專(zhuān)利名稱(chēng)：：用于治療肝性腦病的含有鳥(niǎo)氨酸和苯基乙酸(phenylacetate)或苯基丁酸...的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及對(duì)肝失代償或肝性腦病的預(yù)防和治療。
背景技術(shù)：
：慢性肝病的特征是肝組織隨時(shí)間逐漸遭到破壞，從而導(dǎo)致健康的和再生的肝組織慢慢被瘢痕組織和壞死組織替代。這種現(xiàn)象被認(rèn)為是肝硬化。正常肝功能受到損害，并且瘢痕組織逐漸減少肝內(nèi)血流。正常的再生肝組織損失時(shí)，營(yíng)養(yǎng)物、激素、藥物和毒素就不再有效地得到處理。這就可能導(dǎo)致多種癥狀，包括通過(guò)腸道吸收的蛋白質(zhì)的清除異常導(dǎo)致氨的蓄積；分泌異常導(dǎo)致血液中膽紅素蓄積，產(chǎn)生黃疸；竇壓升高導(dǎo)致腹部液體蓄積(腹水)；以及門(mén)靜脈高血壓(門(mén)體循環(huán)分流)一_其中形成瘢痕的肝組織起到血流屏障的作用一一導(dǎo)致門(mén)靜脈血壓升高和食管靜脈曲張。慢性肝病患者可具有很穩(wěn)定的臨床狀態(tài)，并表現(xiàn)出很少的癥狀或者根本不表現(xiàn)出癥狀。然而，這類(lèi)患者會(huì)有病癥突然惡化的風(fēng)險(xiǎn)，這種惡化可導(dǎo)致慢加急性肝衰竭。這種從肝臟能起作用(即便水平有所降低)的"代償"狀態(tài)到肝臟不能起作用的"失代償"狀態(tài)的轉(zhuǎn)變與^JL事件的作用有關(guān)。與慢性肝病相關(guān)的CJL事件包括胃腸出血、感染(膿毒癥)、門(mén)靜脈血栓形成和脫水。例如，50%的肝硬化患者患有食管靜脈曲張，其中三分之一的患者在確診的兩年內(nèi)會(huì)突然發(fā)生食管靜脈曲張，并導(dǎo)致胃腸出血(GraceND(1992)GastroenterolClinNorthAm21:149-161)。已知上消化道出血可增加對(duì)危及生命的并發(fā)癥的敏感性，所述并發(fā)癥例如細(xì)菌性腹膜炎、膿毒癥、腎衰竭和肝性腦病(Teranetal.(1997)Gastroenterology112:473-482;Gardenetal.(1985)BrJSurg72:91-95;Pauwelsetal.(1996)Hepatology24:802-806;Bleichneretal.(1986)BrJSurg73:724-726),盡管對(duì)出血進(jìn)行了足夠的控制，但仍由此造成約30%的患者死亡(Grace1992，同上)。肝性腦病(HE)是一種發(fā)生于多種臨床條件例如急性或慢性肝病和自發(fā)性門(mén)體靜脈分流中的復(fù)雜神經(jīng)性精神病癥。肝性腦病早期會(huì)發(fā)生些微精神變化例如思維不集中、意識(shí)錯(cuò)亂和定向障礙。在嚴(yán)重的情況下，肝性腦并可導(dǎo)致木僵、昏迷、腦腫脹(腦水腫)和死亡。對(duì)于因慢性肝病而發(fā)生HE的患者，HE的發(fā)病通常是由臨床促發(fā)事件例如胃腸出血、膿毒癥(感染)、門(mén)靜脈血栓形成或脫水造成的結(jié)果。胃腸出血和門(mén)體分流可使通常由肝代謝的毒性物質(zhì)經(jīng)過(guò)肝進(jìn)入體循環(huán)，并跨過(guò)血腦屏障，以對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)產(chǎn)生直接或間接神經(jīng)毒性作用。氨的蓄積被認(rèn)為在肝性腦病和多器官衰竭(呼吸衰竭、心血管衰竭、腎衰竭)的進(jìn)程中具有重要的作用。除氨外，胃腸出血后隨即發(fā)生的敗血癥(或細(xì)菌性腹膜炎)也可能是促發(fā)肝性腦病的一個(gè)因素。由此肝失代償可導(dǎo)致多器官衰竭和肝性腦病。在肝性腦病早期可發(fā)生一些微小的變化，例如思維不集中或不能構(gòu)建簡(jiǎn)單物體。嚴(yán)重的情況下，肝性腦病可導(dǎo)致木僵、昏迷、腦腫脹和死亡。由于慢性肝病存在許多病因，因此很難對(duì)慢性肝病患者的預(yù)后作出估計(jì)。盡量不使代償狀態(tài)向失代償狀態(tài)發(fā)展的預(yù)防性措施包括避開(kāi)會(huì)使疾病惡化的其他致病因素，例如徹底戒酒和針對(duì)曱型和乙型肝炎進(jìn)行接種。然而，一旦發(fā)生肝失代償，生存的幾率就有所下降，而肝移植是唯一可延長(zhǎng)生命的治療方法。由于肝失代償導(dǎo)致壽命縮短，因此十分需要防止肝失代償?shù)陌l(fā)生。對(duì)肝性腦病患者的通常療法包括使氨濃度減小的方法。這些方法包括限制膳食蛋白質(zhì)的攝入,給予乳果糖、新霉素、L-鳥(niǎo)氨酸L-天冬氨酸(LOLA)或苯甲酸鈉，和清潔灌腸。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明涉及苯基乙酸和苯基丁酸中的至少一種以及鳥(niǎo)氨酸用于預(yù)防或治療患者肝失代償或肝性腦病(HE)的用途。對(duì)于因例如胃腸出血而還患有異亮氨酸缺乏的患者還可給予異亮氨酸。因此，本發(fā)明提供一一鳥(niǎo)氨酸用于制備與苯基乙酸和苯基丁酸中的至少一種聯(lián)合使用以預(yù)防或治療肝失代償或肝性腦病的藥物的用途；一一苯基乙酸和苯基丁酸中的至少一種用于制備和鳥(niǎo)氨酸聯(lián)合使用以預(yù)防或治療肝失代償或肝性腦病的藥物的用途；一一苯基乙酸和苯基丁酸中的至少一種以及鳥(niǎo)氨酸用于制備預(yù)防或治療肝失代償或肝性腦病的藥物的用途；一一含有苯基乙酸和苯基丁酸中的至少一種以及鳥(niǎo)氨酸的產(chǎn)品，同時(shí)、分別或相繼使用以預(yù)防或治療肝失代償或肝性腦??；---種含有苯基乙酸和苯基丁酸中的至少一種以及鳥(niǎo)氨酸的藥物組合物；---種用于預(yù)防或治療肝失代償或肝性腦病的藥劑，含有苯基乙酸和苯基丁酸中的至少一種以及鳥(niǎo)氨酸；和---種治療肝失代償或肝性腦病患者或具有肝失代償或肝性腦病患病風(fēng)險(xiǎn)的患者的方法，所述方法包括向所述患者給予有效量的苯基乙酸和苯基丁酸中的至少一種以及鳥(niǎo)氨酸。圖l表示硬變患者的嗜中性粒細(xì)胞功能發(fā)生改變，并隨肝病加重而惡化。圖2表示氨減弱嗜中性粒細(xì)胞的吞噬作用。圖3表示氨減弱嗜中性粒細(xì)胞的趨化作用。圖4表示氨對(duì)嗜中性粒細(xì)胞的吞噬作用的影響可通過(guò)干預(yù)而得到逆轉(zhuǎn)。圖5表示模擬的胃腸出血可減弱嗜中性粒細(xì)胞的趨化作用，所述趨化作用的減弱可通過(guò)給予異亮氨酸而#:部分逆轉(zhuǎn)。圖6表示模擬的出血減少蛋白質(zhì)合成并不適當(dāng)?shù)卮碳ぎ惲涟彼岬难趸?。圖7表示在模擬的出血過(guò)程中給予異亮氨酸可增強(qiáng)蛋白質(zhì)合成，但不降低氨濃度。圖8表示給予LOLA可降低氨濃度但會(huì)使氨再生。圖9表示主動(dòng)除去谷氨酰胺可防止氨濃度再次升高。圖10表示苯基乙酸與谷氨酰胺結(jié)合從而生成可分泌化合物，并且苯基乙酸預(yù)防氨再次增加。圖ll表示鳥(niǎo)氨酸和苯基丁酸對(duì)晚期硬變患者的氨水平的影響。圖12表示鳥(niǎo)氨酸和苯基丁酸對(duì)晚期硬變患者的谷氨酰胺水平的影響。圖13表示用安慰劑、0、P或0+P治療的患者的精神狀態(tài)的變化。圖14表示鳥(niǎo)氨酸、苯基丁酸和異亮氨酸對(duì)晚期硬變患者的氨水平的影響。圖15表示鳥(niǎo)氨酸、苯基丁酸和異亮氨酸對(duì)晚期硬變患者的谷氨酰胺水平的影響。圖16表示鳥(niǎo)氨酸、苯基丁酸和異亮氨酸對(duì)晚期硬變患者的甘氨酸水平的影響。圖17表示鳥(niǎo)氨酸、苯基丁酸和異亮氨酸對(duì)晚期硬變患者的異亮氨酸水平的影響。圖18表示鳥(niǎo)氨酸、苯基丁酸和異亮氨酸對(duì)晚期硬變患者的鳥(niǎo)氨酸水平的影響。圖19表示在膽管結(jié)扎大鼠模型中，鳥(niǎo)氨酸和苯基丁酸對(duì)動(dòng)脈中氨的影響。圖20表示在膽管結(jié)扎大鼠模型中，鳥(niǎo)氨酸和苯基丁酸對(duì)血漿中鳥(niǎo)氨酸的影響。圖21表示在高血氨急性肝衰竭大鼠模型中，鳥(niǎo)氨酸、苯基丁酸和異亮氨酸對(duì)動(dòng)脈血漿氨水平的影響。圖22表示在用OP治療急性肝衰竭的血行阻斷豬模型中，動(dòng)脈氨水平的增加程度變小。圖23表示在0和OP治療的動(dòng)物中，通過(guò)肌肉去除血氨(從股靜脈-股動(dòng)脈中取樣)。相比之下，使用安慰劑和單獨(dú)使用P的動(dòng)物表現(xiàn)出肌肉產(chǎn)生的氨增加。圖24表示在除0P治療的動(dòng)物之外的所有動(dòng)物中，消化道產(chǎn)生氨(從門(mén)靜脈排流組織(portaldrainedviscera)-動(dòng)l^樣)。圖25表示單獨(dú)使用0增加了肌肉谷氨酰胺的釋放，但單獨(dú)使用P并不使之增加。OP使得肌肉谷氨酰胺顯著更多地釋放(由此以肌肉中谷氨酰胺的形式捕獲氨)。圖26表示0增強(qiáng)消化道對(duì)谷氨酰胺的吸收，但0P使其吸收減少(由此減少消化道中產(chǎn)生的氨)。圖27表示在給藥的兩組動(dòng)物(單獨(dú)給予0的組和給予0P的組)中，動(dòng)脈鳥(niǎo)氨酸水平升高。圖28表示使用0時(shí)動(dòng)脈谷氨酰胺水平升高，但使用0P時(shí)該水平升高較少。圖29表示聯(lián)合使用OP可防止氨源M酸甘氨酸的增加。圖30表示單獨(dú)使用鳥(niǎo)氨酸可造成腦積水增加，苯基乙酸誘導(dǎo)腦積水減少的程度很小，但將這些藥劑聯(lián)合就顯著減少腦積水(對(duì)照％)。具體實(shí)施例方式本說(shuō)明書(shū)和隨附的權(quán)利要求書(shū)通篇中的詞語(yǔ)"包含"和"包括"及其變化形式例如"包含了"、"包含有"、"包括了"、"含有"均做非排他性解釋。也就是，這些詞語(yǔ)意在表示可能包括未明確述及的但上下文所允許的其他要素或整數(shù)。本發(fā)明涉及在發(fā)展成肝失代償之前以及在由此而發(fā)生肝性腦病之前，為預(yù)防或延遲肝失代償發(fā)病而對(duì)肝病患者進(jìn)行的早期治療。此外，本發(fā)明涉及通過(guò)有效減少氨濃度和維持嗜中性粒細(xì)胞功能來(lái)對(duì)肝性腦病進(jìn)行的治療。凈甜被財(cái)本發(fā)明涉及預(yù)防或治療肝失代償或肝性腦病。因此受試者的肝應(yīng)處于代償狀態(tài)。受試者可患有慢性肝病。受試者可患有肝硬化。受試者可患有急性肝衰竭。待治療的受試者可患有肝性腦病。急性和慢性肝病的發(fā)病可歸因于異生物因素。例如受試者可能已暴露于某種造成肝損害的化學(xué)物質(zhì)、藥物或一些其他藥劑。受試者可能對(duì)導(dǎo)致肝損害的非處方藥、處方藥或"消閑性"藥物有反應(yīng)。受試者可能服用了Rezulin頂(曲格歹'J酉同；Parke一Davis)、Serzone(奈、法峻嗣；Bristol—MyersSquibb)或者其他被認(rèn)為導(dǎo)致肝損害的藥物。受試者可能服用了過(guò)量的特定藥物或服用了超過(guò)推薦劑量的、可導(dǎo)致肝損害的藥物。例如受試者可能服用了過(guò)量的對(duì)乙酰氨基酚。受試者可能例如在他們的工作地點(diǎn)已暴露于可導(dǎo)致肝損害的化學(xué)物質(zhì)。例如，受試者可能在工業(yè)或農(nóng)業(yè)環(huán)境中已暴露于這類(lèi)化學(xué)物質(zhì)。受試者可能已攝入了含有可導(dǎo)致肝損害的化合物的植物，尤其當(dāng)受試者是動(dòng)物例如食草動(dòng)物時(shí)可能發(fā)生這種情況。例如，受試者可能攝入了含有吡咯聯(lián)啶生物堿的植物例如美狗舌草。受試者可能已暴露于被認(rèn)為會(huì)導(dǎo)致肝病的環(huán)境毒素。藥物相關(guān)肝毒性造成所有急性肝病(急性肝衰竭)病例的50%以上。在美國(guó)和英國(guó)，樸熱息痛(也稱(chēng)為對(duì)乙酰氨基酚和舲乙酰對(duì)氨基苯酚)毒性是引起急性肝衰竭的最常見(jiàn)原因。服用治療量或稍微過(guò)量樸熱息痛的長(zhǎng)期中重度飲酒者具有患嚴(yán)重肝損傷和可能為急性的肝衰竭的風(fēng)險(xiǎn)。飲酒可增強(qiáng)樸熱息痛的毒性作用。特應(yīng)性藥物毒性也會(huì)引起急性肝衰竭。特應(yīng)性藥物毒性被認(rèn)為是一種超敏反應(yīng)，在這種反應(yīng)中受試者是以異常的藥理學(xué)方式產(chǎn)生對(duì)藥物的反應(yīng)。這種異常反應(yīng)可導(dǎo)致急性肝衰竭。急性肝衰竭或慢性肝病可以是由病原微生物感染所致。例如，肝病可以是由病毒感染所致的。尤其地，受試者可能被或已被導(dǎo)致肝炎的病毒感染。受試者可能患有慢性病毒性肝炎。所述病毒可以是例如乙型、丙型或丁型肝炎病毒。在某些情況下，尤其在受試者患有病毒性肝炎的情況下，該受試者還可被HIV-I或n感染。受試者可以是AIDS患者。受試者可能已被或?qū)⒈黄渌麑?dǎo)致肝病的微生物、尤其是那些在其生命周期的某些階段存在于肝中的微生物感染。例如，受試者中可能有或已有肝吸蟲(chóng)。受試者可患有導(dǎo)致慢性肝病或增加患慢性肝病風(fēng)險(xiǎn)的遺傳性疾病。例如受試者可患有肝血色素沉著病、威爾遜(氏)病或a-1-抗胰蛋白酶缺乏癥中的一種或多種疾病。受試者可患有導(dǎo)致某種肝結(jié)構(gòu)或功能異常的遺傳性病癥，所述肝結(jié)構(gòu)或功能異常增加了肝纖維化的幾率。受試者可在遺傳上易發(fā)生損害肝并因此引起肝纖維化的自身免疫性疾病。慢性肝病可以是酒精誘導(dǎo)的。待治療的男性或女性可能是或已是飲酒者。他或她可能或已經(jīng)每周平均攝入50或50單位以上的酒精、每周60或60單位以上的酒精、每周75或75單位以上的酒精甚至是每周100或100單位以上的酒精。該男性或女性可能或者已經(jīng)每周平均攝入最多達(dá)100單位的酒精，每周最多達(dá)150單位的酒精，甚至每周最多達(dá)200單位的酒精。酒精的一個(gè)單位的量度各國(guó)不一。本文中，根據(jù)聯(lián)合王國(guó)標(biāo)準(zhǔn)，一個(gè)單位等于8克乙醇。男性或女性攝入上述水平的酒精可已有5年或多于5年、10年或多于10年，15年或多于15年，或者20年或多于20年。受試者才聶入上述水平的酒精可已達(dá)最多10年、最多20年、最多30年以及甚至最多40年。對(duì)于酒精誘導(dǎo)的肝硬化，受試者可以為例如25歲或25歲以上、35歲或35歲以上、45歲或45歲以上或甚至60歲以上。受試者可以是男性或女性。女性對(duì)酒精的不良作用可能比男性更敏感。相對(duì)男性而言，女性可在更短的時(shí)間段內(nèi)，由更少量的酒精產(chǎn)生酒精性慢性肝病。造成女性對(duì)酒精性肝損害的敏感性更高的原因似乎不是唯一的，但激素對(duì)酒精代謝的影響可能具有重要的作用。在本發(fā)明的其他實(shí)施方案中，受試者患有許多已知會(huì)造成肝損害的其他疾病的一種或多種，所述疾病例如為原發(fā)性膽汁性肝硬變、自身免疫性慢性活動(dòng)性肝炎和/或血吸蟲(chóng)病(寄生蟲(chóng)感染)。受試者可能將患有或已患有膽管阻塞。在某些情況下可能并不知曉導(dǎo)致慢性肝病的潛在原因。例如受試者可能已被診斷為原因不明的硬變。在一個(gè)實(shí)施方案中，受試者可被懷疑患有本文所列的任意疾病。診斷慢性肝病、急性肝衰竭和肝性腦病的方法為本領(lǐng)域所熟知，尤其對(duì)于本領(lǐng)域的臨床醫(yī)師和獸醫(yī)而言是熟知的。優(yōu)選地，受試者將被例如醫(yī)學(xué)或獸醫(yī)專(zhuān)業(yè)人員診斷為患有肝病或肝性腦病。受試者可表現(xiàn)出一種或多種與肝病相關(guān)的癥狀，例如一種或多種下述癥狀黃疸、腹水、皮膚改變、液體潴留、指(趾)曱改變、易挫傷、鼻出血、食管靜脈曲張，并且男性受試者可能會(huì)有乳房增大。受試者可表現(xiàn)出虛脫、疲勞、厭食、惡心、虛弱和/或體重減輕。受試者還可表現(xiàn)出一種或多種與肝性腦病相關(guān)的癥狀，例如一種或多種以下癥狀意識(shí)錯(cuò)亂、定向障礙、癡呆、木僵、昏迷、腦水腫、多器官衰竭(呼吸衰竭、心血管衰竭或腎衰竭)、肌強(qiáng)直/肌肉強(qiáng)直、癲癇發(fā)作或言語(yǔ)障礙。待治療的受試者可能正在服用或未服用治療肝病的其他藥物。待治療的受試者可具有患肝性腦病的風(fēng)險(xiǎn)。肝病可能已經(jīng)通過(guò)或?qū)⑼ㄟ^(guò)包括例如超聲技術(shù)在內(nèi)的生理檢查證實(shí)?？蛇M(jìn)行肝臟活組織檢查以查明積累的纖維化、壞死細(xì)胞、細(xì)胞變性和/或炎癥以及肝病的其他特有特征?？稍谑茉囌咧羞M(jìn)行肝功能評(píng)價(jià)，以確定受試者中是否發(fā)生肝功能損害。肝病的性質(zhì)和潛在病因可得到表征。暴露于肝病致病因素的任何病史均可被確定。待治療的受試者可為有肝性腦病發(fā)作風(fēng)險(xiǎn)的患者，例如等待肝移植、外科手術(shù)的患者和/或門(mén)靜脈高壓的患者。具有肝性腦病發(fā)作風(fēng)險(xiǎn)的人是這樣一種人他未經(jīng)歷任何肝性腦病發(fā)作，或者在較長(zhǎng)一段時(shí)間(約12周或更長(zhǎng))內(nèi)未經(jīng)歷肝性腦病發(fā)作，但患有某種產(chǎn)生肝性腦病發(fā)作風(fēng)險(xiǎn)的疾病或醫(yī)學(xué)病癥。肝性腦病發(fā)作是一種臨床疾病，其特征為肝病或肝功能障礙患者存在腦功能障礙。肝性腦病中存在許多種精神紊亂，輕則其主要影響為降低生活質(zhì)量，重則可導(dǎo)致昏迷并最終至死亡?？墒褂迷u(píng)分系統(tǒng)對(duì)肝病與肝性腦病的嚴(yán)重性和對(duì)受試者的預(yù)后進(jìn)行評(píng)價(jià)?？刹捎肅hild-Pugh、WestHaven標(biāo)準(zhǔn)、格拉斯哥昏迷評(píng)分(GlasgowComaScale)或改進(jìn)的Child-Pugh評(píng)分系統(tǒng)?；蛘撸刹捎?APACHE)n評(píng)分系統(tǒng)。對(duì)包括血清膽紅素水平、血清清蛋白水平等的參數(shù)和包括存在腹水或腦病等的征候分配分?jǐn)?shù)。待治療的受試者可分為Child-Pugh評(píng)分系統(tǒng)的A、B或C等級(jí)。通常待治療的受試者被歸為Child-Pugh評(píng)分系統(tǒng)的C等級(jí)。待治療的男性或女性年齡可在例如25至80歲。在一個(gè)實(shí)施方案中，該男性或女性為45至70歲。在另一個(gè)實(shí)施方案中，該男性或女性為25至44歲。在再一個(gè)實(shí)施方案中，該男性或女性為65歲以上。但是，本發(fā)明還確實(shí)具有獸醫(yī)用途。待治療的受試者可以是養(yǎng)殖動(dòng)物例如母?；蚬?、綿羊、豬、牛、山羊或馬，或者可以是馴養(yǎng)動(dòng)物例如狗或貓。受試者是否為肝病動(dòng)物模型均可。動(dòng)物可以是任何年齡的，但通常應(yīng)是發(fā)育成熟的成年受試者。斧M本發(fā)明所使用的氬基酸可以是純的晶體氨基酸。一般而言，氨基酸為L(zhǎng)型而非D型，或者是D和L的混合物。通常使用分離形式的氛基酸。可使用任何活性形式的氨基酸以預(yù)防或治療肝失代償或肝性腦病?？墒褂每伤幱眯问降陌被?。使用的氛基酸可以是游離的氨基酸或者氨基酸鹽或衍生物。鳥(niǎo)氨酸可以是純的晶體氨基酸形式。一般而言，鳥(niǎo)氨酸為L(zhǎng)型而非D型，或者為D和L的混合物。通常使用分離形式的鳥(niǎo)氨酸?？墒褂萌魏位钚孕问降镍B(niǎo)氨酸或可藥用形式的鳥(niǎo)氨酸。使用的鳥(niǎo)氨酸可以是游離的氨基酸或者氨基酸鹽或衍生物。通常，鳥(niǎo)氨酸以單一單體氨基酸形式使用。可使用鹽形式的鳥(niǎo)氨酸，例如可使用鳥(niǎo)氨酸鹽酸鹽。鳥(niǎo)氨酸可為游離形式的生理上可接受的鹽。因此鳥(niǎo)氨酸或鳥(niǎo)氨酸鹽通常并不與任何其他藥劑進(jìn)行化學(xué)鍵合或共價(jià)連接?？墒褂螟B(niǎo)氨酸的衍生物。例如可以給予鈉鹽或鈣鹽形式的鳥(niǎo)氨酸的酮基或羥基類(lèi)似物。鳥(niǎo)氨酸的酮酸包括鳥(niǎo)氨酸酮戊二酸鹽、鳥(niǎo)氨酸酮亮氨酸和鳥(niǎo)氨酸酮纈氨酸。可使用鳥(niǎo)氨酸的鹽或衍生物以替代游離鳥(niǎo)氨酸，或同時(shí)使用游離鳥(niǎo)氨酸。可使用苯基乙酸和苯基丁酸中的至少一種。苯基乙酸和/或苯基丁酸可為生理上可接受的鹽形式，例如堿金屬或堿土金屬鹽。所述鹽可以是苯基乙酸鈉或苯基丁酸鈉。苯基乙酸和苯基丁酸的鹽形式可以是游離的形式。因此苯基乙酸和苯基丁酸或者苯基乙酸鹽和苯基丁酸鹽通常不與任何其他藥劑進(jìn)行化學(xué)鍵合或者共價(jià)連接。任選使用異亮氨酸。異亮氨酸可為純的晶體氨基酸形式。一般而言，異亮氨酸為L(zhǎng)型而非D型，或D和L的混合物。通常使用分離形式的異亮氨酸?？墒褂萌魏位钚孕问降漠惲涟彼峄蛘呖墒褂每伤幱眯问降漠惲涟彼?。使用的異亮氨酸可以是游離的氨基酸或氨基酸鹽或衍生物。通常，異亮氨酸以單一單體氨基酸形式使用?？墒褂名}形式的異亮氨酸，例如可使用異亮氨酸鹽酸鹽。異亮氨酸可為游離形式的生理上可接受的鹽。因此異亮氨酸或異亮氨酸鹽通常并不與任何其他藥劑進(jìn)行化學(xué)鍵合或共價(jià)連接。通常用可藥用載體或稀釋劑配制用于給藥的鳥(niǎo)氨酸和苯基乙酸和/或苯基丁酸。因此，可用制藥領(lǐng)域常規(guī)的一種或多種標(biāo)準(zhǔn)可藥用載體和/或賦形劑，將鳥(niǎo)氨酸和苯基乙酸和/或苯基丁酸配制成一種藥物。制劑的確切性質(zhì)將依賴(lài)于包括所需給藥途徑在內(nèi)的多種因素。通常將鳥(niǎo)氨酸和苯基乙酸和/或苯基丁酸配制成用于口服、靜脈內(nèi)、胃內(nèi)、血管內(nèi)或腹膜內(nèi)給一所述藥物載體或稀釋劑例如可為等滲溶液例如生理鹽水。固體口服形式中除活性化合物外還可含有稀釋劑例如乳糖、葡萄糖、蔗糖、纖維素、玉米淀粉或馬鈴薯淀粉等；潤(rùn)滑劑例如二氧化硅、滑石、硬脂酸、硬脂酸鎂或硬脂酸鈣和/或聚乙二醇；黏合劑例如淀粉、阿拉伯膠、明膠、曱基纖維素、羧曱基纖維素或聚乙烯吡咯烷酮；崩解劑例如淀粉、海藻酸、海藻酸鹽或羥乙酸淀粉鈉；泡騰混合物；染料；甜味劑；濕潤(rùn)劑例如卵磷脂、聚山梨酯、硫酸月桂酯；以及藥物制劑中通常使用的無(wú)毒無(wú)藥理學(xué)活性的物質(zhì)。這類(lèi)藥物制劑可通過(guò)已知方式制備，例如通過(guò)混合、制粒、壓片、糖包衣或膜包衣過(guò)程制備?？诜后w分散系可以是糖漿劑、乳劑或懸浮劑。糖漿可含有作為載體的例如蔗糖，或者蔗糖與甘油和/或甘露醇和/或山梨糖醇。懸浮劑和乳劑可含有作為載體的例如天然樹(shù)膠、瓊脂、海藻酸鈉、果膠、曱基纖維素、羧曱基纖維素或聚乙烯醇。肌內(nèi)注射用的懸浮劑或溶液除含苯基乙酸和苯基丁酸中的至少一種和鳥(niǎo)氨酸外，還可含有可藥用載體，例如無(wú)菌水、橄欖油、油酸乙酯、二醇例如丙二醇，若需要，還可含適量的利多卡因鹽酸鹽。本發(fā)明的藥物可含有鳥(niǎo)氨酸作為唯一的氨基酸組分。本發(fā)明的藥物可含有鳥(niǎo)氨酸和異亮氨酸作為僅有的氨基酸組分。藥物可基本上由苯基乙酸和苯基丁酸中的至少一種以及鳥(niǎo)氨酸組成。藥物可基本上由苯基乙酸和苯基丁酸中的至少一種、鳥(niǎo)氨酸和異亮氨酸組成。藥物可基本上由鳥(niǎo)氨酸、苯基乙酸和/或苯基丁酸以及可藥用載體組成。因此這類(lèi)藥物除鳥(niǎo)氨酸外基本上不含其他氨基酸。藥物可基本上可由鳥(niǎo)氨酸、異亮氨酸、苯基乙酸和/或苯基丁酸以及可藥用載體組成。因此這類(lèi)藥物除含鳥(niǎo)氨酸和異亮氨酸外，基本上不含其他氨基酸。存在的苯基乙酸的量按重量計(jì)算可為鳥(niǎo)氨酸重量的5%-100%，例如10%-50%或20%-40%。存在的苯基丁酸的量按重量計(jì)算可為鳥(niǎo)氨酸重量的5%-100%,例如10%-50%或20%-40%。然而，藥物可含有非肽形式的游離天冬氨酸、谷氨酸或精氨酸，它們通常以非顯著量存在。一般，按重量計(jì)算的天冬氨酸、谷氨酸或精氨酸的量不超過(guò)按重量計(jì)算的鳥(niǎo)氨酸的量。非顯著量意為按重量計(jì)算的天冬氨酸、谷氨酸或精氨酸或者這些氨基酸的組合的量不超過(guò)鳥(niǎo)氨酸重量的20%。因此，藥物基本上不含天冬氨酸。在一個(gè)實(shí)施方案中，組合物不含天冬氨酸、谷氨酸或精氨酸。組合物中可存在痕量的天冬氨酸、谷氨酸或精氨酸。痕量意為按重量計(jì)算的天冬氨酸、谷氨酸或精氨酸或者這些氨基酸的組合的量不超過(guò)鳥(niǎo)氨酸重量的1%。優(yōu)選地，天冬氨酸、谷氨酸或精氨酸按重量計(jì)算的量不超過(guò)鳥(niǎo)氨酸重量的0.5%。在另一個(gè)實(shí)施方案中，組合物還可含有其他非肽形式的氨基酸，通常為游離氨基酸或其生理上可接受的鹽的游離形式。上述其他氨基酸的量按重量計(jì)通常不超過(guò)鳥(niǎo)氨酸的量。例如，存在的其他氨基酸的量按重量計(jì)最高達(dá)鳥(niǎo)氨酸重量的20%，例如為鳥(niǎo)氨酸重量的5%-20%?？纱嬖谟诮M合物中的上述其他氨基酸包括必需氨基酸和非必需氨基酸。組合物可含有其他支鏈氨基酸(BCAA)。BCAA包括異亮氨酸、纈氨酸和亮氨酸。因此，本發(fā)明的組合物可進(jìn)一步含有異亮氨酸和/或纈氨酸和/或亮氨酸。甜將苯基乙酸和苯基丁酸中的至少一種與鳥(niǎo)氨酸聯(lián)合給予受試者以預(yù)防或延遲肝失代償或肝性腦病的發(fā)病。因此可聯(lián)合給予苯基乙酸和苯基丁酸中的至少一種以及鳥(niǎo)氨酸以改善受試者例如在促發(fā)事件之后患慢性肝病的受試者的狀況?？陕?lián)合給予苯基乙酸和苯基丁酸中的至少一種以及鳥(niǎo)氨酸以緩解受試者的癥狀，例如與受試者促發(fā)事件之后的慢性肝病相關(guān)的癥狀?？陕?lián)合給予苯基乙酸和苯基丁酸中的至少一種以及鳥(niǎo)氨酸以對(duì)抗或延遲肝失代償或肝性腦病的發(fā)病?？蓪⒈交宜岷捅交∷嶂械闹辽僖环N以及鳥(niǎo)氨酸聯(lián)合給予受試者以治療肝性腦病。可聯(lián)合給予苯基乙酸和苯基丁酸中的至少一種以及鳥(niǎo)氨酸以改善肝性腦病患者的狀況?？陕?lián)合給予苯基乙酸和苯基丁酸中的至少一種以及鳥(niǎo)氨酸以緩解與肝性腦病相關(guān)的癥狀?？陕?lián)合給予苯基乙酸和苯基丁酸中的至少一種以及鳥(niǎo)氨酸以對(duì)抗肝性腦病?？陕?lián)合給予苯基乙酸和苯基丁酸中的至少一種以及鳥(niǎo)氨酸以預(yù)防具有肝性腦病發(fā)作風(fēng)險(xiǎn)的人的初始肝性腦病發(fā)作?？陕?lián)合給予苯基乙酸和苯基丁酸中的至少一種以及鳥(niǎo)可聯(lián)合給予i基乙酸和苯基丁酸中的至少一;以及鳥(niǎo)氨酸以延遲具有肝性腦病發(fā)作風(fēng)險(xiǎn)的人的初始肝性腦病發(fā)作。肝失代償和肝性腦病的發(fā)展與"促發(fā)事件"(或"急性發(fā)病")有關(guān)。這類(lèi)促發(fā)事件包括胃腸出血、感染(膿毒癥)、門(mén)靜脈血栓形成和脫水。這類(lèi)急性發(fā)病可能導(dǎo)致住院?；颊呖赡芙?jīng)受某種這類(lèi)急性發(fā)病或者這類(lèi)急性發(fā)病的組合。根據(jù)本發(fā)明，聯(lián)合鳥(niǎo)氨酸與苯基乙酸和/或苯基丁酸來(lái)治療經(jīng)歷過(guò)或疑似經(jīng)歷過(guò)急性發(fā)病的受試者，以預(yù)防肝向失代償狀態(tài)發(fā)展。因此本發(fā)明可預(yù)防肝失代償?shù)尼t(yī)學(xué)后果，例如肝性腦病。鳥(niǎo)氨酸與苯基乙酸和/或苯基丁酸可用于維持肝功能。因此，使用鳥(niǎo)氨酸和苯基乙酸和/或苯基丁酸可延長(zhǎng)肝病患者的壽命。在一個(gè)實(shí)施方案中，防止了胃腸出血的代謝性后果，例如出血期后的高血氨、低異亮氨酸血癥和蛋白質(zhì)合成減少。通常，對(duì)受試者的治療可在發(fā)生或疑似發(fā)生促發(fā)事件(急性發(fā)病)時(shí)盡快開(kāi)始。優(yōu)選在反復(fù)急性發(fā)病前就對(duì)受試者開(kāi)始治療。更優(yōu)選地，在第一次急性發(fā)病后對(duì)受試者開(kāi)始治療。通常在急性發(fā)病開(kāi)始后隨即給予治療?？稍卺t(yī)務(wù)人員例如醫(yī)師、急救醫(yī)士或護(hù)士檢測(cè)出急性發(fā)病或疑似急性發(fā)病的癥狀之后開(kāi)始治療?？稍谑茉囌咦≡汉罅⒓撮_(kāi)始治療。因此，可在檢測(cè)出急性發(fā)病或疑似急性發(fā)病癥狀后6小時(shí)內(nèi)、3小時(shí)內(nèi)、2小時(shí)內(nèi)或1小時(shí)內(nèi)開(kāi)始治療。因此，可在檢測(cè)出了急性發(fā)病或疑似急性發(fā)病的癥狀1至48小時(shí)，例如1-36小時(shí)或1-24小時(shí)后開(kāi)始對(duì)受試者的治療?？稍跈z測(cè)出急性發(fā)病或疑似急性發(fā)病后，進(jìn)行最多達(dá)8周，例如最多達(dá)6周、最多達(dá)4周或最多達(dá)2周的治療。因此可在檢測(cè)出急性發(fā)病或疑似急性發(fā)病后，進(jìn)行最多達(dá)48小時(shí)，例如最多達(dá)36小時(shí)或最多達(dá)24小時(shí)的治療。通常治療進(jìn)行到從急性促發(fā)事件中明顯得到恢復(fù)的時(shí)候。用鳥(niǎo)氨酸和苯基乙酸和/或苯基丁酸治療受試者?？梢詥我坏乃幬镄问铰?lián)合給予苯基乙酸和苯基丁酸中的至少一種以及鳥(niǎo)氨酸，或者以?xún)煞N或三種不同藥物的形式獨(dú)立給予。當(dāng)以組合的藥物形式給予苯基乙酸和苯基丁酸中的至少一種以及鳥(niǎo)氨酸時(shí)，可在制好組合物后立即給藥，或者可以以組合藥物的形式貯藏。當(dāng)獨(dú)立地給予鳥(niǎo)氨酸與苯基乙酸和/或苯基丁酸時(shí)，可在一段時(shí)間內(nèi)同時(shí)或相繼給藥。可在一段時(shí)間內(nèi)獨(dú)立地給予兩種或三種的藥物。當(dāng)給予兩種藥物時(shí)，可先給予鳥(niǎo)氨酸，然后給予苯基乙酸和苯基丁酸、苯基乙酸或苯基丁酸?；蛘?，可先給予苯基乙酸和苯基丁酸、苯基乙酸或苯基丁酸，然后給予鳥(niǎo)氨酸。在另一個(gè)實(shí)施方案中，先聯(lián)合給予鳥(niǎo)氨酸和苯基乙酸，然后再給予苯基丁酸?；蛘撸嚷?lián)合給予鳥(niǎo)氨酸和苯基丁酸，然后給予苯基乙酸。在另一個(gè)實(shí)施方案中，可先給予苯基乙酸，然后聯(lián)合給予鳥(niǎo)氨酸和苯基丁酸?；蛘撸冉o予苯基丁酸，然后聯(lián)合給予鳥(niǎo)氨酸和苯基乙酸。當(dāng)給予三種藥物時(shí)，可在不同的時(shí)間分別給予鳥(niǎo)氨酸、苯基乙酸和苯基丁酸。鳥(niǎo)氨酸可最先給予，或其次給予，或在最后給予。當(dāng)首先給予鳥(niǎo)氨酸時(shí)，可其次給予苯基乙酸或苯基丁酸，之后再給予苯基丁酸或苯基乙酸。當(dāng)其次給予鳥(niǎo)氨酸時(shí)，可首先給予苯基乙酸或苯基丁酸，再次再給予苯基丁酸或苯基乙酸。當(dāng)最后給予鳥(niǎo)氨酸時(shí)，可首先給予苯基乙酸或苯基丁酸，之后給予苯基丁酸或苯基乙酸。可在給予第一種藥物最長(zhǎng)達(dá)5小時(shí)例如最長(zhǎng)達(dá)2小時(shí)或最長(zhǎng)達(dá)l小時(shí)后給予第二種藥物。因此可在給予第一種藥物15分鐘-5小時(shí)后，例如30分鐘-4小時(shí)或1小時(shí)-3小時(shí)后給予第二種藥物。可在給予第二種藥物最長(zhǎng)達(dá)5小時(shí)例如最長(zhǎng)達(dá)2小時(shí)或最長(zhǎng)達(dá)1小時(shí)后給予第三種藥物。因此可在給予第二種藥物15分鐘-5小時(shí)后，例如30分鐘-4小時(shí)或l小時(shí)-3小時(shí)后，給予第三種藥物?？稍谙嗤课换虿煌课唤o予本發(fā)明的藥物?？赏╥t^目同途徑或不同途徑給予本發(fā)明的藥物?？赏ㄟ^(guò)任何合適的途徑給予本發(fā)明的藥物。優(yōu)選通過(guò)口服、靜脈內(nèi)、胃內(nèi)、腹膜內(nèi)或血管內(nèi)途徑給藥。例如，當(dāng)分別給予苯基乙酸和苯基丁酸中的至少一種以及鳥(niǎo)氨酸時(shí)，它們均可口服或它們均可靜脈內(nèi)給藥，或者鳥(niǎo)氨酸可口服給藥，而苯基乙酸和/或苯基丁酸可靜脈內(nèi)給藥，或者苯基乙酸和/或苯基丁酸可口服給藥，而鳥(niǎo)氨酸可靜脈內(nèi)給藥。向受試者給予治療有效量的鳥(niǎo)氨酸、苯基乙酸和/或苯基丁酸以及任選的異亮氨酸。鳥(niǎo)氨酸、苯基乙酸和/或苯基丁酸以及異亮氨酸的劑量可根據(jù)各種參數(shù)確定，所述參數(shù)例如待治療的受試者的年齡、體重和病癥；肝病的類(lèi)型和嚴(yán)重程度；給藥途徑和所需的治療方案。鳥(niǎo)氨酸的常規(guī)劑量、苯基乙酸或苯基丁酸的常規(guī)劑量或者異亮氨酸的常規(guī)劑量為約0.02-1.25g/kg體重，例如0.1-0.5g/kg體重，具體根據(jù)上述參數(shù)而定。因此，鳥(niǎo)氨酸的劑量、苯基乙酸或苯基丁酸的劑量或者異亮氨酸的劑量可為1-50g，例如5-30g。鳥(niǎo)氨酸的劑量可為10至30g。異亮氨酸的劑量可為5-15g。鳥(niǎo)氨酸與苯基乙酸/苯基丁酸可以以10:1-1:IO的重量比進(jìn)行給藥，例如重量比為5:1-1:5或2:l-l:2或約1:1。醫(yī)師可針對(duì)任意具體的患者確定所需的鳥(niǎo)氨酸與苯基乙酸或苯基丁酸以及任選的異亮氨酸的劑量?？山o予單劑量的鳥(niǎo)氨酸和單劑量的苯基乙酸和/或苯基丁酸。任選地，還可給予單劑量的異亮氨酸?；蛘撸山o予多劑量例如2、3、4或5個(gè)劑量的鳥(niǎo)氨酸和/或苯基乙酸和/或苯基丁酸和/或任選的異亮氨酸。上述多劑量給藥可進(jìn)行一個(gè)月或兩周或一周時(shí)間。在另一個(gè)實(shí)施方案中，可每天給予單劑量或多劑量例如2、3、4或5個(gè)劑量的鳥(niǎo)氨酸和/或苯基乙酸和/或苯基丁酸。如上所述，可向受試者給予其他氨基酸。所述或每種其他氨基酸可與鳥(niǎo)氨酸和/或苯基乙酸和/或苯基丁酸以同一藥物的形式進(jìn)行給藥，或者可獨(dú)立給藥。若進(jìn)行獨(dú)立給藥，則所述或每種其他氨基酸的給藥可在鳥(niǎo)氨酸和/或苯基乙酸和/或苯基丁酸給藥同時(shí)進(jìn)行，或者可在不同的時(shí)間例如在給予鳥(niǎo)氨酸和/或苯基乙酸和/或苯基丁酸最長(zhǎng)達(dá)5小時(shí)、最長(zhǎng)達(dá)2小時(shí)或最長(zhǎng)達(dá)l小時(shí)之前或之后進(jìn)行。所述或每種其他氨基酸通常為口服給藥或靜脈內(nèi)給藥。向受試者給予治療有效量的所述或每種其他氨基酸。劑量應(yīng)才艮據(jù)不同的參數(shù)例如以上針對(duì)鳥(niǎo)氨酸、苯基乙酸和苯基丁酸述及的參數(shù)而變化。所述或每種其他氨基酸的常規(guī)劑量為0.02-1.25g/kg體重，例如0.1-0.5g/kg體重。因此所述或每種其他氨基酸的劑量為1g-50g,例如5g一30g。可給予單劑量的所述或每種其他氨基酸?；蛘?，可給予多劑量例如2、3、4或5個(gè)劑量。這類(lèi)多劑量給藥可進(jìn)行一個(gè)月或兩周或一周。在另一個(gè)實(shí)施方案中，可每天進(jìn)行單劑量或多劑量例如2、3、4或5個(gè)劑量的給藥。以下實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行說(shuō)明。實(shí)施例1:硬變患者的嗜中性粒細(xì)胞功能發(fā)生改變并隨肝病加重而惡魚(yú)測(cè)量嗜中性粒細(xì)胞吞噬作用和氧化爆發(fā)的方法在^試發(fā)將肝素化全血與受調(diào)理素作用的FITC標(biāo)記的大腸桿菌和CD16—起培養(yǎng)。然后用5危式細(xì)胞術(shù)(FACScanBectonDickinson)對(duì)細(xì)胞進(jìn)行分析，通過(guò)前向角散射和側(cè)向角散射設(shè)門(mén)，隨后基于藻紅蛋白(PE)[Immunotech,Marseille,France]熒光染料表達(dá)對(duì)細(xì)胞進(jìn)4亍評(píng)價(jià)以i口、別CD16陽(yáng)性細(xì)胞。然后對(duì)門(mén)內(nèi)細(xì)胞群進(jìn)行評(píng)價(jià)以確定FITC標(biāo)記的細(xì)菌的存在情況。在虔4發(fā)將肝素化的全血與受調(diào)理素作用的大腸桿菌懸液一起培養(yǎng)以激發(fā)氧化爆發(fā)。加入底物溶液以測(cè)定二氫羅丹明(DHR)123向熒光源化合物羅丹明(R)123的轉(zhuǎn)化情況。使反應(yīng)終止并固定，然后與CD16抗體一起培養(yǎng)以識(shí)別陽(yáng)性嗜中性粒細(xì)胞。然后用流式細(xì)胞術(shù)進(jìn)行分析。嗜^#在勿^^鷹必#_席通過(guò)改進(jìn)的Boyden小室法，利用白細(xì)胞介素8作為化學(xué)引誘物質(zhì)以激發(fā)化學(xué)激活作用，來(lái)測(cè)量嗜中性粒細(xì)胞的趨化作用?；颊吆头椒ㄎ覀儗?duì)30名硬變患者(酒精性硬變；平均年齡53.2歲(SEM4.6))和20名健康志愿者進(jìn)行了研究。將硬變患者分為疊加性酒精性肝炎(superimposedalcoholichepatitis)(AH+)患者和肝失代償或肝代償患者。利用吞噬試驗(yàn)測(cè)定吞噬細(xì)胞的能力，利用吞噬爆發(fā)測(cè)定細(xì)胞在與大腸桿菌接觸時(shí)是否能夠產(chǎn)生氧化爆發(fā)。結(jié)果我們觀察到來(lái)自硬變患者的嗜中性粒細(xì)胞吞噬細(xì)菌的能力顯著下降。我們還發(fā)現(xiàn)，在使氧化爆發(fā)產(chǎn)生率增加方面，硬變患者對(duì)大腸桿菌刺激嗜中性粒細(xì)胞的作用產(chǎn)生應(yīng)答的能力顯著下降(圖1)。這種能力下降與肝病的嚴(yán)重程度相關(guān)，表明肝病越處于晚期，對(duì)感染的產(chǎn)生應(yīng)答和抵抗的能力就越弱。實(shí)施例2:氨降低嗜中性粒細(xì)胞的吞噬能力測(cè)量嗜中性粒細(xì)胞的吞噬作用和氧化爆發(fā)的方法如實(shí)施例1所述?；颊吆头椒◤慕】抵驹刚?n=15)收集血液，將血液與濃度遞增的氨一起培養(yǎng)1小時(shí)。通過(guò)吞噬試驗(yàn)和嗜中性粒細(xì)胞趨化作用分析測(cè)定嗜中性粒細(xì)胞吞噬細(xì)菌的能力。在嗜中性粒細(xì)胞趨化作用分析中使用10ng/ml的IL-8。結(jié)果隨著培養(yǎng)的氨的濃度增加，嗜中性粒細(xì)胞的吞噬作用(圖2)和嗜中性粒細(xì)胞趨化作用(圖3)顯著減弱。實(shí)施例3:通過(guò)干預(yù)手段可以逆轉(zhuǎn)氨對(duì)嗜中性粒細(xì)胞吞噬作用的影響測(cè)量嗜中性粒細(xì)胞的吞噬作用和氧化爆發(fā)的方法如實(shí)施例1所述。患者和方法從健康志愿者(n=15)收集血液，將血液與氨和選定的氨基酸一起培養(yǎng)1小時(shí)。通過(guò)吞噬試驗(yàn)測(cè)定嗜中性粒細(xì)胞吞噬細(xì)菌的能力。結(jié)果我們觀察到，氨誘導(dǎo)的嗜中性粒細(xì)胞吞噬作用的減弱可被鳥(niǎo)氨酸和谷氨酰胺部分逆轉(zhuǎn)(圖4)。然而，氨與天冬氨酸共培養(yǎng)則使得嗜中性粒細(xì)胞吞噬作用惡化，但使用L-鳥(niǎo)氨酸L-天冬氨酸時(shí)可保持不變。實(shí)施例4:模擬胃腸出血使得嗜中性粒細(xì)胞趨化作用減弱，可通過(guò)給予異亮氨酸使得所述趨化作用的減弱被逆轉(zhuǎn)方法對(duì)10名[9名男性和一名女性；平均年齡為49.6歲(SEM9.1);Child-Pugh平均評(píng)分為7.8(SEM1.2)]禁食一夜、代謝穩(wěn)定、經(jīng)活組織檢查證實(shí)的肝硬化患者進(jìn)行研究，所述研究在口服給予75g模擬血紅蛋白分子(Nutricia，Cuijk，Netherlands)的氨基酸混合物之前以及在給藥2小時(shí)后進(jìn)行。在另外的7名患者[4名男性和3名女性；平均年齡為51.4歲(SEM6.7);Child-Pugh平均評(píng)分為8.1(SEM1.4)]中，在給予氨基酸混合物后，2小時(shí)內(nèi)靜脈內(nèi)給予異亮氨酸(含40mg/1異亮氨酸的等滲溶液，速度為100ml/hr)。測(cè)定周?chē)o脈血樣的嗜中性粒細(xì)胞趨化作用(參見(jiàn)實(shí)施例1的方法)和血漿氨。結(jié)果與年齡匹配的對(duì)照(53.3SEM4.6)相比，這些硬變患者的嗜中性粒細(xì)胞的趨化作用明顯較低，并且在模擬出血后顯著減弱，從30(士4.2)減至8(±5.4)個(gè)細(xì)胞/高倍視野(p<0.0001)(圖5)。氨的血漿濃度顯著增加，從75.1(±4.2)增加至124(±8.5)(/<0.001)。氨濃度的改變與嗜中性粒細(xì)胞趨化作用的改變相關(guān)(r=0.65，/7<0.05)。在模擬出血組觀察到的嗜中性粒細(xì)胞趨化作用的減弱在使用異亮氨酸治療的患者組中被消除(25.4(±6.0)細(xì)胞/高倍視野)。實(shí)施例5:模擬出血可減少蛋白質(zhì)的合成并不適當(dāng)?shù)卮碳ぎ惲涟彼嵫豸~(yú)方法招募5名禁食一夜的肝硬化患者。收集血樣并采集呼出氣樣本，然后開(kāi)始輸注穩(wěn)定的同位素以測(cè)定背景同位素的富集程度。然后，患者接受預(yù)先準(zhǔn)備的[l-"C]-異亮氨酸的連續(xù)靜脈輸注(lmg/kgbw/h)直至試驗(yàn)結(jié)束(t=480min)。結(jié)果圖6顯示輸注鹽水(黑色條柱)和氨基酸(棕色條柱)最后一小時(shí)內(nèi)的異亮氨酸平均全身表觀率(WbRa)和異亮氨酸氧化作用(值以平均值士SEM表示；#表示？<0.05)。硬變患者的上消化道出血導(dǎo)致了異亮氨酸的減少和全身蛋白質(zhì)合成的顯著減少。盡管異亮氨酸濃度顯著降低，但用于氧化作用的異亮氨酸流通部分在模擬出血后并未發(fā)生改變，這表明出現(xiàn)了BCAA拮抗作用。實(shí)施例6:在模擬出血期間給予異亮氨酸增強(qiáng)了蛋白質(zhì)合成但不降低氨濃度方法對(duì)16名代謝穩(wěn)定、經(jīng)活組織檢查證實(shí)的肝硬化患者進(jìn)行研究。在4小時(shí)的模擬出血期間，隨機(jī)對(duì)患者補(bǔ)充異亮氨酸(40mg/L溶液；50ml/hr)或安慰劑。氨和(通過(guò)預(yù)先地連續(xù)輸注L-[環(huán)-l]苯丙氨酸、L-[環(huán)-2114]-酪氨酸和L-[環(huán)-2H2]-酪氨酸來(lái)測(cè)量的)蛋白質(zhì)合成。結(jié)果結(jié)果表明在肝硬化患者模擬出血期間輸注亮氨酸，使得肝和肌肉的遭損害的蛋白質(zhì)合成得到恢復(fù)，導(dǎo)致了這些器官的凈合成代謝狀態(tài)(表1)。兩組的氨濃度顯著增加，但與給予異亮氨酸和給予安慰劑的組間并無(wú)顯著差異(圖7)。實(shí)施例7:晚期硬變患者輸注L-鳥(niǎo)氨酸L-天冬氨酸后的天冬氨酸累積方法用L-鳥(niǎo)氨酸L-天冬氨酸，以40g/天對(duì)5名等待肝移植的晚期硬變患者(年齡59;3名男性，ChildC級(jí)疾病，嚴(yán)重腹水，肌酸酐102pmol/L)進(jìn)行治療。結(jié)果天冬氨酸濃度在3天時(shí)間內(nèi)顯著遞增，增至基礎(chǔ)值的5倍(表2)。表2<table>tableseeoriginaldocumentpage21</column></row><table>數(shù)據(jù)為平均值土SEM咖ol/kg體細(xì)胞質(zhì)量/min。結(jié)束時(shí)的數(shù)值代表氨基酸輸注最后一小時(shí)的平均值。對(duì)肝和腎的蛋白質(zhì)合成的數(shù)據(jù)進(jìn)行幾基化校正(見(jiàn)方法)。統(tǒng)計(jì)p值反映進(jìn)行Mann-WhitneyU檢驗(yàn)的組間差異；發(fā)現(xiàn)組間無(wú)顯著性差異。實(shí)施例8:LOLA的給藥降低氨濃度但可使氨再生患者和方法對(duì)8名硬變患者(年齡56(5.6)，5M，ALD-6;2級(jí)服4例；3-4級(jí)HE:4例)進(jìn)行L0LA輸注(40g，8小時(shí))治療。采集血樣以對(duì)氨和谷氨酰胺進(jìn)行測(cè)量。結(jié)果結(jié)果表明，給予LOLA使得氨濃度顯著下降，同時(shí)伴隨有谷氨酰胺濃度升高(圖8)。這種氨的減少對(duì)HE的嚴(yán)重程度具有有益作用。然而，當(dāng)停止LOLA給藥時(shí)，循環(huán)氨水平出現(xiàn)反彈升高，導(dǎo)致已得到改善的6名患者中的3名患者的HE復(fù)發(fā)。實(shí)施例9:主動(dòng)除去谷氨酰胺防止了氨濃度再次升高患者和方法對(duì)進(jìn)行血液濾過(guò)(heamofiltration(CVVH))的3名患者(年齡45(4.1)2M,ALD，HE全部為3級(jí)，HRS全部為3)進(jìn)行LOLA輸注(40g，8小時(shí))治療。釆集血樣以對(duì)氨和谷氨酰胺進(jìn)行測(cè)量。結(jié)果結(jié)果表明，LOLA使得氨濃度降低，但加入透析阻止了谷氨酰胺濃度同時(shí)升高(圖9)。因此，我們認(rèn)為氨濃度是持續(xù)降低的。實(shí)施例10:苯基乙酸與谷氨酰胺結(jié)合，從而生成可分泌的化合物并且防止了氨再次升高患者和方法用LOLA和苯基乙酸(40g/天，8小時(shí))對(duì)6名急性肝衰竭(5例非甲非乙型肝炎)和嚴(yán)重肝性腦病(3-4級(jí))的患者進(jìn)行治療。結(jié)果聯(lián)合治療并未使得谷氨酰胺濃度顯著增高，但使得氨水平下降(圖10)。未觀察到氬良彈性增加。實(shí)施例11:鳥(niǎo)氨酸和苯基丁酸對(duì)肝性腦病病人的作用患者1.分組每組3名患者，總共12名。2.選入標(biāo)準(zhǔn)—18-80歲的成年患者，一通過(guò)組織學(xué)或臨床標(biāo)準(zhǔn)證實(shí)肝硬化-C型HE，—氨濃度>80jimol/L，告知同意/贊成3.排除標(biāo)準(zhǔn)-其他并發(fā)神經(jīng)性疾病，-使用另一種特定的降氨藥物，-需要機(jī)械通氣和鎮(zhèn)靜的呼吸衰竭，—未控制住的胃腸出血，—需要inotrope的低血壓，明顯腎衰竭(肌酸酐>2mg/dl)，血液透析，-體外肝支持，已知的對(duì)任何研究藥物的高敏感性，-妊娠。對(duì)精神狀態(tài)的評(píng)價(jià)肝性腦病分級(jí)(WestHaven標(biāo)準(zhǔn))<table>tableseeoriginaldocumentpage22</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage23</column></row><table>方法在開(kāi)放的標(biāo)記性研究中，我們選入了8名患有硬變和高血氨的患者。根據(jù)肝病的嚴(yán)重性對(duì)他們進(jìn)行匹配(見(jiàn)表3)。采用以下方案之一在3天時(shí)間內(nèi)對(duì)他們進(jìn)行治療，進(jìn)行5天時(shí)間的觀察。研究組別為(i)安慰劑5%葡萄糖，4小時(shí)；(ii)單用鳥(niǎo)氨酸20g于500ml5%葡萄糖中，0800時(shí)至1200時(shí)；(Hi)苯基丁酸每天兩次，每次10g，口服(0800時(shí)和1600時(shí))；和(iv)鳥(niǎo)氨酸+苯基丁酸20g于500ml5%葡萄糖中，0800時(shí)至1200時(shí)+#天兩次，每次10g,口服(0800時(shí)和1600時(shí))。患者從午夜0000時(shí)至上午0800禁食一夜。按25KCal/Kg向他們提供胃內(nèi)膳食，從0800開(kāi)始至午夜結(jié)束，其中25KCal/Kg膳食中含有l(wèi)g/Kg的蛋白質(zhì)膳食。在0730時(shí)以及之后的1800時(shí)采集血樣，以便對(duì)氨和谷氨酰胺進(jìn)行測(cè)量。密切監(jiān)測(cè)對(duì)患者的副作用。各組的藥物均耐受良好，未觀察到不良事件。表3患者人口統(tǒng)計(jì)<table>tableseeoriginaldocumentpage24</column></row><table>SBP:特發(fā)性細(xì)菌性腹膜炎，非酒精性脂肪肝炎，ICU:必要的重癥監(jiān)護(hù)支持，HRS:肝腎綜合征結(jié)果圖11表明，安慰劑組在治療期間的平均氨水平基本上保持不變。L-鳥(niǎo)氨酸組和苯基丁酸組中，氨濃度相對(duì)基線值有所升高。在L-鳥(niǎo)氨酸和苯基丁酸一起治療的組，氨顯著減少。OP治療的動(dòng)物中，除了氨濃度降低外，餐后氨增加的程度也降低了。到第3天，OP組的兩名患者的肝性腦病評(píng)分得到了兩級(jí)改善，但在任一其他六名患者中未觀察到此現(xiàn)象。圖12表明，0P組在治療期間，雖然有氨的減少，但平均谷氨酰胺水平基本上保持不變。苯基丁酸組中，谷氨酰胺減少，這很可能是有害的。在L-鳥(niǎo)氨酸組和安慰劑組中，谷氨酰胺濃度增加，在餐后狀態(tài)中這一現(xiàn)象得到顯著加強(qiáng)。圖13表示用安慰劑、0、P和OP治療的組的精神狀態(tài)的變化。實(shí)施例12:鳥(niǎo)氨酸、苯基丁酸和異亮氨酸對(duì)肝性腦病病人的作用患者1.分組每組2名患者，總共6名。2.選入標(biāo)準(zhǔn)-18-80歲的成年患者，通過(guò)組織學(xué)或臨床標(biāo)準(zhǔn)證實(shí)肝硬化，ChildB或C，最近有因靜脈曲張的胃腸出血(顯現(xiàn)后6小時(shí)內(nèi))，告知同意/贊成3.排除標(biāo)準(zhǔn)-其他并發(fā)神經(jīng)性疾病，使用另一種特定的降氨藥物，需要機(jī)械通氣和鎮(zhèn)靜的呼吸衰竭，未控制住的胃腸出血，需要inotrope的低血壓，明顯腎衰竭(肌酸肝〉2mg/dl),血液透析，體外肝支持，已知的對(duì)任何研究藥物的高敏感性，妊娠/哺乳。方法在開(kāi)放的標(biāo)記性研究中，我們選入了6名硬變患者，且這些患者因治療靜脈曲張性出血而被接受。根據(jù)肝病的嚴(yán)重性對(duì)他們進(jìn)行匹配(見(jiàn)表4)。采用以下方案之一在3天時(shí)間內(nèi)對(duì)他們進(jìn)行治療，進(jìn)行5天時(shí)間的觀察。研究組別為i.安慰劑5%葡萄糖，4小時(shí)(250ml)H.單用異亮氨酸10gm溶于250ml5%葡萄糖，分成兩個(gè)劑量，2小時(shí)內(nèi)靜脈內(nèi)注射iH.異亮氨酸+鳥(niǎo)氨酸+苯基丁酸異亮氨酸10gm溶于250ml5%葡萄糖，分成兩個(gè)劑量，2小時(shí)內(nèi)靜脈內(nèi)注射；鳥(niǎo)氨酸20g于250ml5%葡萄糖中(t-O、24、48hr);苯基丁酸每天兩次，每次10g,口服(t-O、12、24、36、48hr)患者從午夜0000時(shí)至上午0800時(shí)禁食一夜。按25KCal/Kg向他們提供胃內(nèi)膳食，從0800開(kāi)始至午夜結(jié)束，其中25KCal/Kg膳食中含有l(wèi)g/Kg的蛋白質(zhì)膳食。在0730時(shí)以及之后的1800時(shí)采集血樣，以便對(duì)氨和谷氨酰胺進(jìn)行測(cè)量。密切監(jiān)測(cè)患者的副作用。各組的藥物均耐受良好，未觀察到不良事件。患者由于最初進(jìn)行了內(nèi)鏡檢查術(shù)而接受了鎮(zhèn)靜劑，因此精神狀態(tài)評(píng)價(jià)不能用于解釋。安慰劑組和異亮氨酸組各一名患者因多器官衰竭而在醫(yī)院死亡。其余患者存活。表4<table>tableseeoriginaldocumentpage26</column></row><table>SBP:特發(fā)性細(xì)菌性炎，非酒精性脂肪肝炎，ICU:必要的重癥監(jiān)護(hù)支持，HRS:肝腎綜合征結(jié)果圖14表明安慰劑組和異亮氨酸組的氨濃度無(wú)顯著變化。OIP治療組的氨濃度顯著減少。圖15表明，給予異亮氨酸、安慰劑或OIP并未顯著改變谷氨酰胺水平。氨濃度僅在OIP組有顯著降低。圖16表明OIP作用的另一種方式是通過(guò)減少氨源氨基酸即甘氨酸。僅在OIP組觀察到甘氨酸的顯著減少。圖17表明各組開(kāi)始的異亮氨酸水平均很低，但異亮氨酸治療組的該水平增至正常值的兩倍。安慰劑組的濃度保持低水平并且未變化。圖18表明，治療過(guò)程中患者的鳥(niǎo)氨酸水平的變化示出了鳥(niǎo)氨酸濃度顯著持續(xù)性升高并在停藥后所述濃度顯著降至基礎(chǔ)值，由此表明了不同組織中的吸收。實(shí)施例13:鳥(niǎo)氨酸和苯基丁酸對(duì)膽管結(jié)扎的大鼠的作用方法通過(guò)膽管結(jié)扎(BDL)誘導(dǎo)硬變?cè)诒痉椒ㄖ惺褂眯坌許D大鼠(Sprague-Dawleyrat)(200-250g)。麻醉后，進(jìn)行正中線剖腹術(shù)，暴露膽管，用4.0的絲線三重結(jié)扎，在第二結(jié)扎處和第三結(jié)扎處間切斷。用可吸收縫線對(duì)傷口進(jìn)行分層縫合，使動(dòng)物在安靜的室內(nèi)恢復(fù)，之后放回動(dòng)物飼養(yǎng)室。將動(dòng)物置于常溫(20X:)下，進(jìn)行12小時(shí)的光照/避光循環(huán)，并使其隨意接近水和標(biāo)準(zhǔn)的嚙齒動(dòng)物食物。BDL(或假手術(shù))五周后，將給予動(dòng)物的嚙齒動(dòng)物食物轉(zhuǎn)換為完全液體食物(Liquidiet，Bio-Serv，F(xiàn)renchtownNJ，USA),所述完全液體食物中加入了模擬血紅蛋白組合物的氨基酸混合物(2.8g/Kg/天，NutriciaCuijk，TheNetherlands,ProdUctNo.24143)。在第6周于麻醉狀態(tài)下，插入右側(cè)頸動(dòng)脈導(dǎo)管，并用其反復(fù)采集血樣。此步驟之后收集基線樣品，然后通過(guò)IP注射給予所研究的制劑。研究組為801^對(duì)照+鹽水(n=5)、BDL+IP鳥(niǎo)氨酸(0.22g/Kg，n=6)鹽水、BDL+IP苯基丁酸(0.3g/Kg,11=7)鹽水、BDL+IP0P鹽水(0.22g/Kg/0.3g/Kg，n=7)。將血樣收集至預(yù)冷的肝素化試管中，在處理前置于水上保存。離心(3，000rpm,10min)后收集血漿，在分析前于-80t:保存。利用COBASMiraS，按照廠商說(shuō)明書(shū)測(cè)量氨、葡萄糖、乳酸鹽和脲。用熒光檢測(cè)的HPLC對(duì)氨基酸進(jìn)行定量。結(jié)果與健康對(duì)照(25.6士2ymol/L，p<0.001，數(shù)據(jù)未顯示)相比，在硬變的膽管結(jié)扎的大鼠模型(205±11jimol/L，平均值士SEM)中，動(dòng)脈血漿氨水平顯著升高。在該模型中，我們發(fā)現(xiàn)在鹽水治療的安慰劑組中，動(dòng)脈氨水平在三小時(shí)內(nèi)未改變。圖19表示BDL硬變大鼠在IP注射鹽水(BDL對(duì)照，n=5)、鳥(niǎo)氨酸(0rn,0.22g/Kg，n=6)、苯基丁酸(PB，0.3g/Kg，n=7)和鳥(niǎo)氨酸苯基丁酸(0P，0.22g/Kg+0.3g/Kg，n=7)后的動(dòng)脈血漿氨水平的變化。*表明在3小時(shí)時(shí)0P與0rn比較p〈0.05(雙因素方差分析)。該圖表明，在鳥(niǎo)氨酸治療的動(dòng)物中檢測(cè)到氨濃度有少許降低，但未發(fā)現(xiàn)它與安慰劑有差異。在苯基丁酸治療組中，發(fā)現(xiàn)在l小時(shí)后血漿氨顯著增加(與其他所有組相比，p<0.01)，但發(fā)現(xiàn)這種差異在3小時(shí)時(shí)間點(diǎn)時(shí)變小。此結(jié)果與苯基丁酸(苯基乙酸)只對(duì)谷氨酰胺濃度升高的患者有效的假說(shuō)是吻合的。在未給予鳥(niǎo)氨酸(可代謝形成谷氨酰胺)的動(dòng)物中，單純的P的作用是不想要的，也是潛在有害的。在鳥(niǎo)氨酸+苯基丁酸(0P)的治療組中，觀察到了氨水平的顯著降低。在這些動(dòng)物中，測(cè)量到在研究的三小時(shí)內(nèi)氨持續(xù)減少，在研究結(jié)束時(shí)發(fā)現(xiàn)其水平顯著低于單用鳥(niǎo)氨酸的組的水平(p<0.05)。上述結(jié)果清楚地證明了，在減少血漿氨方面，0P聯(lián)合比單用0或P效力更強(qiáng)。而且，單用P治療的動(dòng)物中，升高的血漿氨水平可能是有害的。我們用一系列樣品對(duì)IP注射0或0P后鳥(niǎo)氨酸被吸收iiyV血流的情況進(jìn)行了檢測(cè)。圖20表示補(bǔ)充組的動(dòng)脈鳥(niǎo)氨酸濃度?？汕宄乜闯?，IP注射后1小時(shí)時(shí)，兩組的血漿鳥(niǎo)氨酸濃度顯著升高，隨后又在3小時(shí)時(shí)降低，這是由于該鳥(niǎo)氨酸在體內(nèi)被代謝。在任何時(shí)間點(diǎn)，均未發(fā)現(xiàn)這些組之間的血漿鳥(niǎo)氨酸濃度有顯著差異。這一發(fā)現(xiàn)很重要，因?yàn)樗C實(shí)了選定的給藥方法可有效地在這些動(dòng)物體內(nèi)送遞鳥(niǎo)氨酸。而且，快速吸收和所觀察到的血漿中的水平降低表明該氨基酸正發(fā)生主動(dòng)代謝。實(shí)施例14:鳥(niǎo)氨酸、苯基丁酸和異亮氨酸對(duì)膽管結(jié)扎的大鼠的作用方法在本方法中使用雄性SD大鼠(200-250g)。將動(dòng)物處死前48hr時(shí)將給予動(dòng)物的標(biāo)準(zhǔn)嚙齒動(dòng)物食物轉(zhuǎn)換為完全液體食物(Liquidiet，Bio-Serv，F(xiàn)renchtownNJ,USA),所述完全液體食物中加入了模擬血紅蛋白組合物的氨基酸混合物(2.8g/Kg，NutriciaCuijk，TheNetherlands,ProductNo.24143)。處死前24小時(shí)時(shí)，通過(guò)IP注射半乳糖胺(lg/Kg，Sigma,PooleUK)鹽水誘導(dǎo)急性肝衰竭(ALF)(每組n-5)。將動(dòng)物處死前3小時(shí)時(shí)，用0IP(鳥(niǎo)氨酸0.22g/Kg，異亮氨酸0.25g/Kg,苯基丁酸0.3g/Kg，于鹽水中IP)制劑或者鹽水對(duì)照治療。在實(shí)驗(yàn)終止時(shí)，將動(dòng)脈血收集至預(yù)冷的肝素化試管中，在處理前置于水上保存。如上所述收集血漿并保存。如上所述測(cè)定氨。結(jié)果與安慰劑對(duì)照相比，OIP治療急性肝衰竭大鼠的動(dòng)脈氨水平顯著下降(圖21)。本研究是為了測(cè)試異亮氨酸與鳥(niǎo)氨酸和苯基丁酸(苯基乙酸)聯(lián)合是否能有效減少血漿氨。先前已經(jīng)在對(duì)人類(lèi)的研究中證實(shí)，單用異亮氨酸并不影響氨水平，但它與0和P聯(lián)合的有效性之前并未測(cè)試過(guò)。圖21表示用鹽水安慰劑(ALF)和OIP治療(ALF+0IP)的高血氨急性肝衰竭模型中的動(dòng)脈血漿氨水平。這兩組間存在p<0.01的顯著性水平(T檢驗(yàn))。該結(jié)果支持了異亮氨酸與鳥(niǎo)氨酸和苯基丁酸聯(lián)合可有效降低氨水平的假說(shuō)。這是異亮氨酸除了前文所述的對(duì)于蛋白質(zhì)合成的有益效果之外的又一有益效果。實(shí)施例15:鳥(niǎo)氨酸和苯基丁酸對(duì)血行阻斷的豬模型的作用方法將5頭豬隨機(jī)分為4組急性肝衰竭(ALF)+安慰劑+安慰劑(n=2)、ALF+鳥(niǎo)氨酸+安慰劑、ALF+苯基丁酸+安慰劑、ALF+鳥(niǎo)氨酸和苯基丁酸。將導(dǎo)管插入豬的股動(dòng)脈和股靜脈、門(mén)靜脈、腎靜脈和肺動(dòng)脈。在開(kāi)始安慰劑或治療劑輸注前1小時(shí)時(shí)開(kāi)始實(shí)驗(yàn)。1.安慰劑3小時(shí)內(nèi)輸注5%葡萄糖，口服水安慰劑2.單用鳥(niǎo)氨酸0.3g/Kg,5%葡萄糖，3小時(shí)內(nèi)血管內(nèi)滴注3.苯基丁酸0.3g/Kg，5%葡萄糖，3小時(shí)內(nèi)胃內(nèi)進(jìn)食鳥(niǎo)氨酸+苯基丁酸0.3g/Kg，5%葡萄糖，3小時(shí)內(nèi)血管內(nèi)滴注，0.3g/Kg5%葡萄糖，3小時(shí)內(nèi)胃內(nèi)進(jìn)食。通過(guò)在時(shí)間-0hr時(shí)的門(mén)靜脈與下腔靜脈的接合，以及隨后的肝動(dòng)脈結(jié)扎(血行阻斷)來(lái)誘導(dǎo)ALF;時(shí)間=+2hr時(shí)停止輸注，時(shí)間=8hr時(shí)停止實(shí)驗(yàn)。在時(shí)間-0、1、3、5、7和9hr時(shí)收集血樣和尿樣，以便測(cè)量局部氨和氨基酸的變化。在實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，取額皮質(zhì)部分以測(cè)量腦積水。結(jié)果輸注鳥(niǎo)氨酸后產(chǎn)生細(xì)胞內(nèi)谷氨酸以及同時(shí)胃內(nèi)提供苯基乙酸的結(jié)果顯示，在該肝衰竭激變模型中，整體氨水平和對(duì)谷氨酰胺的利用情況明顯發(fā)生變化。安慰劑治療的動(dòng)物中，自血行阻斷后，動(dòng)脈氨濃度隨時(shí)間持續(xù)升高(圖22),其中有一些是肌肉產(chǎn)生的(圖23),而大量的氨則來(lái)自消化道(圖24)。該動(dòng)物表明了肌肉釋放的谷氨酰胺較少(圖25)而通過(guò)消化道吸收的谷氨酰胺較顯著(圖26)。在單獨(dú)用鳥(niǎo)氨酸治療的動(dòng)物中，早期的氨升高起初被抑制，但之后它在實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)升至最高(圖22)。在該動(dòng)物中，肌肉對(duì)氨為凈吸收(圖24)，與安慰劑治療的動(dòng)物相比，從肌肉釋放的谷氨酰胺的量基本相當(dāng)(圖25)，而消化道對(duì)谷氨酰胺的吸收增加(圖26)。單用苯基丁酸也表現(xiàn)出動(dòng)脈氨水平的初始抑制，但該水平很快升至與單用鳥(niǎo)氨酸在實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)的相當(dāng)?shù)乃?圖22)，并且肌肉對(duì)氨的吸收基本上無(wú)變化(圖23)，但消化道產(chǎn)生的氨較顯著(圖24)。有意思的是，與安慰劑治療的動(dòng)物相比，單用苯基丁酸的治療中，肌肉對(duì)谷氨酰胺為凈移除，而該治療對(duì)消化道的谷氨酰胺的吸收無(wú)明顯影響(圖26)。鳥(niǎo)氨酸和苯基丁酸聯(lián)用對(duì)動(dòng)脈氨水平影響最大，與所有其他動(dòng)物相比，它使得在實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)的循環(huán)水平顯著降低(圖22)。在該動(dòng)物中，肌肉將氨從血液中主動(dòng)去除，并且消化道產(chǎn)生的氨顯著減少(圖24)。有意思的是，注意到與安慰劑治療和單用鳥(niǎo)氨酸治療的動(dòng)物相比，肌肉釋放的谷氨酰胺增加(圖25)。雖然在肌肉中產(chǎn)生的谷氨酰胺增多，但消化道對(duì)谷氨酰胺的吸收顯著減少(圖26)。如圖27所示，證實(shí)了在鳥(niǎo)氨酸治療的動(dòng)物中，鳥(niǎo)氨酸的循環(huán)水平升高。血行阻斷和治療干預(yù)對(duì)動(dòng)脈谷氨酰胺的影響如圖28所示。在鳥(niǎo)氨酸治療的動(dòng)物中，谷氨酰胺的循環(huán)水平升高，這一現(xiàn)象可通過(guò)聯(lián)合給予苯基乙酸得到改善。一個(gè)有趣的發(fā)現(xiàn)是，在鳥(niǎo)氨酸和苯基丁酸聯(lián)合治療的動(dòng)物中，動(dòng)脈甘氨酸水平得到顯著改善(圖29)。在實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，取腦額皮質(zhì)，并對(duì)腦積水含量進(jìn)行測(cè)量(圖30)。一位獨(dú)立的病理學(xué)家對(duì)這些實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的腦的細(xì)胞解剖學(xué)作了報(bào)道。對(duì)他的報(bào)道概括如下ALF:微血管血管周?chē)[，周?chē)袊芭荨芭葜車(chē)纳窠?jīng)元壞死性改變。ALF+0+P:微血管血管周?chē)?，周?chē)袊芭?較無(wú)任何治療ALF的程度輕)。細(xì)胞內(nèi)水腫。假手術(shù)腦組織超微結(jié)構(gòu)改變最小=正常腦組織。結(jié)論本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，對(duì)與慢性肝病相關(guān)的急性發(fā)病的一些癥狀的模擬例如提高氨濃度或模擬胃腸出血，可導(dǎo)致嗜中性粒細(xì)胞功能減弱，這種減弱可被鳥(niǎo)氨酸或異亮氨酸部分逆轉(zhuǎn)。通過(guò)鳥(niǎo)氨酸和異亮氨酸聯(lián)合對(duì)嗜中性粒細(xì)胞功能的補(bǔ)救在預(yù)防膿毒癥中具有重要作用，而所述膿毒癥是肝失代償進(jìn)程中的常見(jiàn)促發(fā)因素。此外，發(fā)明人還發(fā)現(xiàn)，在模擬胃腸出血后，異亮氨酸對(duì)氨濃度的升高無(wú)影響。因此，氨水平不受影響的結(jié)果與下述假說(shuō)相反，所述假說(shuō)為在給予異亮氨酸后，由于刺激蛋白質(zhì)合成，氨水平將降低。因此，聯(lián)合使用異亮氨酸和鳥(niǎo)氨酸是特別有利的，這種使用已知可降低氨水平。因此，給予鳥(niǎo)氨酸和異亮氨酸可防止胃腸出血在代謝上的后果。氨水平的升高被抑制，異亮氨酸的缺乏得到彌補(bǔ)，嗜中性粒細(xì)胞功能得到補(bǔ)救。因此聯(lián)合使用鳥(niǎo)氨酸和異亮氨酸提供了一種對(duì)促發(fā)事件后的患者進(jìn)行治療的新方法以預(yù)防肝失代償?shù)陌l(fā)生。發(fā)明人還發(fā)現(xiàn)，在肝性腦病患者中用來(lái)減少氨的L-鳥(niǎo)氨酸L-天冬氨酸(L0LA)，并不逆轉(zhuǎn)氨對(duì)嗜中性粒細(xì)胞功能的影響。因此，單用鳥(niǎo)氨酸比使用LOLA更為有利，因?yàn)轼B(niǎo)氨酸即可減少氨又可補(bǔ)救嗜中性粒細(xì)胞的功能。另外，LOLA的天冬氨酸組分也會(huì)在體內(nèi)蓄積。天冬氨酸的這種蓄積實(shí)際上可能對(duì)患者是有害的，因?yàn)樘於彼崾沟冒睂?duì)嗜中性粒細(xì)胞功能的影響惡化，進(jìn)一步減弱嗜中性粒細(xì)胞的功能。因此，預(yù)防或延遲肝失代償?shù)陌l(fā)作可通過(guò)聯(lián)合使用鳥(niǎo)氨酸和異亮氨酸來(lái)實(shí)現(xiàn)，優(yōu)選地不給予天冬氨酸。另外，發(fā)明人還發(fā)現(xiàn)用L-鳥(niǎo)氨酸L-天冬氨酸(LOLA)治療肝性腦病(HE)患者，可降低氨水平，從而升高了谷氨酰胺水平。然而，谷氨酰胺只是暫時(shí)的氨緩沖劑，因?yàn)樗稍谀I和小腸中進(jìn)行再循環(huán)并重新產(chǎn)生氨。因此單用LOLA治療可導(dǎo)致氨水平再次升高，進(jìn)一步加重肝性腦病的病狀。對(duì)尿素循環(huán)障礙的兒童使用苯基乙酸或苯基丁酸可降低谷氨酰胺的異常高水平。相比而言，HE患者具有正常的谷氨酰胺水平，但除了如實(shí)施例l所示用LOLA對(duì)他們進(jìn)行治療以外，所述LOLA降低氨水平但增高谷氨酰胺水平。因此使用苯基乙酸和/或苯基丁酸可去除谷氨酰胺，從而預(yù)防HE患者的氨水平再次升高。所以，可通過(guò)聯(lián)合給予苯基乙酸和苯基丁酸中的至少一種以及鳥(niǎo)氨酸，來(lái)實(shí)現(xiàn)對(duì)肝性腦病的改善性治療，優(yōu)選地不給予天冬氨酸。我們?cè)谟沧儎?dòng)物模型以及硬變病人中的廣泛研究支持了這樣一種觀點(diǎn)，即硬變患者中清除氨的主要器官是肌肉，在將氨轉(zhuǎn)變?yōu)楣劝滨０返姆磻?yīng)中，利用了谷氨酸。在肝衰竭中，負(fù)責(zé)該反應(yīng)的酶谷氨酰胺合成酶被誘導(dǎo)，谷氨酸的供應(yīng)會(huì)增強(qiáng)氨解毒作用。谷氨酸的前體鳥(niǎo)氨酸，通過(guò)轉(zhuǎn)化成谷氨酰胺而對(duì)氨進(jìn)行解毒。然而，我們的初步研究表明這種谷氨酰胺可使氨再循環(huán)和再生。我們的發(fā)明提供了一種新方法，該方法不僅對(duì)把氨轉(zhuǎn)化為谷氨酰胺進(jìn)行解毒，還清除了產(chǎn)生的多余的谷氨酰胺。因此，OP比單用其中一種更為顯著地明顯減小硬變和高血氨患者的氨濃度。該作用顯然是協(xié)同作用而非加合作用。此外，餐后的氨增加可通過(guò)給予0P而消除。這就使得可向失代償?shù)挠沧兓颊咛峁└缓鞍踪|(zhì)的膳食，且無(wú)高血氨風(fēng)險(xiǎn)。氨的減少與精神狀態(tài)的改善相關(guān)。它可通過(guò)防止谷氨酰胺的增加來(lái)減小氨濃度來(lái)實(shí)現(xiàn)。這與一種假說(shuō)是一致的，所述假說(shuō)即為在肌肉中鳥(niǎo)氨酸促使產(chǎn)生谷氨酰胺(由此捕獲一分子的氨)，但該谷氨酰胺被排出(可能以苯基乙酸的加合物形式)，以防止全身性的谷氨酰胺升高，由此防止了反彈性的高血氨。苯基乙酸使得在呈現(xiàn)出尿素循環(huán)障礙的高血氨嬰兒中的氨減少這一確證知識(shí)證實(shí)了氨被捕獲轉(zhuǎn)變成谷氨酰胺，谷氨酰胺被運(yùn)至腎從而以苯基乙酸谷氨酰胺加成物形式排出。這些嬰兒表現(xiàn)出高血氨，并且很重要的一點(diǎn)是表現(xiàn)出高谷氨酰胺。相反，硬變患者表現(xiàn)出高血氨和正常至較低的谷氨酰胺。上述的豬模型在肝被隔離后谷氨酰胺未升高，而氨水平顯著增高。單用鳥(niǎo)氨酸治療可增加血液谷氨酰胺，而氨水平不受影響。單用苯基丁酸少量增加谷氨酰胺，并且對(duì)氨水平也沒(méi)有顯著影響。截然不同的是，在血氨升高的激變模型中，聯(lián)用鳥(niǎo)氨酸和苯基丁酸(0P)使得循環(huán)氨顯著減少，并改善了在單用鳥(niǎo)氨酸時(shí)所觀察到的谷氨酰胺的增加。甘氨酸一一一種產(chǎn)生氨的氨基酸一一在所有動(dòng)物中均增加，但僅在0P治療的動(dòng)物中，該氨基酸的增加基本上被抑制，由此顯示出這種形式的干預(yù)的額外益處。氨升高的確定后果為由于腦中水含量增加所引起的腦腫脹。來(lái)自單用鳥(niǎo)氨酸治療的豬的腦顯示，水含量顯著增加，而鳥(niǎo)氨酸和苯基丁酸聯(lián)合則減少腦的水含量。在組織學(xué)上，與安慰劑治療的動(dòng)物相比，鳥(niǎo)氨酸和苯基丁酸聯(lián)合治療的動(dòng)物的腦的顯微結(jié)構(gòu)損傷比較不明顯。權(quán)利要求1.鳥(niǎo)氨酸在制備與苯基乙酸和苯基丁酸中的至少一種聯(lián)合使用以預(yù)防或治療肝失代償或肝性腦病的藥物中的用途。2.苯基乙酸和苯基丁酸中的至少一種在制備與鳥(niǎo)氨酸聯(lián)合使用以預(yù)防或治療肝失代償或肝性腦病的藥物中的用途。3.苯基乙酸和苯基丁酸中的至少一種以及鳥(niǎo)氨酸在制備預(yù)防或治療肝失代償或肝性腦病的藥物中的用途。4.前述權(quán)利要求任一項(xiàng)的用途，其中所述肝失代償為慢性肝病患者的肝失代償。5.前述權(quán)利要求任一項(xiàng)的用途，其中所述預(yù)防或治療包括延遲肝失代償?shù)陌l(fā)病。6.前述權(quán)利要求任一項(xiàng)的用途，其中所述患者中存在或疑似存在促發(fā)事件。7.權(quán)利要求6的用途，其中所述促發(fā)事件為胃腸出血、感染、門(mén)靜脈血栓形成或脫水。8.權(quán)利要求6或7的用途，其中在檢測(cè)出所述促發(fā)事件或疑似促發(fā)事件的癥狀6小時(shí)內(nèi)給藥。9.前述權(quán)利要求任一項(xiàng)的用途，其中對(duì)慢性肝病或急性肝衰竭患者治療肝性腦病。10.前述權(quán)利要求任一項(xiàng)的用途，其中所述鳥(niǎo)氨酸以游離的單體氨基酸或生理上可接受的鹽的形式存在。11.前述權(quán)利要求任一項(xiàng)的用途，其中所述苯基乙酸或苯基丁酸中的至少一種的存在形式為苯基乙酸鈉或苯基丁酸鈉。12.前述權(quán)利要求任一項(xiàng)的用途，其中所述藥物還含有異亮氨酸。13.權(quán)利要求12的用途，其中所述異亮氨酸以游離的單體氨基酸或生理上可接受的鹽的形式存在。14.前述權(quán)利要求任一項(xiàng)的用途，其中所述藥物基本上不含其他氨基酸。15.前述權(quán)利要求任一項(xiàng)的用途，其中所述藥物^:配制成用于靜脈內(nèi)、腹膜內(nèi)、胃內(nèi)、血管內(nèi)或口服給藥。16.含有苯基乙酸和苯基丁酸中的至少一種以及鳥(niǎo)氨酸的產(chǎn)品，作為同時(shí)、分別或相繼使用以預(yù)防或治療肝失代償或肝性腦病的組合制劑。17.權(quán)利要求16的產(chǎn)品，所述產(chǎn)品還含有異亮氨酸。18.權(quán)利要求16或17的產(chǎn)品，所述產(chǎn)品基本上不含其他氨基酸。19.一種藥物組合物，所述藥物組合物含有苯基乙酸和苯基丁酸中的至少一種以及鳥(niǎo)氨酸。20.權(quán)利要求19的藥物組合物，所述藥物組合物還含有異亮氨酸。21.權(quán)利要求19或20的藥物組合物，所述藥物組合物基本上不含其他氨基酸。22.權(quán)利要求19至21任一項(xiàng)的藥物組合物，在預(yù)防或治療肝失代償或肝性腦病的方法中使用所述藥物組合物。23.—種用于預(yù)防或治療肝失代償或肝性腦病的藥劑，所述藥劑含有苯基乙酸和苯基丁酸中的至少一種以及鳥(niǎo)氨酸。24.權(quán)利要求23的藥劑，所述藥劑還含有異亮氨酸。25.—種治療患有肝失代償或肝性腦病或具有肝失代償或肝性腦病患病風(fēng)險(xiǎn)的患者的方法，所述方法包括向所述患者給予有效量的苯基乙酸和苯基丁酸中的至少一種以及鳥(niǎo)氨酸。26.權(quán)利要求25的方法，所述方法還包括向所述患者給予有效量的異亮氨酸。27.權(quán)利要求26的方法，其中所述患者患有由胃腸出血造成的異亮氨酸缺乏。全文摘要本發(fā)明涉及鳥(niǎo)氨酸用于制備與苯基乙酸和苯基丁酸中的至少一種聯(lián)合使用以預(yù)防和治療肝失代償或肝性腦病的藥物的用途。本發(fā)明還涉及苯基乙酸和苯基丁酸中的至少一種用于制備與鳥(niǎo)氨酸聯(lián)合使用以預(yù)防和治療肝失代償或肝性腦病的藥物的用途。文檔編號(hào)A61K31/192GK101102816SQ200580046990公開(kāi)日2008年1月9日申請(qǐng)日期2005年11月28日優(yōu)先權(quán)日2004年11月26日發(fā)明者K·N·賈蘭,R·賈蘭申請(qǐng)人:Ucl商業(yè)有限公司