專(zhuān)利名稱(chēng)：組織蛋白酶半胱氨酸蛋白酶抑制劑的制作方法
背景技術(shù)：
人類(lèi)和其它哺乳動(dòng)物中的多種疾病都涉及或者與異常的骨吸收相關(guān)。這些疾病包括但不限于骨質(zhì)疏松癥、腎上腺糖皮質(zhì)激素誘發(fā)的骨質(zhì)疏松癥、Paget’s病、異常升高的骨更新、牙周病、牙齒損害、骨折、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎、假體周?chē)芄前Y、骨脆癥病、惡性腫瘤的高鈣血癥或者多發(fā)性骨髓瘤。這些疾病中最常見(jiàn)的一種疾病是骨質(zhì)疏松癥，它在絕經(jīng)后的女性中發(fā)生最為頻繁。骨質(zhì)疏松癥是一種系統(tǒng)骨骼疾病，其特征在于低骨重量和骨組織微結(jié)構(gòu)退化，同時(shí)隨之而來(lái)的使得骨骼脆性和易遭受骨折的性能增加。骨質(zhì)疏松骨折是導(dǎo)致老年人群發(fā)病和致死的主要原因。多達(dá)50％的女性和三分之一的男性會(huì)遭受骨質(zhì)疏松骨折。大部分老年人群已經(jīng)具有低骨骼密度并且具有高骨折風(fēng)險(xiǎn)。顯著需要預(yù)防和治療骨質(zhì)疏松癥以及其它與骨吸收相關(guān)的癥狀。因?yàn)楣琴|(zhì)疏松癥以及其它與骨骼損害相關(guān)的疾病通常都是慢性癥狀，因此，人們確信適當(dāng)?shù)寞煼ㄒ话銓⑿枰蕴幚怼?br> 組織蛋白酶屬于半胱氨酸蛋白酶的木瓜蛋白酶總科。這些蛋白酶在正常生理學(xué)的結(jié)締組織退化以及病理的結(jié)締組織退化中起作用。組織蛋白酶在細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)降解、代謝回轉(zhuǎn)和改造中起著舉足輕重的作用。迄今為止，多種組織蛋白酶已經(jīng)在多種來(lái)源中得到了鑒定和排序。這些組織蛋白酶天然地存在于多種組織中。例如，組織蛋白酶B、C、F、H、L、K、O、S、V、W和Z已經(jīng)得到了克隆。組織蛋白酶L與正常的溶菌酶蛋白質(zhì)水解以及若干病態(tài)相牽連，包括但不限于黑素瘤轉(zhuǎn)移。組織蛋白酶S與阿爾茨海默氏病、動(dòng)脈粥樣硬化癥、慢性阻塞性肺病和某些自身免疫疾病相牽連，包括但不限于青少年發(fā)作糖尿病、多發(fā)性硬化、慢性天皰瘡、Graves’疾病、重癥肌無(wú)力、系統(tǒng)紅斑狼瘡、類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和橋本氏甲狀腺炎；與變應(yīng)性紊亂相牽連，包括但不限于哮喘；以及與外源性免疫反應(yīng)相牽連，包括但不限于器官移植排斥或者組織移植排斥。升高的組織蛋白酶B水平和酶的重新分配在腫瘤中得到了發(fā)現(xiàn)，這表示它在腫瘤發(fā)病和轉(zhuǎn)移中起作用。此外，異常的組織蛋白酶B活性與某類(lèi)疾病狀態(tài)相牽連，如類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎、肺孢子蟲(chóng)肺炎、急性胰炎、炎性的氣道疾病和骨與關(guān)節(jié)病癥。
哺乳動(dòng)物組織蛋白酶與引起疾病的寄生蟲(chóng)表達(dá)的類(lèi)木瓜蛋白酶半胱氨酸蛋白酶相關(guān)，所述寄生蟲(chóng)包括原生動(dòng)物、扁蠕蟲(chóng)、植物線蟲(chóng)和節(jié)肢動(dòng)物家族的寄生蟲(chóng)。這些半胱氨酸蛋白酶在這些有機(jī)體的生命周期中起著主要作用。
人類(lèi)I型膠原，骨中的主要膠原，是組織蛋白酶K的優(yōu)良基質(zhì)。參見(jiàn)Kafienah，W.等人，1988，Biochem J，331727-732，其全部?jī)?nèi)容在此引入作為參考。對(duì)組織蛋白酶K使用反義寡核苷酸的體外試驗(yàn)已經(jīng)顯示了降低的體外骨吸收，這可能是由于組織蛋白酶K信使RNA翻譯的減少。參見(jiàn)Inui，T.等人，1997，J Biol Chem，2728109-8112，其全部?jī)?nèi)容在此引入作為參考。組織蛋白酶K的晶體結(jié)構(gòu)已經(jīng)得到了解析。參見(jiàn)McGrath，M.E.等人，1997，Nat Struct Biol，4105-109；Zhao，B.等人，1997，Nat Struct Biol，4109-11，其全部?jī)?nèi)容在此引入作為參考。同樣，對(duì)基于組織蛋白酶K抑制劑的選擇性縮氨酸已經(jīng)進(jìn)行了研究。參見(jiàn)Bromme，D.等人，1996，Biochem J，31585-89；Thompson，S.K.等人，1997，Proc Natl Acad Sci USA，9414249-14254，其全部?jī)?nèi)容在此引入作為參考。因此，組織蛋白酶K抑制劑可以降低骨吸收。這些抑制劑對(duì)治療涉及骨吸收的病癥將會(huì)有用，涉及骨吸收的病癥例如骨質(zhì)疏松癥。
發(fā)明概述本發(fā)明涉及能夠在需要其的哺乳動(dòng)物中治療和預(yù)防組織蛋白酶依賴(lài)癥狀或者疾病狀態(tài)的化合物。本發(fā)明的一種實(shí)施方案通過(guò)式I化合物和其藥學(xué)上可接受的鹽、立體異構(gòu)體和N-氧化物衍生物進(jìn)行說(shuō)明 發(fā)明詳述本發(fā)明涉及以下化學(xué)式的化合物 其中R1和R2與它們連接的碳原子合起來(lái)形成C3-4環(huán)烷基，其任選被C1-3烷基取代；R3為C1-6烷基，其任選被1～4個(gè)氟或者1～4個(gè)氯取代；R4是被1～5個(gè)鹵素原子取代的C1-6烷基；R5為氫或者C1-6烷基，其任選被1～5個(gè)鹵素原子取代；D各自獨(dú)立地為芳基或者雜芳基；R6為氫或者C1-6烷基，其任選被1～2個(gè)羥基或者2～6個(gè)鹵素原子取代；R7為C1-6烷基，其任選被2～5個(gè)鹵素原子取代；n為2；或者其藥學(xué)上可接受的鹽、立體異構(gòu)體或者N-氧化物衍生物。
在本發(fā)明的一種實(shí)施方案中，R1和R2與它們連接的碳原子合起來(lái)形成環(huán)丙基。
在本發(fā)明的一種實(shí)施方案中，D為苯基。
在本發(fā)明的一種實(shí)施方案中，R4為CF3。
在本發(fā)明的一種實(shí)施方案中，R5為氫。
在本發(fā)明的一種實(shí)施方案中，R7是被兩個(gè)或者三個(gè)氟取代的C1-3烷基。
除非另有說(shuō)明，如上所述的優(yōu)選實(shí)施方案意指包括所有具體和優(yōu)選基團(tuán)的組合。
本發(fā)明的具體實(shí)施方案包括但不限于N1-(1-氰基環(huán)丙基)-N2-(1-{4′-[2，2-二氟-1-羥基乙基]聯(lián)苯基-4-基}-2，2，2-三氟乙基)-4-氟-L-亮氨酸酰胺；N1-(1-氰基環(huán)丙基)-4-氟-N2-{2，2，2-三氟-1-[4′-(2，2，2-三氟-1-羥基乙基)聯(lián)苯基-4-基]乙基}-L-亮氨酸酰胺；N1-(1-氰基環(huán)丙基)-4-氟-N2-(2，2，2-三氟-1-{4′-[3，3，3-三氟-1-羥基-1-甲基丙基]聯(lián)苯基-4-基}乙基)-L-亮氨酸酰胺；N1-(1-氰基環(huán)丙基)-4-氟-N2-(2，2，2-三氟-1-{4′-[2，2，2-三氟-1-羥基-1-(三氟甲基)乙基]聯(lián)苯基-4-基}乙基)-L-亮氨酸酰胺；N1-(1-氰基環(huán)丙基)-4-氟-N2-{2，2，2-三氟-1-[4′-(2，2，2-三氟-1-羥基-1-甲基乙基)聯(lián)苯基-4-基]乙基}-L-亮氨酸酰胺；N1-(1-氰基環(huán)丙基)-4-氟-N2-(2，2，2-三氟-1-{4′-[1-羥基-1-(三氟甲基)丙基]聯(lián)苯基-4-基}乙基)-L-亮氨酸酰胺；N1-(1-氰基環(huán)丙基)-N2-(1-{4′-[2，2-二氟-1-羥基-1-甲基乙基]聯(lián)苯基-4-基}-2，2，2-三氟乙基)-4-氟-L-亮氨酸酰胺；N1-(1-氰基環(huán)丙基)-N2-(1-{4′-[2，2-二氟-1-羥基-1-(羥甲基)乙基]聯(lián)苯基-4-基}-2，2，2-三氟乙基)-4-氟-L-亮氨酸酰胺；N2-[1-(4-溴苯基)-2，2，2-三氟乙基]-N1-(1-氰基環(huán)丙基)-4-氟-L-亮氨酸酰胺；N1-(1-氰基環(huán)丙基)-N2-((1S)-1-{4′-[(1R)-2，2-二氟-1-羥基乙基]聯(lián)苯基-4-基}-2，2，2-三氟乙基)-4-氟-L-亮氨酸酰胺；N1-(1-氰基環(huán)丙基)-N2-((1S)-1-{4′-[(1S)-2，2-二氟-1-羥基乙基]聯(lián)苯基-4-基}-2，2，2-三氟乙基)-4-氟-L-亮氨酸酰胺；N1-(1-氰基環(huán)丙基)-4-氟-N2-{(1S)-2，2，2-三氟-1-[4′-(2，2，2-三氟-1-羥基乙基)聯(lián)苯基-4-基]乙基}-L-亮氨酸酰胺；N1-(1-氰基環(huán)丙基)-4-氟-N2-((1S)-2，2，2-三氟-1-{4′-[(1S)-3，3，3-三氟-1-羥基-1-甲基丙基]聯(lián)苯基-4-基}乙基)-L-亮氨酸酰胺；N1-(1-氰基環(huán)丙基)-4-氟-N2-((1S)-2，2，2-三氟-1-{4′-[(1R)-3，3，3-三氟-1-羥基-1-甲基丙基]聯(lián)苯基-4-基}乙基)-L-亮氨酸酰胺；N1-(1-氰基環(huán)丙基)-4-氟-N2-{(1S)-2，2，2-三氟-1-[4′-(R)-(2，2，2-三氟-1-羥基乙基)聯(lián)苯基-4-基]乙基}-L-亮氨酸酰胺；N1-(1-氰基環(huán)丙基)-4-氟-N2-((1S)-2，2，2-三氟-1-{4′-[2，2，2-三氟-1-羥基-1-(三氟甲基)乙基]聯(lián)苯基-4-基}乙基)-L-亮氨酸酰胺；N1-(1-氰基環(huán)丙基)-4-氟-N2-{(1 S)-2，2，2-三氟-1-[4′-(2，2，2-三氟-1-羥基-1-甲基乙基)聯(lián)苯基-4-基]乙基}-L-亮氨酸酰胺；N1-(1-氰基環(huán)丙基)-4-氟-N2-((1S)-2，2，2-三氟-1-{4′-[1-羥基-1-(三氟甲基)丙基]聯(lián)苯基-4-基}乙基)-L-亮氨酸酰胺；N1-(1-氰基環(huán)丙基)-N2-((1S)-1-{4′-[(1R)-2，2-二氟-1-羥基-1-甲基乙基]聯(lián)苯基-4-基}-2，2，2-三氟乙基)-4-氟-L-亮氨酸酰胺；N1-(1-氰基環(huán)丙基)-N2-((1S)-1-{4′-[(1S)-2，2-二氟-1-羥基-1-甲基乙基]聯(lián)苯基-4-基}-2，2，2-三氟乙基)-4-氟-L-亮氨酸酰胺；N1-(1-氰基環(huán)丙基)-N2-((1S)-1-{4′-[(1S)-2，2-二氟-1-羥基-1-(羥甲基)乙基]聯(lián)苯基-4-基}-2，2，2-三氟乙基)-4-氟-L-亮氨酸酰胺；N1-(1-氰基環(huán)丙基)-N2-((1S)-1-{4′-[(1R)-2，2-二氟-1-羥基-1-(羥甲基)乙基]聯(lián)苯基-4-基}-2，2，2-三氟乙基)-4-氟-L-亮氨酸酰胺；N2-[(1S)-1-(4-溴苯基)-2，2，2-三氟乙基]-N1-(1-氰基環(huán)丙基)-4-氟-L-亮氨酸酰胺；及其藥學(xué)上可接受的鹽、立體異構(gòu)體和N-氧化物衍生物。
在本發(fā)明范圍內(nèi)還包括含有如上所述的式I化合物和藥學(xué)上可接受的載體的藥物組合物。本發(fā)明還預(yù)期包括含有藥學(xué)上可接受的載體和任何在本申請(qǐng)中明確公開(kāi)的化合物的藥物組合物。
本發(fā)明的另一實(shí)施方案涉及含有式I化合物或者其藥學(xué)上可接受的鹽、立體異構(gòu)體或者N-氧化物衍生物的口服藥物組合物，其適于按照劑量間隔為每周一次、每?jī)芍芤淮?、每半月一次或者每月一次的連續(xù)制度抑制骨吸收。
根據(jù)在本文中包含的教導(dǎo)，本發(fā)明的這些和其它方面將是顯而易見(jiàn)的。
應(yīng)用本發(fā)明化合物為組織蛋白酶抑制劑，并且因此可以用于治療或者預(yù)防哺乳動(dòng)物組織蛋白酶依賴(lài)疾病或者癥狀，優(yōu)選人類(lèi)。特別地，本發(fā)明化合物為組織蛋白酶K抑制劑，并且因此可以用于治療或者預(yù)防哺乳動(dòng)物組織蛋白酶K依賴(lài)性疾病或者癥狀，優(yōu)選人類(lèi)。
與現(xiàn)有技術(shù)中已知的結(jié)構(gòu)類(lèi)似化合物相比，本發(fā)明化合物的優(yōu)點(diǎn)在于它們具有顯著的改良藥物動(dòng)力學(xué)分布。明確而言，本發(fā)明化合物具有優(yōu)良的生物利用度，例如但不限于，在0.5-1％甲基纖維素(methocel)中，劑量為10毫克/千克雄性Sprague Dawley大鼠。另外，本發(fā)明化合物提供了比本領(lǐng)域已知的結(jié)構(gòu)類(lèi)似化合物更長(zhǎng)的藥物系統(tǒng)曝置期。
“組織蛋白酶依賴(lài)疾病或者癥狀”是指依賴(lài)一種或多種組織蛋白酶活性的病理情況。“組織蛋白酶K依賴(lài)疾病或者癥狀”是指依賴(lài)一種或多種組織蛋白酶K活性的病理情況。與組織蛋白酶K活性相關(guān)的疾病包括骨質(zhì)疏松癥、腎上腺糖皮質(zhì)激素誘發(fā)的骨質(zhì)疏松癥、Paget’s病、異常疾病、牙齒損害、骨折、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎、假體周?chē)芄前Y、骨脆癥、動(dòng)脈粥樣硬化癥、肥胖病、青光眼、慢性阻塞性肺病和癌癥(包括轉(zhuǎn)移性骨骼疾病、惡性腫瘤的高鈣血癥和多發(fā)性骨髓瘤)。在用本發(fā)明要求的化合物治療這些癥狀中，需要的治療劑量將根據(jù)具體疾病而不同，并且本領(lǐng)域熟練技術(shù)人員可以輕易確定該劑量。雖然治療和預(yù)防都預(yù)期在本發(fā)明范圍內(nèi)，但是這些癥狀的治療是優(yōu)選的用途。
本發(fā)明的一種實(shí)施方案是在需要其的哺乳動(dòng)物中抑制組織蛋白酶活性的方法，包括給藥所述哺乳動(dòng)物治療有效量的如上所述的任何化合物或者任何藥物組合物。
本發(fā)明的一類(lèi)實(shí)施方案是方法，其中組織蛋白酶活性是組織蛋白酶K活性。
本發(fā)明的另一實(shí)施方案是在需要其的哺乳動(dòng)物中治療或者預(yù)防組織蛋白酶依賴(lài)癥狀的方法，包括給藥所述哺乳動(dòng)物治療有效量的如上所述的任何化合物或者任何藥物組合物。
本發(fā)明的一類(lèi)實(shí)施方案是方法，其中組織蛋白酶活性是組織蛋白酶K活性。
本發(fā)明的另一實(shí)施方案是在需要其的哺乳動(dòng)物中抑制骨損害的方法，包括給藥所述哺乳動(dòng)物治療有效量的如上所述的任何化合物或者任何藥物組合物。本發(fā)明的另一實(shí)施方案是在需要其的哺乳動(dòng)物中降低骨損害的方法，包括給藥所述哺乳動(dòng)物治療有效量的如上所述的任何化合物或者任何藥物組合物。本發(fā)明的另一實(shí)施方案是在需要其的哺乳動(dòng)物中治療異常升高的骨更新和骨折的方法，包括給藥所述哺乳動(dòng)物治療有效量的如上所述的任何化合物或者任何藥物組合物。組織蛋白酶K抑制劑在抑制骨吸收中的應(yīng)用在文獻(xiàn)中是已知的，參見(jiàn)Stroup，G.B.，Lark，M.W.，Veber，DF.，Bhattacharrya，A.，Blake，S.，Dare，L.C.，Erhard，K.F.，Hoffman，S.J.，James，I.E.，Marquis，R.w.，Ru，Y.，Vasko-Moser，J.A.，Smith，B.R.，Tomaszek，T.和Gowen，M.Potent and selective inhibition of human cathepsin K leads toinhibition of bone resorption in vivo in a nonhuman primate.J.BoneMiner.Res.，161739-1746；2001；和Votta，B.J.，Levy，M.A.，Badger，A.，Dodds，R.A.，James，I.E.，Thompson，S.，Bossard，M.J.，Carr，T.，Connor，J.R.，Tomaszek，T.A.，Szewczuk，L.，Drake，F(xiàn).H.，Veber，D.和Gowen，M.Peptide aldehyde inhibitors of cathepsin Kinhibit bone resorption both in vivo and in vitro.J.Bone Miner.Res.121396-1406；1997。
本發(fā)明的另一實(shí)施方案是在需要其的哺乳動(dòng)物中治療或者預(yù)防骨質(zhì)疏松癥的方法，包括給藥所述哺乳動(dòng)物治療有效量的如上所述的任何化合物或者任何上述藥物組合物。組織蛋白酶K抑制劑在治療或者預(yù)防骨質(zhì)疏松癥(包括腎上腺糖皮質(zhì)激素誘發(fā)的骨質(zhì)疏松癥)中的應(yīng)用在文獻(xiàn)中是已知的，參見(jiàn)Saftig，P.，Hunziker，E.，Wehmeyer，O.，Jones，S.，Boyde，A.，Rommerskirch，W.，Moritz，J.D.，Schu，P.和Vonfigura，K.Impaired osteoclast bone resorption leads toosteopetrosis in cathepsin K-deficient mice.Proc.Natl.Acad.Sci.USA9513453-13458；1998。
本發(fā)明的另一實(shí)施方案是在需要其的哺乳動(dòng)物中治療或者預(yù)防牙周病或者牙齒損害的方法，包括給藥所述哺乳動(dòng)物治療有效量的如上所述的任何化合物或者任何上述藥物組合物。組織蛋白酶K抑制劑在治療或者預(yù)防牙周病或者牙齒損害中的應(yīng)用已經(jīng)在文獻(xiàn)中進(jìn)行了論述，參見(jiàn)Sasaki，T.，“Differentiation and functions of osteoclasts andosontoclasts in mineralized tissue resorption，”Microsc Res Tech.2003Aug 15；61(6)483-95。
本發(fā)明的另一實(shí)施方案是在需要其的哺乳動(dòng)物中治療或者預(yù)防風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎或者風(fēng)濕性關(guān)節(jié)癥狀的方法，包括給藥所述哺乳動(dòng)物治療有效量的如上所述的任何化合物或者任何藥物組合物。在文獻(xiàn)中，已知關(guān)節(jié)周的骨的漸進(jìn)破壞是風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RA)病人中關(guān)節(jié)機(jī)能障礙和關(guān)節(jié)無(wú)力的主要原因，參見(jiàn)Goldring SR，“Pathogenesis of boneerosions in rheumatoid arthritis”.Curr.Opin.Rheumatol.2002；14406-10?；加蠷A患者的關(guān)節(jié)組織分析已經(jīng)提供證據(jù)，組織蛋白酶K陽(yáng)性破骨細(xì)胞是介導(dǎo)與風(fēng)濕性滑液損害有關(guān)的病灶骨吸收的細(xì)胞類(lèi)型，參見(jiàn)Hou，W-S，Li，W，Keyszer，G，Weber，E，Levy，R，Klein，MJ，Gravallese，EM，Goldring，SR，Bromme，D，“Comparisonof Cathepsin K and S expression within the Rheumatoid andOsteoarthritic Synovium”，Arthritis Rheumatism 2002；46663-74。此外，全身性骨損害是導(dǎo)致與嚴(yán)重RA有關(guān)的病狀的主要原因。在患有慢性RA的患者中，殿部和脊柱的骨折幾率得到了顯著增加，參見(jiàn)GouldA，Sambrook，P，Devlin J et al，“Osteoclastic activation is the principalmechanism leading to secondary osteoporosis in rheumatoid arthritis”.J.Rheumatol.1998；251282-9。組織蛋白酶K抑制劑在關(guān)節(jié)下骨吸除和全身性骨損害的治療或者預(yù)防中的應(yīng)用表明了在風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎增進(jìn)上藥理學(xué)介入的合理方法。
本發(fā)明的另一實(shí)施方案是在需要其的哺乳動(dòng)物中治療或者預(yù)防骨關(guān)節(jié)炎加重的方法，包括給藥所述哺乳動(dòng)物治療有效量的如上所述的任何化合物或者任何藥物組合物。在文獻(xiàn)中，已知骨關(guān)節(jié)炎(OA)伴隨有明確的關(guān)節(jié)變化，包括關(guān)節(jié)軟骨表面侵蝕、周?chē)P(guān)節(jié)軟骨內(nèi)骨化/骨贅增生和軟骨下骨硬化和孢囊形成，參見(jiàn)Oettmeier，R &Abendroth，K，“Osteoarthritis and boneosteologic types ofosteoarthritis of the hip”，Skeletal Radiol.1989；18165-74。最近，已經(jīng)提出了軟骨下骨硬化可能具有促使OA開(kāi)始和加重的作用。當(dāng)關(guān)節(jié)響應(yīng)重復(fù)的沖動(dòng)負(fù)載時(shí)，變硬的軟骨下骨只能較差的減弱和分散通過(guò)關(guān)節(jié)的壓力，使得該壓力通過(guò)關(guān)節(jié)軟骨表面成為更大的機(jī)械應(yīng)力。這反過(guò)來(lái)也促進(jìn)了軟骨磨損和纖化，參見(jiàn)Radin，EL和Rose RM，“Roleof subchondral bone in the initiation and progression of cartilagedamage”，Clin.Orthop.1986；21334-40.通過(guò)抗吸收試劑(例如組織蛋白酶K抑制劑)抑制過(guò)多的關(guān)節(jié)下骨吸收，將導(dǎo)致軟骨下骨更新受到抑制，由此可能會(huì)對(duì)進(jìn)行性O(shè)A產(chǎn)生有利的影響。
除上述假設(shè)之外，采自O(shè)A病人滑膜和關(guān)節(jié)軟骨樣品的滑液成纖維細(xì)胞、巨噬細(xì)胞相似細(xì)胞和軟骨細(xì)胞中的組織蛋白酶K蛋白質(zhì)表達(dá)最近得到了鑒定，參見(jiàn)Hou，W-S，Li，W，Keyszer，G，Weber，E，Levy，R，Klein，MJ，Gravallese，EM，Goldring，SR，Bromme，D，“Comparison of Cathepsin K and S expression within the Rheumatoidand Osteoarthritic Synovium”，Arthritis Rheumatism 2002；46663-74；和Dodd，RA，Connor，JR，Drake，F(xiàn)H，Gowen，M，“Expression ofCathepsin K messenger RNA in giant cells and their precursors inhuman osteoarthritic synovial tissues”.Arthritis Rheumatism 1999；421588-93；和Konttinen，YT，Mandelin，J，Li，T-F，Salo，J，Lassus，J等人“Acidic cysteine endoproteinase cathepsin K in thedegeneration of the superficial articular hyaline cartilage inosteoarthritis”，Arthritis Rheumatism 2002；46953-60。由此，這些近期研究涉及組織蛋白酶K在破壞與骨關(guān)節(jié)炎進(jìn)行相關(guān)的關(guān)節(jié)軟骨II型膠原中的作用。由此，如本發(fā)明所述的組織蛋白酶K抑制劑在骨關(guān)節(jié)炎治療或者預(yù)防中的應(yīng)用包括兩種不同的機(jī)制，一種機(jī)制是抑制破骨細(xì)胞驅(qū)動(dòng)的軟骨下骨更新，和第二種機(jī)制是直接抑制患有OA的患者的滑膜和軟骨中的II型膠原變性。
本發(fā)明的另一實(shí)施方案是在需要其的哺乳動(dòng)物中治療假體周?chē)芄前Y的方法，包括給藥所述哺乳動(dòng)物治療有效量的如上所述的任何化合物或者任何藥物組合物。組織蛋白酶K抑制劑在治療或者預(yù)防假體周?chē)芄前Y中的應(yīng)用已經(jīng)在文獻(xiàn)中進(jìn)行了論述，參見(jiàn)，Mandelin，J.，等人，“Interface tissue fibroblasts from loose total hip replacementprosthesis produce receptor activator of nuclear factor-kappaB ligand，osteoprotegerin and cathepsin K，”J Rheumatol.2005 Apr；32(4)713-20。
本發(fā)明的另一實(shí)施方案是在需要其的哺乳動(dòng)物中治療骨骼疾病(比如Paget’s疾病、骨脆癥和由多發(fā)性骨髓瘤導(dǎo)致的骨骼病變)的方法，包括給藥所述哺乳動(dòng)物治療有效量的如上所述的任何化合物或者任何藥物組合物。組織蛋白酶K抑制劑用于治療Paget’s疾病、骨脆癥和由多發(fā)性骨髓瘤導(dǎo)致的骨骼病變的應(yīng)用已經(jīng)在文獻(xiàn)中進(jìn)行了論述，參見(jiàn)，Lipton，A.，“New therapeutic agents for the treatment of bonediseases，”Expert Opin Biol Ther.2005 Jun；5(6)817-32。
本發(fā)明的另一實(shí)施方案是在需要其的哺乳動(dòng)物中治療癌癥的方法，包括給藥所述哺乳動(dòng)物治療有效量的如上所述的任何化合物或者任何藥物組合物。在文獻(xiàn)中已知組織蛋白酶K在人類(lèi)乳腺癌、前列腺癌和脊索癌中表達(dá)并且其具有基體分解能力，參見(jiàn)Littlewood-EvansAJ，Bilbe G，Bowler WB，F(xiàn)arley D，Wlodarski B，Kokubo T，InaokaT，Sloane J，Evans DB，Gallagher JA，“The osteoclast-associatedprotease cathepsin K is expressed in human breast carcinoma，”CancerRes 1997 Dec 1；57(23)5386-90.Brubaker KD，Vessella RL，True LD，Thomas R，Corey E，“Cathepsin K mRNA and protein expression inprostate cancer progression，”J Bone Miner Res 2003 18，222-30.Haeckel C，Krueger S，Kuester D，Ostertag H，Samii M，Buehling F，Broemme D，Czerniak B，Roessner A，“Expression of cathepsin K inchordoma，”Hum Pathol 2000 Jul；31(7)834-40。
本發(fā)明的另一實(shí)施方案是在需要其的哺乳動(dòng)物中治療動(dòng)脈粥樣硬化癥的方法，包括給藥所述哺乳動(dòng)物治療有效量的如上所述的任何化合物或者任何藥物組合物。下文獻(xiàn)中已知組織蛋白酶K在人類(lèi)動(dòng)脈粥樣化中表達(dá)并且具有顯著的彈性蛋白酶活性，參見(jiàn)Sukhova GK，ShiGP，Simon DI，Chapman HA，Libby P，“Expression of the elastolyticcathepsins S and K in human atheroma and regulation of theirproduction in smooth muscle cells，”J Clin Invest 1998 Aug 102，576-83。
本發(fā)明的另一實(shí)施方案是在需要其的哺乳動(dòng)物中治療肥胖病的方法，包括給藥所述哺乳動(dòng)物治療有效量的如上所述的任何化合物或者任何藥物組合物。在文獻(xiàn)中已知組織蛋白酶K mRNA在數(shù)種肥胖病鼠模型中的脂肪組織中和肥胖人類(lèi)男性的脂肪組織中升高，參見(jiàn)ChielliniC，Costa M，Novelli SE，Amri EZ，Benzi L，Bertacca A，Cohen P，Del Prato S，F(xiàn)riedman JM，Maffei M，“Identification of cathepsin K asa novel marker of adiposity in white adipose tissue，”J Cell Physiol2003，195，309-21。
本發(fā)明的另一實(shí)施方案是在需要其的哺乳動(dòng)物中治療青光眼的方法，包括給藥所述哺乳動(dòng)物治療有效量的如上所述的任何化合物或者任何藥物組合物。組織蛋白酶K在虹膜、睫狀體和視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞中高度表達(dá)并且由此可以用于治療青光眼，參見(jiàn)Ortega，J.，et al.，“Gene Expression of Proteases and Protease Inhibitors in the HumanCiliary Epithelium and ODM-2 cells，”Exp.Eye Res(1997)65，289-299；國(guó)際公開(kāi)申請(qǐng)WO 2004/058238(Alcon，Inc.)。
本發(fā)明的另一實(shí)施方案是在需要其的哺乳動(dòng)物中治療慢性阻塞性肺病的方法，包括給藥所述哺乳動(dòng)物治療有效量的如上所述的任何化合物或者任何藥物組合物。在文獻(xiàn)中已知組織蛋白酶K在肺部纖維化中起作用，參見(jiàn)Buhling，F(xiàn).等人，“Pivotal role of cathepsin K in lungfibrosis，”Am J Pathol.2004 Jun；164(6)2203-16。
本發(fā)明的另一實(shí)施方案是在需要其的哺乳動(dòng)物中治療寄生蟲(chóng)感染的方法，包括給藥所述哺乳動(dòng)物治療有效量的如上所述的任何化合物或者任何藥物組合物。在文獻(xiàn)中已知哺乳動(dòng)物組織蛋白酶與在這些寄生蟲(chóng)的生命周期中起著重要作用的類(lèi)木瓜蛋白酶半胱氨酸蛋白酶相關(guān)。所述寄生蟲(chóng)涉及瘧疾、美洲錐蟲(chóng)病、剛果錐蟲(chóng)病、利什曼病、賈第蟲(chóng)病、滴蟲(chóng)病、變形蟲(chóng)病、血吸蟲(chóng)病、片吸蟲(chóng)病、肺吸蟲(chóng)病和腸蛔蟲(chóng)疾病，參見(jiàn)Lecaille F，Kaleta J，Bromme D.，Human and parasiticpapain-like cysteine proteasestheir role in physiology and pathologyand recent developments in inhibitor design.Chem Rev 2002 102，4459-88。
本發(fā)明的另一實(shí)施方案是在需要其的哺乳動(dòng)物中治療嚴(yán)重急性呼吸性綜合癥(SARS)的方法，包括給藥所述哺乳動(dòng)物治療有效量的如上所述的任何化合物或者任何藥物組合物。
本發(fā)明的另一實(shí)施方案是在需要其的哺乳動(dòng)物中治療轉(zhuǎn)移性骨骼疾病的方法，包括給藥所述哺乳動(dòng)物治療有效量的如上所述的任何化合物或者任何藥物組合物。在文獻(xiàn)中已知，破骨細(xì)胞引起骨吸收并且由轉(zhuǎn)移性腫瘤誘發(fā)的骨組織破壞和高鈣血癥通過(guò)破骨細(xì)胞進(jìn)行。據(jù)此，對(duì)破骨細(xì)胞的抑制可以預(yù)防骨組織破壞和骨骼轉(zhuǎn)移，參見(jiàn)Miyamoto，T.和Suda，T.，“Differentiation and function ofosteoclasts，”Keio J Med 2003 Mar；52(1)1-7。
本發(fā)明的另一實(shí)施方案是給藥哺乳動(dòng)物治療有效量的如上所述的任何化合物或者任何組合物，以治療與組織蛋白酶S相關(guān)的哺乳動(dòng)物疾病，包括阿茲海默病、動(dòng)脈粥樣硬化癥、慢性阻塞性肺病、癌癥和某些自身免疫疾病，包括但不限于青少年發(fā)作糖尿病、多發(fā)性硬化、慢性天皰瘡、Graves’疾病、重癥肌無(wú)力、系統(tǒng)紅斑狼瘡、類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和橋本氏甲狀腺炎；變應(yīng)性疾病，包括但不限于哮喘；和外源性免疫反應(yīng)，包括但不限于器官移植排斥或者組織移植排斥。在文獻(xiàn)中已知組織蛋白酶S活性與上述疾病狀態(tài)相關(guān)，參見(jiàn)
Munger J S，Haass C，Lemere CA，Shi GP，Wong WS，Teplow DB，Selkoe DJ，Chapman HA，“Lysosomal processing of amyloid precursorprotein to A beta peptidesa distinct role for cathepsin S，”Biochem J 1995 311，299-305.Sukhova GK，Zhang Y，Pan JH，Wada Y，Yamamoto T，Naito M，Kodama T，Tsimikas S，Witztum JL，Lu ML，SakaraY，Chin MT，Libby P，Shi GP，“Deficiency of cathepsin S reduces atherosclerosis in LDL receptor-deficient mice，”J Clin Invest 2003 111，897-906.Zheng T，Zhu Z，Wang Z，Homer RJ，Ma B，Riese RJJr，Chapman HA Jr，Shapiro SD，Elias JA“Inducible targeting of IL-13 to the adult lung causes matrixmetalloproteinase-and cathepsin-dependent emphysema，”J Clin Invest 2000 106，1081-93.Shi GP，Sukhova GK，Kuzuya M，Ye Q，Du J，Zhang Y，Pan JH，Lu ML，Cheng XW，Iguchi A，Perrey S，LeeAM，Chapman HA，Libby P，“Deficiency of the cysteine protease cathepsin S impairs microvesselgrowth，”Circ Res 2003 92，493-500.Nakagawa TY，Brissette WH，Lira PD，Griffiths RJ，Petrushova N，Stock J，McNeish JD，Eastman SE，Howard ED，Clarke SR，Rosloniec EF，Elliott EA，Rudensky AY，“Impaired invariant chain degradation and antigen presentation and diminished collagen-induced arthritisin cathepsin S null mice，”Immunity 1999 10，207-17.
本發(fā)明的例證是任何如上所述化合物在制備用于在需要其的哺乳動(dòng)物中治療和/或預(yù)防骨質(zhì)疏松癥的藥物中的用途。本發(fā)明更進(jìn)一步的例證是任何如上所述化合物在制備藥物中的用途，所述藥物用于治療和/或預(yù)防骨損害、骨吸收、骨折、轉(zhuǎn)移性骨疾病和/或與組織蛋白酶功能相關(guān)的病癥。
本發(fā)明的其它例證是本發(fā)明的組織蛋白酶K抑制劑或者其藥學(xué)上可接受的鹽、立體異構(gòu)體或者N-氧化物衍生物的用于制造藥物的用途，所述藥物是在需要其的哺乳動(dòng)物中按照每周一次、每?jī)芍芤淮?、每月兩次或者每月一次的劑量間隔的連續(xù)給藥方案治療選自以下的疾病的口服單元?jiǎng)┬凸琴|(zhì)疏松癥、腎上腺糖皮質(zhì)激素誘發(fā)的骨質(zhì)疏松癥、Paget’s病、異常升高的骨更新、牙周病、牙齒損害、骨折、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎、假體周?chē)芄前Y、骨脆癥、動(dòng)脈粥樣硬化癥、肥胖病、青光眼、慢性阻塞性肺病、轉(zhuǎn)移性骨骼疾病、惡性腫瘤的高鈣血癥或者多發(fā)性骨髓瘤。本發(fā)明的例證還是通過(guò)將本發(fā)明組織蛋白酶K抑制劑按照每周一次、每?jī)芍芤淮巍⒚吭聝纱?、每月一次的連續(xù)給藥方案給藥至需要其的哺乳動(dòng)物從而治療選自以下的疾病骨質(zhì)疏松癥、腎上腺糖皮質(zhì)激素誘發(fā)的骨質(zhì)疏松癥、Paget’s疾病、異常升高的骨更新、牙周病、牙齒損害、骨折、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎、假體周?chē)芄前Y、骨脆癥、動(dòng)脈粥樣硬化癥、肥胖病、青光眼、慢性阻塞性肺病、轉(zhuǎn)移性骨骼疾病、惡性腫瘤的高鈣血癥或者多發(fā)性骨髓瘤。
本發(fā)明化合物可以單獨(dú)給藥或者優(yōu)選協(xié)同藥學(xué)上可接受的載體或者稀釋劑聯(lián)合給藥至哺乳動(dòng)物，優(yōu)選人類(lèi)，在藥物組合物中，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)藥物實(shí)踐，任選與已知的輔劑聯(lián)合，輔劑例如明礬。所述化合物可以口服給藥或者胃腸外給藥，包括靜脈內(nèi)的、肌內(nèi)的、腹膜內(nèi)的、皮下的、直腸的和局部的給藥途徑。
在用于口服使用的片劑的情況下，通常加入常規(guī)使用的載體，包括乳糖和玉米淀粉，和潤(rùn)滑劑，例如硬脂酸鎂。對(duì)于膠囊形式的口服給藥，有益的稀釋劑包括乳糖和干玉米淀粉。對(duì)于根據(jù)本發(fā)明的治療化合物的口服應(yīng)用，選擇的化合物可以通過(guò)以下方式給藥，例如以片劑或者膠囊形式，或者以水溶液或者懸浮液形式給藥。對(duì)于片劑或者膠囊形式的口服給藥，藥物活性成分可以與口服的、無(wú)毒的、藥學(xué)上可接受的惰性載體聯(lián)合使用，惰性載體例如乳糖、淀粉、蔗糖、葡萄糖、甲基纖維素、硬脂酸鎂、磷酸氫鈣、硫酸鈣、甘露醇和山梨糖醇等等；對(duì)于液態(tài)形式的口服給藥，口服的藥物組分可以與任何口服的、無(wú)毒的、藥學(xué)上可接受的惰性載體聯(lián)合使用，惰性載體例如乙醇、甘油和水等等。此外，當(dāng)期望或者需要時(shí)，也可以將合適的粘合劑、潤(rùn)滑劑、崩解劑和著色劑結(jié)合入混合物中。適當(dāng)?shù)慕Y(jié)合劑包括淀粉、明膠、天然糖類(lèi)(例如葡萄糖或者β-乳糖)、玉米甜味劑、天然樹(shù)膠和合成樹(shù)膠(例如阿拉伯膠、西黃蓍膠或者海藻酸鈉)、羧甲基纖維素、聚乙二醇和石蠟等等。用于這些劑型中的潤(rùn)滑劑包括油酸鈉、硬脂酸鈉、硬脂酸鎂、苯甲酸鈉、乙酸鈉和氯化鈉等等。崩解劑包括但不限于淀粉、甲基纖維素、瓊脂、皂土和黃原膠等等。當(dāng)含水混懸劑需要口服應(yīng)用時(shí)，將活性成分與乳化劑和懸浮劑聯(lián)合使用。如果需要，可以將某些甜味劑和/或增香劑加入其中。對(duì)于肌內(nèi)、腹膜內(nèi)、皮下和靜脈內(nèi)應(yīng)用，通常制備活性成分的無(wú)菌液，并且應(yīng)當(dāng)對(duì)溶液的pH值進(jìn)行適當(dāng)?shù)卣{(diào)節(jié)和緩沖。對(duì)于靜脈內(nèi)使用，應(yīng)該對(duì)溶質(zhì)的總濃度進(jìn)行控制，以便使得制劑等滲。
本發(fā)明化合物還可以以微脂粒輸送系統(tǒng)的形式進(jìn)行給藥，微脂粒輸送系統(tǒng)例如小單層囊、大單層囊和多層囊。脂質(zhì)體可以由多種磷脂形成，例如膽固醇、十八胺或者卵磷脂。
本發(fā)明化合物也可以通過(guò)利用單克隆抗體作為個(gè)體載體進(jìn)行遞送，所述化合物分子連接到單克隆抗體上。本發(fā)明化合物也可以與作為目標(biāo)藥物載體的可溶性聚合物結(jié)合。上述聚合物可以包括聚乙烯吡咯烷酮、吡喃共聚物、多羥丙基甲基丙烯酰胺-苯酚、多羥基-乙基天冬酰胺-苯酚或者棕櫚酰基取代的聚氧化乙烯-聚賴(lài)氨酸。此外，可以將本發(fā)明化合物結(jié)合到一類(lèi)用于實(shí)現(xiàn)藥物控釋的可生物降解的聚合物上，可生物降解的聚合物例如聚丙醇酸、聚乙醇酸、聚丙醇酸和聚乙醇酸的共聚物、聚ε-己內(nèi)酯、聚羥基丁酸、聚原酸酯、聚縮醛、聚二氫吡喃、聚氰基丙烯酸酯和交聯(lián)的或者親水疏水兩重性的水凝膠嵌段共聚物。
本發(fā)明化合物還可以用于與已知可以用于治療或者預(yù)防以下疾病的試劑聯(lián)合使用，所述疾病為骨質(zhì)疏松癥、腎上腺糖皮質(zhì)激素誘發(fā)的骨質(zhì)疏松癥、Paget’s病、異常升高的骨更新、牙周病、牙齒損害、骨折、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎、假體周?chē)芄前Y、骨脆癥、轉(zhuǎn)移性骨骼疾病、惡性腫瘤的高鈣血癥和多發(fā)性骨髓瘤。本發(fā)明公開(kāi)的化合物與其它對(duì)治療或者預(yù)防骨質(zhì)疏松癥或者其它骨病癥有用的試劑的聯(lián)合同樣包括在本發(fā)明范圍內(nèi)。基于藥物的特性以及所涉及的疾病，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員將可以辨別哪些試劑的聯(lián)合有效。所述試劑包括以下有機(jī)雙膦酸酯；雌激素受體調(diào)節(jié)劑；雄激素受體調(diào)節(jié)劑；破骨細(xì)胞質(zhì)子ATP酶抑制劑；HMG-CoA還原酶抑制劑；整聯(lián)蛋白受體拮抗劑；維生素D；合成維生素D類(lèi)似物；合成代謝試劑，比如PTH；非甾族抗炎藥物；選擇性環(huán)加氧酶-2抑制劑；白細(xì)胞間介素-1β抑制劑；LOX/COX抑制劑；RANKL抑制劑；及其藥學(xué)上可接受的鹽和混合物。優(yōu)選的聯(lián)合為本發(fā)明化合物和有機(jī)雙膦酸酯的聯(lián)合。另一優(yōu)選的組合為本發(fā)明化合物和雌激素受體調(diào)節(jié)劑的組合。另一優(yōu)選的組合為本發(fā)明化合物和雄激素受體調(diào)節(jié)劑的組合。另一優(yōu)選的組合為本發(fā)明化合物和成骨細(xì)胞合成代謝劑的組合。
“有機(jī)雙膦酸酯”包括但不限于下面化學(xué)式的化合物
其中n為0～7的整數(shù)，和其中A和X獨(dú)立地選自H、OH、鹵素、NH2、SH、苯基、C1-C30烷基、C3-C30支鏈或者環(huán)烷基、具有兩個(gè)或者三個(gè)N的二環(huán)結(jié)構(gòu)、C1-C30取代的烷基、C1-C10烷基取代的NH2、C3-C10支鏈或者環(huán)烷基取代的NH2、C1-C10二烷基取代的NH2、C1-C10烷氧基、C1-C10烷基取代的硫基、苯硫基、鹵代苯硫基、C1-C10烷基取代的苯基、吡啶基、呋喃基、吡咯烷基、咪唑基、咪唑并吡啶基和芐基，從而使得當(dāng)n為0時(shí)A和X都不選自H或者OH；或者A和X與它們連接的碳原子合起來(lái)形成C3-C10環(huán)。
在上述化學(xué)式中，所述烷基可以是直鏈、支鏈或者環(huán)狀的烷基，條件是對(duì)化學(xué)式選擇充足的原子。C1-C30取代烷基可以包含多種取代基，取代基的非限制性實(shí)例包含選自以下的取代基苯基、吡啶基、呋喃基、吡咯烷基、咪唑基、NH2、C1-C10烷基或者二烷基取代的NH2、OH、SH和C1-C10烷氧基。
就A和/或X取代基來(lái)說(shuō)，上述化學(xué)式還意圖包含復(fù)雜碳環(huán)結(jié)構(gòu)、芳香結(jié)構(gòu)和雜原子結(jié)構(gòu)，這些結(jié)構(gòu)的非限制性實(shí)例包括萘基、喹啉基、異喹啉基、金剛烷基和氯代苯硫基。
在此還可以使用雙膦酸酯的藥學(xué)上可接受的鹽和衍生物。這些鹽的非限制性實(shí)例包含選自以下的鹽堿金屬鹽、堿土金屬鹽、銨鹽和單-、二-、三-或者四-C1-C30烷基取代的銨鹽。優(yōu)選的鹽選自鈉鹽、鉀鹽、鈣鹽、鎂鹽和銨鹽。更優(yōu)選鈉鹽。所述衍生物的非限制性實(shí)例包含選自以下的衍生物酯、水合物和酰胺。
應(yīng)當(dāng)指出，在此使用的涉及本發(fā)明治療劑的術(shù)語(yǔ)“雙膦酸酯”的含義還包括二膦酸酯、雙膦酸和二膦酸，以及這些物質(zhì)的鹽和衍生物。除非明確說(shuō)明，在關(guān)于雙膦酸酯中使用的具體命名法并不意味著對(duì)本發(fā)明范圍的限制。因?yàn)楫?dāng)前本領(lǐng)域普通技術(shù)人員使用混合命名法，因此除非在本文中另有說(shuō)明，在本發(fā)明中涉及雙膦酸酯化合物的具體重量或者百分比基于酸活性重量。例如，短語(yǔ)“對(duì)于阿侖膦酸活性重量基位，約5mg選自阿侖膦酸酯、其藥學(xué)上可接受的鹽及其混合物的骨吸收抑制雙膦酸酯”是指選擇的雙膦酸酯化合物的量以5mg阿侖膦酸為基準(zhǔn)進(jìn)行計(jì)算。
在此有效的雙膦酸酯的非限制性實(shí)例包括以下阿侖膦酸酯(又名阿侖膦酸)、4-氨基-1-羥基亞丁基-1，1-二膦酸、阿侖膦酸鈉或者阿侖膦酸鈉三水合物、4-氨基-1-羥基亞丁基-1，1-二膦酸單鈉三水合物。
阿侖膦酸酯描述于美國(guó)專(zhuān)利4,922,007中，Kieczykowski等人，公開(kāi)于1999年5月1日；5,019,651，Kieczykowski等人，公開(kāi)于1991年5月28日；5,510,517，Dauer等人，公開(kāi)于1996年4月23日；5,648,491，Dauer等人，公開(kāi)于1997年7月15日，它們的全部?jī)?nèi)容在此引入作為參考。
環(huán)庚基氨基甲撐-1，1-二膦酸，YM 175，Yamanouchi(英卡磷酸酯，以前稱(chēng)為cimadronate)，如Isomura等人的公開(kāi)于1990年11月13日的美國(guó)專(zhuān)利4,970,335所述，其全部?jī)?nèi)容在此引入作為參考。
1，1-二氯甲撐-1，1-二磷酸(氯膦酸)和二鈉鹽(氯膦酸鹽，Procter和Gamble)，描述于比利時(shí)專(zhuān)利672,205(1966)和J.Org.Chem，32，4111(1967)中，它們的全部?jī)?nèi)容都在此引入作為參考。
1-羥基-3-(1-吡咯烷基)-亞丙基-1，1-二膦酸(EB-1053)。
1-羥基乙烷-1，1-二膦酸(依替膦酸)。
1-羥基-3-(N-甲基-N-戊基氨基)亞丙基-1，1-二膦酸，又名BM-210955，Boehringer-Mannheim(埃本膦酸鹽)，描述于1990年5月22日公開(kāi)的美國(guó)專(zhuān)利No.4,927,814中，其全部?jī)?nèi)容在此引入作為參考。
1-羥基-2-咪唑并(1，2-a)吡啶-3-基乙叉(米諾膦酸酯)。
6-氨基-1-羥基亞己基-1，1-二膦酸(奈立膦酸酯)。
3-(二甲基氨基)-1-羥基亞丙基-1，1-二膦酸(奧帕膦酸酯)。
3-氨基-1-羥基亞丙基-1，1-二膦酸(帕米膦酸酯)。
-1，1-二膦酸(piridronate)，描述于美國(guó)專(zhuān)利編號(hào)4,761,406中，其全部?jī)?nèi)容在此引入作為參考。
1-羥基-2-(3-吡啶基)-亞乙基-1，1-二膦酸(利塞膦酸酯)。
(4-氯苯基)硫甲烷-1，1-二膦酸(替魯膦酸酯)，如美國(guó)專(zhuān)利4,876,248，Breliere等人，1989年10月24日中所述，其全部?jī)?nèi)容在此引入作為參考。
1-羥基-2-(1H-咪唑-1-基)-亞乙基-1，1-二膦酸(唑來(lái)磷酸酯)。
雙膦酸酯的非限制性實(shí)例包含阿侖膦酸酯、英卡膦酸酯、氯屈膦酸酯、依替膦酸酯、埃本膦酸酯、英卡磷酸酯、米諾膦酸酯、奈立膦酸酯、奧帕膦酸酯、帕米膦酸酯、piridronate、利塞膦酸酯、替魯膦酸酯和唑來(lái)磷酸酯，及其藥學(xué)上可接受的鹽和酯。特別優(yōu)選的雙膦酸酯是阿侖膦酸鹽，特別是阿侖膦酸的鈉、鉀、鈣、鎂或者銨鹽。優(yōu)選的雙膦酸鹽的例證是阿侖膦酸鈉鹽，特別是水合阿侖膦酸鈉鹽。所述鹽可以與整摩爾數(shù)的水或者非整摩爾數(shù)的水進(jìn)行水合。優(yōu)選的雙膦酸鹽的其它例證是水合阿侖膦酸鈉鹽，特別是當(dāng)水合鹽是阿侖膦酸鈉三水合物時(shí)。
應(yīng)當(dāng)認(rèn)可，可以使用兩種或更多種雙膦酸酯活性物質(zhì)的混合物。
有機(jī)雙膦酸酯的精確劑量將隨著劑量方案、選擇的具體雙膦酸酯、哺乳動(dòng)物或者人類(lèi)的年齡、大小、性別和狀態(tài)、要進(jìn)行治療的病癥的性質(zhì)和嚴(yán)重程度以及其它相關(guān)的醫(yī)療和物理因素而變化。因此，精確的藥學(xué)有效量不能預(yù)先規(guī)定，可以由護(hù)理者或者臨床醫(yī)生即時(shí)確定。適宜的量可以通過(guò)動(dòng)物模型和人類(lèi)臨床研究的常規(guī)試驗(yàn)進(jìn)行確定。通常，對(duì)雙膦酸酯的適宜量進(jìn)行選擇以獲得骨吸收抑制作用，即給藥骨吸收抑制量的雙膦酸酯。對(duì)于人類(lèi)，雙膦酸酯的有效口服劑量一般為約1.5～約6000μg/kg體重，并且優(yōu)選約10～約2000μg/kg體重。對(duì)于阿侖膦酸單鈉三水合物，一般人類(lèi)給藥劑量通常為約2毫克/天～約40毫克/天，優(yōu)選為約5毫克/天～約40毫克/天。對(duì)于阿侖膦酸單鈉三水合物，美國(guó)目前批準(zhǔn)的用于預(yù)防骨質(zhì)疏松癥的劑量是5毫克/天，用于治療骨質(zhì)疏松癥的劑量是10毫克/天，用于治療Paget’s疾病的劑量是40毫克/天。
在另一種給藥方案中，雙膦酸酯可以每隔一段時(shí)間給藥而不是按天給藥，例如每周一次給藥、每周兩次給藥、每?jī)芍芤淮谓o藥和每月兩次給藥。在每周一次的給藥方案中，阿侖膦酸單鈉三水合物將按35毫克/周或者70毫克/周的劑量給藥。
“選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑”是指干擾或者抑制雌激素結(jié)合至受體的化合物，與機(jī)制無(wú)關(guān)。雌激素受體調(diào)節(jié)劑的實(shí)例包含但不限于雌激素、孕激素、雌二醇、屈洛昔芬、雷洛昔芬、拉索昔芬、TSE-424、他莫昔芬、伊多昔芬、LY353381、LY117081、托瑞米芬、氟維司群、4-[7-(2，2-二甲基-1-氧代丙氧基-4-甲基-2-[4-[2-(1-哌啶基)乙氧基]苯基]-2H-1-苯并吡喃-3-基]-苯基-2，2-二甲基丙酸酯、4，4′-二羥基二苯甲酮-2，4-二硝基苯基-腙和SH646。
“雌激素受體β調(diào)節(jié)劑”是一種選擇性激動(dòng)或者拮抗雌激素受體β的化合物(ERβ激動(dòng)ERβ經(jīng)ERβ介導(dǎo)作用促進(jìn)色氨酸羥化酶基因的轉(zhuǎn)錄(TPH，5-羥色胺合成中的關(guān)鍵酶))。雌激素受體β激動(dòng)劑的實(shí)例可以PCT國(guó)際公開(kāi)WO 01/82923(公開(kāi)于2001年11月8日)和WO02/41835(公開(kāi)于2002年5月20日)中發(fā)現(xiàn)，它們的全部?jī)?nèi)容都在此引入作為參考。
“雄激素受體調(diào)節(jié)劑”是指干擾或者抑制雄激素結(jié)合至受體的化合物，與機(jī)制無(wú)關(guān)。雄激素受體調(diào)節(jié)劑的實(shí)例包含非那甾胺以及其它5α-還原酶抑制劑、尼魯米特、氟他米特、必卡他胺、利阿唑和阿比特龍醋酸鹽。
“破骨細(xì)胞質(zhì)子三磷酸腺苷酶抑制劑”是指質(zhì)子三磷酸腺苷酶的抑制劑，發(fā)現(xiàn)于破骨細(xì)胞的頂膜上，并且據(jù)報(bào)道，其在骨吸收過(guò)程中起著顯著的作用。此質(zhì)子泵代表著設(shè)計(jì)可能可以用于治療和預(yù)防骨質(zhì)疏松癥和相關(guān)代謝疾病的骨吸收抑制劑的誘人目標(biāo)。參見(jiàn)C.Farina等人，“Selective inhibitors of the osteoclast vacuolar proton ATPase asnovel bone antiresorptive agents”，DDT，4163-172(1999)，其全部?jī)?nèi)容在此引入作為參考。
“HMG-CoA還原酶抑制劑”是指3-羥基-3-甲基戊二酰-輔酶A還原酶的抑制劑。對(duì)HMG-CoA還原酶具有抑制活性的化合物可以通過(guò)使用現(xiàn)有技術(shù)中眾所周知的驗(yàn)定法輕易得到鑒定。例如，參見(jiàn)美國(guó)專(zhuān)利4,231,938第6欄和WO 84/02131第30～33頁(yè)中描述或者引用的測(cè)定法。當(dāng)在此使用時(shí)，術(shù)語(yǔ)“HMG-CoA還原酶抑制劑”和“HMG-CoA還原酶的抑制劑”具有相同的含義。
可以使用的HMG-CoA還原酶抑制劑的實(shí)例包括但不限于洛伐他汀MEVACOR；參見(jiàn)美國(guó)專(zhuān)利Nos.4,231,938，4,294,926和4,319,039)、辛伐他汀(ZOCOR；參見(jiàn)美國(guó)專(zhuān)利Nos.4,444,784、4,820,850和4,916,239)、普伐他汀(PRAVACHOL；參見(jiàn)美國(guó)專(zhuān)利Nos.4,346,227、4,537,859、4,410,629，5,030,447和5,180,589)、氟伐他汀(LESCOL；參見(jiàn)美國(guó)專(zhuān)利Nos.5,354,772、4,911,165、4,929,437、5,189,164、5,118,853、5,290,946和5,356,896)、阿伐他汀(LIPITOR；參見(jiàn)美國(guó)專(zhuān)利Nos.5,273,995、4,681,893、5,489,691和5,342,952)和西立伐他汀(還稱(chēng)為西伐他汀和BAYCHOL；參見(jiàn)美國(guó)專(zhuān)利No.5,177,080)。這些和另外可以用于本發(fā)明方法中的HMG-CoA還原酶抑制劑的結(jié)構(gòu)式描述于M.Yalpani的“Cholesterol Lowering Drugs”，85～89頁(yè)的第87頁(yè)(1996年2月5日)中和美國(guó)專(zhuān)利Nos.4,782,084以及4,885,314中。在此使用的術(shù)語(yǔ)“HMG-CoA還原酶抑制劑”包含所有藥學(xué)上可接受的內(nèi)酯和開(kāi)放酸形式(即，其中內(nèi)酯環(huán)開(kāi)放從而形成游離酸)，以及具有HMG-CoA還原酶抑制活性的化合物的鹽和酯形式，并且因此上述鹽、酯、開(kāi)放酸和內(nèi)酯形式的用途都包括在本發(fā)明范圍內(nèi)。內(nèi)酯部分的實(shí)例及其相應(yīng)的開(kāi)放酸形式如下結(jié)構(gòu)I和II所示。
內(nèi)酯 開(kāi)放酸I II在其中可以存在開(kāi)放酸形式的HMG-CoA還原酶抑制劑中，鹽形式和酯形式優(yōu)選可以由開(kāi)放酸形成，并且所有這些形式都包含在在此使用的術(shù)語(yǔ)“HMG-CoA還原酶抑制劑”的含義內(nèi)。優(yōu)選HMG-CoA還原酶抑制劑選自洛伐他汀和辛伐他汀，并且最優(yōu)選辛伐他汀。在此，關(guān)于HMG-CoA還原酶抑制劑的術(shù)語(yǔ)“藥學(xué)上可接受的鹽”將意指用于本發(fā)明中的化合物的無(wú)毒鹽，它們通常通過(guò)游離酸與適當(dāng)?shù)挠袡C(jī)或者無(wú)機(jī)堿進(jìn)行反應(yīng)制備，尤其是那些由陽(yáng)離子形成的鹽，陽(yáng)離子例如鈉、鉀、鋁、鈣、鋰、鎂、鋅和四甲銨，以及由胺形成的鹽，胺例如氨、乙二胺、N-甲基葡萄糖胺、賴(lài)氨酸、精氨酸、鳥(niǎo)氨酸、膽堿、N，N′-二芐基乙二胺、氯普魯卡因、二乙醇胺、普魯卡因、N-芐基苯乙胺、1-對(duì)氯芐基-2-四氫吡咯-1′-基-甲基苯并咪唑、二乙胺、哌嗪和三羥甲基氨基甲烷。HMG-CoA還原酶抑制劑的鹽形式的其它實(shí)例可以包含但不限于，醋酸鹽、苯磺酸鹽、苯甲酸鹽、碳酸氫鹽、硫酸氫鹽、灑石酸氫鹽、硼酸鹽、溴化物、乙二胺四乙酸鈣鹽、右旋樟腦磺酸、碳酸鹽、氯化物、克拉維酸鹽、檸檬酸鹽、二鹽酸化物、乙二胺四乙酸鹽、乙二磺酸鹽、依托紅霉素、esylate、延胡索酸鹽、葡庚糖酸鹽、葡糖酸鹽、谷氨酸鹽、乙醇酰基阿散酸鹽、己基間苯二酸鹽、哈胺、氫溴酸鹽、鹽酸鹽、羥基萘甲酸鹽、碘化物、異硫代硫酸鹽、乳酸鹽、乳糖酸鹽、月桂酸鹽、蘋(píng)果酸鹽、馬來(lái)酸鹽、扁桃酸鹽、甲磺酸鹽、硫酸二甲酯、粘酸鹽、萘磺酸鹽、硝酸鹽、油酸鹽、乙二酸鹽、pamaote、棕櫚酸鹽、泛酸鹽、磷酸酯/磷酸氫鹽、多聚半乳糖醛酸鹽、水楊酸鹽、硬脂酸鹽、堿式醋酸鹽、琥珀酸鹽、丹寧酸鹽、酒石酸鹽、8-氯茶堿鹽、甲苯磺酸鹽、三乙基碘化物和戊酸鹽。
所述HMG-CoA還原酶抑制劑化合物的酯類(lèi)衍生物可以作為前藥，當(dāng)將其吸收到恒溫動(dòng)物血液中去時(shí)，酯類(lèi)衍生物可以以一定方式裂開(kāi)以釋放藥物形式和使得藥物提供改善的治療效能。
以上所應(yīng)用的“整聯(lián)蛋白受體對(duì)抗劑”是指選擇性對(duì)抗、抑制或者抵消生理配體結(jié)合至αvβ3整聯(lián)蛋白的化合物，指選擇性對(duì)抗、抑制或者抵消生理配體結(jié)合至αvβ5整聯(lián)蛋白的化合物，指選擇性對(duì)抗、抑制或者抵消生理配體結(jié)合至αvβ3整聯(lián)蛋白和αvβ5整聯(lián)蛋白的化合物，和指對(duì)抗、抑制或者抵消表達(dá)于毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞上的特定整聯(lián)蛋白的化合物。該術(shù)語(yǔ)還指αvβ6、αvβ8、α1β1、α2β1、α5β1、α6β1和α6β4整聯(lián)蛋白拮抗劑。該術(shù)語(yǔ)還指αvβ3、αvβ5、αvβ6、αvβ8、α1β1、α2β1、α5β1、α6β1和α6β4整聯(lián)蛋白任何組合的拮抗劑。H.N.Lode等人，PNAS USA，961591-1596，1999年，在自發(fā)腫瘤轉(zhuǎn)移的根除中，已經(jīng)觀察到血管原性αv整聯(lián)蛋白對(duì)抗劑和腫瘤特異性抗體細(xì)胞因子(白細(xì)胞介素-2)融合蛋白之間的協(xié)同作用。他們的結(jié)果表明這種聯(lián)用對(duì)于癌癥和轉(zhuǎn)移性腫瘤增加的治療可能有用。αvβ3整聯(lián)蛋白受體對(duì)抗劑通過(guò)與所有現(xiàn)有藥物不同的新機(jī)理抑制骨吸收。整聯(lián)蛋白是介導(dǎo)細(xì)胞-細(xì)胞和細(xì)胞-基質(zhì)相互作用的異源二聚的橫跨膜粘著受體。α和β整聯(lián)蛋白亞單位非共價(jià)相互作用，并且以二階陽(yáng)離子依賴(lài)方式結(jié)合細(xì)胞外基質(zhì)配體。破骨細(xì)胞上最大量的整聯(lián)蛋白是αvβ3(＞107/破骨細(xì)胞)，它們看來(lái)似乎在對(duì)細(xì)胞遷移和極化至關(guān)重要的細(xì)胞骨架組織中起著限速的作用。αvβ3的拮抗作用選自骨吸收抑制作用、再狹窄抑制作用、黃斑變性抑制作用、關(guān)節(jié)炎抑制作用和癌癥以及轉(zhuǎn)移性生長(zhǎng)抑制作用。
“成骨細(xì)胞合成代謝劑”是指構(gòu)造骨的制劑，例如PTH。已經(jīng)表明，甲狀旁腺激素(PTH)或者它的氨基末端片段及其類(lèi)似物的間歇給藥在動(dòng)物和人類(lèi)中預(yù)防、阻止、部分逆轉(zhuǎn)骨損害和刺激骨生成。關(guān)于其論述，參考D.W.Dempster等人，“Anabolic actions of parathyroidhormone on bone”，Endocr Rev，14690-709(1993)。研究已經(jīng)表明了甲狀旁腺激素在刺激骨生成并且從而提高骨質(zhì)量和強(qiáng)度中的臨床益處。結(jié)果報(bào)道于RM Neer等的New Eng J Med，3441434-1441(2001)中。
此外，甲狀旁腺激素相關(guān)蛋白質(zhì)片段或者其類(lèi)似物，例如PTHrP-(1-36)已經(jīng)表明具有有效的抗鈣尿作用[參見(jiàn)M.A.Syed等人，“Parathyroid hormone-related protein-(1-36)stimulates renal tubularcalcium reabsorption in normal human volunteersimplications for thepathogenesis of humoral hypercalcemia of malignancy”，JCEM，861525-1531(2001)]，并且還可以具有成為治療骨質(zhì)疏松癥的合成代謝劑的可能性。
“維生素D”包括但不限于維生素D3(膽鈣化醇)和維生素D2(麥角鈣化醇)，它們是天然存在的維生素D(1α-羥基維生素D；25-羥基維生素D和1α，25-二羥基維生素D)的羥基化生物學(xué)活性代謝產(chǎn)物的生物學(xué)惰性前體。維生素D2和維生素D3在人類(lèi)中具有相同的生物學(xué)效力。當(dāng)維生素D2或者D3進(jìn)入循環(huán)系統(tǒng)時(shí)，它通過(guò)細(xì)胞色素P450-維生素D-25-羥化酶進(jìn)行羥基化，從而得到25-羥基維生素D。所述25-羥基維生素D代謝產(chǎn)物是生物學(xué)惰性的，并且它在腎中通過(guò)細(xì)胞色素P450-單加氧酶25(OH)D-1α-羥化酶得到進(jìn)一步羥基化，從而給出1，25-二羥基維生素D。當(dāng)血清鈣降低時(shí)，甲狀旁腺激素(PTH)的形成增加，它通過(guò)將25-羥基維生素D轉(zhuǎn)化成1，25-二羥基維生素D調(diào)節(jié)鈣的體內(nèi)平衡和提高血漿鈣水平。
認(rèn)為1，25-二羥基維生素D是維生素D對(duì)鈣和骨骼代謝產(chǎn)生作用的物質(zhì)。所述1，25-二羥基代謝產(chǎn)物是保持鈣吸收和骨骼完整性所需的活性激素。通過(guò)將單核細(xì)胞干細(xì)胞誘化異化成破骨細(xì)胞和將鈣保持在正常范圍內(nèi)，鈣的體內(nèi)平衡通過(guò)1，25-二羥基維生素D得到保持，這通過(guò)將鈣羥磷灰石沉積在骨骼表面上導(dǎo)致骨鹽沉積，參見(jiàn)Holick，MF，“Vitamin D photobiology，metabolism，and clinical applications，”Endocrinology，第三版，990-1013(1995)，DeGroot L等人編輯。然而，升高的1α25-二羥基維生素D3的水平會(huì)導(dǎo)致血液中鈣濃度升高和由骨骼代謝對(duì)鈣濃度的異常調(diào)節(jié)，導(dǎo)致高鈣血癥。1α，25-二羥基維生素D3還間接調(diào)節(jié)骨骼代謝中的破骨活性，并且可以預(yù)期其升高的水平可以增強(qiáng)骨質(zhì)疏松癥中的過(guò)度骨吸收。
在本發(fā)明實(shí)施方案中，對(duì)維生素D化合物的適當(dāng)量進(jìn)行選擇，從而在劑量給藥間隔期間提供不會(huì)與組織蛋白酶K抑制劑的能力相抵觸的適當(dāng)?shù)木S生素D營(yíng)養(yǎng)，從而獲得骨吸收抑制作用。對(duì)于包括組織蛋白酶K抑制劑和維生素D化合物的本發(fā)明口服組合物，維生素D化合物的量為約100IU～約60,000IU。在本發(fā)明實(shí)施方案中，維生素D化合物的口服量的非限制性實(shí)例包括但不限于2,800IU、5,600IU、7,000IU、8,400IU、11,200IU、14,000IU、16,800IU或者19,600IU的劑量。對(duì)于每周劑量給藥，維生素D的口服量的非限制性實(shí)例為2,800IU、5,600IU、7,000IU、8,400IU和11,200IU。對(duì)于每月劑量給藥，維生素D的口服量的非限制性實(shí)例為11,200IU、14,000IU、15,400IU、16,800IU和19,600IU。
“合成維生素D類(lèi)似物”包括與維生素作用相同的非天然存在的化合物。
“非甾族抗炎藥物”或者NSAIDs經(jīng)環(huán)加氧酶(COX)-1和COX-2抑制花生四烯酸向促炎性前列腺素的代謝。NSAIDs的非限制性實(shí)例包括阿斯匹林、布洛芬、萘普生、雙氯芬酸、依托度酸、fenoporfen、氟比洛芬、吲哚美辛、酮洛芬、酮咯酸、美洛昔康、萘丁美酮、奧沙普秦、吡羅昔康、舒林酸、托美汀、二氟苯水楊酸、甲氯胺苯酸鹽和苯丁唑酮。
“選擇性環(huán)加氧酶-2抑制劑”或者COX-2抑制劑是指抑制COX-2輔酶的非甾族抗炎藥物(NSAID)，其有助于緩解體內(nèi)疼痛和炎癥。COX-2抑制劑的非限制性實(shí)例包括西利考昔、艾托考昔、帕瑞考昔、羅非考昔、伐地考昔和魯米昔布。
“白細(xì)胞間介素-1β抑制劑”或者IL-1β是指IL-1的抑制劑，它是由活化T-胸腺依賴(lài)性細(xì)胞和加強(qiáng)它們對(duì)促細(xì)胞分裂劑或者抗原的響應(yīng)的單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和其它細(xì)胞形成的可溶性因子。IL-1β抑制劑的非限制性實(shí)例包括雙醋瑞因和萊菌。
“LOX/COX抑制劑”是指所有涉及花生四烯酸途徑的三種主要酶(即，5-LOX、COX-1和COX-2)的抑制劑。LOX/COX抑制劑的非限制性實(shí)例為利克飛龍。
“RANKL抑制劑”是指受體活化劑NF-kB配體(RANKL)的抑制劑，它以前被稱(chēng)為破骨細(xì)胞分化因子(ODF)、骨保護(hù)素配體(OPGL)和TNF-相關(guān)的活化誘發(fā)細(xì)胞因子(TRANCE)。RANKL是破骨細(xì)胞形成和成熟的關(guān)鍵刺激物。RANKL抑制劑的非限制性實(shí)例為AMG-162。
如果配制成固定劑量，那么所述組合物產(chǎn)品使用如下所述劑量范圍的本發(fā)明化合物和在其批準(zhǔn)劑量范圍內(nèi)的其它藥學(xué)活性劑。當(dāng)組合制劑不適宜時(shí)，本發(fā)明化合物可以另外與已知的藥學(xué)上可接受的試劑一起順序使用。
與本發(fā)明化合物相關(guān)的術(shù)語(yǔ)“給藥”及其變形(例如，“用藥”化合物)，意指將化合物或者化合物的前體藥物引入到需要治療的動(dòng)物系統(tǒng)中。當(dāng)本發(fā)明化合物或者其前藥與一種或多種其它活性劑(例如細(xì)胞毒素劑等等)組合提供時(shí)，應(yīng)當(dāng)將“給藥”及其變形理解為包含所述化合物或者其前藥和其它試劑同時(shí)和順序引入。本發(fā)明包括本發(fā)明化合物的前藥。通常，所述前藥將是可以在體內(nèi)輕易轉(zhuǎn)換成所需要的化合物的本發(fā)明化合物的功能性衍生物。本發(fā)明設(shè)想的前藥的非限制性實(shí)例包括可以水解以提供本發(fā)明的醇的酯；可以在體內(nèi)得到還原從而提供本發(fā)明的醇的酮。應(yīng)當(dāng)理解，在一些情形中，酮的還原可能存在立體專(zhuān)一性，從而提供占優(yōu)勢(shì)的單一非對(duì)映體的醇。適宜的前藥的其它實(shí)例以及選擇和制備所述衍生物的常規(guī)方法描述于，例如“Designof Prodrugs”ed.H.Bundgaard，Elsevier，1985中，其全部?jī)?nèi)容在此引入作為參考。因此，在本發(fā)明治療方法中，術(shù)語(yǔ)“給藥”應(yīng)該包含使用明確公開(kāi)的化合物或者使用可以不必明確公開(kāi)但是在給藥患者后體內(nèi)轉(zhuǎn)化成指定化合物的化合物進(jìn)行的多種所述癥狀的治療。這些化合物的代謝產(chǎn)物包含當(dāng)將本發(fā)明化合物引入生物環(huán)境時(shí)所產(chǎn)生的活性中心。
在本文中使用的術(shù)語(yǔ)“組合物”意圖包括含有指定量的指定成分的產(chǎn)品，以及任何由指定量的指定成分的組合物直接或者間接得到的產(chǎn)品。
在此使用的術(shù)語(yǔ)“治療有效量”是指能夠在組織、系統(tǒng)、動(dòng)物或者人類(lèi)中引起生物反應(yīng)或者藥物反應(yīng)的活性物質(zhì)或者藥物制劑的量，該量由研究人員、獸醫(yī)、醫(yī)療醫(yī)生或者其他臨床醫(yī)生進(jìn)行探索。
在此使用的術(shù)語(yǔ)疾病的“治療”包括預(yù)防疾病，即導(dǎo)致疾病的臨床癥狀不在哺乳動(dòng)物中發(fā)展，所述哺乳動(dòng)物可能暴露于疾病或者易感染所述疾病，但是又沒(méi)有經(jīng)歷或者顯示疾病癥狀；抑制疾病，即阻止或者降低疾病或者其臨床癥狀的發(fā)展；或者減輕疾病，即導(dǎo)致疾病或者其臨床癥狀消退。
在此使用的術(shù)語(yǔ)“骨吸收”是指一個(gè)過(guò)程，經(jīng)該過(guò)程破骨細(xì)胞降解骨。
在此使用的術(shù)語(yǔ)“每周一次”和“每周一次劑量給藥”是指單元?jiǎng)┝浚缃M織蛋白酶K抑制劑的單元?jiǎng)┝?，每周進(jìn)行一次給藥，即，在七天時(shí)間內(nèi)給藥一次，優(yōu)選在每周的同一天給藥。在每周一次的劑量給藥方案中，通常約每七天給藥一次單元?jiǎng)┝?。每周一次劑量給藥方案的非限制性實(shí)例是每個(gè)星期日給藥單元?jiǎng)┝康慕M織蛋白酶K抑制劑。通常建議不在連續(xù)兩天內(nèi)給藥每周一次給藥的一個(gè)單元?jiǎng)┝浚敲恐芤淮蝿┝拷o藥方案可以包括其中多個(gè)單元?jiǎng)┝吭趯儆趦蓚€(gè)不同周的連續(xù)兩天內(nèi)進(jìn)行給藥的劑量給藥方案。
“兩周”劑量是指組織蛋白酶K抑制劑的單元?jiǎng)┝吭趦芍軙r(shí)間內(nèi)給藥一次，即，在十四天時(shí)間內(nèi)給藥一次，優(yōu)選在每?jī)芍艿耐惶?。在每?jī)芍芤淮蔚膭┝拷o藥方案中，各個(gè)劑量單元通常約每十四天給藥一次。每?jī)芍芤淮蝿┝拷o藥方案的非限制性性實(shí)例是每隔一個(gè)星期日給藥單元?jiǎng)┝康慕M織蛋白酶K抑制劑。優(yōu)選不在連續(xù)兩天內(nèi)給藥，但是每?jī)芍芤淮蝿┝拷o藥方案可以包括其中單元?jiǎng)┝吭趯儆趦蓚€(gè)不同兩周周期的連續(xù)兩天內(nèi)進(jìn)行給藥的劑量給藥方案。
“每月兩次”是指在一個(gè)月時(shí)間內(nèi)將組織蛋白酶K抑制劑單元?jiǎng)┝拷o藥兩次。在每月兩次的方案中，優(yōu)選所述劑量在每月的相同兩天時(shí)給藥。在每月兩次的劑量給藥方案中，各個(gè)劑量單元通常約每十四至十六天給藥一次。每月兩次劑量給藥方案的非限制性實(shí)例是在每月的第一天前后和每月的第十五天(中間點(diǎn))前后劑量給藥。優(yōu)選所述單元?jiǎng)┝坎辉谕惶旎蛘哌B續(xù)兩天內(nèi)給藥，但是每月兩次劑量給藥的方案可以包括其中單元?jiǎng)┝吭趯儆谝粋€(gè)月周期或者不同月周期內(nèi)的連續(xù)兩天內(nèi)進(jìn)行給藥的劑量給藥方案。在此定義的每月兩次方案不同于并且不包括每?jī)芍芤淮蔚姆桨?，因?yàn)閮煞N方案具有不同的周期性，并且導(dǎo)致長(zhǎng)期時(shí)間內(nèi)給藥不同數(shù)量的劑量。例如，在一年時(shí)間中，根據(jù)每月兩次的方案將總共給藥約二十四個(gè)劑量(因?yàn)橐荒暧惺€(gè)月)，而根據(jù)每?jī)芍芤淮蔚膭┝拷o藥方案將總共給藥約二十六個(gè)劑量(因?yàn)橐荒甏蠹s有五十二周)。
術(shù)語(yǔ)“每月一次”根據(jù)公認(rèn)的含義使用，為約四周、大約30天或者一年的1/12的時(shí)間量度。
本發(fā)明還包含用于治療骨質(zhì)疏松癥或者其它骨骼病癥的藥物組合物，包括給藥治療有效量的本發(fā)明化合物，含有或者不含有藥學(xué)上可接受的載體或者稀釋劑。本發(fā)明適宜的組合物包括含有本發(fā)明化合物和藥理學(xué)上可接受的載體(例如鹽水，pH值水平為例如7.4)的水溶液。所述溶液可以通過(guò)局部彈丸注射引入到患者血液中。
當(dāng)將根據(jù)本發(fā)明的化合物給藥入人類(lèi)對(duì)象時(shí)，每日劑量通常由開(kāi)藥醫(yī)師確定，同時(shí)劑量通常依據(jù)個(gè)體患者的年齡、體重和反應(yīng)以及患者癥狀的嚴(yán)重程度而不同。
在一個(gè)示范性應(yīng)用中，將適宜量的化合物給藥到對(duì)組織蛋白酶依賴(lài)狀態(tài)進(jìn)行治療的哺乳動(dòng)物。當(dāng)用來(lái)產(chǎn)生所需要的效果時(shí)，本發(fā)明的口服劑量為約0.01毫克/千克體重/天(mg/kg/day)～約100mg/kg/day，優(yōu)選0.01～10mg/kg/day，并且最優(yōu)選0.1～5.0mg/kg/day。對(duì)于口服給藥，組合物優(yōu)選以片劑形式提供，其中含有0.01、0.05、0.1、0.5、1.0、2.5、3.5、5.0、10.0、15.0、20.0、25.0、35.0、40.0、50.0、80.0、100、200和500毫克的活性成分以便根據(jù)進(jìn)行治療的患者的癥狀調(diào)整給藥劑量。所述藥物一般含有約0.01mg～約500mg活性成分，優(yōu)選約1mg～約100mg活性成分。對(duì)于靜脈內(nèi)給藥，在恒速輸液期間，最優(yōu)選的劑量為約0.1～約10mg/kg/min。有利地，本發(fā)明化合物可以以單一日劑量給藥，或者每日總劑量可以分為每日兩次、三次或者四次劑量給藥。并且，本發(fā)明化合物還可以根據(jù)劑量間隔為每周一次、每?jī)芍芤淮?、每月兩次或者每月一次的連續(xù)方案進(jìn)行給藥。此外，本發(fā)明的優(yōu)選化合物可以以鼻內(nèi)形式經(jīng)局部使用合適的鼻內(nèi)載體進(jìn)行給藥，或者經(jīng)透過(guò)皮膚路線，利用那些本領(lǐng)域普通技術(shù)人員熟知的皮膚表層貼片形式進(jìn)行給藥。為了以透皮分配系統(tǒng)的形式進(jìn)行給藥，劑量給藥當(dāng)然將持續(xù)整個(gè)給藥方案期間而非間歇性的給藥。
本發(fā)明化合物可以與其它用于治療組織蛋白酶介導(dǎo)癥狀的試劑組合使用。上述組合的單個(gè)組分可以在治療期間的不同時(shí)間給藥，或者以分開(kāi)或者單一組合的形式同時(shí)給藥。因此，應(yīng)當(dāng)將本發(fā)明理解為包含所有上述聯(lián)合治療或者輪流治療的方案，并且術(shù)語(yǔ)“給藥”應(yīng)當(dāng)據(jù)此進(jìn)行理解。應(yīng)當(dāng)理解，本發(fā)明化合物與其它可用于治療組織蛋白酶介導(dǎo)狀態(tài)的試劑的組合范圍原則上包含任何與可用于治療與雌激素功能相關(guān)病癥的藥物組合物的組合。
因此，本發(fā)明的范圍包含本發(fā)明要求的化合物協(xié)同第二試劑的應(yīng)用，所述第二試劑選自有機(jī)雙膦酸酯；雌激素受體調(diào)節(jié)劑；雄激素受體調(diào)節(jié)劑；破骨細(xì)胞質(zhì)子三磷酸腺苷酶抑制劑；HMG-CoA還原酶抑制劑；整聯(lián)蛋白受體對(duì)抗劑；成骨細(xì)胞合成代謝劑，例如PTH；維生素D；合成維生素D類(lèi)似物；非甾族抗炎藥物；選擇性環(huán)加氧酶-2抑制劑；白細(xì)胞間介素-1β抑制劑；LOX/COX抑制劑；RANKL抑制劑；和其藥學(xué)上可接受的鹽及其混合物。
根據(jù)包含于本文中的教導(dǎo)，本發(fā)明的這些和其它方面將是顯而易見(jiàn)的。
定義本發(fā)明化合物可以具有不對(duì)稱(chēng)中心、手性軸和手性面(如E.L.Eliel和S.H.Wilen，Stereochemistry of Carbon Compounds，John Wiley &Sons，New York，1994，pages 1119-1190中所述)，并且可以作為外消旋物、外消旋混合物和單一非對(duì)映異構(gòu)體存在，所有可能的異構(gòu)體及其混合物(包括旋光異構(gòu)體)都包括在本發(fā)明范圍內(nèi)。此外，在此公開(kāi)的化合物可以以互變異構(gòu)體形式存在，兩種互變異構(gòu)形式都意圖包括在本發(fā)明范圍內(nèi)，即便僅僅表明了一種互變結(jié)構(gòu)。例如，以下化合物A的任何權(quán)利要求都應(yīng)當(dāng)理解為包括互變結(jié)構(gòu)B，并且反之亦然，及其混合物。
當(dāng)任何組成部分中的任何變量(例如R1、R2、R3等等)出現(xiàn)多于一次時(shí)，其各次出現(xiàn)時(shí)的定義獨(dú)立于其再次出現(xiàn)時(shí)的定義。并且，只有當(dāng)組合能夠產(chǎn)生穩(wěn)定的化合物時(shí)，取代基和/或變量的組合才是允許的。從取代基畫(huà)入環(huán)系統(tǒng)中的線表示所示鍵可以連接在任何可取代環(huán)碳原子上。如果所述環(huán)為多環(huán)，那么該鍵僅僅連接在最接近的環(huán)上的任何適宜碳原子上。
應(yīng)當(dāng)理解，可以由本領(lǐng)域普通技術(shù)人員對(duì)本發(fā)明化合物上的取代基和取代形式進(jìn)行選擇，從而提供化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定并且可以通過(guò)本領(lǐng)域已知的方法以及以下所述方法由易于得到的原料輕易合成的化合物。如果取代基自身被多于一個(gè)基團(tuán)取代，那么應(yīng)當(dāng)理解所述多個(gè)基團(tuán)可以在相同碳原子上或者在不同碳原子上，只要得到穩(wěn)定結(jié)構(gòu)即可。短語(yǔ)“任選被一個(gè)或者多個(gè)取代基取代”應(yīng)當(dāng)理解為等價(jià)于短語(yǔ)“任選被至少一個(gè)取代基取代”，在所述情形中，優(yōu)選實(shí)施方案將具有0～3個(gè)取代基。
除非另作說(shuō)明，在此使用的“烷基”意圖包括具有1～10個(gè)碳原子的支鏈和直鏈的飽和脂族烴基。例如，在“C1～C10烷基”中的C1～C10定義為包括在直鏈、支鏈或者環(huán)狀結(jié)構(gòu)中具有1、2、3、4、5、6、7、8、9或者10個(gè)碳原子的基團(tuán)。例如，“C1～C10烷基”特別包括甲基、乙基、丙基、丁基、戊基、己基、庚基、辛基、壬基和癸基等等。
除非另有說(shuō)明，術(shù)語(yǔ)“環(huán)烷基”或者“碳環(huán)”將意指碳原子總數(shù)為3～8個(gè)或者此范圍內(nèi)任何數(shù)目的環(huán)狀烷烴環(huán)(即環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基、環(huán)庚基或者環(huán)辛基)。
在某些情況下，取代基可以定義為具有包括零的數(shù)目范圍的碳原子，比如(C0-C6)亞烷基-芳基。如果芳基為苯基，上述定義將包括苯基本身以及-CH2Ph、-CH2CH2Ph、CH(CH3)CH2CH(CH3)Ph等等。
在此使用的“芳基”是指任何穩(wěn)定的在各環(huán)中具有高達(dá)12個(gè)原子的單環(huán)或者二環(huán)碳環(huán)，其中至少一個(gè)環(huán)是芳香環(huán)。上述芳基單元的實(shí)例包括苯基、萘基、四氫萘基、茚滿基、聯(lián)苯基、菲基、蒽基或者苊基。在芳基取代基是二環(huán)并且一個(gè)環(huán)是非芳香環(huán)的情況中，可以理解，所述連接是通過(guò)芳環(huán)進(jìn)行的。
在此使用的術(shù)語(yǔ)“雜芳基”表示各環(huán)中具有高達(dá)10個(gè)原子的穩(wěn)定的單環(huán)、二環(huán)或者三環(huán)，其中至少一個(gè)環(huán)是芳香環(huán)并且含有1～4個(gè)選自O(shè)、N、和S的雜原子。在此定義范圍內(nèi)的雜芳基包括但不限于苯并咪唑基、苯并呋喃基、苯并呋咱基、苯并吡唑基、苯并三唑基、苯并噻吩基、苯并唑基、咔唑基、咔啉基、噌啉基、呋喃基、二氫吲哚基、吲哚基、中氮茚基(indolazinyl)、吲唑基、異苯并呋喃基、異氮雜茚基、異喹啉基、異噻唑基、異唑基、萘吡啶基、二唑基、唑基、唑啉、異唑啉、吡喃基、吡嗪基、吡唑基、噠嗪基、吡啶并吡啶基、吡啶基、嘧啶基、吡咯基、喹唑啉基、喹啉基、喹喔啉基、四唑基、四唑并吡啶基、噻二唑基、噻唑基、噻吩基、三唑基、二氫苯并咪唑基、二氫苯并呋喃基、二氫苯并噻吩基、二氫苯并唑基、二氫吲哚基、二氫喹啉基、亞甲二氧基苯、苯并噻唑基、苯噻吩基、喹啉基、異喹啉基、唑基和四氫喹啉。在其中雜芳基取代基是二環(huán)取代基并且一個(gè)環(huán)是非芳香環(huán)或者不包含雜原子的情況下，可以理解，所述連接分別通過(guò)芳環(huán)或者通過(guò)含雜原子的環(huán)進(jìn)行。如果雜芳基含有氮原子，可以理解，其相應(yīng)的N-氧化物也包含在該定義中。
如熟練的技術(shù)人員所理解，在此使用的“鹵”或者“鹵素”意指包括氯、氟、溴和碘。術(shù)語(yǔ)“酮”意指羰基(C＝O)。
本發(fā)明還包括式I化合物的N-氧化物衍生物和受保護(hù)的衍生物。例如，當(dāng)式I化合物含有可氧化的氮原子時(shí)，可以通過(guò)本領(lǐng)域熟知的方法將氮原子轉(zhuǎn)化成N-氧化物。并且，當(dāng)式I化合物含有比如羥基、羧基、硫醇或者任何含有氮原子的基團(tuán)時(shí)，可以用適當(dāng)?shù)谋Ｗo(hù)基對(duì)這些基團(tuán)進(jìn)行保護(hù)。適當(dāng)保護(hù)基的綜合目錄可以在T.W.Greene，ProtectiveGroups in Organic Synthesis，John Wiley & Sons，Inc.，1981中發(fā)現(xiàn)，其全部?jī)?nèi)容在此引入作為參考。式I化合物的受保護(hù)衍生物可以通過(guò)本領(lǐng)域熟知的方法進(jìn)行制備。
本發(fā)明化合物的藥學(xué)上可接受的鹽包括無(wú)機(jī)或者有機(jī)酸形式的本發(fā)明化合物的常規(guī)無(wú)毒鹽。例如，常規(guī)的無(wú)毒鹽包括由無(wú)機(jī)酸得到的鹽，所述無(wú)機(jī)酸比如氫氯酸、氫溴酸、硫酸、胺磺酸、磷酸和硝酸等等，以及由有機(jī)酸制備的鹽，所述有機(jī)酸比如醋酸、丙酸、琥珀酸、乙醇酸、硬脂酸、乳酸、蘋(píng)果酸、酒石酸、檸檬酸、抗壞血酸、撲酸、馬來(lái)酸、羥基馬來(lái)酸、苯基馬來(lái)酸、谷氨酸、安息香酸、水楊酸、磺胺酸、2-乙酰氧基-安息香酸、富馬酸、甲苯磺酸、甲磺酸、乙基二磺酸、草酸、羥乙磺酸和三氟乙酸等等。如上所述藥學(xué)上可接受的鹽以及其它一般藥學(xué)上可接受的鹽的制備由Berg等人，“PharmaceuticalSalts”，J.Pharm.Sci.，1977，661-19進(jìn)行了更全面的描述，其全文在此引入作為參考。本發(fā)明化合物藥學(xué)上可接受的鹽，可以由含有堿性或者酸性部分的本發(fā)明化合物通過(guò)常規(guī)化學(xué)方法進(jìn)行合成。通常，堿性化合物的鹽或者通過(guò)離子交換色譜法進(jìn)行制備，或者通過(guò)在適當(dāng)溶劑或者多種溶劑組合中，使游離堿與化學(xué)計(jì)算量或者與過(guò)量的形成期望鹽的無(wú)機(jī)酸或有機(jī)酸反應(yīng)進(jìn)行制備。類(lèi)似地，酸性化合物的鹽通過(guò)與適宜的無(wú)機(jī)或者有機(jī)堿反應(yīng)而得到形成。
對(duì)于本說(shuō)明書(shū)，以下縮略語(yǔ)具有所示含義i-BuCOCl＝氯甲酸異丁酯t-BuMe2SiCl＝叔丁基二甲基氯硅烷BuLi＝丁基鋰CH2Cl2＝二氯甲烷CH3CN＝乙腈CrO3＝鉻酸鹽DAST＝二乙基氨三氟化硫DMF＝N，N-二甲基甲酰胺DMSO＝二甲亞砜DTT＝二硫蘇糖醇EDTA＝乙二胺四乙酸EtOH＝乙醇KOH＝氫氧化鉀HATU＝2-(7-氮雜-1H-苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲六氟磷酸鹽HCl＝氫氯酸H5IO6＝高碘酸MeMgBr＝甲基溴化鎂MgSO4＝硫酸鎂Na2CO3＝碳酸鈉NaCl＝氯化鈉NH4Cl＝氯化銨Na2BH4＝硼氫化鈉PdCl2(dppf)＝[1，1′-二(二苯膦基)二茂鐵]二氯化鈀(II)PG＝保護(hù)基rt＝室溫
sat.aq.＝飽和水溶液SiO2＝二氧化硅TBAF＝四丁基氟化銨THF＝四氫呋喃tlc＝薄層色譜法(Ts)2O＝對(duì)甲苯磺酸酸酐Me＝甲基Et＝乙基本發(fā)明的新穎化合物可以利用適當(dāng)原料根據(jù)以下一般方法進(jìn)行制備，并且進(jìn)一步通過(guò)以下具體實(shí)施例進(jìn)行例證說(shuō)明。然而，不應(yīng)當(dāng)將實(shí)施例中例證說(shuō)明的化合物認(rèn)為是本發(fā)明的唯一物質(zhì)形式。以下實(shí)施例進(jìn)一步說(shuō)明了制備本發(fā)明化合物的細(xì)節(jié)。本領(lǐng)域熟練技術(shù)人員可以輕易理解，以下制備方法和條件的已知變體都可以用于制備這些化合物。除非另作說(shuō)明，所有的溫度都是攝氏溫度。
如實(shí)施例12和方案1所述，由市售N-t-Boc-天冬氨酸β芐基酯開(kāi)始，經(jīng)過(guò)(硼氫化鈉還原)的混合酸酐方法(參見(jiàn)，Chen，F(xiàn).M.F.；Lee，Y；Steinauer，R.，Benoiton，N.L.，Can.J.Chem.1987，65，613-618)對(duì)游離酸進(jìn)行活化。將醇轉(zhuǎn)化為離去基團(tuán)并且通過(guò)加熱使其原位環(huán)化，從而形成氨基甲酸酯。用過(guò)量格氏試劑對(duì)酯進(jìn)行處理，從而形成水溶性叔醇。用DAST對(duì)后者進(jìn)行處理，從而獲得氟化產(chǎn)品。對(duì)環(huán)狀氨基甲酸酯進(jìn)行水解并且對(duì)所得醇進(jìn)行甲硅烷基化，從而得到伯胺。通過(guò)共沸除去揮發(fā)物，亞胺得到形成。對(duì)1，4-二溴苯進(jìn)行單鋰化作用，從而得到適于與亞胺反應(yīng)的親核試劑，它們進(jìn)行反應(yīng)從而得到仲胺。對(duì)上述醇進(jìn)行去保護(hù)和氧化，從而得到酸。使其進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)酰胺化反應(yīng)，從而得到通用的溴中間體。
方案1 在如方案2所示的鈀-介導(dǎo)反應(yīng)條件下，可以將方案1中獲得的溴化物轉(zhuǎn)化為硼酸酯。隨后，通過(guò)在鈀-介導(dǎo)條件下與溴化物偶聯(lián)，可以將上述所得硼酸酯輕易轉(zhuǎn)化為二芳基產(chǎn)品。
方案2 另外，在方案3中表明，在鈀催化下可以將芳基溴化物轉(zhuǎn)化為硼酸酯。在鈀-介導(dǎo)的反應(yīng)條件下，該硼酸酯可以與方案1中所述的溴化物偶聯(lián)，從而得到二芳基化合物。
方案3 實(shí)施例1N1-(1-氰基環(huán)丙基)-N2-((1S)-1-{4′-[(1R)-2，2-二氟-1-羥基乙基]聯(lián)苯基-4-基}-2，2，2-三氟乙基)-4-氟-L-亮氨酸酰胺的合成 步驟11-(4-溴苯基)-2，2-二氟乙酮的制備向1，4-二溴苯(86.4g，366mmol)的四氫呋喃(800mL)冷卻(-78℃)攪拌溶液中加入正丁基鋰(228mL，1.6M己烷溶液，366mmol)。在-78℃下將上述混合物攪拌30分鐘，并且在2分鐘時(shí)間內(nèi)向此漿液中加入二氟乙酸乙酯(50g，402mmol)。在-78℃下將上述漿液攪拌1小時(shí)。用1N氫氯酸(250mL)將反應(yīng)猝滅并且使其升溫至室溫。用甲基叔丁基醚(250mL)對(duì)上述介質(zhì)進(jìn)行稀釋并且將各層分離。所得有機(jī)層用鹽水(100mL)洗滌、進(jìn)行干燥(MgSO4)并且在減壓下進(jìn)行濃縮。。在真空下對(duì)所得殘余物進(jìn)行蒸餾，從而得到為白色玻璃狀固體的二氟酮。
步驟2(1R)-1-(4-溴苯基)-2，2-二氟乙醇的制備(類(lèi)似于Ramachandran，P.V.等人，Tet.Asym.1994，Vol.5，No.6，pp.1075-86)在室溫下將實(shí)施例1步驟1制備的酮(2.35g，10mmole)和市售R-Alpine Borane(3.1g，12mmol)混合在一起并且將其攪拌四天，有一些氣體逸出。四天之后，對(duì)試樣進(jìn)行1H NMR分析，表明酮的總消耗量。將反應(yīng)冷卻至0℃以加入乙醛(168uL，3mmol)。將冷卻浴除去并且在室溫下將其繼續(xù)攪拌30分鐘。將乙醚(20mL)加入其中，隨后將乙醇胺(725uL，12mmol)加入其中。在室溫下將上述反應(yīng)混合物攪拌一小時(shí)。通過(guò)過(guò)濾將沉淀除去并且用戊烷對(duì)其進(jìn)行洗滌。在減壓下對(duì)所得濾液進(jìn)行濃縮并且通過(guò)快速色譜法(90％己烷；10％乙酸乙酯～70％己烷；30％乙酸乙酯)對(duì)其進(jìn)行純化，從而得到為無(wú)色油的期望物質(zhì)。此時(shí)未檢測(cè)其光學(xué)純度。
步驟3N1-(1-氰基環(huán)丙基)-4-氟-N2-{(1S)-2，2，2-三氟-1-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜戊硼烷-2-基)苯基]乙基}-L-亮氨酸酰胺的制備在二氧六環(huán)(240mL)中對(duì)得自于實(shí)施例12步驟9的N2-[(1S)-1-(4-溴苯基)-2，2，2-三氟乙基]-N1-(1-氰基環(huán)丙基)-4-氟-L-亮氨酸酰胺(24g，53mmol)、二(pinacolato)二硼(15.24g，60mmol)和乙酸鉀(16.2g，165mmol)進(jìn)行攪拌，然后通過(guò)滴管用氮?dú)夤呐?5分鐘。[將與二氯甲烷1∶1配合的[1，1-二(二苯膦)二茂鐵]二氯化鈀(II)(PdCl2dppf.CH2Cl2，2.4g，3mmol)加入其中，并且在氮?dú)鈿夥障聦⑸鲜龇磻?yīng)混合物浸入80℃的油浴中105分鐘。四天之后，對(duì)試樣進(jìn)行1H NMR分析，表明溴化物的全部消耗量。使上述反應(yīng)冷卻至室溫并且在減壓下將大部分溶劑除去。將所得殘余物溶于少量二氯甲烷中并且將其過(guò)濾在硅藻土墊片上。對(duì)兩種組分進(jìn)行收集并且在減壓下對(duì)其進(jìn)行濃縮，從而得到固體。在室溫下在90％己烷和10％二乙醚混合物中將極性最小的組分?jǐn)嚢柽^(guò)夜，并且在0℃下在己烷中將極性較大的組分?jǐn)嚢柽^(guò)夜。二者都得到為灰白色固體的純物質(zhì)。
步驟4N1-(1-氰基環(huán)丙基)-N2-((1S)-1-{4′-[(1R)-2，2-二氟-1-羥基乙基]聯(lián)苯基-4-基}-2，2，2-三氟乙基)-4-氟-L-亮氨酸酰胺的制備將實(shí)施例1步驟3的硼酸酯(20g，40mmol)和實(shí)施例1步驟2的芳基溴化物(11.4g，48mmol)溶于二甲基甲酰胺(400mL)中，隨后將其溶于碳酸氫鈉水溶液(60mL，120mmol)中。然后，通過(guò)滴管鼓泡氮?dú)?5分鐘。[將與二氯甲烷1∶1配合的[1，1-二(二苯膦)二茂鐵]二氯化鈀(II)(PdCl2dppf.CH2Cl2，2.4g，3mmol)加入其中，并且在氮?dú)鈿夥障聦⑸鲜龇磻?yīng)混合物浸入80℃的油浴中16小時(shí)。在低壓下(45℃，大約1-5mmHg)將大部分二甲基甲酰胺除去。將所得殘余物溶于少量乙酸乙酯(400mL)中并且將其過(guò)濾在硅藻土墊片上。在減壓下對(duì)所得濾液進(jìn)行濃縮。將所得殘余物吸收在大約10mL二氯甲烷中并且通過(guò)快速色譜法對(duì)其進(jìn)行分離。在0℃下，在己烷(100mL)中將最純的組分揮發(fā)三次并且再次對(duì)其進(jìn)行快速色譜法分離(90％己烷；10％乙酸乙酯～45％己烷；55％乙酸乙酯)。在減壓下對(duì)揮發(fā)物進(jìn)行蒸發(fā)之后，在己烷中將所得固體攪拌2天。所得產(chǎn)品中仍然含有4％頻哪醇，因此將該批次分成兩份。在緩緩加熱下，將部分A溶于少量異丙醇中。將己烷加入其中，直至溶液有點(diǎn)渾濁為止，并且使其冷卻下來(lái)。出現(xiàn)白色晶體，進(jìn)一步將該反應(yīng)冷卻至0℃15分鐘。通過(guò)過(guò)濾對(duì)固體進(jìn)行收集，從而獲得未被頻哪醇污染的產(chǎn)品。在室溫下，在20％乙醚；1％乙酸乙酯；79％己烷(100mL)中將部分B攪拌3小時(shí)。通過(guò)1H NMR檢測(cè)，通過(guò)過(guò)濾收集的固體僅僅被大約1％的頻哪醇污染。通過(guò)手性AD-RH，利用等濃度的32％乙腈；68％水；0.1％甲酸對(duì)光學(xué)異構(gòu)余量進(jìn)行檢測(cè)(對(duì)映異構(gòu)體為24分，期望分子為27分鐘)。(MH)+ESI＝528.0.
實(shí)施例2N1-(1-氰基環(huán)丙基)-N2-((1S)-1-{4′-[(1S)-2，2-二氟-1-羥基乙基]聯(lián)苯基-4-基}-2，2，2-三氟乙基)-4-氟-L-亮氨酸酰胺的合成
步驟1(1S)-1-(4-溴苯基)-2，2-二氟乙醇的制備在室溫下將實(shí)施例1步驟1制備的酮(2.35g，10mmole)和市售S-Alpine Borane(3.1g，12mmol)混合在一起并且將其攪拌四天，有一些氣體逸出。四天之后，試樣的1H NMR表明了原料的存在。進(jìn)一步將S-Alpine Borane(1mL)加入其中并且將其繼續(xù)攪拌2天。對(duì)試樣進(jìn)行1H NMR分析，表明酮的全部消耗量。將反應(yīng)冷卻至0℃以加入乙醛(393uL，7mmol)。將冷卻浴除去并且在室溫下將其繼續(xù)攪拌30分鐘。將乙醚(20mL)加入其中，隨后將乙醇胺(966uL，16mmol)加入其中。在室溫下將上述反應(yīng)混合物攪拌一小時(shí)。通過(guò)過(guò)濾將沉淀除去并且用戊烷對(duì)其進(jìn)行洗滌。在減壓下對(duì)所得濾液進(jìn)行濃縮并且通過(guò)快速色譜法(90％己烷；10％乙酸乙酯～70％己烷；30％乙酸乙酯)對(duì)其進(jìn)行純化，從而得到為無(wú)色油的期望物質(zhì)。
步驟2N1-(1-氰基環(huán)丙基)-N2-((1S)-1-{4′-[(1S)-2，2-二氟-1-羥基乙基]聯(lián)苯基-4-基}-2，2，2-三氟乙基)-4-氟-L-亮氨酸酰胺的制備如實(shí)施例1步驟4所述，對(duì)實(shí)施例1步驟3的硼酸酯(200mg，0.40mmol)和實(shí)施例2步驟1的芳基溴化物(114mg，0.48mmol)進(jìn)行處理，從而得到白色固體。(MH)+ESI＝528.0實(shí)施例3N1-(1-氰基環(huán)丙基)-4-氟-N2-{(1S)-2，2，2-三氟-1-[4′-(2，2，2-三氟-1-羥基乙基)聯(lián)苯基-4-基]乙基}-L-亮氨酸酰胺的合成
步驟11-(4-溴苯基)-2，2，2-二氟乙醇的制備向室溫的市售4’-溴-2，2，2-三氟苯乙酮(100mg)的1.9mL甲醇溶液中加入硼氫化鈉(15mg)。在室溫下將上述混合物攪拌過(guò)夜。將水加入其中、用甲基叔丁基醚(3×20mL)對(duì)其進(jìn)行提取，并且用水和鹽水對(duì)其進(jìn)行洗滌。用硫酸鎂對(duì)其進(jìn)行干燥并且在減壓下將溶劑除去，從而得到標(biāo)題化合物，照此將其用于下一步驟。
標(biāo)題化合物的1H NMR(CDCl3)δ(ppm)7.55(2H，d)，7.35(2H，d)，4.92-5.05(1H，m)，3.20(1H，s).
步驟2N1-(1-氰基環(huán)丙基)-4-氟-N2-{(1S)-2，2，2-三氟-1-[4′-(2，2，2-三氟-1-羥基乙基)聯(lián)苯基-4-基]乙基}-L-亮氨酸酰胺的制備使氮?dú)饬魍ㄟ^(guò)DMF(4mL)、實(shí)施例1步驟3中所述的N1-(1-氰基環(huán)丙基)-4-氟-N2-{(1S)-2，2，2-三氟-1-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜戊硼烷-2-基)苯基]乙基}-L-亮氨酸酰胺(150mg)、得自于實(shí)施例3步驟1的1-(4-溴苯基)-2，2，2-三氟乙醇(92mg)和2M Na2CO3(750μL)15分鐘，隨后向其中加入[1，1’-二(二苯膦基)-二茂鐵]二氯化鈀(II)與二氯甲烷的配合物(1∶1)(12mg)。在氮?dú)庀?，?0℃下將上述混合物加熱3小時(shí)。將上述混合物冷卻至室溫，傾倒入冰(20g)和飽和碳酸氫鈉水溶液(20mL)中，并且用50％乙酸乙酯的乙醚溶液(3×50mL)對(duì)其進(jìn)行提取。合并的提取物用鹽水洗滌并且用硫酸鎂干燥。除去溶劑得到殘余物，使用乙酸乙酯和己烷(20～50％)作為洗脫液，在SiO2上通過(guò)色譜法對(duì)所得殘余物進(jìn)行純化，然后通過(guò)使用乙醚和己烷進(jìn)行研磨，得到標(biāo)題化合物。
1H NMR(CD3COCD3)δ(ppm)8.18(1H，s)，7.60-7.70(4H，m)，7.50-7.55(1H，m)，7.33(1H，d)，7.28(1H，d)，6.40(1H，bs)，4.38-4.48(1H，m)，3.56(1H，t)，2.67-2.69(1H，m)，1.92-2.01(2H，m)，1.45-1.46(10H，m)，1.05-1.11(3H，m)，0.92-0.99(1H，m)，0.56-0.60(2H，m)，0.36-0.38(2H，m).
實(shí)施例4N1-(1-氰基環(huán)丙基)-4-氟-N2-((1S)-2，2，2-三氟-1-{4′-[(1S)-3，3，3-三氟-1-羥基-1-甲基丙基]聯(lián)苯基-4-基}乙基)-L-亮氨酸酰胺和N1-(1-氰基環(huán)丙基)-4-氟-N2-((1S)-2，2，2-三氟-1-{4′-[(1R)-3，3，3-三氟-1-羥基-1-甲基丙基]聯(lián)苯基-4-基}乙基)-L-亮氨酸酰胺的合成 步驟12-(4-溴苯基)-4，4，4-三氟丁-2-醇的制備向-78℃的1，4-二溴苯(2.5g，10.6mmol)的THF(50mL)溶液中加入n-BuLi(6.5mL，10.4mmol；1.6M己烷溶液)，并且在-78℃下將所得混合物攪拌15分鐘。然后，將4，4，4-三氟-2-丁酮(1.3g，10.3mmol)加入其中。此后，進(jìn)一步將其攪拌15分鐘。用NH4Cl水溶液將所得反應(yīng)混合物猝滅并且用乙酸乙酯對(duì)其進(jìn)行提取。通過(guò)聯(lián)合快速色譜法(40g柱；用己烷-乙酸乙酯(10％-20％)洗脫20分鐘；流速35mL/min并且收集18mL/餾分)進(jìn)行純化，從而得到為淺褐色液體的標(biāo)題化合物。
1H NMR(CD3COCD3)δ(ppm)7.5(4H，m)，4.64(1H，s)，1.64(3H，s).
步驟2N1-(1-氰基環(huán)丙基)-4-氟-N2-((1S)-2，2，2-三氟-1-{4′-[(1S)-3，3，3-三氟-1-羥基-1-甲基丙基]聯(lián)苯基-4-基}乙基)-L-亮氨酸酰胺和N1-(1-氰基環(huán)丙基)-4-氟-N2-((1S)-2，2，2-三氟-1-{4′-[(1R)-3，3，3-三氟-1-羥基-1-甲基丙基]聯(lián)苯基-4-基}乙基)-L-亮氨酸酰胺的制備使氮?dú)饬魍ㄟ^(guò)DMF(5mL)、實(shí)施例1步驟3中所述的N1-(1-氰基環(huán)丙基)-4-氟-N2-{(1S)-2，2，2-三氟-1-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜戊硼烷-2-基)苯基]乙基}-L-亮氨酸酰胺(150mg)、得自于實(shí)施例4步驟1的2-(4-溴苯基)-4，4，4-三氟丁-2-醇(100mg)和2M Na2CO3(360μL)15分鐘，隨后向其中加入[1，1’-二(二苯膦基)-二茂鐵]二氯化鈀(II)與二氯甲烷的配合物(1∶1)(5mg)。在氮?dú)庀?，?0℃下將上述混合物加熱3小時(shí)。將上述混合物冷卻至室溫，傾倒入冰(20g)和飽和碳酸氫鈉水溶液(20mL)中，并且用50％乙酸乙酯的乙醚溶液(3×50mL)對(duì)其進(jìn)行提取。合并的提取物用鹽水洗滌并且用硫酸鎂干燥。除去溶劑，留下殘余物，利用自動(dòng)梯度泵系統(tǒng)CombiFlash(乙酸乙酯/己烷，20∶80～50∶50進(jìn)行25分鐘)在硅膠上通過(guò)色譜法對(duì)所得殘余物進(jìn)行純化，隨后用乙醚和己烷對(duì)其進(jìn)行研磨，從而得到兩種非對(duì)映異構(gòu)體的混合物。
為了進(jìn)行分離，利用己烷作為溶劑，將200μL N1-(1-氰基環(huán)丙基)-4-氟-N2-{(1S)-2，2，2-三氟-1-[4′-(3，3，3-三氟-1-羥基-1-甲基丙基)聯(lián)苯基-4-基]乙基}-L-亮氨酸酰胺的兩種非對(duì)映異構(gòu)體的混合物溶液(在33％2-丙醇和67％己烷中濃度為50μg/μL)注射在Chiralcel OD，250×20mm(OD00C-CK004)上，流速為6mL/min，并且在260nm對(duì)其進(jìn)行檢測(cè)。數(shù)次注射之后，N1-(1-氰基環(huán)丙基)-N2-((1S)-1-{4′-[(1R)-2，2-二氟-1-羥基-1-甲基乙基]聯(lián)苯基-4-基}-2，2，2-三氟乙基)-4-氟-L-亮氨酸酰胺從第一洗脫餾分中得到分離和N1-(1-氰基環(huán)丙基)-N2-((1S)-1-{4′-[(1S)-2，2-二氟-1-羥基-1-甲基乙基]聯(lián)苯基-4-基}-2，2，2-三氟乙基)-4-氟-L-亮氨酸酰胺從第二洗脫餾分中得到分離。
第一洗脫非對(duì)映異構(gòu)體1H NMR(CD3COCD3)δ(ppm)8.19(1H，s)，7.74-7.68(6H，m)，7.57(2H，d)，4.60(1H，s)，4.42-4.36(1H，m)，3.57-3.53(1H，m)，2.78-2.88(2H，m)，1.94-2.00(2H，m)，1.73(3H，s)，1.49-1.31(8H，m)，1.07-1.13(1H，m)，1.00-0.90(1H，m)，三氟乙胺的NH未觀察到。(MH)+APCI＝573.9.立體化學(xué)是臨時(shí)規(guī)定的。
第二洗脫非對(duì)映異構(gòu)體1H NMR(CD3COCD3)δ(ppm)8.19(1H，s)，7.74-7.68(6H，m)，7.57(2H，d)，4.60(1H，s)，4.42-4.36(1H，m)，3.57-3.53(1H，m)，2.78-2.88(2H，m)，1.94-2.00(2H，m)，1.73(3H，s)，1.49-1.31(8H，m)，1.07-1.13(1H，m)，1.00-0.90(1H，m)，三氟乙胺的NH未觀察到。(MH)+APCI＝574.0.立體化學(xué)是臨時(shí)規(guī)定的。
實(shí)施例5N1-(1-氰基環(huán)丙基)-4-氟-N2-{(1S)-2，2，2-三氟-1-[4′-(R)-(2，2，2-三氟-1-羥基乙基)聯(lián)苯基-4-基]乙基}-L-亮氨酸酰胺的合成 步驟1(R)-2，2，2-三氟-1-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜戊硼烷-2-基)苯基]乙醇的制備用氮?dú)夤呐?R)-1-(4-溴苯基)-2，2，2-三氟乙醇(2.26g，8.86mmol)、二(pinacolato)二硼(2.9g，11mmol)和乙酸鉀(3g，30mmol)的DMF(80mL)懸浮液15分鐘，將[1，1-二(二苯膦)二茂鐵]二氯化鈀(II)與二氯甲烷的1∶1配合物(362mg，0.44mmol)加入其中并且再次用氮?dú)夤呐?0分鐘。在85℃下將上述反應(yīng)混合物攪拌2小時(shí)、將其傾倒在冰水上并且用乙酸乙酯對(duì)其進(jìn)行提取(2×80mL)。合并的有機(jī)層用飽和NaCl溶液洗滌、進(jìn)行干燥(MgSO4)并且在真空下進(jìn)行濃縮。在硅膠上通過(guò)色譜法(乙酸乙酯/己烷，5∶95～20∶80進(jìn)行25分鐘，然后20∶80進(jìn)行5分鐘)對(duì)所得殘余物進(jìn)行純化，從而得到標(biāo)題產(chǎn)品。
1H NMR(CD3COCD3)δ(ppm)7.8(2H，d)，7.55(2H，d)，5.9(1H，OH)，5.2-5.3(1H，m)，1.3(12H，s).
步驟2N1-(1-氰基環(huán)丙基)-4-氟-N2-{(1S)-2，2，2-三氟-1-[4′-(R)-(2，2，2-三氟-1-羥基乙基)聯(lián)苯基-4-基]乙基}-L-亮氨酸酰胺的制備如實(shí)施例1步驟4所述，使實(shí)施例5步驟1的硼酸酯(250mg，0.83mmol)和得自于實(shí)施例12步驟9的N2-[(1S)-1-(4-溴苯基)-2，2，2-三氟乙基]-N1-(1-氰基環(huán)丙基)-4-氟-L-亮氨酸酰胺(374mg，0.83mmol)進(jìn)行偶聯(lián)，從而得到為灰白色粉末的標(biāo)題化合物。
1H NMR(CD3COCD3)δ(ppm)8.1-8.2(1H，bs)，7.75-7.8(4H，m)，7.7(2H，m)，7.6(2H，m)，5.9(1H，m)，5.25-5.35(1H，m)，4.35(1H，m)，3.5-3.6(1H，m)，1.9-2.1(2.H，m)，1.2-1.6(8H，m)，0.9-1.1(2H，m)；NH not observed.(MH)+ESI＝545.8.
實(shí)施例6N1-(1-氰基環(huán)丙基)-4-氟-N2-((1S)-2，2，2-三氟-1-{4′-[2，2，2-三氟-1-羥基-1-(三氟甲基)乙基]聯(lián)苯基-4-基}乙基)-L-亮氨酸酰胺的合成 步驟12-(4-溴苯基)-1，1，1，3，3，3-六氟丙-2-醇的制備向-78℃的二溴苯(4.7g)的四氫呋喃(100mL)溶液中加入正丁基鋰(8mL；2.5M己烷溶液)并且將所得混合物攪拌15分鐘。然后，使溫和的六氟丙酮流通過(guò)該懸浮液約15分鐘。然后，使上述混合物反應(yīng)1小時(shí)。將其傾倒入冰中、用氯化銨稀釋并且用乙酸乙酯對(duì)其進(jìn)行提取。用硫酸鎂對(duì)所得有機(jī)層進(jìn)行干燥并且利用微微加熱，在減壓下將溶劑除去。使所得殘余物通過(guò)SiO2短床，使用10％乙酸乙酯/90％己烷作為洗脫液，從而得到叔醇。
1H NMR(CD3COCD3)δ(ppm)7.75-7.8(4H，s)，7.65(1H，OH).
步驟2N1-(1-氰基環(huán)丙基)-4-氟-N2-((1S)-2，2，2-三氟-1-{4′-[2，2，2-三氟-1-羥基-1-(三氟甲基)乙基]聯(lián)苯基-4-基}乙基)-L-亮氨酸酰胺的制備使實(shí)施例1步驟3所述的N1-(1-氰基環(huán)丙基)-4-氟-N2-{(1S)-2，2，2-三氟-1-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜戊硼烷-2-基)苯基]乙基}-L-亮氨酸酰胺(220mg，0.44mmol)和得自于實(shí)施例6步驟1的溴化物(323mg，1mmol)如實(shí)施例1步驟4中所述進(jìn)行偶聯(lián)，從而得到為泡沫的標(biāo)題化合物。
1H NMR(CD3COCD3)δ(ppm)8.2(1H，bs)，7.85-7.95(4H，m)，7.75-7.8(2H，d)，7.6(2H，d)，7.55(1H，OH)，4.4(1H，m)，3.55(1H，m)，2.8-2.9(1H，m)，1.9-2.1(2H，m)，1.4-1.5(6H，m)，1.3-1.4(2H，m)，1.1(1H，m)，0.95(1H，m).(MH)+ESI＝614.1.
實(shí)施例7N1-(1-氰基環(huán)丙基)-4-氟-N2-{(1S)-2，2，2-三氟-1-[4′-(2，2，2-三氟-1-羥基-1-甲基乙基)聯(lián)苯基-4-基]乙基}-L-亮氨酸酰胺的合成 步驟12-(4-溴苯基)-1，1，1-三氟丙-2-醇的制備將市售1-(4-溴苯基)-2，2，2-三氟乙酮(1g，4mmol)在乙醚(8mL)中冷卻至-78℃，從而向其中加入市售甲基溴化鎂(2.65mL，7.9mmol，3M乙醚溶液)。使上述渾濁的反應(yīng)介質(zhì)升溫至室溫并且將其攪拌過(guò)夜。將所得反應(yīng)混合物轉(zhuǎn)移入含有1.2M氫氯酸(20mL)的分液漏斗中。用乙酸乙酯(30mL)將所得水層提取3次。合并的有機(jī)層用鹽水洗滌、用硫酸鎂干燥并且在減壓下進(jìn)行濃縮。所得澄清油的純度足以進(jìn)行使用，不需要進(jìn)一步純化。
步驟2N1-(1-氰基環(huán)丙基)-4-氟-N2-{(1S)-2，2，2-三氟-1-[4′-(2，2，2-三氟-1-羥基-1-甲基乙基)聯(lián)苯基-4-基]乙基}-L-亮氨酸酰胺的制備如實(shí)施例1步驟4所述，使實(shí)施例1步驟3的硼酸酯(250mg)和得自于實(shí)施例7步驟1的溴化物(150mg)進(jìn)行偶聯(lián)，從而得到為白色粉末的標(biāo)題化合物。
(MH)+ESI＝560實(shí)施例8N1-(1-氰基環(huán)丙基)-4-氟-N2-((1S)-2，2，2-三氟-1-{4′-[1-羥基-1-(三氟甲基)丙基]聯(lián)苯基-4-基}乙基)-L-亮氨酸酰胺的合成 步驟12-(4-溴苯基)-1，1，1-三氟丁-2-醇的制備向-78℃的1，4-二溴苯(2.5g，10.6mmol)的THF(50mL)溶液中加入n-BuLi(6.5mL，10mmol；1.6M己烷溶液)，并且在-78℃下將所得混合物攪拌15分鐘。然后，將1，1，1-三氟-2-丁酮(1.3g，10mmol)加入其中。此后，進(jìn)一步將其攪拌15分鐘。用NH4Cl水溶液將所得反應(yīng)混合物猝滅并且用乙酸乙酯對(duì)其進(jìn)行提取。通過(guò)combi-快速色譜法(40g柱；用己烷-乙酸乙酯(10％-20％)洗脫20分鐘；流速35mL/min并且收集18mL/餾分)進(jìn)行純化，從而得到為無(wú)色液體的標(biāo)題化合物。
1H NMR(CD3COCD3)δ(ppm)7.58(m，5H)，5.52(s，1H)，2.28(m，1H)，2.10(m，1H).
步驟2N1-(1-氰基環(huán)丙基)-4-氟-N2-((1S)-2，2，2-三氟-1-{4′-[1-羥基-1-(三氟甲基)丙基]聯(lián)苯基-4-基}乙基)-L-亮氨酸酰胺的制備如實(shí)施例1步驟4所述，使實(shí)施例1步驟3的硼酸酯(150mg)和得自于實(shí)施例8步驟1的溴化物(100mg)進(jìn)行偶聯(lián)，從而得到為白色粉末的標(biāo)題化合物。
(MH)+ESI＝574實(shí)施例9N1-(1-氰基環(huán)丙基)-N2-((1S)-1-{4′-[(1R)-2，2-二氟-1-羥基-1-甲基乙基]聯(lián)苯基-4-基}-2，2，2-三氟乙基)-4-氟-L-亮氨酸酰胺和N1-(1-氰基環(huán)丙基)-N2-((1S)-1-{4′-[(1S)-2，2-二氟-1-羥基-1-甲基乙基]聯(lián)苯基-4-基}-2，2，2-三氟乙基)-4-氟-L-亮氨酸酰胺的合成
步驟12-(4-溴苯基)-1，1-二氟丙-2-醇的制備在0℃下，在10分鐘時(shí)間內(nèi)，向1-(4-溴苯基)-2，2-二氟乙酮(2.5g，10.6mmol)的THF(60mL)溶液中加入甲基氯化鎂(10mL，30mmol；3M THF溶液)，并且在0℃下將所得混合物攪拌1小時(shí)。微量后處理表明仍然剩余原料，進(jìn)一步將甲基氯化鎂(5mL，15mmol，3M THF溶液)加入其中。此后，進(jìn)一步將其攪拌15分鐘。上述混合物用H2O猝滅、小心地用1M HCl(100mL)進(jìn)行酸化并且用乙酸乙酯進(jìn)行提取。通過(guò)combi-快速色譜法(120g柱；用己烷-乙酸乙酯(5％-25％)洗脫20分鐘；流速70mL/min并且收集25mL/餾分)進(jìn)行純化，從而得到為無(wú)色液體的標(biāo)題化合物。
1H NMR(CD3COCD3)δ(ppm)7.54(m，4H)，5.86(t，1H)，5.10(s，1H)，1.64(s，3H).
步驟2N1-(1-氰基環(huán)丙基)-N2-{(1S)-1-[4′-(2，2-二氟-1-羥基-1-甲基乙基)聯(lián)苯基-4-基]-2，2，2-三氟乙基}-4-氟-L-亮氨酸酰胺的制備如實(shí)施例1步驟4所述，使實(shí)施例1步驟3的硼酸酯(2.5g)和得自于實(shí)施例9步驟1的溴化物(1.6mg)進(jìn)行偶聯(lián)，從而得到為白色粉末的非對(duì)映異構(gòu)體混合物。
步驟3非對(duì)映異構(gòu)體的分離將得自于實(shí)施例9步驟2的1∶1非對(duì)映體混合物(80mg)溶于乙醇(2mL)中。利用Chiralcel OD半制備柱(2cm I.D.×25cm)，用32.5％2-丙醇的己烷溶液洗脫并且流速為6mL/min，通過(guò)～10次注射(10×200μL)對(duì)上述化合物的混合物進(jìn)行拆分。對(duì)在21-23min得到洗脫的快餾分進(jìn)行收集和濃縮，從而得到為白色粉末的N1-(1-氰基環(huán)丙基)-N2-((1S)-1-{4’-[(1R)-2，2-二氟-1-羥基-1-甲基乙基]聯(lián)苯基-4-基}-2，2，2-三氟乙基)-4-氟-L-亮氨酸酰胺(98％d.e.)。立體化學(xué)是臨時(shí)規(guī)定的。
(MH)+ESI＝542對(duì)在～25min得到洗脫的慢餾分進(jìn)行收集和濃縮，從而得到為白色粉末的N1-(1-氰基環(huán)丙基)-N2-((1S)-1-{4’-[(1S)-2，2-二氟-1-羥基-1-甲基乙基]聯(lián)苯基-4-基}-2，2，2-三氟乙基)-4-氟-L-亮氨酸酰胺(98％d.e.)。立體化學(xué)是臨時(shí)規(guī)定的。
(MH)+ESI＝542
實(shí)施例10N1-(1-氰基環(huán)丙基)-N2-((1S)-1-{4′-[(1S)-2，2-二氟-1-羥基-1-(羥甲基)乙基]聯(lián)苯基-4-基}-2，2，2-三氟乙基)-4-氟-L-亮氨酸酰胺的合成 步驟11-溴-4-[1-(二氟甲基)乙烯基]苯的制備向1L燒瓶中的活化鋅粉(13.3g，0.2mol)中加入THF(200mL)。在～10min時(shí)間內(nèi)，將二碘甲烷(8.9mL，110mmol)滴加加入其中。在室溫下將所得混合物攪拌30分鐘。在冰-丙酮浴中對(duì)上述混合物進(jìn)行冷卻，在～15min時(shí)間內(nèi)將氯化錫(iv)的1M CH2Cl2溶液(22.1mL，22.1mmol)加入其中(針尖通入混合物中)。將此混合物攪拌15min并且將冷卻浴除去。在室溫下將所得混合物攪拌30分鐘。重新用冰-丙酮浴冷卻之后，在～10min時(shí)間內(nèi)，將1-(4-溴苯基)-2，2-二氟乙酮(5.2g，22.12mmol)的THF(30mL)溶液滴加加入其中。將冷卻浴除去并且在室溫下將所得混合物攪拌30分鐘。然后，在0℃下將上述混合物分份傾倒入碳酸氫鈉(300mL，300mmol)和己烷(300mL)的混合物中。攪拌15分鐘之后，將混合物濾過(guò)硅藻土。對(duì)有機(jī)層進(jìn)行分離、用鹽水洗滌、干燥(Na2SO4)并進(jìn)行濃縮。在硅膠上進(jìn)行色譜分離并且用己烷∶乙酸乙酯(20∶1)洗脫，從而得到為淺黃色液體的標(biāo)題化合物。
1H NMR(CD3COCD3)δ(ppm)7.60(d，2H)，7.50(d，2H)，6.70(t，1H)，5.92(s，1H)，5.80(s，1H).
步驟2(2S)-2-(4-溴苯基)-3，3-二氟丙-1，2-二醇的制備向裝有市售AD-mix-alpha(7g)的250mL燒瓶中加入叔丁醇(25mL)和H2O(25mL)。在室溫下對(duì)上述混合物進(jìn)行攪拌，從而得到透明的兩相，下相呈現(xiàn)出橙黃色。冷卻至0℃之后，立即將1-溴-4-[1-(二氟甲基)乙烯基]苯(1.1g，4.7mmol)加入其中，并且在大約4℃下將混合物攪拌過(guò)夜。由此得到亮黃色混合物。將混合物保持在0℃下并且將固體亞硫酸鈉(8g，64mmol)加入其中。將反應(yīng)混合物升溫至室溫和將其攪拌30分鐘。將乙酸乙酯(50mL)加入其中并且將有機(jī)層分離。所得水層用乙酸乙酯(2×10mL)進(jìn)行提取。對(duì)合并的乙酸乙酯提取物進(jìn)行干燥(Na2SO4)和濃縮。通過(guò)combi-快速色譜法(40g柱；用己烷-乙酸乙酯(20％-60％)洗脫25分鐘；流速35mL/min并且收集18mL/餾分)進(jìn)行純化，從而得到為無(wú)色油的標(biāo)題化合物。
1H NMR(CD3COCD3)δ(ppm)7.56(s，4H)，6.14(t，1H)，5.00(s，1H)，4.40(t，1H)，4.00(m，1H)，3.80(m，1H).
步驟3N1-(1-氰基環(huán)丙基)-N2-((1S)-1-{4′-[(1S)-2，2-二氟-1-羥基-1-(羥甲基)乙基]聯(lián)苯基-4-基}-2，2，2-三氟乙基)-4-氟-L-亮氨酸酰胺的制備如實(shí)施例1步驟4所述，使實(shí)施例1步驟3的硼酸酯(900mg)和得自于實(shí)施例10步驟2的溴化物(450mg)進(jìn)行偶聯(lián)，從而得到為白色粉末的標(biāo)題化合物。
對(duì)單膦酸酯衍生物(Yves Leblanc等人，Tetrahedron Asymmetry2001，12，3063-3066)進(jìn)行制備，從而測(cè)定其光學(xué)純度(94％d.e.；Chiralpak AD，40％2-丙醇的己烷溶液，流速1mL/min；保留時(shí)間7.4min)。
1H NMR(CD3COCD3)δ(ppm)8.15(s，1H)，7.70(m，6H)，7.55(d，2H)，6.20(t，1H)，4.92(s，1H)，4.35(m，2H)，4.08(m，1H)，3.85(m，1H)，3.52(m，1H)，1.98(m，2H)，1.50-1.28(m，8H)，1.05(m，1H)，0.90(m，1H).
實(shí)施例11N1-(1-氰基環(huán)丙基)-N2-((1S)-1-{4′-[(1R)-2，2-二氟-1-羥基-1-(羥甲基)乙基]聯(lián)苯基-4-基}-2，2，2-三氟乙基)-4-氟-L-亮氨酸酰胺的合成
步驟1(2R)-2-(4-溴苯基)-3，3-二氟丙-1，2-二醇的制備向裝有市售AD-mix-beta(7g)的250mL燒瓶中加入叔丁醇(25mL)和H2O(25mL)。在室溫下對(duì)上述混合物進(jìn)行攪拌，從而得到透明的兩相，下相呈現(xiàn)出橙黃色。冷卻至0℃之后，立即將1-溴-4-[1-(二氟甲基)乙烯基]苯(1.1g，4.7mmol)加入其中，并且在大約4℃下將混合物攪拌過(guò)夜。由此得到亮黃色混合物。將混合物保持在0℃下并且將固體亞硫酸鈉(8g，64mmol)加入其中。將反應(yīng)混合物升溫至室溫和將其攪拌30分鐘。將乙酸乙酯(50mL)加入其中并且將有機(jī)層分離。所得水層用乙酸乙酯(2×10mL)進(jìn)行提取。對(duì)合并的乙酸乙酯提取物進(jìn)行干燥(Na2SO4)和濃縮。通過(guò)聯(lián)用快速色譜法(40g柱；用己烷-乙酸乙酯(20％-60％)洗脫25分鐘；流速35mL/min并且收集18mL/餾分)進(jìn)行純化，從而得到為無(wú)色油的標(biāo)題化合物。
1H NMR(CD3COCD3)δ(ppm)7.56(s，4H)，6.14(t，1H)，5.00(s，1H)，4.40(t，1H)，4.00(m，1H)，3.80(m，1H).
步驟2N1-(1-氰基環(huán)丙基)-N2-((1S)-1-{4′-[(1R)-2，2-二氟-1-羥基-1-(羥甲基)乙基]聯(lián)苯基-4-基}-2，2，2-三氟乙基)-4-氟-L-亮氨酸酰胺的制備如實(shí)施例1步驟4所述，使實(shí)施例1步驟3的硼酸酯(1.5g)和得自于實(shí)施例11步驟1的溴化物(740mg)進(jìn)行偶聯(lián)，從而得到為白色粉末的標(biāo)題化合物。
對(duì)單膦酸酯衍生物(Yves Leblanc等人，Tetrahedron Asymmetry2001，12，3063-3066)進(jìn)行制備，從而測(cè)定其光學(xué)純度(94％d.e.；Chiralpak AD，40％2-丙醇的己烷溶液，流速1mL/min；保留時(shí)間11.1min)。
1H NMR(CD3COCD3)δ(ppm)8.15(s，1H)，7.70(m，6H)，7.55(d，2H)，6.20(t，1H)，4.92(s，1H)，4.35(m，2H)，4.08(m，1H)，3.85(m，1H)，3.52(m，1H)，1.98(m，2H)，1.50-1.28(m，8H)，1.05(m，1H)，0.90(m，1H).
實(shí)施例12N2-[(1S)-1-(4-溴苯基)-2，2，2-三氟乙基]-N1-(1-氰基環(huán)丙基)-4-氟-L-亮氨酸酰胺的合成 步驟1(3S)-3-[(叔丁氧羰基)氨基]-4-羥基丁酸芐酯的制備將N-(叔丁氧羰基)-L-天冬氨酸4-芐酯(30g)溶于乙二醇二甲醚(90mL)中，和將所得溶液冷卻至-5℃。將N-甲基嗎啉(10.32mL)加入其中，隨后將氯甲酸異丁酯(12.66mL)緩慢加入其中，使得反應(yīng)溫度保持低于-10℃。將混合物保持0.5小時(shí)。將固體迅速過(guò)濾并且用乙二醇二甲醚(90mL)對(duì)其進(jìn)行洗滌。將所得濾液冷卻至-50℃并且將硼氫化鈉(4.4g)的水(45mL)溶液緩慢加入其中，使得反應(yīng)溫度保持在-30～-15℃之間。然后，將水(500mL)加入其中，使得反應(yīng)溫度保持低于-15℃。將所得懸浮液過(guò)濾，所得固體用水(400mL)洗滌并且進(jìn)行干燥，從而得到(3S)-3-[(叔丁氧羰基)氨基]-4-羥基丁酸芐酯。
1H NMR(CD3COCD3)δ7.3-7.45(5H，m)，5.85-5.95(1H，NH)，5.15(2H，s)，3.95-4.1(2H，m)，3.5-3.7(2H，m)，2.55-2.75(2H，m)，1.4(9H，s).
步驟2[(4S)-2-氧代-1，3-唑烷-4-基]乙酸芐酯的制備向得自于步驟1的醇(95.7g)的二氯乙烷(925mL)溶液中加入吡啶(625mL)，并且將所得混合物冷卻至0-5℃。將無(wú)水對(duì)甲苯磺酸酐(105.7g)加入其中，并且將所得混合物升溫至室溫并且攪拌1小時(shí)，然后在90℃下將其加熱2小時(shí)。將所得混合物進(jìn)行冷卻，用二氯甲烷(1000mL)對(duì)其進(jìn)行稀釋并且用1N HCl(3×600mL)進(jìn)行洗滌。所得有機(jī)層用鹽水洗滌、用硫酸鈉干燥并且在真空下將溶劑除去。所得殘余物使用比例為1∶1的乙酸乙酯和己烷，然后使用乙酸乙酯，通過(guò)色譜法在SiO2進(jìn)行純化，從而得到[(4S)-2-氧代-1，3-唑烷-4-基]乙酸芐酯。
1H NMR(CD3SOCD3)δ7.8(1H，NH)，7.3-7.45(5H，m)，5.05-5.15(2H，m)，4.4-4.5(1H，m)，4.1-4.2(1H，m)，4.0-4.05(1H，m)，3.6-3.8(2H，m).
步驟3(4S)-4-(2-羥基-2-甲基丙基)-1，3-唑烷-2-酮的制備在-20℃下，將甲基溴化鎂(227mL的3M乙醚溶液)加入到甲苯(340mL)和THF(340mL)的混合物中。然后，將得自于步驟2的酯(40g)的溫THF溶液(170mL)滴加加入其中，保持溫度低于-10℃。將所得混合物放置2小時(shí)，然后將其緩慢加入到水(1000mL)和乙酸(200mL)的混合物中，并且在室溫下將所得混合物攪拌2小時(shí)。將水層分離，并且用水(2×200mL)對(duì)所得有機(jī)層進(jìn)行提取。使用二氯甲烷和連續(xù)提取器將產(chǎn)物從合并的水層中提取出來(lái)。使用庚烷作為共溶劑共沸乙酸，將二氯甲烷提取物蒸干。所得殘余物使用乙醇和二氯甲烷(1∶30)，通過(guò)色譜法在SiO2進(jìn)行純化，從而得到(4S)-4-(2-羥基-2-甲基丙基)-1，3-唑烷-2-酮。
1H NMR(CD3COCD3)δ6.1-6.4(1H，NH)，4.45-4.55(1H，m)，4.1-4.2(1H，m)，3.95-4.05(1H，m)，3.7(1H，s)，1.65-1.85(2H，m)，1.25(6H，m).
步驟4(4S)-4-(2-氟-2-甲基丙基)-1，3-唑烷-2-酮的制備將得自于步驟3的醇(47.8g)的二氯甲烷溶液(100mL)加入到-70℃下的(二乙基氨基)三氟化硫(48.5g)的二氯甲烷(500mL)溶液中。將所得混合物升溫至室溫并且將其攪拌1小時(shí)。然后將上述混合物小心地加入到0℃的飽和NaHCO3水溶液(800mL)的混合物中。將有機(jī)層分離并且用飽和NaHCO3水溶液對(duì)其進(jìn)行洗滌。所得水層進(jìn)一步用二氯甲烷(100mL)提取，并且對(duì)合并的二氯甲烷層進(jìn)行干燥和濃縮。所得殘余物使用乙酸乙酯和己烷(1∶5)和隨后使用乙酸乙酯，在SiO2上通過(guò)色譜法進(jìn)行純化，從而得到(4S)-4-(2-氟-2-甲基丙基)-1，3-唑烷-2-酮。
1H NMR(CD3SOCD3)δ7.6(1H，NH)，4.4-4.5(1H，m)，3.95-4.05(1H，m)，3.9-3.95(1H，m)，1.8-1.95(2H，m)，1.25-1.4(6H，2s).
步驟5(2S)-2-氨基-4-氟-4-甲基戊-1-醇的制備向得自于步驟4的氟衍生物(21.0g)的90％乙醇水溶液(216mL)中加入氫氧化鉀(21.9g)。將上述混合物回流加熱4小時(shí)并且將其冷卻至室溫。然后對(duì)混合物進(jìn)行濃縮和用甲苯(3×300mL)對(duì)其進(jìn)行共蒸發(fā)。將所得殘余物溶于二氯甲烷(500mL)中并將其攪拌0.5小時(shí)。將所得懸浮液濾過(guò)硅藻土和用二氯甲烷(3×100mL)對(duì)硅藻土進(jìn)行洗滌。將所得濾液濃縮至干燥，從而得到(2S)-2-氨基-4-氟-4-甲基戊-1-醇。
1H NMR(CD3OD)δ3.4-3.5(1H，m)，3.2-3.3(1H，m)，3.0-3.1(1H，m)，1.5-1.7(2H，m)，1.35(3H，s)，1.3(3H，s).
步驟6(2S)-1-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}-4-氟-4-甲基戊-2-胺的制備將得自于步驟5的氨基醇(21.0g)溶于二氯甲烷(300mL)中，并且將該溶液冷卻至0℃。將4-(二甲基氨基)吡啶(0.051g)和叔丁基二甲基甲硅烷基氯化物(21g)加入其中，然后將三乙胺(25mL)加入其中。在室溫下將上述混合物攪拌過(guò)夜。將上述反應(yīng)混合物緩緩倒入0℃的飽和氯化銨水溶液中，并且用二氯甲烷(3×300mL)對(duì)其進(jìn)行萃取。所得有機(jī)層用鹽水洗滌、用硫酸鈉干燥并且在真空下除去溶劑，從而得到(2S)-1-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}-4-氟-4-甲基戊-2-胺。
1H NMR(CD3OD)δ3.6-3.65(1H，m)，3.4-3.5(1H，m)，3.1-3.2(1H，m)，1.6-1.8(2H，m)，1.35-1.45(6H，m)，0.93(9H，s)，0.1(6H，s).
步驟7(2S)-1-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}-4-氟-4-甲基-N-[(1E)-2，2，2三氟亞乙基]戊-2-胺的制備向得自于步驟6的胺(31.5g)的苯(126mL)溶液中加入三氟乙醛甲基半縮醛(21.6mL)。將上述溶液在回流下加熱過(guò)夜，使用Dean-Stark阱收集水。將所得反應(yīng)混合物冷卻至室溫并且將其濃縮至干燥。殘余物使用4％的乙酸乙酯的己烷溶液在SiO2上進(jìn)行純化，從而得到(2S)-1-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}-4-氟-4-甲基戊-2-胺。
1H NMR(CD3COCD3)δ7.9-7.95(1H，m)，3.75-3.85(1H，m)，3.7-3.75(1H，m)，3.53-3.6(1H，m)，1.9-2.0(2H，m)，1.3-1.4(6H，m)，0.9(9H，s)，0.1(3H，s)，0.05(3H，s).
步驟8(2S)-2-{[(1S)-1-(4-溴苯基)-2，2，2-三氟乙基]氨基}-4-氟-4-甲基戊-1-醇的制備向-75℃的1，4-二溴苯(0.26g)的THF(4mL)溶液中加入n-BuLi(0.42mL的2.5M己烷溶液)并且將所得混合物放置20分鐘。將得自于步驟7的亞胺(0.329g)的THF(2mL)溶液加入其中并且將該混合物放置2小時(shí)。然后將上述混合物加入到水(50mL)、NH4Cl(1g)和碎冰的混合物中。用乙酸乙酯(2×25mL)對(duì)其進(jìn)行萃取，并且對(duì)合并的乙酸乙酯層進(jìn)行干燥和蒸干。
以較大用量重復(fù)相同的步驟，但是使用1，4-二溴苯(1.2g)、n-BuLi(1.84mL)和亞胺(1.38g.)，并且如上所述對(duì)反應(yīng)混合物進(jìn)行處理。將根據(jù)兩種制備方法得到的合并殘余物溶于THF(10mL)中，并且將其冷卻至0℃。將正四丁基氟化銨(6mL的1M THF溶液)加入其中并且在+5℃下將所得混合物攪拌16小時(shí)。將上述混合物傾倒入水(50mL)、氯化銨(1g)和碎冰的混合物中，并且將所得有機(jī)層分離。所得水層進(jìn)一步用乙酸乙酯(2×15mL)進(jìn)行提取，并且對(duì)合并的有機(jī)層進(jìn)行干燥和濃縮。所得殘余物使用乙酸乙酯和己烷(1∶5)在SiO2上進(jìn)行純化，從而得到(2S)-2-{[(1S)-1-(4-溴苯基)-2，2，2-三氟乙基]氨基}-4-氟-4-甲基戊-1-醇。
1H NMR(CD3COCD3)δ7.65(2H，m)，7.5(2H，m)，4.5-4.6(1H，m)，3.8(1H，m)，3.6(1H，m)，3.3-3.4(1H，m)，2.85-2.0(1H，m)，2.55(1H，m)，1.7-1.9(2H，s)，1.3-1.4(6H，m).
步驟9N2-[(1S)-1-(4-溴苯基)-2，2，2-三氟乙基]-N1-(1-氰基環(huán)丙基)-4-氟-L-亮氨酸酰胺的制備將H5IO6/CrO3懸浮液(66mL的0.44M CH3CN；注釋)冷卻至0℃，并且將得自于步驟8的醇(1.55g)的CH3CN(5mL)溶液滴加加入其中。在0～5℃下將所得混合物攪拌3.5小時(shí)。在劇烈攪拌下將其傾倒入pH值為4的Na2HPO4(200mL)中，并且用乙醚(3×50mL)對(duì)所得混合物進(jìn)行萃取。合并的乙醚提取物用水與鹽水(1∶1)洗滌，然后用NaHSO3稀溶液和鹽水洗滌。所得混合物用硫酸鎂進(jìn)行干燥、進(jìn)行過(guò)濾并且將溶劑蒸干，從而得到N-[(1S)-1-(4-溴苯基)-2，2，2-三氟乙基]-4-氟-L-亮氨酸，其照此用于下一步驟。
注釋氧化劑(H5IO6/CrO3)如Tetrahedron Letters39(1998)5323-5326所述進(jìn)行制備，但是使用HPLC級(jí)CH3CN(含有0.5％水)；不加入水。
將二異丙基乙胺(4.2mL)加入到0℃的得自于上述步驟的酸(1.5g)、1-氨基-1-環(huán)丙烷腈鹽酸鹽(1.18g)、O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲六氟磷酸鹽(1.94g)和二甲基甲酰胺(5mL)的懸浮液中，并且在室溫下使上述混合物反應(yīng)48小時(shí)。然后將其傾倒在冰和稀氯化銨水溶液中。所得混合物用乙酸乙酯和乙醚(1∶1)提取，并且用pH值為3的稀Na2HPO4和鹽水對(duì)合并的有機(jī)層進(jìn)行洗滌。將溶劑蒸干，和所得殘余物通過(guò)使用乙酸乙酯和己烷(1∶2)的色譜法在SiO2上進(jìn)行純化，從而得到N2-[(1S)-1-(4-溴苯基)-2，2，2-三氟乙基]-N1-(1-氰基環(huán)丙基)-4-氟-L-亮氨酸酰胺，其具有用于下一步反應(yīng)的充分純度。
1H NMR(CD3COCD3)δ8.15(1H，NH)，7.6(2H，m)，7.45(2H，m)，4.35-4.45(1H，m)，3.45-3.55(1H，m)，1.9-2.1(2H，m)，1.75-1.85(1H，NH)，1.35-1.55(8H，m)，1.1-1.15(1H，m)，0.95-1.05(1H，m).
藥物組合物作為本發(fā)明的具體實(shí)施方案，將100mg(1R，2R)-N-(氰甲基)-5，5-二氟-2-[4′-(甲硫基)-1，1′-聯(lián)苯基-2-基]環(huán)己烷羧酰胺與充分細(xì)碎的乳糖一起進(jìn)行配制，從而得到總量為580～590mg的混合物，將其裝填在0號(hào)的硬膠囊中。
在本申請(qǐng)中公開(kāi)的化合物在以下測(cè)定中顯示出了活性。此外，公開(kāi)于本申請(qǐng)中的化合物相對(duì)于先前公開(kāi)的化合物具有增強(qiáng)的藥理學(xué)測(cè)驗(yàn)圖。
組織蛋白酶K測(cè)定在二甲亞砜(DMSO)中，對(duì)試驗(yàn)化合物濃度為500μM～0.0085μM的系列稀釋物(1/3)進(jìn)行制備。然后將2μL取自各稀釋物的DMSO加入到在測(cè)定緩沖液溶液中的50μL測(cè)定緩沖液(MES，50mM(pH值5.5)；EDTA，2.5mM；DTT，2.5mM和10％DMSO)和25μL人類(lèi)組織蛋白酶K(0.4nM)中。在搖動(dòng)板上將上述測(cè)定溶液混合5～10秒鐘并且在室溫下將其培養(yǎng)15分鐘。將在25μL測(cè)定緩沖液中的Z-Leu-Arg-AMC(8μM)加入到上述測(cè)定溶液中。通過(guò)分光熒光測(cè)定法(Exλ＝355nm；Emλ＝460nm)，對(duì)香豆素離去基團(tuán)(AMC)的水解跟蹤10分鐘。通過(guò)將實(shí)驗(yàn)值擬合至劑量反應(yīng)曲線的標(biāo)準(zhǔn)數(shù)學(xué)模型，對(duì)抑制作用百分比進(jìn)行計(jì)算。
組織蛋白酶L測(cè)定在二甲亞砜(DMSO)中，對(duì)濃度為500μM～0.0085μM的試驗(yàn)化合物的系列稀釋物(1/3)進(jìn)行制備。然后將2μL取自各稀釋物的DMSO加入到50μL測(cè)定緩沖液(MES，50mM(pH值5.5)；EDTA，2.5mM；DTT，2.5mM和10％DMSO)和25μL人類(lèi)組織蛋白酶L(0.5nM)的測(cè)定緩沖液溶液中。在搖動(dòng)板上將上述測(cè)定溶液混合5～10秒鐘并且在室溫下將其培養(yǎng)15分鐘。將在25μL測(cè)定緩沖液中的Z-Leu-Arg-AMC(8μM)加入到上述測(cè)定溶液中。通過(guò)分光熒光測(cè)定法(Exλ＝355nm；Emλ＝460nm)，對(duì)香豆素離去基團(tuán)(AMC)的水解跟蹤10分鐘。通過(guò)將實(shí)驗(yàn)值擬合至劑量反應(yīng)曲線的標(biāo)準(zhǔn)數(shù)學(xué)模型，對(duì)抑制作用百分比進(jìn)行計(jì)算。
組織蛋白酶B測(cè)定在二甲亞砜(DMSO)中，對(duì)濃度為500μM～0.0085μM的試驗(yàn)化合物的系列稀釋物(1/3)進(jìn)行制備。然后將2μL取自各稀釋物的DMSO加入到50μL測(cè)定緩沖液(MES，50mM(pH值5.5)；EDTA，2.5mM；DTT，2.5mM和10％DMSO)和25μL人類(lèi)組織蛋白酶B(4.0nM)的測(cè)定緩沖液溶液中。在搖動(dòng)板上將上述測(cè)定溶液混合5～10秒鐘并且在室溫下將其培養(yǎng)15分鐘。將在25μL測(cè)定緩沖液中的Z-Leu-Arg-AMC(8μM)加入到上述測(cè)定溶液中。通過(guò)分光熒光測(cè)定法(Exλ＝355nm；Emλ＝460nm)，對(duì)香豆素離去基團(tuán)(AMC)的水解跟蹤10分鐘。通過(guò)將實(shí)驗(yàn)值擬合至劑量反應(yīng)曲線的標(biāo)準(zhǔn)數(shù)學(xué)模型，對(duì)抑制作用百分比進(jìn)行計(jì)算。
組織蛋白酶S測(cè)定在二甲亞砜(DMSO)中，對(duì)濃度為500μM～0.0085μM的試驗(yàn)化合物的系列稀釋物(1/3)進(jìn)行制備。然后將2μL取自各稀釋物的DMSO加入到50μL測(cè)定緩沖液(MES，50mM(pH值5.5)；EDTA，2.5mM；DTT，2.5mM和10％DMSO)和25μL人類(lèi)組織蛋白酶S(20nM)的測(cè)定緩沖液溶液中。在搖動(dòng)板上將上述測(cè)定溶液混合5～10秒鐘并且在室溫下將其培養(yǎng)15分鐘。將在25μL測(cè)定緩沖液中的Z-Leu-Arg-AMC(8μM)加入到上述測(cè)定溶液中。通過(guò)分光熒光測(cè)定法(Exλ＝355nm；Emλ＝460nm)，對(duì)香豆素離去基團(tuán)(AMC)的水解跟蹤10分鐘。通過(guò)將實(shí)驗(yàn)值擬合至劑量反應(yīng)曲線的標(biāo)準(zhǔn)數(shù)學(xué)模型，對(duì)抑制作用百分比進(jìn)行計(jì)算。
在大鼠中的藥物動(dòng)力學(xué)在大鼠中的口服(PO)藥物動(dòng)力學(xué)方法根據(jù)加拿大議會(huì)關(guān)于動(dòng)物飼養(yǎng)的準(zhǔn)則對(duì)動(dòng)物進(jìn)行圈養(yǎng)、進(jìn)食和照顧。
在各次PO血液水平研究之前，將雄性Sprague Dawley大鼠(250-400g)禁食過(guò)夜。
一次將大鼠置于制動(dòng)器中一只并且將箱體牢牢固定。通過(guò)從尾部頂端劃破一小片(1mm或者更小)傷口，獲得零血樣。然后通過(guò)穩(wěn)定但是平緩的從頂部到底部進(jìn)行擠壓，從而將血液擠出。將大約0.5mL血液收集入肝素化的真空采血管中。
根據(jù)需要，將化合物制備成10mL/kg的標(biāo)準(zhǔn)劑量體積，并且分為16種規(guī)格進(jìn)行口服給藥，3″灌食針入食道內(nèi)。
隨后按照與零血樣相同的方式進(jìn)行血液收集，但是不再需要?jiǎng)澠莆膊?。用一片紗布將尾部擦凈并且如上所述擠入/沖擊入適當(dāng)標(biāo)記的管中。
在取樣之后，立即對(duì)血液進(jìn)行離心、分離，將血漿置入清楚標(biāo)記的管形瓶中并且將其貯存入冷凍機(jī)中，直至進(jìn)行分析為止。
在PO劑量給藥之后，測(cè)定大鼠血液的一般時(shí)點(diǎn)為0、15min、30min、1h、2h、4h、6h、8h、24h在放血4小時(shí)時(shí)點(diǎn)之后，將食物任意提供給大鼠。在研究期間一直提供水。
賦形劑可以將以下賦形劑(相應(yīng)的劑量體積)用于PO大鼠血液水平測(cè)定中PEG 200/300/400(在水中為0-60％)等于或者小于10mL/kg甲基纖維素(在水中為0.5％-1.0％)等于或者小于10mL/kgTween 80(在水中為1-10％)等于或者小于10mL/kg
用于PO血液水平研究的化合物可以為混懸劑形式。為了獲得更好的均一性，可以將上述混懸劑置入超聲波發(fā)生器中大約5分鐘。
為了進(jìn)行分析，用1.2～1.5倍體積的任選含有內(nèi)標(biāo)的乙腈對(duì)試樣進(jìn)行分析并且對(duì)其進(jìn)行離心，從而除去蛋白沉淀物。將上清液直接注射入帶有質(zhì)譜(MS)或者紫外線吸光度(UV)或者熒光(Fluo)檢測(cè)的C-18 HPLC柱中。相對(duì)于在任選含有內(nèi)標(biāo)的乙腈中利用已知量藥物示蹤的澄清血樣得到的標(biāo)準(zhǔn)曲線，進(jìn)行定量。將另外任選含有內(nèi)標(biāo)的乙腈加入1.2～1.5倍體積的相應(yīng)于樣品情形中的量的初始血液中。通過(guò)比較i.v.對(duì)p.o曲線(AUC)下的面積，對(duì)生物利用度(F)進(jìn)行評(píng)價(jià)。
F=AUCpoAUCiv×DOSEivDOSEpo×100%]]>和AUC＝(C1+C2)*(T2-T1)/2其中C是在給定時(shí)間T時(shí)通過(guò)MS或者UV或者Fluo測(cè)定的濃度大鼠中的靜脈內(nèi)藥物動(dòng)力學(xué)方法根據(jù)加拿大議會(huì)關(guān)于動(dòng)物飼養(yǎng)的準(zhǔn)則對(duì)動(dòng)物進(jìn)行圈養(yǎng)、進(jìn)食和照顧。
在這些研究中使用雄性Sprague Dawley(325-375g)非禁食大鼠。
根據(jù)需要，將化合物制備為1mL/kg的標(biāo)準(zhǔn)劑量體積。
利用25規(guī)格的針，經(jīng)頸靜脈靜脈內(nèi)給藥有意識(shí)的大鼠所述劑量。這構(gòu)成零時(shí)點(diǎn)。
通過(guò)劃破尾部頂端(1-2mm)，在5分鐘時(shí)進(jìn)行放血。然后通過(guò)穩(wěn)定但是平緩的從頂部到底部進(jìn)行擠壓，從而將血液從尾部擠出。將大約0.5mL血液收集入肝素化收集管形瓶中。隨后按照相同的方式進(jìn)行放血，但是不再需要?jiǎng)澠莆膊俊Ｓ靡黄啿紝⑽膊坎羶舨⑶胰缟纤霾裳脒m當(dāng)標(biāo)記的管中。
在I.V.劑量給藥之后，測(cè)定大鼠血液的一般時(shí)點(diǎn)為以下任意時(shí)點(diǎn)
0、5min、15min、30min、1h、2h、4h、6h或者0、5min、30min、1h、2h、4h、6h、8h、24h賦形劑可以將以下賦形劑用于IV大鼠血液水平測(cè)定中葡萄糖1mL/kgMoleculosol 25％1mL/kgDMSO(二甲亞砜)限制為10％的劑量體積至高達(dá)0.1mL/千克動(dòng)物PEG 200不多于80％的PEG 200與20％無(wú)菌水混合至-1mL/kg如果溶液渾濁，可以將葡萄糖或者碳酸氫鈉加入其中。
為了進(jìn)行分析，用1.2～1.5倍體積的任選含有內(nèi)標(biāo)的乙腈對(duì)試樣進(jìn)行稀釋并且對(duì)試樣進(jìn)行離心，從而除去蛋白沉淀物。將上清液直接注射入帶有質(zhì)譜(MS)或者紫外線吸光度(UV)或者熒光(Fluo)檢測(cè)的C-18 HPLC柱中。相對(duì)于在任選含有內(nèi)標(biāo)的乙腈中利用已知量藥物示蹤的澄清血樣得到的標(biāo)準(zhǔn)曲線，進(jìn)行定量。將另外任選含有內(nèi)標(biāo)的乙腈加入1.2～1.5倍體積的相應(yīng)于樣品情形中的量的初始血液中。通過(guò)比較i.v.對(duì)p.o曲線(AUC)下的面積，對(duì)生物利用度(F)進(jìn)行評(píng)價(jià)。
F=AUCpoAUCiv×DOSEivDOSEpo×100%]]>和AUC＝(C1+C2)*(T2-T1)/2其中C是在給定時(shí)間T時(shí)通過(guò)MS或者UV或者Fluo測(cè)定的濃度。
權(quán)利要求
1.式I化合物 其中R1和R2與它們連接的碳原子合起來(lái)形成C3-4環(huán)烷基，其任選被C1-3烷基取代；R3為C1-6烷基，其任選被1～4個(gè)氟或者1～4個(gè)氯取代；R4為C1-6烷基，其任選被1～5個(gè)鹵素原子取代；R5為氫或者C1-6烷基，其任選被1～5個(gè)鹵素原子取代；D各自獨(dú)立地為芳基或者雜芳基；R6為氫或者任選被1～2個(gè)羥基或者2～6個(gè)鹵素原子取代的C1-6烷基；R7為C1-6烷基，其任選被2～5個(gè)鹵素原子取代；n為2；或者其藥學(xué)上可接受的鹽、立體異構(gòu)體或者N-氧化物衍生物。
2.權(quán)利要求1的化合物，其中R1和R2與它們連接的碳原子合起來(lái)形成環(huán)丙基；或者其藥學(xué)上可接受的鹽、立體異構(gòu)體或者N-氧化物衍生物。
3.權(quán)利要求2的化合物，其中D為苯基；或者其藥學(xué)上可接受的鹽、立體異構(gòu)體或者N-氧化物衍生物。
4.權(quán)利要求3的化合物，其中R5為氫和R4為CF3；或者其藥學(xué)上可接受的鹽、立體異構(gòu)體或者N-氧化物衍生物。
5.權(quán)利要求4的化合物，其中R7是被兩個(gè)或者三個(gè)氟取代的C1-3烷基；或者其藥學(xué)上可接受的鹽、立體異構(gòu)體或者N-氧化物衍生物。
6.權(quán)利要求1的化合物，為N1-(1-氰基環(huán)丙基)-N2-(1-{4′-[2，2-二氟-1-羥基乙基]聯(lián)苯基-4-基}-2，2，2-三氟乙基)-4-氟-L-亮氨酸酰胺；N1-(1-氰基環(huán)丙基)-4-氟-N2-{2，2，2-三氟-1-[4′-(2，2，2-三氟-1-羥基乙基)聯(lián)苯基-4-基]乙基}-L-亮氨酸酰胺；N1-(1-氰基環(huán)丙基)-4-氟-N2-(2，2，2-三氟-1-{4′-[3，3，3-三氟-1-羥基-1-甲基丙基]聯(lián)苯基-4-基}乙基)-L-亮氨酸酰胺；N1-(1-氰基環(huán)丙基)-4-氟-N2-(2，2，2-三氟-1-{4′-[2，2，2-三氟-1-羥基-1-(三氟甲基)乙基]聯(lián)苯基-4-基}乙基)-L-亮氨酸酰胺；N1-(1-氰基環(huán)丙基)-4-氟-N2-{2，2，2-三氟-1-[4′-(2，2，2-三氟-1-羥基-1-甲基乙基)聯(lián)苯基-4-基]乙基}-L-亮氨酸酰胺；N1-(1-氰基環(huán)丙基)-4-氟-N2-(2，2，2-三氟-1-{4′-[1-羥基-1-(三氟甲基)丙基]聯(lián)苯基-4-基}乙基)-L-亮氨酸酰胺；N1-(1-氰基環(huán)丙基)-N2-(1-{4′-[2，2-二氟-1-羥基-1-甲基乙基]聯(lián)苯基-4-基}-2，2，2-三氟乙基)-4-氟-L-亮氨酸酰胺；N1-(1-氰基環(huán)丙基)-N2-(1-{4′-[2，2-二氟-1-羥基-1-(羥甲基)乙基]聯(lián)苯基-4-基}-2，2，2-三氟乙基)-4-氟-L-亮氨酸酰胺；N2-[1-(4-溴苯基)-2，2，2-三氟乙基]-N1-(1-氰基環(huán)丙基)-4-氟-L-亮氨酸酰胺；或者其藥學(xué)上可接受的鹽、立體異構(gòu)體或者N-氧化物衍生物。
7.權(quán)利要求6的化合物，為N1-(1-氰基環(huán)丙基)-N2-((1S)-1-{4′-[(1R)-2，2-二氟-1-羥基乙基]聯(lián)苯基-4-基}-2，2，2-三氟乙基)-4-氟-L-亮氨酸酰胺；N1-(1-氰基環(huán)丙基)-N2-((1S)-1-{4′-[(1S)-2，2-二氟-1-羥基乙基]聯(lián)苯基-4-基}-2，2，2-三氟乙基)-4-氟-L-亮氨酸酰胺；N1-(1-氰基環(huán)丙基)-4-氟-N2-{(1S)-2，2，2-三氟-1-[4′-(2，2，2-三氟-1-羥基乙基)聯(lián)苯基-4-基]乙基}-L-亮氨酸酰胺；N1-(1-氰基環(huán)丙基)-4-氟-N2-((1S)-2，2，2-三氟-1-{4′-[(1S)-3，3，3-三氟-1-羥基-1-甲基丙基]聯(lián)苯基-4-基}乙基)-L-亮氨酸酰胺；N1-(1-氰基環(huán)丙基)-4-氟-N2-((1S)-2，2，2-三氟-1-{4′-[(1R)-3，3，3-三氟-1-羥基-1-甲基丙基]聯(lián)苯基-4-基}乙基)-L-亮氨酸酰胺；N1-(1-氰基環(huán)丙基)-4-氟-N2-{(1S)-2，2，2-三氟-1-[4′-(R)-(2，2，2-三氟-1-羥基乙基)聯(lián)苯基-4-基]乙基}-L-亮氨酸酰胺；N1-(1-氰基環(huán)丙基)-4-氟-N2-((1S)-2，2，2-三氟-1-{4′-[2，2，2-三氟-1-羥基-1-(三氟甲基)乙基]聯(lián)苯基-4-基}乙基)-L-亮氨酸酰胺；N1-(1-氰基環(huán)丙基)-4-氟-N2-{(1S)-2，2，2-三氟-1-[4′-(2，2，2-三氟-1-羥基-1-甲基乙基)聯(lián)苯基-4-基]乙基}-L-亮氨酸酰胺；N1-(1-氰基環(huán)丙基)-4-氟-N2-((1S)-2，2，2-三氟-1-{4′-[1-羥基-1-(三氟甲基)丙基]聯(lián)苯基-4-基}乙基)-L-亮氨酸酰胺；N1-(1-氰基環(huán)丙基)-N2-((1S)-1-{4′-[(1R)-2，2-二氟-1-羥基-1-甲基乙基]聯(lián)苯基-4-基}-2，2，2-三氟乙基)-4-氟-L-亮氨酸酰胺；N1-(1-氰基環(huán)丙基)-N2-((1S)-1-{4′-[(1S)-2，2-二氟-1-羥基-1-甲基乙基]聯(lián)苯基-4-基}-2，2，2-三氟乙基)-4-氟-L-亮氨酸酰胺；N1-(1-氰基環(huán)丙基)-N2-((1S)-1-{4′-[(1S)-2，2-二氟-1-羥基-1-(羥甲基)乙基]聯(lián)苯基-4-基}-2，2，2-三氟乙基)-4-氟-L-亮氨酸酰胺；N1-(1-氰基環(huán)丙基)-N2-((1S)-1-{4′-[(1R)-2，2-二氟-1-羥基-1-(羥甲基)乙基]聯(lián)苯基-4-基}-2，2，2-三氟乙基)-4-氟-L-亮氨酸酰胺；N2-[(1S)-1-(4-溴苯基)-2，2，2-三氟乙基]-N1-(1-氰基環(huán)丙基)-4-氟-L-亮氨酸酰胺；或者其藥學(xué)上可接受的鹽、立體異構(gòu)體或者N-氧化物衍生物。
8.一種藥物組合物，包括根據(jù)權(quán)利要求1的化合物和藥學(xué)上可接受的載體。
9.權(quán)利要求1的化合物在制備可用于在需要治療的哺乳動(dòng)物中治療以下疾病的、含有有效量的根據(jù)權(quán)利要求1的化合物的藥物中的用途，所述疾病為骨質(zhì)疏松癥、腎上腺糖皮質(zhì)激素誘發(fā)的骨質(zhì)疏松癥、Paget’s疾病、異常升高的骨更新、牙周病、牙齒損害、骨折、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎、假體周?chē)芄前Y、骨脆癥、動(dòng)脈粥樣硬化癥、肥胖病、青光眼、慢性阻塞性肺病、轉(zhuǎn)移性骨骼疾病、惡性腫瘤的高鈣血癥或者多發(fā)性骨髓瘤。
10.一種藥物組合物，包括權(quán)利要求1的化合物和另一種選自以下的試劑有機(jī)雙膦酸酯、雌激素受體調(diào)節(jié)劑、雌激素受體β調(diào)節(jié)劑、雄激素受體調(diào)節(jié)劑、破骨細(xì)胞質(zhì)子ATP酶抑制劑、HMG-CoA還原酶抑制劑、整聯(lián)蛋白受體拮抗劑或者成骨細(xì)胞合成代謝劑、維生素D、合成維生素D類(lèi)似物、非甾族抗炎藥物、選擇性環(huán)加氧酶-2抑制劑、白細(xì)胞間介素-1β抑制劑、LOX/COX抑制劑、RANKL抑制劑及其藥學(xué)上可接受的鹽和混合物。
11.權(quán)利要求1的化合物和另一種試劑在制備用于在需要其的哺乳動(dòng)物中治療以下疾病中的用途，所述試劑選自有機(jī)雙膦酸酯、雌激素受體調(diào)節(jié)劑、雄激素受體調(diào)節(jié)劑、破骨細(xì)胞質(zhì)子ATP酶抑制劑、HMG-CoA還原酶抑制劑、整聯(lián)蛋白受體拮抗劑、成骨細(xì)胞合成代謝劑、維生素D、合成維生素D類(lèi)似物、非甾族抗炎藥物、選擇性環(huán)加氧酶-2抑制劑、白細(xì)胞間介素-1β抑制劑、LOX/COX抑制劑、RANKL抑制劑及其藥學(xué)上可接受的鹽和混合物，所述疾病為骨質(zhì)疏松癥、腎上腺糖皮質(zhì)激素誘發(fā)的骨質(zhì)疏松癥、Paget’s疾病、異常升高的骨更新、牙周病、牙齒損害、骨折、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎、假體周?chē)芄前Y、骨脆癥、動(dòng)脈粥樣硬化癥、肥胖病、青光眼、慢性阻塞性肺病、轉(zhuǎn)移性骨骼疾病、惡性腫瘤的高鈣血癥或者多發(fā)性骨髓瘤。
全文摘要
本發(fā)明涉及新穎的一類(lèi)化合物，它們是半胱氨酸蛋白酶抑制劑，包括但不限于組織蛋白酶K、L、S和B抑制劑。這些化合物可以用于治療其中表明骨吸收抑制作用的疾病，比如骨質(zhì)疏松癥。
文檔編號(hào)A61K31/275GK101061093SQ200580039914
公開(kāi)日2007年10月24日 申請(qǐng)日期2005年11月18日 優(yōu)先權(quán)日2004年11月23日
發(fā)明者J·Y·戈捷, 李振聲, C·梅隆 申請(qǐng)人:默克弗羅斯特加拿大有限公司