專利名稱：給藥人il－18治療創(chuàng)傷的方法
技術領域：
本發(fā)明一般涉及人IL-18在治療創(chuàng)傷中的應用，所述人IL-18被認為是干擾素-γ-誘導因子(IGIF)。
背景技術：
本研究的起因是由于將分泌性蛋白質治療靶向用于其發(fā)揮功能的部位(體液或細胞膜)會相對減輕痛苦。分泌性蛋白質以及跨膜蛋白質的胞外區(qū)域可以直接被給藥至體液，或者能通過自然途徑到達體液或膜。將蛋白質分泌至細胞外空間的自然途徑是通過真核生物中的內質網(wǎng)以及原核生物中的內膜(Palade，Science，189，347(1975)；Milstein等，Nature New Biol.，239，117(1972)；Blobel等，J.Cell Biol.，67，835(1975))。另一方面，還不清楚蛋白質從細胞外部導入至細胞液的自然途徑(除了胞飲，蛇毒素侵入至細胞的機制)。因此細胞靶向蛋白治療法在本技術領域是非常困難的。
IL-18是最近發(fā)現(xiàn)的新的細胞因子?；钚匀薎L-18含有157個氨基酸殘基。其具有有效的生物活性，包括誘導T細胞和脾細胞生成干擾素γ-，增強NK細胞的殺傷活性以及促進幼稚CD4+T細胞分化成Th1細胞。另外，人IL-18增加GM-CSF的生成并減小IL-10的生成。IL-18已顯示出較IL-12更強的干擾素γ誘導作用，以及具有不同的受體并且利用特殊的信號轉導通路。
CD4+T細胞是所用免疫應答的重要調控因素。它被分為兩個亞型，即Th1和Th2。根據(jù)其能分泌的不同細胞因子來確定各個亞型。有趣的是，對分化最有效的誘導劑是細胞因子本身。從幼稚前體至Th2細胞的發(fā)育受到IL-4的誘導。IL-12早于IL-18被發(fā)現(xiàn)，被認為是重要的Th1誘導細胞因子。IL-18也是一種Th1誘導細胞因子，并且在刺激干擾素γ生成方面比IL-12更有效。
Th1細胞分泌IL-2、干擾素γ以及TNF-β。干擾素γ是Th1細胞因子的特征，它直接作用于巨噬細胞增強其殺微生物作用(microbiocidal)和吞噬活性。結果，激活的巨噬細胞可以有效地破壞細胞內的病原體以及腫瘤細胞。Th2細胞產(chǎn)生IL-4、IL-5、IL-6、IL-10以及IL-13，它們通過協(xié)助B細胞發(fā)育成產(chǎn)生抗體的細胞而發(fā)揮作用。綜合考慮，Th1細胞是形成細胞介導的免疫的主要原因，而Th2細胞是體液免疫的原因。
創(chuàng)傷修復涉及包括多個細胞類型、細胞外基質成分以及多種介質包括生長因子和細胞因子的的高度的有機相互作用。創(chuàng)傷修復可以由外傷、微生物或化學物質而啟動，這些引起組織損傷。雖然組織的完整性的修復是先天的宿主免疫應答，但是當創(chuàng)傷修復過程受到破壞時有多種情況。一些生長因子已經(jīng)用于或嘗試用于經(jīng)放射或化學治療但效果有限的癌癥患者來預防粘膜炎。Peterson Adv.Stud.Med.，4(4B)S299-S310，(2005)。在四項涉及接受治療的癌癥患者的研究的2項以上中，粒細胞集落刺激因子(優(yōu)保津)對粘膜炎的發(fā)病率以及嚴重度有中等的效果。雖然結果不一致，但是粒細胞巨噬細胞集落刺激因子(沙格司亭)減輕由化學治療和放射誘導的粘膜炎的嚴重度。對于粒細胞集落刺激因子和粒細胞巨噬細胞集落刺激因子均僅證明了其對預防口腔粘膜炎的效果。研究顯示，角化細胞生長因子(Palifermin)非常有可能預防粘膜炎，它可以減少口腔粘膜炎的發(fā)病率并可以縮短口腔粘膜炎的病程。隨著針對粘膜炎病理生理學的制劑的出現(xiàn)，臨床醫(yī)生不再需要改變放射或者化學治療法，而是要調整治療設計，加入可以減少粘膜炎的發(fā)病率的制劑。非常明顯，這需要開發(fā)一種可以增強創(chuàng)傷修復的新的治療性蛋白質，特別是治療皮膚創(chuàng)傷，外科創(chuàng)傷，腿部潰瘍，糖尿病患者潰瘍，粘膜炎特別是胃腸道粘膜炎和口腔粘膜炎，以及肺損傷。


圖1顯示了天然人IL-18的氨基酸序列(SEQ ID NO1)。
圖2顯示了鼠IL-18的氨基酸序列(SEQ ID NO2)。
圖3顯示了鼠血小板來源的生長因子-β(PDGF-β)的氨基酸序列(SEQ IDNO3)。通過除去一個信號肽(-20--1)以及N-端(1-61)和C-端(171-221)的前肽(劃線部分)，得到成熟的小鼠PDGF-β。
圖4顯示了人KGF的氨基酸序列(SEQ ID NO4)。
圖5顯示了局部給藥在腺病毒中編碼的鼠IL-18(SEQ ID NO2)對ob/ob小鼠的創(chuàng)傷修復的作用。每個數(shù)據(jù)均表示各組的平均值。
圖6顯示每日通過腹膜內注射全身遞送鼠IL-18的純化蛋白(SEQ IDNO2)對ob/ob小鼠的創(chuàng)傷修復的作用。每個數(shù)據(jù)均表示各組的平均值。
圖7顯示了每日局部遞送人IL-18(SEQ ID NO1)對ob/ob小鼠的創(chuàng)傷修復的作用。每個數(shù)據(jù)均表示各組的平均值。

發(fā)明內容
在EP 0692536A2、EP 0712931A2、EP0767178A1以及WO 97/2441號專利中公開了人IL-18多肽。人IL-18的氨基酸序列以SEQ ID NO1列出。人IL-18多肽為干擾素γ-誘導多肽。它們對誘導細胞介導的免疫起重要的作用，包括通過T細胞和脾細胞誘導干擾素γ生成、增強NK細胞的殺傷活性以及促進天然CD4+T細胞分化成Th1細胞。
IL-18可以用于修復患者創(chuàng)傷，包括但不限于皮膚創(chuàng)傷，外科創(chuàng)傷，腿部潰瘍，糖尿病潰瘍，壓迫性潰瘍、粘膜炎，特別是胃腸道粘膜炎、口腔粘膜炎，以及肺修復。創(chuàng)傷修復與受損細胞再生成同類細胞有關。創(chuàng)傷修復的過程包括下列細胞性活動的系統(tǒng)協(xié)調增殖、遷移、分化以及再塑。細胞因子、化學因子、生長因子以及作為細胞介質的與特殊細胞有機相連(orchestrate)的粘附分子均參與這些活動。Kampfer等，Molec.Med.6(12)10160-1027(2000)。白介素-18(IL-18)是一種促炎癥反應細胞因子，可以誘導腫瘤壞死因子-α、白介素1-β以及CC和CXC化學因子，它們在創(chuàng)傷修復過程中的炎癥性階段發(fā)揮重要作用。Puren等，J.Clin.Invest.，101711-721(1998)。已經(jīng)確定，一些不同的細胞類型包括角質化細胞和活化的巨噬細胞可以合成IL-18，所述角質化細胞和活化的巨噬細胞均在創(chuàng)傷修復中發(fā)揮重要作用。用人IL-18處理ConA-刺激的外周血液單核細胞(PBMC)的體外培養(yǎng)物可以誘導粒細胞單核細胞集落刺激因子(GM-CSF)的生成。Ushio等，J.Immunol.，1564274-4279(1996)。另外，IL-18顯示出誘導T-細胞和NK細胞生成干擾素γ(IFN-γ)的作用。粒細胞單核細胞集落刺激因子顯示出促進傷口愈合的作用(Arnold等，J.Wound Care)，54400-402(1995)，并已經(jīng)在臨床用于治療患有慢性靜脈腿部潰瘍(venous legulcers)的患者。DaCosta等，Wound Rep.Reg.717-25(1999)。在創(chuàng)傷修復的鼠切除模型中，我們已經(jīng)證明IL-18促進創(chuàng)傷修復。IL-18促進創(chuàng)傷修復的機制可能是由于細胞因子的促炎癥反應的性質，或者是作為生長因子的誘導劑例如粒細胞單核細胞集落誘導因子。
本發(fā)明的多肽可以通過公知的方法從重組細胞培養(yǎng)物中回收和純化，這些公知方法包括硫酸銨或乙醇沉淀、酸提取、陰離子或陽離子交換色譜法、磷酸纖維素色譜法、疏水作用色譜法、親和色譜法、羥磷灰石色譜法、凝集素色譜法以及高效液相色譜法。當細胞內合成、分離和/或純化中多肽變性時，可以采用公知的重折疊蛋白質的技術來恢復活性構象。在WO 01/098455號專利中公開了純化和產(chǎn)生活性人IL-18的方法。
本發(fā)明還提供了含有人IL-18多肽(SEQ ID NO1)的藥物組合物。該組合物含有治療有效量的化合物，還可以含可藥用可藥用的載體、稀釋劑或賦形劑。該藥學載體可以為無菌液體如水和油，所述油包括來自石油、動物、植物或合成的油，例如花生油、大豆油、礦物油、芝麻油等。當藥物組合物靜脈給藥時，水能用作載體。鹽溶液以及葡萄糖和甘油的水溶液也能作為例如注射溶液的液體載體。合適的藥物賦形劑包括淀粉、葡萄糖、乳糖、蔗糖、明膠、麥芽、米、面粉、白堊(chalk)、硅膠、硬脂酸鈉、單硬酯酸甘油酯、滑石、氯化鈉、干脫脂乳、甘油、丙烯、乙二醇、水、乙醇等。如果需要，該組合物還能含有較少量的潤濕劑、乳化劑或pH緩沖劑。這些組合物能形成溶液、混懸劑、乳劑、片劑、丸劑、膠囊劑、粉劑、持續(xù)釋放制劑等形式。該組合物可以與慣用的粘合劑和載體如甘油三酯一起制成栓劑?？诜浞脚浞侥芎袠藴实妮d體，如藥用級的甘露醇、乳糖、淀粉、硬脂酸鎂、糖精鈉、纖維素、碳酸鎂等。在E.W.Martin.的Remington′s Pharmaceutical Sciences中列舉了合適的藥物載體的示例。該組合物將含有治療有效量的通常為純化形式的化合物，以及合適量的載體來提供患者適當?shù)慕o藥形式。該配方配方應滿足給藥形式。
在本發(fā)明的一個實施方案中，將該組合物按照日常規(guī)程制成適合給人靜脈給藥的藥物組合物。特別是，用于靜脈給藥的組合物是在無菌等滲水性緩沖液中的溶液。適當時，該組合物還可以含有增溶劑和局部麻醉劑例如利多卡因，來減輕注射部分的疼痛。通常，組份以單獨或混合在一起以單位劑量的形式被提供，例如在如安瓶或sachette的標明活性劑含量的密封容器中的干燥的經(jīng)低壓凍干的粉末或無水濃縮劑。當組合物通過輸液給藥時，也可以在含有無菌的藥用級水或鹽水的輸液瓶中進行配藥。當組合物通過注射給藥時，可以提供一安瓶的注射用無菌水或鹽水，在給藥之前將各組份混合。
相應的，所述多肽可以用于藥物的制備。本發(fā)明的藥物組合物可以配制成用作胃腸外給藥的溶液或低壓凍干的粉末。在使用之前通過添加適當?shù)南♂寗┗蚱渌伤幱玫妮d體，可以將粉末重新溶解(reconstituted)。液體制劑可以是緩沖的、等滲的、含水的溶液。適當稀釋劑的實例為常規(guī)等滲鹽溶液、標準的5％葡萄糖的水溶液、標準的5％葡萄糖的緩沖醋酸鈉或標準的5％葡萄糖的醋酸銨溶液。該配方特別適合胃腸外給藥，但是也可以用于口服給藥或包含于計量劑量的吸入器或霧化器中用于吹入給藥?？赡苄枰蛟撍幬锝M合物中添加賦形劑，例如聚乙烯吡咯烷酮、明膠、羥基纖維素、阿拉伯膠、聚乙二醇、甘露醇、氯化鈉或檸檬酸鈉。
另一方面，可以將該多肽膠囊化、片劑化，或者將其制成乳劑或糖漿用于口服給藥?？梢蕴砑涌伤幱玫墓腆w或液體載體來增強或穩(wěn)定該組合物，或方便組合物的制備。固體載體包括淀粉、乳糖、二水硫酸鈣、白土、硬脂酸鎂或硬脂酸、滑石、果膠、阿拉伯膠、瓊脂或明膠。液體載體包括糖漿、花生油、橄欖油、鹽和水。載體還可包括持續(xù)釋放材料，如單獨的單硬酯酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯，或者再加蠟。固體載體的量不同，但是應該為每劑量單位約20mg至約1g。該藥學制劑可以通過下述藥劑學的常規(guī)技術來制備，所述技術包括當適合用于片劑時的研制(milling)、混合、制粒和壓片；或者用于硬明膠膠囊劑的研制、混合和充填。當使用液體載體時，制劑可以制成糖漿劑、酏劑、乳劑或者含水或不含水混懸液。這樣的液體配方可以直接經(jīng)口給藥(p.o.)或者填充至軟明膠膠囊中給藥。
可以將人IL-18多肽制成藥物組合物，該組合物在可藥用的載體中含有有效量的多肽作為活性成分。對本發(fā)明的組合物可以采用含有多肽、在生理pH下緩沖的含水混懸液或溶液的易于注射的形式。用于胃腸外給藥的該組合物通常含有本發(fā)明的多肽的溶液或其溶解于可藥用的載體如含水載體中的混合物(cocktail)?？梢圆捎貌煌暮d體，例如0.4％鹽水、0.3％甘氨酸等。這些溶液是無菌的并且通常不含微粒物質。這些溶液可以通過常規(guī)熟知的滅菌技術(例如，過濾)來滅菌。由于需要接近生理條件，因此該組合物可以含可藥用可藥用的輔助物質，如pH調節(jié)劑和緩沖劑等。在該藥物配方中的本發(fā)明的多肽的濃度可以根據(jù)所選擇的特定的給藥方式進行較大地變化，例如以重量計，從小于約0.5％、通常為或至少為約1％，至差不多15或20％，并且可以主要根據(jù)流體體積、粘度等進行選擇。
因此，可以制備用于肌肉注射的本發(fā)明的藥物組合物，使其含有1mL無菌緩沖的水以及約1ng至約100mg，例如約50ng至約30mg或者約5mg至約25mg的本發(fā)明的多肽。類似地，可以制備用于靜脈輸注的本發(fā)明的藥物組合物，使其含有約250mL的無菌Ringer溶液以及約1mg至約30mg、或者約5mg至約25mg的本發(fā)明的多肽。制備胃腸外給藥的組合物的目前的方法為熟知的方法，或者對本技術領域的技術人員是顯而易見的，并且在下列文獻中更加詳細地描述例如Remington′s Pharmaceutical Science，第15版，Mack出版公司，伊斯頓，賓夕法尼亞州。
當被用于藥物制劑的制備中時，本發(fā)明的多肽可以為單位劑量的形式，其適當?shù)闹委熡行┝磕鼙槐绢I域的技術人員輕松地確定。如果可以的情況下，該劑量可以在響應階段內，以醫(yī)師選擇的適當?shù)臅r間間隔重復給藥。
另外，可以任選進行體外分析來幫助確定最佳劑量范圍。在配方中采用的精確的劑量也依賴于給藥途徑、疾病或障礙的嚴重度，并且應該根據(jù)醫(yī)師的判斷以及患者的情況來確定。有效劑量可以通過從體外或動物模型試驗系統(tǒng)所得的劑量響應曲線而推測得到。
典型地，對于向患者給藥的多肽的劑量為0.1mg/kg(患者體重)至100mg/kg(患者的體重)。給藥患者的劑量可以在0.1mg/患者的體重(kg)與20mg/患者的體重(kg)之間，或者1mg/kg(患者的體重)至10mg/kg(患者的體重)。一般，由于對外源多肽的免疫應答，相對于來自其它物種的多肽，人多肽在人體中具有更長的半衰期。因此，更少劑量的人多肽以及更少頻率的給藥常常是可能的。另外，通過修飾，例如脂質化(lipidation)，可以增大本發(fā)明的多肽的吸收和組織透過(例如，進入腦)，這樣可以減少本發(fā)明的多肽的給藥劑量和頻率。
本發(fā)明還提供了藥物試劑包或藥物盒，該藥物試劑包或藥物盒包含裝有1種或多種本發(fā)明的藥物組合物的成分的1個或多個的容器。任選與該一種或多種容器組合可以由政府機構規(guī)定的形式通知，所述政府機構調整藥物制劑或生物制品的制備、使用或出售，該通知反映通過機構的許可，可以為人用給藥而進行制備、使用或出售。在本發(fā)明的另一實施方案中，將試劑盒與適當數(shù)量的容器一起提供，該容器裝有對治療具體適應癥所需要劑量。
在另一實施方案中，可以將該混合物或組合物遞送以小囊具體而言是脂質體遞送(參見Langer，Science2491527-1533(1990)；Treat等，Liposomes in theTherapy of Infectious Disease and Cancer，Lopez-Berestein和Fidler(編輯)，Liss，紐約，第353-365頁(1989)；Lopez-Berestein，同上，第317-327頁；通常參見同上)在另一實施方案中，可以將該化合物或組合物以控式釋放系統(tǒng)遞送。在一實施方案中，可以使用泵(參見Langer，同上；Sefton，CRC Crit.Ref.Biomed.Eng.14201(1987)；Buchwald等，Surgery 88507(1980)；Saudek等，N.Engl.J.Med.321574(1989))。在另一實施方案中，能使用聚合物質(參見Medical Applications of Controlled Release，Langer和Wise(編輯)，CRC Pres.，Boca Raton，F(xiàn)la.(1974)；Controlled Drug bioavailability，Drug Product Designand Performance，Smolen和Ball(編輯)，Wiley，紐約(1984)；Ranger等，J.Macromol.Sci.Rev.Macromol.Chem.2361(1983)；也參見Levy等，Science228190(1985)；During等，Ann.Neurol.25351(1989)；Howard等，J.Neurosurg.71105(1989))。在另一實施方案中，控釋釋放系統(tǒng)可以被放置在接近治療靶向的部位，即腦，因此僅需要全身劑量的一部分(參見，例如Goodson，MedicalApplications of Controlled Release，同上，第2卷，第115-138頁(1984))。在Langer(Science 2491527-1533(1990))的綜述中討論了其它的控釋系統(tǒng)。
人IL-18多肽(SEQ ID NO1)可以通過任意合適的體內途徑給藥，可以根據(jù)需要重復給藥，例如從每日1次到3次給藥1天至約3周，到每周1次或兩周1次。選擇性地，可以改變該肽來降低負荷密度，因此達到口服生物利用度。治療的劑量和持續(xù)時間與本發(fā)明的分子在人體循環(huán)中的持續(xù)時間有關，并且能由本技術領域的技術人員根據(jù)治療的情況和患者的綜合健康調整。
本發(fā)明提供了通過給藥患者有效量的包含人IL-18多肽(SEQ ID NO1)的本發(fā)明的化合物或藥物組合物來進行治療、抑制和預防的方法。在本發(fā)明的一個實施方案中，所述化合物基本上被純化(例如，基本上不含限制其效果或帶來不希望的副作用的物質)。當化合物含有多肽時，能采用如上配方和給藥方法；其它適當?shù)呐浞胶徒o藥方法可以選自下述的方案。
已知有不同的遞送系統(tǒng)，并可以用于本發(fā)明的化合物的給藥，例如，脂質體中的包囊、微粒、微囊、能表達該化合物的重組細胞、受體介導的胞吞(參見，例如Wu等，J.Biol.Chem.2624429-4432(1987))、用逆轉錄病毒或其它載體進行的核酸構建等。給藥的方法包括但不限于真皮內、肌肉內、腹膜內、靜脈內、皮下、鼻內、硬膜外給藥和口服途徑。該化合物或組合物可以通過任意合適的途徑給藥，例如輸液或推注、通過上皮細胞或粘膜與皮膚的內層吸收(例如，口腔粘膜、直腸和腸粘膜等)以及可以與其它生物活性藥物一起給藥。給藥能全身給藥也可以局部給藥。另外，希望通過任意適當?shù)耐緩綄⒈景l(fā)明的藥物化合物或組合物導入至中樞神經(jīng)系統(tǒng)，這些途徑包括腦室內和鞘內注射；通過腦室內導管可以更容易進行腦室內注射，例如，連接一個貯器(reservoir)如Ommaya貯器。還能采用肺部給藥，例如，通過使用吸入器或噴霧器以及具有霧化劑(aerosolizing agent)的配方。
在本發(fā)明的一個實施方案中希望的是向需要治療的部位局部給藥本發(fā)明的藥物化合物或組合物。這種給藥方式可以通過下述示例實現(xiàn)，但不限于此，例如在手術時局部輸注；局部施用例如在手術后與創(chuàng)傷敷料結合，通過注射，通過導管，通過栓劑，通過移植片，所述移植片為多孔、非多孔、或凝膠狀材料，包括膜例如sialastic膜，或者纖維。當給藥蛋白質時希望使用不吸收蛋白質的材料。
本發(fā)明的多肽的給藥方式可以是將藥物遞送至宿主的任意適當?shù)耐緩?。本發(fā)明的多肽和藥物組合物對胃腸外給藥尤其有效，即皮下給藥、肌肉內給藥、靜脈給藥或鼻內給藥，或者如果用于修復皮膚上的創(chuàng)傷時局部給藥。該多肽能通過胃腸外給藥給藥患者來治療粘膜炎。
在不超出本發(fā)明的發(fā)明構思以及基本特征的情況下，本發(fā)明可以通過其它具體方式來實施，并且相應地應參照權利要求書來確定本發(fā)明的范圍，而不是根據(jù)上述說明書或下述實施例。
術語表提供以下解釋使在上文中經(jīng)常出現(xiàn)的特定術語更易于理解。
在此，術語“載體”是指用于給藥治療劑的稀釋劑、佐劑、賦形劑或者媒介物。
“分離的”是指從其自然狀態(tài)改變到“人工狀態(tài)”，也就是，如果它在自然界存在，那么它已經(jīng)被改變或被從原始環(huán)境中移出，或者兩種情況兼有。例如，多核苷酸或多肽自然存在于活組織中不是“分離的”，但是，同樣的多核苷酸或多肽從至少一種其自然狀態(tài)的共存的細胞物質中分離出來就是“分離的”，就如該術語在此的使用。此外，通過轉化、基因操作或者其它重組方法被導入生物體的多核苷酸或多肽是“分離的”，即使該多核苷酸或多肽還存在于所述生物體，該生物體可以是活生物體或非活生物體。
在此使用的術語“粘膜炎”是指由輻射或化學治療造成的器官例如在腸、膀胱、口腔上皮層的破壞，。
在此使用的術語“藥物”包括本發(fā)明在獸醫(yī)上的應用。術語“治療有效劑量”是指治療劑的劑量，所述劑量對緩解所選癥狀有效。
在此使用的術語“可藥用的”是指經(jīng)聯(lián)邦或國家政府的調控機構的認可，或者在美國藥典或其它公認的藥典中列出用于動物，尤其為人用。“多肽”是指含有通過肽鍵或經(jīng)修飾的肽鍵相互連接2個或多個氨基酸的任意多肽，即，肽電子等排體?！岸嚯摹笨梢詾槎替湥ǔＶ鸽?、寡肽或低聚物，也可以為長鏈，通常指蛋白質。多肽可以包含除了20個基因編碼的氨基酸之外的氨基酸?！岸嚯摹卑ㄍㄟ^自然加工進行修飾的氨基酸序列，例如翻譯后加工，也包括通過本領域熟知的化學修飾技術進行修飾的氨基酸序列。在基礎課本中詳細描述了這些修飾，在專題著作中以及大量的研究文獻中敘述得更加細致。修飾可以發(fā)生在多肽的任意部位，包括肽的主鏈、氨基酸側鏈以及氨基或羧基端。一般認為在給定多肽的一些位點可以存在相同或不同的程度的相同類型的修飾。給定的多肽也可以含有多種類型的修飾。多肽可以由于泛素化而形成分枝，也可以為具有或不具有分枝的環(huán)狀。環(huán)狀、分枝化以及分枝化環(huán)狀多肽可以是由于翻譯后自然加工，或者通過合成方法而形成。修飾包括乙?；Ⅴ；?、ADP-糖基化、酰胺化、生物素酰化、與黃素共價連接、與血紅素部分共價連接、與核苷酸或核苷酸的衍生物共價連接、與脂質或脂質衍生物共價結合、與磷脂酰肌醇共價連接、交聯(lián)、環(huán)化、形成二硫鍵、脫甲基化、形成共價交聯(lián)、形成胱氨酸、形成焦谷氨酸、甲酰化、γ-羧化、糖基化、形成GPI錨、羥基化、碘化、甲基化、豆蔻?；⒀趸?、蛋白水解加工、磷酸化、異戊烯化、外消旋化、硒化、硫酸化、轉移RNA介導的將氨基酸加成至蛋白質，例如精氨酰化和泛素化(參見，例如Protein-Structureand Molecular Properties，第二版，T.E.Creighton，W.H.Freeman andCompany，紐約，1993；Wold，F(xiàn).，Post-translational Protein ModificationsPerspectives and Prospects，Post-translational Covalent Modification of protein，B.C.Johnson編輯，Academic Press，紐約，1983；Seifter等，Meth Enzymol，182，626-646，1990；Rattan等，Ann.NY Acad.Sci.，66348-62(1992))。
將生物活性化合物共價連接到水溶性聚合物上是改變或控制這些化合物的生物擾動、藥代動力學以及常為毒性的一種方法(Duncan，R.和Kopecek，J.(1984)Adv.Polym.Sci.5753-101)。已經(jīng)使用多種水溶性聚合物來達到這些效果，例如聚(唾液酸)、葡聚糖、聚(N-(2-羥丙基)異丁烯酰胺)(PHPMA)、聚(N-乙烯基吡咯烷酮)(PVP)、聚(乙烯醇)(PVA)、聚(乙二醇-共-丙二醇)、聚(N-丙烯酰嗎啉(PAcM)以及聚(乙二醇)(PEG)(Powell，G.M.(1980)Polyethyleneglycol。在R.L.Davidson(編輯)Handbook of Water Soluble Gums and Resins.McGraw-Hill，紐約，第18章)。PEG具有理想的性質非常低的毒性(Pang，S.N.J.(1993)J.Am.Coll.Toxicol.12429-456)、在水溶液中非常好的溶解性(Powell，supra)、低免疫原性和抗原性(Dreborg，S.和Akerblom，E.B.(1990)Crit.Rev.Ther.Drug Carrier Syst.6315-365)。在科技文獻(Clark，R.等，(1996)J.Biol.Chem.27121969-21977；Hershfield，M.S.(1997)Biochemistry andimmunology of poly(ethylene glycol)-modified adenosine deaminase(PEG-ADA)，在J.M.Harris和S.Zalipsky(編輯)Poly(ethylene glycol)中Chemistry and Biological Applications.American Chemical Society，華盛頓，，第145-154頁；Olson，K.等，(1997)Preparation and characterization ofpoly(ethylene glycol)ylated human growth hormone antagonist。在J.M.Harris和S.Zalipsky(編輯)Poly(ethylene glycol)中Chemistry and BiologicalApplications.American Chemical Society，華盛頓，第170-181頁)中描述了在蛋白質上含有單個或多個聚乙二醇鏈的PEG-綴合的或“PEG化的”蛋白治療學。
在此使用的術語“創(chuàng)傷修復”是指關于愈合傷口的組織修復過程，包括但不限于封閉傷口修復。
將本說明書中引用的包括但不限于專利和專利申請的所用出版物和參考物，全文引用作為參考，如同每個單獨的出版物或參考物被具體和單獨地全文引用作為參考。本申請要求優(yōu)先權的任何專利申請也以與出版物和參考物的上述方式相同的方式被全文引用作為參考。
實施例1切除性創(chuàng)傷修復模型糖尿病小鼠，如ob/ob品系，表現(xiàn)出延遲性創(chuàng)傷愈合。Stallmeyer等，Diabetologia 44471-479(2001)。ob/ob小鼠是自然出現(xiàn)的缺失瘦蛋白ob/ob基因的小鼠的品系，所述基因編碼瘦蛋白(Ieptin)。瘦蛋白與細胞因子類I受體obRb結合，并活化細胞內的減少食欲的信號級聯(lián)。由于ob/ob小鼠不能生成瘦蛋白，因此它們比較肥胖，為正常C57/B16小鼠的兩倍體重。該肥胖小鼠還有其它代謝缺陷，包括產(chǎn)熱減少、攝食過量、生育減少以及生長激素的抑制。Ring等，Endocrinol.141(1)446-449(2000)。ob/ob小鼠的創(chuàng)傷恢復的延遲歸因于它們的糖尿病樣表型。
受損創(chuàng)傷修復模型提供了研究特殊細胞因子對創(chuàng)傷修復作用的機會，所述細胞因子可例舉如IL-18和生長因子如血小板衍生生長因子(PDGF)。研究表明，局部應用PDGF-β可以增進糖尿病小鼠品系db/db的創(chuàng)傷修復。Greenlaugh等，Am.J.Pathol.1361235-1246(1990)。該db/db品系的表型與ob/ob品系相似，但是db/db小鼠缺少瘦蛋白受體。db/db小鼠的創(chuàng)傷在細胞浸潤、粒狀組織形成中表現(xiàn)明顯的延遲，并且表現(xiàn)延遲創(chuàng)傷愈合。血小板衍生生長因子(PDGF-β)對平滑肌細胞和成纖維細胞既是促細胞分裂劑又是化學引誘物，并且對db/db小鼠的創(chuàng)傷引起快速的再次表皮細胞再生。雖然以往白介素-18(IL-18)沒有在創(chuàng)傷修復模型中作為治療劑使用，但是研究表明，ob/ob小鼠的創(chuàng)傷中IL-18的表達水平增加，但蛋白產(chǎn)物沒有增加。Kampfer等，J.Invest.Derm.113(3)369-74(1999)。由于IL-18是促炎細胞因子(Kampfer等，Eur.Cytokine Netw.11626-33(2000))，它可通過刺激細胞浸潤至創(chuàng)傷處，在創(chuàng)傷愈合中起重要作用。
為了研究局部給藥IL-18或PDGF-β對創(chuàng)傷修復的作用，使用氯胺酮(90mg/kg)/賽拉嗪(10mg/kg)混合物(cocktail)麻醉10-14周齡的雌性ob/ob小鼠。在兔耳模型中腺病毒-介導的PDGF過表達表現(xiàn)出修正缺血性創(chuàng)傷修復。Liechty等，J.Invest.Dermatol.113375-383(1999)。Liechty等證實了，復制不足的腺病毒有效地將PDGF-β轉基因直接給藥至創(chuàng)傷部位的細胞。將每只小鼠的后背的上部剃毛，交替用乙醇和聚維酮碘擦拭形成一個無菌區(qū)。用無菌生檢打孔器使每只小鼠形成兩個直徑6mm的全厚度環(huán)形切除性創(chuàng)傷。將編碼鼠IL-18(SEQ ID NO2)、鼠PDGF-β(SEQ ID NO3的氨基酸1-61和171-221)或者對照(空腺病毒-CMV.Null))的腺病毒(1×1010病毒粒/創(chuàng)傷)直接局部遞送至創(chuàng)傷部位。鹽水對照也直接遞送至創(chuàng)傷部位。隨后將Polaxamer(普盧蘭尼克(Pluronic)F127在10％的磷酸鹽緩沖鹽(PBS)中)覆蓋在創(chuàng)傷上，再用透明的無菌敷料覆蓋。為了確定創(chuàng)傷愈合速率每間隔兩天將創(chuàng)傷的周線印記至透明膠片上。當所有的創(chuàng)傷愈合，該研究結束時，將該透明光膠片光學掃描，并用Scion Image軟件(Scion Corporation，F(xiàn)rederick，Maryland，U.S.A)確定表面積。該實驗的結果示于圖5。
通過直接克隆的方法得到對照腺病毒、Ad.mPDGF-β(SEQ ID NO3氨基酸1-61和171-221)(Sukmanm A.J.，Kallarakal，A.，F(xiàn)ornwald，J.，Kozarsky，K.F.，Appelbaum，E.，Shatzman，A.R.和Lu，Q.2002，Generation of recombinantadenovirus vectors by a direct cloning approach.In Gene Cloning andExpression Technologies，M.P.Weiner和Q.Lu(編輯).第341-355頁.Eaton出版，Westborough，MA)。簡而言之，將用于鼠PDGF-β的ORF經(jīng)PCR擴增，并且將其克隆至pAC2XS的XbaI/SwaI位點，將該基因置于CMV IE啟動因子的控制下。通過用限制酶PacI消化將腺病毒載體的經(jīng)純化的分子克隆DNA線性化，使ITRs暴露，并轉染至HEK293細胞中用以腺病毒復蘇(rescue)。通過記載的CsCl顯帶法(Engelhardt，J.1999.Methods foradenovirus-mediated gene transfer to airway epithelium.In Methods inMolecular Medicine，Gene Therapy Protocols，P.Robbins(編輯).第169-184頁.Humana Press，Totowa)將該腺病毒擴增和純化。通過使用生物凝膠柱(Bio-Rad)使?jié)饪s的腺病毒除去鹽分，并將其于-80℃儲存在含有10％甘油的1×PBS中。使用在Osaki等，Gene Therapy 6808-815(1999)中描述的方法，可進行該Ad.m-IL-18的構建。
由于用腺病毒載體局部遞送了蛋白質構建物，Ad.m-PDGF-β(SEQ IDNO3的氨基酸1-61和171-221)以及Ad.m-IL-18(SEQ ID NO2)均顯著促進ob/ob切除性創(chuàng)傷修復模型的創(chuàng)傷修復。與載體對照(Ad.CMV.Null)相比較，作為陽性對照蛋白的Ad.m-PDGF-β(SEQ ID NO3的氨基酸1-61和171-221)以及Ad.m-IL-18(SEQ ID NO2)在第7.5和9.5日分別達到50％修復第0日的創(chuàng)傷(50％ Day Zero closure)，所述載體對照在創(chuàng)傷后第20日達到50％修復第0日創(chuàng)傷。另外，Ad.m-IL-18(SEQ ID NO2)和Ad.m-PDGF-β(SEQ ID NO3的氨基酸1-61和171-221)在20天內均加速了創(chuàng)傷的完全愈合。創(chuàng)傷之后的第22天的研究結論表明，鹽水或載體對照組均沒有完全愈合。已經(jīng)證實了在切除性創(chuàng)傷修復模型中局部施用Ad.IL-18的陽性作用，研究了全身遞送鼠IL-18蛋白質(SEQ ID NO2)的效果。
為了確定系統(tǒng)遞送鼠IL-18(SEQ ID NO2)的作用，使用氯胺酮(90mg/kg)/賽拉嗪(10mg/kg)混合物麻醉10-14周齡的雌性ob/ob小鼠。在創(chuàng)傷過程之前的2小時，腹膜內給藥小鼠多劑量(從0.1μg/0.5ml至100μg/0.5m1)的鼠IL-18蛋白質(SEQ ID NO2)或者載體(不含鈣和鎂的PBS)。將每只小鼠的后背的上部剃毛，交替用乙醇和聚維酮碘擦拭形成一個無菌區(qū)。用無菌生檢打孔器使每只小鼠形成兩個直徑6mm的全厚度環(huán)形切除性創(chuàng)傷。將鹽水直接施用至創(chuàng)傷，之后用透明的無菌敷料覆蓋。為了確定創(chuàng)傷愈合速率每間隔兩天將創(chuàng)傷的周線印記至透明膠片上。當所有的創(chuàng)傷愈合，該研究結束時，將該透明光膠片光學掃描，并用Scion Image軟件(Scion Corporation，F(xiàn)rederick，Maryland，U.S.A)確定表面積。在該系統(tǒng)研究的整個過程中，監(jiān)測小鼠體重的減少和增加。將該實驗的結果示于圖6。
由于系統(tǒng)遞送經(jīng)純化的蛋白質，鼠IL-18(SEQ ID NO2)提高創(chuàng)傷修復的速率，并在0.1μg至100μg/小鼠/日的劑量范圍內顯示劑量依賴性。最有效的劑量為50和100μg/小鼠/日，與載體對照相比較，這兩個劑量分別在第8和9日達到50％修復第0日創(chuàng)傷，載體對照在第16日達到50％修復第0日創(chuàng)傷。與PBS對照相比較，m-IL-18(SEQ ID NO2)治療提高了完全修復速率。
在ob/ob切除性創(chuàng)傷修復模型中，局部和全身遞送鼠IL-18(SEQ ID NO2)均可增強創(chuàng)傷修復。PDGF在我們的鼠創(chuàng)傷修復研究中被作為陽性對照來使用。重組人血小板來源的生長因子已經(jīng)被U.S.Food and Drug Administration許可來治療糖尿病足潰瘍。Wieman等，Am.J.Surg.176745-795(1998)。許多身體疾病來自于組織損傷，這些組織損傷破壞了組織的自然構造，導致創(chuàng)傷。在該專利中提到的適應癥均是通過用人IL-18(SEQ ID NO1)治療可以修復的組織損傷的示例。
實施例2對切除性創(chuàng)傷每日局部遞送人IL-18由于在鼠切除性創(chuàng)傷修復模型中，以腺病毒構建物局部遞送鼠IL-18(SEQ ID NO2)是有效的，因此進行了將純化的人IL-18(SEQ ID NO1)蛋白質每日直接用于上述實施例1的創(chuàng)傷的研究。以10μg/30μl/創(chuàng)傷的劑量施用人IL-18蛋白質(SEQ ID NO1)。磷酸緩沖鹽(PBS)作為稀釋劑對照。結果示于圖7，表明與PBS對照相比較，人IL-18(SEQ ID NO1)加速創(chuàng)傷修復。在臨床上，人PDGF已經(jīng)局部應用來治療糖尿病足潰瘍。Wieman等，Am.J.Surg.176745-795(1998)。
實施例3腸粘膜炎模型癌癥治療，如化學治療或放射，常常由于腺管(crypt)的破壞導致胃腸道的細胞毒損傷。該腺管損耗導致潰瘍沿著上皮組織的裸露部位發(fā)展，引起胃腸道粘膜炎。一個密切相關的情況為，當細胞毒劑破壞口腔的上皮層時，導致潰瘍發(fā)展，發(fā)生口腔粘膜炎。如果蛋白質，如人角化細胞生長因子(KGF)(SEQ ID NO4)在腸粘膜炎模型中具有活性，那么它通過刺激上皮的增殖和分化，可以作為有絲分裂因子。Potten等，Cell GrowthDiffer.12265-75(2001)?；蛘?，人KGF(SEQ ID NO4)可以作為細胞周期抑制劑，所述抑制劑在細胞毒損傷之前誘導干細胞停止周期，因此保護了干細胞，從而，延長了腺管存活。Farrell等，Cancer Res.58933-39(1998)。同樣地，在口腔粘膜炎中降低干細胞對細胞毒損傷的敏感性及/或改善接觸后的再生應答的治療，通過減少目前癌癥治療方法的副作用，將具有臨床上的作用。Sonis等，J.Am.Dent.Assoc.97468-472(1978)。
采用一種分析方法來說明IL-18在粘膜炎中的作用腺管存活分析。
A.腸粘膜炎模型的腺管存活分析下述方法改良自EpiStem，Ltd.，Incubator Building，Grafton Street，Manchester，M13 9XX，UK.。
使用30只成年(10-12周齡)雄性BDF1小鼠。所用動物飼養(yǎng)2周用以穩(wěn)定晝夜循環(huán)周期(Potten等，1977，Cell Tissue Kinet.，10，557)。將小鼠單獨的放置在12小時光亮黑暗循環(huán)的SPF柵欄單元中的通風籠子(IVCs)中。整個過程中，動物可以自由攝食和飲水。整個過程符合UK Home Office(AnimalProcedures)Act 1986。將動物以，每組6只隨機分成以下6組(1)照射前以及照射后腹腔注射鹽水的組；(2)在照射前腹腔注射藥物，在照射后注射鹽水的組；(3)在照射前腹腔注射鹽水，在照射后注射藥物的組；(4)在照射前和照射后注射藥物的組；(5)未處理對照組；以及(6)照射前腹腔注射人KGF(SEQID NO4)，在照射后注射鹽水的組(陽性對照)。
利用單劑量的13Gy X-射線照射，采用全身暴露造成腸損傷。13Gy為開始的最佳中劑量，因為應該篩選出受試化合物的所有潛在保護作用(Withers等，1969，Rad.Res.，38，598)。所有動物從開始進行處理到被處死均每日稱重。動物在照射4日后被處死。將小腸剝離并用Carnoy’s固定劑固定。處理所有組織用于顯微解剖學(石蠟包埋)。使用Carnoy’s固定材料對每個治療組中的小腸腺管的存活數(shù)量進行記分并使用未處理對照組進行大小校正，作為各組的“ClonoQuantTM”。對于每只小鼠，對10個腸橫切片進行記分并計算每個橫切片的腺管數(shù)量的平均值(Farrell等，1998，Cancer Res.，58，933)。也測量腺管的厚度來校正由大小引起的評分誤差。再進行大小校正之后，對每組的每個橫切片的腺管的平均數(shù)進行記分。將采用的注射方案示于下表1。蛋白質購自PeproTech，，產(chǎn)品目錄為100-19。
表1

S＝腹膜內注射鹽水D＝腹膜內注射藥物KGF＝腹膜內注射陽性對照藥I＝用13Gy照射C＝篩選(Cull)Gp＝組根據(jù)該方案，在09:00進行所有的注射。在15:00進行照射。
在對04/135C的研究中，考察在照射之后鼠IL-18(SEQ ID NO2)對腸腺管存活的作用，該考察是在由EpiStem Ltd.EpiStem’s CLONOQUANT系統(tǒng)協(xié)約下進行的，對小腸的橫切片中的再生腺管進行識別和定量。在細胞毒損傷之后，再生的腺管迅速增多，并且十分容易從死亡的腺管中區(qū)分。人KGF(SEQ ID NO4)的劑量為6.25mg/kg/日，并在該研究中作為陽性對照。鼠IL-18(SEQ ID NO2)的劑量為5mg/kg/日。將關于每個腺管周邊的腺管的存活數(shù)量的數(shù)據(jù)顯示在圖6中。
下表2中總結了從放射誘發(fā)粘膜炎模型中得到的數(shù)據(jù)。用于放射誘發(fā)的粘膜炎的研究中的陽性對照人KGF(SEQ ID NO4)，在于照射之前給藥3天的情況下顯示出良好的活性。人KGF(SEQ ID NO4)組在存活腺管的數(shù)量上顯示為鹽水對照組的4倍。鼠IL-18(SEQ ID NO2)在于照射之前給藥3天的情況下，具有與人KGF(SEQ ID NO4)相當?shù)幕钚?，其在腺管存活方面顯示出為鹽水對照組的3倍。與鹽水對照組比較，當在照射前和照射后均給藥鼠IL-18(SEQ ID NO2)時，腺管存活的數(shù)量提高至2倍。當僅在照射之后給藥鼠IL-18(SEQ ID NO2)時效果最小，對存活腺管僅導致提高至1.6倍。在照射之前給藥鼠IL-18(SEQ ID NO2)3天是最有效的治療方案。
雖然化學治療和放射治療對于殺死癌細胞是成功的治療方法，但是健康的組織也同時受到破壞。當胃腸道上皮層缺乏抵抗力時，會出現(xiàn)潰瘍和腺管破壞，給患者帶來痛苦，患者不能進食并容易受到感染。另外，粘膜炎的發(fā)展將導致病人在完成化學治療或放射治療的全程治療方案中缺少順應性。在鼠模型中，KGF改善了放射和化學治療引起的口腔和胃腸道上皮的損傷。已經(jīng)顯示出，重組[人]KGF可以減輕接受氟尿嘧啶+亞葉酸治療的轉移性結腸癌患者的口腔粘膜炎。Meropol等，J.Clin.Oncol.211452-1458(2003)。在放射誘發(fā)的粘膜炎模型中，鼠IL-18(SEQ ID NO2)已經(jīng)顯示出對保護腸腺管的有效性，并可以用作對人的緩和治療。由于IL-18已經(jīng)在放射誘發(fā)的粘膜炎中顯示出陽性作用，因此它也可以用于治療口腔粘膜炎中的受損上皮組織。
表2.
原始數(shù)據(jù)每個腺管環(huán)狀面的存活腺管的數(shù)量

序列表<110>史密絲克萊恩比徹姆公司(SMITHKLINE BEECHAM CORPORATION)DEDE，KimberlyLEE，Judithann<120>給藥人IL-8治療創(chuàng)傷的方法<130>PU60998<140>Herewith<141>2005-08-05<150>60/603,012<151>2004-08-20<160>4<170>FastSEQ for Windows Version 4.0<210>1<211>157<212>PRT<213>人(Homo sapien)<400>1Tyr Phe Gly Lys Leu Glu Ser Lys Leu Ser Val Ile Arg Asn Leu Asn1 5 10 15Asp Gln Val Leu Phe Ile Asp Gln Gly Asn Arg Pro Leu Phe Glu Asp20 25 30Met Thr Asp Ser Asp Cys Arg Asp Asn Ala Pro Arg Thr Ile Phe Ile35 40 45Ile Ser Met Tyr Lys Asp Ser Gln Pro Arg Gly Met Ala Val Thr Ile50 55 60Ser Val Lys Cys Glu Lys Ile Ser Thr Leu Ser Cys Glu Asn Lys Ile65 70 75 80Ile Ser Phe Lys Glu Met Asn Pro Pro Asp Asn Ile Lys Asp Thr Lys85 90 95Ser Asp Ile Ile Phe Phe Gln Arg Ser Val Pro Gly His Asp Asn Lys100 105 110Met Gln Phe Glu Ser Ser Ser Tyr Glu Gly Tyr Phe Leu Ala Cys Glu115 120 125Lys Glu Arg Asp Leu Phe Lys Leu Ile Leu Lys Lys Glu Asp Glu Leu130 135 140Gly Asp Arg Ser Ile Met Phe Thr Val Gln Asn Glu Asp145 150 155<210>2<211>157<212>PRT<213>小鼠(Mus musculus)<400>2Asn Phe Gly Arg Leu His Cys Thr Thr Ala Val Ile Arg Asn Ile Asn15 10 15Asp Gln Val Leu Phe Val Asp Lys Arg Gln Pro Val Phe Glu Asp Met20 25 30Thr Asp Ile Asp Gln Ser Ala Ser Glu Pro Gln Thr Arg Leu Ile Ile35 40 45
Tyr Met Tyr Lys Asp Ser G1u Val Arg Gly Leu Ala Val Thr Leu Ser50 55 60Val Lys Asp Ser Lys Met Ser Thr Leu Ser Cys Lys Asn Lys Ile Ile65 70 75 80Ser Phe Glu Glu Met Asp Pro Pro Glu Asn Ile Asp Asp Ile Gln Ser85 90 95Asp Leu Ile Phe Phe Gln Lys Arg Val Pro Gly His Asn Lys Met Glu100 105 110Phe Glu Ser Ser Leu Tyr Glu Gly His Phe Leu Ala Cys Gln Lys Glu115 120 125Asp Asp Ala Phe Lys Leu Ile Leu Lys Lys Lys Asp Glu Asn Gly Asp130 135 140Lys Ser Val Met Phe Thr Leu Thr Asn Leu His Gln Ser145 150 155<210>3<211>241<212>PRT<213>人(Homo sapien)<220>
<221>SIGNAL<222>(-241)...(20)<400>3Met Asn Arg Cys Trp Ala Leu Phe Leu Pro Leu Cys Cys Tyr Leu Arg-20 -15 -10 -5Leu Val Ser Ala Glu Gly Asp Pro Ile Pro Glu Glu Leu Tyr Glu Met1 5 10Leu Ser Asp His Ser Ile Arg Ser Phe Asp Asp Leu Gln Arg Leu Leu15 20 25His Arg Asp Ser Val Asp Glu Asp Gly Ala Glu Leu Asp Leu Asn Met30 35 40Thr Arg Ala His Ser Gly Val Glu Leu Glu Ser Ser Ser Arg Gly Arg45 50 55 60Arg Ser Leu Gly Ser Leu Ala Ala Ala Glu Pro Ala Val Ile Ala Glu65 70 75Cys Lys Thr Arg Thr Glu Val Phe Gln Ile Ser Arg Asn Leu Ile Asp80 85 90Arg Thr Asn Ala Asn Phe Leu Val Trp Pro Pro Cys Val Glu Val Gln95 100 105Arg Cys Ser Gly Cys Cys Asn Asn Arg Asn Val Gln Cys Arg Ala Ser110 115 120Gln Val Gln Met Arg Pro Val Gln Val Arg Lys Ile Glu Ile Val Arg125 130 135 140Lys Lys Pro Ile Phe Lys Lys Ala Thr Val Thr Leu Glu Asp His Leu145 150 155Ala Cys Lys Cys Glu Thr Ile Val Thr Pro Arg Pro Val Thr Arg Ser160 165 170Pro Gly Thr Ser Arg Glu Gln Arg Ala Lys Thr Pro Gln Ala Arg Val175 180 185Thr Ile Arg Thr Val Arg Ile Arg Arg Pro Pro Lys Gly Lys His Arg190 195 200Lys Phe Lys His Thr His Asp Lys Ala Ala Leu Lys Glu Thr Leu Gly205 210 215 220Ala<210>4
<211>164<212>PRT<213>小鼠(Mus musculus)<400>4Met Cys Asn Asp Met Thr Pro Glu Gln Met Ala Thr Asn Val Asn Cys1 5 10 15Ser Ser Pro Glu Arg His Thr Arg Ser Tyr Asp Tyr Met Glu Gly Gly20 25 30Asp Ile Arg Val Arg Arg Leu Phe Cys Arg Thr Gln Trp Tyr Leu Arg35 40 45Ile Asp Lys Arg Gly Lys Val Lys Gly Thr Gln Glu Met Lys Asn Asn50 55 60Tyr Asn Ile Met Glu Ile Arg Thr Val Ala Val Gly Ile Val Ala Ile65 70 75 80Lys Gly Val Glu Ser Glu Phe Tyr Leu Ala Met Asn Lys Glu Gly Lys85 90 95Leu Tyr Ala Lys Lys Glu Cys Asn Glu Asp Cys Asn Phe Lys Glu Leu100 105 110Ile Leu Glu Asn His Tyr Asn Thr Tyr Ala Ser Ala Lys Trp Thr His115 120 125Asn Gly Gly Glu Met Phe Val Ala Leu Asn Gln Lys Gly Ile Pro Val130 135 140Arg Gly Lys Lys Thr Lys Lys Glu Gln Lys Thr Ala His Phe Leu Pro145 150 155 160Met Ala Ile Thr
權利要求
1.一種在需要治療的患者中治愈創(chuàng)傷的方法，包括向所述患者給藥治療有效劑量的人IL-18多肽(SEQ ID NO1)的步驟。
2.如權利要求2所述的方法，其中所述創(chuàng)傷選自皮膚創(chuàng)傷、外科創(chuàng)傷、腿部潰瘍、糖尿病潰瘍、粘膜炎以及肺損傷。
3.如權利要求2所述的方法，其中經(jīng)胃腸外給藥途徑給藥人IL-18。
4.如權利要求3所述的方法，其中所述胃腸外給藥選自皮下給藥、肌內給藥、靜脈給藥或和鼻內給藥。
5.如權利要求2所述的方法，其中所述粘膜炎為口腔粘膜炎。
6.如權利要求2所述的方法，其中所述粘膜炎為腸粘膜炎。
7.一種在需要治療的患者中治愈創(chuàng)傷的方法，包括向所述患者給藥藥物組合物的步驟，所述藥物組合物包括有效量的人IL-18多肽(SEQ ID NO1)和載體的組合。
8.如權利要求5所述的方法，其中所述創(chuàng)傷選自皮膚創(chuàng)傷、外科創(chuàng)傷、腿部潰瘍、糖尿病潰瘍、粘膜炎以及肺損傷。
9.如權利要求8所述的方法，其中所述粘膜炎為口腔粘膜炎。
10.如權利要求8所述的方法，其中所述粘膜炎為腸粘膜炎。
11.如權利要求2所述的方法，其中經(jīng)胃腸外給藥途徑給藥所述藥物組合物。
12.如權利要求11所述的方法，其中所述胃腸外給藥選自皮下給藥、肌內給藥、靜脈給藥或和鼻內給藥。
13.如權利要求8所述的方法，其中所述創(chuàng)傷為皮膚創(chuàng)傷，并且進一步地向所述患者局部給藥所述藥物組合物。
全文摘要
本發(fā)明一般涉及人IL－18在治療皮膚創(chuàng)傷、外科創(chuàng)傷、腿部潰瘍、糖尿病患者潰瘍、胃腸道粘膜炎、口腔粘膜炎以及肺損傷中的用途，所述人IL－18也被認為是干擾素－γ－誘導因子(IGIF)。
文檔編號A61K45/00GK101039696SQ200580033819
公開日2007年9月19日 申請日期2005年8月18日 優(yōu)先權日2004年8月20日
發(fā)明者朱迪森·李, 金伯利·A·戴德 申請人:史密絲克萊恩比徹姆公司