免疫印跡檢測是可靠的。也可在例如美容療法中、獸醫(yī)療法中使用本發(fā)明的組合物和/或方法以增加壽命、治療生殖缺陷和治療多種生長相關(guān)性病癥?？乖Y(jié)合蛋白的治療方法和施用此處提供的某些方法包括給受試者施用結(jié)合IGF-1R的抗原結(jié)合蛋白，從而減少在特定病癥中起作用的IGF-1誘導(dǎo)的生物學(xué)反應(yīng)。在特定的實施方案中，本發(fā)明的方法包括例如通過給受試者施用或通過以離體的方法將內(nèi)源IGF-1R與IGF-1R結(jié)合性抗原結(jié)合蛋白接觸。術(shù)語"治療"包括減輕或預(yù)防病癥的至少一種癥狀或其他方面或減輕疾病嚴重度等。對于構(gòu)建可行的治療劑，抗原結(jié)合蛋白不需要實現(xiàn)完全治愈或根除疾病的每一個癥狀或表現(xiàn)。正如在相關(guān)領(lǐng)域內(nèi)所承認的，用作治療劑的藥物可減少給定的疾病狀態(tài)的嚴重度，但不需要消除疾病的每一個表現(xiàn)而被當(dāng)作有用的治療劑。類似地，為了構(gòu)建可行的預(yù)防藥，預(yù)防性施用的療法不必在預(yù)防病癥的發(fā)病中完全有效。僅僅減輕疾病的影響(例如，通過減少其癥狀的數(shù)目或嚴重度，或通過增加另一種療法的有效性，或通過產(chǎn)生另一種有益效果)或減少疾病將在受試者中發(fā)生或惡化的可能性就足夠了。本發(fā)明的一個實施方案涉及方法，所述方法包括以足以誘導(dǎo)高于反映特定病癥的嚴重度的指標(biāo)的基線的持續(xù)的改善的量和時間給患者施用IGF-1R拮抗劑。正如在相關(guān)領(lǐng)域內(nèi)所理解的，以適合于適應(yīng)癥的方式給受試者施用包含本發(fā)明的分子的藥物組合物。可通過任何合適的技術(shù)，包括但不限于胃腸外、局部途徑或通過吸入施用藥物組合物。如果進行注射，可通過關(guān)節(jié)內(nèi)、靜脈內(nèi)、肌內(nèi)、傷口內(nèi)、腹膜內(nèi)或皮下途徑，通過推注或連續(xù)輸注施用藥物組合物。涉及在例如疾病或受傷的位置的局部施用，如透皮給藥和從植入物的持續(xù)釋放。通過吸入進行的遞送包括，例如，鼻或口的吸入，噴霧器的使用，以氣霧劑形式進行的拮抗劑的吸入等。其他選擇包括滴眼劑；口服制劑，包括丸劑、糖漿劑、錠劑或嚼膠(chewinggum);和局部制劑例如洗劑、凝膠劑、噴霧劑和軟骨劑。也涉及以離體方法使用抗原結(jié)合蛋白。例如，可將患者的血液或其他體液離體地與結(jié)合IGF-1R的抗原結(jié)合蛋白接觸?？蓪⒖乖Y(jié)合蛋白結(jié)合至合適的不溶性基質(zhì)或固體支持材料。有利地，以包含一種或多種額外的組分例如生理可接受的載體、賦形劑或稀釋劑的組合物形式施用抗原結(jié)合蛋白。任選地，所述組合物額外地包含一種或多種生理活性劑，例如第二IGF-1受體抑制性物質(zhì)、抗血管生成物質(zhì)、化療物質(zhì)、止痛物質(zhì)等，此處提供了非排他性實例。在各種特定的實施方案中，所述組合物，除了IGF-1R結(jié)合性抗原結(jié)合蛋白外，還包含l、2、3、4、5或6種生理活性劑。在一個實施方案中，藥物組合物包含本發(fā)明的抗原結(jié)合蛋白和一種或多種物質(zhì)，所述物質(zhì)選自緩沖劑、抗氧化劑例如抗壞血酸、低分子量多肽(例如具有少于IO個氨基酸的多肽)、蛋白、氨基酸、糖例如葡萄糖、蔗糖或糊精、螯合劑例如EDTA、谷胱甘肽、穩(wěn)定劑和賦形劑。中性緩沖鹽或與同種的血清白蛋白混合的鹽是合適的稀釋劑的實例。根據(jù)合適的工業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，也可加入防腐劑例如苯曱醇?？墒褂煤线m的賦形劑溶液(例如，蔗糖)作為稀釋劑將所述組合物配制為凍干劑(lyophilizate)。合適的組分在使用的劑量和濃度上對接受者是無害的?？捎糜谒幬镏苿┑慕M分的其他實例示于Remington'sPharmaceuticalSciences,第16版(1980)和第20版(2000),MackPublishingCompany,Easton，PA。由醫(yī)生使用的試劑盒包括本發(fā)明的IGF-1受體抑制性物質(zhì)和用于治療此處描述的任何病癥的標(biāo)簽或其他說明書。在一個實施方案中，所述試劑盒包括一種或多種IGF-1R結(jié)合性抗原結(jié)合蛋白的無菌制劑，該制劑可以以上面公開的組合物的形式存在，且可存在于一個或多個藥瓶中。施用的劑量和頻率可根據(jù)這些因素如給藥途徑、使用的特定抗原結(jié)合蛋白、被治療的疾病的性質(zhì)和嚴重度、所述疾病是急性的還是慢性的以及受試者的身材大小和一般身體狀況而變化?？赏ㄟ^相關(guān)領(lǐng)域內(nèi)例如在可包括劑量遞增研究的臨床試驗中已知的方法確定合適的劑可在例如一段時間內(nèi)按一定間隔例如一次或多次地施用本發(fā)明的IGF-1受體抑制性物質(zhì)。在特定的實施方案，在至少一個月或更長的時間例如1、2或3個月或甚至無限期的時期內(nèi)施用抗原結(jié)合蛋白。為了治療慢性病癥，長期治療通常是最有效的。然而，為了治療急性病癥，更短的時期例如1至6周的施用可以是足夠的。一般地，施用抗原結(jié)合蛋白直至患者表現(xiàn)高于所選指標(biāo)的基線水平的醫(yī)療相關(guān)程度的改善。本發(fā)明的特定實施方案包括以從每天每Kg受試者體重大約lng("lng/kg/天")的抗原結(jié)合蛋白至大約10mg/kg/天，更優(yōu)選地從大約500ng/kg/天至大約5mg/kg/天，最優(yōu)選地從大約5pg/kg/天至大約2mg/kg/天的劑量給受試者施用抗原結(jié)合蛋白。在其他實施方案中，每周一次、每周每次或每周三次或多次給成人施用抗原結(jié)合蛋白以治療IGF-l和/或IGF-2介導(dǎo)的疾病、病狀或病癥，例如此處公開的醫(yī)學(xué)病癥。如果進行注射，每成人劑量的抗原結(jié)合蛋白的有效量可在l-20mg/m2的范圍內(nèi)變動，優(yōu)選地為大約5-12mg/m2?？蛇x擇地，可施用平臺劑量(Hatdose);所述量可在5-100mg/劑的范圍內(nèi)變動。平臺劑量的一個范圍是每劑大約20-30mg。在本發(fā)明的一個實施方案中，通過注射重復(fù)施用25mg/劑的平臺劑量。如果使用除了注射以外的施用途徑，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)的醫(yī)療實踐適當(dāng)?shù)卣{(diào)整劑量。治療方案的一個實例包括在至少三周的時期內(nèi)每周一至三次注射大約20-30mg的抗原結(jié)合蛋白的劑量，雖然更長時期的治療可能是誘導(dǎo)想要的改善程度所必需的。對于兒科受試者(年齡4-17歲)，一個示例性合適的方案包扭皮下注射0.4mg/kg，至多25mg的抗原結(jié)合蛋白的最大劑量，每周給藥2或3次。此處提供的方法的特定實施方案包括每周一次或兩次皮下注射從0.5mg至10mg，優(yōu)選地從3至5mg的抗原結(jié)合蛋白。另一個實施方案涉及每周一次的3或更多mg的抗原結(jié)合蛋白的肺部給藥(例如，通過噴霧器)。此處提供的治療方案的實例包括每周一次以1.5至3mg的劑量皮下注射抗原結(jié)合蛋白以治療其中IGF-1R信號轉(zhuǎn)導(dǎo)起作用的病癥。此處提供了這些病癥的實例，包括例如癌癥、肢端肥大癥和其他過度生長病癥、糖尿病、肥胖癥、黃斑變性和衰老。持續(xù)進行抗原結(jié)合蛋白每周一次的施用直至獲得想要的結(jié)果，例如受試者的癥狀消退。當(dāng)需要時可繼續(xù)進行治療，或可選擇地，可施用維持劑量。此處提供的治療方案的其他實例包括皮下或靜脈內(nèi)施用每千克受試者體重l、3、5、6、7、8、9、10、11、12、15或20毫克(mg/kg)本發(fā)明的IGF-1R抑制劑的劑量?？梢淮螌⑺鰟┝拷o受試者施用，或以一定的間隔不止一次地例如每天一次、每周三次、每周兩次、每周一次、每月三次、每月二次、每月一次、每二月一次、每三月一次、每六月一次或每年一次地給受試者施用。可在治療過程中改變或變化治療的持續(xù)時間和對劑量和/或治療頻率的任何改變、以滿足受試者的特定需要。在另一個實施方案中，以足以誘導(dǎo)至少一個指標(biāo)的改善，優(yōu)選地持續(xù)改善的量和時間施用抗原結(jié)合蛋白，所述指標(biāo)反映被治療的病癥的嚴重度?？稍u估反映受試者的病癥、疾病或病狀的各種指標(biāo)以確定治療的量和時間是否充足。這些指標(biāo)包括，例如，臨床上承認的疾病嚴重度、癥狀或所述病癥的表現(xiàn)的指標(biāo)。在一個實施方案中，如果受試者在至少兩個相隔2至4周的時期展示改善則所述改善被認為是持續(xù)的。一般由可基于征候(sign)、癥狀、活組織檢查或其他檢測結(jié)果作出該確定和也可使用發(fā)給受試者的問巻(例如經(jīng)設(shè)計用于給定的疾病的生活質(zhì)量調(diào)查表)的醫(yī)生確定改善的程度。提高的IGF-1和/或IGF-2水平與許多病癥相關(guān)，所述病癥包括例如癌癥(例如，肺、前列腺、乳腺和結(jié)腸癌)和肢端肥大癥以及其他過度生長病癥(例如，體格高的兒童(constitutionallytallchildren))。可篩查具有給定的病癥的受試者以鑒定具有提高的IGF-1和/或IGF-2水平的個體，從而鑒定可從使用IGF-1R結(jié)合性抗原結(jié)合蛋白的治療中獲得最大益處的受試者。因此，此處提供的治療任選地包括測量受試者的IGF-1和/或IGF-2水平的笫一步驟?？山o受試者施用抗原結(jié)合蛋白，在所迷受試者中，IGF-l和/或IGF-2的水平被提高至高于正常水平。在一個實施方案中，本發(fā)明提供了治療過度生長病癥(例如，肢端肥大癥)的方法，所述方法包括給需要其的受試者施用本發(fā)明的抗原結(jié)合蛋白和培維索孟?？稍谑褂每乖Y(jié)合蛋白的治療之前、期間和/或之后監(jiān)控受試者的IGF-l和/或IGF-2水平以檢測其水平的變化(如果有的話)。對于一些病癥，提高的IGF-1和/或IGF-2水平的發(fā)生率可隨這些因素如疾病的階段或疾病的特定形式而變化?？墒褂靡阎募夹g(shù)測量例如受試者血清中的IGF-1和/或IGF-2水平?？墒褂萌魏魏线m的技術(shù)例如ELISA測量血液樣品中的IGF-1和/或IGF-2水平。本發(fā)明的方法和組合物的特定實施方案包括使用抗原結(jié)合蛋白和一種或多種額外的IGF-1R拮抗劑，例如兩種或更多種本發(fā)明的抗原結(jié)合蛋白或本發(fā)明的抗原結(jié)合蛋白和一種或多種其他IGF-1R拮抗劑。在其他實施方案中，單獨地或與用于治療患者所遭受的病癥的其他藥物一起施用抗原結(jié)合蛋白。這些藥物的實例包括蛋白質(zhì)和非蛋白質(zhì)藥物。當(dāng)共施用多種治療劑時，相應(yīng)地調(diào)整劑量，如在相關(guān)領(lǐng)域內(nèi)所承認的。"共施用"和組合療法不限于同時施用，其還包括這樣的治療方案，在所述治療方案中在包括給患者至少施用一種其他治療劑的治療過程中至少施用一次抗原結(jié)合蛋白?？膳c抗原結(jié)合蛋白一起共施用的其他試劑的實例是根據(jù)被治療的特定病癥選擇的其他抗原結(jié)合蛋白或治療性多肽?？蛇x擇地，用于治療上述特定病癥中的一種的非蛋白質(zhì)藥物可與IGF-1R拮抗劑共施用。組合療法在另一方面，本發(fā)明提供了用IGF-1R抑制性抗原結(jié)合蛋白和一種或多種其他療法治療受試者的方法。在一個實施方案中，這樣的組合療法通過例如攻擊肺瘤的多個位置或分子靶獲得協(xié)同或累加效應(yīng)?？膳c本發(fā)明一起使用的組合療法類型包括抑制或激活(適當(dāng)時)單個疾病相關(guān)性途徑中的多個節(jié)點、靶細胞中的多個途徑和靶組織內(nèi)(例如，腫瘤內(nèi))的多種細胞類型。例如，本發(fā)明的IGF-1R抑制劑可與抑制IGF-1、促進細胞編程性死亡、抑制血管發(fā)生或抑制巨噬細胞的療法組合。在另一個實施方案中，當(dāng)單獨使用時不能引起治療上想要的效果的乾向藥物可用于例如使癌細胞致敏或提高其他藥物的治療效果。在另一個實施方案中，本發(fā)明的IGF-1R抑制劑與細胞毒性藥物或誘導(dǎo)編程性細胞死亡的其他靶向藥物一起使用。在另一個實施方案中，將IGF-1R抑制劑與抑制不同的乾(該乾參與細胞生存)(例如，PKB、mT0R)、不同的受體酪氨酸激酶(辨如，BrbBl、ErbB2、c-Met、c-kit)或不同的細胞類型(例如，KDR抑制劑、c-fms)的一種或多種藥物一起使用。在另一個實施方案中，向現(xiàn)有的用于特定病癥的護理標(biāo)準(zhǔn)中加入本發(fā)明的IGF-1R抑制劑。治療劑的實例包括，但不限于，吉西他濱、泰素、泰索帝和CPT-ll。在另一個實施方案中，組合治療方法包括給受試者施用2、3、4、5、6或更多種此處描迷的IGF-1R激動劑或拮抗劑。在另一個實施方案中，所述方法包括給受試者施用一起抑制或激活(直接或間接地)IGF-1R介導(dǎo)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的兩種或更多種療法。這些方法的實例包括使用兩種或更多種IGF-1R抑制性抗原結(jié)合蛋白的組合、IGF-1R抑制性抗原結(jié)合蛋白和一種或多種其他IGF-1、IGF-2、和/或IGF-1R激動劑或拮抗劑(例如，IGF-l和/或IGF-2結(jié)合多肽、IGF-1R結(jié)合多肽、IGF-1和/或IGF-2衍生物、抗IGF-1和/或IGF-2抗體、抗IGF-1、IGF-2和/或IGF-1R的反義核酸或結(jié)合IGF-1、IGF-2和/或IGF-1R多肽或核酸的其他分子)的組合或IGF-1R抑制性抗原結(jié)合蛋白和一種或多種其他療法(例如，手術(shù)、超聲、放射療法、化學(xué)療法或使用其它抗癌劑的療法)，例如美國專利5,473,054(1995年12月5日頒布的)、6,051，593(2000年4月18日頒布的)、6，084，085(2000年7月4日頒布的)、6，506，763(2003年1月14日頒布的)、美國專利申請公開號03/0092631(2003年5月15日公布的)、03/0165502(2003年9月4日公布的)、03/0235582(2003年12月25日公布的)、04/0886503(2004年5月6日公布的)、05/0272637(2005年12月8日公布的)、PCT公開系列號WO99/60023(1999年11月25日公布的)、WO02/053596(2002年7月11日公布的)、WO02/072780(2002年9月19日公布的)、WO03/027246(2003年3月3日公布的)、WO03/020698(2003年3月13日公布的)、WO03/059951(2003年7月24日公布的)、WO03/100008(2003年12月4日公布的)、WO03/106621(2003年12月24日公布的)、WO04/071529(2004年8月26日/>布的)、WO04/083248(2004年9月30日公布的)、WO04/087756(2004年10月14日公布的)、WO05/112969(2005年12月1日公布的)、Kull爭入，1983,.JBiolChem258:6561-66，F(xiàn)lier爭入，1986，ProcNatlAcadSciUSA83:664-668，Conover爭人，1987，JCellPhysiol〗:33:560-66，Rohlik爭入，1987，BiochemBiophysResCo咖149:276-81，Arteaga等人，1989，JClinicalInvestigation$4:1418-23，Arteaga等人，1989，CancerRes49:6237-41,Gansler等人，1989，AmericanJPathol135:961-66，Gustafson等人，1990，JBiolChem265:18663-67，Steele-Perkins等人，1990，BiochemBiophysResCoram171:1244-51，Cullen等人，1992，MolEndocrinol6:91-100，Soos等人，1992，JBiolChem267:12955-63，Xiong等人，1992，ProcNatlAcadSciUSA89:5356-60，Br醒er等人，1993，EuroJCancer29A:562-69，F(xiàn)urlanetto等人，1993，CancerRes53:2522-26，Li等人，1993，BiochemBiophysResCoram196:92-98，Kalebic等人，1994，CancerRes54:5531-34，Lahm等人，1994，IntlJCancer58:452—59，Zia等人，1996，JCel1BiochemSupp24:269-75:Jansson等人，1997，JBiolChem272:8189-97，Scotlandi等人，1998，CancerRes58:4127-31，Logie等人，1999，Li等人,2000，CancerImmunolImmunotherapy49:243—52，JMolEndocrinol23:23-32，DeMeyts等人，2002，NatureReviewsl:769-83，Hailey等人，2002，MolCancerTherapeutics1:1349-53，Maloney等人，2003，CancerResearch63:5073-83，Burtrum等人，2003，CancerResearch63:8912-21，和Karav"aki等人，2004，Hormones3:27-36，(各自在此以其全文引用作為參考)中描述的療法，可將所述療法用于本發(fā)明的方法和組合物。此外，一種或多種抗IGF-1R抗體或抗體衍生物可與一種或多種分子或其他療法一起使用，其中所述其他分子和/或療法不直接結(jié)合或影響IGF-1R、IGF-1或IGF-2，但其組合對于治療或預(yù)防病癥，例如癌癥或過度生長病癥(例如肢端肥大癥)是有效的。在一個實施方案中，一種或多種分子和/或療法治療或預(yù)防在治療過程中由一種或多種其他分子或療法引起的病癥，例如惡心、疲勞、殼發(fā)癥、惡病質(zhì)、失眠癥等。在當(dāng)使用分子和/或其他療法的組合時的每一種情況下，可以任何順序，在任何長度的有效時期內(nèi)施用例如同時、連續(xù)或交替地施用個體分子和/或療法。在一個實施方案中，治療的方法包括在開始第二療程前用一種分子或其他療法完成第一療程。笫一療程結(jié)束和第二療程開始之間的時間長度可以是允許總的治療過程是有效的任何時間長度例如數(shù)秒、數(shù)分鐘、數(shù)小時、數(shù)天、數(shù)周、數(shù)月或甚至數(shù)年。在另一個實施方案中，所述方法包括施用一種或多種此處描述的IGF-1R拮抗劑和一種或多種其他療法(例如，治療性療法或姑息療法)，例如抗癌療法(例如手術(shù)、超聲、放射療法、化學(xué)療法或使用其它抗癌劑的療法)。當(dāng)所述方法包括給受試者施用不止一種療法時，要理解施用的順序、時間安排、次數(shù)、濃度和體積只受到醫(yī)療要求和療法的局限性限制，即可將兩種療法例如同時、連續(xù)、交替或按照任何其他的方案給受試者施用?？膳c此處描述的IGF-1R拮抗劑一起施用的試劑的實例包括，但不限于，嗜中性白細胞增強劑(neutrophil-boostingagent)、伊立替康(irinothecan)、SN-38、吉西他濱、herstatin或IGF-1R結(jié)合性herstatin衍生物(例如美國專利申請05/0272637中所描述的)、AVASTIN(Genentech，SouthSanFrancisco,CA)、HERCEPTIN(Genentech)、RITUXAN(Ge織tech)、ARIMIDEX⑧(AstraZeneca，Wilmington,DE)、IRESSA(AstraZeneca)、BEXXAR(Corixa，Seattle,WA)、ZEVALIN(BiogenIdec，Cambridge:MA)、ERBITUX(ImcloneSystemsInc.，NewYork,NY)、GEMZAR(EliLillyandCo.，Indianapolis,IN)、CAMPT0SAR(Pfizer,NewYork,NY)、GLEEVEC(Novartis)、SU-11248(Pfizer)、BMS-354825(Bristol—MyersSquibb)、panitumumab(Abgenix，F(xiàn)remont,CA/AmgenInc.，Thousand0aks，CA)和denosumab(AmgenInc.，ThousandOaks,CA)。下列實施例，實際的和預(yù)期的(prophetic),都是為了舉例說明本發(fā)明的特定實施方案或特征而提供的且不限定其范圍。實施例1:抗體的制備本實施例演示了制備識別IGF-1受體的抗體的方法。IGF-1受體多肽可在通過常規(guī)方法產(chǎn)生單克隆抗體中用作免疫原。人們認識到，備種形式的多肽例如全長蛋白、其片段、其融合蛋白例如Fc融合蛋白、在細胞表面表達重組蛋白的細胞等可用作免疫原。為概述這樣的方法的實例，將在完全弗氏佐劑中乳化的IGF-IR免疫原以10-lOOm范圍內(nèi)變動的量皮下注射入Lewis大鼠。3周后，用在不完全弗氏佐劑中乳化的額外免疫原加強免疫的動物，此后每3周加強一次。通過眼球后放血(retro-orbitalbleeding)或尾尖切除周期性地采集血液樣品以進行點印跡測定法、ELISA(酶聯(lián)免疫吸附測定法)或125I-IGF-1或mI-IGF-2對表達IGF-1R的細胞的提取物的結(jié)合的抑制。在適合的抗體滴度檢測之后，給陽性動物進行在鹽水中配制的抗原的最后靜脈內(nèi)注射。3至4天后，殺死動物，獲取脾細胞，并將其融合至鼠類骨髓瘤細胞系A(chǔ)G8653。將所得的雜交瘤細胞系涂板在多個微量滴定板的HAT選擇培養(yǎng)基(次黃噤呤、氨基蝶呤和胸苷)中以抑制非融合細胞、骨髓瘤雜交體和脾細胞雜交體的增殖。就與IGF-1R的反應(yīng)性篩選所產(chǎn)生的雜交瘤克隆。雜交瘤上清液的初步篩選使用部分純化的125I-IGF-1受體的抗體捕獲和結(jié)合。通過改進的抗體捕獲法檢測在該篩選方法中呈陽性的雜交瘤以檢測正在產(chǎn)生阻斷性抗體的雜交瘤細胞系。從而檢測分泌能夠抑制125I-IGF-1對表達IGF-1R的細胞的結(jié)合的單克隆抗體的雜交瘤。然后可將這些雜交瘤注射入棵小鼠的腹腔內(nèi)以產(chǎn)生包含高濃度Olmg/ml)的抗IGF-1R單克隆抗體的腹水。可通過硫酸銨沉淀，然后進行凝膠排阻層析和/或基于抗體對G蛋白的結(jié)合的親和層析純化所得單克隆抗體?？墒褂妙愃频姆椒ㄔ谵D(zhuǎn)基因小鼠中產(chǎn)生人抗體。參見，例如，Chen等人，1993，lnternat.Immunol.5:647-56;Chen等人，1993，EMBOJ.12:821-30;Choi等人，1993，NatureGenetics4:117-23;Fishwild等人，1996，NatureBiotech.14:845-51;Harding等人，1995，AnnaIsNewYorkAcad.Sci.;Lonberg等人，1994，Nature368:856-59;Lonberg，1994,HandbookExper.1Pharmacol.113:49-101;Lonberg等人,1995，InternalRev.Immunol.13:65-93;Morrison,1994，Nature368:812-13;Neuberger，1996，NatureBiotech.14:826;Taylor等人，1992，Nuc.AcidsRes.20:6287-95;Taylor等人，1994，lnternat.Immunol.6:579-91;Tomizuka等人，1997，NatureGenetics16:133-43;Tomizuka等人，2000,Proc.Nat.Acad.Sci.USA97:722-27;Tuaillon等人，1993，Proc.Nat.Acad.Sci.USA90:3720-24;Tuaillon等人，1994，J.Immunol.152:2912-20;Russel等人，2000，InfectionandImmunityApri12000:1820—26;Gallo等人，2000，Eur.J.Immunol.30:534-40;Davis等人，1999，CancerMetastasisRev.18:421-25;Green,1999，J.Immunol.Methods231:11-23;Jakobovits,1998，AdvancedDrugDeliveryRev.31:33-42;Green等人，1998，J.Exp.Med.188:483-95;Jakobovits,1998，Exp.Opin.Invest.Drugs7:607-14;Tsuda等人，1997，Genomics42:413-21;Mendez等人，1997，NatureGenetics15:146-56;Jakobovits,1996，Weir，sHandbookofExperimentalImmunology,TheIntegratedImmuneSystem第IV巻，194.1-194.7;Mendez等人，1995，Genomics26:294-307;Jakobovits,1994，CurrentBiol.4:761-63;Arbones，1994，Immunity1:247-60;Green等人，1994，NatureGenetics7:13-21;Jakobovits等人，1993，Nature362:255-58;Jakobovits等人，1993，.Proc.Nat.Acad.Sci.USA90:2551-55.實施例2:人IGF-lR(ECD)-C3-muIgGl的分離本實施例提供了制備用于產(chǎn)生抗體的IGF-1R的可溶性片段的方法。pDSRcx:huIGF-lR(ECD)-C3-muIgGlFc的克隆引物2830-36:5，AGCAAGCTTCCACCATGAAGTCTGGCTCCGGAGGAGG3，鄧QIDNO:256)和2830-38:5，ATTTGTCGACTTCGTCCAGATGGATGAAGTTTTCAT3'，SEQIDNO:257)用于擴增人IGF-1R細胞外結(jié)構(gòu)域(1-906)cDNA序列。引物包括起始密碼子前的Kozak翻譯起始序列(下劃線標(biāo)示的)、用于隨后亞克隆的限制性位點和caspace-3位點(緊靠細胞外結(jié)構(gòu)域C末端插入該位點)。在下列條件下在PerkinElmer2400(PerkinElmer,Torrance,CA)上進行PCR:1個循環(huán)在95匸下進行2分鐘；23個循環(huán)在951C下進行30秒，58.5^C下進行30秒和在72t;進行3分鐘；以及l(fā)個循環(huán)在72n下進行10分鐘。終反應(yīng)條件為IXpfuTURBO緩沖液(Stratagene，LaJolla，CA)，200pMdNTPs，2yM各引物，5UpfuTURBO(Stratagene)和lng模板DNA。按照廠商說明書使用<table>tableseeoriginaldocumentpage101</column></row><table>bcgcccaac8cctacaggtttgagggctggcgctgtgtggaccgtgacttctgcgccaacatcctcagcgccgagagcagcgactccgaggggtttgtgatccacgacggcgagtgcatgcaggagtgcccctcgggcttcatccgcaacggcagccagagcatgtactgcatcccttgtgaaggtccttgcccgaaggtctgtgaggaagaaaagaaaacaaagaccattgattctgttacttctgctcagatgctccaaggatgcaccatcttcaagggcaatttgctcattaacatccgacgggggaataacattgcttcagagctggagaacttcatggggctcatcgaggtggtgacgggctacgtgaagatccgccattctcatgccttggtctccttgtccttcctaaaaaaccttcgcctcatcctaggagaggagcagctagaagggaattactccttctacgtcctcgacaaccagaacttgcagcaactgtgggactgggaccaccgcaacctgacc"caBagcagggaaB"gtactttgctttcaatcccaaattatgtgtttccgaaatttaccgcatggaggaagtgacggggactaaagggcgccaaagcaaaggggacataaacaccaggaacaacggggagagagcctcctgtgaaagtgacgtcctgcaitttcacctccaccaccacgtcgaagaatcgcatcatcataacctggcaccggtaccggccccctgactacagggatctcatcagcttcaccgtttactacaaggaagcacccttUagaatgtcacagagtatgatgggcaggatgcctgcggctccaacagctggaacatggtggacgtggacctcccgcccaacaaggacgtggagcccggcatcttaictacatgggctgaagccctggactcagtacgccgtttacgtcaaggctgtgaccctcaccBtggtggagaacgaccatatccgtggggccaagagtgagatcttgtacattcgcaccaatgcttcagttccttccattcccttggacgttctttcagcatcgaactcctcttctcagttaatcgtgaagtggaaccctccctctctgcccaacggcaacctgagtUctacattgtgcgctggcagcggcagcctcaggacggctacctttaccggcacaattactgctccaaagacaaaatccccatcaggaagtatgccgacggcaccatcgacattgaggaggtcacagagaaccccaagactgaggtgtgtggtggggagaaagggccttgctgcgcctgccccaaaactgaagccgagaagcaggccgagaaggaggaggctgaataccgcaaagtctttgagaatttcctgcacaactccatcttcgtgcccagacctgaaaggaagcggagagatgtcatgcaagtggccaacaccaccatgtccagccgaagcaggaacaccacggccgcagacacctacaacatcactgacccggaagagctggagacagagtaccctttctttgagagcagagtggaUacaaggagagaactgtcatttctaaccttcggcctttcacattgtaccgcatcgatatccacagctgcaaccacgaggctgagaagctgggctgcagcgcctccaacttcgtctttgcaaggactatgcccgcagaaggagcagatgacattcctgggccagtgacctgggagccaaggcctgaaaactccatctttttaaagtggccggaacctgagaatcccaatggattgattctaatgtatgaaataaaatacggatcacaagttgaggatcagcgagaatgtgtgtccagacaggaatacaggaagtatggaggggccaagcUaaccggctaaacccggggaactacacagcccggattcaggccacatctctctctgggaatgggtcgtggacagatcctgtgttcttcUtgtccaggccaaaacaggatatgaaaacttcatccatctggacgaagtcgacggttgtaagccttgcatatgtacagtcccagaagtatcatctgtcttcatcttccccccaaagcccaaggatgtgctcaccattactctgactcctaaggtcacgtgtgttgtggtagacatcagcaaggatgatcccgaggtccagttcagctggtttgtagatgatgtggaggtgcacacagctcagacgcaaccccgggaggagcagttcaacagcactttccgctcagtcagtgaacttcccBtcatgcaccaggactggctcaatggcaaggagttcaaatgcagggtaaacagtgcagctttccctgcccccatcgagaaaaccatctccaaaaccaaaggcagaccgaaggctccacaggtgUcaccattccacctcccaaggagcagatggccaaggataaagtcagtctgacctgcatgaUacagacttcttccctgaagacattactgtggagtggcagtggaatgggcagccagcggagaactacaagaacactcagcccatcBtggacac<table>tableseeoriginaldocumentpage104</tablehuIGF-1R(ECD)-C3-muIgGlFc的表達使用LT1脂轉(zhuǎn)染劑(PanVeraCorp.,Madison,WI)將15微克的線性化表達載體pDSRcc:huIGFlR(ECD)-C3-muIgGlFc轉(zhuǎn)染入AM-1/DCH0d-細胞，并在允許蛋白表達和分泌入細胞培養(yǎng)基的條件下培養(yǎng)細胞。在DHFR選擇培養(yǎng)基(補充有10%透析的胎牛血清、lx青霉素-鏈霉素(Invitrogen)的Dulbecco改良Eagles培養(yǎng)基(Invitrogen))中進行10-14天后選擇24個集落，通過western印跡法估量表達水平。為進行該測定法，向單孔中的匯合細胞(所述細胞培養(yǎng)在24孔板(Falcon)中)加入0.5ml無血清培養(yǎng)基。在48小時后回收條件化培養(yǎng)基。將進行western印跡分析的樣品在10%的Tris-甘氨酸凝膠(Novex)中進行跑膠，然后使用小型電轉(zhuǎn)移印跡槽(MiniTrans-Blotcell)(Biorad)將其吸印在0.45mm的硝酸纖維素膜(Invitrogen)上。用綴合辣根過氧化物酶(Pierce)的兔抗小鼠IgGFc抗體溫育被印跡的膜。將表達最高水平的IGF-1R(ECD)-C3-mulgGlFc的克隆在DHFR選擇培養(yǎng)基中進行擴增，將2x107個細胞接種入50個滾瓶(Corning)中，各瓶裝有250ml高葡萄糖DMEM(Invitrogen)、10%透析的FBS(Invitrogen)、lx谷氨酰胺(Invitrogen)、lx非必需氨基酸(Invitrogen)、lx丙酮酸鈉(Invitrogen)。在給滾瓶加蓋前向培養(yǎng)基中充入10%0)2/平衡氣體，進行5秒鐘。將滾瓶在37X:下在滾瓶架(rollerrack)上以0.75rpm旋轉(zhuǎn)保持。當(dāng)細胞達到大約85-90%的匯合時(在培養(yǎng)大約5-6天后)，棄去培養(yǎng)基，用100mlPBS清洗細胞，然后加入200ml生產(chǎn)培養(yǎng)基(Wy4DMEM(Invitrogen)/50%F12(Invitrogen)、lx谷氨酰胺(Invitrogen)、lx非必需氨基酸(Invitrogen)、lx丙酮酸鈉(Invitrogen)、1.5%DMS0(Sigma))。收獲條件化培養(yǎng)基并以一周的間隔更換培養(yǎng)基。將獲得的30升條件化培養(yǎng)基通過0.45mm醋酸纖維素過濾器(Corning,Acton，MA)過濾。huIGF-1R(ECD)-C3-muIgGlFc的純化4吏用纏繞式筒(spiral-woundcartridge)(分子量截斷值=10kDa)濃縮從條件化培養(yǎng)基所得的過濾液，然后用3MKCl，1M甘氨酸，pH9.0以1:l稀釋，使最終的鹽濃度達到1.5MKC1，0.5M甘氨酸，pH9.0。將該樣品用于重組A蛋白-瓊脂糖柱(AmershamPharmaciaBiotech,Uppsala,Sweden),所述柱子已在1.5MKC1、0.5M甘氨酸，pH9.0中平衡。用40倍柱體積的相同緩沖液洗滌柱子，然后用20倍柱體積的0.1M甘氨酸HC1，pH2.8進行洗脫。收集5mL級分并用lmL1MTris-HCl，pH7.5立即中和。通過SDS-PAGE鑒定包含huIGFlR(ECD)-C3-muIgGFc的級分，合并所述級分并對磷酸緩沖鹽溶液透析。產(chǎn)量為2.4mg/L的條件化培養(yǎng)基。檢測到的主要蛋白種類為成熟的oc和P鏈以及鼠類Fc，基于其提高的和不均勻的分子量，其各自表現(xiàn)出被正確地糖基化。未加工的IGF-1R(ECD)以及糖基化但未被蛋白水解切割的IGF-1R(CED)也存在于制劑中。非還原條件下變成更高分子量的帶表明二疏鍵連接oc和p鏈。終產(chǎn)物的氨基末端的測序表明60%的蛋白在IGF-lR(ECD)的a和P鏈之間被正確加工，而40%仍保持未加工。實施例3:人INSR(ECD)-muIgGl的分離本實施例提供了克隆和表達人胰島素受體的可溶性片段的方法。pDSRa:huINSR(ECD)-muIgGlFc的克隆引物2830-40:5，AGCAAGCTTCCACCATGGGCACCGGGGGCCGG3，SEQIDNO:259(下劃線標(biāo)示i7/7dIII位點)和2830-41:5，ATTTGTCGACTTTTGCAATATTTGACGGGACGTCTAA3'SEQIDNO:260(下劃線標(biāo)示^/I位點)用于擴增人INSR細胞外結(jié)構(gòu)域(1-929)，所述INSR細胞外結(jié)構(gòu)域來自編碼B型INSR剪接變體的INSR親本質(zhì)粒(Ullrich等人，1985，Nature313:756-61;Ebina等人，1985,Cell40:747-58)。所述引物包括起始密碼子前的Kozak翻譯起始序列和用于隨后亞克隆的限制性位點。在下列條件下在PerkinElmer2400上進行PCR:l個循環(huán)在95。C下進行2分鐘，32個循環(huán)在95°C下進行30秒，在58.5°C下進行30秒，和在72。C下進行3分鐘，和l個循環(huán)在72°C下進行10分鐘。終反應(yīng)條件為1Xp/wTURBO⑧緩沖液、200nMdNTP、2^iM各引物、5Up/*"TURBO(Stratagene)和10ng模板DNA。按照廠商說明書使用NUCLEOSPI脾柱(BDBiosciencesClontech，PaloAlto，CA)純化PCR產(chǎn)物，用〃/;dIII和I(Roche)降解所述PCR產(chǎn)物，在連接入"'/2dI降解的pDSRa-muIgGl之前用凝膠對其進行純化。通過DNA測序確認插入物的完整性。INSR-muFc的蛋白序列顯示于圖11中。最終的表達載體描述于表2中。表2質(zhì)粒堿基對編號<table>tableseeoriginaldocumentpage107</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage108</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage109</column></row><table>aaccaaaggcagaccgaaggctccacaggtgtacaccattccacctcccaaggagcagatggccaaggataaagtcagtctgacctgcatgataacagacttcttccctgaagacattactgtggagtggcagtggaatgggcagccagcggagaactacaagaacactcagcccatcatggacacagatggctcttacttcgtctacagcaagctcaatgtgcaga3gagcaactgggaggcaggaaaUctttCBCCtgctctgtgttacatgagggcctgcacaaccaccatactgagaagagcctctcccactctcctggtaaa(SEQIDNO:261)3557至4441來自牛垂體糖蛋白激素(a-FSH)的a亞基的轉(zhuǎn)錄終止/多腺苷酸化信號(Goodwin等人，1983，h油b.11:6873-82;Genbank目錄號X00004)4446至5586包含內(nèi)源小鼠DHFR啟動子、cDNA編碼序列和DHFR轉(zhuǎn)錄終止/多腺苷酸化信號的小鼠二氫葉酸還原酶(DHFR)小基因(Gasser等人，1982，戶艦^C2'.K&丄2^:6522—6;Nunberg等人，1980，Ce/7ii:355-64;Setzer等人，1982，/.A/o人C力e邁.257:5143-7;McGrogan等人，1985，/."'OA260:2307—14)5594至6241包含氨芐青霉素抗性標(biāo)記基因和大腸桿菌中的質(zhì)粒的復(fù)制起始點的PBR322序列(Genbank目錄號J01749)7513至7856SV40早期啟動子、增強子和復(fù)制起始點(^e6e爭入，1988，艇Ce//"2.o入圣466-72，Genbank目錄號J02400)7863至8119來自HTLV-1LTR結(jié)構(gòu)域的翻譯增強元件(Seiki等人，1983，戶roc.Sc/."5".A80:3618-22，Genbank目錄號J02029)8163至8259來自SV4016S，19S剪接供體/受體信號的內(nèi)含子(0kayama和Berg,1983.#o/.Ce//S/o/.280—9，Genbank目錄號J02400)huINSR(ECD)-C3-muIgGlFc的表達使用FUGENE6脂轉(zhuǎn)染劑(RocheDiagnosticsCorp.,Indianapolis,IN)用15pm線性化的表達載體pDSRa:huINSR(ECD)-mulgGlFc轉(zhuǎn)染AM-l/DCH0d細胞，然后在允許蛋白表達和分泌入細胞培養(yǎng)基的條件下培養(yǎng)細胞。如上所述選擇和分析集落。huINSR(ECD)-C3-muIgGlFc的純化使用纏繞式筒(spiral-woundcartridge)(分子量截斷值-10kDa)濃縮包含huINSR(ECD)-muIgGFc的過濾的條件化培養(yǎng)基17倍，然后用3MKC1，1M甘氨酸，pH9.0以1:1稀釋，使最終的鹽濃度達到1.5MKC1，0.5M甘氨酸，pH9.0。將該樣品用于已在1.5MKC1，0.5M甘氨酸，pH9.0中平衡的重組A蛋-瓊脂糖柱(Pharmacia)。用40倍柱體積的相同緩沖液洗滌柱子，然后用20倍柱體積的0.1M甘氨酸HC1，pH2.8進行洗脫。收集5mL級分并用lmL1MTris-HCl，pH7.5立即中和。通過SDS-PAGE鑒定包含huINSR(ECD)-C3-muIgGFc的級分，合并所述級分并對磷酸緩沖鹽溶液透析。產(chǎn)量為0.9mg/L的條件化培養(yǎng)基。主要蛋白種類為成熟的ot和P鏈以及鼠類Fc?；谄涮岣叩暮筒痪坏姆肿恿?，這些種類都表現(xiàn)出被正確地糖基化。未加工的INSR(ECD)以及被糖基化但未被蛋白水解切割的INSR(CED)也存在于制劑中。在非還原條件下變成更高分子量的帶表明二硫鍵連接oc和P鏈。終產(chǎn)物的氨基末端的測序表明87%的蛋白在INSR(ECD)的a和l3鏈之間被正確加^L，而13%仍保持未被加工。實施例3:抗IGF-lR噬菌體Fab的初步篩選本實施例提供了鑒定抗IGF-1R抗體的方法。獲得使用來自四個健康供體的外周血淋巴細胞和來自患有胃癌的一個患者的脾淋巴細胞構(gòu)建的TargetQuestQFab文庫("TQ文庫，，；TargetQuest,Maastricht,theNetherlands),所述文庫的多樣性為3.7x1016個克隆，包含3xl(T個重鏈。已公開了所述文庫的來源、篩選方法和特征(deHaard爭乂，1999，JBiolChem274:18218-30)。用PBS洗滌未包被的Dynabead(200^1)M-450(目錄號140.02，Dynal，LakeSuccess,NY)3次，將其重懸浮于200jnlIGFlR(ECD)-C3-mFc中，產(chǎn)生PBS中的0.5|uM的濃度，并在化下在振蕩器上溫育過液。用1ml在PBS(2%MPBS)中配制的2。/。脫脂奶粉(M)洗滌IGF-lR(ECD)-C3-mFc包被的小珠3次，然后用lml2%的MPBS在室溫下封閉1小時。平行地，通過與250|il8%MPBS在室溫下混合30分鐘至1小時預(yù)封閉750^1的TQ文庫(4xl012pfu)。將500nl封閉的小珠轉(zhuǎn)移入另一個微量離心管中，并在磁力分離器上與封閉溶液分離。將預(yù)封閉的噬菌體混合物加入至封閉的小珠并在室溫下在轉(zhuǎn)動器上溫育90分鐘。將結(jié)合小珠的噬菌體與未結(jié)合的噬菌體分開，然后用lml2%MPBS/0.1%Tween20洗滌6次，用lmlPBS/0.1%Tween20'沬滌6次，用PBS洗滌2次，在不同的洗滌溶液之間更換管。用lml0.1MTEA(pHll)洗脫結(jié)合的噬菌10分鐘，然后立即與小珠分離并用0.5mllMTris.HCl中和。將洗脫的噬菌體混合物與4ml2xYT液體培養(yǎng)基(10g酵母提取液，16g細菌培養(yǎng)用胰蛋白胨，每升水5gNaCl)和5mlTGI細菌培養(yǎng)物(O.D.59。大約為0.5)在50ml錐形管中混合。在3"C下在培養(yǎng)箱中溫育感染混合物30分鐘，然后在3500rpm下離心20分鐘。將細胞沉淀重懸浮于1500iul2xYT-CG液體培養(yǎng)基中，并將300nl涂布在5個2xYT-CG(含有100pg/ml羧節(jié)青霉素和2%的葡萄糖的2xYT液體培養(yǎng)基)板的各板上。在30。C下溫育20小時后，向各板加入41111xYT-AG，然后用細胞刮棒從板上回收所述細胞。重復(fù)該步驟3次。將少部分回收的細胞用于噬菌體拯救(參見下面)。在3500rpm下離心剩下的細胞懸浮液20分鐘。將細胞沉淀懸浮入大致為沉淀體積一半的量的50。/。的甘油中并在-80'C下貯存。，為了拯救噬菌體，使用涂板擴增的細胞懸浮液接種40ml2xYT-CG直至達到大約0.05的OD59。。將培養(yǎng)物在37°C下在振蕩器上溫育至OD59Q0.5。用M.O.I.20的M13K07輔助謹菌體(GIBC0BRL，Gaithersburg，MD，目錄號18311-019，1.1x1011pfu/ml)感染對數(shù)期培養(yǎng)物，然后在37°C下溫育30分鐘。在4000rpm下離心被感染的細胞20分鐘。將細胞沉淀重懸浮于200ml2xYT-CK(lOOpg/ml羧芐青霉素和40pg/ml卡那霉素)并轉(zhuǎn)移至兩個250ml培養(yǎng)瓶中，然后在30。C下以270rpm振蕩溫育20小時。在4000rpm下離心過夜培養(yǎng)物20分鐘以除去細胞碎片。重復(fù)離心以確保細胞碎片的去除。向上清液中加入大約1/5體積的PEG溶液(20y。PEG8000，2.5MNaCl)以沉淀噬菌體顆粒。將混合物在冰上溫育至少1小時，然后在4000rpm下離心20分鐘以收集沉淀的噬菌體顆粒。將噬菌體沉淀重懸浮入lmlPBS中，然后轉(zhuǎn)移至微量離心管。將噬菌體懸浮液保留在冰上進行1'J、時以允許噬菌體顆粒的完全懸浮，然后通過在14，000rpm下離心2分鐘以除去殘留的細胞碎片來使所述懸浮液澄清。重復(fù)噬菌體沉淀步驟。在澄清后，將最終的噬菌體沉淀懸浮入PBS。所述拯救的噬菌體懸浮物用于下一輪選擇。進行4輪選擇，所述選擇包括各種標(biāo)準(zhǔn)結(jié)合參數(shù)的改變。第二輪選擇與第一輪選擇相同。在第三和第四輪中引入輸入的噬菌體數(shù)目和洗脫試劑的變化。對于第三輪選擇，選擇5xl011pfu的噬菌體并用IGF-1(目錄號13769，Sigma,St.Louis，MO)或用1^iM濃度的嵌合ctlR3-huFc抗體洗脫結(jié)合的噬菌體以產(chǎn)生兩個第三輪的庫TQ4-3IS和TQ4-3CA。在來自兩個第三輪的庫的拯救噬菌體庫上進行第四輪選擇。使用小鼠IgGFc包被的DYMBEADS(DynalBiotech,Oslo,Norway)的兩輪負選擇用于在實際的IGF-1R選擇之前除去小鼠Fc結(jié)合劑。負選擇的溫育時間各為30分鐘。分別選擇3.WxlO11pfu的TQ4-3IS庫和3.75x1012pfu的TQ4-3CA庫。用1^MIGF-2(目錄號12526，Sigma，St.Louis,MO)洗脫結(jié)合噬菌體以產(chǎn)生兩個第4輪庫TQ4-4ISI2和TQ4-4CAI2。在各洗脫步驟中確定大約96-192個噬菌體DNA插入物的序列。在一些情況下，進行第二篩選。按照廠商說明書(Qiagen，Valencia,CA)使用DNAMaxiprep試劑盒制備總TQ文庫的噬菌粒DNA混合物和在幾輪抗IGF-1R的選擇后擴增的選擇的噬菌體。用heI和AcoRI(NewEnglandBiolab,Beverly,MA)降解所有四個DM制劑。在制備級0.5%的瓊脂糖凝膠上分離所得的兩個AcI/fcoRI片段。從IGF-IR選擇的噬菌體凝膠純化包含重鏈的2.1kb片段。從總TQ文庫DNA凝膠純化包含輕鏈和pCESl載體部分的3.9kb片段。以3:1的比例將2.lkb片段連接至來自TQ文庫的DM樣品的3.9kb的片段。沉淀連接的DNA并通過電穿孔將其用于轉(zhuǎn)化TG1細胞。所得輕鏈改組的第二文庫的文庫大小為8.8xl08。在對96個隨機挑選的克隆測序后，獲得76個獨特的輕鏈序列，表明改組輕鏈的嘗試是成功的。用于篩選輕鏈改組文庫的結(jié)合、洗滌和洗脫條件基本上與對于初步篩選所描述的相同。然而，進行了幾個變化以增加對具有更高親和力的IGF-1R結(jié)合劑(特別是具有顯著更低的解離速率的IGF-IR結(jié)合劑)的擴增的選擇壓力。這些參數(shù)是輸入噬菌體的更多數(shù)目(2-2.7xlO13pfu)、更小的小珠體積(100nl用于第1輪，50nl用于第2輪和25nl用于第3輪)和長達20小時的長特異性洗脫時間。第1輪(RD1)的洗脫緩沖液是0.1MTEA,RD2的是在0.4%的MPBS中配制的1IGF-1，RD3的是在0.4%的MPBS中配制的ljoMIGF-1或IGF-2。在RD2和RD3中，棄去在15分鐘或2小時洗脫的結(jié)合劑。繼續(xù)洗脫并在8-10小時后和在20小時后再次收集洗脫的噬菌體。嗟菌體Fab的ELISA篩選在96孔2ml深孔板中，用20nl單個克隆的過夜培養(yǎng)物接種480^1/孔2xYT-CG的液體培養(yǎng)基，然后在37X:、300rpm下溫育3小時。向各孔中加入50nl1:3稀釋的M13K07輔助噬菌體以感染細胞。將板在不振蕩的情況下在37r下溫育30分鐘，然后在150rpm下再輕舉史地振蕩30分鐘。將板在3600rpm下離心20分鐘以沉淀受感染的細胞。將各孔中的細胞沉淀懸浮于480^1的2xYT-CK(包含100pg/ml羧節(jié)青霉素和40jig/ml卡那霉素的2xYT液體培養(yǎng)基)中，并在30X:下溫育過夜，進行大約20小時。通過在3600rpm下離心20分鐘分離細胞碎片。將拯救的噬菌體上清液用于噬菌體ELISA以檢查個體克隆的IGF-1R特異性、INSR交叉反應(yīng)性或小鼠Fc結(jié)合。分別用100pl/孔在PBS中配制的5ng/mlIGF-lR-C3-mFc、5ng/mlINSR-mFc或2ng/ml小鼠IgGl(目錄號010-0103，Rockland,Pilbertsville，PA)包被三組NuncMaxiSorbImmunoplate,在4。C下過夜。用300nl/孔的PBS洗滌包被的板3次。在室溫下用300nl/孔2MMPBS封閉洗滌的板1小時。同時，通過將170^1拯救的噬菌體與170^14°/。MPBS混合來預(yù)封閉個體克隆的拯救的噬菌體。用300|nl/孔TBST(TBS:10mMTris-HCl，pH7.5，lmMEDTA，150mMNaCl;Tween-20.0.1%)洗滌封閉的板5次。將100jnl/孔的預(yù)封閉的噬菌體稀釋液分配至各組包被的板，將所述板在室溫下在架子上溫育90分鐘。用300nl/孔TBST洗滌板5次。分配100nl/孔的在2%MPBS中配制的抗M13-HRP(l:3000稀釋度，目錄號27-9421-01，AmershamPharmaciaBiotech),然后將板置于架子上于室溫下溫育1小時。用300inl/孔TBST洗滌板5次。加入100nl/孔的底物l-StepABTS(PierceBiotechnology,Rockford，IL，目錄號37615)。將板溫育1小時。測量OD4。5以進行信號檢測。噬菌體展示的抗體基本上不展示與胰島素受體和鼠類Fc結(jié)構(gòu)域的交叉反應(yīng)性。因此在IGF-1RELISA中觀察到的信號對于IGF-1R細胞外結(jié)構(gòu)域是特異性的。來自關(guān)于4個噬菌體展示抗體的相似測定的結(jié)果顯示于圖14。對IGF-1R陽性、INSR和muIgGl陰性克隆的DNA插入物進行測序。鑒定了52個獨特的Fab序列，所述序列具有下列輕鏈和重鏈可變結(jié)構(gòu)域序列的組合L1H1，L2H2，L3H3，L4H4，L5H5，L6H6，L7H7，L8H8L9H9，LIOHIO，LllHll，L12H12,L13H13，L14H14，L15H15，L16H16，L17H17,L18H18，L19H19，L20H20,L21H21，L22H22，L23H23,L24H24，L25H25，L26H26，L27H27,L28H28,L29H29,L30H30,L31H31,L32H32,L33H33，L34H34，L35H35，L36H36，L37H37，L38H38，L39H39,L40謹，L41H41,L42H42，L43H43，L44H44，L45H45，L46H46,L47H47，L48H48,L49H49，L50H50,L51H51和L52H52，其中"Lx"表示輕鏈可變結(jié)構(gòu)域編號"x",而"Hx"表示重鏈可變結(jié)構(gòu)域編號"x"。圖l提供了這些輕鏈和重鏈可變結(jié)構(gòu)域的各結(jié)構(gòu)域的多核苷酸序列。圖2和3提供了對應(yīng)的氨基酸序列。實施例4:Vh和Vl至IgGl表達載體的亞克隆本實施例提供了將之前鑒定的可變結(jié)構(gòu)域序列亞克隆入IgGl表達載體的方法。pDSRa20和pDSRa20:hlgGlCH的構(gòu)建pDSRa20:hlgGlCH表達載體(WO90/14363)是pDSR19:hIgGlCH的衍生物(參見2002年4月5日提交的美國臨時專利申請60/370,407，"HumanAnti-OPGLNeutralizingAntibodiesAsSelectiveOPGLPathwayInhibitors,"此處以其全文在此引用作為參考)。pDSRctl9:hlgGlCH質(zhì)粒編碼大鼠可變區(qū)/人恒定區(qū)IgGl(rVh/hChl)。通過以J6al和5^BI結(jié)尾的大鼠抗體可變區(qū)PCR產(chǎn)物、人IgGl恒定區(qū)(CV鉸鏈區(qū)，Cm和Ch3結(jié)枸域)(其通過I切割和凝膠分離來自線性質(zhì)粒pDSRal9:hlgGlCH07//dIII和"s邁BI末端)的^邊BI片段產(chǎn)生)和具有Dal和i^/I末端的線性化pDSRot19的三片段連接構(gòu)建所述質(zhì)粒。通過定向誘變將pDSRal9中的核苷酸2563從鳥嘌呤核苷改變成腺嘌呤核苷來產(chǎn)生pDSRa20。重鏈表達載體pDSRa20:hlgGlCH大鼠可變區(qū)/人恒定區(qū)IgGl(rVh/hChl)具有6163個堿基對且包食表3中描述的7個功能區(qū)。表3質(zhì)才立堿基對編號<table>tableseeoriginaldocumentpage116</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage117</column></row><table>GTCCATGACACTCTCCTGTGCAGCCTCGGGATTCACTTTCAGAACCTATGGCATGGCCTGGGTCCGCCAGGCCCCAACGAAGGGTCTGGAGTGGGTCTCATCAATTACTGCTAGTGGTGGTACCACCTACTATCGAGACTCCGTGAAGGGCCGCTTCACTATTTTTAGGGATAATGCAAAAAGTACCCTATACCTGCAGATGGACAGTCCGAGGTCTGAGGACACGGCCACTTATTTCTGTACATCAATTTCGGAATACTGGGGCCACGGAGTCATGGTC細旦ACCGTCTCTAGTGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACC<table>tableseeoriginaldocumentpage119</column></row><table>通過用限制性內(nèi)切酶^T6aI和A^zBI降解pDSR20:大鼠可變區(qū)/人恒定區(qū)IgGl質(zhì)粒以除去大鼠可變區(qū)來制備線性質(zhì)粒pDSRct20:hIgGlCH，并使用QIAquickGelExtraction試劑盒進行純化。使用包含1.Okbp人IgGl恒定區(qū)結(jié)構(gòu)域的線性質(zhì)粒pDSRa20:hIgGlCH接受抗IGF-1R可變重鏈編碼序列。抗IGF-1RIgGl重鏈表達克隆的構(gòu)建用互補寡核苷酸引物從噬菌粒DM擴增編碼重鏈的抗IGF-1R可變區(qū)的序列。設(shè)計用于聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)的引物以將111位點、J6aI位點、Kozak序列(CCACC)和信號序列(翻譯的肽為MDMRVPAQLLGLLLLWLRGARC;SEQIDNO:263)整合在所述可變區(qū)的5，末端，同時將&/z/BI位點加入至PCR產(chǎn)物的3，末端。用J6aI和As/sBI降解PCR產(chǎn)物，然后將其克隆入包含人IgGl恒定區(qū)的J6a卜&邊BI線性pDSRa20:hlgGlCH表達載體(圖13)。最終的表達載體包含表4中描述的7個功能區(qū)域。表4質(zhì)粒堿基對編號<table>tableseeoriginaldocumentpage119</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage120</column></row><table>克隆為全長產(chǎn)物。將所述全長輕鏈以J6aI和I片段克隆入表達載體pDSRoc20。最終的表達載體包含表5中描述的7個功能區(qū)。表5質(zhì)粒堿基對編號:<table>tableseeoriginaldocumentpage121</column></row><table>5485當(dāng)與天然的人恒定區(qū)序列相比較時，一些k克隆在其恒定區(qū)中具有錯誤。為了消除這些錯誤，用可將I位點導(dǎo)入5，末端和將A邁BI位點導(dǎo)入3'末端的引物擴增k可變區(qū)。然后將該片段與具有可相容的5，末端上的I和3，Sa7I末端的人k恒定區(qū)(圖13)—起連接入具有J6aI和I末端的pDSRot20。實施例5:抗體的瞬時表達本實施例提供了瞬時表達抗IGF-1R抗體的方法。在適應(yīng)無血清懸浮的293T細胞中瞬時表達所述抗體。以250mL蜂養(yǎng)物的形式進行所有轉(zhuǎn)染。簡而言之，在4。C、2，500RPM下離心1.25x108個細胞(5.0x1()5個細胞/mLx250mL)10分鐘以除去條件化培養(yǎng)基。將細胞重懸浮于無血清DMEM并在4t:、2,500RPM下再次離心10分鐘。在抽吸洗滌溶液后，將細胞重懸浮于50mL旋轉(zhuǎn)玻瓶培養(yǎng)物中的生長培養(yǎng)基[DMEM/F12(3:1)+lx胰島素-轉(zhuǎn)鐵蛋白-硒補充劑+IXPenStrepGlut+2mML-谷氨酰胺十20mMHEPES+0.01%PluronicF68]中。將旋轉(zhuǎn)玻瓶培養(yǎng)物保持在以125RPM旋轉(zhuǎn)的磁力攪拌板上，所述攪拌板置于保持在37t:和5%0)2下的潮濕培養(yǎng)箱中。將所述質(zhì)粒DNA與轉(zhuǎn)染劑在50mL錐形管中溫育。以5%的終培養(yǎng)體積在無血清DMEM中配制DNA-轉(zhuǎn)染劑復(fù)合物。首先將每毫升培養(yǎng)物1微克質(zhì)粒DNA加入無血清DMEM，然后加入1ji1X-TremeGeneRO-1539/mL培養(yǎng)物。將所述混合物在室溫下溫育大約30分鐘，然后再將其加至旋轉(zhuǎn)波瓶中的細胞中。進行轉(zhuǎn)染/表達7天，之后通過在4t:、4，000RPM下離心60分鐘收獲條件化培養(yǎng)基。如果初步轉(zhuǎn)染不能產(chǎn)生所需要的100jag純化的抗體，在滾瓶中再表達這些克隆。這些轉(zhuǎn)染使用培養(yǎng)和保持在補充有5%FBS+lx非必需氨基酸+lxPenStrepGlut+lx丙酮酸鈉的DMEM中的293T貼壁細胞。近似地，將4-5x107個293T細胞播種在850cm2的滾瓶中過夜。然后在第二天使用FUGENE6轉(zhuǎn)染劑轉(zhuǎn)染之前播種的細胞。在大約6.75mL無血清DMEM中制備DNA-轉(zhuǎn)染劑混合物。首先加入675HilFUGENE6轉(zhuǎn)染劑，然后加入112.5ng質(zhì)粒DNA。在室溫下溫育所述混合物30分鐘。然后將整個混合物加入至滾瓶。用5%0)2氣體混合物充注滾瓶，蓋緊蓋，然后將其放在在以0.35RPM旋轉(zhuǎn)的滾轉(zhuǎn)機架上，置于37r的培養(yǎng)箱中。在用100mLDMEM+1X胰島素-轉(zhuǎn)鐵蛋白-硒補充劑+IXPenStrepGlu+1X非必需氨基酸+IX丙酮酸鈉更換所述培養(yǎng)基前進行轉(zhuǎn)染24小時。一般地，以48小時的間隔從各滾瓶獲得2-3次收獲物(1Q0ml)。將收獲的無血清條件化培養(yǎng)基混合在一起，然后在4r以4，000RPM離心30分鐘。實施例6:抗IGF-1R抗體的小規(guī)模純化本實施例提供了在小規(guī)模上純化抗IGF-1R抗體的方法。將條件化培養(yǎng)基通過0.45jlim醋酸纖維薄膜過濾器過濾，然后使用Vivaflow20050K切線流膜(Vivascience，Goettingen,Germany)將其濃縮大約8倍。用磷酸緩沖鹽溶液(2.7mM氯化鉀、138mM氯化鈉、1.5mM磷酸鉀和8.lmM磷酸鈉，pH7.4)(PBS)洗滌rProteinASEPHAROSEFastFlow樹月旨(AmershamBiosciences,Piscataway，NJ)4次，然后直接用于濃縮的介質(zhì)。使用的樹脂的量基于通過ELISA確定的抗體濃度，其中每5pg抗體使用ljLil樹脂。在溫和攪拌下在4x:下溫育所述培養(yǎng)基過夜。在4x:下以500g離心樹脂io分鐘。將上清液作為未結(jié)合的級分輕輕倒出。在室溫下，在溫和的攪拌下，用PBS洗滌樹脂4次，每次進行1分鐘，每一次通過在4t:下以500g離心樹脂10分鐘來收集樹脂。通過在室溫下用1.5倍體積的0.1M甘氨酸pH3.0溫育樹脂10分鐘來洗脫抗體。在4n下以500g離心樹脂10分鐘并將上清液作為洗脫的抗體輕輕倒出。重復(fù)上述步驟進行總共三次洗脫；每一次用0.04倍體積的1.0Mtris-HCl，pH9.2中和洗脫的材料。將樣品通過0.2pm醋酸纖維素薄膜過濾器進行過濾。按照提供的說明書使用人IgG(Sigma-Aldrich，St.Louis，M0)作為標(biāo)準(zhǔn)通過Bradford法使用Bio-RadProteinAssay(Bio-RadLaboratories,Hercules,CA)確定蛋白的濃度。使用用考馬斯亮藍染色的4-20%的tris-甘氨酸SDS聚丙烯酰胺凝膠(SDS-PAGE)將樣品與人IgG1，K標(biāo)準(zhǔn)(Sigma-Aldrich，St.Louis,MO)進行比較。在這些制劑中沒有看到污染性蛋白。實施例7:穩(wěn)定的表達抗體的CHO克隆的分離本實施例提供了用于分離穩(wěn)定的表達抗IGF-1R抗體的CHO細胞系的方法。通過用pDSRa20重鏈和輕鏈IgGl表達構(gòu)建體共轉(zhuǎn)染AM1-DCHO細胞(美國專利No.6，210，924，此處以其全文引用)獲得TQUC、TQ25、TQ58和TQ59IgGl的穩(wěn)定表達。按照廠商說明書使用LF2000(InvUrogen，Carlsbad,CA)進行質(zhì)粒轉(zhuǎn)染。簡而言之，在轉(zhuǎn)染前24小時，將4x106個AM1-DCHO細胞涂板在100mm直徑FALCON塑料培養(yǎng)皿(BDFalcon,FranklinLakes,NJ)中的補充有5%胎牛血清、lx青霉素-鏈霉素和谷氨酰胺(Invitrogen)、非必需氨基酸(Invitrogen)、丙酮酸鈉和HT(0.ImM次黃嘌呤鈉、16nM胸苷；Invitrogen)的10mlDulbecco改良Eagle培養(yǎng)基(Invitrogen)中。使用細I(NewEnglandBiolabs)線性化大約15mg的各pDSRa21-釋鏈和重鏈質(zhì)粒DNA并將其稀釋在2ml0PTI-MEM(Invitrogen)中。將稀釋的質(zhì)粒與在2mlOPTI-MEM逸中稀釋的75ja1LIPOFECTAMINE2000(LF2000;GIBCO/BRL)混合并將該混合物在室溫下溫育20分鐘。第二天加入新配制的生長培養(yǎng)基。將細胞在完全生長培養(yǎng)基中培養(yǎng)48小時，然后以1:20和1:50的稀釋度涂板在HT選擇培養(yǎng)基中。轉(zhuǎn)染后大約2周，使用無菌克隆盤(cloningdiscs)(RPI)將12-24個可見的集落挑入24孔培養(yǎng)板。通過western免疫印跡分析鑒定表達最高水平的TQ11C、TQ25、TQ58和TQ59IgGl的克隆。為進行該測定，向培養(yǎng)在24孔板(BDFalcon)中的單孔匯合細胞中加入0.5ml無血清培養(yǎng)基。24小時后回收條件化培養(yǎng)基，然后將10jul的CM與等體積的上樣緩沖液混合以進行10%Tris-甘氨酸聚丙烯酰胺蛋白凝膠(Invitrogen)跑膠。將凝膠轉(zhuǎn)移至0.45pm孔徑大小的硝酸纖維素膜(Invitrogen)，然后使用1:1000稀釋度的山羊抗人IgGFcJmmunoPure抗體(PierceBiotechnology,Inc.,Rockford，IL)和ECL作為檢測劑進行western印跡分析。實施例8:抗體的中等規(guī)模表達本實施例提供了通過穩(wěn)定的CHO細胞系表達抗IGF-1R抗體的方法。將按照實施例7制備的CHO細胞系擴增至T-175組織培養(yǎng)瓶(Falcon)中以進行擴大的表達。將匯合的T175瓶(大約2-3x107個細胞)用于播種3-850cm2滾瓶(CorningLifeSciences,Acton,MA)，且將3個匯合滾瓶(每滾瓶大約1-2x108個細胞)用于播種30個滾瓶，各滾瓶裝有250ml的高葡萄糖DMEM(Invitrogen)、10%透析的FBS(Invitrogen)、lx谷氨酰胺(Invitrogen)、lx非必需氨基酸(Invitrogen)、lx丙酮酸鈉(Invitrogen)。在滾瓶加蓋前用10%C02/平衡空氣充注培養(yǎng)基5秒。將滾瓶在37C下在滾瓶架上以0.75rpm旋轉(zhuǎn)溫育。當(dāng)細胞達到大約85-90%的匯合度時(培養(yǎng)大約5-6天)，棄去生長培養(yǎng)基，用100mlPBS洗滌細胞，然后加入200ml生產(chǎn)培養(yǎng)基(50°/(>DMEM(Invitrogen)/50%F12(Invitrogen)、lx谷氨酰胺(Invitrogen)、lx非必需氨基酸(Invitrogen)、lx丙酮酸鈉(Invitrogen)、1.5%DMSO(Sigma))。每7天收獲條件化培養(yǎng)基，總共收獲4次。將條件化培養(yǎng)基通過0.45nm醋酸纖維素薄膜過濾器過濾，然后使用SartoriusSartoconSliceDisposable30K切線流膜(SartoriusAG,Goettingen，Germany)將其濃縮大約10倍。將濃縮的材料在4X:下用于10ml重組A蛋白瓊脂糖柱，收集流出液(flowthrough)作為未結(jié)合的級分。用4倍柱體積的PBS洗滌柱子。用大約4倍柱體積的0.1M甘氨酸pH3.G洗滌結(jié)合的樣品。收集洗脫峰，并用0.04倍體積的1.0Mtris-HCl，pH9.2進行中和。將洗脫物在4t:下對150倍體積的PBS透析過夜。將樣品通過0.2jam醋酸纖維素薄膜過濾器過濾，然后通過使用14，000M-l的消光系數(shù)確定280nm處的吸光率來測量蛋白濃度。使用用考馬斯亮藍染料染色的4-20%tris-甘氨酸SDS-PAGE凝膠將樣品與人IgGl，K標(biāo)準(zhǔn)(Sigma-Aldrich，St.Louis,Missouri,USA)進行比較。按照提供的說明書使用PyrotellLimulusAmebocyteLysateAssay(AssociatesofCapeCod,Inc.,Falmouth,Ma)確定各抗體制劑中的內(nèi)毒素水平。實施例9:0RIGEN⑧劑量反應(yīng)竟?fàn)帨y定本實施例提供了檢測抗體阻斷配體對IGF-1R的結(jié)合的能力的方法。通過使用廠商(Igen,Inc.,Gaithersburg，MD)提供的方法，0RIGE『結(jié)合測定法可用于確定TQ11C、TQ25、TQ58和TQ59IgGl抗體是否可阻斷配體對IGF-1R的結(jié)合。為了用釕標(biāo)記IGF-1和IGF-2,將凍干的蛋白溶解在PBS中以產(chǎn)生1.Omg/ml溶液。以5:1(標(biāo)記蛋白)的摩爾比向蛋白中加入標(biāo)記(來自Igen的0RI-TAG-NHS酯，Cat#110034)，所述標(biāo)記來自DMSO中配制的5mg/ml的標(biāo)記母液。在黑暗處在室溫(20-22iC)下溫育所述混合物l小時，然后用20jLil2M甘氨酸在室溫下處理10分鐘。通過應(yīng)用至在PBS中平衡的AmershamBiosciencesNAP-5柱(AmershamBiosciences,Piscataway，NJ)，將標(biāo)記的蛋白與游離標(biāo)記分離并收集0.33ml的級分。通過MicroBCAProteinAssay(PierceBiotechnology,Inc.，Rockford，IL)確定級分的蛋白濃度。級分2和3包含大量的蛋白，將其混合。使用下式IGF-1和IGF-2的釕三聯(lián)吡咬化合物(Ru(bpy)3"標(biāo)記，估量整合的釕沖示記的量。將山羊抗小鼠IgG包被的DynalM450順磁小珠用作IGF-lR(ECD)-C3-muFc的固體支持相。通過用含有l(wèi)xPBS、0.05%TWEEN20(ICIAmericas,Inc.，WilmingtonDE)0.1%BSA、0.01%疊氮化鈉的測定緩沖液洗滌3次制備用于受體裝載的M450小珠。在25ju1體積的測定緩沖液中以每1x106個M450小珠50ng受體的比例結(jié)合IGF-lR(ECD)-C3-muFcl小時。為產(chǎn)生劑量反應(yīng)數(shù)據(jù)，以不斷增加的濃度(1(T"M至IO"M)加入抗體或未標(biāo)記的IGF-1和IGF-2因子，同時加入lnMRu-igf-1和2nMRu-igf-2。最終的反應(yīng)體積為100jj1。在黑暗處在室溫下溫育2小時后，使用M8Analyzer(Igen)除去游離的釕標(biāo)記的配體并確定結(jié)合至受體的配體的量。所述數(shù)據(jù)表示為在與過量未標(biāo)記的生長IGF1或IGF-2竟?fàn)幒笫Ｏ碌目偟慕Y(jié)合配體減去背景的百分比。使用單組分平衡模型(singlecomponentequilibiriummodel)，用GraphPadPrism軟件(GraphPadSoftware,SanDiego，CA)產(chǎn)生竟?fàn)幥€。基本上所有(〉98%)的結(jié)合與過量的未標(biāo)記的生長因子竟?fàn)?。結(jié)合分析中的陽性對照抗體是鼠類抗IGF-1R抗體ocIR3(Calbiochem，SanDiego,CA)或MAB391(R&Dsystems,Minneapolis,MN)、24-57(Biocarta，SanDiego,CA)和1H7(SantaCruzBiotechnology,Inc.，SantaCruz,CA)。負對照抗體是抗CD20抗體。配體竟?fàn)帞?shù)據(jù)顯示于圖15中。觀察到的IGF-1和IGF-2結(jié)合反應(yīng)的Ki和最大抑制值列于表6中。表6<table>tableseeoriginaldocumentpage127</column></row><table>1抑制的Ki。2lpM抗體濃度的抑制的最大水平。實施例10:SPA劑量反應(yīng)竟?fàn)帨y定法本實施例提供了用于估量抗體對胰島素(INS)與胰島素受體(INSR)的相互作用以及IGF-1和IGF-2對IGF-1R的相互作用的影響的閃爍親近測定法(SPA)。TQ11C，TQ25，TQ58和TQ59IgGl抗體的IGF-1R結(jié)合反應(yīng)體系包含lxPBS、0.05%TWEEN20(Mal1inkrodt)、0.1%BSA(EMScience,Gibbstown，NJ)、50ngIGF-1R(ECD)-C3-muFc、500ugSPAPVT抗小鼠IgG熒光孩i球(fluoromicrospheres)(Amersham)和終濃度為0.64nM的1251-標(biāo)記的IGF-1或IGF-2(獲自Amersham)。總反應(yīng)體積為100jal。除了其包含50ngINSR(ECD)-muFc和0.64nM125I-INS(Amersham)外，INSR結(jié)合反應(yīng)體系是相同的。在結(jié)合反應(yīng)體系的建立之前將受體在室溫下裝載至SPAPVT微球，進行1小時。為了產(chǎn)生劑量反應(yīng)數(shù)據(jù)，以不斷增加的濃度(10—nM至10—、)加入抗體或未標(biāo)記的生長因子，同時加入1251標(biāo)記的生長因子?；旧纤械慕Y(jié)合都與過量的未標(biāo)記的生長因子竟?fàn)帯Ｓ蒘PTPVT微球的隨機Y刺激導(dǎo)致產(chǎn)生的不依賴于受體的背景低于輸入的1251cpm的O.5%。所述數(shù)據(jù)表示為與過量的未標(biāo)記的生長IGF1或IGF-2竟?fàn)幒笫Ｓ嗟目偟慕Y(jié)合配體減去背景的百分比。使用單一組分平衡模型，用GraphPadPrism軟件產(chǎn)生竟?fàn)幥€。實施例11:抗體對IGF-1R的結(jié)合本實施例提供了檢測抗IGF-1R抗體對IGF-1R的結(jié)合的方法。BIACORE2000、傳感器芯片CM5、表面活性劑P20、HBS-EP(10mMHEPES、0.15MNaCl、3.4mMEDTA、0.005%P20，pH7.4)、胺偶聯(lián)試劑盒、10mM醋酸pH4.5和10mM甘氨酸pH1.5全部從BIACore，Inc.(PiscaUway，NJ)購買。磷酸緩沖鹽溶液(PBS，IX，無氯化釣、無氯化鎂)購自Gibco。牛血清白蛋白(BSA，級分V，不含IgG)購自Sigma。重纟且G蛋白("rProteinG")購自PierceBiotechnology,按照廠商說明書，使用lOmMHEPES、0.15MNaCl、3.4mMEDTA、0.005%P20，pH7.4(HBS-EP緩沖液)的連續(xù)流動進行重組G蛋白和IGF-lR-C3-muFc至傳感器芯片表面的固定。簡而言之，通過注射60jal混合物激活傳感器芯片表面上的羧基，所述混合物包含0.2MN-乙基-N，-(二甲基氨基丙基)碳二亞胺(EDC)和0.05MN-羥基琥珀酰亞胺(NHS)。通過以20和50pg/ml之間的濃度注射在10mM醋酸，pH4.5中稀釋的重組A蛋白(Pierce)或IGF-lR-C3-mFc獲得特異性表面。通過注射60ja11M乙醇胺使表面上的過量活性基團失活。對于G蛋白，表面，最終的固定水平是5，000-6，000共振單位(resonanceunit)(RU)，對于IGF-lR-mFc表面為大約7，800RU。也在IGF-lR-mFc傳感器芯片上制備空白、偶聯(lián)模擬物的參照表面。如下進4亍IGF-lR-mFc和抗體之間相互作用的動力學(xué)分析。將抗體和陽性對照抗體(抗IR3-CDR-人-小鼠嵌合體)在PBS+0.005%P20+0.lmg/mlBSA中稀釋，然后注射在G蛋白表面上以捕獲抗體。將IGF-lR-mFc在PBS+0.005%P20+0.lmg/mlBSA中稀釋(從500nM至3.9nM)，然后將各濃度注射在捕獲的抗體表面上和注射在空白G蛋白表面上以進行本底扣除。在10分鐘的解離后，通過注射10mM甘氨酸，pH1.5再生各表面。使用BIAEvaluation，v.3.2(BIACore，Inc.)進行所得感應(yīng)(sensorgram)圖的動力學(xué)分析。通過將兩種不同濃度(O.2nM和lnM)的抗體與在PBS+0.005%P-20+0.lmg/mlBSA中配制的各種濃度(0.OlnM至50nM)的IGF-1R-mFc—起溫育進行溶液親和力分析。在室溫下進行溫育至少5個小時以允許樣品達到平衡。然后將樣品注射在固定的IGF-lR-mFc表面上。在樣品注射后，通過注射25jal8mM甘氨酸，pH1.5再生所述表面。獲得的結(jié)合信號與平衡時溶液中的游離抗體成比例。通過使用雙曲線單位點同質(zhì)結(jié)合模型(dual-curveone-sitehomogeneousbindingmodel)(KinExA軟件v.2.3，SapidyneInstrumentsInc.，BoiseID)從竟?fàn)幥€的非線性回歸分析獲得解離平衡常數(shù)(K。)。數(shù)據(jù)示于表7中。表7<table>tableseeoriginaldocumentpage130</column></row><table>實施例12:抗生物素蛋白-融合蛋白的表位作圖本實施例提供了確定被抗IGF-1R抗體結(jié)合的IGF-1R的表位的方法。使用抗生物素蛋白-IGF-1R融合蛋白確定被抗體TQ11C、TQ25、TQ58和TQ59結(jié)合的IGF-1R的亞結(jié)構(gòu)域。為表達各蛋白，將完整IGF-1R(ECD)的編碼DNA序列克隆入表達載體pCep4-抗生物素蛋白-C中以使雞抗生物素蛋白序列被連接至表達的IGF-1R蛋白的C末端。使用下列PCR引物從親本IGF-1R質(zhì)粒PCR擴增ECD編碼序列(1-932):2804-255，GCAAGCTTGGGAGAAATCTGCGGGCCAG3，SEQIDNO:265和2826-68:5，ATTGCGGCCGCTTCATATCCTGTTTTGGCCTG3，SEQIDNO:266所述引物包括用于克隆入pCep4avidin-C的5，"'/dIII位點和3，I位點。抗生物素蛋白-人IGF-1R(ECD)融合蛋白的氨基酸序列顯示于圖12。用于表位作圖的IGF-1R亞結(jié)構(gòu)域構(gòu)建體包含LI(卜15D、CR(152-298)、L2(299-461)、FnIII-1(461-579)、Fnlll-2/ID(580-798)、FnIII-3(799-901)、L1+CR+L2(1-461)和Ll+CR(1-298)。在括號中提供了各表達質(zhì)粒中的IGF-IR亞結(jié)構(gòu)域的氨基酸座標(biāo)(coordinate)。4吏用下列引物對從親本IGF1RcDNA克隆PCR擴增各結(jié)構(gòu)域的編碼序列Ll:2謝-25:(SEQIDNO:265)2804-19:5，ATTGCGGCCGCCCCACATTCCTTTGGGGGC3，SE(JIDNO:267CR:2804-38:5，AGCAAGCTTGGACCTGTGTCCAGGGACC3，SEQIDNO:2682804-20:5，ATTGCGGCCGCGCAAGGACCTTCACAAGGG3，SEQIDNO:269L2:2804-39:5，AGCAAGCTTGCCGAAGGTCTGTGAGGAAG3，SEQIDNO:2702804-23:5，ATTGCGGCCGCACTTTCACAGGAGGCTCTC3，SEQIDNO:271FnIII-1:2808-08:5，AGCAAGCTTGGACGTCCTGCATTTCACCTC3，SEQIDNO:2722804-52:5，ATTGCGGCCGCGGTGCGAATGTACAAGATCTC3，SEQIDNO:273FnlII-2+ID:2804-41:5，AGCAAGCTTGAATGCTTCAGTTCCTTCCATTC3，SEQIDNO:2742804-51:5，ATTGCGGCCGCAGTCCTTGCAAAGACGAAGTTG3，SEQIDNO:275FnIII-3:2804-42:5，AGCAAGCTTGATGCCCGCAGAAGGAGCAG3，SEQIDNO:2762804-50:5，ATTGCGGCCGCTTTAATGGCCACTCTGGTTTC3，SEQIDNO:277L1+CR+L2:2804-25:5，AGCAAGCTTGGGAGAAATCTGCGGGCCAG3，SEQIDNO:2782804-23(SEQIDNO:272)Ll+CR:2804-25:AGCAAGCTTGGGAGAAATCTGCGGGCCAG(SEQIDNO:279)2804-20(SEQIDNO:270)引物包括用于克隆(如對于IGF-IR(ECD)所描述的)的&'/zdIII和#WI位點。將IGF-IR亞結(jié)構(gòu)域克隆入表達載體pCep4avidin-N以使雞抗生物素蛋白序列(具有內(nèi)源信號序列)連接至表達的IGF-IR蛋白的N末端。通過瞬時轉(zhuǎn)染滾瓶培養(yǎng)物中的人293-EBNA細胞(Invitrogen)獲得各抗生物素蛋白融合蛋白的表達。將所述細胞生長和保持在補充有5%FBS+lx非必需氨基酸+lxPenStrepGlut+lx丙酮酸鈉的DMEM中。將大約4-5x107個293-EBNA細胞播種在850cm2滾瓶中過夜。然后在第二天通過使用FUGENE6轉(zhuǎn)染劑，用pCep4-抗生物素蛋白質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染之前播種的細胞。在大約6.75mL無血清DMEM中制備DM-轉(zhuǎn)染劑混合物。首先加入675ji1FUGENE6轉(zhuǎn)染劑，然后加入112.5Mg質(zhì)粒DNA。在室溫下溫育混合物30分鐘。然后向滾瓶中加入整個混合物。用5%C02氣體混合物灌注滾瓶，蓋緊蓋子，然后將其放在以0.35RPM旋轉(zhuǎn)的滾動架上，置于37匸的培養(yǎng)箱中。在用100mLDMEM+IX胰島素-轉(zhuǎn)鐵蛋白-硒補充劑+IXPenStrepGlu十IX非必需氨基酸+IX丙酮酸鈉更換培養(yǎng)基前進行轉(zhuǎn)染24小時。以48小時的間隔進行條件化培養(yǎng)基的收獲和用新配制的培養(yǎng)基進行更換(2-3輪)。將收獲的無血清條件化培養(yǎng)基混合在一起并通過在4。C下以10，000xg離心30分鐘來使其澄清。使用基于定量FACS的方法確定各條件化培養(yǎng)基中的抗生物素蛋白-融合蛋白的濃度。通過在室溫下與5pl(大約3.5x105)生物素包4皮的聚苯乙烯小珠(Spherotech，Inc.,Libertyvi1le,IL)—起溫育2小時來捕獲200m1條件化培養(yǎng)基中的抗生物素蛋白融合蛋白。通過在包含0.5%BSA的PBS(BPBS)中進行三輪抗生物素蛋白包被的小珠的離心和重懸浮除去條件化培養(yǎng)基。用在lmlBPBS中配制的ljag/ml山羊FITC-標(biāo)記的抗抗生物素蛋白抗體(VectorLabBurlingame:CA)對抗生物素蛋白-小珠進行染色。在半小時溫育后，通過在1800rpm下離心5分鐘收集抗體-小珠復(fù)合物，然后洗滌沉淀3次。用FACSCAN(BecktonDicksonBioscience,FranklinUkes，NJ)檢溯'JFITC焚光。使用用重組抗生物素蛋白產(chǎn)生的標(biāo)準(zhǔn)曲線將信號轉(zhuǎn)化成蛋白質(zhì)的質(zhì)量。為進行表位作圖，通過與合適量(l-20ml)的條件化培養(yǎng)基溫育以每大約3.5x105個小珠50-100ng抗生物素蛋白-融合蛋白的量給生物素小珠加載。在lmlBPBS中充分洗滌加載的小珠并重懸浮其。對于所有實驗，在加載融合蛋白之前用PBS中的10%的BSA封閉生物素-小珠。才法A卓悉浙定法M/zeCo/orJ^ayJ.將用IGF-IR(BCD)和IGF-IR亞結(jié)構(gòu)域融合蛋白裝載的生物素包被的聚苯乙烯小珠與lmlBPBS中配制的liJg抗IGF-1R抗體混合。在室溫下溫育l小時后，加入4ml洗滌緩沖液并通過在750g下離心5分鐘收集抗體-小珠復(fù)合物。通過在4mlBPBS中重懸浮來洗滌沉淀3次。通過用lmlBPBS中的0.5Hg/ml藻紅蛋白-(PE)標(biāo)記的山羊抗人F(ab，)2(SouthernBiotechAssociates,Inc.,Birmingham,AL)處理來檢測結(jié)合抗生物素蛋白-4、珠復(fù)合物的抗體。發(fā)現(xiàn)受試抗體結(jié)合包含完整IGF-1RECD和L2結(jié)構(gòu)域的抗生物素蛋白-融合蛋白。在本實驗中未檢測到對Ll、CR或Fnlll-1的結(jié)合。也觀察到與Ll結(jié)構(gòu)域相對弱的反應(yīng)。才法A兩悉浙;C法r/Voco/ora^flj^.'為同時監(jiān)測抗IGF-IR單克隆抗體和結(jié)合至生物素-小珠的抗生物素蛋白-融合蛋白的量，將FITC標(biāo)記的抗抗生物素蛋白抗體(1jag/ml)用于與0.5jjg/mlpe-標(biāo)記的山羊抗人IgGl的結(jié)合反應(yīng)。如對于單色測定法的描述一樣制備用于FACSCAN分析的小珠。才法J,拔雄;^爭為準(zhǔn)備用熒光素進行標(biāo)記，透析抗體或以lmg/ml的疼度重懸浮于PBS(pH8.5)中。以9.5:1(標(biāo)記蛋白)的摩爾比向蛋白中加入標(biāo)記([6-熒光素-5-(和-6)-曱酰胺基]己酸，琥珀,酰亞胺酯5(6)-SFX]混合異構(gòu)體(來自MolecularProbe(Eugene,0R，Cat.No.F2181))，所述標(biāo)記來自DMS0中配制的5mg/ml的標(biāo)記母液。將混合物在黑暗處在4'C下溫育過夜。通過在PBS中透析將標(biāo)記的抗體與游離標(biāo)記分離。獲得的FITC/抗體比例在3至8的范圍內(nèi)變化。對于各竟?fàn)帉嶒?，建立包?0倍過量(10-50yg/ml)的未標(biāo)記竟?fàn)幙贵w、存在于BPBS中的3.5x105個用抗生物素蛋白融合蛋白包被的生物素小珠的結(jié)合反應(yīng)體系。在30分鐘預(yù)溫育后加入FITC標(biāo)記的抗體(1mg/ml)。從該點之后所述方法遵循單色法。四種受試抗體中的每一種結(jié)合表8中所示的IGF-1RL2結(jié)構(gòu)域。然而，在IGF-1RL2結(jié)構(gòu)域中各抗體的精確氨基酸接觸可以不同。表8抗體Ll1CR1L21FnIII-l1ECD1'2TQ11C無無有無有TQ25無無有無有TQ58有無有無有TQ59無無有無有1使用包含所示的人IGF-1R區(qū)域的抗生物素蛋白-IGF-1R融合蛋白進行表位作圖。2ECD融合蛋白包含Ll+CR+L2+FnlII-l+FnlII-2+ID+FnlII-3。實施例13:抗體對細胞表面IGF-1R的結(jié)合本實施例提供了用于檢測抗IGF-1R抗體對細胞表面表達的IGF-1R的結(jié)合的方法。使用Balb/C3T3成纖維細胞和MCF-7人乳腺癌細胞評估抗體TQ11C、TQ25、TQ58和TQ59結(jié)合細胞表面展示的人IGF-1R的能力，所述細胞經(jīng)基因工程改造以每細胞大約3-4x105個分子的水平過表達所述人IGF-1R受體?；旧先鏟ietrzkowski等人，1992，CellGrowthDifferentiation3:199-205所述，使用逆轉(zhuǎn)錄病毒載體產(chǎn)生穩(wěn)定地過表達人IGF-1R(每細胞大約3xl(T個受體)的Balb/C3T3細胞系。用pcDM3.1表達載體(InvitrogenCorp.)轉(zhuǎn)染過量產(chǎn)生huIGF-1R的MCF-7乳腺癌細胞。在使用抗IGF-1R單克隆抗體ocIR3和PE標(biāo)記的山羊抗鼠類IgG抗體(CaltagLaboratories,Burlingame:CA)通過FACS選擇后，擴增表達高水平huIGF-1R(每細胞大約4x105個受體)的抗Zeocin細胞。重復(fù)選擇和擴增的方法4次。如下通過FACS監(jiān)測IGF-1R受體抗體染色和受體表達通過用過量的PBS(無Ca/Mg)洗滌2次，然后用5ml細胞離解液(CellDissociationBuffer)(Sigma)在室溫下處理10分鐘來從T175培養(yǎng)瓶(Corning)釋放細胞。通過離心收集細胞，然后通過將其重懸浮于pbs，然后離心，進行兩次洗滌。為進行一抗染色，向懸浮于100m1pbs和0.5%BSA(BPBS)中的106個細胞中加入lug抗體并將所述細胞在4匸下溫育1.5個小時。通過離心收集細胞并用BPBS洗滌2次以除去未結(jié)合的一抗。將細胞重懸浮于100n1BPBS中并在4"C下用lpgFITC標(biāo)記的山羊抗人F(ab，)2(SouthernBiotechnologyAssociates,Inc.,Birmingham,AL)溫育30分鐘。在洗滌除去未結(jié)合的FITC二抗后，將細胞重懸浮于lmlPBS+0.5%BSA中并用FACSCAN(BecktonDicksonBioscience,FranklinLakes,NJ)檢測FITC細胞熒光。通過使用具有預(yù)先確定的IgGl結(jié)合能力的Quantum微珠(BangsLaboratories,Inc.,Fishers,IN)產(chǎn)生標(biāo)準(zhǔn)曲線來將熒光水平轉(zhuǎn)化成絕對受體水平。用由廠商提供的QuickCalv2.1軟件(VeritySoftwareHouse,Topsham，ME)進行數(shù)據(jù)換算。對于各受試抗體，相對于親本Balb/C3T3和MCF-7細胞，IGF-IR過表達者的抗IGF-IR抗體標(biāo)記的峰熒光強度增加了10-20倍。這是對特異性結(jié)合IGF-1R的抗體的預(yù)測的結(jié)果。不用抗體或只用FITC標(biāo)記的二抗處理的細胞的背景熒光不明顯。實施例14:IGF-1R的抑制本實施例提供了檢測抗IGF-1R抗體抑制IGF-1R的方法。32DhuIGF-1R+IRS-1細胞的抑制已證明共表達人IGF-1R受體(每細胞20K)和人IRS-1的鼠類32D細胞是檢查分子組分IGF-1R信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的有效系統(tǒng)(Valentinis等人，1999，JBiolChem274:12423-30)。正常的32D細胞表達相對低水平的這兩種基因產(chǎn)物的鼠類直向同源物。32D細胞通常需要IL3以進行生長和存活。如圖16圖框A中所示，IGF-1或IGF-2可替代32DhuIGF-lR+IRS-l細胞中的IL3。所述IGF-1劑量反應(yīng)曲線的EC^是大約0.5nM，而IGF-2ECs。(2.8nM)高大約6倍，反映了IGF-2對IGF-1R的更弱的親和力。為了評估抗體TQ11C、TQ25、TQ58和TQ59阻斷IGF-1或IGF-2刺激的能力，以每孔200plRPMI(Gibco/BRL)中30，000個32DhuIGF-1R+IRS-1細胞播種96孔微量滴定板，所述RPMI包含5%胎牛血清(Gibco/BRL)和lx青霉素、鏈霉素、谷氨酰胺(Giboco/BRL)和濃度不斷增加的抗體(10"M至l(TM)或無抗體。在用抗體預(yù)溫育1小時后，加入IGF-1(2nM)、IGF-2(8nM)或不加入任何物質(zhì)。在抗體加入后27小時加入311-胸苷(每孔luCi)。在21小時后收獲細胞，且確定各樣品的^胸苷至DM的整合。以三次重復(fù)進行所述測定法。將抗CD20抗體用作負對照?？贵wTQ11C、TQ25、TQ58和TQ59的各抗體能夠完全阻斷IGF-1和IGF-2介導(dǎo)的32D細胞的刺激。在加入的IGF-1和IGF-2不存在的情況下背景增殖的減少歸因于血清IGF-1和IGF-2的抑制。使用GraphPadPRIZM軟件分析結(jié)合數(shù)據(jù)。數(shù)據(jù)顯示于圖16中。Balb/C3T3huIGF-1R細胞的抑制IGF-1極大地刺激了3H胸苷被過表達(每細胞大約1x106個IGFlR)IGF-lR的小鼠胚胎成纖維細胞(Balb/C3T3或NIH3T3)的血清饑餓培養(yǎng)物的整合。Kato等人，1993，JBiolChem268:2655-61;Pietrzkowski等人，1992,Cel1GrowthDifferentiation3:199-205。在Balb/C3T3細胞系huIGF-1R過表達者中用IGF-1和IGF-2概括該現(xiàn)象。兩種生長因子都刺激311-胸苷的整合大約20倍。IGF-l劑量反應(yīng)曲線的ECso大約為0.7nM，而IGF-2EC5。(4.4nM)高7倍，表明IGF-2對IGF-1R的親和力更弱。為評估給定的抗體阻斷IGF-1或IGF-2的刺激的能力，以每孔200jnlDMEM(Gibco/BRL)中10，000個細胞播種96孔微量滴定板，所述DMEM包含10W小牛血清(Gibco/BRL)和lx青霉素、鏈霉素、谷氨酰胺(Giboco/BRL)。過夜溫育后，當(dāng)細胞大約80%匯合時，在用200ji1PBS洗滌一次后用100jli1包含0.1%BSA的DMEM更換生長培養(yǎng)基。在血清饑餓后24小時以不斷增加的濃度(10"M至10—M)加入抗體或不加入抗體。在用抗體預(yù)溫育1小時后加入IGF-1(2nM)、IGF-2(8nM)和3H胸苷(每孔1jaCi)。24小時后收獲細胞,確定每個樣品的311胸苷至DNA的整合。以三次重復(fù)進行所述測定。如圖17中所示，各受試抗體能夠完全阻斷IGF-l和IGF-2介導(dǎo)的Balb/C3T3細胞的刺激?？笴D20抗體用作負對照(圖17中的"CD20")。對于其教導(dǎo)的所有內(nèi)容和對于所有目的，此處引用的各參考資料以其全文引用作為參考。權(quán)利要求1.分離的抗原結(jié)合蛋白，其包含a.包含選自下列的序列的輕鏈CDR3i.與選自圖6中所示的L1-L52的輕鏈CDR3序列的CDR3序列相異不超過總共2個氨基酸的添加、置換和/或缺失的輕鏈CDR3序列；ii.MX1X2X3X4X5PX6X7；iii.QQX8X9X10X11PX12T；和iv.QSYX13X14X15NX16X17X18；b.包含選自下列的序列的重鏈CDR3i.與選自圖9中所示的H1-H52的重鏈CDR3序列的CDR3序列相異不超過總共3個氨基酸的添加、置換和/或缺失的重鏈CDR3序列；ii.X19X20X21X22X23X24X25X26X27FDI；iii.X28X29X30X31X32X33X34X35X36X37X38MDV；iv.DSSX39；或c.(a)的輕鏈CDR3序列和(b)的重鏈CDR3序列；其中X1是谷氨酰胺殘基或谷氨酸殘基，X2是丙氨酸殘基、甘氨酸殘基、蘇氨酸殘基或絲氨酸殘基，X3是亮氨酸殘基、苯丙氨酸殘基或蘇氨酸殘基，X4是谷氨酰胺殘基、谷氨酸殘基或組氨酸殘基，X5是蘇氨酸殘基、甲硫氨酸殘基、色氨酸殘基或纈氨酸殘基，X6是甘氨酸殘基、丙氨酸殘基、纈氨酸殘基、亮氨酸殘基、異亮氨酸殘基、脯氨酸殘基、苯丙氨酸殘基、甲硫氨酸殘基、色氨酸殘基或半胱氨酸殘基，X7是蘇氨酸殘基、丙氨酸殘基或絲氨酸殘基，X8是精氨酸殘基、絲氨酸殘基、亮氨酸殘基或丙氨酸殘基，X9是天冬酰胺殘基、絲氨酸殘基或組氨酸殘基，X10是天冬酰胺殘基或絲氨酸殘基，X11是色氨酸殘基、纈氨酸殘基、酪氨酸殘基、脯氨酸殘基或苯丙氨酸殘基，X12是亮氨酸殘基、酪氨酸殘基或異亮氨酸殘基，X13是天冬氨酸殘基或谷氨酰胺殘基，X14是絲氨酸殘基或脯氨酸殘基，X15是絲氨酸殘基、酪氨酸殘基、天冬氨酸殘基或丙氨酸殘基，X16是谷氨酰胺殘基、精氨酸殘基、纈氨酸殘基或色氨酸殘基，X17是精氨酸殘基、纈氨酸殘基、異亮氨酸殘基或無殘基，X18是纈氨酸殘基或無殘基，X19是谷氨酸殘基或無殘基，X20是酪氨酸殘基、甘氨酸殘基、絲氨酸殘基或無殘基，X21是絲氨酸殘基、天冬酰胺殘基、色氨酸殘基、谷氨酸殘基、天冬氨酸殘基或無殘基，X22是絲氨酸殘基、天冬氨酸殘基、色氨酸殘基、丙氨酸殘基、精氨酸殘基、蘇氨酸殘基、谷氨酰胺殘基、亮氨酸殘基、谷氨酸殘基或無殘基，X23是絲氨酸殘基、甘氨酸殘基、天冬酰胺殘基、蘇氨酸殘基、色氨酸殘基、纈氨酸殘基、丙氨酸殘基或異亮氨酸殘基，X24是精氨酸殘基、谷氨酰胺殘基、酪氨酸殘基、纈氨酸殘基、丙氨酸殘基、甘氨酸殘基、絲氨酸殘基、苯丙氨酸殘基，或色氨酸殘基，X25是天冬酰胺殘基、亮氨酸殘基、天冬氨酸殘基、蘇氨酸殘基、色氨酸殘基、酪氨酸殘基、纈氨酸殘基、丙氨酸殘基，或組氨酸殘基，X26是天冬氨酸殘基、絲氨酸殘基、天冬酰胺殘基，或谷氨酰胺殘基，X27是丙氨酸殘基或脯氨酸殘基，X28是丙氨酸殘基或無殘基，X29是谷氨酸殘基、酪氨酸殘基、甘氨酸殘基或無殘基，X30是精氨酸殘基、絲氨酸殘基或無殘基，X31是甘氨酸殘基、天冬氨酸殘基、纈氨酸殘基、絲氨酸殘基或無殘基，X32是絲氨酸殘基、天冬氨酸殘基、甘氨酸殘基或無殘基，X33是苯丙氨酸殘基、天冬氨酸殘基、酪氨酸殘基、甘氨酸殘基、絲氨酸殘基、組氨酸殘基、色氨酸殘基或無殘基，X34是色氨酸殘基、天冬氨酸殘基、酪氨酸殘基、絲氨酸殘基或無殘基，X35是天冬氨酸殘基、谷氨酸殘基、精氨酸殘基、絲氨酸殘基、甘氨酸殘基、酪氨酸殘基，或色氨酸殘基，X36是酪氨酸殘基、賴氨酸殘基、異亮氨酸殘基、亮氨酸殘基或苯丙氨酸殘基，X37是酪氨酸殘基、絲氨酸殘基、苯丙氨酸殘基、天冬氨酸殘基或甘氨酸殘基，X38是甘氨酸殘基、天冬酰胺殘基，或酪氨酸殘基，X39是纈氨酸殘基、甘氨酸殘基，或絲氨酸殘基，且所述抗原結(jié)合蛋白特異性結(jié)合人IGF-1R。2.權(quán)利要求1的分離的抗原結(jié)合蛋白，其包含選自下列的氨基酸序列a.與圖4中所示的L1-L52的CDR1序列相異總共不超過6個氨基酸的添加、置換和/或缺失的輕鏈CDRl序列；b.與圖5中所示的L1-L52的CDR2序列相異總共不超過2個氨基酸的添加、置換和/或缺失的輕鏈CDR2序列；c.與圖6中所示的L1-L52的CDR3序列相異總共不超過3個氨基酸的添加、置換和/或缺失的輕鏈CDR3序列；d.與圖7中所示的H1-H52的CDR1序列相異總共不超過2個氨基酸的添加、置換和/或缺失的重鏈CDRl序列；e.與圖8中所示的H1-H52的CDR2序列相異總共不超過5個氨基酸的添加、置換和/或缺失的重鏈CDR2序列；和f.與圖9中所示的H1-H52的CDR3序列相異總共不超過4個氨基酸的添加、置換和/或缺失的重鏈CDR3序列。3.權(quán)利要求2的分離的抗原結(jié)合蛋白，其包含選自下列的氨基酸序列a.與圖4中所示的L1-L52的CDR1序列相異總共不超過5個氨基酸的添加、置換和/或缺失的輕鏈CDRl序列；b.與圖5中所示的L1-L52的CDR2序列相異總共不超過1個氨基酸的添加、置換或缺失的輕鏈CDR2序列；c.與圖6中所示的L1-L52的CDR3序列相異總共不超過2個氨基酸的添加、置換和/或缺失的輕鏈CDR3序列；d.與圖7中所示的H1-H52的CDR1序列相異總共不超過1個氨基酸的添加、置換或缺失的重鏈CDR1序列；e.與圖8中所示的H1-H52的CDR2序列相異總共不超過4個氨基酸的添加、置換和/或缺失的重鏈CDR2序列；和f.與圖9中所示的H1-H52的CDR3序列相異總共不超過3個氨基酸的添加、置換和/或缺失的重鏈CDR3序列；4..權(quán)利要求3的分離的抗原結(jié)合蛋白，其包含選自下列的氨基酸序列a.與圖4中所示的L1-L52的CDR1序列相異總共不超過4個氨基酸的添加、置換和/或缺失的輕鏈CDRl序列；b.圖5中所示的L1-L52的輕鏈CDR2序列；c.與圖6中所示的L1-L52的CDR3序列相異總共不超過1個氰基酸的添加、置換或缺失的輕鏈CDR3序列；d.圖7中所示的H1-H52的重鏈CDR1序列；e.與圖8中所示的H1-H52的CDR2序列相異總共不超過3個氨基酸的添加、置換和/或缺失的重鏈CDR2序列；和f.與圖9中所示的H1-H52的CDR3序列相異總共不超過2個氨基酸的添加、置換和/或缺失的重鏈CDR3序列。5.權(quán)利要求4的分離的抗原結(jié)合蛋白，其包含選自下列的氨基酸序列a.與圖4中所示的L1-L52的CDR1序列相異總共不超過3個氨基酸的添加、置換和/或缺失的輕鏈CDRl序列；b.圖6中所示的L1-L52的輕鏈CDR3序列；c.與圖8中所示的H1-H52的CDR2序列相異總共不超過2個氨基酸的添加、置換和/或缺失的重鏈CDR2序列；和d.與圖9中所示的H1-H52的CDR3序列相異總共不超過1個氨基酸的添加、置換或缺失的重鏈CDR3序列。6.權(quán)利要求5的分離的抗原結(jié)合蛋白，其包含選自下列的氨基酸序列a.與圖4中所示的L1-L52的CDR1序列相異總共不超過2個氨基酸的添加、置換和/或缺失的輕鏈CDRl序列；b.與圖8中所示的HI-H52的重鏈CDR2序列相異總共不超過l個氨基酸的添加、置換或缺失的重鏈CDR2序列；和c.圖9中所示的H1-H52的重鏈CDR3序列。7.權(quán)利要求6的分離的抗原結(jié)合蛋白，其包含選自下列的氨基酸序列a.與圖4中所示的L1-L52的CDR1序列相異總共不超過1個氨基酸的添加、置換或缺失的輕鏈CDR1序列；和b.圖8中所示的HI-H52的重鏈CDR2序列。8.權(quán)利要求7的分離的抗原結(jié)合蛋白，其包含圖4中所示的L1-L52的CDR1序列。9.權(quán)利要求1的分離的抗原結(jié)合蛋白，其包含選自下列的序列a.選自下列的輕鏈CDR1序列i.RSSQSLLHSNGYNYLD;ii.RASQ(G/S)(I/V)(G/S)X(Y/F)L(A/N);和iii.RSSQS(L/I)XXXXX;b.選自下列的輕鏈CDR2序列i.LGSNRAS;ii.AASTLQS;和iii.E醒RPS;c.選自下列的重鏈CDR1序列i.SS匿S;ii.XYYWS;和iii.SYAM(S/H);和d.選自下列的重鏈CDR2序列i.(E/I)(I/V)(Y/N)(H/Y)SGST(N/Y)YNPSLKS;和ii.XIS(G/S)SG(G/S)STYYADSVKG;其中，括號內(nèi)的氨基酸殘基符號代表序列中相同位置的可選擇的殘基，各X獨立地是任何氨基酸殘基，各Z獨立地是甘氨酸殘基、丙氨酸殘基、纈氨酸殘基、亮氨酸殘基、異亮氨酸殘基、脯氨酸殘基、苯丙氨酸殘基、曱硫氨酸殘基、色氨酸殘基，或半胱氨酸殘基。10.權(quán)利要求1的分離的抗原結(jié)合蛋白，其包含與圖9中所示的H1-H52的CDR3序列相異總共不超過2個氨基酸的添加、置換和/或缺失的重鏈CDR3序列。11.權(quán)利要求10的分離的抗原結(jié)合蛋白，其包含與圖9中所示的HI-H52的CDR3序列相異總共不超過1個氨基酸的添加、置換或缺失的重鏈CDR3序列。12.權(quán)利要求11的分離的抗原結(jié)合蛋白，其包含圖9中所示的H1-H52的重鏈CDR3序列。13.權(quán)利要求1的分離的抗原結(jié)合蛋白，其包含選自下列的2個氨基酸序列a.與圖4中所示的L1-L52的CDR1序列相異總共不超過6個氨基酸的添加、置換和/或缺失的輕鏈CDRl序列；b.與圖5中所示的L1-L52的CDR2序列相異總共不超過2個氨基酸的添加、置換和/或缺失的輕鏈CDR2序列；c.與圖6中所示的LI-L52的CDR3序列相異總共不超過3個氨基酸的添加、置換和/或缺失的輕鏈CDR3序列；d.與圖7中所示的H1-H52的CDR1序列相異總共不超過2個氨基酸的添加、置換和/或缺失的重鏈CDRl序列；e.與圖8中所示的H1-H52的CDR2序列相異總共不超過5個氨基酸的添加、置換和/或缺失的重鏈CDR2序列；和f.與圖9中所示的H1-H52的CDR3序列相異總共不超過4個氨基酸的添加、置換和/或缺失的重鏈CDR3序列。14.權(quán)利要求13的分離的抗原結(jié)合蛋白，其包含選自下列的3個氨基酸序列a.與圖4中所示的L1-L52的CDR1序列相異總共不超過6個氨基酸的添加、置換和/或缺失的輕鏈CDRl序列；b.與圖5中所示的L1-L52的CDR2序列相異總共不超過2個氨基酸的添加、置換和/或缺失的輕鏈CDR2序列；c.與圖6中所示的L1-L52的CDR3序列相異總共不超過3個氨基酸的添加、置換和/或缺失的輕鏈CDR3序列；d.與圖7中所示的H1-H52的CDR1序列相異總共不超過2個氨基酸的添加、置換和/或缺失的重鏈CDRl序列；e.與圖8中所示的H1-H52的CDR2序列相異總共不超過5個氨基酸的添加、置換和/或缺失的重鏈CDR2序列；和f.與圖9中所示的H1-H52的CDR3序列相異總共不超過4個氨基酸的添加、置換和/或缺失的重鏈CDR3序列。15.權(quán)利要求14的分離的抗原結(jié)合蛋白，其包含選自下列的4個氨基酸序列a.與圖4中所示的L1-L52的CDR1序列相異總共不超過6個氨基酸的添加、置換和/或缺失的輕鏈CDRl序列；b.與圖5中所示的L1-L52的CDR2序列相異總共不超過2個氨基酸的添加、置換和/或缺失的輕鏈CDR2序列；c.與圖6中所示的LI-L52的CDR3序列相異總共不超過3個氨基酸的添加、置換和/或缺失的輕鏈CDR3序列；d.與圖7中所示的H1-H52的CDR1序列相異總共不超過2個氨基酸的添加、置換和/或缺失的重鏈CDRl序列；e.與圖8中所示的H1-H52的CDR2序列相異總共不超過5個氨基酸的添加、置換和/或缺失的重鏈CDR2序列；和f.與圖9中所示的H1-H52的CDR3序列相異總共不超過4個氨基酸的添加、置換和/或缺失的重鏈CDR3序列。16.權(quán)利要求15的分離的抗原結(jié)合蛋白，其包含選自下列的5個氨基酸序列a.與圖4中所示的L1-L52的CDR1序列相異總共不超過6個氨基酸的添加、置換和/或缺失的輕鏈CDRl序列；b.與圖5中所示的L1-L52的CDR2序列相異總共不超過2個氨基酸的添加、置換和/或缺失的輕鏈CDR2序列；c.與圖6中所示的L1-L52的CDR3序列相異總共不超過3個氨基酸的添加、置換和/或缺失的輕鏈CDR3序列；d.與圖7中所示的H1-H52的CDR1序列相異總共不超過2個氨基酸的添加、置換和/或缺失的重鏈CDRl序列；e.與圖8中所示的H1-H52的CDR2序列相異總共不超過5個氨基酸的添加、置換和/或缺失的重鏈CDR2序列；和f.與圖9中所示的H1-H52的CDR3序列相異總共不超過4個氨基酸的添加、置換和/或缺失的重鏈CDR3序列。17.權(quán)利要求16的分離的抗原結(jié)合蛋白，其包含a.與圖4中所示的L1-L52的CDR1序列相異總共不超過6個氨基酸的添加、置換和/或缺失的輕鏈CDRl序列；b.與圖5中所示的L1-L52的CDR2序列相異總共不超過2個氨基酸的添加、置換和/或缺失的輕鏈CDR2序列；c.與圖6中所示的L1-L52的CDR3序列相異總共不超過3個氨基酸的添加、置換和/或缺失的輕鏈CDR3序列；d.與圖7中所示的H1-H52的CDR1序列相異總共不超過2個氨基酸的添加、置換和/或缺失的重鏈CDRl序列；e.與圖8中所示的H1-H52的CDR2序列相異總共不超過5個氨基酸的添加、置換和/或缺失的重鏈CDR2序列；和f.與圖9中所示的H1-H52的CDR3序列相異總共不超過4個氨基酸的添加、置換和/或缺失的重鏈CDR3序列。18.權(quán)利要求1的分離的抗原結(jié)合蛋白，其包含a.輕鏈可變結(jié)構(gòu)域，其包含i.圖4中所示的輕鏈CDR1序列；ii.圖5中所示的輕鏈CDR2序列；和iii.圖6中所示的輕鏈CDR3序列；b.重鏈可變結(jié)構(gòu)域，其包含i.圖7中所示的重鏈CDR1序列；ii.圖8中所示的重鏈CDR2序列；和iii.圖9中所示的重鏈CDR3序列；或c.(a)的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域和(b)的重鏈可變結(jié)構(gòu)域。19.權(quán)利要求18的分離的抗原結(jié)合蛋白，其包含a.輕鏈CDR1、CDR2和CDR3序列，所述各序列分別與選自L1-L52的相同輕鏈可變結(jié)構(gòu)域序列的CDR1、CDR2和CDR3序列同一；b.各自分別與選自HI-H52的相同重鏈可變結(jié)構(gòu)域序列的CDR1、CDR2和CDR3序列同一的重鏈CDR1、CDR2和CDR3序列；或c.(a)的輕鏈CDRl、CDR2和CDR3序列和(b)的重鏈CDRl、CDR2和CDR3序列。20.分離的抗原結(jié)合蛋白，其包含a.輕鏈可變結(jié)構(gòu)域序列，其選自i.與圖2中所示的L1-L52的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域序列具有至少80%的同一性的氨基酸序列；ii.包含圖2中所示的L1-L52的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域序列的至少15個連續(xù)氨基酸殘基的氨基酸序列；iii.由與圖1中所示的編碼L1-L52的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域序列的多核苷酸序列具有至少80%的同一性的多核苷酸序列編碼的氨基酸序列；和iv.由多核苷酸序列編碼的氨基酸序列，所述多核苷酸序列在中等嚴緊條件下與由圖1中所示的Ll-L52的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域序列組成的多核苷酸的互補物雜交；b.重鏈可變結(jié)構(gòu)域序列，其選自i.與圖2中所示的H1-H52的重鏈可變結(jié)構(gòu)域序列具有至少80%的同一性的氨基酸序列；ii.包含圖2中所示的H1-H52的重鏈可變結(jié)構(gòu)域序列的至少i5個連續(xù)氨基酸殘基的氨基酸序列；iii.由與圖1中所示的編碼H1-H52的重鏈可變結(jié)構(gòu)域序列的多核苷酸序列具有至少80%的同一性的多核苷酸序列編碼的氨基酸序列；和iv.由多核苷酸序列編碼的氨基酸序列，所述多核苷酸序列在中等嚴緊條件下與由圖1所示的H1-H52的重鏈可變結(jié)構(gòu)域序列組成的多核苷酸的互補物雜交；或c.(a)的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域和(b)的重鏈可變結(jié)構(gòu)域；其中所述抗原結(jié)合蛋白結(jié)合人IGF-1R。21.權(quán)利要求20的分離的抗原結(jié)合蛋白，其包含a.輕鏈可變結(jié)構(gòu)域序列，其選自i.與圖2中所示的LI-L52的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域序列具有至少85%的同一性的氨基酸序列；ii.包含圖2中所示的L1-L52的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域序列的至少25個連續(xù)氨基酸殘基的氨基酸序列；iii.由與圖1中所示的編碼L1-L52的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域序列的多核苷酸序列具有至少85%的同一性的多核苷酸序列編碼的氨基酸序列；和iv.由多核苷酸序列編碼的氨基酸序列，所述多核苷酸序列在高度嚴緊條件下與由圖1所示的L1-L52的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域序列組成的多核苷酸的互補物雜交；b.重鏈可變結(jié)構(gòu)域序列，其選自i.與圖2中所示的H1-H52的重鏈可變結(jié)構(gòu)域序列具有至少85%的同一性的氨基酸序列；ii.包含圖2中所示的HI-H52的重鏈可變結(jié)構(gòu)域序列的至少25個連續(xù)氨基酸殘基的氨基酸序列；iii.由與圖1中所示的編碼H1-H52的重鏈可變結(jié)構(gòu)域序列的多核苷酸序列具有至少85%的同一性的多核苷酸序列編碼的氨基酸序列；和iv.由多核苷酸序列編碼的氨基酸序列，所述多核苷酸序列在高度嚴緊條件下與由圖1中所示的H1-H52的重鏈可變結(jié)構(gòu)域序列組成的多核苷酸的互補物雜交；或c)(a)的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域和(b)的重鏈可變結(jié)構(gòu)域。22.權(quán)利要求21的分離的抗原結(jié)合蛋白，其包含a.輕鏈可變結(jié)構(gòu)域序列，其選自i.與圖2中所示的L1-L52的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域序列具有至少90%的同一性的氨基酸序列；ii.包含圖2中所示的L1-L52的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域序列的至少35個連續(xù)氨基酸殘基的氨基酸序列；和iii.由與圖1中所示的編碼L1-L52的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域序列的多核香酸序列具有至少90%的同一性的多核苷酸序列編碼的氨基酸序列；和b.重鏈可變結(jié)構(gòu)域序列，其選自i.與圖2中所示的H1-H52的重鏈可變結(jié)構(gòu)域序列具有至少90%的同一性的氨基酸序列；ii.包含圖2中所示的H1-H52的重鏈可變結(jié)構(gòu)域序列的至少35個連續(xù)氨基酸殘基的氨基酸序列；和iii.由與圖1中所示的編碼Hl-H52的重鏈可變結(jié)構(gòu)域序列的多核苷酸序列具有至少90%的同一性的多核苷酸序列編碼的氨基酸序列；或c)(a)的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域和(b)的重鏈可變結(jié)構(gòu)域。23.權(quán)利要求22的分離的抗原結(jié)合蛋白，其包含a.輕鏈可變結(jié)構(gòu)域序列，其選自i.與圖2中所示的L1-L52的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域序列具有至少95%的同一性的氨基酸序列；ii.包含圖2中所示的L1-L52的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域序列的至少50個連續(xù)氨基酸殘基的氨基酸序列；和iii.由與圖1中所示的編碼L1-L52的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域序列的多核苷酸序列具有至少95%的同一性的多核苷酸序列編碼的氨基酸序列；和b.重鏈可變結(jié)構(gòu)域序列，其選自i.與圖2中所示的H1-H52的重鏈可變結(jié)構(gòu)域序列具有至少95%的同一性的氨基酸序列；ii.包含圖2中所示的H1-H52的重鏈可變結(jié)構(gòu)域序列的至少50個連續(xù)氨基酸殘基的氨基酸序列；和iii.由與圖1中所示的編碼H1-H52的重鏈可變結(jié)構(gòu)域序列的多核苷酸序列具有至少95%的同一性的多核苷酸序列編碼的氨基酸序列；或c)(a)的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域和(b)的重鏈可變結(jié)構(gòu)域。24.權(quán)利要求23的分離的抗原結(jié)合蛋白，其包含a.輕鏈可變結(jié)構(gòu)域序列，其選自i.與圖2中所示的L1-L52的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域序列具有至少97%的同一性的氨基酸序列；ii.包含圖2中所示的L1-L52的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域序列的至少75個連續(xù)氨基酸殘基的氨基酸序列；和iii.由與圖1中所示的編碼L1-L52的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域序列的多核苷酸序列具有至少97%的同一性的多核苷酸序列編碼的氨碁酸序列；和b.重鏈可變結(jié)構(gòu)域序列，其選自i.與圖2中所示的H1-H52的重鏈可變結(jié)構(gòu)域序列具有至少97%的同一性的氨基酸序列；ii.包含圖2中所示的H1-H52的重鏈可變結(jié)構(gòu)域序列的至少75個連續(xù)氨基酸殘基的氨基酸序列；和iii.由與圖1中所示的編碼H1-H52的重鏈可變結(jié)構(gòu)域序列的多核苷酸序列具有至少97%的同一性的多核苷酸序列編碼的氨基酸序列；或c)(a)的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域和(b)的重鏈可變結(jié)構(gòu)域。25.權(quán)利要求24的分離的抗原結(jié)合蛋白，其包含a.輕鏈可變結(jié)構(gòu)域序列，其選自i.與圖2中所示的L1-L52的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域序列具有至少99°/。的同一性的氨基酸序列；ii.包含圖2中所示的L1-L52的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域序列的至少90個連續(xù)氨基酸殘基的氨基酸序列；和iii.由與圖1中所示的編碼L1-L52的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域序列的多核苷酸序列具有至少99%的同一性的多核苷酸序列編碼的氨基酸序列；和b.重鏈可變結(jié)構(gòu)域序列，其選自i.與圖2中所示的H1-H52的重鏈可變結(jié)構(gòu)域序列具有至少99%的同一性的氨基酸序列；ii.包含圖2中所示的H1-H52的重鏈可變結(jié)構(gòu)域序列的至少90個連續(xù)氨基酸殘基的氨基酸序列；和iii.由與圖1中所示的編碼H1-H52的重鏈可變結(jié)構(gòu)域序列的多核苷酸序列具有至少99%的同一性的多核苷酸序列編碼的氨基酸序列；或c)(a)的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域和(b)的重鏈可變結(jié)構(gòu)域。26.權(quán)利要求25的分離的抗原結(jié)合蛋白，其包含a.選自圖2中所示的L1-L52的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域序列；b.選自圖3中所示的H1-H52的重鏈可變結(jié)構(gòu)域序列；或c.(a)的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域和(b)的重鏈可變結(jié)構(gòu)域。27.權(quán)利要求26的分離的抗原結(jié)合蛋白，其包含選自下列組合的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域和重鏈可變結(jié)構(gòu)域的組合L1H1、L2H2、L3H3、L4H4、L5H5、L6H6、L7H7、L8H8、L9H9、LIOHIO、LllHll、L12H12、L13H13、L14H14、L15H15、L16H16、L17H17、L18H18、L19H19、L20H20、L21H21、L22H22、L23H23、L24H24、L25H25、L26H26、L27H27、L28H28、L29H29、L30H30、L31H31、L32H32、L33H33、L34H34、L35H35、L36H36、L37H37、L38H38、L39H39、L40H40、L41H41、L42H42、L43H43、L44H44、L45H45、L46H46、L47H47、L48H48、L49H49、L50H50、L51H51和L52H52。28.權(quán)利要求27的分離的抗原結(jié)合蛋白，其還包含a.圖13的K輕鏈恒定序列，b.圖13的IgGl重鏈恒定序列，或c.圖13的K輕鏈恒定序列和圖13的IgGl重鏈恒定序列。29.權(quán)利要求1或權(quán)利要求20的分離的抗原結(jié)合蛋白，當(dāng)結(jié)合IGF-1R時，其a.抑制IGF-1R;b.激活I(lǐng)GF-1R;c.與參照抗體交叉竟?fàn)帉GF-1R的結(jié)合；d.與所述參照抗體結(jié)合相同的IGF-IR的表位；e.結(jié)合IGF-1R，該結(jié)合具有基本上與所述參照抗體相同的Kd;或f.結(jié)合IGF-1R，其解離速率基本上與所述參照抗體相同；其中所述參照抗體包含選自下列組合的輕鏈和重鏈可變結(jié)構(gòu)域序列的組合L1H1、L2H2、L3H3、L4H4、L5H5、L6H6、L7H7、L8H8、L9H9、LIOHIO、LllHll、L12H12、L13H13、L14H14、L15H15、L16H16、L17H17、L18H18、L19H19、L20H20、L21H21、L22H22、L23H23、L24H24、L25H25、L26H26、L27H27、L28H28、L29H29、L30H30、L31H31、L32H32、L33H33、L34H34、L35H35、L36H36、L37H37、L38H38、L39H39、L40謹、L41H41、L42H42、L43H43、L44H44、L45H45、L46H46、L47H47、L48H48、L49H49、L50H50、L51H51和L52H52。30.權(quán)利要求1或權(quán)利要求20的分離的抗原結(jié)合蛋白，當(dāng)與人IGF-1R結(jié)合時，其抑制IGF-1和/或IGF-2對所述人IGF-1R的結(jié)合。31.權(quán)利要求1或權(quán)利要求20的分離的抗原結(jié)合蛋白，所述分離.的抗原結(jié)合蛋白在選自血清、IGF-1和IGF-2的生長剌激物存在的情況下抑制癌細胞的生長高于大約80%。32.權(quán)利要求31的分離的抗原結(jié)合蛋白，其中所述癌細胞是MCF-7人乳腺癌細胞。33.權(quán)利要求1或權(quán)利要求20的分離的抗原結(jié)合蛋白，所述分離的抗原結(jié)合蛋白以高于其對于人胰島素受體的選擇性至少50倍的選擇性結(jié)合人IGF-1R。34.權(quán)利要求1或權(quán)利要求20的分離的抗原結(jié)合蛋白，所述分離的抗原結(jié)合蛋白在體內(nèi)抑制肺瘤的生長。35.權(quán)利要求1或權(quán)利要求20的分離的抗原結(jié)合蛋白，所述分離的抗原結(jié)合蛋白抑制IGF-IR介導(dǎo)的酪氨酸磷酸化。36.權(quán)利要求1或權(quán)利要求20的分離的抗原結(jié)合蛋白，所述分離的抗原結(jié)合蛋白特異性地結(jié)合非人靈長類、食蟹猴、黑猩猩、非靈長類哺乳動物、嚙齒動物、小鼠、大鼠、倉鼠、豚鼠、貓或狗的IGF-1R。37.權(quán)利要求1或權(quán)利要求20的分離的抗原結(jié)合蛋白，其中所述抗原結(jié)合蛋白包括a.人抗體；b.人源化抗體；c.嵌合抗體；d.單克隆抗體；e.多克隆抗體；f.重組抗體；g.抗原結(jié)合抗體片段；h.單鏈抗體；i，雙抗體；j.三抗體；k.四鏈抗體；1.Fab片段；m.F(ab')2片段；n.結(jié)構(gòu)域抗體；o.IgD抗體jp.IgE抗體；(1.IgM抗體；r.IgGl抗體js.IgG2抗體；t.IgG3抗體ju.IgG4抗體j或v.具有至少一個減少形成H鏈內(nèi)二硫鍵的趨勢的鉸鏈區(qū)突變的IgG4抗體。38.分離的多核普酸，該多核苷酸包含編碼權(quán)利要求1或權(quán)利要求20所述的抗原結(jié)合蛋白的輕鏈、重鏈或兩者的序列。39.權(quán)利要求38的分離的多核苷酸，其中所述多核苷酸包含圖1的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域核酸序列和/或圖1的重鏈可變結(jié)構(gòu)域核酸序列。40.包含權(quán)利要求38的所述分離的多核苷酸的質(zhì)粒。41.權(quán)利要求40的質(zhì)粒，其中所述質(zhì)粒是表達載體。42.包含權(quán)利要求38的所述多核苷酸的分離的細胞。43.權(quán)利要求42的分離的細胞，其中所述細胞的染色體包含所述多核苷酸。44.權(quán)利要求42的分離的細胞，其中所述細胞是雜交瘤。45.權(quán)利要求42的分離的細胞，其中表達載體包含所述多核苷46.權(quán)利要求42的分離的細胞，其中所述細胞是CHO細胞。47.制備結(jié)合人IGF-1R的抗原結(jié)合蛋白的方法，其包括在允許其表達所述抗原結(jié)合蛋白的條件下培養(yǎng)權(quán)利要求42的所述分離的細胞。48.包含權(quán)利要求1或權(quán)利要求20的抗原結(jié)合蛋白的藥物組合物。49.在受試者中治療病癥的方法，其包括給所述受試者施用權(quán)利要求48的所述藥物組合物，其中可通過在所述受試者中減少IGF-1R的活性來治療所述病癥。50.權(quán)利要求49的方法，其中所述受試者是人類。51.權(quán)利要求49的方法，其中所述病癥是多發(fā)性骨髄瘤、液體肺瘤、肝癌、胸腺疾病、T細胞介導(dǎo)的自身免疫疾病、內(nèi)分泌紊亂、局部缺血或神經(jīng)變性疾病。52.權(quán)利要求51的方法，其中所述液體腫瘤選自急性淋巴細胞性白血病(ALL)和慢性髓細胞性白血病(CML);其中所述肝癌選自肝癌、肝細胞癌、膽管癌、血管肉瘤、血管肉瘤、肝胚細胞瘤；其中所述胸腺疾病選自胸腺瘤和甲狀腺炎，其中所述T細胞介導(dǎo)的自身免疫疾病選自多發(fā)性硬化癥、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、全身性紅斑狼瘡(SLE)、格雷夫斯病、橋本甲狀腺炎、重癥肌無力、自身免疫性曱狀腺炎、白塞病，其中所述內(nèi)分泌病癥選自II型糖尿病、曱狀腺功能亢進、甲狀腺功能減退、甲狀腺炎、腎上腺皮質(zhì)功能亢進和腎上腺皮質(zhì)功能減退；其中所述局部缺血是心臟梗塞后局部缺血，或其中所述神經(jīng)變性病癥是阿耳茨海默氏病。53.權(quán)利要求49的方法，其中所述病癥選自肢端肥大癥、膀胱癌、腎母細胞瘤、卵巢癌、胰腺癌、良性前列腺增生癥、乳腺癌、前列腺癌、骨癌、肺癌、結(jié)腸直腸癌、子宮頸癌、滑膜肉瘤、與轉(zhuǎn)移類癌瘤相關(guān)的腹瀉、分泌腸道血管活性肽的腫瘤、巨人癥、牛皮癬、動脈粥樣硬化、血管的平滑肌再狹窄、不適當(dāng)?shù)奈⒀茉鲋?、成膠質(zhì)細胞瘤、成神經(jīng)管細胞瘤、頭和頸鱗狀上皮細胞癌、口腔癌、口腔白斑、前列腺上皮內(nèi)贅瘤、肛門癌、食管癌、胃癌、骨癌、轉(zhuǎn)移癌、真性紅細胞增多癥、與氧化應(yīng)激相關(guān)的良性狀況、早產(chǎn)兒視網(wǎng)膜病、急性呼吸窘逸綜合征、對乙酰氨基酚的過度劑量、支氣管肺發(fā)育異常、嚢性纖維化、肺纖維化和糖尿病性視網(wǎng)膜病。54.權(quán)利要求49的方法，所述方法還包括給所述受試者施用第二療法。55.權(quán)利要求54的方法，其中在給所述受試者施用所述藥物組合物之前和/或與此同時和/或之后給所迷受試者施用所述第二療法。56.權(quán)利要求54的方法，其中所述第二療法包括放射療法、手術(shù)或第二藥物組合物。57.權(quán)利要求56的方法，其中所述第二藥物組合物包含藥劑，所述藥劑選自皮質(zhì)類固醇、止吐藥、鹽酸昂丹西瓊、鹽酸格拉司瓊、甲IL氯普胺(metroclopramide)、多潘立酮、氟派吱醇、賽克力嚷、勞柱西泮、丙氯拉溱、地塞米松、左美丙噪、托烷司瓊、癌癥疫苗、GM-CSF,制劑、GM-CSFDNA疫苗、基于細胞的疫苗、樹突細胞疫苗、重組病^疫苗、熱激蛋白(HSP)疫苗、同種異體腫瘤疫苗、自體腫瘤疫苗、止痛劑、布洛芬、萘普生、三水楊酸膽堿鎂、鹽酸羥考酮、抗血管生成劑、抗血管劑、貝伐單抗、抗VEGF抗體、抗VEGF受體抗體、可溶性YEGF受體片段、抗TWEAK抗體、抗TWEAK受體抗體、可溶性TWEAK受體片段、AMG706、AMG386、抗增殖劑、法尼基蛋白轉(zhuǎn)移酶抑制劑、gtvP3抑制劑、avP5抑制劑、p53抑制劑、Kit受體抑制劑、ret受體抑制劑、PDGFR抑制劑、生長激素分泌抑制劑、血管生成素抑制劑、腫瘤浸潤巨噬細胞抑制劑、c-fms抑制劑、抗c-fms抗體、CSF-1抑制劑、抗CSF-1抗體、可溶性c-fms片段、培維索孟、吉西他濱、panitumumab、伊立替康和SN-38。58.權(quán)利要求54的方法，包括給所述受試者施用第三療法。59.杈利要求58的方法，其中所述病癥是癌癥，所述第二療法^括施用panitumumab,且所述第三療法包括施用吉西他濱。60.權(quán)利要求49的方法，其中所述病癥選自肢端肥大癥、膀胱癌、腎母細胞瘤、卵巢癌、胰腺癌、良性前列腺增生、乳腺癌、前列腺癌、骨癌、肺癌、結(jié)腸直腸癌、子宮頸癌、滑膜肉瘤、與轉(zhuǎn)移的類癌瘤相關(guān)^腹瀉、血管活性腸肽分泌型腫瘤、巨人癥、牛皮癬、動脈粥樣硬化、血管的平滑肌再狹窄、不適當(dāng)?shù)奈⒀茉鲋?、成膠質(zhì)細胞瘤、成神經(jīng)管細胞瘤、頭與頸鱗狀上皮細胞癌、口腔癌、口腔白斑、前列腺上皮內(nèi)瘤形成、肛門癌、食管癌、胃癌、骨癌、轉(zhuǎn)移癌、真性紅細胞增多癥、涉及氧化應(yīng)激的良性病癥、早產(chǎn)兒視網(wǎng)膜病、急性呼吸窘迫綜合征、對乙酰氨基酚的過量、支氣管肺發(fā)育異常、嚢性纖維化、肺纖維化和糖尿病性視網(wǎng)膜病。61.增加受試者壽命的方法，其包括給所述受試者施用權(quán)利要求48的所述藥物組合物。62.在需要其的受試者中減少IGF-1R活性的方法，其包括給所述受試者施用權(quán)利要求48的所述藥物組合物。63.在需要其的受試者中減少IGF-1R信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的方法，其包括給所述受試者施用權(quán)利要求48的所述藥物組合物。64.在需要其的受試者中抑制IGF-l和/或IGF-2對IGF-1R的結(jié)合的方法，其包括給所述受試者施用權(quán)利要求48的所述藥物組合物。全文摘要本發(fā)明提供了涉及IGF-1R抗體或來源于其的藥物組合物和方法。在特定的實施方案中，本發(fā)明提供了結(jié)合人IGF-1R的完全人的、人源化的或嵌合的抗IGF-1R抗體、這些抗體的IGF-1R結(jié)合片段和衍生物以及包含這些片段的IGF-1R結(jié)合性多肽。其他實施方案提供了編碼這些抗體、抗體片段和衍生物及多肽的核酸、包含這些核酸的細胞、制備這些抗體、抗體片段和衍生物及多肽的方法和使用這些抗體、抗體片段和衍生物及多肽的方法，包括治療或診斷患有IGF-1R相關(guān)性病癥或疾病的受試者的方法。文檔編號A61P35/00GK101128484SQ200580048584公開日2008年2月20日申請日期2005年12月20日優(yōu)先權(quán)日2004年12月22日發(fā)明者F·J·卡爾佐,R·V·德什潘德,蔡美美申請人:安進公司