專利名稱：神經(jīng)生長因子產(chǎn)生抑制劑、以及配合有該神經(jīng)生長因子產(chǎn)生抑制劑的皮膚外用劑、化妝品 ...的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及神經(jīng)生長因子產(chǎn)生抑制劑、以及配合有該神經(jīng)生長因子產(chǎn)生抑制劑的皮膚外用劑、化妝品、醫(yī)藥部外品、瘙癢預(yù)防和治療劑、以及特異性皮炎治療劑。
背景技術(shù)：
瘙癢是僅在皮膚、粘膜、角膜等產(chǎn)生的特有感覺，被說明為“伴隨抓撓欲望的不舒適感覺”。在近年來正在成為社會問題的特異性皮炎疾病、花粉病、食物過敏、蕁麻疹等炎癥性以及變態(tài)反應(yīng)性的皮膚疾病中，這種稱之為瘙癢的感覺是非常重要而且嚴(yán)重的癥狀之一。另外，伴隨皮膚干燥的老年性皮膚瘙癢癥或黃疸、伴隨透析的瘙癢，在糖尿病或惡性腫瘤的并發(fā)癥瘙癢也正在成為問題。
瘙癢是在皮膚的干燥或溫度變化、汗、壓迫、接觸等物理刺激或致癢物質(zhì)引起的化學(xué)刺激等各種刺激作用下，作為末梢性瘙癢或中樞性瘙癢被誘發(fā)的。作為內(nèi)因性致癢物質(zhì)，最重要的原因可能是目前臨床上使用的僅為組胺拮抗劑，與H1受體相關(guān)。配合有對抗組胺的競爭拮抗物質(zhì)例如順丁烯二酸氯屈米通、苯海拉明及其類似物質(zhì)的外用劑，正被用于治療瘙癢。但問題是，具有這些抗組胺作用的外用劑存在副作用。
因此，提出了與著眼于安全性、配合有天然含有成分的皮膚外用劑相關(guān)的下述專利文獻(xiàn)1之類的專利申請。該專利文獻(xiàn)1公開有與含有竹提取成分的皮膚外用劑相關(guān)的發(fā)明，但在以往技術(shù)欄中也公開有利用冰片的肥大細(xì)胞膜穩(wěn)定化能力的發(fā)明(日本特開平6-211713號)、利用放線菌培養(yǎng)液的炎癥抑制作用的發(fā)明(日本特開平5-25053號)、利用含二十二碳六烯酸(DHA)或亞麻酸的油脂的抗變態(tài)反應(yīng)性的發(fā)明(日本特開平2-29081號)等，據(jù)記載，這些天然存在的抗過敏劑的副作用少，但效果不夠。
專利文獻(xiàn)1日本特開2003-212786號公報但是，該專利文獻(xiàn)1中的發(fā)明在組胺游離抑制試驗或白三烯分泌抑制試驗中也只不過顯示瘙癢抑制效果。
另一方面，在近年來的研究中，被認(rèn)為健康人皮膚中僅存在到表皮與真皮的邊界部為止的瘙癢的傳遞纖維末梢(C纖維末梢)，在特異性皮炎的皮膚或干燥的皮膚中伸長到皮膚的表皮，該C纖維末梢的向表皮的伸長被指出可能就是老年性瘙癢癥、特異性皮膚炎、干燥肌膚的劇烈瘙癢的產(chǎn)生原因之一。
關(guān)于這樣的問題，例如在下述專利文獻(xiàn)2的以往技術(shù)欄中有記載(說明書 ～ )。該專利文獻(xiàn)2中的發(fā)明的特征在于，在抗變態(tài)反應(yīng)組合物中含有野鳳仙花的花瓣的提取物，但在明確如上所述的瘙癢機(jī)制的基礎(chǔ)上，其不是解決瘙癢機(jī)制，所以發(fā)明的效果也不過是起到抗變態(tài)反應(yīng)、抗過敏反應(yīng)效果而已。
專利文獻(xiàn)2日本特開2001-278796號公報綜上所述，當(dāng)前的現(xiàn)狀是以抑制C纖維向皮膚表皮伸長為作用機(jī)制的瘙癢抑制劑尚未開發(fā)出來。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明正是為了解決上述問題而提出的發(fā)明，其課題在于，提供具有抑制與C纖維向表皮的伸長密切相關(guān)的神經(jīng)生長因子的產(chǎn)生的作用并同時具有高安全性的神經(jīng)生長因子產(chǎn)生抑制劑、以及配合有該神經(jīng)生長因子產(chǎn)生抑制劑的皮膚外用劑、化妝品、醫(yī)藥部外品、瘙癢預(yù)防和治療劑以及特異性皮炎治療劑。
本發(fā)明人等為了解決上述課題進(jìn)行了潛心研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，金虎尾種子提取物具有出色的神經(jīng)生長因子產(chǎn)生抑制作用、特別是緩和、改善皮膚發(fā)生的炎癥或瘙癢，同時對生物體為安全的，以至完成了本發(fā)明。
即，本發(fā)明為神經(jīng)生長因子產(chǎn)生抑制劑、以及配合有該神經(jīng)生長因子產(chǎn)生抑制劑的皮膚外用劑、化妝品、醫(yī)藥部外品、瘙癢預(yù)防和治療劑以及特異性皮炎治療劑，關(guān)于神經(jīng)生長因子產(chǎn)生抑制劑的本發(fā)明的第一技術(shù)方案，其特征在于，神經(jīng)生長因子產(chǎn)生抑制劑中含有金虎尾種子提取物。
在本發(fā)明中，“神經(jīng)生長因子產(chǎn)生抑制劑中含有金虎尾種子提取物”是指除了含有僅由金虎尾種子提取物構(gòu)成的物質(zhì)之外，還含有金虎尾種子提取物以外的成分的情況。
另外，本發(fā)明的第二技術(shù)方案是配合有本發(fā)明的第一技術(shù)方案所述的神經(jīng)生長因子產(chǎn)生抑制劑的皮膚外用劑，本發(fā)明的第三技術(shù)方案是配合有本發(fā)明的第一技術(shù)方案所述的神經(jīng)生長因子產(chǎn)生抑制劑的化妝品，本發(fā)明的第四技術(shù)方案是配合有本發(fā)明的第一技術(shù)方案所述的神經(jīng)生長因子產(chǎn)生抑制劑的醫(yī)藥部外品。
進(jìn)而，本發(fā)明的第五技術(shù)方案是配合有本發(fā)明的第一技術(shù)方案所述的神經(jīng)生長因子產(chǎn)生抑制劑的瘙癢預(yù)防和治療劑，本發(fā)明的第六技術(shù)方案是配合有本發(fā)明的第一技術(shù)方案所述的神經(jīng)生長因子產(chǎn)生抑制劑的特異性皮炎治療劑。
如上所述，C纖維末梢被認(rèn)為在健康人皮膚中僅存在到表皮與真皮的邊界部為止，但在特異性皮炎等的皮膚或干燥的皮膚中已伸長到皮膚的表皮，該C纖維末梢向表皮的伸長被指出可能就是瘙癢的產(chǎn)生原因之一。接著，C纖維這樣向表皮伸長被推測是由于神經(jīng)生長因子NGF作用于C纖維末梢，因而通過使用本發(fā)明的神經(jīng)生長因子產(chǎn)生抑制劑，可以抑制NGF的產(chǎn)生，這樣，可以阻止C纖維末梢伸長到表皮。
如上所述，利用本發(fā)明，可以提供通過抑制與C纖維向表皮的伸長密切相關(guān)的神經(jīng)生長因子NGF的產(chǎn)生而能夠直接去除瘙癢的主要原因、并同時具有高安全性的神經(jīng)生長因子產(chǎn)生抑制劑，以及配合有該神經(jīng)生長因子產(chǎn)生抑制劑的皮膚外用劑、化妝品等。


圖1是表示使用正常人皮膚成纖維細(xì)胞(NHDF)的神經(jīng)生長因子產(chǎn)生抑制試驗中，金虎尾種子提取物的濃度與NGF的游離量之間的相關(guān)關(guān)系的曲線圖。
圖2是表示對小鼠接觸性皮炎的抑制效果的曲線圖。
圖3是表示使用了NC/Nga小鼠的瘙癢抑制效果的曲線圖。
具體實施例方式
本發(fā)明中使用的提取物是指通過干燥金虎尾(Acerola、學(xué)名Malpighia emarginata DC)的種子，或不干燥而粉碎，然后在低溫或室溫～加熱下，利用溶劑提取或使用索克斯累特回流提取器等提取器具提取得到的各種溶劑提取液、其稀釋液、其濃縮液或其干燥粉末。
作為上述提取溶劑，例如可以使用水、甲醇、乙醇等低級1元醇、甘油、丙二醇、1，3-丁二醇等液態(tài)多元醇、含水醇類等1種或組合2種以上使用。作為優(yōu)選的提取方法的例子，可以舉出使用含水濃度20～80容量％的乙醇或1，3-丁二醇，在室溫下進(jìn)行1～5天的提取，然后過濾的方法。
對本發(fā)明的皮膚外用劑、化妝品等中金虎尾種子提取物的各神經(jīng)生長因子產(chǎn)生抑制劑的配合量沒有特別限定，干燥固體物質(zhì)重量(含多種提取物時為其總計量)，以總量為基準(zhǔn)，優(yōu)選為0.0001～20.0重量％。這是因為，如果配合量不到0.0001重量％，則不能充分得到本發(fā)明的效果，另一方面，即使超過20.0重量％，也未見其增量帶來的效果提高。從這個角度出發(fā)，更優(yōu)選為0.0005～5.0重量％。
本發(fā)明的神經(jīng)生長因子產(chǎn)生抑制劑可以作為皮膚外用劑，制成例如洗劑類、乳液類、霜劑類、軟膏類、美容涂敷劑類、粉底類等劑型。在本發(fā)明的神經(jīng)生長因子產(chǎn)生抑制劑中，對應(yīng)形態(tài)可以適當(dāng)配合色素、防腐劑、界面活性劑、香料、顏料等。
實施例以下對本發(fā)明的實施例進(jìn)行說明。
(實施例1)本實施例是含有金虎尾種子提取物的神經(jīng)生長因子產(chǎn)生抑制劑的實施例。向已粉碎的金虎尾種子80kg中加入140kg的1，3-丁二醇含量為30重量％的1，3-丁二醇水溶液，室溫下攪拌一晚。全部離心分離處理之后，用0.22μm的過濾器過濾其上清，得到金虎尾種子提取物。干燥固體成分量為0.71重量％。
(試驗例1)本試驗例是使用正常人皮膚成纖維細(xì)胞(NHDF)的神經(jīng)生長因子產(chǎn)生抑制試驗。即，使用由上述實施例1的金虎尾種子提取物構(gòu)成的神經(jīng)生長因子產(chǎn)生抑制劑，進(jìn)行NHDF神經(jīng)生長因子產(chǎn)生抑制試驗。
正常人皮膚成纖維細(xì)胞(NHDF)在含10％胎牛血清(56℃，處理30分鐘)的Dulbecco’s MEM培養(yǎng)基(Sigma制)中37℃、5％CO2下培養(yǎng)。將NHDF混懸于含10％胎牛血清(56℃，處理30分鐘)的Dulbecco’sMEM培養(yǎng)基中，使其成為105cells/ml，將該懸浮液分批注入到24孔微孔板(IWAKI制)中，且每孔1ml。
在培養(yǎng)24小時之后，吸引上清并除去，分批注入預(yù)先配制的含0.2容量％、0.1容量％、0.05容量％或0.025容量％的金虎尾種子提取物的含10％胎牛血清(56℃，處理30分鐘，ICN制)的Dulbecco’s MEM培養(yǎng)基(Sigma制)450μl。培養(yǎng)30分鐘之后，加入含100ng/ml的人白介素1α/10％胎牛血清(56℃，處理30分鐘)的Dulbecco’s MEM培養(yǎng)基(Sigma制)溶液50μl，進(jìn)一步培養(yǎng)24小時?；厥张囵B(yǎng)上清，用NGF EmaxImmunoassay kit(Promega制)測定培養(yǎng)上清中的神經(jīng)生長因子濃度。測定的N＝4，用平均值和標(biāo)準(zhǔn)差表示。其結(jié)果見圖1。
從圖1可知，未添加金虎尾種子提取物的成纖維細(xì)胞的培養(yǎng)上清中神經(jīng)生長因子的游離量(神經(jīng)生長因子濃度)為14.69pg/ml，與此相對，就添加了金虎尾種子提取物時的培養(yǎng)上清中的神經(jīng)生長因子濃度而言，在添加0.025容量％時為8.58pg/ml，在添加0.05容量％時為5.87pg/ml，在添加0.1容量％時為1.09pg/ml，在添加0.2容量％時為1.86pg/ml。
(試驗例2)本試驗例是對小鼠接觸性皮炎的抑制效果的試驗。從SLC株式會社購入7周齡的BALB/c系雄性小鼠，在室溫23±3℃、濕度55±15％、明暗周期12小時(明期7:00～19:00)的條件下飼養(yǎng)。設(shè)定致敏30分鐘后給予金虎尾種子提取物(N＝5)組。在當(dāng)日剃毛的小鼠的腹部皮膚涂布5％苦基氯—乙醇溶液0.15ml，實施致敏處置。在第5天后，向左側(cè)耳廓皮膚的雙面涂布20μl的1％苦基氯—丙酮∶橄欖油(4∶1)溶液，激發(fā)過敏反應(yīng)。
激發(fā)過敏反應(yīng)30分鐘之后，向小鼠耳廓部給予用50容量％乙醇溶液配制的5容量％金虎尾種子提取物溶液50μl。作為對照組，同樣給予50μl的用50容量％乙醇溶液配制的1.5容量％1，3-丁二醇溶液。在過敏反應(yīng)激發(fā)前和其24小時后，用micrometer(MITUTOYO)測定左側(cè)耳廓的厚度，根據(jù)耳廓浮腫率求得耳廓浮腫抑制率。各組間的顯著性檢驗用t-檢驗進(jìn)行。試驗結(jié)果見圖2。
從圖2可知，相對于對象組的耳廓浮腫率為67.8±20.9％，金虎尾種子提取物給藥組的耳廓浮腫率為39.0±15.4％(p＝0.035)。通過給予金虎尾種子提取物，顯著抑制耳廓浮腫。上述試驗用作特異性皮炎和花粉癥的篩查。
(試驗例3)本試驗例是使用了NC/Nga小鼠的瘙癢抑制試驗。NC/Nga小鼠是常規(guī)使用級別的動物，是特異性皮炎自然發(fā)病的特異性皮炎模型小鼠，伴隨特異炎癥誘發(fā)瘙癢。從日本チヤ一ルズ·リバ一株式會社購入10只4周齡的NC/Nga系雄性小鼠，在室溫23±3℃、濕度55±15％、明暗周期12小時(明期7:00～19:00)的條件下飼養(yǎng)。每籠養(yǎng)5只小鼠，預(yù)備飼養(yǎng)后，將特異性皮炎發(fā)病的動物每組5只用于以下試驗。設(shè)定為連續(xù)5天給予金虎尾種子提取物組(N＝5)。
用理發(fā)推子和電剃須刀對小鼠背部剃毛，將用50容量％乙醇溶液配制的5容量％金虎尾提取物溶液150μl涂布給藥，每天2次、1周連續(xù)5次。作為對照組，同樣給予150μl的用50容量％乙醇溶液配制的1.5容量％1，3-丁二醇溶液。試驗結(jié)束時，測定每只小鼠的20分鐘抓撓次數(shù)。測定值用平均值和標(biāo)準(zhǔn)差表示。各組間的顯著性檢驗用t-檢驗進(jìn)行，5％以下的顯著水平為有意義。
試驗結(jié)果見圖3。在試驗結(jié)束時的20分鐘抓撓次數(shù)的測定中，對照組為309±92次，金虎尾種子提取物給藥組為158±79次，可見抓撓次數(shù)顯著降低。
(配方例1)本配方例是作為化妝品的一個例子的霜劑配方例，其組分如下所述。
組分配合比(重量％)鯨蠟醇 2.5％鯊烯10.0％白蠟1.0％三辛酸甘油酯5.0％肉豆蔻酸辛基十二烷基酯 15.0％生育酚乙酸酯0.1％1，3-丁二醇 7.0％甘油一硬脂酸酯 3.0％POE(20)山梨糖醇酐一硬脂酸酯 1.0％山梨糖醇酐一硬脂酸酯2.0％金虎尾種子提取物0.1％濃甘油 5.0％對羥基苯甲酸丁酯0.1％對羥基苯甲酸乙酯0.2％凈化水 余量在上述配合成分中，加熱溶解鯨蠟醇、鯊烯、白蠟、肉豆蔻酸辛基十二烷基酯之后，加入三辛酸甘油酯、生育酚乙酸酯、甘油一硬脂酸酯、POE(20)山梨糖醇酐一硬脂酸酯(界面活性劑)、山梨糖醇酐一硬脂酸酯，調(diào)整為70℃，使其均一地分散·溶解，得到油性凝膠。接著，在規(guī)定濃度凈化水中溶解金虎尾種子提取物、1，3-丁二醇、濃甘油、對羥基苯甲酸丁酯(防腐劑)、對羥基苯甲酸乙酯(防腐劑)，調(diào)整為70℃之后，向油性凝膠中邊充分?jǐn)嚢柽吘徛砑?。用勻漿器均一混合之后，脫氣、過濾之后，冷卻到30℃，得到霜劑。
(配方例2)本配方例也是霜劑的配方例，除了作為神經(jīng)生長因子產(chǎn)生抑制劑的金虎尾種子提取物的配合量多于上述配方例1以外，與配方例1的組成相同。其組成如下所述。霜劑的配制與上述配方例1同樣地進(jìn)行。
組分 配合比(重量％)鯨蠟醇2.5％
鯊烯10.0％白蠟1.0％三辛酸甘油酯5.0％肉豆蔻酸辛基十二烷基酯 15.0％生育酚乙酸酯0.1％1，3-丁二醇 7.0％甘油一硬脂酸酯 3.0％POE(20)山梨糖醇酐一硬脂酸酯 1.0％山梨糖醇酐一硬脂酸酯2.0％金虎尾種子提取物0.5％濃甘油 5.0％對羥基苯甲酸丁酯0.1％對羥基苯甲酸乙酯0.2％凈化水 余量(配方例3)本配方例也是霜劑的配方例，除了作為神經(jīng)生長因子產(chǎn)生抑制劑的金虎尾種子提取物的配合量多于上述配方例1、2以外，與配方例1、2組成相同。其組成如下所述。霜劑的配制與上述配方例1同樣地進(jìn)行。
組分配合比(重量％)鯨蠟醇 2.5％鯊烯10.0％白蠟1.0％三辛酸甘油酯5.0％肉豆蔻酸辛基十二烷基酯 15.0％生育酚乙酸酯0.1％1，3-丁二醇 7.0％甘油一硬脂酸酯 3.0％POE(20)山梨糖醇酐一硬脂酸酯 1.0％山梨糖醇酐一硬脂酸酯2.0％金虎尾種子提取物1.0％
濃甘油 5.0％對羥基苯甲酸丁酯0.1％對羥基苯甲酸乙酯0.2％凈化水 余量(試驗例4)在本試驗例4中，對上述配方例1～3的霜劑進(jìn)行瘙癢抑制試驗。試驗方法如下所述。以主訴伴隨干燥而有皮膚瘙癢的女性受試者(25歲～45歲)25人為對象，分別1天2次、連續(xù)3個月涂布配方例1～3的霜劑。評價用回答為不感覺皮膚瘙癢的人數(shù)。另一方面，霜劑基質(zhì)的組成與上述配方例1～3相同，將沒有配合金虎尾種子提取物的下面組成的霜劑作為比較例1，進(jìn)行相同的試驗。
(比較例1)組分配合比(重量％)鯨蠟醇 2.5％鯊烯10.0％白蠟1.0％三辛酸甘油酯5.0％肉豆蔻酸辛基十二烷基酯 15.0％生育酚乙酸酯0.1％1，3-丁二醇 7.0％甘油一硬脂酸酯 3.0％POE(20)山梨糖醇酐一硬脂酸酯 1.0％山梨糖醇酐一硬脂酸酯2.0％濃甘油 5.0％對羥基苯甲酸丁酯0.1％對羥基苯甲酸乙酯0.2％凈化水 余量試驗結(jié)果見表1。


從表1可知，配方例1中，回答為不感覺皮膚瘙癢的人數(shù)與比較例1相同，但配方例2中，該人數(shù)約為比較例1的1.5倍，進(jìn)而，配方例3約為2倍以上。
(試驗例5)本試驗例為由紫外線引起的炎癥抑制試驗。使用上述配方例1～3的霜劑，進(jìn)行對炎癥的改善效果的試驗。另一方面，作為陽性對照，將配合作為抗炎癥劑藥物一的吲哚美辛的藥品消炎痛霜劑(インテバンクリ一ム)(住友制藥制)作為比較例2使用。
從SLC株式會社購入4周齡的Hartley系豚鼠，在室溫23±3℃、濕度55±15％、明暗周期12小時(明期7:00～19:00)的條件下飼養(yǎng)。用理發(fā)推子和電剃須刀對豚鼠背部剃毛，對剃毛部位(2cm×2cm)使用上述配方例1～3和比較例1、2的樣品，連續(xù)使用3天，照射紫外線。使用色差計測定紫外線照射部位的皮膚顏色。皮膚紅斑用以比較例1的情況為100進(jìn)行比較算出的a*值表示。
試驗結(jié)果見表2。


從表2可知，配方例1中a*值與比較例1相比稍微減少，配方例2中a*值與比較例1相比減少約20％左右，進(jìn)而配方例3減少到約一半。其中，不及比較例2的減少率。但是，比較例2的吲哚美辛的副作用已被公知，在安全性方面，配方例1～3比比較例2更出色。
產(chǎn)業(yè)上的可利用性本發(fā)明的神經(jīng)生長因子產(chǎn)生抑制劑，可以廣泛應(yīng)用于全部皮膚外用劑、化妝品、醫(yī)藥部外品等，另外，從用途的方面來看，可以廣泛應(yīng)用于特異性皮炎治療劑、瘙癢預(yù)防和治療劑、具有改善由變態(tài)反應(yīng)引起的皮膚粗糙的作用的組合物等。
權(quán)利要求
1.一種神經(jīng)生長因子產(chǎn)生抑制劑，其特征在于，含有金虎尾種子提取物。
2.一種皮膚外用劑，其特征在于，配合有權(quán)利要求1所述的神經(jīng)生長因子產(chǎn)生抑制劑。
3.一種化妝品，其特征在于，配合有權(quán)利要求1所述的神經(jīng)生長因子產(chǎn)生抑制劑。
4.一種醫(yī)藥部外品，其特征在于，配合有權(quán)利要求1所述的神經(jīng)生長因子產(chǎn)生抑制劑。
5.一種瘙癢預(yù)防和治療劑，其特征在于，配合有權(quán)利要求1所述的神經(jīng)生長因子產(chǎn)生抑制劑。
6.一種特異性皮炎治療劑，其特征在于，配合有權(quán)利要求1所述的神經(jīng)生長因子產(chǎn)生抑制劑。
全文摘要
本發(fā)明提供具有抑制與C纖維向表皮的伸長密切相關(guān)的神經(jīng)生長因子的產(chǎn)生的作用并同時具有高安全性的神經(jīng)生長因子產(chǎn)生抑制劑、以及配合有該神經(jīng)生長因子產(chǎn)生抑制劑的皮膚外用劑、化妝品、醫(yī)藥部外品、瘙癢預(yù)防和治療劑以及特異性皮炎治療劑，它們的特征在于，神經(jīng)生長因子產(chǎn)生抑制劑中含有金虎尾種子提取物。
文檔編號A61P43/00GK101035551SQ20058003394
公開日2007年9月12日 申請日期2005年10月14日 優(yōu)先權(quán)日2004年10月19日
發(fā)明者殿垣內(nèi)浩, 仲尾次浩一, 酒井薰, 濱田和彥, 永峰賢一 申請人:碧雅詩株式會社, 株式會社日冷生物科學(xué)