專利名稱：治療胰島素抵抗和心肌病的化合物及方法
背景技術(shù)：
本文中所引用的所有出版物是為了使讀者熟悉本發(fā)明的背景技術(shù)。這些參考文獻(xiàn)都不能被認(rèn)為是關(guān)于本發(fā)明的現(xiàn)有技術(shù)。
盡管2型糖尿病(即T2D、糖尿病、非胰島素依賴型糖尿病、成年型糖尿病)經(jīng)常被認(rèn)為是由高血糖導(dǎo)致的疾病，現(xiàn)代理論已經(jīng)將血糖濃度視為與不規(guī)律脂肪代謝相關(guān)的原發(fā)疾病的主要癥狀。因此高脂肪酸濃度導(dǎo)致了多種脂毒性胰島素抵抗、胰腺β細(xì)胞凋亡和一種稱為“代謝綜合癥”的紊亂。胰島素抵抗可通過下列指標(biāo)來檢驗如胰島素血濃度增加、與口服葡萄糖耐量試驗(OGTT)相關(guān)的葡萄糖的血濃度增加、與胰島素給藥相關(guān)的磷酸化蛋白質(zhì)激酶B(AKT)濃度減少等。胰島素抵抗可能由細(xì)胞中與胰島素受體相關(guān)的信號系統(tǒng)敏感度下降和/或胰腺β細(xì)胞因凋亡而損失所導(dǎo)致。還有證據(jù)顯示胰島素抵抗可通過具有原發(fā)性炎性成分來表征。
久坐的生活方式和肥胖促進(jìn)了產(chǎn)生更多的T2D。治療學(xué)的介入已經(jīng)開始針對具有葡萄糖耐受不良(IGT)的人。IGT被定義為葡萄糖負(fù)荷之后的高血糖(葡萄糖值在正常和糖尿病之間)，并在世界范圍內(nèi)影響了至少2億人。為IGT所困擾的人較之普通人具有更高的患糖尿病的風(fēng)險。大約40％的有IGT的人在5-10年間會患糖尿病，但有一些人則回歸正?；蛉跃S持IGT。
此外，具有IGT的人還具有更高的患心血管疾病的風(fēng)險，例如高血壓、血脂異常和向心性肥胖。因此，IGT的診斷，尤其是在表面上健康和不臥床的個體上，具有重要的預(yù)測意義。至于更詳細(xì)的回顧，參見Zimmte P等，Nature，414783-7(2001)，其公開內(nèi)容在此引入作為參考。
最近，空腹葡萄糖異常(IFG)作為另一種異常的葡萄糖代謝被予以介紹。IFG被定義為基于空腹葡萄糖濃度，如IGT一樣也與患心血管疾病和糖尿病的風(fēng)險相聯(lián)系。
T2D可由多種因素導(dǎo)致。另外，該病也表現(xiàn)為不同種類的癥狀。以前，T2D被認(rèn)為是相對清楚的病體，但現(xiàn)在的理解揭示了T2D(和其相關(guān)的高血糖或葡萄糖代謝紊亂(dysglycaemia))經(jīng)常表現(xiàn)為更廣泛的原發(fā)性紊亂，包括代謝綜合癥。這種綜合癥有時稱為X綜合癥，而且是一連串心血管疾病的風(fēng)險因素，除了葡萄糖不耐性，包括高胰島素血癥、血脂異常、高血壓、內(nèi)臟肥胖、過高血液凝固性和微白蛋白尿。
對導(dǎo)致T2D的因素的新近的理解影響了現(xiàn)在對該疾病的治療。已經(jīng)開始探求治療高血糖以及在2型糖尿病中的其它危險因素如高血壓、血脂異常和向心性肥胖的更具進(jìn)取性方法。另外，健康組織，例如美國糖尿病協(xié)會，已經(jīng)開始提倡對處于風(fēng)險中的個體進(jìn)行更加簡單和廣泛的篩查。
神經(jīng)酰胺已經(jīng)被報道在一些與T2D相關(guān)的因素中顯示活性，例如胰島素抵抗和β細(xì)胞凋亡。例如，Schimitz-Pfiffer等，報道了用棕櫚酸或神經(jīng)酰胺培養(yǎng)細(xì)胞會導(dǎo)致胰島素抵抗(Schimitz-Pfiffer C等，J.Biol.Chem，27424202-10(1999))。細(xì)胞中棕櫚酸濃度增加通過棕櫚酰輔酶A濃度增加直接導(dǎo)致神經(jīng)酰胺濃度增加，棕櫚酰輔酶A參與了神經(jīng)酰胺的從頭合成途徑。研究顯示神經(jīng)酰胺的從頭合成是重要的因素，因為用伏馬毒素抑制神經(jīng)酰胺合酶阻斷了β細(xì)胞凋亡(Shimabukuro M等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，952498-2502(1998))。同樣的，已經(jīng)認(rèn)識到在從頭合成神經(jīng)酰胺合酶途徑的限速步驟中所涉及的酶，絲氨酸棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶(SPT)可能是阻斷β細(xì)胞凋亡的可行性目標(biāo)。例如，Shimabukuro等報道在糖尿病性的Zucker肥胖大鼠模型中用環(huán)絲氨酸抑制 SPT有部分的β細(xì)胞保護(hù)效應(yīng)(≈50％的活性)(Shimabukuro等，J.Biol.Chem，27332487-90(1998)，其公開內(nèi)容在此引入作為參考)。
一個眾所周知的致炎癥信號，腫瘤壞死因子α(TNF)，已經(jīng)被顯示能提高培養(yǎng)培養(yǎng)的細(xì)胞中神經(jīng)酰胺的濃度(Sawada，M等，CellDeath Differ，11997-1008(2004)；Meyer，SG等，Biochim BiophysActa.1643(1-3)1-4(2003))。施用TNF可減少脂肪細(xì)胞中PPAR-γ濃度，而且這已經(jīng)顯示涉及神經(jīng)酰胺(Kajita，K等.Diabetes.Res.Clin.Pract，66 Suppl 1S79-83(2004))。TNF也誘導(dǎo)肝細(xì)胞的凋亡，且這和由于病毒性肝炎、酒精中毒、局部缺血和暴發(fā)性肝衰竭導(dǎo)致的損傷相關(guān)(Ding，WX和Yin，XM，J.Cell.Mol.Med.8445-54(2004)；Kanzler S等.Semin Cancer Biol.10(3)173-84(2000))。同樣的，TNF和IL-6與惡病質(zhì)相關(guān)，惡病質(zhì)是另一種綜合癥，有炎性成分的有力證據(jù)，涉及神經(jīng)酰胺作為一種效應(yīng)因子。眾所周知動脈粥樣硬化有炎性成分。由淀粉狀蛋白誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激包括誘導(dǎo)提高神經(jīng)元細(xì)胞中的神經(jīng)酰胺濃度的級聯(lián)反應(yīng)(Ayasolla K等，F(xiàn)ree Radic.Biol.Med，37(3)325-38(2004))。因此改變的神經(jīng)酰胺濃度可能是癡呆例如阿爾茨海默氏病和HIV癡呆的原因，用SPT抑制劑調(diào)節(jié)其濃度被認(rèn)為有望作為治療手段(CutlerRG等，Proc Natl.Acad.Sci，1012070-5(2004))。眾所周知TNF與膿毒病相關(guān)和胰島素具有保護(hù)效應(yīng)(Esmon，CT.Crosstalk betweeninflammation and thrombosis，Maturitas，47305-14(2004))。從頭合成的神經(jīng)酰胺濃度可能在許多疾病和癥狀的炎性過程中充當(dāng)主要的效應(yīng)機(jī)理。然而，SPT調(diào)節(jié)劑被用作與神經(jīng)酰胺相關(guān)的疾病和癥狀的治療劑，作為炎性過程中的效應(yīng)物，該潛質(zhì)在以前未被披露過。
脂肪酸濃度的提高會導(dǎo)致與心肌病病理相仿的綜合癥(即心力衰竭)。對這一致命癥狀的致病原因缺乏了解，但似乎與脂毒性相關(guān)。研究顯示心肌細(xì)胞脂肪過載可能是心肌病發(fā)生的一個原因。另外，最近的研究已經(jīng)確定在衰竭的人心臟中有低濃度的肌細(xì)胞凋亡(每105核80-250個肌細(xì)胞)。然而，仍不清楚這種細(xì)胞死亡是巧合的發(fā)現(xiàn)，還是一種保護(hù)步驟，或是疾病病理中的一種因果原因(參見例如Wencker D等，J.Clin.Invest.1111497-1504(2003)，其公開內(nèi)容在此引入作為參考)。細(xì)胞中脂肪酸濃度的提高直接導(dǎo)致了神經(jīng)酰胺從頭合成率的提高。TNF與CHF相關(guān)，由此，神經(jīng)酰胺，一種與TNF信號相聯(lián)系的效應(yīng)物，通過獨(dú)立的方向被牽涉其中(McTiernan，CF等，Curr Cardiol Rep.2(3)189-97(2000))。然而，神經(jīng)酰胺從頭合成調(diào)節(jié)劑在心肌病中作為阻礙進(jìn)一步發(fā)展并提供心肌治療的試劑這方面的效用，未被證實過。
惡病質(zhì)是一種進(jìn)行性消耗綜合癥，伴隨大量的骨骼肌損失(FrostRA和Lang CH；Curr.Opin.Clin.Nutrit.Metab.Care，255-263(2005))和脂肪組織損失。這一綜合癥被發(fā)現(xiàn)與傳染病、炎癥、癌癥(TisdaleMJ；Langenbecks Arch Surg，389299-305(2004))或一些慢性疾病如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(Rall LC和Roubenoff，R，Rheumatol431219-23(2004))的應(yīng)答有關(guān)。多種細(xì)胞活素的釋放與該綜合癥相關(guān)，TNF和IL-6被認(rèn)為是主要的因素。因此惡病質(zhì)可視為一種慢性炎癥狀態(tài)。神經(jīng)酰胺是眾所周知的TNF信號的主要效應(yīng)物。另外，為人熟知的是神經(jīng)酰胺可調(diào)節(jié)IL-6的表達(dá)(Shinoda J，Kozawa O，TokudaH，Uematsu，T.Cell Signal，11435-41(1999))；Coroneos，E；Wang，Y；Panuska，JR；Templeton，DJ；Kester，M；Biochem J；31613-7(1996))?，F(xiàn)有資料使我們相信神經(jīng)酰胺從頭合成作為一種炎癥性狀態(tài)的信號起著重要作用。因此我們相信對TNF和/或IL-6通過神經(jīng)酰胺信號的抑制可以給患有這種消耗綜合癥的病人提供治療效果。
Rosenberg和其他人已經(jīng)披露了分離胰腺胰島用于移植，例如，供糖尿病治療之用，是困難的，這是由于分離的低產(chǎn)率造成的，而低產(chǎn)率是因為β細(xì)胞凋亡。由于胰島分離導(dǎo)致結(jié)構(gòu)和功能性變化導(dǎo)致了胰島細(xì)胞的死亡(Rosenberg L，Wang R，Paraskevas S，Maysinger D；Surgery，12639398(1999)).Cell loss in isolated human islets occursby apoptosis.Paraskevas S，Maysinger D，Wang R，Duguid TP，Rosenberg L；Pancreas，20(3)270-76(2000).Challenges facingislet transplantation for the treatment of typel diabetes mellitus.RotherKI，Harlan DM，J.Clin.Invest.114877-83(2004))。
Beattie等已經(jīng)報道了多種治療(例如海藻糖，從培養(yǎng)基中除去Arg，及其他)可改善移植胰島的收益，但相當(dāng)量的細(xì)胞死亡仍存在(Beattie GM，LeiboWitz G，Lopez AD，Levine F，Hayek A，CellTransplant.9431-38(2000))。通過半胱天冬蛋白酶抑制劑對細(xì)胞和組織的治療導(dǎo)致部分阻斷由多種代謝損害而造成的凋亡，但凋亡可由許多機(jī)制驅(qū)動，而半胱天冬蛋白酶抑制劑具有有用的或邊緣性的效果，這取決于研究中的具體情況。(Study of capase inhibitors forlimiting death in mammalian cell culture.Sauerwald TM，OylerGA，Betenbaugh MJ.) (Biotechnol.Bioeng.81329-40(2003))。
對從頭合成的神經(jīng)酰胺的抑制的研究表明該抑制在許多重要情況中顯示出抗凋亡效果。與用游離棕櫚酸和/或結(jié)合高濃度的葡萄糖的治療相對應(yīng)的β細(xì)胞凋亡能夠被伏馬毒素B1(神經(jīng)酰胺合酶抑制劑)的治療所阻斷，例如(Maedler，Kdiabetes，52726-33(2003))。因此抑制或從頭合成神經(jīng)酰胺被用于阻止凋亡的發(fā)生是可能的。然而，采用抑制神經(jīng)酰胺合酶的試劑的治療已經(jīng)顯示出會導(dǎo)致毒性效果，正如攝入伏馬毒素B1(Bennett JW和Klich M，Clin.Microbiol.Rev，16497-516(2003))所觀察到的。抑制SPT提供了一種可選方法用于阻止胰腺β細(xì)胞的凋亡，然而，SPT調(diào)節(jié)劑在胰腺β細(xì)胞移植之前的培養(yǎng)培養(yǎng)中并沒有顯示出能阻止其損失。
因此，從頭合成神經(jīng)酰胺的調(diào)節(jié)劑能提供重要的新治療劑用于大量的人和牲畜的疾病，這些疾病伴隨運(yùn)用神經(jīng)酰胺作為效應(yīng)劑的炎性成分。然而，在某些點上對從頭合成神經(jīng)酰胺途徑進(jìn)行干涉(例如用伏馬毒素B1)已知會導(dǎo)致毒性。而抑制絲氨酸棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶的濃度則導(dǎo)致無害的細(xì)胞成分絲氨酸和棕櫚酰輔酶A積聚。
已知的SPT抑制劑包括環(huán)絲氨酸、D-絲氨酸、多球殼菌素、sphingofunginB、viridiofunginA和脂黃霉素。許多的這類天然產(chǎn)物，例如多球殼菌素，已經(jīng)顯示出具有不可接受的毒性。此外，這些神經(jīng)酰胺僅僅給予部分的保護(hù)活性。另外，一些SPT抑制劑，例如環(huán)絲氨酸，顯示出微弱的抑制性和低的特異性。結(jié)構(gòu)研究顯示天然的神經(jīng)酰胺模擬起始材料或產(chǎn)物的活性位點結(jié)合形式(Hanada K等，Biochem.Biophys.Acta，163216-30(2003))。
SPT抑制劑多球殼菌素已知是一種有力的免疫抑制分子。已經(jīng)以其結(jié)構(gòu)為基礎(chǔ)設(shè)計了許多類似物。以下圖示的具有多球殼菌素免疫抑制活性的結(jié)構(gòu)，例如那些涉及化合物FTY720的結(jié)構(gòu)，不會抑制SPT。另外，F(xiàn)TY720的羧基衍生物，在下面以化合物2所示，沒有顯示出抗SPT活性，這已經(jīng)在對類FTY720活性的免疫抑制試驗中得到驗證(Kiuchi M等，J.Med Chem，432946-61(2000))，并被認(rèn)為由于其極低的溶解度和本身缺少結(jié)合親合力因而是非活性的。
SPT調(diào)節(jié)提供了一種針對減弱胰島素抵抗和防止胰腺β細(xì)胞損失的引人注目的方式。SPT抑制劑尤其可以提供治療T2D的新療法。這些藥劑有益于在移植中保護(hù)組織，例如用于胰島移植和肝臟移植。如上所列，這樣的抑制劑也可以有益地用于治療凋亡在其中起作用的心肌病、動脈粥樣硬化、肝損害、再灌注損傷、阿爾茨海默氏病、1型糖尿病和其他的炎癥疾病。作為高效力的選擇性SPT抑制劑的生物可用藥劑，在此之前是不存在的。非毒性生物可用的、有效力和選擇性的SPT調(diào)節(jié)劑將被證明是一種重要的新藥劑，用于治療本文所公開的疾病和癥狀以及本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的其它涉及凋亡且TNF起作用的其它疾病和癥狀的。這樣的化合物和其治療這些適應(yīng)癥的用途在以前都沒有公開過。
發(fā)明概述本文介紹了新穎的化合物和使用方法。在一個優(yōu)選的實施方案中，本文提供的化合物顯示出對酶即絲氨酸棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶(SPT)的活性。
本文提供的化合物可用于多種人類疾病或癥狀的治療。在一個優(yōu)選的實施方案中，化合物用于治療疾病如T2D、胰島素抵抗、胰腺β細(xì)胞凋亡或肥胖。在另一個優(yōu)選的實施方案中，化合物用于治療前血栓性癥狀(pro-thrombotic conditions)、充血性心力衰竭、心肌梗死、高血壓、血脂異常或其它代謝綜合癥(如綜合癥X)。在又一個優(yōu)選的實施方案中，化合物用于治療炎癥疾病，例如心血管系統(tǒng)炎癥疾病、膿毒病和惡病質(zhì)。代表性的心血管系統(tǒng)炎癥疾病包括動脈粥樣硬化。在另一個優(yōu)選的實施方案中，這些化合物用于防止如上所列的與病毒、酒精相關(guān)的肝損害、再灌注損傷。在又一個優(yōu)選的實施方案中，這些化合物單獨(dú)或聯(lián)合目前已批準(zhǔn)的雞尾酒療法和/或半胱天冬蛋白酶抑制劑，用于保護(hù)或提高胰腺肝細(xì)胞和或肝臟移植的收益。
還提供組合物，其包含本文所列化合物的組合物，與另一種治療有效量的活性劑相聯(lián)合。代表性的試劑包括胰島素、胰島素類似物、腸胰島素、腸胰島素類似物、胰高血糖素樣肽、胰高血糖素樣肽類似物、胰高血糖素樣肽的抑制劑(exendin)、胰高血糖素樣肽的抑制劑類似物、PACAP和VIP類似物、磺酰脲類、縮二胍類、α-葡萄糖苷酶抑制劑、乙酰輔酶A羧化酶抑制劑、半胱天冬蛋白酶抑制劑、δ3不飽和脂肪酸、多不飽和脂肪酸和PPAR配體。因此，多種疾病治療方法的實施方案包括共同施用本文所列化合物和治療有效量的另一種活性劑，或施用本文提供的聯(lián)用組合物。
發(fā)明詳述在說明書中，“一種”指一個或更多。在權(quán)利要求中，當(dāng)與“包含”一詞聯(lián)用時，“一種”指一個或更多。在本文中，“另一個”指至少第二種或更多。
本發(fā)明的多種實施方案和具體應(yīng)用將會詳細(xì)說明。本發(fā)明會與多種實施方案和應(yīng)用結(jié)合進(jìn)行描述，可以理解的是這些實施方案和應(yīng)用并不限制本發(fā)明。而是本發(fā)明包括在本發(fā)明精神和范圍內(nèi)的變化、修改和等同方式。另外，在本文中引用了多個專利、專利申請、網(wǎng)頁和出版物作為參考，除非另外指出，每一個都是全文引入作為參考。所有本文提到的出版物都是為了描述和公開本發(fā)明的反應(yīng)劑、工藝和概念。不能被解釋為承認(rèn)這些參考文獻(xiàn)是關(guān)于本發(fā)明的現(xiàn)有技術(shù)。
I.化合物本文公開了了新穎的化合物和其藥學(xué)上可接受的鹽，對應(yīng)于式(I) 其中R1是H或任選取代的低級烷基、芳基、芳烷基或烷氧基烷基；每一個R2獨(dú)立為H、保護(hù)基或-C(＝O)-CHRa-NHRb，其中Ra選自下組烷基、芳基、?；⑼?、疊氮基、羥基、肼、氰基、鹵素、酰肼、烯基、炔基、醚、硫醇、硒基、磺?；?、硼酸酯(boronate)、硼酸鹽(borate)、二氧磷基、膦酰基、膦、雜環(huán)、烯酮、亞胺、醛、酯、硫代酸、羥胺、氨基和其組合；和Rb是H或氨基保護(hù)基；每一個V和Z獨(dú)立為(CRcRd)n、O、NRe、S、Ar、CRcRdAr、OAr、NR4Ar、SAr或Ar，其中每一個Rc和Rd獨(dú)立為H、低級烷基、OH、O-低級烷基，或Rc和Rd一起形成＝O、＝N-OH、＝N-O-低級烷基，或＝N-O-CH2CH2-O-CH3；Re是H、低級烷基或-CH2CH2-O-CH3；和n是1到7；
q是0到3；Ar是任選取代的芳基或雜芳基；u是0或1；每一個X獨(dú)立為H或鹵素；和m是4到12。
在本發(fā)明的一些實施方案中，式(I)化合物不包括 優(yōu)選的式(I)化合物包括其中R1是低級烷基的化合物，例如低級烷基為甲基、乙基、異丙基等。另外優(yōu)選的實施方案包括其中R1是烷氧基烷基的化合物，例如烷氧基烷基為CH3-O-CH2-CH2-、HO-CH2-CH2-O-、HO-(CH2-CH2-O)p-、羥乙基醇、羥丙基醇、羥乙基氧基乙基醇和聚乙二醇或其衍生物。其它優(yōu)選的式(I)化合物包括其中Z是NR4、O或S的化合物。另一個優(yōu)選的實施方案包括其中Ar是任選取代的雜芳基的式(I)化合物。另一個優(yōu)選的實施方案包括其中Ar是任選取代的稠環(huán)系，例如5-5、5-6或6-6環(huán)系的式(I)化合物。
在一個實施方案中，式(I)化合物對應(yīng)于式(II) 其中L是CH2、CHRf、CRfRg、O、NRh、S、Ar、CH2Ar、CHRfAr、CRfRgAr、OAr、NRhAr、SAr或ArAr，其中Rf是H、低級烷基、OH、O-低級烷基，Rg是H，或Rf和Rg一起形成＝O、＝N-OH、＝N-O-低級烷基，或＝N-O-CH2CH2-O-CH3，和Rh是H、低級烷基或-CH2CH2-O-CH3。
在一個實施方案中，式(I)化合物對應(yīng)于式(IIA) 其中每一個Y獨(dú)立為C、CH、O、S、N或NH。
在另一個實施方案中，式(I)化合物對應(yīng)于式(IIB) 其中每一個W獨(dú)立為C、CH、N或NH。
在又一個實施方案中，式(I)化合物對應(yīng)于式(IIC) 其中每一個Y獨(dú)立為C、CH、O、S、N或NH。
在另一個實施方案中，式(I)化合物對應(yīng)于式(IID) 在另一個實施方案中，式(I)化合物對應(yīng)于式(IIE) 在另一個實施方案中，式(I)化合物對應(yīng)于式(IIF) 在另外一個實施方案中，式(I)化合物對應(yīng)于式(III) 在另一個實施方案中，式(I)化合物對應(yīng)于式(IIIA)
在另一個實施方案中，式(I)化合物對應(yīng)于式(IIIB) 在另外一個實施方案中，式(I)化合物對應(yīng)于式(IIIC) 其中每一個Y獨(dú)立為C、CH、O、S、N或NH。
在另外一個實施方案中，式(I)化合物對應(yīng)于式(IIID) 其中每一個Y獨(dú)立為C、CH、O、S、N或NH。
在另外一個實施方案中，式(I)化合物對應(yīng)于式(IIIE)
其中每一個Y獨(dú)立為C、CH、O、S、N或NH。
在另外一個實施方案中，式(I)化合物對應(yīng)于式(IIIF) 其中每一個W獨(dú)立為C、CH、N或NH。
在另外一個實施方案中，式(I)化合物對應(yīng)于式(IIIG) 其中每一個W獨(dú)立為C、CH、N或NH。
在另外一個實施方案中，式(I)化合物對應(yīng)于式(IIIH) 其中每一個W獨(dú)立為C、CH、N或NH。
在另外一個實施方案中，式(I)化合物對應(yīng)于式(IIIJ)
其中每一個Y獨(dú)立為C、CH、O、S、N或NH。
在另外一個實施方案中，式(I)化合物對應(yīng)于式(IIIK) 其中每一個Y獨(dú)立為C、CH、O、S、N或NH。
在另外一個實施方案中，式(I)化合物對應(yīng)于式(IIIL) 其中每一個Y獨(dú)立為C、CH、O、S、N或NH。
在又一個實施方案中，列出了式(I)化合物的前藥形式。化合物的前藥形式最佳是口服給藥，通常對應(yīng)于酸活性種的酯。前藥的活性種可用于制備活性藥物化合物。
在一個實施方案中，前藥化合物對應(yīng)于式(IIIM)
其中Ra是丙氨酸、精氨酸、天門冬酰胺、天冬氨酸、半胱氨酸、谷氨酰胺、谷氨酸、甘氨酸、組氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、賴氨酸、甲硫氨酸、苯基丙氨酸、脯氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、色氨酸、酪氨酸、纈氨酸、pyrolysine與硒代半胱氨酸的側(cè)鏈。
對應(yīng)于式(IIIM)的具有代表性的前藥化合物包括對應(yīng)于式(IIIN)的化合物 在另一個實施方案中，前藥化合物對應(yīng)于式(IIIP) 其中Ra是丙氨酸、精氨酸、天門冬酰胺、天冬氨酸、半胱氨酸、谷氨酰胺、谷氨酸、甘氨酸、組氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、賴氨酸、甲硫氨酸、苯基丙氨酸、脯氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、色氨酸、酪氨酸、纈氨酸、pyrolysine與硒代半胱氨酸的側(cè)鏈。
對應(yīng)于式(IIIP)的具有代表性的前藥化合物包括對應(yīng)于式(IIIQ)的化合物 示例性的化合物在下面表1中列出。
表1-代表化合物
II.定義本文所列化合物包括同位素標(biāo)記化合物，這些同位素化合物與式(I)所舉化合物相對應(yīng)，但實際上有一個或更多的原子被具有不同于天然存在的通常的原子量或質(zhì)量數(shù)的原子所替代?？梢氡景l(fā)明化合物的同位素的例子包括氫、碳、氮、氧、氟和氯的同位素，例如分別為2H、3H、13C、14C、15N、18O、17O、35S、18F、36Cl。含有前述同位素和/或其它原子的同位素的本文所列的化合物、其前藥以及所述化合物或前藥藥學(xué)上可接受的鹽，都在本發(fā)明的范圍內(nèi)。一些本發(fā)明的同位素標(biāo)記化合物，例如引入了放射性同位素如3H和14C的那些化合物在藥物和/或基體組織分布試驗中是有用的。3H和14C因其易于制備和檢測而被優(yōu)選。此外，以重同位素如氘，即2H，進(jìn)行置換，可以提供一些緣自更高的代謝穩(wěn)定性的治療優(yōu)勢，例如延長體內(nèi)半衰期或減少所需劑量，從而在一些情況下被優(yōu)選。本文的同位素標(biāo)記化合物及其前藥可基本按照下面的反應(yīng)流程圖和/或?qū)嵤├_的步驟，通過用容易得到的同位素示蹤試劑替代非同位素示蹤試劑進(jìn)行制備。
本文的一些化合物具有不對稱碳原子，因此可以對映體或非對映體存在。非對映混合物可以根據(jù)其物理和化學(xué)上的差異通過熟知的方法分離為各自的非對映體，例如通過色譜法和/或分級結(jié)晶。對映體的分離可通過與適宜的光學(xué)活性化合物(例如醇類)反應(yīng)將對映混合物轉(zhuǎn)換為非對映混合物，分離非對映體并將非對映個體轉(zhuǎn)換(例如水解)為相應(yīng)的純的對映體。對映體還可利用不對稱試劑合成，例如制備多球殼菌素的α烷基氨基酸主核(head group)及其類似物(例如Seebach，D等，Helv.Chim.Acta，701194-1216(1987))；Hale，JJ等，Bio-org.Med.Chem.Lett，124803-07(2004))；Kobayashi，S等，J.Am.Chem.Soc，120908-19(1998))?？蛇x地，實現(xiàn)這樣的合成的一種容易的途徑是運(yùn)用來自天然產(chǎn)物的手性合成纖維的對映中心的手性合成，例如，由右旋甘露糖合成多球殼菌素(Oishi，T等，ChemicalCommun.1932-33(2001))；和其中涉及多球殼菌素合成的文獻(xiàn))和由分離的天然多球殼菌素合成多球殼菌素類似物(Chen，JK等.ChemBiol.6，221-35(1999))；Fujita，T等.J.Med.Chem.39，4451-59(1996))。另外，使用酶(游離或被承載的)優(yōu)選地修飾一個對映中心從而使得對映體可以分離或互變是本領(lǐng)域熟知的(例如Wang，Y.-F等.(1988).J.Am.Chem.Soc.110，7200-5)并在藥物制備中具有極大的用處。所有這些異構(gòu)體，包括非對映體、對映體及其混合物都視為本發(fā)明的一部分。
本領(lǐng)域技術(shù)人員將會理解的是本文的一些化合物可以幾種互變異構(gòu)形式存在。所有這些互變異構(gòu)形式都視為被發(fā)明的一部分。此外，例如本文中任何化合物的所有烯醇-酮形式都包含在本發(fā)明中。
本發(fā)明的一些化合物是酸性的并可與藥學(xué)上可接受的陽離子形成鹽。本發(fā)明的一些化合物可以是堿性的，并相應(yīng)地可與藥學(xué)上可接受的陰離子形成鹽。所有這些鹽，包括二鹽都在本發(fā)明的范圍內(nèi)，并可通過慣用方法制備。例如，鹽可以通過簡單地將酸性物質(zhì)與堿性物質(zhì)在水性、非水性或部分水性介質(zhì)中接觸而制備。鹽可通過過濾、以非溶劑沉淀然后過濾、蒸發(fā)溶劑或在水性溶液的情況下冷凍干燥酌情回收。
另外，本文的化合物包括其代謝物、水合物或溶劑化物，所有這些都包含在本發(fā)明范圍內(nèi)。
術(shù)語“取代的”指以任何化學(xué)上可行的取代基在任何碳原子或雜原子上取代。代表性的取代包括以鹵素取代，或以任何含雜原子的基團(tuán)，例如烷氧基、磷?；?、巰基等取代。
術(shù)語“烷基”指直鏈、支鏈或環(huán)狀烴類。代表性的這樣的烷基(假定指定長度包括具體例子)是甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、仲丁基、叔丁基、異戊基、新戊基、叔戊基、1-甲基丁基、2-甲基丁基、3-甲基丁基、己基、異己基、庚基和辛基。術(shù)語“低級烷基”指包含C1-C20的上述定義的烷基。取代的烷基指如上所述被取代的的烷基，例如鹵代烷基，如CF3、CHF2、CH2F等。
術(shù)語“芳基”指任何包含C3-C20的芳族基。芳基還包括稠環(huán)系，例如5-5、5-6和6-6環(huán)系。代表性的芳基包括苯基、聯(lián)苯基、蒽基、降冰片基及其它。芳基可根據(jù)前面的定義被取代。
術(shù)語“雜芳基”指芳環(huán)中包含至少一個雜原子的任何芳基。雜芳基還包括稠環(huán)系，例如5-5、5-6和6-6環(huán)系。代表性的雜芳基包括咪唑、噻唑、噁唑、苯基、吡啶基、嘧啶基、咪唑基、苯并咪唑基、噻唑基、噁唑基、異噁唑基、苯并噻唑基或苯并噁唑基。雜芳基可根據(jù)前面的定義被取代。
術(shù)語“芳烷基”或“芳基烷基”指包含上面定義的烷基的芳基。芳烷基或芳基烷基可能是來自芳基或烷基部分的基團(tuán)。
術(shù)語“烷氧基”指以氧原子相連的烷基。代表性的烷氧基(假定指定長度包括具體例子)是甲氧基、乙氧基、丙氧基、異丙氧基、丁氧基、異丁氧基、叔丁氧基、戊氧基、異戊氧基、新戊氧基、叔戊氧基、己氧基、異己氧基、庚氧基和辛氧基。烷氧基可根據(jù)前面的定義被取代。
術(shù)語“烷氧基烷基”指包含前面定義的烷基的烷氧基。烷氧基烷基可根據(jù)前面的定義被取代。
術(shù)語“鹵素”指氯、溴、碘或氟。
術(shù)語“調(diào)節(jié)劑”指對目標(biāo)有直接或間接作用的分子。這種分子包括但不限于激動劑、拮抗劑或其它。
術(shù)語“激動劑”指提高另一種分子的活性或受體部位活性的一種分子，如一種化合物、一種藥劑、一種酶激活劑或一種激素。
術(shù)語“拮抗劑”指減少或抑制另一種分子的活性或受體部位的活性的一種分子，如一種化合物、一種藥劑、一種酶抑制劑或一種激素。
術(shù)語“有效量”或“治療有效量”指足夠量的試劑以提供預(yù)期的生物學(xué)效果。該效果可以是減少和/或減輕征兆、癥狀或疾病的誘因，或任何其它期望的生物系統(tǒng)的變化。例如，用于治療的“有效量”是包含本文所公開的化合物的組合物能夠在臨床上顯著減輕病癥的量。任意個體的適當(dāng)?shù)摹坝行Я俊笨捎杀绢I(lǐng)域技術(shù)人員通過常規(guī)試驗確定。
本文所用的動詞“治療(treat)”或名詞“治療(treatment)”是可交替使用的，并意味著延緩疾病的發(fā)展和/或降低這一癥狀可能或預(yù)期出現(xiàn)的嚴(yán)重性。該術(shù)語進(jìn)而包括改善現(xiàn)有的病癥，預(yù)防其它的癥狀，及改善或預(yù)防原發(fā)性代謝導(dǎo)致的癥狀。
“藥學(xué)上可接受的”或“藥理學(xué)上可接受的”指不期望為非生物學(xué)的材料，也即是說，用于給藥材料不會引起任何不希望的生物學(xué)效果，也不會與在組合物中包含的任何成分以有害方式相互作用。
III.化合物的制備本文提供的化合物可通過本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的合成方法制備?？梢圆捎玫拇硇灾苽浞椒ǖ牡湫蛥⒖嘉墨I(xiàn)包括Kiuchi等.J.Med.Chem，432946-61(2000)；Seidel G等，J.Org.Chem，693950-52(2004))；Clemens J.J等，Bioorg.Med.Chem.Lett，144903-06(2004)；Durand，P等，Synthesis，5056(2000)；Hale等，Bioorg.Med.Chem.Lett.，143351-55(2004)；Seebach，D.，等，HeIv.Chim.Acta.，701194-1216(1987))；Oishi，T，等(2001)，Chem.Commun.1932-3；Wang，Y.-F.，等，J.Am.Chem.Soc.110，7200-05(1988))；Pipik，B，等，Synth.Commun.34，1863-70(2004))；所有文獻(xiàn)的公開內(nèi)容在此引入作為參考。
“Comprehensive Organic Transformations”2ndEdition，Larock，RC，Wiley，New York，1999和“Protective Groups in Organic Synthesis”，Greene T and Wuts PGM，Edition 3，Wiley，New York，1999中提供了通常合成方法尤其是酯的合成方法。
Kiuchi等(Kiuchi M，et al，J.Med.Chem.，432946-61(2000))討論了化合物2的合成步驟。合成該化合物的代表性的方法包括其中所報道的合成前體。用于由烷基鹵(或從相應(yīng)的羥基或醛基結(jié)構(gòu)轉(zhuǎn)化為烷基鹵)制備Cα-取代的絲氨酸基團(tuán)的通常步驟(方案1)可廣泛用于制備本發(fā)明的化合物。下列示出的合成方案是代表性的制備本化合物的方法。
下面方案1示出了Kiuchi等報道的制備化合物2的制備路線。
方案1方案2闡明了制備具有更高水溶性的類似物的相似的合成步驟。
方案2在下面的方案3中，包含兩個羥基基團(tuán)α和β連到主核的多球殼菌素的類似物，可由天然的多球殼菌素制備，采用Chen，JK等(1999)所報道方法的變通方法。下面所示的是一種示例性的合成步驟，通過采用Chen等報道的起始材料與碘烷基化合物發(fā)生Witting型反應(yīng)得到一定范圍的在R’具有多種官能團(tuán)的類似物，。例如，R’可以是烷基、鹵烷基、芳基、芳烷基和其它。方案3是手性制備，且相應(yīng)的對映體可以運(yùn)用該步驟通過先保護(hù)伯OH和NH/CO2H官能團(tuán)，然后仲OH基上進(jìn)行化學(xué)轉(zhuǎn)換來制備。代表性的化合物13、17、18和19通過下面的步驟容易由相應(yīng)的碘烷基化合物制備。
方案3在絲氨酸主核的α位有單羥基官能團(tuán)的化合物可通過下面方案4的合成方法制備?？蛇\(yùn)用相似的反應(yīng)劑來進(jìn)行這些反應(yīng)步驟，更高還是更低的收率取決于實際使用的物質(zhì)。代表性的化合物14、19和20通過方案4容易制得。
方案4類似的，在絲氨酸類主核的β位上有單羥基官能團(tuán)的化合物(例如化合物20)可以通過根據(jù)方案5的路線，由相應(yīng)的易制得的α鹵代酮或α羥基酮起始進(jìn)行制備。
方案5IV.藥物組合物本文所列的藥物組合物包括本文提供的化合物和藥學(xué)上可接受的載體。
A.制劑包含本發(fā)明化合物的藥學(xué)可用的組合物可通過熟知的方法配制，如通過混合藥學(xué)上可接受的載體進(jìn)行配制。這樣的載體和方法的例子可在Remington’s Pharmaceutical Sciences中找到。為了制得適于有效給藥的藥學(xué)上可接受的組合物，這樣的組合物將包含有效量的本發(fā)明化合物，如，前藥或活性成分(例如酯或前藥相應(yīng)的酸)。
本發(fā)明化合物適于給藥的劑型包括局部給藥、經(jīng)皮給藥、口服給藥、系統(tǒng)給藥和腸道外給藥的藥物劑型。包含本發(fā)明化合物的組合物可以多種慣用的給藥載體的治療劑型給藥。例如，化合物或調(diào)節(jié)劑可以口服劑型給藥，如片劑、膠囊(各自包括緩釋和持久釋放劑型)、丸劑、粉劑、顆粒劑、酏劑、酊劑、溶液、懸浮液、糖漿和乳劑，或透皮傳送或注射。同樣，也可以在靜脈內(nèi)(丸劑和浸劑都是)、腹腔內(nèi)、皮下、局部以或不以包裹型、透皮或肌注形式給藥，所有運(yùn)用的形式都為藥學(xué)領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知?；衔锟赏ㄟ^多種機(jī)制輸送，包括但不限于經(jīng)皮輸送或通過針或無針方式注射。
B.劑量實施方案包括包含有效量化合物的藥物組合物。本文公開的有效劑量的化合物可通過例行測試來確定，以獲得最佳的絲氨酸棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶抑制效果而將任何潛在的毒性最小化。
本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的是，有效量可通過例行測試來確定并根據(jù)例如個體的癥狀、體重、性別、年齡、患者的體格情況、治療癥狀的嚴(yán)重性、給藥途徑、患者的腎和肝功能以及所用的具體化合物等多種因素的變化而變化。普通醫(yī)生或獸醫(yī)能夠容易地確定和規(guī)定用于預(yù)防、對抗或阻止癥狀發(fā)展的所需藥物的有效量。達(dá)到既有效果又沒有毒性的藥物濃度的最高精確性需要基于對對靶向位點的藥物利用度動力學(xué)的方法。這包括對藥物分配、平衡、消除的考慮。
有效果但無毒性這樣數(shù)量的所需化合物可用作絲氨酸棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶調(diào)節(jié)劑。用于給藥的本發(fā)明化合物的劑量為每人每天0.01到1000mg。對口服給藥，組合物優(yōu)選為刻痕或未刻痕片劑，包含0.01、0.05、0.1、0.5、1.0、2.5、5.0、10.0、15.0、25.0和50.0毫克的活性成分用于狀調(diào)節(jié)治療患者的劑量。劑量還可以根據(jù)體重變化，例如，從每天大約0.0001mg/kg體重到大約100mg/kg體重，優(yōu)選從從每天大約0.001mg/kg體重到大約10mg/kg體重。
化合物可以單一日劑量給藥，或以每日劑量的總量可分為2、3或4次劑量在一日內(nèi)給藥。為了以經(jīng)皮輸送系統(tǒng)的形式給藥，給藥期間應(yīng)持續(xù)給藥而非間歇性給藥。
當(dāng)與其它治療劑聯(lián)用時可調(diào)整本發(fā)明化合物的劑量。這些不同藥劑的劑量可以是獨(dú)立地最優(yōu)化，也可以聯(lián)合達(dá)到協(xié)同效果，由此較之單獨(dú)使用更能減輕病狀。另外，其它藥劑的共同給藥或相繼給藥也是可行的。
C.衍生物本文所列的化合物的實施方案包括“化學(xué)衍生物”?；瘜W(xué)衍生物包括本文的化合物和另外的能夠改善化合物的溶解度、半衰期、吸收性等的部分?；瘜W(xué)衍生物還可以包括削弱不希望的副作用或減少毒性的部分。這樣的基團(tuán)例子在多篇文獻(xiàn)中有描述，例如Remington′sPharmaceutical Sciences，是本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的。
D.載體和賦型劑化合物可以同合適的藥物稀釋劑、賦型劑或載體(在此統(tǒng)一稱為“載體”材料)以混合物的形式給藥，根據(jù)將采用的給藥形式，即口服片劑、膠囊、酏劑、糖漿等，進(jìn)行合理選擇，并與慣用的制藥操作相一致。
對于片劑或膠囊的給藥形式，活性藥物成分可與口服的無毒藥學(xué)可接受惰性載體如乙醇、甘油、水等組合。此外，如果需要，還可向混合物中加入合適的粘合劑、潤滑劑、崩解劑和著色劑。適當(dāng)?shù)恼澈蟿┌ǖ幌抻诘矸?、明膠、天然糖例如葡萄糖或β乳糖、玉米甜味劑、天然和合成的樹膠例如阿拉伯膠、黃蓍膠或海藻酸鈉、羥甲基纖維素、聚乙二醇、蠟等。劑型中所用的潤滑劑包括但不限于油酸鈉、硬脂酸鈉、硬脂酸鎂、苯甲酸鈉、乙酸鈉、氯化鈉等。崩解劑包括但不限于淀粉、甲基纖維素、瓊脂、皂土、黃原膠等。
對于液體劑型，活性藥物成分可與合適的增加香味的懸浮劑或分散劑例如合成和天然的樹膠，例如黃蓍膠、阿拉伯膠、甲基纖維素等混合。其它可用的分散劑包括甘油等。
對于胃腸外給藥，可用無菌懸浮液和溶液。當(dāng)需要靜脈內(nèi)給藥時可以采用通常包含適宜防腐劑的等滲制劑。
包含本發(fā)明化合物的局部給藥制劑可與本領(lǐng)域熟知的多種載體材料混合，例如醇類、蘆薈凝膠(aloe vera gel)、尿囊素、甘油、維生素A和E油劑、礦物油、PPG2十四烷基丙酸鹽等，以形成例如醇溶液、局部凈化劑、清潔霜、皮膚凝膠、皮膚洗液和乳劑或凝膠形式的洗發(fā)劑。
化合物還可以脂質(zhì)體傳送系統(tǒng)給藥，例如單層小泡囊、單層大泡囊體和多層泡囊。脂質(zhì)體可由多種磷脂組成，例如膽固醇、十八烷胺或卵磷脂。
本文化合物還可通過運(yùn)用單克隆抗體作為單獨(dú)的載體來輸送，化合物分子偶聯(lián)到載體上?；衔锟膳c作為可靶向藥物載體的可溶性聚合物偶聯(lián)。這樣的聚合物包括聚乙烯-吡咯烷酮、吡喃共聚物、聚羥丙基甲基丙烯酸-酰胺苯酚、聚羥基-乙基天冬酰胺苯酚或以棕櫚酰殘基取代的聚乙基-烯氧基聚賴氨酸(eneoxidepolylysine)。另外，化合物可與用于藥物控釋的可生物降解聚合物偶聯(lián)，例如聚乳酸、聚ε-己內(nèi)酯、聚羥基丁酸、聚原酸酯、聚縮醛、聚二羥基-吡喃、聚氰基丙烯酸酯、水凝膠的交聯(lián)或兩親性嵌段共聚物，以及本領(lǐng)域所熟知的其它合適的聚合物。
對口服給藥，化合物可以膠囊、片劑或丸劑形式給藥。膠囊、片劑或丸劑包含適當(dāng)?shù)妮d體，例如淀粉、滑石、硬脂酸鎂或磷酸二鈣。
單位劑型通過將化合物與適當(dāng)?shù)募?xì)末狀惰性成分，包括稀釋劑、填料、崩解劑和/或粘合劑緊密混合而制備得到均質(zhì)混合物。惰性成分是不會與化合物發(fā)生不利化學(xué)反應(yīng)的物質(zhì)。適當(dāng)?shù)亩栊猿煞职ǖ矸?、乳糖、滑石、硬脂酸鎂、植物樹膠和油劑等。化合物通過研磨、攪拌、碾磨或滾動與惰性載體緊密混合。
注射劑型包含與適當(dāng)?shù)亩栊砸后w載體混合的本化合物?？山邮艿囊后w載體包括植物油例如花生油、棉籽油、芝麻油等以及有機(jī)溶劑例如solketal、甘油縮甲醛等?？蛇x的，水性腸道外劑型也是可用的。植物油是優(yōu)選的液體載體。劑型通過將化合物溶解或懸浮在液體載體中而制備。
化合物的局部應(yīng)用可通過利用例如液體浸透或包含該化合物的洗發(fā)劑來實現(xiàn)，或以作為水溶液或懸浮液的調(diào)節(jié)劑應(yīng)用。這些劑型可包含懸浮劑例如皂土和任選的消泡劑。
E.給藥模式影響劑量的其它因素是給藥的方式。包含本發(fā)明化合物的藥物組合物可以多種途徑提供給個體，這些途徑包括但不限于皮下、肌肉、靜脈內(nèi)、局部、透皮、口服和任何其它的腸道外或非腸道途徑。另外，化合物可利用適當(dāng)?shù)谋莾?nèi)載體在鼻內(nèi)局部給藥，或采用本領(lǐng)域普通技術(shù)人員所熟知的透皮貼片形式通過透皮途徑給藥。
化合物或調(diào)節(jié)劑可以可選地通過注射由活性成分溶于惰性液體載體所組成的制劑腸道外給藥。注射可以是通過針頭或無針方式進(jìn)行肌注、管腔內(nèi)、氣管內(nèi)或皮下注射。
F.藥學(xué)可接受的鹽實施方案包括為游離堿或藥學(xué)上可接受的鹽形式的本發(fā)明化合物。代表性的藥學(xué)上可接受的鹽包括與溴化氫、碘化氫、鹽酸、高氯酸、硫酸、馬來酸、反丁烯二酸、蘋果酸、酒石酸、檸檬酸、安息香酸、扁桃酸、甲磺酸、羥乙基磺酸、苯磺酸、草酸、撲酸、2-萘磺酸、對甲苯磺酸、環(huán)己磺酸和糖合物形成的鹽。離子交換、置換或中和步驟可用于形成所需鹽。
G聯(lián)用實施方案包括本發(fā)明化合物與其它活性藥劑的聯(lián)用。代表性的可用的活性藥劑包括胰島素、胰島素類似物、腸胰島素、腸胰島素類似物、胰高血糖素樣肽、胰高血糖素樣肽類似物、胰高血糖素樣肽的抑制劑、胰高血糖素樣肽的抑制劑類似物、PACAP和VIP類似物、磺酰脲類、縮二胍類、α-葡萄糖苷酶抑制劑和各種等級的用于過氧化酶增殖體-激活受體(PPARs)的配體。
對于采用多于一種活性藥劑的聯(lián)合治療，其中活性藥劑是各自單獨(dú)的劑型，活性藥劑可同時給藥，或各自在不同的時間分別給藥。
當(dāng)與其它治療劑聯(lián)用時調(diào)整本發(fā)明化合物的劑量。這些不同藥劑的劑量可以獨(dú)立地最佳化，并聯(lián)合達(dá)到協(xié)同效果，由此較之單獨(dú)使用更能減輕病狀。另外，其它藥劑的共同給藥或相繼給藥也是可行的。
H.藥盒(Kits)在一個優(yōu)選的實施方案中，本化合物被包裝在藥盒中。這樣的藥盒的一個例子是所謂的泡殼包裝(blister pack)。泡殼包裝是包裝業(yè)中為人熟知的并廣泛用于包裝藥物單位劑量(片劑、膠囊等)。泡殼包裝通常由用薄片狀優(yōu)選透明的塑料材料覆蓋在一片相對堅硬的材料板上構(gòu)成。在包裝過程中在塑料薄片中形成凹陷。凹陷具有待包裝的片劑或膠囊的尺寸和形狀。然后，將片劑或膠囊置于凹陷中并將相對堅硬材料的板片在凹陷形成的相反方向的薄片一面密封。這樣片劑或膠囊被密封在塑料薄片和板片形成的凹陷中。優(yōu)選的板片強(qiáng)度為片劑或膠囊可通過手工在凹陷處施壓從泡殼包裝中取出，在板片上形成開口。片劑或膠囊從開口處取出。
理想的是在藥盒上提供記憶提示，例如，在片劑或膠囊附近以指定攝取數(shù)量的數(shù)字形式提供。另一個這樣的記憶提示的例子是印上日期，例如“第一周、星期一、星期二……等……第二周、星期一、星期二……”等。還可以存在其它多種記憶提示?！皢稳談┝俊笨梢允窃谀程旆靡黄幤蚰z囊或幾個藥丸或膠囊。此外，式I化合物的單日劑量可由一片藥片或膠囊組成，而第二種化合物的單日劑量可由數(shù)片藥片或膠囊組成，反之亦然。記憶提示應(yīng)反映這些。
在本發(fā)明的另一個具體的實施方案中，提供用來分配每人每日應(yīng)該服用劑量的分配器。優(yōu)選的，該分配器備有記憶提示，以進(jìn)一步有助于提高給藥依從性。這樣的記憶提示的一個例子是機(jī)械計數(shù)器，其能指出已經(jīng)分配的每日劑量。另一個這樣的記憶提示的例子是電力微芯片記憶器與液晶屏的聯(lián)合，或與語音提示信號聯(lián)合，例如讀出上次服用的日期和/或提醒下次服用的日期。
V.治療方法本發(fā)明的一個重要特征涉及在炎癥過程中神經(jīng)酰胺作為信號分子。除了對涉及T2D的β細(xì)胞凋亡的影響，從頭合成的神經(jīng)酰胺可能在人體健康中具有更廣泛的凋亡效果。在為了改善胰島在體外和移植后的存活率的移植分離培養(yǎng)期間，通過影響神經(jīng)酰胺的濃度可導(dǎo)致對人類胰島或來自其它商業(yè)或重要的醫(yī)藥來源的胰島的新療法培養(yǎng)。SPT抑制劑可加入正在使用或已接受的治療方案中以單獨(dú)和/或協(xié)同方式抑制胰島和β細(xì)胞因凋亡和/或壞死導(dǎo)致的損失。
有待改善的這樣的治療方案記載在Beattie等2000(上述以及其中的文獻(xiàn))和描述“″Edmonton Protocol″的出版物中(Diabetes.2001；50710-9.Clinical outcomes and insulin secretion after islettransplantation with the Edmonton protocol.Ryan EA，Lakey JR，RajotteRV，Korbutt GS，Kin T，Imes S，Rabinovitch A，Elliott JF，Bigam D，Kneteman NM，Warnock GL，Larsen I，Shapiro AM，以及其中的文獻(xiàn))。這些治療方案涉及加入海藻糖防凍劑和去除Arg(Diabetes.46519-23(1997)Trehalosea cryoprotectant that enhances recovery and preservesfunction of human pancreatic islets after long-term storage.Beattie GM，Crowe JH，Lopez AD，Cirul V，Ricordi C，Hayek A)、胎牛血清、鐵傳遞蛋白、硒(Cell Tissue Bank.，4(2/4)85-93(2003).A comparatiVeevaluation of culture conditions for short-term maintenance(＜24hr)ofhuman islets isolated using the Edmonton protocol.Matsumoto S，Goel S，Qualley S，Strong DM，Reems JA.)，或多種半胱天冬蛋白酶抑制劑如Z-VAD-FMK和B-D-FMK(Biotechnol.Bioeng.，81(3)329-40(2003).Study of caspase inhibitors for limiting death in mammalian cellculture.Sauerwald T.M.，Oyler G.A.，Betenbaugh MJ.；Nephron.Exp.Nephrol.，96(2)e39-51(2004).Inhibitors directed towards caspase-1and-3 are less effective than pan caspase inhibition in preventing renalproximal tubular cell apoptosis.Yang B，E1 Nahas AM，F(xiàn)isher M，Wagner B，Huang L，Storie I，Barnett D，Barratt J，Smith AC，JohnsonTS.)，煙酰胺、丁酸鈉(Transplantation.，68(11)1674-83(1999)Differentiation and maturation of porcinefe tal islet cells in vitro andafter transplantation.Otonkoski T，Ustinov J，Rasilainen S，Kallio E，Korsgren O，Hayry P.)，caerulein，IBMX(Pancreas.6625-30(1991).Survival and B-cell function of neonatal pig pancreatic islet-like cellclusters in an extracellular matrix.Ohgawara H，Mochizuki N，Karibe S，Omori Y.)，IGF-II(J Endocrinol.61_:357-64(1999).Pancreatic islet cellsurvival following islet isolationthe role of cellular interactions in thepancreas.Ilieva A，Yuan S，Wang RN，Agapitos D，Hill DJ，RosenbergL.)，等。
在上面所列舉的治療方案中加入本發(fā)明化合物如SPT抑制劑，對神經(jīng)酰胺從頭合成的阻斷，顯示出對細(xì)胞存活的協(xié)同改善。在1型糖尿病中胰腺胰島的損失也有導(dǎo)致細(xì)胞凋亡和壞死的炎癥跡象。
本發(fā)明的實施方案包括治療發(fā)展的1型糖尿病和/或移植之后胰島的進(jìn)一步損失(人或異生物胰島細(xì)胞移植)的方法，該方法包括在現(xiàn)有的治療方案中加入本發(fā)明化合物例如SPT抑制劑的方法，對于現(xiàn)有的治療方案(IUBMB Life.2004 JuI，56387-94.Protecting pancreaticbeta-cells.Pileggi A，F(xiàn)enjves ES，Klein D，Ricordi C，Pastori RL.)。在本發(fā)明方法中使用的異生物細(xì)胞包括但不限于豬、牛、鼠類和其它哺乳動物細(xì)胞類型。對神經(jīng)酰胺從頭合成的抑制在單獨(dú)使用或作為現(xiàn)有治療方案的另外輔助中均顯示了有益效果。這樣的治療可在探測到β細(xì)胞量或功能損失后立刻開始，并單獨(dú)使用或與免疫抑制療法(例如環(huán)孢菌素、霉酚酸試劑、FTY720等)聯(lián)合使用。這是保護(hù)β細(xì)胞免遭大量的凋亡和壞死的基本機(jī)制。
在本發(fā)明其它的實施方案中，本發(fā)明化合物用于阻止伴隨脊椎傷損的神經(jīng)元細(xì)胞凋亡，和例如在阿爾茨海默氏疾病或中風(fēng)中的CNS神經(jīng)元損失。這種運(yùn)用SPT抑制劑的療法可以有效地單獨(dú)使用或與其它的抗氧化劑、半胱天冬蛋白酶抑制劑聯(lián)合使用(Neurochem Res.，28143-52(2003).Protection of mature oligodendrocytes by inhibitors ofcaspases and calpains.Benjamins JA，Nedelkoska L，George EB)和/或本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的其它中風(fēng)后的保護(hù)治療。
可對處于多種疾病治療中的患者給藥本文所列的化合物和組合物。優(yōu)選的，這里所列的治療方法是針對有與絲氨酸棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶(SPT)活性或機(jī)能亢奮相關(guān)失調(diào)或癥狀的患者(即人類或其它哺乳動物)。相應(yīng)的，提供了治療胰島素抵抗和心肌病的治療方法。治療心肌病有效的化合物可阻礙心肌病的發(fā)展。本發(fā)明化合物還可用于治療惡病質(zhì)和膿毒病。
優(yōu)選的用于治療的化合物具有理想的生物利用率特征。代表性的化合物是酯，其作為前藥具有改善的溶解性、持續(xù)作用和體內(nèi)效應(yīng)。優(yōu)選的用于治療的化合物顯示了改善的水溶性和低的透過血腦屏障能力，后者會產(chǎn)生副作用，例如改變攝食行為。
將藥物組合物以充足的量施加給個體以治療或診斷絲氨酸棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶活性調(diào)控導(dǎo)致的失調(diào)。為人們所熟知的或懷疑可被絲氨酸棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶調(diào)節(jié)的代表性疾病或癥狀，包括但不限于胰島素抵抗、2型糖尿病及其并發(fā)癥、肥胖、預(yù)血栓形成癥狀、心肌梗死、充血性心力衰竭、高血壓、血脂異常和其它普通的“代謝綜合征”和“X綜合征”的表現(xiàn)。有治療效果的化合物能有效專一地調(diào)節(jié)絲氨酸棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶。
可以理解的是上述描述是用于示例性說明，并不限制本發(fā)明的范圍。本發(fā)明的范圍不應(yīng)僅參考上述描述確定，而應(yīng)參照所附的包含所有等同方式的權(quán)利要求確定。
實施例為了進(jìn)一步對本發(fā)明進(jìn)行闡述，列出下面的實施例。這些實施例不對本發(fā)明進(jìn)行限制，而只是闡述本發(fā)明的代表性的方法和化合物。熟悉有機(jī)合成和絲氨酸棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶相關(guān)失調(diào)治療的技術(shù)人員可能找到其它的方法來實踐本發(fā)明。當(dāng)然這些方法都認(rèn)為在本發(fā)明的范圍之內(nèi)。
實施例1化合物2的甲酯的合成在圓底燒瓶中，500mL MeOH冷卻到-5℃并攪拌滴入0.11molSOCl2。立即加入粉末狀的化合物2(0.1mol)并冷卻攪拌。溶液在兩小時內(nèi)緩慢加熱到室溫。蒸掉過量的MeOH，得到高收率的所需化合物(R1＝Me)的HCl鹽，其為白色粉末。以適當(dāng)?shù)娜軇?MeOH/Et2O)重結(jié)晶得到高純度的所需化合物，其為白色蠟狀固體。通過類似的方法可制備該化合物的其它酯形式?；衔?的合成記載在Kiuchi等.2000(supra)。
實施例2化合物2的乙酯的合成在圓底燒瓶中，以0.1mol溶于EtOAc的HCl處理500mL EtOH，并立即加入粉末狀的化合物2(0.1mol)并冷卻攪拌。將溶液加熱回流并持續(xù)加熱24小時。蒸掉過量的EtOH，得到高收率的所需化合物(R1＝Me)的HCl鹽，其為白色粉末。以適當(dāng)?shù)娜軇?EtOH/Et2O)重結(jié)晶得到高純度的所需化合物，其為無色油狀并緩慢形成蠟狀固體。通過類似的方法可制備該化合物的其它酯形式?？蛇x的，加入等當(dāng)量的溶于EtOH的HCl和H2SO4并回流2天可得高收率的產(chǎn)品。
實施例3化合物23的合成化合物23采用方案2的途徑制備，起始物是4-(3-羥基丙基)苯酚(Aldrich Chemical Company)。方案2報道了所得收率。所得化合物23為近白色固體并具有較寬的熔點。
(M-1)分子離子為322.3 a.m.u.1H NMR(CD3OD)δ0.95(3H，tr)，1.37(4H，m)，1.45(2H，m)，1.75(6H，m)，2.55(2H，m)，3.7(2H，dd)，3.9(2H，t)，6.9(4H，dd)。
實施例4化合物24的合成化合物24采用方案2的途徑制備，起始物是4-(3-羥基丁基)苯酚。所得化合物24為近白色固體并具有較寬的熔點。
(M-1)分子離子為336.3 a.m.u1H NMR(D6-DMSO)δ0.93(3H，t)，1.4(12H，寬m)，2.45(2H，d)，3.5(2H，q)，3.9(2H，t)，6.9(4H，dd).
實施例5β細(xì)胞凋亡試驗大鼠胰腺胰島根據(jù)Shimabukuro等，J.Biol.Chem.，27332487-90(1998)進(jìn)行生物學(xué)試驗，并進(jìn)行了某些變通。糖尿病型肥胖Zucker鼠(ZuckerDiabetic Fatty rats)以腹腔內(nèi)注射本發(fā)明化合物處理兩周。分離胰腺胰島并通過電泳評估細(xì)胞凋亡程度。與對照鼠相比，處理過的鼠明顯受到了保護(hù)。該保護(hù)證實了通過SPT途徑的神經(jīng)酰胺從頭合成被特異性抑制，從而保護(hù)了β細(xì)胞免于凋亡。
人胰腺胰島根據(jù)Maedler，K，等(2003).Diabetes 52，726-33進(jìn)行用于測量β細(xì)胞凋亡的另一種試驗分析。在該試驗中，培養(yǎng)用更高的棕櫚酸或更高的葡萄糖培養(yǎng)導(dǎo)致細(xì)胞凋亡增加，而神經(jīng)酰胺合成酶抑制劑的保護(hù)效應(yīng)顯示了有益效果。該試驗結(jié)果證實了本化合物對于在酶通道更早的不同位點抑制神經(jīng)酰胺從頭合成具有有益效果，例如抑制SPT。
胰島分離和培養(yǎng)胰島從供體器官的胰腺分離出，如Oberholzer J，等Transplantation 691115-23(2000)中所記載。由雙硫腙著色劑測定的胰島純度＞95％。當(dāng)由常規(guī)分離不能達(dá)到這一純度時，胰島由人工挑取。供體通常是沒有糖尿病或代謝失調(diào)病史的仍有心跳的尸體器官供體。
如Maedler等(2003)所報道，為了長期的體外試驗，胰島培養(yǎng)在源于牛角膜內(nèi)皮細(xì)胞(Novamed、耶路撒冷、以色列)的細(xì)胞外基質(zhì)覆蓋的平皿上，而且細(xì)胞粘附于平皿上并平鋪，以確保其功能完整性。4天后培養(yǎng)中由管細(xì)胞(ductal cell)導(dǎo)致的污染估計在5到15％，但發(fā)現(xiàn)幾乎所有的管細(xì)胞都在胰島周邊且不與β細(xì)胞相互交錯。胰島在包含100單位/ml青霉素、100μg/ml鏈霉素和10％FCS(Gibco，Gaithersburg，MD)的CMRL培養(yǎng)培養(yǎng)基中培養(yǎng)，此后稱之為培養(yǎng)基。
在培養(yǎng)兩天后，當(dāng)絕大多數(shù)的胰島附著并平直后，培養(yǎng)基換為包含5.5或33.3mmol/l的有或沒有脂肪酸補(bǔ)充的葡萄糖的培養(yǎng)基(SigmaChemical，St.Louis，MO；棕櫚酸[16:0]，棕櫚油酸[16:1]，油酸[18:1]，或混合脂肪酸[16:0/16:1，16:0/18:1])。脂肪酸在氮?dú)獗Ｗo(hù)下溶于包含11％無脂肪酸的牛血清白蛋白(BSA)σ(希格馬)的培養(yǎng)基中，在37℃下?lián)u動整晚，超聲波處理15分鐘，并無菌過濾(備用液)。對于對照實驗，根據(jù)上面的描述制備不含脂肪酸的牛血清白蛋白脂肪酸。有效的FFA濃度可在由市購試劑盒(Wako chemicals，Neuss，Germany)進(jìn)行無菌過濾后測定。非白蛋白結(jié)合的FFA的計算濃度是采用分段式均衡模型由總的FFA(0.5mmol/l)和白蛋白(0.15mmol/l)的摩爾比計算得到，分段式均衡模型的報道記載于Spector AA，等，Biochemistry，103226-32(1971)中。棕櫚酸、棕櫚油酸和油酸的非結(jié)合濃度分別是0.832、0.575和2.089 micromol/L，最終的濃度是0.5mmol/LFFA。在一些實施方案中，對胰島的培養(yǎng)用或不用15micromol/LC2-神經(jīng)酰胺、15micromol/LC2-二氫神經(jīng)酰胺(Biomol，Plymouth Meeting，PA)、15micromol/L伏馬毒素B1(希格馬)、或濃度為10nmol/L 到 100micromol/L的測試化合物。所有這些先以5mmol/L溶于預(yù)熱到37℃的DMSO(Fluka，Buchs，Switzerland)中。對于對照試驗，胰島單獨(dú)與溶劑接觸(0.3％DMSO)。
細(xì)胞凋亡如Maedler等(2003)所報道，由于DNA降解而斷裂的游離3-OH由末端脫氧核苷轉(zhuǎn)移酶-調(diào)節(jié)的dUTP標(biāo)記終點(TUNEL)技術(shù)(Gavrieli Y，et al，J.Cell Biol.119493-501(1992))測定。胰島培養(yǎng)基用PBS洗滌，以4％的多聚甲醛固化(30分鐘，室溫)，然后以0.5％TritonX-100透化(4分鐘，室溫)，然后是TUNEL試驗，根據(jù)制造商的指導(dǎo)進(jìn)行(In Situ Cell Death Detection Kit，AP；Boehringer Mannheim，Germany)。然后用Tris緩沖生理鹽水沖洗制得物，并以5-溴-4-氯-吲哚磷酸鹽/硝基四唑鎓藍(lán)液體基質(zhì)體系(希格馬)培養(yǎng)。為了對活化的半胱天冬蛋白酶3著色，在固定和透化之后，胰島以兔抗裂解半胱天冬蛋白酶-3抗體(1∶50稀釋，D 175；Cell Signaling，Beverly，MA)在37℃下培養(yǎng)2小時，然后以Cy3-結(jié)合驢抗兔抗體(1∶100稀釋，Jackson ImmunoResearch Laboratories，West Grove，PA)培養(yǎng)(30分鐘，37℃)。然后，如前所述胰島以豚鼠抗胰島素抗體培養(yǎng)，然后用抗生蛋白鏈菌素維生素H過氧化物酶復(fù)合物(酶)測定或以1∶20稀釋的熒光結(jié)合(fluoresceinconjugated)抗豚鼠抗體(Dako)培養(yǎng)30分鐘。TUNEL試驗測定與凋亡和細(xì)胞壞死相關(guān)的DNA斷裂；因此，胰島也用熒光Annexin V探針(Annexin-V-FLUOS staining kit，Boehringer Mannheim)根據(jù)制造商的指導(dǎo)處理。用碘化丙啶和AnnexinV的細(xì)胞雙重染色法使得凋亡細(xì)胞區(qū)別于壞死細(xì)胞。
實施例7抗炎癥應(yīng)用根據(jù)Shinabukuro等的記載殺死糖尿病型肥胖Zucker大鼠獲得胰島。在培養(yǎng)中，這些胰島用有效量的α腫瘤壞死因子處理。從頭合成的神經(jīng)酰胺通過引入氚化的絲氨酸來評估，如實施例8所描述。以有效濃度的本文所列化合物進(jìn)行治療，較之對照組，神經(jīng)酰胺濃度顯著下降。這證明了本化合物在抗炎癥應(yīng)用中的效力和對SPT的特異性抑制。
實施例8絲氨酸棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶活性試驗A根據(jù)Merrill等，Anal.Biochem.，171373-381(1988)報道的方法稍作修改來實施該試驗。
Frozen鼠或其它哺乳動物的肝臟在包含DTT(5mM)、蔗糖(0.25M)和EDTA的pH7.4標(biāo)準(zhǔn)HEPES緩沖系統(tǒng)中勻化。勻漿以30kg旋轉(zhuǎn)0.5小時，去掉上清液。該試驗采用上面的上清液(足夠用于50-150μg蛋白質(zhì))來進(jìn)行，并加入在與勻化緩沖液相似但pH8.3的緩沖液中的50μM吡哆醛、200μM棕櫚酰輔酶A和1mM3H-L-絲氨酸。用CHCl3/CH3OH提取出放射性同位素示蹤的產(chǎn)品，3-酮二氫鞘氨酸，放射性由液體計數(shù)器計算。
對絲氨酸棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶的抑制性通過在脂質(zhì)產(chǎn)品中引入氚標(biāo)記來評估。對該化合物在CTLL-2-細(xì)胞株中活性的進(jìn)一步證實可運(yùn)用Nakamura，S等，J.Biol.Chem.，2711255-57(1996)所描述的試驗來進(jìn)行。
試驗B可選的用于評估對SPT抑制性的試驗，酶存在于普通的培養(yǎng)細(xì)胞中，以CHO或人細(xì)胞株來實施。細(xì)胞用冰冷的磷酸緩沖鹽水(PBS)沖洗三次。總共0.5mL的雜酚皂液(lysis)緩沖液[包含5mM乙二胺四乙酸(EDTA)和5mM二硫蘇糖醇(DTT)的50mM羥乙基哌嗪乙磺酸(pH8.0)]被加入每個培養(yǎng)皿中。用橡膠細(xì)胞刮棒刮下細(xì)胞，并轉(zhuǎn)移到準(zhǔn)備好的試管中。細(xì)胞懸液用超聲波處理3次，每次5秒，間隔為1到2分鐘。細(xì)胞勻漿中的蛋白質(zhì)濃度利用Bradford蛋白試驗試劑盒(Bio-Rad)測量。為了測定SPT活性，將0.1mL的細(xì)胞勻漿加入0.1mL的反應(yīng)緩沖液中[20mM羥乙基哌嗪乙磺酸(pH8.0)，其中包含5mMEDTA，10mMDTT，50μM吡哆醛-5′-磷酸鹽，0.4mM棕櫚酰輔酶A，2mML-絲氨酸，10μCi的[3H]絲氨酸，和測試化合物或標(biāo)準(zhǔn)抑制劑(多球殼菌素)。在37℃搖動培養(yǎng)20分鐘后，以0.5mL包含10mML-絲氨酸的0.5NNH4OH終止反應(yīng)。脂質(zhì)產(chǎn)品利用以下溶劑體系提取3mL的氯仿/甲醇(1∶2)，25μg的鞘氨醇(1mg/ml于乙醇中)作為載液，2mL的氯仿和3.8mL的0.5N NH4OH。在充分混合后，以每分鐘轉(zhuǎn)速2500離心5分鐘從而相分離。吸除水層，下面的氯仿層以4.5mL的水沖洗3次。氯仿層轉(zhuǎn)移到閃爍管中，溶劑在氮?dú)夥罩姓舻簟７派湫杂蒐S6000TA液體計數(shù)器(Beckman)測量。[3H]絲氨酸向溶于氯仿片斷的非特異性轉(zhuǎn)化通過不存在棕櫚酰輔酶A的試驗測量。背景計數(shù)值是100％活性計數(shù)的大約六分之一。
試驗C作為一種選擇，該試驗采用由Smedes(Smedes，F(xiàn).，Analyst1241711-18(1999)所報道的Blye和Dyer脂質(zhì)提取法的非氯化溶劑變通方法，用于評估代表性的化合物。在該方法中，以冰冷的磷酸緩沖鹽水洗細(xì)胞三次，并將0.5mL的雜酚皂液(lysis)緩沖液加入每個培養(yǎng)皿。用橡膠細(xì)胞刮棒刮下細(xì)胞，并轉(zhuǎn)移到準(zhǔn)備好的試管中。細(xì)胞懸液用超聲波處理3次，每次5秒，間隔為1到2分鐘。將0.1mL的細(xì)胞勻漿樣品加入試管中的0.1mL反應(yīng)緩沖液中，其中還包含合適濃度的測試化合物和10μCi的[3H]絲氨酸。在37℃搖動培養(yǎng)反應(yīng)混合物20分鐘后，以包含10mM非標(biāo)記的L-絲氨酸的0.5mL 0.05N NH4OH終止反應(yīng)?？偟闹|(zhì)物質(zhì)通過將試管中的物質(zhì)轉(zhuǎn)移到15ml的包含下列物質(zhì)的離心管中來提取4.5mL的異丙醇/環(huán)己烷(4∶5)，其中包含25μg鞘氨醇(1mg/ml溶于乙醇并稀釋到異丙醇/環(huán)己烷混合液中)作為載液。在充分混合后，加入4mL的0.5N NH4OH。以每分鐘轉(zhuǎn)速2500離心5分鐘，相分離。精確測量的有機(jī)層部分(4.0ml)被加入閃爍管中并伴以1ml水。加入Ultima Gold F(5ml)，旋轉(zhuǎn)該管并靜置分層。[3H]絲氨酸在脂質(zhì)中的放射性以數(shù)目顯示在液體計數(shù)器上。通過將不包含棕櫚酰輔酶A的對照樣品進(jìn)行試驗而得出非特異性數(shù)值。如下表2所示，陽性對照，ISP-1(例如多球殼菌素)顯示出對SPT有效的但非選擇性的抑制性。在該試驗中評估了代表性的化合物12，如表2所示，該化合物在所給劑量顯示出中等活性。
表3提供了代表性化合物23和24以10nM和100nM在本試驗中的測量結(jié)果。
表2

表3


實施例9SPT抑制劑對胰島的保護(hù)根據(jù)Eitel，K等(2002)評估代表化合物對胰島的保護(hù)，所得結(jié)果如表4所列。大鼠胰腺胰島在對照培養(yǎng)基(RPMI1640并添加10％胎兒牛血清、抗生素和葡萄糖中制得8％)或在添加1毫摩爾棕櫚酸鈉(脂肪酸培養(yǎng)基)的培養(yǎng)基中培養(yǎng)3天。兩天后將培養(yǎng)基改為相同組成的培養(yǎng)基，在合適的孔中存在新鮮的抑制劑。用碘化丙啶(PI)給細(xì)胞著色，洗滌，以丙啶著色(作為細(xì)胞的DNA含量測量)的細(xì)胞通過流式細(xì)胞光度術(shù)評估。少于正常數(shù)量的PI著色的細(xì)胞百分比被認(rèn)為是凋亡的細(xì)胞(Eitel，K等(2002))。
在該試驗中，用代表化合物12的處理顯示出對脂肪酸處理細(xì)胞的完全保護(hù)，且較之對照培養(yǎng)基顯示出出人意料的有益效果。
表4

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權(quán)利要求
1.一種化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽，如式(I)所示 其中R1是H或任選取代的低級烷基、芳基、芳烷基或烷氧基烷基；每一個R2獨(dú)立為H、保護(hù)基或-C(＝O)-CHRa-NHRb，其中Ra選自下組烷基、芳基、酰基、酮基、疊氮基、羥基、肼基、氰基、鹵素、酰肼、烯基、炔基、醚、硫醇、硒基、磺?；⑴鹚狨?、硼酸鹽、二氧磷基、膦?；?、膦、雜環(huán)、烯酮、亞胺、醛、酯、硫代酸、羥胺、氨基和其組合；和Rb是H或氨基保護(hù)基；每一個V和Z獨(dú)立為(CRcRd)n、O、NRe、S、Ar、CRcRdAr、OAr、NR4Ar、SAr或Ar，其中每一個Rc和Rd獨(dú)立為H、低級烷基、OH、O-低級烷基，或Rc和Rd一起形成＝O、＝N-OH、＝N-O-低級烷基，或＝N-O-CH2CH2-O-CH3；Re是H、低級烷基或-CH2CH2-O-CH3；和n是1到7；q是0到3；Ar是任選取代芳基或雜芳基；u是0或1；每一個X獨(dú)立為H或鹵素；和m是4到12。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其結(jié)構(gòu)式(II)為 其中L是CH2、CHRf、CRfRg、O、NRh、S、Ar、CH2Ar、CHRfAr、CRfRgAr、OAr、NRhAr、SAr或ArAr，其中Rf是H、低級烷基、OH、O-低級烷基，Rg是H，或Rf和Rg一起形成＝O、＝N-OH、＝N-O-低級烷基，或＝N-O-CH2CH2-O-CH3，和Rh是H、低級烷基或-CH2CH2-O-CH3。
3.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其結(jié)構(gòu)式(III)為
4.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其結(jié)構(gòu)式(IIIA)為 (IIIA).
5.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其結(jié)構(gòu)式(IIIB)為
6.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中Ar為任選取代的苯基、吡啶基、嘧啶基、咪唑基、苯并咪唑基、噻唑基、噁唑基、異噁唑基、苯并噻唑基或苯并噁唑基。
7.根據(jù)權(quán)利要求6的化合物，其中Ar為苯基、吡啶基或噁唑基。
8.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中X是鹵素。
9.根據(jù)權(quán)利要求8的化合物，其中每一個X均是氟。
10.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中R1是C2-C3。
11.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中R1是CH3-O-CH2-CH2-、HO-CH2-CH2-、HO-CH2-CH2-O-CH2-CH2-或CH3-O-CH2-CH2-O-CH2-CH2-。
12.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中n是2。
13.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中m是7。
14.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中所述化合物調(diào)節(jié)絲氨酸棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶(SPT)。
15.根據(jù)權(quán)利要求14的化合物，其中所述化合物抑制絲氨酸棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶(SPT)。
16.一種包含權(quán)利要求1的化合物和藥學(xué)可接受的載體的組合物。
17.一種組合物，其包含權(quán)利要求1的化合物和藥學(xué)有效量的至少一種選自下組的活性劑胰島素、胰島素類似物、腸胰島素、腸胰島素類似物、胰高血糖素樣肽、胰高血糖素樣肽類似物、胰高血糖素樣肽的抑制劑、胰高血糖素樣肽的抑制劑類似物、PACAP和VIP類似物、磺酰脲類、縮二胍類、α-葡萄糖苷酶抑制劑、乙酰輔酶A羧化酶抑制劑、半胱天冬蛋白酶抑制劑和PPAR配體。
18.一種治療胰島素抵抗的方法，所述方法包括給需要的患者施用權(quán)利要求1的化合物。
19.一種治療胰腺β細(xì)胞凋亡的方法，所述方法包括給需要的患者施用權(quán)利要求1的化合物。
20.一種治療肥胖的方法，所述方法包括給需要的患者施用權(quán)利要求1的化合物。
21.一種治療前-血栓形成癥狀、心肌梗死、高血壓、血脂異?；蚱渌黊綜合癥表現(xiàn)的方法，所述方法包括給需要的患者施用權(quán)利要求1的化合物。
22.一種治療充血性心力衰竭的方法，所述方法包括給需要的患者施用權(quán)利要求1的化合物。
23.一種治療炎癥疾病的方法，所述方法包括給需要的患者施用權(quán)利要求1的化合物，其中所述炎癥疾病是心血管系統(tǒng)疾病、動脈粥樣硬化或膿毒病。
24.一種防止人或其它生物胰島(xenobiotic islet)細(xì)胞在培養(yǎng)液中損失或死亡的方法，所述方法包括將權(quán)利要求1的化合物加入到培養(yǎng)液中。
25.一種在培養(yǎng)液中保存肝臟組織的方法，所述方法包括將權(quán)利要求1化合物加入到培養(yǎng)液中。
26.一種治療或預(yù)防1型糖尿病的方法，所述方法包括給需要的患者施用權(quán)利要求1的化合物。
27.一種治療或預(yù)防肝損傷的方法，所述方法包括給需要的患者施用權(quán)利要求1的化合物。
28.一種治療或預(yù)防惡質(zhì)病的方法，所述方法包括給需要的患者施用權(quán)利要求1的化合物。
29.根據(jù)權(quán)利要求18的方法，進(jìn)一步包括聯(lián)合施用治療有效量的至少一種選自下組的活性劑胰島素、胰島素類似物、腸胰島素、腸胰島素類似物、胰高血糖素樣肽、胰高血糖素樣肽類似物、胰高血糖素樣肽的抑制劑、胰高血糖素樣肽的抑制劑類似物、PACAP和VIP類似物、磺酰脲類、縮二胍類、α-葡萄糖苷酶抑制劑、乙酰輔酶A羧化酶抑制劑、半胱天冬蛋白酶抑制劑、不飽和脂肪酸、多不飽和脂肪酸和PPAR配體。
全文摘要
本發(fā)明記載了新穎的化合物、包含化合物的組合物以及制備和應(yīng)用化合物的方法。通過施用本申請所述的化合物治療或改善多種癥狀的方法，所述癥狀包括胰島素抵抗、胰腺β細(xì)胞凋亡、肥胖、前血栓性癥狀、心肌梗死、高血壓、血脂異常、X綜合癥現(xiàn)象、充血性心力衰竭、心血管系統(tǒng)炎性疾病、動脈粥樣硬化、膿毒癥、1型糖尿病、肝臟損害與惡病質(zhì)。本發(fā)明的化合物可用于調(diào)節(jié)絲氨酸棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶活性。
文檔編號A61K31/421GK101060845SQ200580039238
公開日2007年10月24日 申請日期2005年10月12日 優(yōu)先權(quán)日2004年10月12日
發(fā)明者J·內(nèi)斯特 申請人:福布斯梅迪泰克(研究)公司