專利名稱：作為pi3k抑制劑的17－羥基渥曼青霉素類似物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一系列具有抗腫瘤活性的作為PI3K抑制劑的17-羥基渥曼青霉素(17-hydroxywortmannin)類似物。
背景技術(shù)：
發(fā)現(xiàn)渥曼青霉素是在信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑中為磷脂酰肌醇-3(OH)-激酶(PI3K)和TOR激酶功能的有效催化抑制劑的真菌代謝物。(Norman，Bryan H.等人，(1996)″Studies on theMechanism of the Phosphatidylinositol 3-Kinase Inhibition by Wortmannin and RelatedAnalogs，″J.Med.Chem.，39，1106-111和Creemer，Lawrence C.(1996)″Synthesis and inVitro Evaluation of New Wortmannin EstersPotent Inhibitors of Phosphatidylinositol3-Kinase，″J.Med.Chem.，39，5021-5024)。
1a類PI3K(稱為PI3K)是包含p85調(diào)控亞單元和p110催化亞單元的異源二聚體酶。響應(yīng)于生長(zhǎng)因子受體刺激，PI3K催化在細(xì)胞膜處脂質(zhì)第二信使磷脂酰肌醇-3，4，5-三磷酸酯(PIP3)的產(chǎn)生。PIP3又有助于多種下游細(xì)胞底物的活化。PI3K下游的最重要的信號(hào)傳導(dǎo)介體包括絲氨酸/蘇氨酸激酶AKT和哺乳動(dòng)物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)。AKT賦予顯性存活信號(hào)，并通過多種細(xì)胞死亡/細(xì)胞凋亡蛋白和細(xì)胞周期因子的直接磷酸化促進(jìn)增殖。mTOR是通過控制細(xì)胞蛋白翻譯起作用的重要細(xì)胞生長(zhǎng)調(diào)控劑。因此，PI3K/AKT/TOR途徑對(duì)于細(xì)胞增殖、生長(zhǎng)、存活和血管生成尤為重要。
在人類癌癥中，在PI3K/AKT/TOR途徑中的調(diào)控解除是所有主要人類腫瘤中的最常發(fā)事件。據(jù)估計(jì)，在30-50％的所有人類癌癥(包括肺癌、前列腺癌、乳癌、腦癌、腎癌、黑素瘤、卵巢癌、子宮內(nèi)膜癌、甲狀腺癌和淋巴癌)中發(fā)生腫瘤抑制基因PTEN(其為PIP3磷酸酶和PI3K信號(hào)傳導(dǎo)的負(fù)性調(diào)控劑)的遺傳損失。另外，已將PI3K表達(dá)的構(gòu)成性升高與肺癌、卵巢癌和胰腺癌聯(lián)系起來。最后，例如Her-2、EGFR和Ras的細(xì)胞表面致癌基因引起乳房、前列腺、結(jié)腸和肺腫瘤中的構(gòu)成性PI3K信號(hào)傳導(dǎo)。這些臨床數(shù)據(jù)為探索作為新穎抗癌劑的PI3K抑制劑提供強(qiáng)有力的理論基礎(chǔ)。(Cantley，L.和Neel，B.(1999)″New Insights into Tumor SuppressionPTEN Suppresses Tumor Formation byRestraining the Phosphoinositide 3-kinase/AKT pathway，″Proc.Natl.Acad.Sci.USA，96，4240-4245)。已顯示PI3激酶和TOR激酶在癌癥(Vivanco，I.和Sawyer，C.(2002)″Thephosphatidylinositol 3-kinase-AKT Pathway in Human Cancer，″Nature Reviews Cancer，2，489-501)、缺血性心臟病和再狹窄(Shiojima，I.和Walsh，K.(2002)″Role of Akt Signalingin Vascular Homeostasis and Angiogenesis，″Circulation Research，90，1243-1250和RuygrokP.等人，(2003)″Rapamycin in Cardiovascular Medicine，″Intern MedJ.，33，103-109)、炎癥(Wymann，M.等人，(2003)″Phosphoinostide 3-kinase gammaA Key Modulator inInflammation and Allergy，″Biochem Soc Trans，31，275-280和Kwak，Yong-Geun等人，(2003年4月)″Involvement of PTEN in airway hyperresponsiveness and inflammation in bronchialasthma，″The Journal of Clinical Investigation，1117，1083-1092)、血小板凝集(Watanabe，N.等人，(2003年3月)″Functional Phenotype of Phosphoinositide 3-kinase p85(alpha)NullPlatelets Characterized by an Impaired Response to GP VI Stimulation，″Blood(epub))、硬化癥(Kenerson，H.等人，(2002)″Activated Mammalian Target of Rapamycin in thePathogenesis of Tuberous Sclerosis Complex Renal Tumors，″Cancer Res.，62，5645-5650)、呼吸障礙(Kitaura，J.等人，(2000)″AKT-dependent Cytokine Production in Mast Cells，″J.Exp.Med，192，729-739和Stewart A.(2001)″Airway Wall Remodeling andHyper-responsivenessModeling Remodeling in vitro and in vivo，″Pulm Pharmacol Ther，14，255-265)、HIV(Francois，F(xiàn).和Klotman，M.″Phosphatidylinositol 3-kinase RegulatesHuman Immunodeficiency Virus Type-1 Replication Following Viral Entry in Primary CD4(+)T Lymphocytes and Macrophages，″J.Virol，11，2539-2549)和骨吸收(Pilkington，M.等人，(1998)″Wortmannin Inhibits Spreading and Chemotaxis of Rat Osteoclasts in vitro″J BoneMiner Res，13，688-694)中具有活性。
PI3K是以85kDa調(diào)控亞單元和110kDa催化亞單元的緊密相關(guān)異源二聚體形式存在，且發(fā)現(xiàn)其與幾乎所有的配體活化生長(zhǎng)因子受體和致癌基因蛋白酪氨酸激酶形成細(xì)胞復(fù)合物(Cantley，L.C.等人，Cell，64281-302(1991))。85kDa調(diào)控亞單元顯然充當(dāng)PI3K與生長(zhǎng)因子受體和酪氨酸磷酸化蛋白相互作用的適配子(Margolis，C，Cell Growth Differ.，373-80(1992))。
雖然PI3K似乎在信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)中是重要的酶，關(guān)于細(xì)胞的有絲分裂發(fā)生和惡性轉(zhuǎn)化尤其具有牽連，但是已確定僅有限數(shù)量的水溶性藥物-聚合物接合物對(duì)PI3K具有抑制活性(例如參看Matter，W.F.等人，Biochem.Biophys，Res.Commun.，186624-631(1992))。與本發(fā)明方法中所用水溶性藥物-聚合物接合物的選擇性PI3K活性相反，Matter等人使用的生物類黃酮水溶性藥物-聚合物接合物(特別是槲皮素(quercetin)和其某些類似物)抑制PI3K和其它激酶，例如蛋白激酶C和PI 4-激酶(同上)。
1995年1月3日頒發(fā)的美國專利第5,378,725號(hào)提供一種使用渥曼青霉素或其某些類似物中的一種而在哺乳動(dòng)物體內(nèi)抑制PI3K的方法。渥曼青霉素的缺點(diǎn)之一為其對(duì)活生物的毒性。即使低劑量的純態(tài)渥曼青霉素通常也為限于實(shí)驗(yàn)室動(dòng)物的全身性劑量。
此項(xiàng)技術(shù)中眾所周知渥曼青霉素的生物合成產(chǎn)生，并由渥曼青霉素合成衍生物。(Dewald，Beatrice等人，(1988)″Two Transduction Sequences Are Necessary for NeutrophilActivation by Receptor Agonists，″The Journal of Biological Chemistry，第263卷，11月5日的期刊，第16179-16184頁；Norman，Bryan H.等人，(1996)″Studies on the Mechanism ofPhosphatidylinositol 3-Kinase Inhibition by Wortmannin and Related Analogs，″J.Med.Chem.，39，第1106-1111頁；Varticovski，L.等人，(2001)″Water-soluble HPMAcopolymer-wortmannin conjugate retains phosphoinositide 3-kinase inhibitory activity in vitroand in vivo，″Journal of Controlled Release，74，第275-281頁)，其都以引用的方式并入本文中。
用二硼烷還原渥曼青霉素所制備的渥曼青霉素衍生物17β-羥基渥曼青霉素相對(duì)于渥曼青霉素顯示活性增加10倍，并使PI3K IC50處于毫微摩爾以下的范圍內(nèi)，IC50為0.50nM。然而，17β-羥基渥曼青霉素在C3H乳房模型中的抗腫瘤活性在0.5(mg/kg)的劑量時(shí)顯示無抑制作用，且在1.0mg/kg的劑量時(shí)顯示毒性。這些發(fā)現(xiàn)使作者得出以下結(jié)論“抑制劑效能和抗腫瘤活性需要與渥曼青霉素和相關(guān)類似物的親電子C-21位的親核加成。不幸的是，這種機(jī)制似乎與所觀察到的毒性有關(guān)”(Norman，Bryan H.等人，(1996)″Studieson the Mechanism of Phosphatidylinositol 3-Kinase Inhibition by Wortmannin and RelatedAnalogs，″J.Med Chem.，39，1106-1111，1109-1110)。
在C-17羥基處乙酰化的渥曼青霉素衍生物顯示活性嚴(yán)重?fù)p失，使作者得出以下結(jié)論“活性位點(diǎn)在C-17處不能容納親油性或空間大物體”(Creemer，Lawrence C.等人，(1996)″Synthesis and in Vitro Evaluation of New Wortmannin EstersPotent Inhibitors ofPhosphatidylinositol 3-Kinase，″J.Med.Chem.，39，5021-5024，5022)。這一結(jié)論與隨后闡明的與渥曼青霉素結(jié)合的PI3K的X射線結(jié)晶結(jié)構(gòu)相一致(Walker，Edward H.等人，(2000)″Structural Determinants of Phosphoinositide 3-Kinase Inhibition by Wortmannin，LY294002，Quercetin，Myricetin，and Staurosporine，″Molecular Cell，6(4)，909-919)。
其它渥曼青霉素衍生物在C-20處斷開。通過使渥曼青霉素與親核試劑在C-20位反應(yīng)，呋喃環(huán)斷開。所述開環(huán)化合物展示多種生物活性(Wipf，Peter等人，(2004)″Synthesisand biological evaluation of synthetic viridins derived from C(20)-heteroalkylation of thesteroidal PI-3-kinase inhibitor wortmannin，″Org.Biomol.Chem.，2，1911-1920)。也參看Powis的U.S.2003/0109572。
在醫(yī)藥化學(xué)中已成功采用連接聚(乙二醇)(PEG)來改進(jìn)藥物的水溶性和投藥。(同上)然而，共價(jià)連接的PEG未必提供與其連接的藥物的水溶性和可用性的改進(jìn)(Bebbington，David等人，(2002)″Prodrug and Covalent Linker Strategies for theSolubilization of Dual-Action Antioxidants/Iron Chelators，″Bioorganic & MedicinalChemistry Letters，12，3297-3300，3299)和(Feng，Xia等人，(2002)″Synthesis andEvaluation of Water-Soluble Paclitaxel Prodrugs，″Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters，12，3301-3303，3302)。
在PEG藥物綜述中，歷經(jīng)20年仍未制備出產(chǎn)生臨床批準(zhǔn)的產(chǎn)品的低分子量(＜20,000)PEG小分子藥物接合物(Greenwald，R.B.(2001)″PEG drugsan overview，″Journal ofControlled Release，74，第159-171頁，摘要)。實(shí)際上，僅有少數(shù)的小有機(jī)分子抗癌劑通過永久鍵與PEG接合，且所述藥劑未產(chǎn)生具有臨床優(yōu)越性的水溶性藥物-聚合物接合物(Greenwald，R.B.等人，(2003)″Effective Drug Delivery by PEGylated Drug Conjugates，″Advanced Drug Delivery Reviews，55，第217-250頁，220)。當(dāng)使用PEG-CPT時(shí)，就PEG-CPT 40,000、20,000和8,000構(gòu)筑體而言分別展示約50％、10％和0％的致死率。表面看來，采用Mw5000的聚合物與藥物接合會(huì)迅速產(chǎn)生在活體內(nèi)具有很小作用或無作用的分泌物質(zhì)(同上，235)。這并不是說連接在腫瘤中具有積聚能力的PEG 40,000將自動(dòng)使得藥物具有更大的抗腫瘤活性(同上，235)。
需要具有改進(jìn)的抗腫瘤活性和/或低毒性的渥曼青霉素類似物。本發(fā)明的化合物滿足這一需求。

發(fā)明內(nèi)容
在一個(gè)實(shí)施例中，本發(fā)明提供式I化合物
其中R1選自由NR4R5、SR6和OR7組成的群組；R2選自由氫、甲?；王；M成的群組；R3選自由氫、羥基、烷氧基、烷酰氧基、＝O、酰氧基和羰基組成的群組；R4和R5獨(dú)立選自由氫、羥基、烷基、烯基、雜環(huán)基、芳基、雜芳基、芳烷基和PEG組成的群組；且其中R4和R5視情況連接以形成環(huán)；R6選自由烷基、芳基、雜芳基、芳烷基和PEG組成的群組；且R7選自由氫、烷基、芳基、雜芳基、芳烷基和PEG組成的群組；R8選自由羥基、酰氧基和烷氧基組成的群組；和其鹽、溶劑化物和水合物。
在一個(gè)實(shí)施例中，R1為NR4R5。
在一個(gè)實(shí)施例中，R2為氫。
在另一實(shí)施例中，R2為甲?；?br> 在又一實(shí)施例中，R3為酰氧基。優(yōu)選的是，R3為乙酰氧基。
在一個(gè)實(shí)施例中，R8為羥基。
在一個(gè)實(shí)施例中，本發(fā)明提供式I化合物，其中R1選自由NR4R5、SR6和OR7組成的群組；R2選自由氫和甲酰基組成的群組；R3選自由氫、羥基和酰氧基組成的群組；R4和R5獨(dú)立選自由氫、烷基、烯基、雜環(huán)基、芳基、芳烷基和PEG組成的群組；且其中R4和R5視情況連接以形成環(huán)；
R6為烷基；R7為氫；R8為羥基；和其鹽、溶劑化物和水合物。
在一個(gè)實(shí)施例中，本發(fā)明提供式I的示范性化合物。一個(gè)實(shí)例為(1E，4S，4aR，5R，6aS，7S)-1-{[[3-(二甲氨基)丙基](甲基)氨基]亞甲基}-7，11-二羥基-4-(甲氧基甲基)-4a，6a-二甲基-2，10-二氧代-1，2，4，4a，5，6，6a，7，8，9，9a，10-十二氫茚并[4，5-h]異苯并吡喃-5-基乙酸酯。
本發(fā)明也涵蓋經(jīng)聚乙二醇化的式I化合物，其中R基團(tuán)如上所述。實(shí)例包括(但不限于)在R1、R2或R3位置經(jīng)聚乙二醇化的化合物。
在另一實(shí)施例中，本發(fā)明提供一種通過提供本發(fā)明的化合物抑制PI3K活性的方法。本發(fā)明也提供一種抑制哺乳動(dòng)物、特別是人類體內(nèi)的PI3K的方法，其包含投與本發(fā)明的化合物。本發(fā)明也提供一種治療PI3K依賴性病癥的方法，其包含投與本發(fā)明的化合物。
本發(fā)明也提供通過提供本發(fā)明的化合物抑制TOR活性的方法。本發(fā)明也提供一種抑制哺乳動(dòng)物、特別是人類體內(nèi)的TOR的方法，其包含投與本發(fā)明的化合物。
本發(fā)明也提供包含本發(fā)明的化合物和醫(yī)藥學(xué)上可接受的載劑的醫(yī)藥組合物。本發(fā)明提供一種治療癌癥的方法，其包含投與本發(fā)明的醫(yī)藥組合物。本發(fā)明也提供另外包含投與一種或一種以上調(diào)節(jié)生長(zhǎng)因子信號(hào)傳導(dǎo)、細(xì)胞因子反應(yīng)和細(xì)胞周期控制的藥劑的方法。


圖1描繪聚乙二醇化17-羥基渥曼青霉素化合物。
圖2描繪本發(fā)明化合物的通用合成流程。
圖3描繪經(jīng)聚乙二醇化的本發(fā)明化合物的合成流程。
圖4描繪聚乙二醇化17-羥基渥曼青霉素的合成流程。
圖5描繪聚乙二醇化17-羥基渥曼青霉素衍生物的合成流程。
圖6展示U87MG神經(jīng)膠質(zhì)瘤中由不同靜脈內(nèi)給藥時(shí)程(一周1次和2次)和不同濃度的化合物5所獲得的結(jié)果的比較。
圖7展示U87MG神經(jīng)膠質(zhì)瘤中由不同劑量的化合物5(一周2次靜脈內(nèi)給藥)所獲得的結(jié)果的比較。
圖8展示NSCLC A549模型中由不同劑量的化合物5(一周1次靜脈內(nèi)給藥)所獲得的結(jié)果的比較。
圖9展示U87MG神經(jīng)膠質(zhì)瘤中由不同劑量的化合物53(一周2次靜脈內(nèi)給藥)所獲得的結(jié)果的比較。
圖10展示NSCLC A549中由不同劑量的化合物53(一周2次經(jīng)口給藥)所獲得的結(jié)果的比較。
圖11展示U87MG神經(jīng)膠質(zhì)瘤中由不同靜脈內(nèi)給藥時(shí)程(一周1次和2次)和不同劑量的化合物46和化合物5所獲得的結(jié)果的比較。
圖12展示當(dāng)化合物以一周2次靜脈內(nèi)給藥時(shí)，化合物5、46、25和30在U87MG神經(jīng)膠質(zhì)瘤中的活體內(nèi)活性和比較。
圖13展示一周5次或2次腹膜內(nèi)或一周2次靜脈內(nèi)以5mg/kg給藥時(shí)，化合物4和13在U87MG神經(jīng)膠質(zhì)瘤中的活體內(nèi)活性。
圖14展示化合物5或53與太平洋紫杉醇的組合療法在U87MG神經(jīng)膠質(zhì)瘤模型中的結(jié)果(所有都一周1次靜脈內(nèi)給藥)。
圖15展示化合物5與太平洋紫杉醇的組合療法在NSCLC H460模型中的結(jié)果(一周1次靜脈內(nèi)給藥)。
圖16A和B展示化合物4與MEK抑制劑的組合協(xié)同抑制HCT116結(jié)腸腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)。
圖17A和B展示化合物5與MEK抑制劑的組合協(xié)同抑制HCT116結(jié)腸腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)。
圖18A-C展示化合物4與2-(2-氯-4-碘苯胺基)-N-(環(huán)丙基甲氧基-3，4-二氟苯甲酰胺)(MEK抑制劑)的組合在一組七個(gè)結(jié)腸腫瘤細(xì)胞系中顯示協(xié)同生長(zhǎng)抑制作用。
圖19A和B展示化合物4與MEK抑制劑2-(2-氯-4-碘苯胺基)-N-(環(huán)丙基甲氧基-3，4-二氟苯甲酰胺)的組合在非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)細(xì)胞系中顯示協(xié)同生長(zhǎng)抑制作用。
圖20A展示化合物4與MEK抑制劑2-(2-氯-4-碘苯胺基)-N-(環(huán)丙基甲氧基-3，4-二氟苯甲酰胺)的組合在MDA231乳房腫瘤細(xì)胞中顯示協(xié)同生長(zhǎng)抑制作用。
圖20B展示化合物4與MEK抑制劑2-(2-氯-4-碘苯胺基)-N-(環(huán)丙基甲氧基-3，4-二氟苯甲酰胺)的組合在DU145前列腺腫瘤細(xì)胞中顯示協(xié)同生長(zhǎng)抑制作用。
圖21展示通過化合物4與MEK抑制劑2-(2-氯-4-碘苯胺基)-N-(環(huán)丙基甲氧基-3，4-二氟苯甲酰胺)的組合處理在HCT116細(xì)胞中協(xié)同誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。
圖22提供對(duì)HCT116細(xì)胞的PI3K、MEK和細(xì)胞周期控制的各種分子途徑標(biāo)記的Western印跡法分析。將細(xì)胞以單一或組合藥劑處理16小時(shí)。
圖23展示HER2/neu抑制劑(E)-N-{4-[3-氯-4-(2-吡啶基甲氧基)苯胺基]-3-氰基-7-乙氧基-6-喹啉基}-4-(二甲氨基)-2-丁烯酰胺(稱為“HKI-272”)與化合物4(0.1μg/ml)的組合協(xié)同抑制過度表達(dá)HER2/Neu的MDA361-DYT2乳房腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)。
圖24提供對(duì)MDA361-DYT2的PI3K、HER2/Neu、ERK和細(xì)胞周期控制的各種分子途徑標(biāo)記的Western印跡法分析。將細(xì)胞處理16小時(shí)。
圖25展示mTOR抑制劑CCI-779與化合物4(0.1μg/ml)的組合協(xié)同抑制MDA-MB-231乳房腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)。
圖26A和B展示mTOR抑制劑CCI-779與化合物4(0.1μg/ml)的組合協(xié)同抑制結(jié)腸腫瘤細(xì)胞系的生長(zhǎng)。
圖27A和B展示mTOR抑制劑CCI-779與化合物4(0.1μg/ml)的組合協(xié)同抑制PTEN陰性乳房腫瘤細(xì)胞系的生長(zhǎng)。
在化合物名稱與結(jié)構(gòu)之間沖突的情況下，結(jié)構(gòu)優(yōu)先。
具體實(shí)施例方式
在一個(gè)實(shí)施例中，本發(fā)明提供式I化合物 其中R1選自由NR4R5、SR6和OR7組成的群組；R2選自由氫、甲?；王；M成的群組；R3選自由氫、羥基、烷氧基、烷酰氧基、＝O、酰氧基和羰基組成的群組；R4和R5獨(dú)立選自由氫、羥基、烷基、烯基、雜環(huán)基、芳基、雜芳基、芳烷基和PEG組成的群組；且其中R4和R5視情況連接以形成環(huán)；R6選自由烷基、芳基、雜芳基、芳烷基和PEG組成的群組；且R7選自由氫、烷基、芳基、雜芳基、芳烷基和PEG組成的群組；R8選自由羥基、酰氧基和烷氧基組成的群組；和其鹽、溶劑化物和水合物，只要化合物不是式V化合物 其中R9為烷基，或具有單一非重復(fù)式(B)的藥物-聚合物接合物
其中R10為-O-、-NH-或-S-；R11為烷基、環(huán)烷基或芳基；R3為H、＝O、-O-COC4H9或OR12；R12為H、COR13或烷基；R13為烷基、H、芳基或-CH2-芳基；且n為1-1000。
本發(fā)明的R基團(tuán)視情況經(jīng)取代。視情況經(jīng)取代意謂具有零個(gè)、一個(gè)或一個(gè)以上取代基。取代基包括(但不限于)氫、鹵素、烷基、烯基、炔基、羥基、烷氧基、?；?、烷氨基、芳氨基、芳基烷氨基、氨基、氰基、氨甲酰基、乙酰胺基、羧基、烷氧羰基、磺?；EG(聚乙二醇)、雜環(huán)基、芳基、芳烷基、雜芳基、多環(huán)基、芳氧基、烷硫基和芳硫基。取代基本身也可以視情況經(jīng)取代。
除非另外指出，否則烷基、烯基和炔基具有1到10個(gè)碳原子且可為直鏈、支鏈或環(huán)狀。
雜環(huán)基的實(shí)例包括(但不限于)吡咯烷、哌啶、哌嗪、氧代哌啶、嗎啉和吖丁啶。與雜環(huán)稠合的苯環(huán)的實(shí)例包括(但不限于)喹啉、異喹啉和二氫異喹啉。除非另外指出，否則雜環(huán)基含有一個(gè)或一個(gè)以上選自由氮、氧和硫組成的群組的雜原子。
芳基的實(shí)例包括(但不限于)苯基和萘基。
多環(huán)基包含一個(gè)與一個(gè)或一個(gè)以上其它環(huán)稠合的環(huán)。環(huán)可以是芳香族或非芳香族。環(huán)可以是烴環(huán)或雜環(huán)。
甲酰基意謂-C(O)H基團(tuán)。
?；庵^通過去除羥基而衍生自有機(jī)酸的有機(jī)基團(tuán)，例如，RC(O)-為RCOOH的?；?br> 烷氧基意謂-OR基團(tuán)，其中R為可視情況經(jīng)一個(gè)或一個(gè)以上官能團(tuán)取代的烷基、烯基或炔基。
羰基意謂經(jīng)雙鍵與氧鍵結(jié)的碳，即C＝O。
酰氧基是指烷基-C(O)O-、經(jīng)取代的烷基-C(O)O-、環(huán)烷基-C(O)O-、經(jīng)取代的環(huán)烷基-C(O)O-、芳基-C(O)O-、雜芳基-C(O)O-和雜環(huán)基-C(O)O-基團(tuán)。酰氧基包括烷酰氧基、烯酰氧基和芳酰氧基。
雜芳基意謂芳香族雜環(huán)，其包括單環(huán)、雙環(huán)和三環(huán)系統(tǒng)，其中環(huán)系統(tǒng)的至少一個(gè)碳原子可由獨(dú)立選自氮、氧和硫的雜原子置換。
芳烷基是芳基化烷基，其為其中烷基H原子經(jīng)芳基取代的基團(tuán)。
PEG為聚乙二醇。
在一個(gè)實(shí)施例中，R1為NR4R5。在某些實(shí)施例中，R4和R5連接以形成環(huán)。例如，實(shí)施例包括(但不限于)R4和R5連接以使得NR4R5為吡咯烷、哌啶、哌嗪、氧代哌啶、嗎啉或吖丁啶的實(shí)施例。NR4R5環(huán)可如上文所述視情況經(jīng)取代。NR4R5環(huán)也可以與苯環(huán)稠合以使得NR4R5為例如二氫異喹啉。
在另一實(shí)施例中，R1為SR6。實(shí)例包括(但不限于)丁基硫烷基。
在另一實(shí)施例中，R1為OR7。實(shí)例包括(但不限于)-OH。
在式I中，R1被描述為關(guān)于渥曼青霉素化合物的C20具有一個(gè)特定的結(jié)構(gòu)關(guān)系。所屬領(lǐng)域技術(shù)人員將認(rèn)識(shí)到可能存在C20雙鍵的其它可能幾何結(jié)構(gòu)。雖然未圖示，但式I和本發(fā)明的化合物包括C20雙鍵的替代幾何結(jié)構(gòu)。
在一個(gè)實(shí)施例中，R2為氫或甲?；?。
R3選自由氫、羥基、烷氧基、烷酰氧基、＝O、酰氧基和羰基組成的群組。在一個(gè)實(shí)施例中，R3為酰氧基。酰氧基的實(shí)例包括(但不限于)乙酰氧基。
在一個(gè)實(shí)施例中，R8為羥基。
在一個(gè)實(shí)施例中，本發(fā)明提供式I化合物，其中R1選自由NR4R5、SR6和OR7組成的群組；R2選自由氫和甲酰基組成的群組；R3選自由氫、羥基和酰氧基組成的群組；R4和R5獨(dú)立選自由氫、烷基、烯基、雜環(huán)基、芳基、芳烷基和PEG組成的群組；且其中R4和R5視情況連接以形成環(huán)；R6為烷基；R7為氫；R8為羥基；和其鹽、溶劑化物和水合物。
以下圖表提供本發(fā)明的某些示范性化合物和可在本文整個(gè)說明書中使用的指定“化合物編號(hào)”。本發(fā)明也包括所述化合物的鹽、溶劑化物和水合物。




本發(fā)明也涵蓋經(jīng)聚乙二醇化的式I化合物，其中R基團(tuán)如上文所述。實(shí)例包括(但不限于)在R1、R2或R3位置處經(jīng)聚乙二醇化的化合物。
在式I化合物中存在某些取代基使得可形成所述化合物的鹽。合適鹽包括醫(yī)藥學(xué)上可接受的鹽，例如衍生自無機(jī)酸或有機(jī)酸的酸加成鹽，和衍生自無機(jī)堿和有機(jī)堿的鹽。
酸加成鹽包括鹽酸鹽、氫溴酸鹽、氫碘酸鹽、烷基磺酸鹽(例如甲烷磺酸鹽、乙烷磺酸鹽或羥乙基磺酸鹽)、芳基磺酸鹽(例如對(duì)甲苯磺酸鹽、苯磺酸鹽或萘磺酸鹽)、磷酸鹽、硫酸鹽、硫酸氫鹽、乙酸鹽、三氟乙酸鹽、丙酸鹽、檸檬酸鹽、馬來酸鹽、富馬酸鹽、丙二酸鹽、琥珀酸鹽、乳酸鹽、草酸鹽、酒石酸鹽和苯甲酸鹽。
衍生自無機(jī)堿或有機(jī)堿的鹽包括堿金屬鹽(例如鈉鹽或鉀鹽)、堿土金屬鹽(例如鎂鹽或鈣鹽)和有機(jī)胺鹽(例如嗎啉、哌啶、二甲胺或二乙胺鹽)。
本發(fā)明化合物的尤其有用的鹽包括醫(yī)藥學(xué)上可接受的鹽，尤其是醫(yī)藥學(xué)上可接受的酸加成鹽。
本發(fā)明的化合物可如上文所述和早前2004年4月20日申請(qǐng)的美國申請(qǐng)案第10/828,474號(hào)(其以引用的方式并入本文中)中所述由17-羥基渥曼青霉素制得?？捎冒诽幚?7-羥基渥曼青霉素以產(chǎn)生呋喃開環(huán)化合物。17-羥基渥曼青霉素也可以在17位經(jīng)甲酰基化，且用胺處理以產(chǎn)生呋喃開環(huán)化合物。參看圖2。
經(jīng)聚乙二醇化的本發(fā)明化合物可通過在二氯甲烷中的聚乙二醇化17-羥基渥曼青霉素中加入胺而制得。參看圖3。用于制備聚乙二醇化17-羥基渥曼青霉素和聚乙二醇化渥曼青霉素衍生物的方法分別描述于圖4和5中，且是如早前2004年4月20日申請(qǐng)的美國申請(qǐng)案第10/828,474號(hào)中所述。
例如，如圖4中所述，將60mg渥曼青霉素(0.14mmol，來自Aldrich)在12mL四氫呋喃(THF)中的溶液在氮?dú)庀略?℃冰浴中冷卻。加入THF溶液(134μL，0.14mmol，來自Aldrich)中的1M硼烷，且將反應(yīng)混合物在0℃下攪拌3.5小時(shí)。用1mL水使反應(yīng)中止。在加溫到室溫后，將反應(yīng)混合物用水稀釋，且用乙酸乙酯萃取。處理后，獲得約60mg(通過HPLC，90％純的17-羥基-渥曼青霉素)固體。將所述固體(約0.126mmol 17-羥基-渥曼青霉素)溶解在15mL二氯甲烷中，使其與碘乙酸(24mg，0.13mmol)、二環(huán)己基碳化二亞胺(DCC)(27mg，0.13mmol)和4-N，N-二甲氨基吡啶(DMAP)(0.1mg，作為催化劑)反應(yīng)。將反應(yīng)混合物在室溫下保持1小時(shí)。處理后，獲得約75mg粗產(chǎn)物(黃色固體)。通過制備型HPLC分離純的17-二氫-17-(1-碘乙?；?-渥曼青霉素。獲得總共54mg白色固體。
又，如圖4所述，在氮?dú)庀聦?.40mg(0.067mmol)17-二氫-17-(1-碘乙?；?-渥曼青霉素溶解在15mL乙腈和10mL 0.1M碳酸氫鈉中。在1小時(shí)內(nèi)加入總共345mgM-PEG-SH-5000(0.069mmol)(分4批)。在室溫下再攪拌1小時(shí)后，將反應(yīng)混合物用二氯甲烷萃取并處理。獲得約320mg粗產(chǎn)物。在制備型HPLC后，自260mg粗產(chǎn)物獲得總共209mg純的水溶性藥物-聚合物聚乙二醇化渥曼青霉素衍生物。
在另一實(shí)施例中，本發(fā)明提供一種通過在細(xì)胞內(nèi)(活體內(nèi)或活體外)提供一種或一種以上本發(fā)明化合物來抑制PI3K活性的方法?？蓪?duì)本發(fā)明的化合物進(jìn)行測(cè)試以確定足以抑制PI3K的最小濃度，即最小抑制濃度IC50。參看實(shí)例66。下表1和2展示本發(fā)明示范性化合物的IC50結(jié)果。除非另外指出，否則IC50是以μg/ml測(cè)量。所屬領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)了解展示本發(fā)明化合物抑制PI3K活性的能力的檢定。例如，美國專利第5,378,725號(hào)提供一種可用于測(cè)試化合物活性的示范性測(cè)試系統(tǒng)。所屬領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)了解其它檢定系統(tǒng)。另外，所屬領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)了解用于研究對(duì)PI3K活性的抑制作用的哺乳動(dòng)物模型。所述模型包括(但不限于)無胸腺小鼠中的人類異種移植模型。同樣，所屬領(lǐng)域技術(shù)人員可使用這些模型來測(cè)定本發(fā)明化合物的活性和毒性。
在一個(gè)活體內(nèi)實(shí)驗(yàn)方案中，根據(jù)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物照護(hù)評(píng)鑒協(xié)會(huì)(Association for Accreditationof Laboratory Animal Care，AALAACC)標(biāo)準(zhǔn)將Balb/c nu/nu(無胸腺)小鼠在用于實(shí)驗(yàn)之前圈養(yǎng)至少一周。將動(dòng)物圈養(yǎng)在微型隔離籠中，并只在層流凈化罩中處理。所有食物和水都經(jīng)過高溫滅菌。使用25-26規(guī)格無菌針和注射器將細(xì)胞懸浮液以200μL的體積在小鼠左側(cè)腹接種。將細(xì)胞再懸浮在完全生長(zhǎng)培養(yǎng)基中，且每只小鼠傳遞1千萬個(gè)細(xì)胞。當(dāng)所得腫瘤達(dá)到適于分級(jí)的尺寸時(shí)，將小鼠再分組以產(chǎn)生相等大小的組，n＝10。分級(jí)后，靜脈內(nèi)給予小鼠0.2cc化合物?；衔锟稍賾腋≡诹姿猁}緩沖鹽水(PBS)中，隨后注射到小鼠體內(nèi)。處理在整段時(shí)期內(nèi)通常為一周1次或一周2次。在一些研究中，以每2周重復(fù)一次，每天5次給藥的時(shí)程進(jìn)行處理，直到腫瘤達(dá)到動(dòng)物體重的10％。在整個(gè)實(shí)驗(yàn)持續(xù)期間，每周兩次監(jiān)控實(shí)體腫瘤的生長(zhǎng)。使用游標(biāo)卡尺量化腫瘤尺寸，并使用公式L×W除以2(mm)來計(jì)算質(zhì)量。假定單位密度，將mm3轉(zhuǎn)化為mg。不允許腫瘤生長(zhǎng)到大于小鼠體重的15％，此時(shí)對(duì)小鼠施以安樂死。
圖6-15展示根據(jù)此實(shí)驗(yàn)方案進(jìn)行的活體內(nèi)檢定的結(jié)果。化合物溶解在磷酸鹽緩沖液中。媒劑對(duì)照物是無化合物的磷酸鹽緩沖液。所有劑量都是以mg/kg測(cè)量。對(duì)于聚乙二醇化化合物而言，在不考慮PEG重量的情況下由基礎(chǔ)化合物來測(cè)量劑量。A549(人類非小細(xì)胞肺癌)和U87(膠質(zhì)母細(xì)胞瘤)細(xì)胞系是購自美國典型微生物保藏中心(AmericanType Culture Collection，ATCC)(Rockville，MD)。檢定結(jié)果表明本發(fā)明化合物抑制腫瘤生長(zhǎng)。
本發(fā)明提供一種抑制哺乳動(dòng)物、特別是人類體內(nèi)的PI3K的方法，其包含投與PI3K抑制量的本發(fā)明化合物。
一個(gè)實(shí)施例提供一種治療PI3K依賴性病癥的方法，其包含對(duì)個(gè)體投與PI3K抑制量的本發(fā)明化合物。PI3K依賴性病癥包括與疼痛、糖尿病、炎癥、血小板凝集、缺血性心臟病、硬化癥、再狹窄、呼吸障礙、HIV、骨吸收且特別是癌癥(例如非小細(xì)胞肺癌和腦癌)相關(guān)的生物化學(xué)過程。
因?yàn)镻I3K在細(xì)胞的有絲分裂發(fā)生和惡性轉(zhuǎn)化中起重要作用，所以已證明抑制PI3K的化合物可用作抗腫瘤劑。因此，本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例提供通過投與本發(fā)明化合物治療癌癥的方法。治療癌癥涵蓋(但不限于)抑制和/或減少腫瘤細(xì)胞增殖、腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)或腫瘤發(fā)生。所屬領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)了解展示本發(fā)明化合物減少細(xì)胞增殖的能力的檢定。例如，將細(xì)胞系與本發(fā)明的化合物一起培養(yǎng)，然后例如通過MTS檢定法或胸苷并入檢定法來測(cè)量細(xì)胞增殖。所屬領(lǐng)域技術(shù)人員也應(yīng)了解其它檢定。
示范性細(xì)胞增殖檢定展示足以抑制腫瘤生長(zhǎng)的最小化合物濃度，即最小抑制濃度IC50(μg/ml)。示范性化合物的細(xì)胞增殖檢定結(jié)果顯示在下文表1和2中。LNCaP(人類前列腺癌)、MDA468(人類乳癌細(xì)胞)、MDA435(人類乳腺癌)和DU145(人類前列腺癌/淋巴性白血病)細(xì)胞系是購自美國典型微生物保藏中心(ATCC)(Rockville，MD)。在含有5％CO2的37℃培育箱中，將細(xì)胞培養(yǎng)在含有10％胎牛血清(FBS)的RPMI培養(yǎng)基1640中。所有細(xì)胞培養(yǎng)試劑都購自Gibco-BRL(Grand Island，NY)。將細(xì)胞以每孔約3000個(gè)細(xì)胞涂在96孔培養(yǎng)板上。涂布一天后，在細(xì)胞中加入化合物或媒劑對(duì)照物(只有緩沖液)。開始處理后三天時(shí)進(jìn)行增殖檢定。
對(duì)于非放射性細(xì)胞增殖檢定而言，通過測(cè)量染料MTS四唑鎓染料的代謝轉(zhuǎn)化率(通過存活細(xì)胞)來確定存活細(xì)胞密度，這是所屬領(lǐng)域技術(shù)人員已知的細(xì)胞增殖檢定(MTS檢定)且先前已確立。使用檢定試劑盒(Promega Corp.，Madison，WI)進(jìn)行檢定。將檢定板培育1-2小時(shí)，并通過測(cè)量490nm下的吸光度而在96孔格式平板讀取器中讀取結(jié)果。每種化合物的作用都計(jì)算成由在同一平板中生長(zhǎng)的經(jīng)媒劑處理的細(xì)胞所獲得的對(duì)照細(xì)胞生長(zhǎng)百分比。
PI3K/AKT/TOR途徑對(duì)于細(xì)胞增殖、生長(zhǎng)、存活和血管生成尤為重要。因此，本發(fā)明的化合物也可以用于抑制TOR活性。與關(guān)于PI3K的上述檢定類似的活體內(nèi)和活體外檢定可以用來確定足以抑制TOR的最小化合物濃度。如實(shí)例67和68所述的人類TOR檢定和Rat1-IGF1檢定分別由本發(fā)明的某些實(shí)施例來進(jìn)行。這些檢定的結(jié)果顯示在下文表1和2中。示范性化合物足以抑制TOR的最小化合物濃度、即最小抑制濃度IC50(μg/ml)顯示在下文表1和2中。
表1檢定數(shù)據(jù)(IC50，μg/ml)

表2檢定數(shù)據(jù)(IC50，μg/ml，標(biāo)記處除外)

本發(fā)明也提供包含本發(fā)明化合物和醫(yī)藥學(xué)上可接受載劑的醫(yī)藥組合物。
本發(fā)明的醫(yī)藥組合物可單獨(dú)或與其它治療有效化合物或療法組合投與，以用于治療或預(yù)防哺乳動(dòng)物中受介導(dǎo)的病理學(xué)病癥或病況。同樣，本發(fā)明化合物可以單一化合物的形式或與其它化合物組合的形式提供。
預(yù)期PI3K的抑制作用可增強(qiáng)此項(xiàng)技術(shù)中已知的調(diào)節(jié)生長(zhǎng)因子信號(hào)傳導(dǎo)、細(xì)胞因子反應(yīng)和細(xì)胞周期控制的其它藥劑的治療活性，所述藥劑例如(但不限于)細(xì)胞因子、干擾素、雷帕霉素(rapamycin)、HER2/EGFR抑制劑、MEK抑制劑、干擾素α、Src激酶抑制劑和mTor抑制劑。
HER2為人類表皮生長(zhǎng)因子受體2且在多種人類腫瘤(包括乳癌)的表面上表達(dá)。HER2抑制劑優(yōu)選抑制介導(dǎo)細(xì)胞增殖的信號(hào)傳導(dǎo)途徑且特異性抑制HER2酪氨酸激酶，且因此也可以用作用于抑制表達(dá)HER2的癌癥生長(zhǎng)的治療劑。此項(xiàng)技術(shù)中已知HER2抑制劑。示范性HER2抑制劑為(E)-N-{4-[3-氯-4-(2-吡啶基甲氧基)苯胺基]-3-氰基-7-乙氧基-6-喹啉基}-4-(二甲氨基)-2-丁烯酰胺。
人類表皮生長(zhǎng)因子(EGF)為通過結(jié)合到特異性細(xì)胞膜表皮生長(zhǎng)因子受體(EGFR/ErbB-1)上來發(fā)揮生物作用的多肽。許多類型的癌細(xì)胞在其細(xì)胞表面上展現(xiàn)增強(qiáng)的EGFR表達(dá)。EGFR在癌細(xì)胞上的表達(dá)增強(qiáng)與過度增殖和癌轉(zhuǎn)移有關(guān)。已通過失控細(xì)胞生長(zhǎng)來識(shí)別其過多配體EGF，從而導(dǎo)致各種癌癥，包括結(jié)腸直腸癌、頭頸癌、卵巢癌、前列腺癌、乳癌和肺癌。當(dāng)EGF與EGFR結(jié)合時(shí)，觸發(fā)促進(jìn)生長(zhǎng)和分裂的化學(xué)信號(hào)傳導(dǎo)過程。EGFR抑制劑優(yōu)選干擾EGF與其受體EGFR的相互作用，或抑制內(nèi)部化學(xué)信號(hào)傳導(dǎo)過程以終止產(chǎn)生細(xì)胞分裂前進(jìn)信號(hào)的化學(xué)物質(zhì)的產(chǎn)生。示范性EGFR抑制劑為4-二甲氨基-丁-2-烯酸[4-(3-氯-4-氟-苯基氨基)-3-氰基-7-乙氧基-喹啉-6-基]-酰胺。
MEK為稱為MEK激酶的酶家族，其是MAP(有絲分裂原相關(guān)蛋白激酶)和Erk(胞外信號(hào)調(diào)控)激酶的群組。這些酶是在哺乳動(dòng)物體內(nèi)調(diào)控底物磷酸化的酶。優(yōu)選的MEK抑制劑是抑制MEK 1和MEK 2酶而實(shí)質(zhì)上不抑制其它所述酶的化合物。示范性MEK抑制劑是4-({3-氯-4-[(1-甲基-1H-咪唑-2-基)硫基]苯基}氨基)-6-甲氧基-7-(4-吡咯烷-1-基哌啶-1-基)喹啉-3-甲腈。另一示范性MEK抑制劑是稱為UO126或化學(xué)上稱為1，4-二氨基-2，3，-二氰基-1，4-雙[2-氨基苯硫基]丁二烯的MAP激酶抑制劑。
Src為與細(xì)胞膜相關(guān)的蛋白酪氨酸激酶(PTK)且涉及在信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和生長(zhǎng)調(diào)控途徑中。它通過將ATP的γ磷酸酯轉(zhuǎn)移到底物蛋白上的酪氨酸殘基側(cè)鏈來傳遞細(xì)胞信號(hào)。至今為止，已發(fā)現(xiàn)Src蛋白酪氨酸激酶家族中的九個(gè)成員。這些成員是Src、Yes、Fyn、Fgr、Blk、Lck、Lyn、Hck和Yrk。Fgr、Blk、Lck、Lyn、Hck和Yrk主要在造血細(xì)胞中表達(dá)且具有活性。Src底物磷酸化的變化是細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)中的重要事件。大多數(shù)正常細(xì)胞含有非常低的Src含量和活性，且細(xì)胞生活力的確定或維持無需這種酶。Src活性在許多人類癌癥中大幅增加。
Src活性變化與細(xì)胞周期變化相關(guān)，且Src活性調(diào)控的變化與瘤形成相關(guān)。抑制Src將具有干擾其所參與的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的作用，且因此將降低癌細(xì)胞生長(zhǎng)速率。旨在抑制Src家族的藥物具有以下優(yōu)勢(shì)，即具有有限的全身性毒性或無全身性毒性，但對(duì)展示Src家族的一個(gè)或一個(gè)以上成員具有增加活性的腫瘤具有高特異性。示范性Src抑制劑是4-(2，4-二氯-5-甲氧基-苯基氨基)-5-甲氧基-7-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-丙氧基]-喹啉-3-甲腈和4-(2，4-二氯-5-甲氧基苯胺基)-7-{5-[(4-甲基-1-哌嗪基)甲基]-2-吡啶基}-3-甲腈。
CCI-779為雷帕霉素酯和目前在II期臨床研發(fā)中用于治療癌癥患者的哺乳動(dòng)物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)的抑制劑。CCI-779與mTOR相互作用且抑制其激酶活性，導(dǎo)致對(duì)受mTOR調(diào)控的翻譯控制物p70(s6)激酶的抑制作用。
本發(fā)明的化合物在與各種細(xì)胞生長(zhǎng)或細(xì)胞周期調(diào)節(jié)劑、酪氨酸激酶或細(xì)胞因子的抑制劑組合時(shí)，在數(shù)種腫瘤模型中產(chǎn)生協(xié)同生長(zhǎng)抑制作用。本發(fā)明的發(fā)明人已發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明的化合物在與MEK、Her2/Neu和mTOR的抑制劑組合時(shí)可獲得協(xié)同抗腫瘤活性。特別的是，本發(fā)明的化合物通過PI3K和MEK的組合抑制作用已在結(jié)腸癌(參看圖16-18、21、22和26)、肺癌(參看圖19)、前列腺癌(參看圖20)和乳癌細(xì)胞系(參看圖20、23、25和27)中顯示協(xié)同抗癌活性。也參看實(shí)例69。
響應(yīng)于17-羥基渥曼青霉素和本發(fā)明化合物所作的處理，PI3K途徑標(biāo)記在敏感性細(xì)胞和抗性細(xì)胞中都受到良好抑制。注意到細(xì)胞周期蛋白cyclin D1和c-Myc只在敏感性細(xì)胞中得到有效抑制。通常觀察到PI3K或MEK的特異性抑制劑不交叉抑制彼此的途徑標(biāo)記。如最近的文獻(xiàn)(Mirza AM等人，Mol Cell Biol.2004Dec；24(24)10868-81；Xing D等人，Proc Natl Acad Sci USA.2005年5月10日；102(19)6936-41；Gera JF等人，J Biol Chem.2004年1月23日；279(4)2737-46；和Shi Y等人，J Biol Chem.2005年3月25日；280(12)10964-73)所指出，許多關(guān)鍵的細(xì)胞功能(例如cyclin D1和c-Myc的表達(dá))都由涉及PI3K和Ras/MEK的共同和獨(dú)立信號(hào)傳導(dǎo)途徑的轉(zhuǎn)錄和翻譯來調(diào)控。本發(fā)明的發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，許多細(xì)胞模型中ERK(MEK的底物)的構(gòu)成性磷酸化作用和活化作用都與對(duì)本發(fā)明化合物的敏感性降低有關(guān)。因此，PI3K和Ras/MEK途徑的組合抑制作用對(duì)于廣泛的抗癌應(yīng)用而言似乎特別有吸引力，這是因?yàn)閮煞N途徑都是細(xì)胞生長(zhǎng)和存活所必需的。
本發(fā)明的化合物當(dāng)與HER2/Neu抑制劑組合時(shí)在HER2/Neu陽性乳癌細(xì)胞系中也提供協(xié)同抗癌活性。最近的報(bào)導(dǎo)(Bianco R等人，Oncogene..2003年5月8日；22(18)2812-22和Nagata Y等人，Cancer Cell.2004年8月；6(2)117-27)表明由PTEN缺陷引起的構(gòu)成性PI3K信號(hào)傳導(dǎo)產(chǎn)生對(duì)EGFR激酶抑制劑和HER2抗體赫賽汀(Herceptin)的抗性，且在兩種情況下的所述抗性可通過用已知抑制劑LY294002抑制PI3K來克服。本發(fā)明的發(fā)明者已發(fā)現(xiàn)，乳房腫瘤細(xì)胞系MDA361-DYT2表達(dá)高水平的Her2/Neu，但對(duì)Her2/Neu激酶抑制劑HKI-272(也稱為(E)-N-{4-[3-氯-4-(2-吡啶基甲氧基)苯胺基]-3-氰基-7-乙氧基-6-喹啉基}-4-(二甲氨基)-2-丁烯酰胺)具有活體外和活體內(nèi)抗性。雖然用0.1μg/mlHKI-272處理MDA361-DYT2完全抑制了磷酸化形式的Her2/Neu和ERK，但對(duì)表明PI3K/AKT途徑的構(gòu)成性活化作用的AKT途徑標(biāo)記幾乎無影響。因此，PI3K(與本發(fā)明化合物)與Her2/Neu抑制劑的組合抑制可在耐赫賽汀和/或HKI-272的乳房腫瘤中提供協(xié)同功效。參看圖23和24。
本發(fā)明的化合物當(dāng)與mTOR抑制劑組合時(shí)在乳房腫瘤和結(jié)腸腫瘤細(xì)胞系中也提供協(xié)同抗癌活性。PI3K和mTOR是通常在癌癥中解除調(diào)控的PI3K/AKT/mTOR途徑中的兩種主要組分。PI3K和mTOR由不同組的生長(zhǎng)因子、營養(yǎng)物和能量供應(yīng)的重疊以及獨(dú)立信號(hào)來調(diào)控。解除調(diào)控的PI3K和mTOR可協(xié)同地用于促進(jìn)腫瘤生長(zhǎng)和存活。與此概念一致的是，顯示腫瘤抑制基因PTEN(PI3K的細(xì)胞抑制基因)和TSC2(mTOR的細(xì)胞抑制基因)協(xié)同地抑制對(duì)每一所述基因的損失具有特異性的腫瘤子集的嚴(yán)重性(Manning BD等人，Genes Dev.2005年7月18日)。在惡性神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞中，雷帕霉素的TOR抑制作用與PI3K/AKT抑制作用組合可通過擴(kuò)大的自體吞噬作用而產(chǎn)生協(xié)同抗腫瘤作用(Takeuchi H等人，Cancer Res.2005年4月15日；65(8)3336-46)。在最新報(bào)導(dǎo)中，通過雷帕霉素與PI3K抑制劑LY294002組合治療克服了H157肺腫瘤細(xì)胞中由Rapa誘發(fā)的elF4E磷酸化作用，從而增強(qiáng)抗腫瘤活性(Sun SY等人，Cancer Res.2005年8月15日；65(16)7052-8)。之前已觀察到，通過組合最小劑量的PI3K抑制劑PEG-17-羥基渥曼青霉素與mTOR抑制劑Peg-Rapa來獲得優(yōu)良的活體內(nèi)抗腫瘤功效(Yu K等人，Cancer BiolTher.2005年5月28日；4(5)538-45)。在目前的組合實(shí)驗(yàn)中，化合物4與mTOR抑制劑CCI-779的組合在PTEN陰性(CCI-779敏感性)腫瘤細(xì)胞中產(chǎn)生附加的抑制作用且在結(jié)腸腫瘤細(xì)胞中產(chǎn)生協(xié)同抑制作用，但所述抑制作用與經(jīng)CCI-779或其它17-羥基渥曼青霉素(17-HWT)類似物的單一藥劑治療相比具有較小敏感性。
本發(fā)明的化合物4和5與結(jié)構(gòu)獨(dú)特的MEK抑制劑UO126(也稱為1，4-二氨基-2，3-二氰基-1，4-雙[2-氨基苯硫基]丁二烯)和2-(2-氯-4-碘苯胺基)-N-(環(huán)丙基甲氧基-3，4-二氟苯甲酰胺)的組合在結(jié)腸癌細(xì)胞系(HCT116、HT29、SW620、SW480、LS-174T、Caco2和Lovo)、NSCLC細(xì)胞系(A549和H157)、前列腺癌細(xì)胞系DU145和乳癌細(xì)胞系MDA231中展示廣泛的協(xié)同生長(zhǎng)抑制作用。
在HCT116模型中，通過誘發(fā)細(xì)胞凋亡獲得組合的協(xié)同生長(zhǎng)抑制作用。對(duì)HCT116結(jié)腸癌細(xì)胞系的Western分析展示信號(hào)傳導(dǎo)分子的調(diào)節(jié)與協(xié)同抗腫瘤活性一致。
化合物4與Her2/Neu抑制劑HKI-272的組合在對(duì)HKI-272具有抗性的過度表達(dá)Her2/Neu的MDA361-DYT2細(xì)胞系中顯示協(xié)同生長(zhǎng)抑制作用。Western分析展示生化標(biāo)記的調(diào)節(jié)與協(xié)同抗腫瘤活性一致。
化合物4與mTOR抑制劑CCI-779的組合在PTEN陰性乳房腫瘤細(xì)胞中顯示附加的生長(zhǎng)抑制作用，且在CCI-779抗性乳房腫瘤和結(jié)腸腫瘤細(xì)胞系中顯示協(xié)同生長(zhǎng)抑制作用。
渥曼青霉素衍生物與干擾素α(Intron-A)協(xié)同作用，導(dǎo)致腫瘤消退并增強(qiáng)聚乙二醇化雷帕霉素(一種mTOR激酶的特異性抑制劑)的抗癌活性。Yu，K.等人，Cancer Biol.Ther.(2005)284(5)。因此，本發(fā)明提供一種抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)或治療癌癥的方法，其包含投與本發(fā)明的化合物與生長(zhǎng)因子信號(hào)傳導(dǎo)級(jí)聯(lián)、細(xì)胞因子反應(yīng)等的抑制劑(包括(但不限于)MEK、Her2/Neu、mTor、Src、細(xì)胞因子和干擾素α(Intron-A)的抑制劑)的組合。
對(duì)PI3K或AKT的細(xì)胞抑制導(dǎo)致存活降低，這是優(yōu)先于許多標(biāo)準(zhǔn)癌癥療法的抗癌活性的關(guān)鍵過程。然而，在許多情況下，腫瘤細(xì)胞快速產(chǎn)生化學(xué)抗性。一種抗性細(xì)胞機(jī)制與PI3K/AKT途徑的構(gòu)成性提高有關(guān)。因此，細(xì)胞毒素(例如(但不限于)依立替康(irinotecan)、5-FU、紫杉醇(taxol)、順鉑(cisplatin)、阿霉素(adriamycin)、奧沙利鉑(oxaliplatin)和環(huán)磷酰胺)與PI3K抑制劑的組合治療可以進(jìn)一步擴(kuò)大初期療法的功效，而且也可以有助于在再現(xiàn)療法中恢復(fù)化學(xué)敏感性。渥曼青霉素衍生物可以增強(qiáng)太平洋紫杉醇在肺癌和神經(jīng)膠質(zhì)瘤中的抗癌功效。
本發(fā)明的醫(yī)藥組合物可含有一種或一種以上賦形劑。向組合物中加入賦形劑以達(dá)成各種目的。
稀釋劑增加固體醫(yī)藥組合物的體積，而且可采用含有組合物的醫(yī)藥劑型以使患者和護(hù)理人員易于操作。固體組合物的稀釋劑包括(例如)微晶纖維素(例如Avicel)、微細(xì)纖維素、乳糖、淀粉、預(yù)凝膠淀粉、碳酸鈣、硫酸鈣、糖、葡萄糖結(jié)合劑(dextrate)、糊精、右旋糖、磷酸氫鈣二水合物、磷酸三鈣、高嶺土、碳酸鎂、氧化鎂、麥芽糖糊精、甘露醇、聚甲基丙烯酸酯(例如Eudragit)、氯化鉀、粉末纖維素、氯化鈉、山梨醇和滑石粉。
壓制成例如片劑的劑型的固體醫(yī)藥組合物可包括賦形劑，賦形劑的功能包括在壓縮后幫助將活性成分和其它賦形劑結(jié)合在一起。固體醫(yī)藥組合物的粘合劑包括阿拉伯膠(acacia)、褐藻酸、卡波姆(carbomer)(例如卡巴浦爾(carbopol))、羧甲基纖維素鈉、糊精、乙基纖維素、明膠、瓜爾膠(guar gum)、氫化植物油、羥乙基纖維素、羥丙基纖維素(例如Klucel)、羥丙基甲基纖維素(例如Methocel)、液體葡萄糖、硅酸鎂鋁、麥芽糖糊精、甲基纖維素、聚甲基丙烯酸酯、聚維酮(povidone)(例如Kollidon、Plasdone)、預(yù)凝膠淀粉、褐藻酸鈉和淀粉。
可以通過向組合物中加入崩解劑來增加經(jīng)壓制的固體醫(yī)藥組合物在患者胃中的溶解速率。崩解劑包括褐藻酸、羧甲基纖維素鈣、羧甲基纖維素鈉(例如Ac-Di-Sol、Primellose)、膠態(tài)二氧化硅、交聯(lián)羧甲基纖維素鈉、交聯(lián)聚維酮(crospovidone)(例如Kollidon、Polyplasdone)、瓜爾膠、硅酸鎂鋁、甲基纖維素、微晶纖維素、波拉克林鉀(polacrilin potassium)、粉末纖維素、預(yù)凝膠淀粉、褐藻酸鈉、羥乙酸淀粉鈉(例如Explotab)和淀粉。
可加入助流劑以改進(jìn)未壓制固體組合物的流動(dòng)性并改進(jìn)給藥的準(zhǔn)確性?？沙洚?dāng)助流劑的賦形劑包括膠態(tài)二氧化硅、三硅酸鎂、粉末纖維素、淀粉、滑石粉和磷酸三鈣。
當(dāng)通過壓制粉末組合物制得例如片劑的劑型時(shí)，使組合物經(jīng)受來自沖頭和沖模的壓力。某些賦形劑和活性成分具有粘附到?jīng)_頭和沖模表面上的趨勢(shì)，這可導(dǎo)致產(chǎn)物具有凹坑和其它表面不規(guī)則性?？上蚪M合物中加入潤滑劑以降低粘附力，并使得易于從沖模釋放產(chǎn)物。潤滑劑包括硬脂酸鎂、硬脂酸鈣、單硬脂酸甘油酯、硬脂酸棕櫚酸甘油酯、氫化蓖麻油、氫化植物油、礦物油、聚乙二醇、苯甲酸鈉、十二烷基硫酸鈉、硬脂富馬酸鈉、硬脂酸、滑石粉和硬脂酸鋅。
調(diào)味劑和增味劑使劑型對(duì)于患者而言變得更美味?？砂ㄔ诒景l(fā)明組合物中的醫(yī)藥產(chǎn)品的常見調(diào)味劑和增味劑包括麥芽醇、香蘭素、乙基香蘭素、薄荷醇、檸檬酸、富馬酸、乙基麥芽醇和酒石酸。
固體和液體組合物也可以使用任何醫(yī)藥學(xué)上可接受的著色劑來染色，以改進(jìn)其外觀和/或便于患者鑒別產(chǎn)品和單位劑量。
在本發(fā)明的液體醫(yī)藥組合物中，式I化合物和任何其它固體賦形劑溶解或懸浮在液體載劑(例如水、植物油、醇、聚乙二醇、丙二醇或甘油)中。
液體醫(yī)藥組合物可含有乳化劑以使不可溶于液體載劑中的活性成分或其它賦形劑均勻分散在整個(gè)組合物中?？捎糜诒景l(fā)明的液體組合物中的乳化劑例如包括明膠、蛋黃、酪蛋白、膽固醇、阿拉伯膠、黃芪膠、角叉菜膠、果膠、甲基纖維素、卡波姆、十六十八烷醇和十六烷醇。
本發(fā)明的液體醫(yī)藥組合物也可以含有粘度增強(qiáng)劑以改進(jìn)產(chǎn)物的口感和/或涂布胃腸道的內(nèi)層。所述藥劑包括阿拉伯膠、褐藻酸、膨潤土、卡波姆、羧甲基纖維素鈣或鈉、十六十八烷醇、甲基纖維素、乙基纖維素、明膠、瓜爾膠、羥乙基纖維素、羥丙基纖維素、羥丙基甲基纖維素、麥芽糖糊精、聚乙烯醇、聚維酮、碳酸丙二酯、褐藻酸丙二醇酯、褐藻酸鈉、羥乙酸淀粉鈉、淀粉黃芪膠和黃原膠。
也可以加入例如山梨醇、糖精、糖精鈉、蔗糖、阿斯巴甜(aspartame)、果糖、甘露醇和轉(zhuǎn)化糖的甜味劑以改進(jìn)味道。
也可以加入對(duì)于攝取而言安全含量的防腐劑和螯合劑(例如醇、苯甲酸鈉、丁基化羥基甲苯、丁基化羥基苯甲醚和乙二胺四乙酸)以改進(jìn)儲(chǔ)存穩(wěn)定性。
根據(jù)本發(fā)明，液體組合物也可以含有緩沖劑，例如葡萄糖酸、乳酸、檸檬酸或乙酸、葡萄糖酸鈉、乳酸鈉、檸檬酸鈉或乙酸鈉。對(duì)賦形劑和用量的選擇可由配方科學(xué)家基于所屬領(lǐng)域中的標(biāo)準(zhǔn)程序和參考工作的經(jīng)驗(yàn)和考慮來容易地確定。
本發(fā)明的固體組合物包括粉末、顆粒、聚集粒和壓制組合物。劑量包括適于經(jīng)口、經(jīng)面頰、經(jīng)直腸、不經(jīng)腸(包括皮下、肌肉內(nèi)和靜脈內(nèi))、吸入和經(jīng)眼投藥的劑量。在任何給定情況下最合適的投與將取決于所治療的病癥的性質(zhì)和嚴(yán)重性。劑量適宜地可以單位劑型提供并且由醫(yī)藥學(xué)領(lǐng)域中眾所周知的任何方法制備。
劑型包括固體劑型(諸如片劑、粉末、膠囊、栓劑、藥包、錠劑和糖錠)以及液體糖漿、懸浮液和酏劑。
本發(fā)明的劑型可以是在硬質(zhì)或軟質(zhì)外殼中含有組合物(例如本發(fā)明的粉末狀或顆粒狀固體組合物)的膠囊。外殼可以由明膠制得且視情況含有增塑劑(例如甘油和山梨醇)和乳濁劑或著色劑。
活性成分和賦形劑可根據(jù)此項(xiàng)技術(shù)中已知的方法調(diào)配成組合物和劑型。
可由濕式制粒法制備用于制錠或膠囊填充的組合物。在濕式制粒中，摻合某些或所有粉末形式的活性成分和賦形劑，然后在液體、一般是水的存在下進(jìn)一步混合，這導(dǎo)致粉末聚結(jié)成顆粒物。將顆粒物過篩和/或研磨、干燥，然后過篩和/或研磨成所要粒度。然后可將顆粒物制錠，或可在制錠前加入其它賦形劑，例如助流劑和/或潤滑劑。
可通過干式摻合法常規(guī)制備制錠組合物。例如，可將活性成分與賦形劑的摻合組合物壓制成長(zhǎng)條或薄板，然后粉碎成壓制顆粒物。壓制顆粒物隨后可壓縮成片劑。
作為干式?；ǖ奶娲椒?，可使用直接壓縮技術(shù)將摻合組合物直接壓縮成壓制劑型。直接壓縮產(chǎn)生無顆粒物的更均勻片劑。特別適合直接壓縮制錠的賦形劑包括微晶纖維素、噴霧干燥乳糖、磷酸二鈣二水合物和膠狀二氧化硅。這些和其它賦形劑在直接壓縮制錠中的適當(dāng)使用為關(guān)于直接壓縮制錠的特定調(diào)配挑戰(zhàn)具有經(jīng)驗(yàn)和技能的所屬領(lǐng)域技術(shù)人員所已知。
本發(fā)明的膠囊填充可包括關(guān)于制錠描述的前述摻合物和顆粒物中的任一種，然而，其不經(jīng)受最終制錠步驟。
本發(fā)明所涵蓋的醫(yī)藥組合物的投藥方法不受特別限制，其可以視患者年齡、性別和癥狀以各種制劑形式投與。例如，片劑、丸劑、溶液、懸浮液、乳液、顆粒物和膠囊可經(jīng)口服。注射制劑可經(jīng)靜脈內(nèi)單獨(dú)投與或與例如葡萄糖溶液和氨基酸溶液的注射輸注液混合投與。必要時(shí)，注射制劑是經(jīng)肌肉內(nèi)、皮內(nèi)、皮下或腹膜內(nèi)單獨(dú)投與。栓劑可投與到直腸內(nèi)。
本發(fā)明醫(yī)藥組合物中所含的式I化合物的量不受特別限制，然而，有效量是足以治療、緩解或減少目標(biāo)癥狀的劑量。本發(fā)明醫(yī)藥組合物的劑量將取決于使用方法，患者年齡、性別和病癥。
雖然已描述本發(fā)明，但仍將通過下列非限制性實(shí)施例進(jìn)一步說明本發(fā)明。
實(shí)例實(shí)例1(1E，4S，4aR，5R，6aS，7S，9aR)-1-[(二乙氨基)亞甲基]-7，11-二羥基-4-(甲氧基甲基)-4a，6a-二甲基-2，10-二氧代-1，2，4，4a，5，6，6a，7，8，9，9a，10-十二氫茚并[4，5-h]異苯并吡喃-5-基乙酸酯的制備向50mg(0.116mmol)17-羥基渥曼青霉素在1mL CH2Cl2中的溶液中加入22.5mL(0.217mmol)二乙胺。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌2小時(shí)30分鐘，然后在真空下濃縮以產(chǎn)生橙色糊狀物。將殘余物溶解在乙酸乙酯(EtOAc)中并用己烷沉淀。將沉淀物用己烷洗滌兩次以產(chǎn)生45mg(77％)橙色固體狀產(chǎn)物。C27H37NO8的HRMS(ESI)m/z計(jì)算值503.25206，實(shí)驗(yàn)值504.25747(M+H)+1。
實(shí)例2(1E，4S，4aR，5R，6aS，7S，9aR)-7，11-二羥基-4-(甲氧基甲基)-4a，6a-二甲基-2，10-二氧代-1-(吡咯烷-1-基亞甲基)-1，2，4，4a，5，6，6a，7，8，9，9a，10-十二氫茚并[4，5-h]異苯并吡喃-5-基乙酸酯的制備向50mg(0.116mmol)17-羥基渥曼青霉素在1mL二氯甲烷(CH2Cl2)中的溶液中加入12.1mL(0.145mmol)吡咯烷。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌2小時(shí)，然后在真空下濃縮。將殘余物溶解在EtOAc中并用己烷沉淀。將沉淀物用己烷洗滌兩次以產(chǎn)生40mg(68.7％)黃色固體狀產(chǎn)物。C27H35NO8的HRMS(ESI)m/z計(jì)算值501.2364，實(shí)驗(yàn)值502.24250(M+H)+1。
實(shí)例3(1E，4S，4aR，5R，6aS，7S，9aR)-1-(苯胺基亞甲基)-7，11-二羥基-4-(甲氧基甲基)-4a，6a-二甲基-2，10-二氧代-1，2，4，4a，5，6，6a，7，8，9，9a，10-十二氫茚并[4，5-h]異苯并吡喃-5-基乙酸酯的制備向50mg(0.116mmol)17-羥基渥曼青霉素在1mL CH2Cl2中的溶液中加入26.2mL(0.287mmol)苯胺。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌一周，然后在真空下濃縮。將殘余物溶解在EtOAc中并與己烷一起濕磨以產(chǎn)生黃色粉末。將黃色粉末通過硅膠色譜(己烷/EtOAc)純化以產(chǎn)生油狀物。將油狀物與己烷一起濕磨以產(chǎn)生26mg(42.8％)橙色粉末狀產(chǎn)物。C29H33NO8的HRMS(ESI)m/z計(jì)算值523.22074，實(shí)驗(yàn)值524.22692(M+H)+1。
實(shí)例4(1E，4S，4aR，5R，6aS，7S)-1-{[叔丁基(2-羥乙基)氨基]亞甲基}-7，11-二羥基-4-(甲氧基甲基)-4a，6a-二甲基-2，10-二氧代-1，2，4，4a，5，6，6a，7，8，9，9a，10-十二氫茚并[4，5-h]異苯并吡喃-5-基乙酸酯的制備向50mg(0.12mmol)17-羥基渥曼青霉素在0.5mL CH2Cl2中的溶液中加入28.1mg(0.24mmol)2-(叔丁氨基)-乙醇。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌過夜。在真空下除去CH2Cl2。將殘余物與乙醚(Et2O)一起濕磨以產(chǎn)生32mg(48.7％)橙色粉末狀產(chǎn)物。MS(ESI)m/z 548.3(M+1)。
實(shí)例5(1E，4S，4aR，5R，6aS，7S)-1-{[[3-二甲氨基)丙基](甲基)氨基]亞甲基}-7，11-二羥基-4-(甲氧基甲基)-4a，6a-二甲基-2，10-二氧代-1，2，4，4a，5，6，6a，7，8，9，9a，10-十二氫茚并[4，5-h]異苯并吡喃-5-基乙酸酯的制備向50mg(0.12mmol)17-羥基渥曼青霉素在0.5mL CH2Cl2中的溶液中加入27.9mg(0.24mmol)N，N，N′-三甲基-1，3-丙二胺。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌過夜。在真空下除去CH2Cl2。將殘余物與Et2O一起濕磨以產(chǎn)生24mg(36.6％)橙色粉末狀產(chǎn)物。MS(ESI)m/z 547.3(M+1)。
實(shí)例6(1E，4S，4aR，5R，6aS，7S)-7，11-二羥基-4-(甲氧基甲基)-4a，6a-二甲基-1-{[甲基(1-甲基吡咯烷-3-基)氨基]亞甲基}-2，10-二氧代-1，2，4，4a，5，6，6a，7，8，9，9a，10-十二氫茚并[4，5-h]異苯并吡喃-5-基乙酸酯的制備向50mg(0.12mmol)17-羥基渥曼青霉素在0.5mL CH2Cl2中的溶液中加入27.4mg(0.24mmol)N，N′-二甲基-3-氨基吡咯烷。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌過夜。在真空下除去CH2Cl2。將殘余物與Et2O一起濕磨以產(chǎn)生25mg(38％)橙色粉末狀產(chǎn)物。MS(ESI)m/z545.25(M+1)。
實(shí)例7(1E，4S，4aR，5R，6aS，7S)-[(4-環(huán)己基哌嗪-1-基)亞甲基]-7，11-二羥基-4-(甲氧基甲基)-4a，6a-二甲基-2，10-二氧代-1，2，4，4a，5，6，6a，7，8，9，9a，10-十二氫茚并[4，5-h]異苯并吡喃-5-基乙酸酯的制備向50mg(0.12mmol)17-羥基渥曼青霉素在0.5mL CH2Cl2中的溶液中加入40.4mg(0.24mmol)1-環(huán)己基哌嗪。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌過夜。在真空下除去CH2Cl2。將殘余物與Et2O一起濕磨以產(chǎn)生16mg(22％)橙色粉末狀產(chǎn)物。MS(ESI)m/z 599.35(M+1)。
實(shí)例8(1E，4S，4aR，5R，6aS，7S)-1-{[丁基(甲基)氨基]亞甲基}-7，11-二羥基-4-(甲氧基甲基)-4a，6a-二甲基-2，10-二氧代-1，2，4，4a，5，6，6a，7，8，9，9a，10-十二氫茚并[4，5-h]異苯并吡喃-5-基乙酸酯的制備向50mg(0.12mmol)17-羥基渥曼青霉素在0.5mL CH2Cl2中的溶液中加入20.9mg(0.24mmol)N-甲基丁胺。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌過夜。在真空下除去CH2Cl2。將殘余物與Et2O一起濕磨以產(chǎn)生38mg(61.2％)橙色粉末狀產(chǎn)物。MS(ESI)m/z 518.25(M+1)。
實(shí)例9(1E，4S，4aR，5R，6aS，7S)-1-{[環(huán)己基(甲基)氨基]亞甲基}-7，11-二羥基-4-(甲氧基甲基)-4a，6a-二甲基-2，10-二氧代-1，2，4，4a，5，6，6a，7，8，9，9a，10-十二氫茚并[4，5-h]異苯并吡喃-5-基乙酸酯的制備向50mg(0.12mmol)17-羥基渥曼青霉素在0.5mL CH2Cl2中的溶液中加入27.2mg(0.24mmol)環(huán)己基-甲基-胺。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌過夜。在真空下除去CH2Cl2。將殘余物與Et2O一起濕磨以產(chǎn)生30mg(46％)橙色粉末狀產(chǎn)物。MS(ESI)m/z 544.25(M+1)。
實(shí)例10(1E，4S，4aR，5R，6aS，7S)-1-[(4-苯甲基哌嗪-1-基)亞甲基]-7，11-二羥基-4-(甲氧基甲基)-4a，6a-二甲基-2，10-二氧代-1，2，4，4a，5，6，6a，7，8，9，9a，10-十二氫茚并[4，5-h]異苯并吡喃-5-基乙酸酯的制備向50mg(0.12mmol)17-羥基渥曼青霉素在0.5mL CH2Cl2中的溶液中加入42.3mg(0.24mmol)1-苯甲基-哌嗪。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌過夜。在真空下除去CH2Cl2。將殘余物與Et2O一起濕磨以產(chǎn)生13mg(17.8％)橙色粉末狀產(chǎn)物。MS(ESI)m/z 607.2(M+1)。
實(shí)例11(1E，4S，4aR，5R，6aS，7S)-7，11-二羥基-4-(甲氧基甲基)-4a，6a-二甲基-2，10-二氧代-1-(哌啶-1-基亞甲基)-1，2，4，4a，5，6，6a，7，8，9，9a，10-十二氫茚并[4，5-h]異苯并吡喃-5-基乙酸酯的制備向50mg(0.12mmol)17-羥基渥曼青霉素在0.5mL CH2Cl2中的溶液中加入20.4mg(0.24mmol)哌啶。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌過夜。在真空下除去CH2Cl2。將殘余物與Et2O一起濕磨以產(chǎn)生33mg(53.3％)橙色粉末狀產(chǎn)物。MS(ESI)m/z 516.25(M+1)。
實(shí)例12(1E，4S，4aR，5R，6aS，7S)-1-(3，4-二氫異喹啉-2(1H)-基亞甲基)-7，11-二羥基-4-(甲氧基甲基)-4a，6a-二甲基-2，10-二氧代-1，2，4，4a，5，6，6a，7，8，9，9a，10-十二氫茚并[4，5-h]異苯并吡喃-5-基乙酸酯的制備向50mg(0.12mmol)17-羥基渥曼青霉素在0.5mL CH2Cl2中的溶液中加入32mg(0.24mmol)1，2，3，4-四氫異喹啉。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌過夜。在真空下除去CH2Cl2。將殘余物與Et2O一起濕磨以產(chǎn)生9mg(13.3％)橙色粉末狀產(chǎn)物。MS(ESI)m/z564.25(M+1)。
實(shí)例13(1E，4S，4aR，5R，6aS，7S)-7，11-二羥基-4-(甲氧基甲基)-4a，6a-二甲基-2，10-二氧代-1-[(4-苯基哌嗪-1-基)亞甲基]-1，2，4，4a，5，6，6a，7，8，9，9a，10-十二氫茚并[4，5-h]異苯并吡喃-5-基乙酸酯的制備向50mg(0.12mmol)17-羥基渥曼青霉素在0.5mL CH2Cl2中的溶液中加入38.9mg(0.24mmol)1-苯基哌嗪。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌過夜。在真空下除去CH2Cl2。將殘余物與Et2O一起濕磨以產(chǎn)生16mg(22.5％)橙色粉末狀產(chǎn)物。MS(ESI)m/z 593.3(M+1)。
實(shí)例14(1E，4S，4aR，5R，6aS，7S)-7，11-二羥基-4-(甲氧基甲基)-4a，6a-二甲基-1-[(4-甲基哌嗪-1-基)亞甲基]-2，10-二氧代-1，2，4，4a，5，6，6a，7，8，9，9a，10-十二氫茚并[4，5-h]異苯并吡喃-5-基乙酸酯的制備向50mg(0.12mmol)17-羥基渥曼青霉素在0.5mL CH2Cl2中的溶液中加入24mg(0.24mmol)1-甲基哌嗪。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌過夜。在真空下除去CH2Cl2。將殘余物與Et2O一起濕磨以產(chǎn)生19mg(29.8％)橙色粉末狀產(chǎn)物。MS(ESI)m/z 531.2(M+1)。
實(shí)例15(1E，4S，4aR，5R，6aS，7S)-7，11-二羥基-4-(甲氧基甲基)-4a，6a-二甲基-2，10-二氧代-1-[(4-苯基哌啶-1-基)亞甲基]-1，2，4，4a，5，6，6a，7，8，9，9a，10-十二氫茚并[4，5-h]異苯并吡喃-5-基乙酸酯的制備向50mg(0.12mmol)17-羥基渥曼青霉素在0.5mL CH2Cl2中的溶液中加入38.7mg(0.24mmol)4-苯基哌啶。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌過夜。在真空下除去CH2Cl2。將殘余物與Et2O一起濕磨以產(chǎn)生14mg(19.7％)橙色粉末狀產(chǎn)物。MS(ESI)m/z 592.25(M+1)。
實(shí)例16(1E，4S，4aR，5R，6aS，7S)-7-(甲酰氧基)-11-羥基-4-(甲氧基甲基)-4a，6a-二甲基-2，10-二氧代-1-(吡咯烷-1-基亞甲基)-1，2，4，4a，5，6，6a，7，8，9，9a，10-十二氫茚并[4，5-h]異苯并吡喃-5-基乙酸酯的制備將17-甲酰基渥曼青霉素(150mg，0.33mmol)溶解在CH2Cl2(1.5mL)中并用0.4mmol吡咯烷處理30分鐘。通過以CH2Cl2-MeOH(二氯甲烷-甲醇)(15∶1)洗脫的硅膠純化以產(chǎn)生橙黃色固體狀產(chǎn)物(產(chǎn)率是接近定量的)。MS(EI)分析值556(M++1)。
實(shí)例17(1E，4S，4aR，5R，6aS，7S)-1-[(二烯丙氨基)亞甲基]-7-(甲酰氧基)-11-羥基-4-(甲氧基甲基)-4a，6a-二甲基-2，10-二氧代-1，2，4，4a，5，6，6a，7，8，9，9a，10-十二氫茚并[4，5-h]異苯并吡喃-5-基乙酸酯的制備將17-甲?；茁嗝顾?150mg，0.33mmol)溶解在CH2Cl2(1.5mL)中并用0.4mmol二烯丙胺處理30分鐘。通過以CH2Cl2-MeOH(15∶1)洗脫的硅膠純化以產(chǎn)生橙黃色固體狀產(chǎn)物(產(chǎn)率是接近定量的)。MS(EI)分析值530(M++1)。
實(shí)例18(1E，4S，4aR，5R，6aS，7S)-1-[(二乙氨基)亞甲基]-7-(甲酰氧基)-11-羥基-4-(甲氧基甲基)-4a，6a-二甲基-2，10-二氧代-1，2，4，4a，5，6，6a，7，8，9，9a，10-十二氫茚并[4，5-h]異苯并吡喃-5-基乙酸酯的制備將17-甲?；茁嗝顾?150mg，0.33mmol)溶解在CH2Cl2(1.5mL)中并用0.4mmol二乙胺處理30分鐘。通過以CH2Cl2-MeOH(15∶1)洗脫的硅膠純化以產(chǎn)生橙黃色固體狀產(chǎn)物(產(chǎn)率是接近定量的)。MS(EI)m/z 532(M++1)。
實(shí)例19乙酸4-{[雙-(2-羥基-乙基)-氨基]-亞甲基}-6，17-二羥基-1-甲氧基甲基-10，13-二甲基-3，7-二氧代-1，3，4，7，10，11，12，13，14，15，16，17-十二氫-2-氧雜-環(huán)戊[a]菲-11-基酯的制備向100mg(0.23mmol)17-羥基渥曼青霉素在2mL CH2Cl2中的溶液中加入二乙醇胺(45μL，0.46mmol)。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌12小時(shí)，然后在真空下濃縮。將殘余物溶解在EtOAc中并用己烷沉淀。將沉淀物用己烷洗滌兩次以產(chǎn)生黃色固體狀產(chǎn)物。MS(ESI)m/z 537(M+H)。
實(shí)例20乙酸4-[(叔丁基-甲基-氨基)-亞甲基]-6，17-二羥基-1-甲氧基甲基-10，13-二甲基-3，7-二氧代-1，3，4，7，10，11，12，13，14，15，16，17-十二氫-2-氧雜-環(huán)戊[a]菲-11-基酯的制備向100mg(0.23mmol)17-羥基渥曼青霉素在2mL CH2Cl2中的溶液中加入N-叔丁基甲胺(55μL，0.46mmol)。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌12小時(shí)，然后在真空下濃縮。將殘余物溶解在EtOAc中并用己烷沉淀。將沉淀物用己烷洗滌兩次以產(chǎn)生黃色固體狀產(chǎn)物。MS(ESI)m/z 519(M+H)。
實(shí)例21乙酸4-{[雙-(3-二甲氨基-丙基)-氨基]-亞甲基}-6，17-二羥基-1-甲氧基甲基-10，13-二甲基-3，7-二氧代-1，3，4，7，10，11，12，13，14，15，16，17-十二氫-2-氧雜-環(huán)戊[a]菲-11-基酯的制備向100mg(0.23mmol)17-羥基渥曼青霉素在2mL CH2Cl2中的溶液中加入3，3′-亞氨基雙(N，N-二甲基丙胺)(104μL，0.46mmol)。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌12小時(shí)，然后在真空下濃縮。將殘余物溶解在EtOAc中并用己烷沉淀。將沉淀物用己烷洗滌兩次以產(chǎn)生黃色固體狀產(chǎn)物。MS(ESI)m/z 619(M+H)。
實(shí)例221-(11-乙酰氧基-6，17-二羥基-1-甲氧基甲基-10，13-二甲基-3，7-二氧代-1，7，10，11，12，13，14，15，16，17-十氫-2-氧雜-環(huán)戊[a]亞菲-4-基甲基)-哌啶-4-甲酸甲酯的制備向100mg(0.23mmol)17-羥基渥曼青霉素在2mL CH2Cl2中的溶液中加入異哌啶甲酸甲酯(63μL，0.46mmol)。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌12小時(shí)，然后在真空下濃縮。將殘余物溶解在EtOAc中并用己烷沉淀。將沉淀物用己烷洗滌兩次以產(chǎn)生黃色固體狀產(chǎn)物。MS(ESI)m/z 575(M+H)。
實(shí)例231-(11-乙酰氧基-6，17-二羥基-1-甲氧基甲基-10，13-二甲基-3，7-二氧代-1，7，10，11，12，13，14，15，16，17-十氫-2-氧雜-環(huán)戊[a]亞菲-4-基甲基)-哌啶-4-甲酸的制備向100mg(0.23mmol)17-羥基渥曼青霉素和三乙胺(65μL，0.46mmol)在2mLCH2Cl2中的溶液中加入異哌啶甲酸(60mg，0.46mmol)。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌12小時(shí)，然后在真空下濃縮。將殘余物溶解在EtOAc中并用己烷沉淀。將沉淀物用己烷洗滌兩次以產(chǎn)生黃色固體狀產(chǎn)物。MS(ESI)m/z 561(M+H)。
實(shí)例244-[(11-乙酰氧基-6，17-二羥基-1-甲氧基甲基-10，13-二甲基-3，7-二氧代-1，7，10，11，12，13，14，15，16，17-十氫-2-氧雜-環(huán)戊[a]亞菲-4-基甲基)-甲基-氨基]-2，5-二甲基-己-2-烯酸甲酯的制備向100mg(0.23mmol)17-羥基渥曼青霉素在2mL CH2Cl2中的溶液中加入2，5-二甲基-4-甲氨基-己-2-烯酸甲酯(86mg，0.46mmol)。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌12小時(shí)，然后在真空下濃縮。將殘余物溶解在EtOAc中并用己烷沉淀。將沉淀物用己烷洗滌兩次以產(chǎn)生黃色固體狀產(chǎn)物。MS(ESI)m/z 630(M+)。
實(shí)例25乙酸6，17-二羥基-1-甲氧基甲基-4-[({3-[4-(4-甲氧基-苯基)-哌嗪-1-基]-丙基}-甲基-氨基)-亞甲基]-10，13-二甲基-3，7-二氧代-1，3，4，7，10，11，12，13，14，15，16，17-十二氫-2-氧雜-環(huán)戊[a]菲-11-基酯的制備向100mg(0.23mmol)17-羥基渥曼青霉素和三乙胺(65μL，0.46mmol)在2mLCH2Cl2中的溶液中加入{3-[4-(4-甲氧基-苯基)-哌嗪-1-基]-丙基}-甲基-胺鹽酸鹽(123mg)。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌12小時(shí)，然后在真空下濃縮。將殘余物溶解在EtOAc中并用己烷沉淀。將沉淀物用己烷洗滌兩次以產(chǎn)生黃色固體狀產(chǎn)物。MS(ESI)m/z 695(M+H)。
實(shí)例26乙酸6，17-二羥基-1-甲氧基甲基-10，13-二甲基-4-({甲基-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-丙基]-氨基}-亞甲基)-，7-二氧代-1，3，4，7，10，11，12，13，14，15，16，17-十二氫-2-氧雜-環(huán)戊[a]菲-11-基酯的制備向100mg(0.23mmol)17-羥基渥曼青霉素在2mL CH2Cl2中的溶液中加入甲基-[3-4-甲基-哌嗪-1-基]丙基]胺(80mg，0.46mmol)。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌12小時(shí)，然后在真空下濃縮。將殘余物溶解在EtOAc中并用己烷沉淀。將沉淀物用己烷洗滌兩次以產(chǎn)生黃色固體狀產(chǎn)物。MS(ESI)m/z 603(M+H)。
實(shí)例27乙酸6，17-二羥基-1-甲氧基甲基-10，13-二甲基-4-{[甲基-(3-嗎啉-4-基-丙基)-氨基]-亞甲基}-3，7-二氧代-1，3，4，7，10，11，12，13，14，15，16，17-十二氫-2-氧雜-環(huán)戊[a]菲-11-基酯的制備向100mg(0.23mmol)17-羥基渥曼青霉素在2mL CH2Cl2中的溶液中加入甲基-(3-嗎啉-4-基-丙基)胺(74mg，0.46mmol)。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌12小時(shí)，然后在真空下濃縮。將殘余物溶解在EtOAc中并用己烷沉淀。將沉淀物用己烷洗滌兩次以產(chǎn)生黃色固體狀產(chǎn)物。MS(ESI)m/z 590(M+H)。
實(shí)例28乙酸4-{[(2-苯磺?；?乙基)-(3-二乙氨基-丙基)-氨基]-亞甲基}-6，17-二羥基-1-甲氧基甲基-10，13-二甲基-3，7-二氧代-1，3，4，7，10，11，12，13，14，15，16，17-十二氫-2-氧雜-環(huán)戊[a]菲-11-基酯的制備向100mg(0.23mmol)17-羥基渥曼青霉素在2mL CH2Cl2中的溶液中加入N′-(2-苯磺?；?乙基)-N，N-二乙基-丙-1，3-二胺(139mg，0.46mmol)。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌12小時(shí)，然后在真空下濃縮。將殘余物溶解在EtOAc中并用己烷沉淀。將沉淀物用己烷洗滌兩次以產(chǎn)生黃色固體狀產(chǎn)物。MS(ESI)m/z 730(M+H)。
實(shí)例29乙酸4-{[(1-氮雜-雙環(huán)[3.3.1]壬-5-基甲基)-苯甲基-氨基]-亞甲基}-6，17-二羥基-1-甲氧基甲基-10，13-二甲基-3，7-二氧代-1，3，4，7，10，11，12，13，14，15，16，17-十二氫-2-氧雜-環(huán)戊[a]菲-11-基酯的制備向100mg(0.23mmol)17-羥基渥曼青霉素和三乙胺(65μL，0.46mmol)在2mLCH2Cl2中的溶液中加入(1-氮雜-雙環(huán)[3.3.1]壬-5-基甲基)-苯甲基-胺鹽酸鹽(114mg)。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌12小時(shí)，然后在真空下濃縮。將殘余物溶解在EtOAc中并用己烷沉淀。將沉淀物用己烷洗滌兩次以產(chǎn)生黃色固體狀產(chǎn)物。MS(ESI)m/z 676(M+H)。
實(shí)例30乙酸6，17-二羥基-1-甲氧基甲基-10，13-二甲基-4-[4-(3-嗎啉-4-基-丙基)-哌嗪-1-基亞甲基]-3，7-二氧代-1，3，4，7，10，11，12，13，14，15，16，17-十二氫-2-氧雜-環(huán)戊[a]菲-11-基酯的制備向100mg(0.23mmol)17-羥基渥曼青霉素在2mL CH2Cl2中的溶液中加入1-(3-嗎啉基丙基)哌嗪(99mg，0.46mmol)。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌12小時(shí)，然后在真空下濃縮。將殘余物溶解在EtOAc中并用己烷沉淀。將沉淀物用己烷洗滌兩次以產(chǎn)生黃色固體狀產(chǎn)物。MS(ESI)m/z 645(M+H)。
實(shí)例31乙酸4-{[(2-二甲氨基-乙基)-甲基-氨基]-亞甲基}-6，17-二羥基-1-甲氧基甲基-10，13-二甲基-3，7-二氧代-1，3，4，7，10，11，12，13，14，15，16，17-十二氫-2-氧雜-環(huán)戊[a]菲-11-基酯的制備向100mg(0.23mmol)17-羥基渥曼青霉素在2mL CH2Cl2中的溶液中加入N，N，N′-三甲基乙二胺(47mg，0.46mmol)。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌12小時(shí)，然后在真空下濃縮。將殘余物溶解在EtOAc中并用己烷沉淀。將沉淀物用己烷洗滌兩次以產(chǎn)生黃色固體狀產(chǎn)物。MS(ESI)m/z 534(M+H)。
實(shí)例32乙酸4-[4-(3-二甲氨基-丙基)-哌嗪-1-基亞甲基]-6，17-二羥基-1-甲氧基甲基-10，13-二甲基-3，7-二氧代-1，3，4，7，10，11，12，13，14，15，16，17-十二氫-2-氧雜-環(huán)戊[a]菲-11-基酯的制備向100mg(0.23mmol)17-羥基渥曼青霉素在2mL CH2Cl2中的溶液中加入1-(3-二甲氨基丙基)哌嗪(80mg，0.46mmol)。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌12小時(shí)，然后在真空下濃縮。將殘余物溶解在EtOAc中并用己烷沉淀。將沉淀物用己烷洗滌兩次以產(chǎn)生黃色固體狀產(chǎn)物。MS(ESI)m/z 603(M+H)。
實(shí)例33乙酸6，17-三羥基-1-甲氧基甲基-10，13-二甲基-4-[4-(2-嗎啉-4-基-乙基)-哌嗪-1-基亞甲基]-3，7-二氧代-1，3，4，7，10，11，12，13，14，15，16，17-十二氫-2-氧雜-環(huán)戊[a]菲-11-基酯的制備向100mg(0.23mmol)17-羥基渥曼青霉素在2mL CH2Cl2中的溶液中加入1-(2-嗎啉基乙基)哌嗪(93mg，0.46mmol)。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌12小時(shí)，然后在真空下濃縮。將殘余物溶解在EtOAc中并用己烷沉淀。將沉淀物用己烷洗滌兩次以產(chǎn)生黃色固體狀產(chǎn)物。MS(ESI)m/z 631(M+H)。
實(shí)例34乙酸6，17-二羥基-1-甲氧基甲基-10，13-二甲基-4-[4-(1-甲基-哌啶-4-基)-哌嗪-1-基亞甲基]-3，7-二氧代-1，3，4，7，10，11，12，13，14，15，16，17-十二氫-2-氧雜-環(huán)戊[a]菲-11-基酯的制備向100mg(0.23mmol)17-羥基渥曼青霉素在2mL CH2Cl2中的溶液中加入1-(1-甲基哌啶-4-基)哌嗪(85mg，0.46mmol)。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌12小時(shí)，然后在真空下濃縮。將殘余物溶解在EtOAc中并用己烷沉淀。將沉淀物用己烷洗滌兩次以產(chǎn)生黃色固體狀產(chǎn)物。MS(ESI)m/z 615(M+H)。
實(shí)例35[(11-乙酰氧基-6，17-二羥基-1-甲氧基甲基-10，13-二甲基-3，7-二氧代-1，7，10，11，12，13，14，15，16，17-十氫-2-氧雜-環(huán)戊[a]亞菲-4-基甲基)-甲基-氨基]-乙酸叔丁酯的制備向100mg(0.23mmol)17-羥基渥曼青霉素和三乙胺(65μL，0.46mmol)在2mLCH2Cl2中的溶液中加入肌氨酸叔丁酯鹽酸鹽(84mg，0.46mmol)。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌12小時(shí)，然后在真空下濃縮。將殘余物溶解在EtOAc中并用己烷沉淀。將沉淀物用己烷洗滌兩次以產(chǎn)生黃色固體狀產(chǎn)物。MS(ESI)m/z 577(M+H)。
實(shí)例36乙酸4-{[(2，3-二羥基-丙基)-甲基-氨基]-亞甲基}-6，17-二羥基-1-甲氧基甲基-10，13-二甲基-3，7-二氧代-1，3，4，7，10，11，12，13，14，15，16，17-十二氫-2-氧雜-環(huán)戊[a]菲-11-基酯的制備向100mg(0.23mmol)17-羥基渥曼青霉素和三乙胺(65μL，0.46mmol)在2mLCH2Cl2中的溶液中加入3-甲氨基-1，2-丙二醇鹽酸鹽(49mg，0.46mmol)。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌12小時(shí)，然后在真空下濃縮。將殘余物溶解在EtOAc中并用己烷沉淀。將沉淀物用己烷洗滌兩次以產(chǎn)生黃色固體狀產(chǎn)物。MS(ESI)m/z 537(M+H)。
實(shí)例374-[(11-乙酰氧基-6，17-二羥基-1-甲氧基甲基-10，13-二甲基-3，7-二氧代-1，7，10，11，12，13，14，15，16，17-十氫-2-氧雜-環(huán)戊[a]亞菲-4-基甲基)-甲基-氨基]-丁酸的制備向100mg(0.23mmol)17-羥基渥曼青霉素和三乙胺(65μL，0.46mmol)在2mLCH2Cl2中的溶液中加入4-(甲氨基)丁酸鹽酸鹽(71mg，0.46mmol)。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌12小時(shí)，然后在真空下濃縮。將殘余物溶解在EtOAc中并用己烷沉淀。將沉淀物用己烷洗滌兩次以產(chǎn)生黃色固體狀產(chǎn)物。MS(ESI)m/z 549(M+H)。
實(shí)例381-(11-乙酰氧基-6，17-二羥基-1-甲氧基甲基-10，13-二甲基-3，7-二氧代-1，7，10，11，12，13，14，15，16，17-十氫-2-氧雜-環(huán)戊[a]亞菲-4-基甲基)-吖丁啶-2-甲酸的制備向100mg(0.23mmol)17-羥基渥曼青霉素和三乙胺(65μL，0.46mmol)在2mLCH2Cl2中的溶液中加入1-吖丁啶-2-甲酸(47mg，0.46mmol)。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌12小時(shí)，然后在真空下濃縮。將殘余物溶解在EtOAc中并用己烷沉淀。將沉淀物用己烷洗滌兩次以產(chǎn)生黃色固體狀產(chǎn)物。MS(ESI)m/z 533(M+H)。
實(shí)例391-(11-乙酰氧基-6，17-二羥基-1-甲氧基甲基-10，13-二甲基-3，7-二氧代-1，7，10，11，12，13，14，15，16，17-十氫-2-氧雜-環(huán)戊[a]亞菲-4-基甲基)-吡咯烷-2-甲酸甲酯的制備向100mg(0.23mmol)17-羥基渥曼青霉素在2mL CH2Cl2中的溶液中加入1-脯氨酸甲酯(60mg，0.46mmol)。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌12小時(shí)，然后在真空下濃縮。將殘余物溶解在EtOAc中并用己烷沉淀。將沉淀物用己烷洗滌兩次以產(chǎn)生黃色固體狀產(chǎn)物。MS(ESI)m/z 561(M+H)。
實(shí)例40乙酸4-{[苯甲基-(2-氰基-乙基)-氨基]-亞甲基}-6，17-二羥基-1-甲氧基甲基-10，13-二甲基-3，7-二氧代-1，3，4，7，10，11，12，13，14，15，16，17-十二氫-2-氧雜-環(huán)戊[a]菲-11-基酯的制備向100mg(0.23mmol)17-羥基渥曼青霉素在2mL CH2Cl2中的溶液中加入3-苯甲基氨基-丙腈(73μL，0.46mmol)。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌12小時(shí)，然后在真空下濃縮。將殘余物溶解在EtOAc中并用己烷沉淀。將沉淀物用己烷洗滌兩次以產(chǎn)生黃色固體狀產(chǎn)物。MS(ESI)m/z 592(M+H)。
實(shí)例41乙酸4-{[(2-二乙氨基-乙基)-甲基-氨基]-亞甲基}-6，17-二羥基-1-甲氧基甲基-10，13-二甲基-3，7-二氧代-1，3，4，7，10，11，12，13，14，15，16，17-十二氫-2-氧雜-環(huán)戊[a]菲-11-基酯的制備向100mg(0.23mmol)17-羥基渥曼青霉素在2mL CH2Cl2中的溶液中加入N，N-二乙基-N′-甲基-乙-1，2-二胺(45μL，0.28mmol)。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌12小時(shí)，然后在真空下濃縮。將殘余物溶解在EtOAc中并用己烷沉淀。將沉淀物用己烷洗滌兩次以產(chǎn)生黃色固體狀產(chǎn)物。MS(ESI)m/z 561(M+H)。
實(shí)例42乙酸4-{[(2-二乙氨基-乙基)-乙基-氨基]-亞甲基}-6，17-二羥基-1-甲氧基甲基-10，13-二甲基-3，7-二氧代-1，3，4，7，10，11，12，13，14，15，16，17-十二氫-2-氧雜-環(huán)戊[a]菲-11-基酯的制備向100mg(0.23mmol)17-羥基渥曼青霉素在2mL CH2Cl2中的溶液中加入N，N-二乙基-N′-乙基-乙-1，2-二胺(50μL)。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌12小時(shí)，然后在真空下濃縮。將殘余物溶解在EtOAc中并用己烷沉淀。將沉淀物用己烷洗滌兩次以產(chǎn)生黃色固體狀產(chǎn)物。MS(ESI)m/z 575(M+H)。
實(shí)例43乙酸4-{[苯甲基-(2-二甲氨基-乙基)-氨基]-亞甲基}-6，17-二羥基-1-甲氧基甲基-10，13-二甲基-3，7-二氧代-1，3，4，7，10，11，12，13，14，15，16，17-十二氫-2-氧雜-環(huán)戊[a]菲-11-基酯的制備向100mg(0.23mmol)17-羥基渥曼青霉素在2mL CH2Cl2中的溶液中加入N，N-二甲基-N′-苯甲基-乙-1，2-二胺(62μL)。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌12小時(shí)，然后在真空下濃縮。將殘余物溶解在EtOAc中并用己烷沉淀。將沉淀物用己烷洗滌兩次以產(chǎn)生黃色固體狀產(chǎn)物。MS(ESI)m/z 609(M+H)。
實(shí)例44乙酸6，17-二羥基-1-甲氧基甲基-10，13-二甲基-3，7-二氧代-4-(4-氧代-哌啶-1-基亞甲基)-1，3，4，7，10，11，12，13，14，15，16，17-十二氫-2-氧雜-環(huán)戊[a]菲-11-基酯的制備向17-OH渥曼青霉素溶液(25mg在2ml THF/H2O(4∶1)中，0.058mmol)中加入16mg碳酸鉀(0.116mmol)和9.5mg(0.06mmol)4-哌啶酮單水合物鹽酸鹽(98％純度)。在氮?dú)夥障略谑覝叵聰嚢璐朔磻?yīng)溶液。1小時(shí)后，將溶液倒入10ml二氯甲烷中，并將有機(jī)層分離且用鹽水(3ml)洗滌。在真空下蒸發(fā)溶劑后，將殘余固體溶解在4ml乙酸乙酯中，并加入約2ml己烷以產(chǎn)生沉淀物。過濾后，用2ml己烷洗滌固體，并在真空下干燥以產(chǎn)生22mg橙色粉末狀標(biāo)題化合物(1)。UVλmax(CH3CN/H2O)250nm，320nm，397nm；正性ESI-MSm/z 563[M+Na]+，530[M+H]+。
實(shí)例454-{[(2-二甲氨基-乙基)-乙基-氨基]-亞甲基}-6，17-二羥基-1-甲氧基甲基-10，13-二甲基-10，11，12，13，14，15，16，17-八氫-1H，4H-2-氧雜-環(huán)戊[a]菲-3，7-二酮的制備將11-去乙酰氧基-17-OH-渥曼青霉素(20mg，0.053mmol)溶解在2ml二氯甲烷中，并在氮?dú)夥障略谑覝叵聰嚢瑁瑫r(shí)加入N，N-二甲基-N′-乙基-乙二胺(0.053mmol，8.4μL)。反應(yīng)立即變成橙色。30分鐘后，蒸發(fā)溶劑，且使固體自乙酸乙酯/己烷(3∶1)中再結(jié)晶。過濾后，用己烷洗滌固體，并在真空下干燥以產(chǎn)生18mg橙色粉末狀標(biāo)題化合物。UVλmax(CH3CN/H2O)250nm，320nm，397nm；正性ESI-MSm/z 489[M+H]+。
實(shí)例46乙酸4-{[(2-二甲氨基-乙基)-乙基-氨基]-亞甲基}-6，17-二羥基-1-甲氧基甲基-10，13-二甲基-3，7-二氧代-1，3，4，7，10，11，12，13，14，15，16，17-十二氫-2-氧雜-環(huán)戊[a]菲-11-基酯的制備將17-羥基渥曼青霉素(129mg，0.3mmol)溶解在5ml二氯甲烷中并在氮?dú)夥障略谑覝叵聰嚢?，同時(shí)加入N，N-二甲基-N′-乙基-乙二胺(0.31mmol，56μL)。反應(yīng)溶液立即變成橙色。30分鐘后，蒸發(fā)溶劑，且使固體自乙酸乙酯/己烷(3∶1)中再結(jié)晶。過濾后，用己烷洗滌固體，并在真空下干燥以產(chǎn)生115mg橙色粉末狀標(biāo)題化合物。UVλmax(CH3CN/H2O)250nm，320nm，397nm；正性ESI-MSm/z 547[M+H]+。
實(shí)例47乙酸4-[1，4′]雙哌啶基-1′-基亞甲基-6，17-二羥基-1-甲氧基甲基-10，13-二甲基-3，7-二氧代-1，3，4，7，10，11，12，13，14，15，16，17-十二氫-2-氧雜-環(huán)戊[a]菲-11-基酯的制備將17-羥基渥曼青霉素(30mg，0.069mmol)溶解在2ml二氯甲烷中并在氮?dú)夥障略谑覝叵聰嚢?，同時(shí)加入4-哌啶并哌啶(0.069mmol，11.6mg)。反應(yīng)溶液立即變成橙色。30分鐘后，蒸發(fā)溶劑，且使固體自乙酸乙酯/己烷(2∶1)中再結(jié)晶。過濾后，用己烷洗滌固體，并在真空下干燥以產(chǎn)生約30mg橙色粉末狀標(biāo)題化合物。UVλmax(CH3CN/H2O)250nm，320nm，397nm；正性ESI-MSm/z 599[M+H]+。
實(shí)例48乙酸6，17-二羥基-1-甲氧基甲基-10，13-二甲基-4-嗎啉-4-基亞甲基-3，7-二氧代-1，3，4，7，10，11，12，13，14，15，16，17-十二氫-2-氧雜-環(huán)戊[a]菲-11-基酯的制備將17-羥基渥曼青霉素(50mg，0.116mmol)溶解在2ml二氯甲烷中并在氮?dú)夥障略谑覝叵聰嚢瑁瑫r(shí)加入嗎啉(0.12mmol，10μL)。反應(yīng)溶液立即變成橙色。30分鐘后，蒸發(fā)溶劑，且用己烷(2×3ml)洗滌固體，并在真空下干燥以產(chǎn)生50mg橙色粉末狀標(biāo)題化合物。UVλmax(CH3CN/H2O)250nm，320nm，397nm；正性ESI-MSm/z 540[M+H]+，518[M+H]+。
實(shí)例49丙酸4-{[(2-二甲氨基-乙基)-甲基-氨基]-亞甲基}-6，17-二羥基-1-甲氧基甲基-10，13-二甲基-3，7-二氧代-1，3，4，7，10，11，12，13，14，15，16，17-十二氫-2-氧雜-環(huán)戊[a]菲-11-基酯的制備向β-11-O-去乙酰基-11-O-丙?；?17-二氫渥曼青霉素(可根據(jù)Creemer，L.C；Kirst，H.A.；Vlahos，C.J.；Schultz，R.M.J Med Chem.1996，39，5021-5024制備)(100mg)在二氯甲烷(4ml)中的溶液中加入N，N，N-三甲基乙二胺(32μL)。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌，然后在減壓下濃縮。將殘余物與己烷和乙酸乙酯一起濕磨以產(chǎn)生硬的橙色泡沫體(0.12g，100％)。MS(ES+)547.2(M+H)+。
實(shí)例50(1E，4S，4aR，5R，6aS，7S，9aR)-1-[(二乙氨基)亞甲基]-5，7，11-三羥基-4-(甲氧基甲基)-4a，6a-二甲基-4a，5，6，6a，7，8，9，9a-八氫茚并[4，5-h]異苯并吡喃-2，10(1H，4H)-二酮的制備向17-羥基渥曼青霉素(1100mg)在甲醇(5mL)中的溶液中加入二乙胺(0.72mL)。48小時(shí)后，將反應(yīng)混合物在真空下濃縮。將殘余物溶解在EtOAc中，并用己烷沉淀。獲得黃色粉末(0.29mg)。MS462.2(M+H)+。
實(shí)例51(1Z，4S，4aR，5R，6aS，7S)-7，11-二羥基-4-(甲氧基甲基)-4a，6a-二甲基-2，10-二氧代-1-{12-氧代-16-[(3aR，4R，6aS)-2-氧代六氫-1H-噻吩并[3，4-d]咪唑-4-基]-5，8-二氧雜-2，11-二氮雜亞十六-1-基}-1，2，4，4a，5，6，6a，7，8，9，9a，10-十二氫茚并[4，5-h]異苯并吡喃-5-基乙酸酯的制備向27.9mg(0.0649mmol)17-羥基渥曼青霉素在0.2mL CHCl2和0.2mL CH3CN中的溶液中加入25.5mg(0.0681mmol)(+)-生物素基-3，6-二氧雜辛二胺。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌4小時(shí)。過濾反應(yīng)混合物并在真空下除去CH2Cl2以產(chǎn)生黃色泡沫(19mg，36％)。MS(ESI)m/z 805.8(M+1)。
實(shí)例52乙酸4-丁基硫烷基亞甲基-6，17-二羥基-1-甲氧基甲基-10，13-二甲基-3，7-二氧代-1，3，4，7，10，11，12，13，14，15，16，17-十二氫-2-氧雜-環(huán)戊[a]菲-11-基酯的制備向17-二氫渥曼青霉素(0.21g，0.49mmol)在二氯甲烷(2mL)中的溶液中加入正丁硫醇(90μL)，然后加入一滴三乙胺。在室溫下攪拌19小時(shí)后，再加入一滴三乙胺。攪拌3天后，在減壓下濃縮反應(yīng)混合物。通過快速色譜(乙酸乙酯/己烷)純化殘余物以產(chǎn)生橙黃色固體(82mg，40％)。MS(ES+)521.1(M+H)+。
實(shí)例5317-聚乙二醇化二-(1E，4S，4aR，5R，6aS，7S)-1-{[[3-(二甲氨基)丙基](甲基)氨基]亞甲基}-7，11-二羥基-4-(甲氧基甲基)-4a，6a-二甲基-2，10-二氧代-1，2，4，4a，5，6，6a，7，8，9，9a，10-十二氫茚并[4，5-h]異苯并吡喃-5-基乙酸酯的制備向雙17-羥基渥曼青霉素Peg5000(10g，參看圖66，也描述在2004年4月20日申請(qǐng)的早期美國申請(qǐng)案第10/828,474號(hào)的第30和33頁，其以引用的方式并入本文中)在30mL CH2Cl2的溶液中加入N，N，N′-三甲基-1，3-丙二胺(0.98mL，6.68mmol)。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌24小時(shí)，然后在真空下濃縮。用Et2O處理殘余物。通過過濾收集所得固體，并在真空下干燥以產(chǎn)生黃色固體(10.1g)。X＝(CH2OCH2)107的MS(ESI)m/z 6069(M+)。
實(shí)例5417-聚乙二醇化(1E，4S，4aR，5R，6aS，7S，9aR)-1-[(二乙氨基)亞甲基]-7，11-二羥基-4-(甲氧基甲基)-4a，6a-二甲基-2，10-二氧代-1，2，4，4a，5，6，6a，7，8，9，9a，10-十二氫茚并[4，5-h]異苯并吡喃-5-基乙酸酯的制備向17-聚乙二醇化-17-羥基渥曼青霉素(3g)在12mLCH2Cl2中的溶液中加入200μL二乙胺。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌過夜。在真空下除去CH2Cl2。將殘余物與Et2O一起濕磨以產(chǎn)生2.8g黃色粉末狀產(chǎn)物。
實(shí)例55圖1所示聚乙二醇化化合物的制備步驟A向mPEG5000-NH2(購自Nektar，3.0g，0.60mmol)在二氯甲烷(15mL)中的溶液中加入二碳酸二叔丁酯(0.28mL，1.2mmol)，然后加入三乙胺(0.4mL)。將混合物在室溫下攪拌，然后在減壓下濃縮以產(chǎn)生白色固體狀mPEG5000-NHBoc(3.0g)。
步驟B向mPEG5000-NHBoc(0.60mmol)在二甲基甲酰胺(30mL)中的0℃溶液中加入碘甲烷(0.4mL)，然后加入氫化鈉(在礦物油中的60％分散液，0.12g)。在室溫下攪拌過夜后，用水中止反應(yīng)混合物，并在減壓下蒸發(fā)到干燥。通過快速色譜純化殘余物以產(chǎn)生淺黃色固體狀mPEG5000-N(CH3)Boc。
步驟C向mPEG5000-N(CH3)Boc(2.4g)在二氯甲烷(100mL)中的溶液中加入三氟乙酸(2.5mL)。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌過夜，然后在減壓下濃縮以產(chǎn)生TFA(三氟乙酸)鹽形式的mPEG5000-NHCH3。
步驟D向TFA鹽形式的mPEG500O-NHCH3(2.5g，0.5mmol)在二氯甲烷中的懸浮液中加入三乙胺(0.3mL)，然后加入17-羥基渥曼青霉素(0.13g，0.3mmol)。攪拌過夜后，加入額外數(shù)量的17-羥基渥曼青霉素(0.12g，0.3mmol)和三乙胺(5滴)。在室溫下攪拌后，在減壓下濃縮混合物，并通過快速色譜(甲醇/氯仿)純化所得殘余物以產(chǎn)生金色片狀的mPEG5000NHCH3加合物形式的17-羥基渥曼青霉素(2.0g)。MS5321.0。
實(shí)例56(1Z，4S，4aR，5R，6aS，7S)-1-{[叔丁氨基]亞甲基}-7，11-二羥基-4-(甲氧基甲基)-4a，6a-二甲基-2，10-二氧代-1，2，4，4a，5，6，6a，7，8，9，9a，10-十二氫茚并[4，5-h]異苯并吡喃-5-基乙酸酯的制備向100mg(0.23mmol)17-羥基渥曼青霉素在2mL CH2Cl2中的溶液中加入49μL(0.46mmol)叔丁胺。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌過夜。在真空下除去CH2Cl2。將殘余物與Et2O一起濕磨以產(chǎn)生58mg(50％)橙色粉末狀產(chǎn)物。MS(ESI)m/z 504(M+1)。
實(shí)例57(1Z，4S，4aR，5R，6aS，7S)-1-{[3-二甲氨基-丙基氨基]亞甲基}-7，11-二羥基-4-(甲氧基甲基)-4a，6a-二甲基-2，10-二氧代-1，2，4，4a，5，6，6a，7，8，9，9a，10-十二氫茚并[4，5-h]異苯并吡喃-5-基乙酸酯的制備向100mg(0.23mmol)17-羥基渥曼青霉素在2mL CH2Cl2中的溶液中加入58μL(0.46mmol)N，N-二甲基-1，3-丙二胺。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌過夜。在真空下除去CH2Cl2。將殘余物與Et2O一起濕磨以產(chǎn)生74mg(60％)橙色粉末狀產(chǎn)物。MS(ESI)m/z533(M+1)。
實(shí)例58(1Z，4S，4aR，5R，6aS，7S)-7，11-二羥基-1-{[(2-巰乙基)氨基]亞甲基}-4-(甲氧基甲基)-4a，6a-二甲基-2，10-二氧代-1，2，4，4a，5，6，6a，7，8，9，9a，10-十二氫茚并[4，5-h]異苯并吡喃-5-基乙酸酯的制備向100mg(0.23mmol)17-羥基渥曼青霉素在2mL CH2Cl2中的溶液中加入32mg(0.278mmol)2-氨基-乙硫醇鹽酸鹽和三乙胺(45μL，0.325mmol)。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌4小時(shí)。加入水并除去CH2Cl2，通過Kimwipe棉紙塞過濾，并在真空下濃縮以產(chǎn)生黃色泡沫。MS(ESI)m/z 508.5(M+1)。
實(shí)例59(1Z，4S，4aR，5R，6aS，7S，9aR)-1-[(乙氨基)亞甲基]-7，11-二羥基-4-(甲氧基甲基)-4a，6a-二甲基-2，10-二氧代-1，2，4，4a，5，6，6a，7，8，9，9a，10-十二氫茚并[4，5-h]異苯并吡喃-5-基乙酸酯的制備向100mg(0.23mmol)17-羥基渥曼青霉素在2mL CH2Cl2中的溶液中加入100mg乙胺鹽酸鹽和100μL三乙胺。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌24小時(shí)。加入水并除去CH2Cl2，通過K2CO3過濾并在真空下濃縮。將殘余物溶解在EtOAc中，并用己烷沉淀以產(chǎn)生黃色粉末(32mg，29％)。MS(ESI)m/z 476.22813(M+1)。
實(shí)例60(1E，4S，4aR，5R，6aS，7S)-1-{[[3-(二甲氨基)丙基](甲基)氨基]亞甲基}-5，7，11-三羥基-4-(甲氧基甲基)-4a，6a-二甲基-4a，5，6，6a，7，8，9，9a-八氫茚并[4，5-h]異苯并吡喃-2，10(1H，4H)-二酮的制備向50mg(0.13mmol)11-去乙?；?17-羥基渥曼青霉素在2mLCH2Cl2中的溶液中加入38μL N，N，N′-三甲基丙二胺(0.26mmol)。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌24小時(shí)。在真空下除去CH2Cl2。將殘余物溶解在EtOAc中，并用己烷沉淀以產(chǎn)生黃色粉末(35mg，53％)。MS(ESI)m/z 505.29083(M+1)。
實(shí)例61(1Z，4S，4aR，5R，6aS，7S，9aR)-7，11-二羥基-1-(羥基亞甲基)-4-(甲氧基甲基)-4a，6a-二甲基-2，10-二氧代-1，2，4，4a，5，6，6a，7，8，9，9a，10-十二氫茚并[4，5-h]異苯并吡喃-5-基乙酸酯的制備將17-羥基-渥曼青霉素(20mg，0.047mmol)溶解在4mL乙腈和2mL水以及0.5mL三乙胺中。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌過夜。通過使用Nova-Pak HRC18，60A，6μm，19×300mm柱(Waters)的制備型HPLC在UV 254nm下分離標(biāo)題化合物(流動(dòng)相A是100ml乙腈和900ml水以及0.2ml三氟乙酸。流動(dòng)相B是900ml乙腈和100ml水以及0.2ml三氟乙酸。梯度為在20％B和80％A下0-5分鐘，在20％B到70％B下5-35分鐘，流率為20mL/min)。收集12分鐘峰時(shí)的餾份，并用CH2Cl2萃取。將有機(jī)層通過無水硫酸鈉干燥，并旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)到干燥。通過自1mL CH2Cl2和3mL庚烷中沉淀并使用氮?dú)馊缓笫褂胹peecdvac進(jìn)行干燥來獲得總共5mg黃色固體。LC/MS展示[M+H]449.31和[M-H]447.26。
實(shí)例62(1E，4S，4αR，5R，6αS，7S，9αR)-1-({叔丁基[2-(二甲氨基)乙基]氨基}亞甲基)-7，11-二羥基-4-(甲氧基甲基)-4α，6α-二甲基-2，10-二氧代-1，2，4，4α，5，6，6α，7，8，9，9α，10-十二氫茚并[4，5-h]異苯并吡喃-5-基乙酸酯的制備步驟A將叔丁基乙醇胺(12g，100mmol)在氯仿(100mL)中的溶液在氯化鈉/冰浴中冷卻到-10℃。在加入亞硫酰氯(10mL，在10mL氯仿中)后，移開冷卻浴，并用油浴代替。將反應(yīng)混合物在回流下加熱6小時(shí)，然后冷卻到室溫。收集沉淀物質(zhì)并用丙酮洗滌以產(chǎn)生白色固體狀2-(叔丁氨基)乙基氯鹽酸鹽。MS(ES+)m/z(M+H)＝136.2，138.2。
步驟B在密封管中將2-(叔丁氨基)乙基氯鹽酸鹽(1.2g，7.0mmol)溶解于二甲胺水溶液中(40重量％，22mL)。將混合物在140℃油浴中加熱6小時(shí)，冷卻到室溫，然后用固體碳酸鉀飽和。將混合物用乙酸乙酯萃取三次。將經(jīng)合并萃取物用無水硫酸鈉干燥，傾析并在減壓下濃縮以產(chǎn)生淺褐色液體狀N-叔丁基，N’，N’-二甲基乙二胺(0.57g，56％)。粗物質(zhì)不經(jīng)進(jìn)一步純化繼續(xù)用于下一步驟中。MS(ES+)m/z(M+H)＝145.3。
步驟C在室溫下，向粗N-叔丁基，N’，N’-二甲基乙二胺(0.57g，4.0mmol)在二氯甲烷(20mL)中的溶液中逐滴加入氯甲酸苯甲酯(0.85mL，6.0mmol)。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌過夜。在水處理后，通過半制備型逆相HPLC(采用5％乙腈/95％水/0.1％三氟乙酸到100％乙腈的梯度洗脫，歷經(jīng)40分鐘)純化粗產(chǎn)物以產(chǎn)生透明無色油狀N-苯甲氧基羰基-N-叔丁基，N’，N’-二甲基乙二胺三氟乙酸(0.47g，29％)。MS(ES+)m/z(M+H)＝279.15.
步驟D
將N-苯甲氧基羰基-N-叔丁基，N’，N’-二甲基乙二胺三氟乙酸(0.47g，1.2mmol)在乙醇(15mL)中的溶液用干冰脫氣。加入鈀/碳(10％，100mg)，然后加入濃鹽酸(300μL)。將混合物在50psi氫氣下在Parr氫化器上振蕩20小時(shí)，通過硅藻土墊過濾，并在減壓下濃縮以產(chǎn)生白色粉末狀N-叔丁基，N’，N’-二甲基乙二胺二鹽酸鹽(0.22g，85％)。MS(ES+)m/z(M+H)＝145.3。
步驟E向N-叔丁基，N’，N’-二甲基乙二胺二鹽酸鹽(0.12g，0.55mmol)在二氯甲烷(5mL)中的懸浮液中加入三乙胺(220μL，1.7mmol)。加入17-羥基渥曼青霉素(0.12g，0.28mmol)并將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌過夜，然后在減壓下濃縮。將殘余物溶解在DMSO/乙腈/水(1∶1∶0.5)中，并通過半制備型逆相HPLC(采用5％乙腈/95％水到100％乙腈的梯度洗脫，歷經(jīng)40分鐘)純化。將所收集的物質(zhì)與乙酸乙酯一起濕磨，并通過過濾收集以產(chǎn)生淺黃色粉末狀(1E，4S，4αR，5R，6αS，7S，9αR)-1-({叔丁基[2-(二甲氨基)乙基]氨基}亞甲基)-7，11-二羥基-4-(甲氧基甲基)-4α，6α-二甲基-2，10-二氧代-1，2，4，4α，5，6，6α，7，8，9，9α，10-十二氫茚并[4，5-h]異苯并吡喃-5-基乙酸酯。HRMS(ES+)m/z(M+H)＝575.33233。
實(shí)例63丁酸4-{[(2-二甲氨基-丙基)-甲基-氨基]-亞甲基}-6，17-二羥基-1-甲氧基甲基-10，13-二甲基-3，7-二氧代-1，3，4，7，10，11，12，13，14，15，16，17-十二氫-2-氧雜-環(huán)戊[a]菲-11-基酯的制備通過與實(shí)例48所述類似的方式，將二氯甲烷(2mL)中的β-11-O-去乙?；?11-O-丁酰基-17-二氫渥曼青霉素(80mg，0.17mmol)用N，N，N-三甲基丙二胺(58μL)處理。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌過夜，然后在減壓下濃縮。將殘余物通過逆相HPLC(采用5％乙腈/95％水到95％乙腈的梯度洗脫，歷經(jīng)40分鐘)純化以產(chǎn)生硬的橙色泡沫體狀標(biāo)題化合物(47mg，48％)。MS(ES+)m/z(M+H)＝575.4。
實(shí)例64乙酸4-{[(2-二甲氨基-丙基)-乙基-氨基]-亞甲基}-6，17-二羥基-1-甲氧基甲基-10，13-二甲基-3，7-二氧代-1，3，4，7，10，11，12，13，14，15，16，17-十二氫-2-氧雜-環(huán)戊[a]菲-11-基酯的制備在密封容器中將N，N-二甲氨基丙基氯鹽酸鹽(1.6g，10mmol)加入乙胺(70重量％水溶液，24mL，300mmol)中。將懸浮液在140℃油浴中加熱8小時(shí)。冷卻到室溫后，將混合物用固體碳酸鉀飽和，并用乙酸乙酯萃取三次。將經(jīng)合并萃取物用飽和氯化鈉水溶液洗滌一次，經(jīng)無水硫酸鎂干燥，過濾并在減壓下濃縮以產(chǎn)生粗N’-乙基-N，N-二甲基丙-1，3-二胺(500mg，38％)。MS(ES+)m/z(M+H)＝131.3。將粗N’-乙基-N，N-二甲基丙-1，3-二胺(0.50g，3.8mmol)在二氯甲烷(20mL)中的溶液用氯甲酸苯甲酯(0.82mL，5.7mmol)處理，然后在室溫下攪拌2小時(shí)。在減壓下濃縮反應(yīng)混合物后，將殘余物通過逆相HPLC(采用5％乙腈/95％水/0.1％三氟乙酸到95％乙腈的梯度洗脫，歷經(jīng)45分鐘)純化以產(chǎn)生透明無色漿狀的(3-二甲氨基丙基)-乙基-氨基甲酸苯甲酯三氟乙酸鹽(840mg，58％)。MS(ES+)m/z(M+H)＝265.4。
向(3-二甲氨基丙基)-乙基-氨基甲酸苯甲酯三氟乙酸鹽(0.84g，2.2mmol)在乙醇(30mL)和濃鹽酸(0.5mL，6mmol)中的溶液中加入鈀/碳(10％，50mg)。在50psi氫氣下振蕩懸浮液。在觀察到氫氣消耗已停止時(shí)，通過硅藻土墊過濾混合物，然后在減壓下濃縮以產(chǎn)生白色固體狀N′-乙基-N，N-二甲基丙-1，3-二胺二鹽酸鹽(400mg，89％)。MS(ES+)m/z(M+H)＝131.3。向N′-乙基-N，N-二甲基丙-1，3-二胺二鹽酸鹽(0.26g，1.3mmol)在二氯甲烷(5mL)中的懸浮液中加入三乙胺(0.51mL，3.9mmol)。在攪拌10分鐘后，用17-羥基渥曼青霉素(0.28g，0.65mmol)處理混合物。在室溫下攪拌過夜后，在減壓下濃縮混合物，然后通過逆相HPLC(采用5％乙腈/95％水到95％乙腈的梯度洗脫，歷經(jīng)45分鐘)純化。獲得鐵銹色固體狀標(biāo)題化合物(11.6mg)。MS(ES+)m/z(M+H)＝561.4。
實(shí)例65(1E，4S，4aR，5R，6aS，7S，9aR)-1-({4-[2-(2，5-二氧代-2，5-二氫-1H-吡咯-1-基)乙基]哌嗪-1-基}亞甲基)-7，11-二羥基-4-(甲氧基甲基)-4a，6a-二甲基-2，10-二氧代-1，2，4，4a，5，6，6a，7，8，9，9a，10-十二氫茚并[4，5-h]異苯并吡喃-5-基乙酸酯的制備向(3-二甲氨基丙基)-乙基-氨基甲酸苯甲酯三氟乙酸鹽(0.84g，2.2mmol)在乙醇(30mL)和濃鹽酸(0.5mL，6mmol)中的溶液中加入鈀/碳(10％，50mg)。在50psi氫氣下振蕩懸浮液。在觀察到氫氣消耗已停止時(shí)，通過硅藻土墊過濾混合物，然后在減壓下濃縮以產(chǎn)生白色固體狀N′-乙基-N，N-二甲基丙-1，3-二胺二鹽酸鹽(400mg，89％)。MS(ES+)m/z(M+H)＝131.3。向N′-乙基-N，N-二甲基丙-1，3-二胺二鹽酸鹽(0.26g，1.3mmol)在二氯甲烷(5mL)中的懸浮液中加入三乙胺(0.51mL，3.9mmol)。在攪拌10分鐘后，用17-羥基渥曼青霉素(0.28g，0.65mmol)處理混合物。在室溫下攪拌過夜后，在減壓下濃縮混合物，然后通過逆相HPLC(采用5％乙腈/95％水到95％乙腈的梯度洗脫，歷經(jīng)45分鐘)純化。獲得鐵銹色固體狀標(biāo)題化合物(11.6mg)。MS(ES+)m/z(M+H)＝561.4。
實(shí)例66PI3K的熒光偏振檢定因?yàn)榇藱z定通過測(cè)量抑制作用鑒別PI3激酶抑制劑，所以使用其確定本發(fā)明化合物的IC50。
材料反應(yīng)緩沖液20mM Hepes(pH 7.5)，2mM MgCl2，0.05％CHAPS和0.01％BME(新鮮加入)停止/檢測(cè)緩沖液100mM Hepes(pH 7.5)，4mM EDTA，0.05％CHAPSATP在水中20mMPIP2(diC8，目錄號(hào)P-4508)在水中1mM(MW＝856.5)GST-GRP在10％甘油中1.75mg/mL或1.4mg/mL紅色檢測(cè)劑(TAMRA)2.5μM平板Nunc 384孔黑色聚丙烯熒光平板方法通過在每個(gè)孔中放置5μL經(jīng)稀釋酶進(jìn)行檢定，然后加入5μL經(jīng)稀釋化合物(或9.5μL酶，然后DMSO中的0.5μL化合物)并混合。然后，加入10μL底物以開始反應(yīng)。將樣品培育30-60分鐘，然后通過加入20μL停止/檢測(cè)混合物停止反應(yīng)。
用反應(yīng)緩沖液稀釋PI3K(例如，在620μL反應(yīng)緩沖液中加入5μL或7.5μL PI3K)，且每孔中使用5μL經(jīng)稀釋酶。向每一孔中加入5μL反應(yīng)緩沖液或在緩沖液中稀釋的藥物(例如，4μL/100，所以在反應(yīng)中的最終DMSO為1％)。通過上下移液混合樣品?；蛘?，可將酶稀釋到1215μL。在此情況下，每孔加入9.8μL，且在DMSO中加入0.2μL化合物。
為制備1mL底物溶液，混合955μL反應(yīng)緩沖液、40μL PIP2和2.5μL ATP。向每個(gè)孔中加入10μL底物以開始反應(yīng)。這導(dǎo)致每個(gè)反應(yīng)中有20μM PIP2和25μM ATP。
通過將4μL紅色檢測(cè)劑和1.6μL或2.0μL GST-GRP與1mL停止緩沖液混合來制備停止/檢測(cè)混合物，這得到10nM探測(cè)劑和70nM GST-GRP。向每個(gè)孔中加入20μL停止/檢測(cè)混合物以停止反應(yīng)。在將紅色探測(cè)劑溶液保持黑暗30-90分鐘后讀取平板。
對(duì)于零時(shí)間點(diǎn)而言，剛好在加入底物之前向酶中加入停止/檢測(cè)混合物。對(duì)于外部對(duì)照而言，將停止/檢測(cè)混合物加入緩沖液(無酶)和底物中，或只加入緩沖液(無底物)中。
匯集的PI3K制劑具有0.25mg/mL的蛋白濃度。推薦的反應(yīng)為每20μL具有0.06μL(0.015μg/20μL)或0.01125μg/15μL或0.75μg/mL。
在具有過濾器的機(jī)器上讀取平板以供Tamra之用。單位為mP，在無酶對(duì)照的情況下，讀數(shù)為約190-220mP單位。30分鐘后，完全活性酶將熒光偏振降低到70-100mP?；钚詂pd將mP值升高到對(duì)照的一半或升高到120-150mP單位。結(jié)果列在表1和2中。
實(shí)例67mTOR激酶檢定方法如下通過DELFIA格式在96孔板中進(jìn)行純化酶的人類TOR檢定(參看Toral-Barza等人，Biochem Biophys.Res.Commun.2005 June 24；332(1)304-10)。首先將酶在激酶檢定緩沖液(10mM Hepes(pH 7.4)，50mM NaCl，50mM b-甘油磷酸鹽，10mM MnCl2，0.5mM DTT，0.25mM微囊藻毒素LR和100mg/mL BSA)中稀釋。在每個(gè)孔中將12mL經(jīng)稀釋酶與0.5mL測(cè)試抑制劑或?qū)φ彰絼┒讈嗧?DMSO)短暫混合。通過加入12.5mL含有ATP和His6-S6K的激酶檢定緩沖液開始激酶反應(yīng)，產(chǎn)生25mL含有800ng/mLFLAG-TOR、100mM ATP和1.25mM His6-S6K的最終反應(yīng)體積。將反應(yīng)板在室溫下伴隨輕緩振蕩培育2小時(shí)(線性1-6小時(shí))，然后通過加入25mL停止緩沖液(20mM Hepes(pH 7.4)，20mM EDTA，20mM EGTA)終止。在室溫下使用經(jīng)銪-N1-ITC(Eu)(每抗體10.4Eu，PerkinElmer)標(biāo)記的單克隆抗P(T389)-p70S6K抗體(1A5，Cell Signaling)進(jìn)行磷酸化(Thr-389)His6-S6K的DELFIA檢測(cè)。DELFIA檢定緩沖液和增強(qiáng)溶液可購自PerkinElmer。將45mL經(jīng)終止的激酶反應(yīng)混合物轉(zhuǎn)移到含有55mL PBS的MaxiSorp平板(Nunc)中。連接His6-S6K達(dá)2小時(shí)，之后抽吸孔并用PBS洗滌一次。加入100mL含有40ng/mL Eu-P(T389)-S6K抗體的DELFIA檢定緩沖液。伴隨輕緩攪拌繼續(xù)抗體結(jié)合1小時(shí)。然后抽吸孔，并用含有0.05％Tween-20的PBS(PBST)洗滌4次。向每個(gè)孔中加入100mL DELFIA增強(qiáng)溶液，并在PerkinElmer Victor型平板讀取器中讀取平板。獲得的數(shù)據(jù)用來計(jì)算酶活性和潛在抑制劑對(duì)酶的抑制作用。
實(shí)例68活體外IGF-1誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)的Ratl-IGFl檢定方法將Ratl細(xì)胞涂在6孔培養(yǎng)板中，并使其血清饑餓24小時(shí)。將血清饑餓的細(xì)胞用對(duì)照媒劑或各種濃度的17-HWT處理2小時(shí)，用IGF-1(100ng/mL)刺激30分鐘。使用NuPAGE-LDS樣品緩沖液(Invitrogen)制備總的細(xì)胞溶解產(chǎn)物，聲波降解處理，然后通過離心凈化。使相同量的蛋白經(jīng)受使用NuPAGE電泳系統(tǒng)的免疫印跡法分析，并用磷-AKT(S473)(總AKT抗體)(Signaling Technology)探測(cè)。
實(shí)例69腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)檢定人類腫瘤細(xì)胞都從ATCC獲得，并使用標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞培養(yǎng)方法培養(yǎng)。將細(xì)胞以每孔1000到3000個(gè)細(xì)胞涂在96孔培養(yǎng)板中。涂布一天后，單獨(dú)用各種劑量的PI3K抑制劑化合物4或化合物5或與低恒定劑量的MEK抑制劑2-(2-氯-4-碘苯胺基)-N-(環(huán)丙基甲氧基-3，4-二氟苯甲酰胺)(1μg/ml)或UO126(5μg/ml)一起處理細(xì)胞。UO126也稱為1，4-二氨基-2，3-二氰基-1，4-雙[2-氨基苯硫基]丁二烯。在一些實(shí)驗(yàn)中，單獨(dú)用各種劑量的MEK抑制劑(2-(2-氯-4-碘苯胺基)-N-(環(huán)丙基甲氧基-3，4-二氟苯甲酰胺))或HER2/neu抑制劑HKI-272或mTOR抑制劑CCI-779，或與低恒定劑量的化合物4(0.1μg/ml)一起處理細(xì)胞。在所有組合檢定中，都在同一個(gè)96孔板以及經(jīng)媒劑(DMSO)處理的對(duì)照孔中，或單獨(dú)用組合中所包括的相同劑量的第二藥物進(jìn)行單一和組合處理。另外，也在同一個(gè)檢定板上進(jìn)行對(duì)照組合，其中實(shí)驗(yàn)組合中所用的低劑量藥物與其自身組合以評(píng)估檢定變化性。藥物處理后3天，通過染料MTS的代謝轉(zhuǎn)化(被存活細(xì)胞轉(zhuǎn)化)這一確定的細(xì)胞增殖檢定方法測(cè)定存活細(xì)胞密度。使用購自Promega Corp.(Madison，WI)的檢定試劑盒，遵循試劑盒中提供的實(shí)驗(yàn)方案來進(jìn)行檢定。在96孔平板讀取器中通過測(cè)量490nm下的吸光度來讀取MTS檢定結(jié)果。每一種處理的作用都計(jì)算成以生長(zhǎng)在同一個(gè)培養(yǎng)板中經(jīng)媒劑DMSO處理的細(xì)胞為基準(zhǔn)的對(duì)照生長(zhǎng)的百分率。
協(xié)同作用的數(shù)據(jù)分析和計(jì)算對(duì)于每一組合生長(zhǎng)抑制實(shí)驗(yàn)而言，產(chǎn)生單一藥物和組合的劑量響應(yīng)曲線。為評(píng)估協(xié)同作用，通過使用公式[生長(zhǎng)％(組合)/生長(zhǎng)％(只有第二藥物)]×100由單獨(dú)第二藥物所獲得的值標(biāo)準(zhǔn)化組合劑量曲線，以產(chǎn)生標(biāo)準(zhǔn)化組合劑量曲線。如果標(biāo)準(zhǔn)化劑量曲線與單一藥物的曲線重疊，那么將組合活性確定為加成性生長(zhǎng)抑制作用。如果標(biāo)準(zhǔn)化劑量曲線相對(duì)于對(duì)應(yīng)單一處理顯示較大的抑制作用，那么將組合活性確定為協(xié)同性生長(zhǎng)抑制作用。在每一個(gè)實(shí)驗(yàn)中，來自對(duì)照組合的數(shù)據(jù)展示完全加成性生長(zhǎng)抑制曲線。
Western印跡法分析將細(xì)胞涂在6孔培養(yǎng)板中。24小時(shí)后，將細(xì)胞用指定的單一藥劑或組合藥劑在完全生長(zhǎng)培養(yǎng)基中處理16小時(shí)。如早期在Yu，K.等人，Endocr.Relat.Cancer.2001年9月8(3)249-58中所述，制備蛋白溶解產(chǎn)物以用于Western印跡法分析。
細(xì)胞凋亡檢定將細(xì)胞以每孔3000個(gè)細(xì)胞的密度涂在96孔板中。24小時(shí)后，用指定的單一藥劑或組合藥劑處理細(xì)胞。根據(jù)廠家提供的實(shí)驗(yàn)方案，在通過Apo-ONE Caspase-3/7檢定試劑盒(目錄號(hào)G7791，Promega Corp.)藥物處理后24小時(shí)和48小時(shí)時(shí)測(cè)量細(xì)胞凋亡。將檢定混合物加入細(xì)胞中，并在室溫下伴隨輕緩混合使用平板振蕩器培育3小時(shí)。使用VictorWallac平板讀取器讀取每個(gè)孔的熒光。每個(gè)實(shí)驗(yàn)板都含有空白孔(無細(xì)胞)作為背景熒光，從所有孔中減去背景熒光得到實(shí)驗(yàn)值。數(shù)據(jù)是表示為相對(duì)熒光單位(RFLU)或Apo-ONE單位。
權(quán)利要求
1.一種式I化合物 其中R1選自由NR4R5、SR6和OR7組成的群組；R3選自由氫、甲?；王；M成的群組；R3選自由氫、羥基、烷氧基、烷酰氧基、＝O、酰氧基和羰基組成的群組；R4和R5獨(dú)立選自由氫、羥基、烷基、烯基、雜環(huán)基、芳基、雜芳基、芳烷基和PEG組成的群組；且其中R4和R5視情況連接以形成環(huán)；R6選自由烷基、芳基、雜芳基、芳烷基和PEG組成的群組；且R7選自由氫、烷基、芳基、雜芳基、芳烷基和PEG組成的群組；R8選自由羥基、酰氧基和烷氧基組成的群組；和其鹽、溶劑化物和水合物，只要所述化合物不是式V化合物 其中R9為烷基，或具有單一非重復(fù)式(B)的藥物-聚合物接合物 其中R10為-O-、-NH-或-S-；R11為烷基、環(huán)烷基或芳基；R3為H、＝O、-O-COC4H9或OR12；R12為H、COR13或烷基；R13為烷基、H、芳基或-CH2-芳基；且n為1-1000。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物，其中R1為NR4R5。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的化合物，其中R2為氫。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的化合物，其中R2為甲?；?br> 5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的化合物，其中R3為酰氧基。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的化合物，其中R3為乙酰氧基。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物，其中R8為羥基。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物，其中R1選自由NR4R5、SR6和OR7組成的群組；R2選自由氫和甲酰基組成的群組；R3選自由氫、羥基和酰氧基組成的群組；R4和R5獨(dú)立選自由氫、烷基、烯基、雜環(huán)基、芳基、芳烷基和PEG組成的群組；且其中R4和R5視情況連接以形成環(huán)；R6為烷基；R7為氫；R8為羥基；和其鹽、溶劑化物和水合物。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物，其選自由下列各物組成的群組(1E，4S，4aR，5R，6aS，7S，9aR)-1-[(二乙氨基)亞甲基]-7，11-二羥基-4-(甲氧基甲基)-4a，6a-二甲基-2，10-二氧代-1，2，4，4a，5，6，6a，7，8，9，9a，10-十二氫茚并[4，5-h]異苯并吡喃-5-基乙酸酯；(1E，4S，4aR，5R，6aS，7S，9aR)-7，11-二羥基-4-(甲氧基甲基)-4a，6a-二甲基-2，10-二氧代-1-(吡咯烷-1-基亞甲基)-1，2，4，4a，5，6，6a，7，8，9，9a，10-十二氫茚并[4，5-h]異苯并吡喃-5-基乙酸酯；(1E，4S，4aR，5R，6aS，7S，9aR)-1-(苯胺基亞甲基)-7，11-二羥基-4-(甲氧基甲基)-4a，6a-二甲基-2，10-二氧代-1，2，4，4a，5，6，6a，7，8，9，9a，10-十二氫茚并[4，5-h]異苯并吡喃-5-基乙酸酯；(1E，4S，4aR，5R，6aS，7S)-1-{[叔丁基(2-羥乙基)氨基]亞甲基}-7，11-二羥基-4-(甲氧基甲基)-4a，6a-二甲基-2，10-二氧代-1，2，4，4a，5，6，6a，7，8，9，9a，10-十二氫茚并[4，5-h]異苯并吡喃-5-基乙酸酯；(1E，4S，4aR，5R，6aS，7S)-1-{[[3-(二甲氨基)丙基](甲基)氨基]亞甲基}-7，11-二羥基-4-(甲氧基甲基)-4a，6a-二甲基-2，10-二氧代-1，2，4，4a，5，6，6a，7，8，9，9a，10-十二氫茚并[4，5-h]異苯并吡喃-5-基乙酸酯；(1E，4S，4aR，5R，6aS，7S)-7，11-二羥基-4-(甲氧基甲基)-4a，6a-二甲基-1-{[甲基(1-甲基吡咯烷-3-基)氨基]亞甲基}-2，10-二氧代-1，2，4，4a，5，6，6a，7，8，9，9a，10-十二氫茚并[4，5-h]異苯并吡喃-5-基乙酸酯；(1E，4S，4aR，5R，6aS，7S)-1-[(4-環(huán)己基哌嗪-1-基)亞甲基]-7，11-二羥基-4-(甲氧基甲基)-4a，6a-二甲基-2，10-二氧代-1，2，4，4a，5，6，6a，7，8，9，9a，10-十二氫茚并[4，5-h]異苯并吡喃-5-基乙酸酯；(1E，4S，4aR，5R，6aS，7S)-1-{[丁基(甲基)氨基]亞甲基}-7，11-二羥基-4-(甲氧基甲基)-4a，6a-二甲基-2，10-二氧代-1，2，4，4a，5，6，6a，7，8，9，9a，10-十二氫茚并[4，5-h]異苯并吡喃-5-基乙酸酯；(1E，4S，4aR，5R，6aS，7S)-1-{[環(huán)己基(甲基)氨基]亞甲基}-7，11-二羥基-4-(甲氧基甲基)-4a，6a-二甲基-2，10-二氧代-1，2，4，4a，5，6，6a，7，8，9，9a，10-十二氫茚并[4，5-h]異苯并吡喃-5-基乙酸酯；(1E，4S，4aR，5R，6aS，7S)-1-[(4-苯甲基哌嗪-1-基)亞甲基]-7，11-二羥基-4-(甲氧基甲基)-4a，6a-二甲基-2，10-二氧代-1，2，4，4a，5，6，6a，7，8，9，9a，10-十二氫茚并[4，5-h]異苯并吡喃-5-基乙酸酯；(1E，4S，4aR，5R，6aS，7S)-7，11-二羥基-4-(甲氧基甲基)-4a，6a-二甲基-2，10-二氧代-1-(哌啶-1-基亞甲基)-1，2，4，4a，5，6，6a，7，8，9，9a，10-十二氫茚并[4，5-h]異苯并吡喃-5-基乙酸酯；(1E，4S，4aR，5R，6aS，7S)-1-(3，4-二氫異喹啉-2(1H)-基亞甲基)-7，11-二羥基-4-(甲氧基甲基)-4a，6a-二甲基-2，10-二氧代-1，2，4，4a，5，6，6a，7，8，9，9a，10-十二氫茚并[4，5-h]異苯并吡喃-5-基乙酸酯；(1E，4S，4aR，5R，6aS，7S)-7，11-二羥基-4-(甲氧基甲基)-4a，6a-二甲基-2，10-二氧代-1-[(4-苯基哌嗪-1-基)亞甲基]-1，2，4，4a，5，6，6a，7，8，9，9a，10-十二氫茚并[4，5-h]異苯并吡喃-5-基乙酸酯；(1E，4S，4aR，5R，6aS，7S)-7，11-二羥基-4-(甲氧基甲基)-4a，6a-二甲基-1-[(4-甲基哌嗪-1-基)亞甲基]-2，10-二氧代-1，2，4，4a，5，6，6a，7，8，9，9a，10-十二氫茚并[4，5-h]異苯并吡喃-5-基乙酸酯；(1E，4S，4aR，5R，6aS，7S)-7，11-二羥基-4-(甲氧基甲基)-4a，6a-二甲基-2，10-二氧代-1-[(4-苯基哌啶-1-基)亞甲基]-1，2，4，4a，5，6，6a，7，8，9，9a，10-十二氫茚并[4，5-h]異苯并吡喃-5-基乙酸酯；(1E，4S，4aR，5R，6aS，7S)-7-(甲酰氧基)-11-羥基-4-(甲氧基甲基)-4a，6a-二甲基-2，10-二氧代-1-(吡咯烷-1-基亞甲基)-1，2，4，4a，5，6，6a，7，8，9，9a，10-十二氫茚并[4，5-h]異苯并吡喃-5-基乙酸酯；(1E，4S，4aR，5R，6aS，7S)-1-[(二烯丙氨基)亞甲基]-7-(甲酰氧基)-11-羥基-4-(甲氧基甲基)-4a，6a-二甲基-2，10-二氧代-1，2，4，4a，5，6，6a，7，8，9，9a，10-十二氫茚并[4，5-h]異苯并吡喃-5-基乙酸酯；(1E，4S，4aR，5R，6aS，7S)-1-[(二乙氨基)亞甲基]-7-(甲酰氧基)-11-羥基-4-(甲氧基甲基)-4a，6a-二甲基-2，10-二氧代-1，2，4，4a，5，6，6a，7，8，9，9a，10-十二氫茚并[4，5-h]異苯并吡喃-5-基乙酸酯；乙酸4-{[雙-(2-羥基-乙基)-氨基]-亞甲基}-6，17-二羥基-1-甲氧基甲基-10，13-二甲基-3，7-二氧代-1，3，4，7，10，11，12，13，14，15，16，17-十二氫-2-氧雜-環(huán)戊[a]菲-11-基酯；乙酸4-[(叔丁基-甲基-氨基)-亞甲基]-6，17-二羥基-1-甲氧基甲基-10，13-二甲基-3，7-二氧代-1，3，4，7，10，11，12，13，14，15，16，17-十二氫-2-氧雜-環(huán)戊[a]菲-11-基酯；乙酸4-{[雙-(3-二甲氨基-丙基)-氨基]-亞甲基}-6，17-二羥基-1-甲氧基甲基-10，13-二甲基-3，7-二氧代-1，3，4，7，10，11，12，13，14，15，16，17-十二氫-2-氧雜-環(huán)戊[a]菲-11-基酯；1-(11-乙酰氧基-6，17-二羥基-1-甲氧基甲基-10，13-二甲基-3，7-二氧代-1，7，10，11，12，13，14，15，16，17-十氫-2-氧雜-環(huán)戊[a]亞菲-4-基甲基)-哌啶-4-甲酸甲酯；1-(11-乙酰氧基-6，17-二羥基-1-甲氧基甲基-10，13-二甲基-3，7-二氧代-1，7，10，11，12，13，14，15，16，17-十氫-2-氧雜-環(huán)戊[a]亞菲-4-基甲基)-哌啶-4-甲酸；4-[(11-乙酰氧基-6，17-二羥基-1-甲氧基甲基-10，13-二甲基-3，7-二氧代-1，7，10，11，12，13，14，15，16，17-十氫-2-氧雜-環(huán)戊[a]亞菲-4-基甲基)-甲基-氨基]-2，5-二甲基-己-2-烯酸甲酯；乙酸6，17-二羥基-1-甲氧基甲基-4-[({3-[4-(4-甲氧基-苯基)-哌嗪-1-基]-丙基}-甲基-氨基)-亞甲基]-10，13-二甲基-3，7-二氧代-1，3，4，7，10，11，12，13，14，15，16，17-十二氫-2-氧雜-環(huán)戊[a]菲-11-基酯；乙酸6，17-二羥基-1-甲氧基甲基-10，13-二甲基-4-({甲基-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-丙基]-氨基}-亞甲基)-3，7-二氧代-1，3，4，7，10，11，12，13，14，15，16，17-十二氫-2-氧雜-環(huán)戊[a]菲-11-基酯；乙酸6，17-二羥基-1-甲氧基甲基-10，13-二甲基-4-{[甲基-(3-嗎啉-4-基-丙基)-氨基]-亞甲基}-3，7-二氧代-1，3，4，7，10，11，12，13，14，15，16，17-十二氫-2-氧雜-環(huán)戊[a]菲-11-基酯；乙酸4-{[(2-苯磺?；?乙基)-(3-二乙氨基-丙基)-氨基]-亞甲基}-6，17-二羥基-1-甲氧基甲基-10，13-二甲基-3，7-二氧代-1，3，4，7，10，11，12，13，14，15，16，17-十二氫-2-氧雜-環(huán)戊[a]菲-11-基酯；乙酸4-{[(1-氮雜-雙環(huán)[3.3.1]壬-5-基甲基)-苯甲基-氨基]-亞甲基}-6，17-二羥基-1-甲氧基甲基-10，13-二甲基-3，7-二氧代-1，3，4，7，10，11，12，13，14，15，16，17-十二氫-2-氧雜-環(huán)戊[a]菲-11-基酯；乙酸6，17-二羥基-1-甲氧基甲基-10，13-二甲基-4-[4-(3-嗎啉-4-基-丙基)-哌嗪-1-基亞甲基]-3，7-二氧代-1，3，4，7，10，11，12，13，14，15，16，17-十二氫-2-氧雜-環(huán)戊[a]菲-11-基酯；乙酸4-{[(2-二甲氨基-乙基)-甲基-氨基]-亞甲基}-6，17-二羥基-1-甲氧基甲基-10，13-二甲基-3，7-二氧代-1，3，4，7，10，11，12，13，14，15，16，17-十二氫-2-氧雜-環(huán)戊[a]菲-11-基酯；乙酸4-[4-(3-二甲氨基-丙基)-哌嗪-1-基亞甲基]-6，17-二羥基-1-甲氧基甲基-10，13-二甲基-3，7-二氧代-1，3，4，7，10，11，12，13，14，15，16，17-十二氫-2-氧雜-環(huán)戊[a]菲-11-基酯；乙酸6，17-二羥基-1-甲氧基甲基-10，13-二甲基-4-[4-(2-嗎啉-4-基-乙基)-哌嗪-1-基亞甲基]-3，7-二氧代-1，3，4，7，10，11，12，13，14，15，16，17-十二氫-2-氧雜-環(huán)戊[a]菲-11-基酯；乙酸6，17-二羥基-1-甲氧基甲基-10，13-二甲基-4-[4-(1-甲基-哌啶-4-基)-哌嗪-1-基亞甲基]-3，7-二氧代-1，3，4，7，10，11，12，13，14，15，16，17-十二氫-2-氧雜-環(huán)戊[a]菲-11-基酯；[(11-乙酰氧基-6，17-二羥基-1-甲氧基甲基-10，13-二甲基-3，7-二氧代-1，7，10，11，12，13，14，15，16，17-十氫-2-氧雜-環(huán)戊[a]亞菲-4-基甲基)-甲基-氨基]-乙酸叔丁酯；乙酸4-{[(2，3-二羥基-丙基)-甲基-氨基]-亞甲基}-6，17-二羥基-1-甲氧基甲基-10，13-二甲基-3，7-二氧代-1，3，4，7，10，11，12，13，14，15，16，17-十二氫-2-氧雜-環(huán)戊[a]菲-11-基酯；4-[(11-乙酰氧基-6，17-二羥基-1-甲氧基甲基-10，13-二甲基-3，7-二氧代-1，7，10，11，12，13，14，15，16，17-十氫-2-氧雜-環(huán)戊[a]亞菲-4-基甲基)-甲基-氨基]-丁酸；1-(11-乙酰氧基-6，17-二羥基-1-甲氧基甲基-10，13-二甲基-3，7-二氧代-1，7，10，11，12，13，14，15，16，17-十氫-2-氧雜-環(huán)戊[a]亞菲-4-基甲基)-吖丁啶-2-甲酸；1-(11-乙酰氧基-6，17-二羥基-1-甲氧基甲基-10，13-二甲基-3，7-二氧代-1，7，10，11，12，13，14，15，16，17-十氫-2-氧雜-環(huán)戊[a]亞菲-4-基甲基)-吡咯烷-2-甲酸甲酯；乙酸4-{[苯甲基-(2-氰基-乙基)-氨基]-亞甲基}-6，17-二羥基-1-甲氧基甲基-10，13-二甲基-3，7-二氧代-1，3，4，7，10，11，12，13，14，15，16，17-十二氫-2-氧雜-環(huán)戊[a]菲-11-基酯；乙酸4-{[(2-二乙氨基-乙基)-甲基-氨基]-亞甲基}-6，17-二羥基-1-甲氧基甲基-10，13-二甲基-3，7-二氧代-1，3，4，7，10，11，12，13，14，15，16，17-十二氫-2-氧雜-環(huán)戊[a]菲-11-基酯；乙酸4-{[(2-二乙氨基-乙基)-乙基-氨基]-亞甲基}-6，17-二羥基-1-甲氧基甲基-10，13-二甲基-3，7-二氧代-1，3，4，7，10，11，12，13，14，15，16，17-十二氫-2-氧雜-環(huán)戊[a]菲-11-基酯；乙酸4-{[苯甲基-(2-二甲氨基-乙基)-氨基]-亞甲基}-6，17-二羥基-1-甲氧基甲基-10，13-二甲基-3，7-二氧代-1，3，4，7，10，11，12，13，14，15，16，17-十二氫-2-氧雜-環(huán)戊[a]菲-11-基酯；乙酸6，17-二羥基-1-甲氧基甲基-10，13-二甲基-3，7-二氧代-4-(4-氧代-哌啶-1-基亞甲基)-1，3，4，7，10，11，12，13，14，15，16，17-十二氫-2-氧雜-環(huán)戊[a]菲-11-基酯；4-{[(2-二甲氨基-乙基)-乙基-氨基]-亞甲基}-6，17-二羥基-1-甲氧基甲基-10，13-二甲基-10，11，12，13，14，15，16，17-八氫-1H，4H-2-氧雜-環(huán)戊[a]菲-3，7-二酮；乙酸4-{[(2-二甲氨基-乙基)-乙基-氨基]-亞甲基}-6，17-二羥基-1-甲氧基甲基-10，13-二甲基-3，7-二氧代-1，3，4，7，10，11，12，13，14，15，16，17-十二氫-2-氧雜-環(huán)戊[a]菲-11-基酯；乙酸4-[1，4′]雙哌啶基-1′-基亞甲基-6，17-二羥基-1-甲氧基甲基-10，13-二甲基-3，7-二氧代-1，3，4，7，10，11，12，13，14，15，16，17-十二氫-2-氧雜-環(huán)戊[a]菲-11-基酯；乙酸6，17-二羥基-1-甲氧基甲基-10，13-二甲基-4-嗎啉-4-基亞甲基-3，7-二氧代-1，3，4，7，10，11，12，13，14，15，16，17-十二氫-2-氧雜-環(huán)戊[a]菲-11-基酯；丙酸4-{[(2-二甲氨基-乙基)-甲基-氨基]-亞甲基}-6，17-二羥基-1-甲氧基甲基-10，13-二甲基-3，7-二氧代-1，3，4，7，10，11，12，13，14，15，16，17-十二氫-2-氧雜-環(huán)戊[a]菲-11-基酯；(1E，4S，4aR，5R，6aS，7S，9aR)-1-[(二乙氨基)亞甲基]-5，7，11-三羥基-4-(甲氧基甲基)-4a，6a-二甲基-4a，5，6，6a，7，8，9，9a-八氫茚并[4，5-h]異苯并吡喃-2，10(1H，4H)-二酮；乙酸4-丁基硫烷基亞甲基-6，17-二羥基-1-甲氧基甲基-10，13-二甲基-3，7-二氧代-1，3，4，7，10，11，12，13，14，15，16，17-十二氫-2-氧雜-環(huán)戊[a]菲-11-基酯；17-聚乙二醇化二-(1E，4S，4aR，5R，6aS，7S)-1-{[[3-(二甲氨基)丙基](甲基)氨基]亞甲基}-7，11-二羥基-4-(甲氧基甲基)-4a，6a-二甲基-2，10-二氧代-1，2，4，4a，5，6，6a，7，8，9，9a，10-十二氫茚并[4，5-h]異苯并吡喃-5-基乙酸酯；如圖1所示的聚乙二醇化17-羥基渥曼青霉素(17-hydroxywortmannin)化合物；(1E，4S，4aR，5R，6aS，7S)-1-{[[3-(二甲氨基)丙基](甲基)氨基]亞甲基}-5，7，11-三羥基-4-(甲氧基甲基)-4a，6a-二甲基-4a，5，6，6a，7，8，9，9a-八氫茚并[4，5-h]異苯并吡喃-2，10(1H，4H)-二酮；(1E，4S，4αR，5R，6αS，7S，9αR)-1-({叔丁基[2-(二甲氨基)乙基]氨基}亞甲基)-7，11-二羥基-4-(甲氧基甲基)-4α，6α-二甲基-2，10-二氧代-1，2，4，4α，5，6，6α，7，8，9，9α，10-十二氫茚并[4，5-h]異苯并吡喃-5-基乙酸酯；丁酸4-{[(2-二甲氨基-丙基)-甲基-氨基]-亞甲基}-6，17-二羥基-1-甲氧基甲基-10，13-二甲基-3，7-二氧代-1，3，4，7，10，11，12，13，14，15，16，17-十二氫-2-氧雜-環(huán)戊[a]菲-11-基酯；乙酸4-{[(2-二甲氨基-丙基)-乙基-氨基]-亞甲基}-6，17-二羥基-1-甲氧基甲基-10，13-二甲基-3，7-二氧代-1，3，4，7，10，11，12，13，14，15，16，17-十二氫-2-氧雜-環(huán)戊[a]菲-11-基酯；(1E，4S，4aR，5R，6aS，7S，9aR)-1-({4-[2-(2，5-二氧代-2，5-二氫-1H-吡咯-1-基)乙基]哌嗪-1-基}亞甲基)-7，11-二羥基-4-(甲氧基甲基)-4a，6a-二甲基-2，10-二氧代-1，2，4，4a，5，6，6a，7，8，9，9a，10-十二氫茚并[4，5-h]異苯并吡喃-5-基乙酸酯；(1Z，4S，4aR，5R，6aS，7S)-7，11-二羥基-4-(甲氧基甲基)-4a，6a-二甲基-2，10-二氧代-1-{12-氧代-16-[(3aR，4R，6aS)-2-氧代六氫-1H-噻吩并[3，4-d]咪唑-4-基]-5，8-二氧雜-2，11-二氮雜亞十六-1-基}-1，2，4，4a，5，6，6a，7，8，9，9a，10-十二氫茚并[4，5-h]異苯并吡喃-5-基乙酸酯；17-聚乙二醇化(1E，4S，4aR，5R，6aS，7S，9aR)-1-[(二乙氨基)亞甲基]-7，11-二羥基-4-(甲氧基甲基)-4a，6a-二甲基-2，10-二氧代-1，2，4，4a，5，6，6a，7，8，9，9a，10-十二氫茚并[4，5-h]異苯并吡喃-5-基乙酸酯；(1Z，4S，4aR，5R，6aS，7S)-1-{[叔丁氨基]亞甲基}-7，11-二羥基-4-(甲氧基甲基)-4a，6a-二甲基-2，10-二氧代-1，2，4，4a，5，6，6a，7，8，9，9a，10-十二氫茚并[4，5-h]異苯并吡喃-5-基乙酸酯；(1Z，4S，4aR，5R，6aS，7S)-1-{[3-二甲氨基-丙基氨基]亞甲基}-7，11-二羥基-4-(甲氧基甲基)-4a，6a-二甲基-2，10-二氧代-1，2，4，4a，5，6，6a，7，8，9，9a，10-十二氫茚并[4，5-h]異苯并吡喃-5-基乙酸酯；(1Z，4S，4aR，5R，6aS，7S)-7，11-二羥基-1-{[(2-巰乙基)氨基]亞甲基}-4-(甲氧基甲基)-4a，6a-二甲基-2，10-二氧代-1，2，4，4a，5，6，6a，7，8，9，9a，10-十二氫茚并[4，5-h]異苯并吡喃-5-基乙酸酯；(1Z，4S，4aR，5R，6aS，7S，9aR)-1-[(乙氨基)亞甲基]-7，11-二羥基-4-(甲氧基甲基)-4a，6a-二甲基-2，10-二氧代-1，2，4，4a，5，6，6a，7，8，9，9a，10-十二氫茚并[4，5-h]異苯并吡喃-5-基乙酸酯；和其鹽、溶劑化物和水合物。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的化合物，其選自由下列各物組成的群組(1E，4S，4aR，5R，6aS，7S，9aR)-1-[(二乙氨基)亞甲基]-7，11-二羥基-4-(甲氧基甲基)-4a，6a-二甲基-2，10-二氧代-1，2，4，4a，5，6，6a，7，8，9，9a，10-十二氫茚并[4，5-h]異苯并吡喃-5-基乙酸酯；(1E，4S，4aR，5R，6aS，7S，9aR)-7，11-二羥基-4-(甲氧基甲基)-4a，6a-二甲基-2，10-二氧代-1-(吡咯烷-1-基亞甲基)-1，2，4，4a，5，6，6a，7，8，9，9a，10-十二氫茚并[4，5-h]異苯并吡喃-5-基乙酸酯；(1E，4S，4aR，5R，6aS，7S，9aR)-1-(苯胺基亞甲基)-7，11-二羥基-4-(甲氧基甲基)-4a，6a-二甲基-2，10-二氧代-1，2，4，4a，5，6，6a，7，8，9，9a，10-十二氫茚并[4，5-h]異苯并吡喃-5-基乙酸酯；(1E，4S，4aR，5R，6aS，7S)-1-{[叔丁基(2-羥乙基)氨基]亞甲基}-7，11-二羥基-4-(甲氧基甲基)-4a，6a-二甲基-2，10-二氧代-1，2，4，4a，5，6，6a，7，8，9，9a，10-十二氫茚并[4，5-h]異苯并吡喃-5-基乙酸酯；(1E，4S，4aR，5R，6aS，7S)-1-{[[3-(二甲氨基)丙基](甲基)氨基]亞甲基}-7，11-二羥基-4-(甲氧基甲基)-4a，6a-二甲基-2，10-二氧代-1，2，4，4a，5，6，6a，7，8，9，9a，10-十二氫茚并[4，5-h]異苯并吡喃-5-基乙酸酯；(1E，4S，4aR，5R，6aS，7S)-7，11-二羥基-4-(甲氧基甲基)-4a，6a-二甲基-1-{[甲基(1-甲基吡咯烷-3-基)氨基]亞甲基}-2，10-二氧代-1，2，4，4a，5，6，6a，7，8，9，9a，10-十二氫茚并[4，5-h]異苯并吡喃-5-基乙酸酯；(1E，4S，4aR，5R，6aS，7S)-1-[(4-環(huán)己基哌嗪-1-基)亞甲基]-7，11-二羥基-4-(甲氧基甲基)-4a，6a-二甲基-2，10-二氧代-1，2，4，4a，5，6，6a，7，8，9，9a，10-十二氫茚并[4，5-h]異苯并吡喃-5-基乙酸酯；(1E，4S，4aR，5R，6aS，7S)-1-{[丁基(甲基)氨基]亞甲基}-7，11-二羥基-4-(甲氧基甲基)-4a，6a-二甲基-2，10-二氧代-1，2，4，4a，5，6，6a，7，8，9，9a，10-十二氫茚并[4，5-h]異苯并吡喃-5-基乙酸酯；(1E，4S，4aR，5R，6aS，7S)-1-{[環(huán)己基(甲基)氨基]亞甲基}-7，11-二羥基-4-(甲氧基甲基)-4a，6a-二甲基-2，10-二氧代-1，2，4，4a，5，6，6a，7，8，9，9a，10-十二氫茚并[4，5-h]異苯并吡喃-5-基乙酸酯；(1E，4S，4aR，5R，6aS，7S)-1-[(4-苯甲基哌嗪-1-基)亞甲基]-7，11-二羥基-4-(甲氧基甲基)-4a，6a-二甲基-2，10-二氧代-1，2，4，4a，5，6，6a，7，8，9，9a，10-十二氫茚并[4，5-h]異苯并吡喃-5-基乙酸酯；(1E，4S，4aR，5R，6aS，7S)-7，11-二羥基-4-(甲氧基甲基)-4a，6a-二甲基-2，10-二氧代-1-(哌啶-1-基亞甲基)-1，2，4，4a，5，6，6a，7，8，9，9a，10-十二氫茚并[4，5-h]異苯并吡喃-5-基乙酸酯；(1E，4S，4aR，5R，6aS，7S)-1-(3，4-二氫異喹啉-2(1H)-基亞甲基)-7，11-二羥基-4-(甲氧基甲基)-4a，6a-二甲基-2，10-二氧代-1，2，4，4a，5，6，6a，7，8，9，9a，10-十二氫茚并[4，5-h]異苯并吡喃-5-基乙酸酯；(1E，4S，4aR，5R，6aS，7S)-7，11-二羥基-4-(甲氧基甲基)-4a，6a-二甲基-2，10-二氧代-1-[(4-苯基哌嗪-1-基)亞甲基]-1，2，4，4a，5，6，6a，7，8，9，9a，10-十二氫茚并[4，5-h]異苯并吡喃-5-基乙酸酯；(1E，4S，4aR，5R，6aS，7S)-7，11-二羥基-4-(甲氧基甲基)-4a，6a-二甲基-1-[(4-甲基哌嗪-1-基)亞甲基]-2，10-二氧代-1，2，4，4a，5，6，6a，7，8，9，9a，10-十二氫茚并[4，5-h]異苯并吡喃-5-基乙酸酯；(1E，4S，4aR，5R，6aS，7S)-7，11-二羥基-4-(甲氧基甲基)-4a，6a-二甲基-2，10-二氧代-1-[(4-苯基哌啶-1-基)亞甲基]-1，2，4，4a，5，6，6a，7，8，9，9a，10-十二氫茚并[4，5-h]異苯并吡喃-5-基乙酸酯；(1E，4S，4aR，5R，6aS，7S)-7-(甲酰氧基)-11-羥基-4-(甲氧基甲基)-4a，6a-二甲基-2，10-二氧代-1-(吡咯烷-1-基亞甲基)-1，2，4，4a，5，6，6a，7，8，9，9a，10-十二氫茚并[4，5-h]異苯并吡喃-5-基乙酸酯；(1E，4S，4aR，5R，6aS，7S)-1-[(二烯丙氨基)亞甲基]-7-(甲酰氧基)-11-羥基-4-(甲氧基甲基)-4a，6a-二甲基-2，10-二氧代-1，2，4，4a，5，6，6a，7，8，9，9a，10-十二氫茚并[4，5-h]異苯并吡喃-5-基乙酸酯；(1E，4S，4aR，5R，6aS，7S)-1-[(二乙氨基)亞甲基]-7-(甲酰氧基)-11-羥基-4-(甲氧基甲基)-4a，6a-二甲基-2，10-二氧代-1，2，4，4a，5，6，6a，7，8，9，9a，10-十二氫茚并[4，5-h]異苯并吡喃-5-基乙酸酯；乙酸4-{[雙-(2-羥基-乙基)-氨基]-亞甲基}-6，17-二羥基-1-甲氧基甲基-10，13-二甲基-3，7-二氧代-1，3，4，7，10，11，12，13，14，15，16，17-十二氫-2-氧雜-環(huán)戊[a]菲-11-基酯；乙酸4-[(叔丁基-甲基-氨基)-亞甲基]-6，17-二羥基-1-甲氧基甲基-10，13-二甲基-3，7-二氧代-1，3，4，7，10，11，12，13，14，15，16，17-十二氫-2-氧雜-環(huán)戊[a]菲-11-基酯；乙酸4-{[雙-(3-二甲氨基-丙基)-氨基]-亞甲基}-6，17-二羥基-1-甲氧基甲基-10，13-二甲基-3，7-二氧代-1，3，4，7，10，11，12，13，14，15，16，17-十二氫-2-氧雜-環(huán)戊[a]菲-11-基酯；1-(11-乙酰氧基-6，17-二羥基-1-甲氧基甲基-10，13-二甲基-3，7-二氧代-1，7，10，11，12，13，14，15，16，17-十氫-2-氧雜-環(huán)戊[a]亞菲-4-基甲基)-哌啶-4-甲酸甲酯；1-(11-乙酰氧基-6，17-二羥基-1-甲氧基甲基-10，13-二甲基-3，7-二氧代-1，7，10，11，12，13，14，15，16，17-十氫-2-氧雜-環(huán)戊[a]亞菲-4-基甲基)-哌啶-4-甲酸；4-[(11-乙酰氧基-6，17-二羥基-1-甲氧基甲基-10，13-二甲基-3，7-二氧代-1，7，10，11，12，13，14，15，16，17-十氫-2-氧雜-環(huán)戊[a]亞菲-4-基甲基)-甲基-氨基]-2，5-二甲基-己-2-烯酸甲酯；乙酸6，17-二羥基-1-甲氧基甲基-4-[({3-[4-(4-甲氧基-苯基)-哌嗪-1-基]-丙基}-甲基-氨基)-亞甲基]-10，13-二甲基-3，7-二氧代-1，3，4，7，10，11，12，13，14，15，16，17-十二氫-2-氧雜-環(huán)戊[a]菲-11-基酯；乙酸6，17-二羥基-1-甲氧基甲基-10，13-二甲基-4-({甲基-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-丙基]-氨基}-亞甲基)-3，7-二氧代-1，3，4，7，10，11，12，13，14，15，16，17-十二氫-2-氧雜-環(huán)戊[a]菲-11-基酯；乙酸6，17-二羥基-1-甲氧基甲基-10，13-二甲基-4-{[甲基-(3-嗎啉-4-基-丙基)-氨基]-亞甲基}-3，7-二氧代-1，3，4，7，10，11，12，13，14，15，16，17-十二氫-2-氧雜-環(huán)戊[a]菲-11-基酯；乙酸4-{[(2-苯磺酰基-乙基)-(3-二乙氨基-丙基)-氨基]-亞甲基}-6，17-二羥基-1-甲氧基甲基-10，13-二甲基-3，7-二氧代-1，3，4，7，10，11，12，13，14，15，16，17-十二氫-2-氧雜-環(huán)戊[a]菲-11-基酯；乙酸4-{[(1-氮雜-雙環(huán)[3.3.1]壬-5-基甲基)-苯甲基-氨基]-亞甲基}-6，17-二羥基-1-甲氧基甲基-10，13-二甲基-3，7-二氧代-1，3，4，7，10，11，12，13，14，15，16，17-十二氫-2-氧雜-環(huán)戊[a]菲-11-基酯；乙酸6，17-二羥基-1-甲氧基甲基-10，13-二甲基-4-[4-(3-嗎啉-4-基-丙基)-哌嗪-1-基亞甲基]-3，7-二氧代-1，3，4，7，10，11，12，13，14，15，16，17-十二氫-2-氧雜-環(huán)戊[a]菲-11-基酯；乙酸4-{[(2-二甲氨基-乙基)-甲基-氨基]-亞甲基}-6，17-二羥基-1-甲氧基甲基-10，13-二甲基-3，7-二氧代-1，3，4，7，10，11，12，13，14，15，16，17-十二氫-2-氧雜-環(huán)戊[a]菲-11-基酯；乙酸4-[4-(3-二甲氨基-丙基)-哌嗪-1-基亞甲基]-6，17-二羥基-1-甲氧基甲基-10，13-二甲基-3，7-二氧代-1，3，4，7，10，11，12，13，14，15，16，17-十二氫-2-氧雜-環(huán)戊[a]菲-11-基酯；乙酸6，17-二羥基-1-甲氧基甲基-10，13-二甲基-4-[4-(2-嗎啉-4-基-乙基)-哌嗪-1-基亞甲基]-3，7-二氧代-1，3，4，7，10，11，12，13，14，15，16，17-十二氫-2-氧雜-環(huán)戊[a]菲-11-基酯；乙酸6，17-二羥基-1-甲氧基甲基-10，13-二甲基-4-[4-(1-甲基-哌啶-4-基)-哌嗪-1-基亞甲基]-3，7-二氧代-1，3，4，7，10，11，12，13，14，15，16，17-十二氫-2-氧雜-環(huán)戊[a]菲-11-基酯；[(11-乙酰氧基-6，17-二羥基-1-甲氧基甲基-10，13-二甲基-3，7-二氧代-1，7，10，11，12，13，14，15，16，17-十氫-2-氧雜-環(huán)戊[a]亞菲-4-基甲基)-甲基-氨基]-乙酸叔丁酯；乙酸4-{[(2，3-二羥基-丙基)-甲基-氨基]-亞甲基}-6，17-二羥基-1-甲氧基甲基-10，13-二甲基-3，7-二氧代-1，3，4，7，10，11，12，13，14，15，16，17-十二氫-2-氧雜-環(huán)戊[a]菲-11-基酯；4-[(11-乙酰氧基-6，17-二羥基-1-甲氧基甲基-10，13-二甲基-3，7-二氧代-1，7，10，11，12，13，14，15，16，17-十氫-2-氧雜-環(huán)戊[a]亞菲-4-基甲基)-甲基-氨基]-丁酸；1-(11-乙酰氧基-6，17-二羥基-1-甲氧基甲基-10，13-二甲基-3，7-二氧代-1，7，10，11，12，13，14，15，16，17-十氫-2-氧雜-環(huán)戊[a]亞菲-4-基甲基)-吖丁啶-2-甲酸；1-(11-乙酰氧基-6，17-二羥基-1-甲氧基甲基-10，13-二甲基-3，7-二氧代-1，7，10，11，12，13，14，15，16，17-十氫-2-氧雜-環(huán)戊[a]亞菲-4-基甲基)-吡咯烷-2-甲酸甲酯；乙酸4-{[苯甲基-(2-氰基-乙基)-氨基]-亞甲基}-6，17-二羥基-1-甲氧基甲基-10，13-二甲基-3，7-二氧代-1，3，4，7，10，11，12，13，14，15，16，17-十二氫-2-氧雜-環(huán)戊[a]菲-11-基酯；乙酸4-{[(2-二乙氨基-乙基)-甲基-氨基]-亞甲基}-6，17-二羥基-1-甲氧基甲基-10，13-二甲基-3，7-二氧代-1，3，4，7，10，11，12，13，14，15，16，17-十二氫-2-氧雜-環(huán)戊[a]菲-11-基酯；乙酸4-{[(2-二乙氨基-乙基)-乙基-氨基]-亞甲基}-6，17-二羥基-1-甲氧基甲基-10，13-二甲基-3，7-二氧代-1，3，4，7，10，11，12，13，14，15，16，17-十二氫-2-氧雜-環(huán)戊[a]菲-11-基酯；乙酸4-{[苯甲基-(2-二甲氨基-乙基)-氨基]-亞甲基}-6，17-二羥基-1-甲氧基甲基-10，13-二甲基-3，7-二氧代-1，3，4，7，10，11，12，13，14，15，16，17-十二氫-2-氧雜-環(huán)戊[a]菲-11-基酯；乙酸6，17-二羥基-1-甲氧基甲基-10，13-二甲基-3，7-二氧代-4-(4-氧代-哌啶-1-基亞甲基)-1，3，4，7，10，11，12，13，14，15，16，17-十二氫-2-氧雜-環(huán)戊[a]菲-11-基酯；4-{[(2-二甲氨基-乙基)-乙基-氨基]-亞甲基}-6，17-二羥基-1-甲氧基甲基-10，13-二甲基-10，11，12，13，14，15，16，17-八氫-1H，4H-2-氧雜-環(huán)戊[a]菲-3，7-二酮；乙酸4-{[(2-二甲氨基-乙基)-乙基-氨基]-亞甲基}-6，17-二羥基-1-甲氧基甲基-10，13-二甲基-3，7-二氧代-1，3，4，7，10，11，12，13，14，15，16，17-十二氫-2-氧雜-環(huán)戊[a]菲-11-基酯；乙酸4-[1，4′]雙哌啶基-1′-基亞甲基-6，17-二羥基-1-甲氧基甲基-10，13-二甲基-3，7-二氧代-1，3，4，7，10，11，12，13，14，15，16，17-十二氫-2-氧雜-環(huán)戊[a]菲-11-基酯；乙酸6，17-二羥基-1-甲氧基甲基-10，13-二甲基-4-嗎啉-4-基亞甲基-3，7-二氧代-1，3，4，7，10，11，12，13，14，15，16，17-十二氫-2-氧雜-環(huán)戊[a]菲-11-基酯；丙酸4-{[(2-二甲氨基-乙基)-甲基-氨基]-亞甲基}-6，17-二羥基-1-甲氧基甲基-10，13-二甲基-3，7-二氧代-1，3，4，7，10，11，12，13，14，15，16，17-十二氫-2-氧雜-環(huán)戊[a]菲-11-基酯；(1E，4S，4aR，5R，6aS，7S，9aR)-1-[(二乙氨基)亞甲基]-5，7，11-三羥基-4-(甲氧基甲基)-4a，6a-二甲基-4a，5，6，6a，7，8，9，9a-八氫茚并[4，5-h]異苯并吡喃-2，10(1H，4H)-二酮；乙酸4-丁基硫烷基亞甲基-6，17-二羥基-1-甲氧基甲基-10，13-二甲基-3，7-二氧代-1，3，4，7，10，11，12，13，14，15，16，17-十二氫-2-氧雜-環(huán)戊[a]菲-11-基酯；17-聚乙二醇化二-(1E，4S，4aR，5R，6aS，7S)-1-{[[3-(二甲氨基)丙基](甲基)氨基]亞甲基}-7，11-二羥基-4-(甲氧基甲基)-4a，6a-二甲基-2，10-二氧代-1，2，4，4a，5，6，6a，7，8，9，9a，10-十二氫茚并[4，5-h]異苯并吡喃-5-基乙酸酯；如圖1所示的聚乙二醇化17-羥基渥曼青霉素化合物；(1E，4S，4aR，5R，6aS，7S)-1-{[[3-(二甲氨基)丙基](甲基)氨基]亞甲基}-5，7，11-三羥基-4-(甲氧基甲基)-4a，6a-二甲基-4a，5，6，6a，7，8，9，9a-八氫茚并[4，5-h]異苯并吡喃-2，10(1H，4H)-二酮；(1E，4S，4αR，5R，6αS，7S，9αR)-1-{叔丁基[2-(二甲氨基)乙基]氨基}亞甲基)-7，11-二羥基-4-(甲氧基甲基)-4α，6α-二甲基-2，10-二氧代-1，2，4，4α，5，6，6α，7，8，9，9α，10-十二氫茚并[4，5-h]異苯并吡喃-5-基乙酸酯；丁酸4-{[(2-二甲氨基-丙基)-甲基-氨基]-亞甲基}-6，17-二羥基-1-甲氧基甲基-10，13-二甲基-3，7-二氧代-1，3，4，7，10，11，12，13，14，15，16，17-十二氫-2-氧雜-環(huán)戊[a]菲-11-基酯；乙酸4-{[(2-二甲氨基-丙基)-乙基-氨基]-亞甲基}-6，17-二羥基-1-甲氧基甲基-10，13-二甲基-3，7-二氧代-1，3，4，7，10，11，12，13，14，15，16，17-十二氫-2-氧雜-環(huán)戊[a]菲-11-基酯；(1E，4S，4aR，5R，6aS，7S，9aR)-1-({4-[2-(2，5-二氧代-2，5-二氫-1H-吡咯-1-基)乙基]哌嗪-1-基}亞甲基)-7，11-二羥基-4-(甲氧基甲基)-4a，6a-二甲基-2，10-二氧代-1，2，4，4a，5，6，6a，7，8，9，9a，10-十二氫茚并[4，5-h]異苯并吡喃-5-基乙酸酯；和其鹽、溶劑化物和水合物。
11.根據(jù)權(quán)利要求10所述的化合物，其中所述化合物為(1E，4S，4aR，5R，6aS，7S)-1-{[[3-(二甲氨基)丙基](甲基)氨基]亞甲基}-7，11-二羥基-4-(甲氧基甲基)-4a，6a-二甲基-2，10-二氧代-1，2，4，4a，5，6，6a，7，8，9，9a，10-十二氫茚并[4，5-h]異苯并吡喃-5-基乙酸酯。
12.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物，其中所述化合物經(jīng)聚乙二醇化。
13.根據(jù)權(quán)利要求12所述的化合物，其中所述化合物在R1處經(jīng)聚乙二醇化。
14.根據(jù)權(quán)利要求12所述的化合物，其中所述化合物在R2處經(jīng)聚乙二醇化。
15.根據(jù)權(quán)利要求12所述的化合物，其中所述化合物在R3處經(jīng)聚乙二醇化。
16.一種抑制細(xì)胞中的PI3K活性的方法，所述方法包含使細(xì)胞與根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物接觸，從而所述化合物抑制PI3K。
17.一種抑制細(xì)胞中的TOR活性的方法，所述方法包含使細(xì)胞與根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物接觸，從而所述化合物抑制TOR。
18.一種抑制哺乳動(dòng)物中的PI3K活性的方法，所述方法包含對(duì)哺乳動(dòng)物投與PI3K抑制量的根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物。
19.根據(jù)權(quán)利要求18所述的方法，其中所述哺乳動(dòng)物是人類。
20.一種抑制哺乳動(dòng)物中的TOR活性的方法，所述方法包含對(duì)哺乳動(dòng)物投與TOR抑制量的根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物。
21.一種治療PI3K依賴性病癥的方法，所述方法包含對(duì)個(gè)體投與PI3K抑制量的根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物。
22.根據(jù)權(quán)利要求21所述的方法，其中所述PI3K依賴性病癥選自由腫瘤細(xì)胞增殖、腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)和腫瘤發(fā)生組成的群組。
23.一種醫(yī)藥組合物，其包含根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物和醫(yī)藥學(xué)上可接受的載劑。
24.一種治療腫瘤細(xì)胞增殖、腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)或腫瘤發(fā)生的方法，所述方法包含對(duì)個(gè)體投與根據(jù)權(quán)利要求23所述的醫(yī)藥組合物。
25.根據(jù)權(quán)利要求19或24所述的方法，其另外包含投與一種或一種以上調(diào)節(jié)生長(zhǎng)因子信號(hào)傳導(dǎo)、細(xì)胞因子反應(yīng)和細(xì)胞周期控制的藥劑。
26.根據(jù)權(quán)利要求25所述的方法，其中所述藥劑是干擾素α(Intron-A)或聚乙二醇化雷帕霉素(rapamycin)。
27.根據(jù)權(quán)利要求25所述的方法，其中所述藥劑具有細(xì)胞毒性。
28.根據(jù)權(quán)利要求24所述的方法，其中R1為NR4R5。
29.根據(jù)權(quán)利要求24所述的方法，其中R2為氫。
30.根據(jù)權(quán)利要求24所述的方法，其中R2為甲?；?。
31.根據(jù)權(quán)利要求24所述的方法，其中R3為酰氧基。
32.根據(jù)權(quán)利要求31所述的方法，其中R3為乙酰氧基。
33.根據(jù)權(quán)利要求24所述的方法，其中R8為羥基。
34.一種治療腫瘤細(xì)胞增殖、腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)或腫瘤發(fā)生的方法，所述方法包含對(duì)個(gè)體投與包含根據(jù)權(quán)利要求9所述的化合物和醫(yī)藥學(xué)上可接受的載劑的醫(yī)藥組合物。
35.一種治療腫瘤細(xì)胞增殖、腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)或腫瘤發(fā)生的方法，所述方法包含對(duì)個(gè)體投與包含根據(jù)權(quán)利要求8所述的化合物和醫(yī)藥學(xué)上可接受的載劑的醫(yī)藥組合物。
36.一種治療PI3K依賴性病癥的方法，所述方法是通過對(duì)個(gè)體投與包含根據(jù)權(quán)利要求1、權(quán)利要求8或權(quán)利要求9所述的化合物和醫(yī)藥學(xué)上可接受的載劑的醫(yī)藥組合物，其中所述PI3K依賴性病癥選自由疼痛、糖尿病、炎癥、血小板凝集、缺血性心臟病、硬化癥、再狹窄、呼吸障礙、HIV、骨吸收、癌癥、非小細(xì)胞肺癌和腦癌組成的群組。
37.一種化合物17-聚乙二醇化二-(1E，4S，4aR，5R，6aS，7S)-1-{[[3-(二甲氨基)丙基](甲基)氨基]亞甲基}-7，11-二羥基-4-(甲氧基甲基)-4a，6a-二甲基-2，10-二氧代-1，2，4，4a，5，6，6a，7，8，9，9a，10-十二氫茚并[4，5-h]異苯并吡喃-5-基乙酸酯。
38.根據(jù)權(quán)利要求34所述的方法，其中所述化合物是根據(jù)權(quán)利要求11或權(quán)利要求37所述。
39.根據(jù)權(quán)利要求35所述的方法，其中所述化合物是根據(jù)權(quán)利要求11或權(quán)利要求37所述。
40.根據(jù)19或24所述的方法，其另外包含投與紫杉醇(taxol)。
41.根據(jù)權(quán)利要求40所述的方法，其另外包含投與一種或一種以上調(diào)節(jié)生長(zhǎng)因子信號(hào)傳導(dǎo)、細(xì)胞因子反應(yīng)和細(xì)胞周期控制的藥劑。
42.根據(jù)權(quán)利要求41所述的方法，其中所述藥劑選自由細(xì)胞因子、干擾素、雷帕霉素、聚乙二醇化雷帕霉素、HER2/EGFR抑制劑、MEK抑制劑、干擾素α(Intron-A)和Src激酶抑制劑組成的群組。
43.一種由圖2所示方法制備權(quán)利要求1所述的化合物的方法。
44.一種由圖3所示方法制備權(quán)利要求1所述的化合物的方法。
45.根據(jù)權(quán)利要求25所述的方法，其中所述藥劑是MEK抑制劑。
46.根據(jù)權(quán)利要求45所述的方法，其中所述MEK抑制劑是2-(2-氯-4-碘苯胺基)-N-(環(huán)丙基甲氧基-3，4-二氟苯甲酰胺)。
47.根據(jù)權(quán)利要求46所述的方法，其中所述組合物包含化合物(1E，4S，4aR，5R，6aS，7S)-1-{[叔丁基(2-羥乙基)氨基]亞甲基}-7，11-二羥基-4-(甲氧基甲基)-4a，6a-二甲基-2，10-二氧代-1，2，4，4a，5，6，6a，7，8，9，9a，10-十二氫茚并[4，5-h]異苯并吡喃-5-基乙酸酯。
48.根據(jù)權(quán)利要求25所述的方法，其中所述藥劑是Her2/neu抑制劑。
49.根據(jù)權(quán)利要求48所述的方法，其中所述Her2/neu抑制劑是(E)-N-{4-[3-氯-4-(2-吡啶基甲氧基)苯胺基]-3-氰基-7-乙氧基-6-喹啉基}-4-(二甲氨基)-2-丁烯酰胺。
50.根據(jù)權(quán)利要求48所述的方法，其中所述組合物包含化合物(1E，4S，4aR，5R，6aS，7S)-1-{[叔丁基(2-羥乙基)氨基]亞甲基}-7，11-二羥基-4-(甲氧基甲基)-4a，6a-二甲基-2，10-二氧代-1，2，4，4a，5，6，6a，7，8，9，9a，10-十二氫茚并[4，5-h]異苯并吡喃-5-基乙酸酯。
51.根據(jù)權(quán)利要求25所述的方法，其中所述藥劑是mTor抑制劑。
52.根據(jù)權(quán)利要求51所述的方法，其中所述組合物包含化合物(1E，4S，4aR，5R，6aS，7S)-1-{[叔丁基(2-羥乙基)氨基]亞甲基}-7，11-二羥基-4-(甲氧基甲基)-4a，6a-二甲基-2，10-二氧代-1，2，4，4a，5，6，6a，7，8，9，9a，10-十二氫茚并[4，5-h]異苯并吡喃-5-基。
全文摘要
本發(fā)明涉及可用作PI3K抑制劑的式(I)化合物其中R
文檔編號(hào)A61K31/352GK101039952SQ200580034934
公開日2007年9月19日 申請(qǐng)日期2005年10月13日 優(yōu)先權(quán)日2004年10月13日
發(fā)明者阿里·扎斯克, 古簡(jiǎn)欣, 蔡平, 克爾·余, 喬希·卡普蘭, 阿達(dá)姆·馬修·吉爾伯特, 馬修·蓋爾戈里·布爾薩維奇 申請(qǐng)人:惠氏公司