專利名稱：治療癌癥的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及治療非典型組織如增生組織、囊腫和新生物(包括腫瘤和癌癥)的方法，以及預(yù)防非典型組織、囊腫和新生物發(fā)育或使其退化或緩解的方法。具體而言，本發(fā)明涉及治療包括良性和癌性在內(nèi)的不同癌癥類型(包括乳腺病如乳腺囊腫和新生物)的方法，以及通過將梭菌毒素局部給藥至患病非典型組織或其附近治療增生腺細(xì)胞和/或高滲腺細(xì)胞的方法。
背景技術(shù)：
眾所周知，如果不對許多增生組織進(jìn)行治療，那么它們就會發(fā)展成為癌性組織，例如(1)不同增生乳腺組織、組織轉(zhuǎn)化乳腺組織或非典型乳腺組織會發(fā)展成癌癥(參見例如Ellis I.O.，et al，Tumors of theBreast，chapter 16(pages 865-930)of″Diagnostic Histopathologyof Tumors″，volume 1，edited by Fletcher C.D.M.，second edition，Churchill Livingstone(2000)，在下文中進(jìn)一步討論，以及FabianCJ.et al Beyond tamoxifen new endpoints for breast cancerchemoprevention，new drugs for breast cancer prevention，.Ann NYAcad Sci 2001 Dec；95244-59)；(2)增生腸組織如息肉會轉(zhuǎn)化為癌(參見例如Der，R.et al Gastric Neoplasms，chapter 5(pages 105-144)of Chandraspma，P.，″Gastrointestinal Pathology″，Appleton &Lange(1999)，具體在第106-107頁)；(3)口腔上皮增生和口咽上皮增生指示癌前病灶。Sunaga H.，et al.Expression of granulocytecolony-stimulating factor receptor and platelet-derivedendothelial cell growth factor in oral and oropharyngealprecancerous lesions.Anticancer Res 2001 JuI-Aug；21(4B)2901-6；(4)子宮內(nèi)膜增生組織為癌前組織。Sivridis E.et al.，Prognostic aspects on endometrial hyperplasia and neoplasia，Virchows Arch 2001 Aug；439(2)118-26，and；(5)腎臟和前列腺細(xì)胞增生已被證明是引起癌細(xì)胞發(fā)育的因子。Van Poppel，H.，et al.，Precancerous lesions in the kidney Scand J Urol Nephrol Suppl 2000；(205)136-65乳腺癌女人的乳腺(同義詞，乳房)是高度修飾的頂泌汗腺，具有為新生兒提供營養(yǎng)物質(zhì)的特殊功能。乳腺由管泡狀上皮腺組織、圍繞腺組織的纖維結(jié)締組織(基質(zhì))和葉間脂肪組織組成。乳腺的神經(jīng)供給來源于具有感覺傳出纖維和交感傳出纖維的第四根到第六根肋間神經(jīng)的前支和側(cè)支。腺組織的分泌活性主要受控于卵巢激素和垂體激素，而非傳出運動纖維。在雌性中，乳腺在青春期發(fā)育，在絕經(jīng)期退化。妊娠期間，乳腺中的分泌成分在大小和數(shù)目上大大增加，為泌乳做準(zhǔn)備。每個乳腺由15-25個稱為腺葉的獨立的腺單位組成，每個葉由一個復(fù)管泡狀腺組成。每個葉連接一個與其它輸乳管匯集在乳頭處的輸乳管。葉埋于一塊被膠原間隔細(xì)分的脂肪組織之中。皮膚的特定區(qū)域乳暈圍繞在乳頭底部周圍。乳腺位于深層胸肌筋膜之上，胸肌筋膜又覆蓋在胸肌和前鋸肌之上。
乳腺癌是女性中最常見的癌癥(除皮膚癌和肺癌之外)，在1999年，美國有175,000多名女性被診斷患有乳腺癌，并且據(jù)估計這些人中約有43,300人將死于該病。在美國，乳腺癌每年將使約40,000名女性喪生。在美國，乳腺癌占所有女性患有癌癥的29％。據(jù)估計有八分之一的女性在其一生的某個時候會開始患乳腺癌。盡管早期檢測使得治愈率有所提高，但是乳腺癌依然是54歲以下成年女性患癌死亡的最常見原因，并且是54歲以上成年患者患癌死亡的第二常見原因。在所有年齡段的女性中，作為女性患癌死亡的主要原因，乳腺癌僅次于肺癌。全部乳腺癌病例中不到1％出現(xiàn)在男性中。
良性乳腺腫瘤可包括纖維囊性改變、纖維腺瘤和變異體、硬化病灶(sclerosing lesion)、乳頭狀瘤(由覆蓋有上皮細(xì)胞的纖維血管中心組成的結(jié)構(gòu))和增殖性乳腺病(proliferative breast disease)。囊腫被認(rèn)為是由于小葉內(nèi)卷(lobular involution)過程所引起。囊腫是病理學(xué)膨脹的囊，由上皮細(xì)胞排列形成并包含流體。識別了兩種主要形式的乳腺囊腫由一層上皮細(xì)胞排列形成的囊腫和由頂泌性上皮細(xì)胞排列形成的更為常見形式的囊腫，后者與正常頂泌汗腺上皮細(xì)胞相似。囊腫被認(rèn)為是由于小葉內(nèi)卷過程所引起并且非常普遍，占總?cè)后w的約19％，并且有7％可觸及。治療方法通常通過抽吸術(shù)(aspiration)?？稍诩s77％患有癌癥的乳腺中發(fā)現(xiàn)囊腫(Ellis et al，第866頁)。乳腺囊腫的頂泌上皮層可表現(xiàn)出增生。另外，頂泌組織轉(zhuǎn)化常見于乳腺之中，通常與囊腫形成相關(guān)。此外，頂泌組織轉(zhuǎn)化可與其它非囊性良性乳腺疾病相關(guān)，包括硬化性腺病(腺病為腺組分的增大或數(shù)量的增加)、乳頭狀瘤和纖維腺瘤。有意義的是，頂泌改變(非典型)并非炎性病癥，它被看作一類癌前組織的指標(biāo)，這類癌前組織表明患者隨后發(fā)生乳腺癌如大汗腺癌(apocrine carcinoma)或髓樣癌的風(fēng)險顯著增加。最后，上皮增生、管道增生和小葉增生均被看作指示乳腺癌發(fā)生風(fēng)險的癌前乳腺組織病癥。Ellis I.O.，et al，Tumors of the Breast，參見上文，具體在第866-867、881和884頁。
因此，很顯然良性增生改變或纖維囊性改變(纖維囊性疾病)以及增生已被鑒定為發(fā)生乳腺癌風(fēng)險的形態(tài)學(xué)標(biāo)記。Rosen，P.R.，Rosen′sBreast Pathology，第二版，Lippincott Williams & Wilkins(2001)，chapter 10(″Precancerous Breast Disease″)，第229-248頁，具體在第231-232和236-239頁。
基因突變是引起約5％的家族性乳腺癌的原因。Li-Fraumeni綜合征是一種罕見的遺傳性綜合征，與乳腺新生物、腦新生物和腎上腺新生物以及肉瘤、淋巴瘤和白血病相關(guān)。該綜合征的病因被認(rèn)為與p53基因的突變相關(guān)，該p53基因為腫瘤抑制基因。
乳腺癌的特征在于沿乳腺的導(dǎo)管或小葉排列的上皮細(xì)胞的惡性增生。一般認(rèn)為乳腺癌是激素依賴的，因為不具有功能性卵巢和從未接受過雌激素替代的女性很明顯一般并不會發(fā)生乳腺癌。惡性腫瘤可在任一種乳腺結(jié)構(gòu)中產(chǎn)生。導(dǎo)管癌為最常見的一種，然后是小葉癌和由于其它結(jié)締組織所引起的惡性腫瘤。
侵入性(浸潤性)導(dǎo)管癌為最常見的細(xì)胞類型，占所有乳腺癌病例的70％到80％。腫瘤可出現(xiàn)在乳腺癌的任何年齡段，最常出現(xiàn)于50到60歲之間的中期到后期的婦女中。它的特征在于其實心(solid core)在觸診時通常是堅硬的。相關(guān)的原位導(dǎo)管癌經(jīng)常出現(xiàn)，并且粉刺型壞死(comedo necrosis)可出現(xiàn)在侵入性區(qū)域和導(dǎo)管內(nèi)癌區(qū)域。侵入性導(dǎo)管癌通常擴(kuò)散到局部淋巴結(jié)，并且在各種類型的導(dǎo)管癌中預(yù)后最差。核級和組織學(xué)級已顯示為有效的預(yù)后預(yù)測指標(biāo)。
原位導(dǎo)管癌(ductal carcinoma in-situ，DCIS)由乳腺導(dǎo)管周圍的惡性上皮細(xì)胞組成，未見通過基膜侵入周圍組織的微觀證據(jù)。根據(jù)腫瘤分化，可將DCIS進(jìn)一步分為低級、中級和高級。這種分級與預(yù)后有一定關(guān)系。DCIS具有五種組織學(xué)亞型，即粉刺型、乳頭型、微乳頭型、篩狀型和實體型。粉刺型亞型很有可能出現(xiàn)高核級、微侵入以及her-2/neu癌基因的過表達(dá)。DCIS相關(guān)乳房造影異常最顯著的特征是“成簇樣微小鈣化”。已提出使用結(jié)構(gòu)、核級和壞死的組合的新分類系統(tǒng)。侵入性小葉癌相對不常見，僅占乳腺腫瘤的5％到10％。侵入性小葉癌的特征在于在同一乳腺或?qū)?cè)乳腺中多中心性的比例較高。該病灶傾向于具有不明確的邊緣，并且有時唯一的證據(jù)是略為增厚或硬結(jié)。浸潤性小葉癌患者特別容易兩側(cè)患癌。逐步地，侵入性小葉癌具有與浸潤性導(dǎo)管癌相似的預(yù)后。
原位小葉癌(lobular carcinoma in-situ，LCIS)通常缺乏特定臨床或乳房造影征兆，更多地出現(xiàn)在絕經(jīng)前的女性之中。通過定義，這些癌細(xì)胞被限定為未侵入乳腺的小葉細(xì)胞。LCIS的微觀特征在于小細(xì)胞的實體增殖。該細(xì)胞增殖率較低、一般為雌激素受體陽性，并且很少過表達(dá)her-2/neu癌基因。由于已報道該病有兩側(cè)發(fā)展的風(fēng)險，因此一些研究人員推薦僅進(jìn)行兩側(cè)乳房切除術(shù)并立即進(jìn)行乳房再造術(shù)(breastreconstruction)的治療方法。若選擇密切觀察，那么必須進(jìn)行終生觀察，這是由于乳腺癌增加的風(fēng)險并不確定。管狀癌也已知為一種高度分化的癌癥。腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的發(fā)生率為約10％，這比導(dǎo)管癌的低。認(rèn)為該病的預(yù)后比侵入性導(dǎo)管癌要好。髓樣癌的特征在于顯著的淋巴細(xì)胞浸潤。髓樣癌患者似乎比其它類型的乳腺癌患者更年輕。認(rèn)為該病的預(yù)后也比侵入性導(dǎo)管癌要好。
炎性乳腺癌的特征在于彌散性皮膚水腫、皮膚和乳腺紅腫以及皮下組織變硬，但沒有可觸及的腫塊。該臨床表現(xiàn)主要是由于真皮淋巴管(皮膚淋巴通道)的腫瘤栓塞和伴隨的淺層毛細(xì)血管的充血。炎性乳腺癌預(yù)后較差，優(yōu)選通過切除術(shù)治療。
乳頭的Paget’s疾病是乳腺癌的一種罕見形式，其臨床特征在于乳頭的濕疹樣變化。認(rèn)為Paget’s疾病代表著惡性細(xì)胞從鄰接乳腺導(dǎo)管轉(zhuǎn)移到了乳頭上。Paget’s疾病患者的預(yù)后與其它類型乳腺癌女性患者的預(yù)后每個階段都明顯相似。
良性乳腺腫瘤包括纖維腺瘤、導(dǎo)管周纖維瘤(periductalfibromas)(結(jié)締組織腫瘤)、導(dǎo)管內(nèi)上皮細(xì)胞腫瘤(intraductalepithelial tumor)、潴留囊腫、脂肪瘤(脂肪腫瘤)、慢性囊性乳腺炎和脂肪壞死。通常它們出現(xiàn)在生命生殖期間或緊隨其后。通常難于將這些良性乳腺腫瘤與惡性腫瘤區(qū)分開，同時必須對大小變化或所涉及的淋巴管進(jìn)行觀察，在這種情況下生長組織切片檢測。乳房造影、超聲、熱敏成像法和囊性形式(cystic form)吸引術(shù)有助于診斷。
乳腺癌診斷可通過對乳房組織進(jìn)行病理學(xué)檢查進(jìn)行。即使是在乳房造影被描述為正常時，也應(yīng)對乳房中的腫塊進(jìn)行活組織檢查。乳房組織可通過細(xì)針抽吸活組織檢查或手術(shù)活組織檢查獲得。一些內(nèi)科醫(yī)生使用細(xì)針抽吸術(shù)來幫助分辨囊腫和實體瘤。囊腫通常在抽吸和除去流體之后消失。對抽吸術(shù)中吸出的材料的細(xì)胞學(xué)檢查和病理學(xué)檢查可用于鑒定癌癥。超聲可幫助確定腫塊是固體的還是囊性的。還可使用乳房MRI。切除式活組織檢查是最常使用的方法，腫塊小時可采用該方法。在這些情況下，整個腫瘤及正常組織的邊緣都被切除。如果腫瘤較大，可進(jìn)行切開式活組織檢查以取出少量組織用于病理檢查。手術(shù)活組織檢查獲得的組織可通過冰凍切片評估，這為在30分鐘內(nèi)診斷提供了可能并且隨后可進(jìn)行確定的外科手術(shù)；但是大部分外科醫(yī)生卻等待永久切片，這需要花24-48小時。后一種方法使得患者有時間與內(nèi)科醫(yī)生討論治療可選方案，是更為常見的方法。
乳腺癌擴(kuò)散的最常見途徑是通過腋窩淋巴結(jié)。約30-40％乳腺癌患者在腫瘤可觸及時已有呈陽性反應(yīng)的(已患病)腋窩淋巴結(jié)。所涉及的腋窩淋巴結(jié)越多，其他地方微小轉(zhuǎn)移(在臨床上無法檢測到的腫瘤細(xì)胞)和復(fù)發(fā)或再發(fā)的風(fēng)險就越大。乳腺癌復(fù)發(fā)的常見位置為乳腺中的原始位置的局部復(fù)發(fā)或遠(yuǎn)側(cè)擴(kuò)散到骨、肝、肺和腦。轉(zhuǎn)移疾病的一些并發(fā)癥包括脊髓受壓、病理學(xué)骨折、胸膜滲漏和支氣管梗阻。
根據(jù)細(xì)胞類型將乳腺癌劃分為發(fā)病率、生長和轉(zhuǎn)移模式以及存活率有所不同的類型。浸潤性導(dǎo)管癌是最為常見的一類乳腺癌，占所有這種腫瘤的70％。罕見的炎性乳腺癌(占乳腺癌病例的1-4％)與極差的預(yù)后相關(guān)。原位癌(carcinoma in situ，CIS)是非侵入性癌癥，它具有良好的預(yù)后，并通常在沒有明顯的物體可觸及時可通過乳房造影術(shù)檢測。
推薦的治療方法根據(jù)診斷時疾病的類型和進(jìn)程有所不同。I期或II期疾病通常由乳房保留手術(shù)(breast conservation surgery)和輻射療法，或者通過進(jìn)行或不進(jìn)行乳房再造術(shù)的改進(jìn)根治性乳房切除術(shù)進(jìn)行治療。乳房切除術(shù)和輻射為局部治療方法，很顯然不會影響到已經(jīng)轉(zhuǎn)移的癌細(xì)胞。也可對具有較高風(fēng)險發(fā)展為轉(zhuǎn)移性疾病的早期疾病患者進(jìn)行輔助化學(xué)療法。對具有陽性雌激素受體的患者而言，現(xiàn)在輔助治療或他莫昔芬(tamoxifen)被認(rèn)為是一個標(biāo)準(zhǔn)的治療方法。卵巢切除對絕經(jīng)前ER-陽性患者的抑制作用正在臨床研究之中。警戒淋巴結(jié)是沿源自原發(fā)腫瘤的淋巴引流途徑中的第一個淋巴結(jié)。與完全的腋窩清掃術(shù)(axillary dissection)相比較，在原發(fā)腫瘤或瘤床周圍注射放射性同位素(锝-99m硫體膠)和/或活性藍(lán)染料(vital blue dye)后進(jìn)行警戒淋巴結(jié)活組織檢查使得發(fā)病率和費用均下降。該技術(shù)仍然在研究之中。局部有所進(jìn)展的乳腺癌(III期)患者預(yù)后較差。良好的局部控制可通過外科手術(shù)、化學(xué)療法和輻射的組合實現(xiàn)?？紤]化學(xué)療法是因為III期患者有出現(xiàn)遠(yuǎn)端轉(zhuǎn)移的風(fēng)險。對患有局部復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移性疾病的患者的治療方法可根據(jù)疾病的位置和程度有所改變。在多數(shù)情況下，局部治療和全身治療相聯(lián)合。由于患有轉(zhuǎn)移性疾病的患者很少對標(biāo)準(zhǔn)治療方法展現(xiàn)出持續(xù)反應(yīng)，因此研究人員正對使用高劑量化學(xué)療法然后進(jìn)行自身骨髓移植(或干細(xì)胞置換)的方案進(jìn)行評估。
乳房保留手術(shù)由腫瘤切除和部分(下側(cè))腋窩淋巴結(jié)清掃術(shù)組成。術(shù)語“局部病灶切除術(shù)”、“分段切除術(shù)”、“腫塊切除術(shù)”和“部分乳房切除術(shù)”經(jīng)常用于描述局部外科手術(shù)。對于所有侵入性癌癥患者和大部分原位癌患者，一般在外科手術(shù)之后進(jìn)行輻射治療。最近對腫瘤大小最大為5cm(約2英寸)的小腫瘤患者進(jìn)行了研究，并沒有多病灶疾病或廣泛導(dǎo)管內(nèi)癌的證據(jù)表明乳房保留手術(shù)之后進(jìn)行輻射治療與改進(jìn)根治性乳房切除術(shù)之間存活率存在差異。改進(jìn)根治性乳房切除術(shù)是要除去整個乳房并進(jìn)行腋窩淋巴結(jié)清掃。改進(jìn)的根治性乳房切除術(shù)的缺點是表面畸形(cosmetic deformity)，并且可能具有影響體像和自我概念的心理社會問題。
良性乳房疾病和乳腺癌的現(xiàn)有治療方法有很多不足和缺點。改進(jìn)的根治性乳房切除術(shù)會導(dǎo)致身體一部分的喪失、有所改變的體像、對假體的需要、可選擇的再造術(shù)、胸壁緊縮和皮瓣壞死。部分乳房切除術(shù)引起腋窩結(jié)清掃和輻射、乳房纖維化、色素沉著、肋骨骨折、乳房水腫、皮膚敏感性改變、肌炎和原始療法的時間延長。事實上，根治性乳房切除術(shù)和部分乳房切除術(shù)都會引起感覺喪失，產(chǎn)生對手和臂護(hù)理的需要并產(chǎn)生如下術(shù)后并發(fā)癥血清腫、血腫、傷口感染、淋巴水腫、臂無力、疼痛、心理痛苦、臂運動性受到損害、神經(jīng)損傷和疲勞。血清腫是腋窩或胸壁的無效腔中漿液或血性漿液(serosanguinous fluid)的累積。血清腫可延緩愈合并使得易于感染。血液在細(xì)胞間隙中累積時出現(xiàn)血腫，并且它可在液化時被抽吸或在一段時間內(nèi)在沒有干擾的情況下被再吸收。
不管如何進(jìn)行外科努力避免創(chuàng)傷，還是會出現(xiàn)神經(jīng)損傷?；颊呖赡軙髟V在手臂或胸上有疼痛感、麻刺感、麻木感、沉重感或皮膚敏感性增加。這些感覺會隨時間發(fā)生改變，并且通常在一年里或一年后消失。還有一種情況出現(xiàn)可能性略小，就是在神經(jīng)損傷之后發(fā)生肌肉萎縮，并且該病會引起臂功能或肩功能下降。
由于在局部切除癌癥之后還會留下臨床上不能檢測的乳腺癌細(xì)胞，因此進(jìn)行輻射治療進(jìn)行局部腫瘤控制。輻射治療也可在手術(shù)之前使用以使得大乳腺腫瘤變小并使其更容易被切除。姑息性輻射治療通常用于緩解骨轉(zhuǎn)移的疼痛并用于轉(zhuǎn)移到其他位置如腦的對癥治療(symptomaticmanagement)。在輻射治療乳腺過程期間或緊隨其后通常會出現(xiàn)疲勞、皮膚反應(yīng)、皮膚的敏感性、顏色和結(jié)構(gòu)發(fā)生變化以及乳房腫脹。
化學(xué)療法、激素治療或兩者的組合可用于減輕轉(zhuǎn)移性疾病的影響。輔助化學(xué)療法和/或輔助激素治療的建議通常以陽性腋窩淋巴結(jié)的數(shù)目、絕經(jīng)狀況、原發(fā)性腫瘤的大小和雌激素受體分析為基礎(chǔ)。最常用的化學(xué)療法藥物是烷化劑、抗代謝劑、抗腫瘤抗生素(曲妥單抗，Herceptin)和長春花生物堿。激素控制主要通過激素阻斷劑實現(xiàn)，偶爾也通過手術(shù)去除產(chǎn)生性激素的腺體(卵巢切除術(shù)、腎上腺切除術(shù)或垂體切除術(shù))實現(xiàn)。他莫昔芬——一種抗雌激素——是最為廣泛使用的激素藥劑。例如弗隆(Femara)、瑞寧得(Arimidex)的二線激素藥劑現(xiàn)在可用于ER/PR陰性患者和/或他莫昔芬施用失敗的患者。不幸地是，乳腺癌化學(xué)療法具有很多不良副作用，包括疲勞、體重增加、惡心、嘔吐、禿頂、食欲和味覺障礙、神經(jīng)病變、腹瀉、骨髓抑制、絕經(jīng)癥狀、脫發(fā)和體重增加。另外，選擇一線藥物他莫昔芬可增加子宮癌和血凝塊的風(fēng)險。
成神經(jīng)細(xì)胞瘤成神經(jīng)細(xì)胞瘤是幼童時期最常見的實體瘤之一，通常發(fā)現(xiàn)于嬰兒或幼兒之中。約96％的病例出現(xiàn)在10歲之前。在所有患癌癥死亡的兒童中有15％是因為成神經(jīng)細(xì)胞瘤。該病通常起源于腎上腺髓質(zhì)或交感神經(jīng)組織的其它位置。出現(xiàn)成神經(jīng)細(xì)胞瘤的最常見位置是腹部(腎上腺附近)，但是也可出現(xiàn)在胸部、頸部、骨盆和其它位置。大部分成神經(jīng)細(xì)胞瘤癌癥患者在就診時已有明顯的癥狀(widespread occurence)。成神經(jīng)細(xì)胞瘤的最常見癥狀是由于腫瘤引起的壓力或已擴(kuò)散到骨的癌癥所引起的骨痛。眼突和黑眼圈很常見，是由于擴(kuò)散到眼后區(qū)域的癌癥所引起。成神經(jīng)細(xì)胞瘤可壓迫脊髓，引起麻痹。偶爾會有高燒、貧血和高血壓。偶爾在兒童中會出現(xiàn)嚴(yán)重的水瀉、共濟(jì)失調(diào)的肌肉運動或肌肉抽搐，或不能控制的眼運動。
白血病成年人平均約有五升血，其功能包括遞送必需元素、氧合作用和排出廢物。血由紅細(xì)胞、白細(xì)胞、血小板和血漿組成。白細(xì)胞有助于對抗感染。血小板參與形成防止從傷口失血的凝塊。約55％的血是血漿，血漿是稻草黃色澄清液體，攜帶血細(xì)胞和血小板，并將消化得到的營養(yǎng)物質(zhì)和腺體產(chǎn)生的激素輸送到全身。
如上所述，白細(xì)胞負(fù)責(zé)防御機(jī)制。有兩種主要類型的白細(xì)胞淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞。有兩種類型的淋巴細(xì)胞參與產(chǎn)生抗體的B淋巴細(xì)胞(B細(xì)胞)和T淋巴細(xì)胞(T細(xì)胞)。T細(xì)胞進(jìn)一步分為炎性T細(xì)胞、細(xì)胞毒性t淋巴細(xì)胞和輔助T細(xì)胞，炎性T細(xì)胞募集巨噬細(xì)胞和中性粒細(xì)胞到感染位置或其它受到損害的組織，細(xì)胞毒性t細(xì)胞殺死病毒感染的細(xì)胞，輔助T細(xì)胞增強(qiáng)B細(xì)胞產(chǎn)生抗體的能力。
急性成淋巴細(xì)胞性白血病(acute lymphoblastic leukemia，ALL)是兒童中最常見的白血病。它是白細(xì)胞尤其是淋巴細(xì)胞的癌癥。白血病細(xì)胞是功能不再正常的異常血細(xì)胞。因此，患有ALL的那些兒童的白細(xì)胞不能幫助身體對抗感染。基于這個原因，患有ALL的兒童通常會被感染并發(fā)燒。根據(jù)異常細(xì)胞的數(shù)目和這些細(xì)胞聚集在何處，白血病患者可有許多癥狀?；加蠥LL的兒童通常只有少量的健康紅細(xì)胞和血小板。因此，沒有足夠的紅細(xì)胞在身體中攜帶氧氣?；加羞@種稱為貧血的病癥的患者看起來很蒼白并且感覺虛弱和疲憊。沒有足夠的血小板時，患者就會很容易出血和碰傷。ALL的一些常見癥狀包括發(fā)燒；疲勞；經(jīng)常感染；淋巴結(jié)、肝或脾的腫脹或觸痛；蒼白；容易出血或碰傷；皮膚下有小的紅斑(稱為瘀點)；和/或骨痛或關(guān)節(jié)痛。
前列腺癌前列腺為男性生殖系統(tǒng)的一部分。健康的前列腺約為核桃大小，為環(huán)形。它位于直腸之前膀胱之下，并包裹在尿道周圍。前列腺是產(chǎn)生部分精液的腺體，這部分精液有助于在射精時攜帶作為精液的一部分的精子。擴(kuò)大的前列腺將擠壓尿道，通過減慢或阻止尿從膀胱流到陰莖引起泌尿問題。
所有前列腺癌中超過70％在65歲以上的男性中確診。盡管前列腺癌的病因?qū)W尚且不知道，風(fēng)險因素包括環(huán)境、遺傳學(xué)和家族史。關(guān)于一級親屬(即父親、兄弟)的信息表明在其家庭中具有該病史的男性中患前列腺癌的風(fēng)險增加超過2到11倍。前列腺癌死亡率在非洲裔美國男性中比在高加索男性中高2倍。由于這種較高的風(fēng)險，將前列腺癌的早期篩選推薦給非洲裔美國男性。根據(jù)美國癌癥協(xié)會(American CancerSociety)的建議，50歲和50歲以上的男性、以及高風(fēng)險人群的超過45歲那些男性如非洲裔美國男性和具有前列腺癌家族史的男性應(yīng)該每年進(jìn)行一次前列腺特異性抗原(prostate-specific antigen，PSA)血檢測和直腸指診(digital rectal exam，DRE)。
前列腺癌的癥狀通常包括泌尿問題；不能排尿或開始或中止尿流困難；尿頻，尤其是在晚上；尿流較弱或間斷；排尿時有疼痛或灼熱感；勃起困難；尿或精液中有血；以及后腰、臀部或大腿根經(jīng)常疼痛。
黑素瘤皮膚是身體最大的器官。它抵御受熱、日曬、損傷和感染。它有助于調(diào)節(jié)體溫、儲存水分和脂肪，并產(chǎn)生維生素D。皮膚主要為兩層外面的表皮和里面的真皮。表皮主要由稱為鱗狀上皮細(xì)胞的扁平魚鱗狀細(xì)胞組成。稱為基底細(xì)胞的圓形細(xì)胞在表皮中位于鱗狀上皮細(xì)胞之下。表皮里層部分還含有黑素細(xì)胞。真皮含有血管、淋巴管、毛囊和腺體。這其中的部分腺體產(chǎn)生汗液，這可幫助調(diào)節(jié)體溫。其它腺體產(chǎn)生皮脂，皮脂為一種幫助防止皮膚干燥的油性物質(zhì)。汗液和皮脂通過稱為毛孔的微小開口到達(dá)皮膚表面。
黑素瘤是一種皮膚癌。它出現(xiàn)在黑素細(xì)胞(色素細(xì)胞)惡化時。黑素瘤是一類很可能會致命的皮膚癌。每年在美國超過53600人被診斷患有黑素瘤。在全世界一些地方尤其是在西方國家，黑素瘤逐年變得更為常見。例如，在美國，患黑素瘤人群的比例在過去30年里已增加了一倍以上。
黑素瘤是最常見的癌癥之一?；荚摬〉膸茁孰S年齡增加，但是它影響到所有年齡段的人群。它出現(xiàn)在任何皮膚表面。在男性中，黑素瘤通常出現(xiàn)于軀干(肩和髖之間的面積)或頭部和頸部。在女性中，它通常出現(xiàn)在小腿。黑素瘤很少出現(xiàn)在黑人和具有深色皮膚的其它人群中。當(dāng)它出現(xiàn)在黑皮膚人群中時，它傾向于出現(xiàn)在手指甲或腳趾甲之下，或者出現(xiàn)在掌或趾上。當(dāng)黑素瘤擴(kuò)散時，癌細(xì)胞可出現(xiàn)在附近淋巴結(jié)中。在全身存在多組淋巴結(jié)。淋巴結(jié)捕捉可能在淋巴系統(tǒng)中的細(xì)菌、癌細(xì)胞或其它有害物質(zhì)。若癌癥到達(dá)淋巴結(jié)，這可能意味著癌細(xì)胞已擴(kuò)散到身體的其它部分如肝、肺或腦。通常，黑素瘤的第一個征兆是已有痣的大小、形狀、顏色或觸感的變化。大部分黑素瘤具有黑色區(qū)域或深藍(lán)色區(qū)域。黑素瘤還可以新痣形式出現(xiàn)。它可為黑色的、異常的、或“丑陋的外形”。
結(jié)腸和直腸癌結(jié)腸和直腸為消化系統(tǒng)的一部分。它們形成長的肌肉管道，稱為大腸(也稱為large bowel)。結(jié)腸為大腸的前4至5英尺，直腸為最后4至5英寸。連接直腸的結(jié)腸部分為乙狀結(jié)腸。連接小腸的部分為盲腸。部分消化的食物從小腸進(jìn)入結(jié)腸。結(jié)腸從食物中除去水和營養(yǎng)物質(zhì)并將剩余部分作為廢物儲藏。該廢物從結(jié)腸進(jìn)入直腸，然后通過肛門排出體內(nèi)。
在美國，結(jié)腸直腸癌是在男性中繼皮膚癌、前列腺癌和肺癌之后第四常見的癌癥。它是在女性中繼皮膚癌、肺癌和乳腺癌之后同樣為第四常見的癌癥。結(jié)腸直腸癌的常見癥狀包括大便習(xí)慣的改變、腹瀉、便秘或感覺大便不能完全排空、糞便出血(可為鮮紅色或暗紅色)、糞便比平常更窄、腹部整體不適(經(jīng)常脹氣痛、胃氣脹、發(fā)脹和/或痛性痙攣)、原因不明的體重下降、持續(xù)疲勞、惡心和嘔吐。
癌癥治療和副作用對癌癥如乳腺癌、成神經(jīng)細(xì)胞瘤、白血病、前列腺癌、黑素瘤或結(jié)腸直腸癌的治療既可為局部的，也可為全身的。局部治療例如影響腫瘤中的癌細(xì)胞及其附近區(qū)域的外科手術(shù)和輻射。全身治療例如通過血流到達(dá)全身的癌細(xì)胞的化學(xué)療法、激素治療和生物學(xué)治療。
很難保護(hù)健康細(xì)胞免受癌癥治療的有害作用。由于治療確實會損害健康細(xì)胞和組織，因此它通常會引起副作用。癌癥治療的副作用主要取決于治療的類型和程度。同時，該作用對每個人不盡相同，對同一個人的某次治療和下次治療的副作用也會有所變化。
外科手術(shù)是除去癌癥的治療方法，外科醫(yī)生也可除去腫瘤附近的一些外圍組織和淋巴結(jié)。有時，外科手術(shù)針對門診患者進(jìn)行，或針對不得不住院的患者進(jìn)行。該決定主要取決于外科手術(shù)類型和麻醉類型。
外科手術(shù)的副作用取決于許多因素，包括腫瘤的大小和位置、手術(shù)類型以及患者的總體健康程度。盡管患者通常會在外科手術(shù)后的前幾天感覺不舒服，但是該疼痛可通過藥物控制?；颊咄ǔ谕饪剖中g(shù)之后暫時感覺疲勞或虛弱。從手術(shù)中康復(fù)所需要的時長在患者之間有所不同。
輻射療法(也稱為放射療法)使用高能射線殺死癌細(xì)胞。對某些類型的癌癥而言，輻射療法可替代外科手術(shù)用作基本療法。輻射療法也可在外科手術(shù)之前進(jìn)行(新輔助療法)以縮小腫瘤，使得它更易于被除去。在其它情況下，輻射療法可在外科手術(shù)之后進(jìn)行(輔助療法)以破壞可能殘留在該區(qū)域的任何癌細(xì)胞。如果腫瘤不能被除去，輻射也可單獨使用，或與其它類型的治療方法一起使用，以緩解疼痛或其它問題。
輻射療法可為兩種形式中的任何一種外部輻射療法或內(nèi)部輻射療法。一些患者接受了兩種輻射療法。外部輻射來自將射線針對身體特定區(qū)域的機(jī)器。最通常，這種治療方法針對醫(yī)院或診所中的門診患者。該治療之后身體內(nèi)沒有殘留放射活性。對內(nèi)部輻射(也稱為植入輻射、組織內(nèi)射線療法或近距離放射療法)而言，輻射來自放射活性物質(zhì)，該放射活性物質(zhì)被封閉在注射針、種子形小管、導(dǎo)線或?qū)Ч苤胁⒈恢苯又糜谀[瘤內(nèi)或其附近。植入物可為永久植入物或臨時植入物。永久植入物中的輻射量在患者出院前下降到安全水平。對臨時植入物而言，取出植入物之后沒有放射活性殘留在身體內(nèi)。
輻射療法的副作用取決于治療劑量以及被治療的身體部分。患者在輻射治療期間特別是在治療的最后幾個星期里可能會極度疲勞。通常需要額外的休息，但是醫(yī)生一般鼓勵患者在休息期間試著盡量活動。對外部輻射而言，治療區(qū)域的皮膚可能會永遠(yuǎn)發(fā)黑或為“青銅色”。另外，通常在治療區(qū)域會暫時脫發(fā)，并且通常皮膚會變紅、變干、敏感和發(fā)癢。輻射療法還可引起白細(xì)胞(幫助保護(hù)身體對抗感染的細(xì)胞)數(shù)目下降。盡管輻射療法可引起副作用，但是這些副作用通?？傻玫街委熁蚩刂?。大部分副作用都是暫時的，但有一些可能為永久的或在此后出現(xiàn)數(shù)月至數(shù)年之久。
化學(xué)療法是使用藥物殺死癌細(xì)胞。醫(yī)生可使用一種藥物或多種藥物的組合?；瘜W(xué)療法可為患者需要的唯一一種治療方法，或者它可與其它形式的治療方法相聯(lián)合。新輔助化學(xué)療法指外科手術(shù)前給藥至縮小腫瘤的藥物；輔助化學(xué)療法指外科手術(shù)后給予幫助防止癌癥復(fù)發(fā)的藥物?；瘜W(xué)療法還可(單獨或與其它形式的治療方法一起)用于緩解該疾病的癥狀。
化學(xué)療法通常以這樣一個周期進(jìn)行治療期(進(jìn)行治療的一天或多天)，然后是康復(fù)期(幾天或幾周)，然后是另一治療期，如此循環(huán)。大部分抗癌藥物通過注射到靜脈內(nèi)(IV)給藥；一些被注射入肌肉或皮膚之下；一些通過口腔給藥。
通常，需要多次劑量IV化學(xué)療法的患者通過直到治療結(jié)束一直在恰當(dāng)位置的導(dǎo)管(細(xì)軟管)獲得藥物。導(dǎo)管的一端被置于臂或胸的大靜脈內(nèi)；另一端保留在身體外面。抗癌藥物通過導(dǎo)管給藥。帶有導(dǎo)管的患者避免了每次治療將注射針插入靜脈所帶來的不適。
有時抗癌藥物以其它方式給藥。例如，在一種被稱為腹膜內(nèi)化學(xué)療法的方法中，抗癌藥物通過導(dǎo)管被直接置于腹部。為到達(dá)中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)中的癌細(xì)胞，患者可接受鞘內(nèi)化學(xué)療法。在這類治療方法中，抗癌藥物通過置于脊柱中的注射針或置于頭皮下的裝置進(jìn)入腦脊液。
通常，患者(在醫(yī)院、醫(yī)生的辦公室或家里)以門診患者方式進(jìn)行化學(xué)治療。但是，根據(jù)給予何種藥物、劑量、藥物如何給予以及患者的總體健康程度，可能需要短期住院。
化學(xué)療法的副作用主要取決于患者接受的藥物和劑量。與其它類型治療方法一樣，副作用因人而異。一般而言，抗癌藥物影響快速分裂細(xì)胞。除了癌細(xì)胞外，這些細(xì)胞包括血細(xì)胞，而血細(xì)胞能夠?qū)垢腥?、幫助血液凝固，并將氧輸送到身體的所有部分。血細(xì)胞受到影響時，患者更容易被感染，很易撞傷或出血，并且會感到不同尋常的虛弱和極度疲勞。毛根的快速分裂細(xì)胞和位于消化管道的細(xì)胞也可受到影響。因此，副作用可包括脫發(fā)、食欲不振、惡心和嘔吐、腹瀉或口腔和唇潰瘍。
脫發(fā)受很多患癌癥的人的極大關(guān)注。一些抗癌藥物僅引起毛發(fā)變薄，而另外一些可能會引起全身毛發(fā)的脫去。大部分副作用在治療之間的康復(fù)期間逐漸消除，并且治療結(jié)束之后頭發(fā)恢復(fù)原貌。
一些抗癌藥物可引起長效副作用如生育力(生產(chǎn)孩子的能力)降低。生育力降低可為暫時的或永久的，這取決于所使用藥物以及患者的年齡和性別。女性月經(jīng)周期可中斷，并且她們可能會具有熱潮紅和陰道干燥。青年女性的月經(jīng)周期較易恢復(fù)。
激素治療用于對抗依賴激素生長的某些癌癥。激素治療使癌細(xì)胞不能獲得或使用它們需要的激素。該治療方法可包括終止某些激素的生產(chǎn)或改變它們的作用方式的藥物的使用。另一類激素治療為摘除生產(chǎn)激素的器官(如卵巢或睪丸)的外科手術(shù)。
激素治療可引起許多副作用。患者可能會感覺疲勞；具有液體潴留、體重增加、熱潮紅、惡心和嘔吐、食欲改變，并且在某些情況下具有血液凝固。在女性中，激素治療可中斷月經(jīng)期并引起陰道干燥。女性中的激素治療還可引起生育力降低或增加；采取激素治療的女性應(yīng)該在治療期間與其醫(yī)生對避孕進(jìn)行討論。在男性中，激素治療可引起陽萎、性欲降低或生育力降低。根據(jù)所使用的藥物，這些變化可為暫時的、長效的或永久的。
生物療法(也稱為免疫療法)可幫助身體的天然能力(免疫系統(tǒng))對抗疾病或保護(hù)身體免受癌癥治療的一些副作用。單克隆抗體、干擾素、白細(xì)胞介素-2和集落刺激因子為一些類型的生物療法。
生物療法引起的副作用隨具體治療方法有所不同。一般而言，這些治療方法可引起流感樣癥狀，如寒顫、發(fā)燒、肌肉疼痛、虛弱、食欲不振、惡心、嘔吐和腹瀉。患者還易出血或碰傷、出現(xiàn)皮疹或腫脹。這些問題可能很嚴(yán)重，但是它們會在治療結(jié)束后消失。
骨髓移植(bone marrow transplantation，BMT)或外周干細(xì)胞移植(peripheral stem cell transplantation，PSCT)也可用于癌癥治療。移植可為自體的(早期收集的這個人自己的細(xì)胞)、同種的(由另一個人捐獻(xiàn)的細(xì)胞)或同源的(由同卵雙生子捐獻(xiàn)的細(xì)胞)。BMT和PSCT兩者均為患者提供健康的干細(xì)胞(會發(fā)育成為血細(xì)胞的極不成熟細(xì)胞)。這些細(xì)胞替換了已被極高劑量化學(xué)治療和/或輻射治療所損害或破壞的干細(xì)胞。
進(jìn)行了BMT或PSCT的患者會面臨由于他們所接受的高劑量化學(xué)治療和/或輻射所引起的風(fēng)險有所增加的感染、出血和其它副作用。由移植本身引起的最常見副作用是移植期間的惡心和嘔吐，以及第一天左右的寒顫和發(fā)燒。另外，移植物抗宿主疾病(graft-versus-host disease，GVHD)可出現(xiàn)在從捐獻(xiàn)者獲得骨髓的患者中。在GVHD中，所捐獻(xiàn)的骨髓(移植物)針對患者的(宿主的)組織(最通常為肝臟、皮膚和消化管道)發(fā)生反應(yīng)。GVHD可能較輕，也可能很嚴(yán)重。它可出現(xiàn)在移植之后任何時間(甚至此后數(shù)年)。如果GVHD出現(xiàn)，可給予藥物以減少GVHD的風(fēng)險并處理該問題。
一些患有癌癥的人發(fā)現(xiàn)很難進(jìn)食因為它們沒有食欲。另外，治療方法共有的副作用如嘔吐、惡心或口腔和唇潰瘍使得進(jìn)食困難。通常，食物嘗起來有所不同。同時，得到癌癥治療的人在不適或疲勞時，他們可能不愿意進(jìn)食。
肉毒毒素厭氧革蘭氏陽性菌肉毒梭菌產(chǎn)生效力強(qiáng)大的多肽神經(jīng)毒素肉毒毒素，該肉毒毒素在人和動物中引起稱為肉毒中毒的神經(jīng)性麻痹病。肉毒梭菌的孢子存在于土壤，并可在家庭作坊式罐頭工廠的滅菌和密封不正確的食品容器生長，這即為多起肉毒中毒病例的原因。肉毒中毒作用一般在進(jìn)食被肉毒梭菌培養(yǎng)物或孢子感染的食品后18至36小時出現(xiàn)。肉毒毒素似乎可以毫無衰減地通過腸內(nèi)膜(lining)并攻擊外周運動神經(jīng)元。肉毒毒素中毒的癥狀可從行走、吞咽和說話困難發(fā)展為呼吸肌麻痹和死亡。
A型肉毒毒素是已知對人類致死力最強(qiáng)的天然生物試劑。大約50皮克的A型肉毒毒素1(純化的神經(jīng)毒素復(fù)合物)即達(dá)到小鼠的LD50。1單位(U)的肉毒毒素被定義為將其腹膜內(nèi)注射到每只重18～20克的雌性Swiss Webster小鼠中的LD50。已經(jīng)表征了七種常見的免疫學(xué)上不同的肉毒神經(jīng)毒素，它們分別為肉毒神經(jīng)毒素血清型A、B、C1、D、E、F和G，其中的每一種血清型用型特異性抗體的中和作用區(qū)分。不同血清型的肉毒毒素在其感染的動物物種以及所引起的麻痹的嚴(yán)重程度和持續(xù)時間上均不盡相同。例如，用在大鼠體內(nèi)產(chǎn)生麻痹的水平為量度，測得A型肉毒毒素的效力比B型肉毒毒素強(qiáng)500倍。此外，據(jù)測定在靈長類動物中B型肉毒毒素在480U/kg的劑量下是無毒性的，而該劑量是A型肉毒毒素靈長類動物L(fēng)D50的約12倍。肉毒毒素似乎以高親和力與膽堿能運動神經(jīng)元結(jié)合，并被轉(zhuǎn)移至神經(jīng)元中，從而阻斷乙酰膽堿的釋放。
在臨床環(huán)境下，肉毒毒素已用于治療例如以骨骼肌機(jī)能亢進(jìn)為特征的神經(jīng)肌肉病癥。美國食品藥品監(jiān)督管理局(U.S.Food and DrugAdministration)已批準(zhǔn)可將A型肉毒毒素用于治療瞼痙攣、斜視、偏側(cè)面肌痙攣和頸肌張力障礙(cervical dystonia)。與A型肉毒毒素相比，除A型之外的肉毒毒素血清型明顯效力較低和/或活性期間更短。外周肌內(nèi)注射A型肉毒毒素的臨床效果通常出現(xiàn)于在注射一周內(nèi)。單次肌內(nèi)注射A型肉毒毒素所產(chǎn)生的癥狀緩解的一般持續(xù)時間平均約為三個月。
雖然所有肉毒毒素血清型能明顯抑制在神經(jīng)肌肉接頭處神經(jīng)遞質(zhì)乙酰膽堿的釋放，但它們是通過影響不同的神經(jīng)分泌蛋白和/或在這些蛋白的不同位點進(jìn)行切割起到抑制作用的。例如，A型和E型肉毒毒素均可切割25千道爾頓(kD)突觸相關(guān)蛋白(SNAP-25)，但是它們靶向1購自Allergan，Inc.，of Irvine，California，商品名為BOTOX該蛋白的不同氨基酸序列。B、D、F和G型肉毒毒素均作用于小泡相關(guān)蛋白(VAMP，也稱為突觸小泡蛋白)，但每種血清型在不同位點切割所述蛋白。最后，C1型肉毒毒素表現(xiàn)為切割突觸融合蛋白和SNAP-25。上述作用機(jī)理的差異可影響各種肉毒毒素血清型的相對效力和/或作用持續(xù)時間。
對于所有的七種已知肉毒毒素血清型，肉毒毒素蛋白分子的分子量均為約150kD。有趣的是，肉毒毒素是作為含有150kD肉毒毒素蛋白分子和相關(guān)非毒素蛋白的復(fù)合物從梭菌中釋放出來的。因此，A型肉毒毒素復(fù)合物可由梭菌以900kD、500kD和300kD形式產(chǎn)生。B型和C1型肉毒毒素顯然僅以500kD復(fù)合物形式產(chǎn)生。D型肉毒毒素以300kD和500kD復(fù)合物形式產(chǎn)生。最后，E型和F型肉毒毒素僅以約300kD復(fù)合物形式產(chǎn)生。所述復(fù)合物(即分子量大于約150kD的復(fù)合物)被認(rèn)為含有非毒素血凝素蛋白以及非毒素和無毒非血凝素蛋白。上述兩種非毒素蛋白(它們與肉毒毒素分子組成相關(guān)神經(jīng)毒素復(fù)合物)可起著為肉毒毒素分子提供對抗變性的穩(wěn)定性的作用，并可在毒素被攝取時保護(hù)毒素對抗消化性酸。此外，有可能較大(分子量大于約150kD)的肉毒毒素復(fù)合物會使肉毒毒素從肉毒毒素復(fù)合物肌內(nèi)注射位點擴(kuò)散的速度減慢。
體外研究已表明肉毒毒素抑制鉀陽離子誘導(dǎo)的乙酰膽堿和去甲腎上腺素從腦干組織的原代細(xì)胞培養(yǎng)物中釋放。此外，據(jù)報道在脊髓神經(jīng)元的原代培養(yǎng)物中肉毒毒素抑制甘氨酸和谷氨酸的誘發(fā)釋放，在腦突觸體標(biāo)本中肉毒毒素抑制下述每一種神經(jīng)遞質(zhì)的釋放乙酰膽堿、多巴胺、去甲腎上腺素、CGRP和谷氨酸。
A型肉毒毒素可通過如下方法獲得在發(fā)酵罐中建立并培養(yǎng)肉毒梭菌的培養(yǎng)物，然后根據(jù)已知方法收集并純化發(fā)酵混合物。所有肉毒毒素血清型最初以無活性單鏈蛋白質(zhì)形式合成，該蛋白質(zhì)必須被蛋白酶切割或切口而具有神經(jīng)活性。產(chǎn)生血清型A和G肉毒毒素的細(xì)菌菌株具有內(nèi)源性蛋白酶，因此血清型A和G可主要以其活性形式從細(xì)菌培養(yǎng)物中回收得到。相反，血清型C1、D和E肉毒毒素由非蛋白水解菌株合成，因此從培養(yǎng)物回收時一般沒有活性。血清型B和F由蛋白水解菌株和非蛋白水解菌株生產(chǎn)，因此可以活性形式或無活性形式回收得到。但是，即便是生產(chǎn)例如B型血清型肉毒毒素的蛋白水解菌株也僅切割部分所生產(chǎn)的毒素。切口分子和未切口分子的確切比例取決于培養(yǎng)時間和培養(yǎng)溫度。因此，一定比例的任何制劑，例如B型肉毒毒素的任何制劑可能沒有活性，這可能是已知的B型肉毒毒素的效力顯著低于A型肉毒毒素的效力的原因。臨床制劑中無活性肉毒毒素分子的存在無形中增加了制劑的蛋白總負(fù)荷，從而引起抗原性增加而并未提高臨床效力。此外，還已知進(jìn)行肌內(nèi)注射后，B型肉毒毒素比相同劑量水平的A型肉毒毒素的活性持續(xù)時間更短，效力也更弱。
據(jù)報道肉毒毒素已用于如下臨床處置中(1)每次肌內(nèi)注射(多塊肌肉)約75～250單位BOTOX以治療頸張力失常；(2)每次肌內(nèi)注射5～10單位BOTOX以治療眉間線(眉溝)(降眉間肌肌內(nèi)注射5單位，各皺眉肌肌內(nèi)注射10單位)；(3)向恥骨直腸肌括約肌內(nèi)(intrasphincter)注射約30～80單位的BOTOX以治療便秘；(4)向上眼瞼外側(cè)瞼板前的眼輪匝肌和下眼瞼外側(cè)瞼板前的眼輪匝肌分別肌內(nèi)注射約1～5單位的BOTOX以治療瞼痙攣。
(5)向眼外肌肌內(nèi)注射約1～5單位的BOTOX以治療斜視，注射的量根據(jù)待注射肌肉的大小以及所需的肌肉麻痹的程度(即所需的屈光度校正)變化。
(6)為治療中風(fēng)后的上肢痙攣，按照如下方式向五塊不同的上肢屈肌肌內(nèi)注射BOTOX(a)跖深屈肌7.5U～30U(b)跖淺屈肌7.5U～30U(c)尺側(cè)腕屈肌10U～40U(d)橈側(cè)腕屈肌15U～60U(e)肱二頭肌50U～200U。對各指定的五塊肌肉在相同的治療期進(jìn)行注射，因此患者在每一治療期接受90U～360U的BOTOX的上肢屈肌肌內(nèi)注射。
A型肉毒毒素治療不同臨床疾病的成功已引起對其它血清型肉毒毒素的關(guān)注。已對兩種可商購的A型肉毒毒素制劑(BOTOX和Dysport)以及B和F型肉毒毒素的制劑(均購自Wako Chemicals，日本)進(jìn)行了研究以測定使局部肌肉無力的效力、安全性和抗原性潛能。將肉毒毒素制劑注射至右側(cè)腓腸肌頂端(0.5至200.0單位/kg)，并使用小鼠趾外展評分分析(digit abduction scoring，DAS)評估肌無力。ED50值從劑量反應(yīng)曲線計算得到。對其它小鼠進(jìn)行肌內(nèi)注射以確定LD50劑量。治療指數(shù)計算為LD50/ED50。將接受后肢注射BOTOX(5.0至10.0單位/kg)或B型肉毒毒素(50.0至400.0單位/kg)的小鼠分組，并就肌無力和所增加的耗水量對其進(jìn)行測試，后者為口干燥的推定模式。通過在兔子中進(jìn)行肌內(nèi)注射(B型肉毒毒素為1.5或6.5ng/kg，BOTOX為0.15ng/kg)評估抗原性潛能。對于所有血清型，肌無力峰值和持續(xù)時間是劑量相關(guān)的。注射B型肉毒毒素的小鼠其耗水量比注射BOTOX的小鼠的耗水量要多，盡管B型肉毒毒素在使肌肉無力方面效力較差。注射四個月之后，4只用1.5ng/kg處理的兔子中有2只逐漸形成抗B型肉毒毒素的抗體，4只用6.5ng/kg處理的兔子中有4只逐漸形成抗B型肉毒毒素的抗體。在一個單獨的研究中，9只用BOTOX處理的兔子中沒有一只顯示出有抗A型肉毒毒素的抗體。DAS結(jié)果表明A型肉毒毒素的相對峰效力與F型肉毒毒素的相同，并且F型肉毒毒素的相對峰效力高于B型肉毒毒素。在作用的持續(xù)時間方面，A型肉毒毒素長于B型肉毒毒素，B型肉毒毒素的作用持續(xù)時間長于F型肉毒毒素。如治療指數(shù)值所示，這兩種商購的A型肉毒毒素制劑(BOTOX和Dysport)不相同。后肢注射B型肉毒毒素后所觀察到的有所升高的耗水量現(xiàn)象表明在臨床上有意義的該血清型的量進(jìn)入至鼠類體循環(huán)。該結(jié)果還表明為了獲得與A型肉毒毒素相當(dāng)?shù)男Я?，必須增加其它所檢測血清型的量。所增加劑量具有安全性。另外，在兔中，B型比BOTOX更具有抗原性，這可能是因為所注射的較高蛋白負(fù)荷達(dá)到了B型肉毒毒素的有效劑量。
除了對外周位置具有藥理作用，肉毒毒素還可對中樞神經(jīng)系統(tǒng)具有抑制作用。Weigand et al，Nauny-Schmiedeberg′s Arch.Pharmacol.1976；292，161-165和Habermann，Nauny-Schmiedeberg′s Arch.Pharmacol.1974；281，47-56的工作表明肉毒毒素可通過逆向運輸上升到脊髓區(qū)域。因此，在外周位置如肌內(nèi)注射的肉毒毒素可逆向運輸?shù)郊顾琛?br> 肉毒毒素還被提出或者已被用于治療皮膚受傷、骨骼受傷和腱受傷(美國專利6,447,787)；鞘內(nèi)疼痛(參見例如美國專利No.6,113,915)；各種自主神經(jīng)障礙，包括汗腺障礙(美國專利5,766,605)；緊張性頭疼(美國專利6,458,365)；偏頭疼(美國專利5,714,468)；術(shù)后疼痛和內(nèi)臟疼痛(美國專利6,464,986)；毛發(fā)生長和毛發(fā)維持(美國專利6,299,893)；牛皮癬和皮炎(美國專利5,670,484)；肌肉受傷(美國專利6,423,319)；各種癌癥(參見例如美國專利6,139,845和6,063,768)；平滑肌礙(美國專利5,437,291)；神經(jīng)卡壓綜合征(美國專利申請2003 0224019)；痤瘡(WO 03/011333)；神經(jīng)能炎癥(美國專利6,063,768)；聽力障礙(參見例如美國專利no.6,265,379)；胰腺障礙(參見例如美國專利no.6,143,306和6,261,572)；前列腺障礙，包括前列腺增生、前列腺癌和尿失禁(參見例如美國專利6,365,164和6,667,041和Doggweiler R.，et al Botulinum toxin type A causesdifftuse and highly selective atrophy of rat prostate，NeurourolUrodyn 1998；17(4)363)。
美國專利No.5,989,545公開了經(jīng)修飾的梭菌神經(jīng)毒素或其片段，優(yōu)選化學(xué)綴合或重組融合至特定靶向部分的肉毒毒素可被用于通過將藥劑給藥至脊髓治療疼痛。另外，已公開靶向肉毒毒素(即帶有非天然結(jié)合部分的)可用于治療不同病癥(參見WO 96/33273；WO 99/17806；WO 98/07864；WO 00/57897；WO 01/21213；WO 00/10598)。
肉毒毒素已被注射至胸肌以控制胸痙攣。參見例如Senior M.，Botox and the management of pectoral spasm after subpectoralimplant insertion，Plastic and Recon Surg，July 2000，224-225.控釋毒素植入物已知(參見例如美國專利6,306,423和6,312,708)為經(jīng)皮膚的肉毒毒素給藥形式(美國專利申請系列號10/194805)。
液體穩(wěn)定制劑和純?nèi)舛径舅刂苿?參加例如WO 00/15245和WO74703)以及局部使用肉毒毒素(參見例如DE 198 52 981)均已被公開。
乙酰膽堿一般而言，哺乳動物神經(jīng)系統(tǒng)中的每一種神經(jīng)元僅釋放一種類型的小分子神經(jīng)遞質(zhì)。神經(jīng)遞質(zhì)乙酰膽堿由很多腦區(qū)中的神經(jīng)元所分泌，但特別由運動神經(jīng)皮質(zhì)的大錐體細(xì)胞分泌、由基底神經(jīng)節(jié)的幾個不同神經(jīng)元分泌、由神經(jīng)支配骨骼肌的運動神經(jīng)元分泌、由自主神經(jīng)系統(tǒng)(交感和副交感)的節(jié)前神經(jīng)元分泌、由副交感神經(jīng)系統(tǒng)的節(jié)后神經(jīng)節(jié)分泌、以及由交感神經(jīng)系統(tǒng)的一些節(jié)后神經(jīng)元分泌。實質(zhì)上，僅有分布于汗腺、豎毛肌(piloerector muscle)和一些血管中的節(jié)后交感神經(jīng)纖維為膽堿能的，大部分交感神經(jīng)系統(tǒng)的節(jié)后神經(jīng)元所分泌的神經(jīng)遞質(zhì)為去甲腎上腺素。在大部分情況下，乙酰膽堿具有興奮作用。但是，已知乙酰膽堿在一些外周副交感神經(jīng)末梢具有抑制作用，如迷走神經(jīng)對心臟的抑制作用。
自主神經(jīng)系統(tǒng)的傳出信號通過交感神經(jīng)系統(tǒng)或副交感神經(jīng)系統(tǒng)被傳送至身體。交感神經(jīng)系統(tǒng)的節(jié)前神經(jīng)元從位于脊髓中間外側(cè)角(intermediolateral horn)的節(jié)前交感神經(jīng)元胞體發(fā)出。從胞體發(fā)出的節(jié)前交感神經(jīng)纖維與位于椎旁交感神經(jīng)節(jié)或椎前神經(jīng)節(jié)的節(jié)后神經(jīng)元聯(lián)會。由于交感和副交感神經(jīng)系統(tǒng)的節(jié)前神經(jīng)元是膽堿能的，因此將乙酰膽堿用于神經(jīng)節(jié)將會使交感和副交感節(jié)后神經(jīng)元興奮。
乙酰膽堿激活兩類受體毒蕈堿性受體和煙堿性受體。毒蕈堿性受體存在于由副交感神經(jīng)系統(tǒng)的節(jié)后神經(jīng)元所刺激的全部效應(yīng)細(xì)胞，還存在于那些由交感神經(jīng)系統(tǒng)的節(jié)后膽堿能神經(jīng)元所刺激的效應(yīng)細(xì)胞。煙堿性受體存在于介于交感與副交感的節(jié)前和節(jié)后神經(jīng)元間的突觸。煙堿性受體還存在于神經(jīng)肌肉接頭處的骨骼肌纖維的很多膜上。
當(dāng)小清亮胞內(nèi)囊泡與突觸前的神經(jīng)細(xì)胞膜融合時，乙酰膽堿從膽堿能神經(jīng)元釋放。多種非神經(jīng)元的分泌細(xì)胞如腎上腺髓質(zhì)(以及PC12細(xì)胞系)和胰島細(xì)胞分別從大致密核心囊泡釋放兒茶酚胺和胰島素。PC12細(xì)胞系為大鼠嗜鉻細(xì)胞瘤細(xì)胞的克隆，被廣泛用作交感腎上腺發(fā)育研究的組織培養(yǎng)模型。肉毒毒素通過體外透化處理(如通過電穿孔)或通過將該毒素注射至去神經(jīng)支配的細(xì)胞中抑制兩類化合物從兩類細(xì)胞釋放。還已知肉毒毒素能阻斷神經(jīng)遞質(zhì)谷氨酸從皮質(zhì)突觸小體細(xì)胞培養(yǎng)物中釋放。
肉毒毒素底物的廣泛分布已知肉毒毒素可使肌細(xì)胞去除神經(jīng)支配，引起弛緩性麻痹，這是由于乙酰膽堿從神經(jīng)肌肉接頭處的神經(jīng)元釋放的突觸前抑制所引起。肉毒毒素的蛋白水解結(jié)構(gòu)域作用于靶細(xì)胞的細(xì)胞溶膠中的特定底物，對該底物的切割可阻止膜停靠(docking)以及含有乙酰膽堿的分泌小泡的胞吐作用。神經(jīng)支配性神經(jīng)元和肌細(xì)胞之間的突觸間隙中乙酰膽堿的缺失可阻止對肌細(xì)胞的刺激，由此引起麻痹。
肉毒毒素是胞內(nèi)蛋白酶，它專門作用于控制含有乙酰膽堿的分泌小泡的?？康娜N不同蛋白中的一種或多種。肉毒毒素的這些特定底物為小突觸小泡蛋白、突觸小泡蛋白和/或SNAP-25。參見例如Duggan M.J.，et al.，A survey of botulinum neurotoxin substrate expression incells，Mov Disorder 10(3)；3761995，和Blasi J.，et al.，Botulinum neurotoxin A selectively cleaves the synaptic proteinSNAP-25.Nature 365；160-1631993。對B型、D型、F型和G型肉毒毒素而言，特定胞內(nèi)底物為小突觸小泡蛋白。SNAP-25、小突觸小泡蛋白和突觸小泡蛋白已知為SNARE(可溶解的N-乙基順丁烯二酰亞胺敏感因子附著蛋白受體)。
有意義的是，不僅是分布于肌肉之中的神經(jīng)含有肉毒毒素的底物“很多神經(jīng)元亞類的突觸前區(qū)域中和神經(jīng)嵴細(xì)胞系中的SNAP-25的存在表明該蛋白在神經(jīng)組織中起著重要作用”。Oyler G.A.et al.，Distribution and expression of SNAP-25 immunoreactivity in ratbrain，rat PC-12 cells and human SMS-KCNR neuroblastoma cells，Brain Res Dev Brain Res 1992 Feb 21；65(2)133-146，1992。
另外，“內(nèi)分泌細(xì)胞中的SNARE蛋白的廣泛存在表明它們還可能可作為內(nèi)分泌腫瘤的普通診斷標(biāo)記……”，Graff，L.，et al.Expressionof vesicular monoamine transporters，synaptosomal-associatedprotein 25 and syntaxinia signature of human small cell lungcarcinoma，Cancer Research 61，2138-2144，March 1，2001，atpage 2138。例如，已知SNAP-25廣泛分布于神經(jīng)內(nèi)分泌細(xì)胞(包括嗜鉻細(xì)胞、PC12、GH3和胰島素瘤)中。另外，肉毒毒素底物小突觸小泡蛋白存在于成纖維細(xì)胞和髓樣細(xì)胞(如肥大細(xì)胞)中。Duggan M.，et al.，參見上文。
事實上，SNARE明顯影響或控制即便不是全部也是大部分分泌細(xì)胞中的分泌小泡的膜融合。Andersson J.，et al，Differential sortingof SNAP-25a and SNAP-25b proteins in neuroblastoma cells，Eur J.Cell Bio 79，781-789Nov 2000。
因此，肉毒毒素的底物并不限定為釋放神經(jīng)遞質(zhì)乙酰膽堿的神經(jīng)細(xì)胞。因此，肉毒毒素底物“廣泛參與到膜-膜融合事件中”并且該證據(jù)說明了“膜融合事件(即分泌小泡與細(xì)胞壁的?？?的普遍機(jī)理”(Duggan 1995，參見上文)。
因此，肉毒毒素的胞內(nèi)底物廣泛分布于神經(jīng)元分泌細(xì)胞和非神經(jīng)元分泌細(xì)胞中。這由在如下至少一種組織中發(fā)現(xiàn)SNAP-25(一種25千道爾頓突觸小體相關(guān)蛋白，并為至少A型肉毒毒素的底物)的存在清楚闡明(1)胰腺(Sadoul K.，et al.，SNAP-25 is expressed in isletsof Langerhans and is involved in insulin release，J.Cell Biology128；1019-10291995；)(2)垂體(Dayanithi G.，et al.Release of vasopressin formisolated permeabilized neurosecretory nerve terminals is blockedby the light chain of botulinum A toxin，Neuroscience1990；39(3)711-5)；(3)腎上腺髓質(zhì)(Lawrence G.，et al.Distinct exocytoticresponses of intact and permeabilised chromaffin cells aftercleavage of the 25-kDa synaptosomal associated protein(SNAP-25)or synaptobrevin by botulinum toxin A or B，Eur J.Biochem236；877-8861996)；(4)胃細(xì)胞(Hohne-Zell B.，et al.，F(xiàn)unctional importance ofsynaptobrevin and SNAP-25 during exocytosis of histamine by ratgastric enterochromaffin-like cells，Endocrinology 138；5518-55261997；(5)肺腫瘤(Graff，L.，et al.Expression of vesicularmonoamine transporters，synaptosomal-associated protein 25 andsyntaxinia signature of human small cell lung carcinoma，CancerResearch 61，2138-2144，March 1，2001(小細(xì)胞肺癌(small celllung carcinomas，SCLC)含有SNAP-25)；(6)腸腫瘤，Maksymowych A.，et al.，Binding and transcytosisof botulinum neurotoxin by polarized human colon carcinoma cells，J of Bio.Chem，273(34)；21950-219571998(肉毒毒素通過人結(jié)腸癌細(xì)胞進(jìn)入)；(7)胰腺腫瘤，Huang，X.，et al.，Truncated SNAP-25(1-197)，like botulinum neurotoxin A，can inhibit insulin secretion fromHIT-T15 insulinoma cells，MoI.Endo.12(7)；1060-10701998(“……胰島素分泌需要功能性SNAP-25蛋白……”，同上，在第1060頁)。還參見Boyd R.，et al.，The effect of botulinum neurotoxinson the release of insulin from the insulinoma cell lines HIT-15and RINm5F，J.Bio Chem.270(31)；18216-182181995，以及；CukanM.，et al.，Expression of SNAP-23 and SNAP-25 in the pancreaticacinar tumor cell line AR42J，Molec Biol Cell 20(suppl)；398a，no.23051999(“SNAP-25是介導(dǎo)神經(jīng)系統(tǒng)和內(nèi)分泌系統(tǒng)中胞吐事件的SNARE蛋白?！?；(8)垂體瘤以及在正常垂體細(xì)胞中，Majo G.，et al.，lmmunocytochemical analysis of the synaptic proteins SNAP-25 andRab3A in human pituitary adenomas.Overexpression of SNAP-25 inthe mammososmatotroph lineages，J.Pathol 1997 Dec；183(4)440-446；(9)成神經(jīng)細(xì)胞瘤，Goodall，A.，et al.，Occurrence of two typesof secretory vesicles in the human neuroblastoma SH-SY5Y，J.ofNeurochem 68；1542-15521997.還參見Oyler，G.A，Distributionand expression of SNAP-25 immunoreactivity in rat brain，ratPC-12 cells and human SMS-KCNR neuroblastoma cells，Dev.BrainRes.65(1992)；133-146。注意Goodall(1992)僅詳細(xì)討論了一種成神經(jīng)細(xì)胞瘤細(xì)胞系中某些小泡?？康鞍?vesicle docking protein)的體外鑒定；(10)腎臟細(xì)胞(Shukla A.，et al.，SNAP-25 associated Hrs-2protein colocalizes with AQP2 in rat kidney collecting ductprincipal cells，Am J Physiol Renal Physiol 2001 Sep；281(3)F546-56(SNAP-25參與腎臟細(xì)胞“調(diào)節(jié)的胞吐作用”)，以及；(11)正常肺細(xì)胞(Zimmerman UJ.，et al.，Proteolysis ofsynaptobrevin，syntaxin，and SNAP-25 in alveolar epithelial typeIl cells，IUBMB Life 1999 Oct；48(4)453-8)，以及；(12)全部卵巢細(xì)胞(Grosse J.，et al.，Synaptosome associated protein of 25kilodaltons in oocytes and steroid producing cells of rat andhuman ovarymolecular analysis and regulation by gonadotropins，Biol Reprod 2000 Aug；63(2)643-50(SNAP-25存在于“所有卵母細(xì)胞和包括大囊狀卵泡中的顆粒細(xì)胞(granulosa cell，GC)”和黃體細(xì)胞在內(nèi)的類固醇生成細(xì)胞中)膽堿能乳腺組織不同增生和新生乳腺細(xì)胞受到膽堿能機(jī)制的影響。因此，已發(fā)現(xiàn)“在肺泡細(xì)胞活動中存在膽堿能機(jī)制”。Balakina G.B.，et al.，Localization of choline acetyltransferase in the alveolarportion of the mammary gland of the white mouse，Arkh Anat GistolEmbriol 1986 Apr；90(4)73-7.另外，在乳腺發(fā)育異常(mammarydysplasia)(纖維囊腫)和乳腺癌組織的均存在膽堿能影響(Dorosevich A.E.，et al.，Autonomic nerve endings and their cellmicroenvironment as one of the integral parts of the stromalcomponent in breast dysplasia and cancer，Arkh Patol 1994 Nov-Dec；56(6)49-53)，以及在乳腺動脈中還有“平滑肌的直接膽堿能刺激”(Pesic S.，et al.，Acetylcholine-induced contractions in theporcine internal mammary artery；possible role of muscarinicreceptors，Zentralbl Veterinarmed A 1999 Oct；46(8)509-15)。
有意義的是，由于膽堿酯酶的抑制所引起的乙酰膽堿的增加涉及到有所增加的乳腺細(xì)胞增殖，隨后發(fā)展成為乳腺癌。Cabello G.，et al，A rat mammary tumor model induced by the organophosphorouspesticides parathion and malathion，possibly throughacetylcholinesterase inhibition，Environ Health Perspect 2001May；109(5)471-9。因此，乳腺癌細(xì)胞增殖的下降似乎受到膽堿能機(jī)制的介導(dǎo)。Panagiotou S.，″Opioid agonists modify breast cancercell proliferation by blocking cells to the G2/M phase of thecycleinvolvement of cytoskeletal elements，J Cell Biochem 1999May 1；73(2)204-11。
腎上腺髓質(zhì)腎上腺是位于腎臟頂部的小的三角形結(jié)構(gòu)。每個腎上腺包含腎上腺皮質(zhì)或外側(cè)部分和腎上腺髓質(zhì)或內(nèi)側(cè)部分。皮質(zhì)包圍并封閉髓質(zhì)。
腎上腺皮質(zhì)分泌激素皮質(zhì)醇和醛固酮。皮質(zhì)醇在應(yīng)激時產(chǎn)生，調(diào)節(jié)糖使用，是維持正常血壓所必需的。醛固酮是鹽、鉀和水平衡的主要調(diào)節(jié)劑之一。如果兩個腎上腺均被除去，則必須進(jìn)行皮質(zhì)醇和醛固酮替代療法。
腎上腺髓質(zhì)分泌兒茶酚胺腎上腺素(同義詞為epinephrine)和去甲腎上腺素(同義詞為norepinephrine)。這些激素在各種身體功能的正常調(diào)節(jié)中是很重要的，這些身體功能包括應(yīng)激反應(yīng)(此時它們引起血壓升高)、心臟的泵能力和血糖水平。腎上腺髓質(zhì)的除去僅稍微引起或不引起激素不足，因為身體的其它腺體可進(jìn)行補(bǔ)償。相反，過量兒茶酚胺的產(chǎn)生會威脅到生命。
正常成年男性的腎上腺髓質(zhì)產(chǎn)生的全部兒茶酚胺中，約85％為腎上腺素，剩下15％為去甲腎上腺素。每克髓質(zhì)組織中存在約1.6mg兒茶酚胺。血液和尿液中存在的大部分去甲腎上腺素并非來自腎上腺髓質(zhì)，而是來自節(jié)后交感神經(jīng)末梢。如果將新切除的腎上腺置于含有重鉻酸鉀的固定劑中，髓質(zhì)會變成棕色，這被稱為嗜鉻反應(yīng)，如此命名暗示腎上腺髓質(zhì)組織對鉻鹽具有親和力。因此，腎上腺髓質(zhì)的細(xì)胞通常被稱為嗜鉻細(xì)胞。嗜鉻細(xì)胞還存在于腎上腺髓質(zhì)外側(cè)，但是通常僅分泌去甲腎上腺素，而不分泌腎上腺素。
可將腎上腺髓質(zhì)看作受節(jié)前膽堿能神經(jīng)纖維支配的交感神經(jīng)節(jié)。這些神經(jīng)纖維釋放乙酰膽堿，該乙酰膽堿通過腎上腺髓質(zhì)的嗜鉻細(xì)胞的胞吐作用引起兒茶酚胺(主要是腎上腺素)的分泌。正常腎上腺髓質(zhì)受內(nèi)臟神經(jīng)——交感神經(jīng)系統(tǒng)的節(jié)前膽堿能分支——的支配。腎上腺髓質(zhì)的活性基本完全受控于該膽堿能神經(jīng)。
嗜鉻細(xì)胞腫瘤嗜鉻細(xì)胞(包括腎上腺髓質(zhì)的嗜鉻細(xì)胞)和交感神經(jīng)節(jié)細(xì)胞具有很多共通之處，比如它們均來自共同的胚胎祖先——神經(jīng)嵴的交感神經(jīng)元細(xì)胞(sympathagonium)，如下圖所示?？捎蛇@其中的每種細(xì)胞類型所引起的新生物類型的實例示于括號中。所示出的這其中的每種細(xì)胞類型都有可能分泌兒茶酚胺。
Θ，pheochromoblastomaΩ，sympathoblast盡管大部分嗜鉻細(xì)胞新生物出現(xiàn)在腎上腺髓質(zhì)中，但是已知異位和多發(fā)位置嗜鉻細(xì)胞腫瘤也經(jīng)常出現(xiàn)在兒童中。
副神經(jīng)節(jié)瘤副神經(jīng)節(jié)(同義詞嗜鉻體)存在于心臟、主動脈附近、腎臟、肝臟、性腺和其它位置，由明顯來源于神經(jīng)嵴細(xì)胞的嗜鉻細(xì)胞組成，并且該嗜鉻細(xì)胞已遷移至自主神經(jīng)系統(tǒng)神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的近鄰。副神經(jīng)節(jié)瘤是由來源于副神經(jīng)節(jié)的嗜鉻細(xì)胞組成的新生物。頸動脈體副神經(jīng)節(jié)瘤被稱為頸動脈副神經(jīng)節(jié)瘤，而腎上腺髓質(zhì)副神經(jīng)節(jié)瘤被稱為嗜鉻細(xì)胞瘤或副神經(jīng)節(jié)瘤。
通常所觀察到的頸動脈體是圓形的、紅棕色到棕褐色的結(jié)構(gòu)，存在于一般的頸動脈體外膜中。它位于血管分叉處的后內(nèi)側(cè)壁上，并由ayer’s韌帶附著，供血血管通過該韌帶主要從頸外動脈進(jìn)入。正常的頸動脈體測得直徑為3-5mm。傳入的神經(jīng)支配似乎通過舌咽神經(jīng)(第九腦神經(jīng))提供。舌咽神經(jīng)為莖突咽肌提供運動纖維，為腮腺提供副交感促分泌纖維(secretomotor fiber)，并特別為鼓室，軟腭和扁桃體的內(nèi)表面提供感覺纖維)。從組織學(xué)來看，頸動脈體包括具有豐富細(xì)胞質(zhì)和大的圓的或者橢圓形細(xì)胞核的I型(主要)細(xì)胞。細(xì)胞質(zhì)包含似乎是儲存和釋放兒茶酚胺的致密核心顆粒。正常的頸動脈體負(fù)責(zé)檢測動脈血的組成的變化。
頸動脈副神經(jīng)節(jié)瘤總的來說是極少見的腫瘤，但卻是頭和頸副神經(jīng)節(jié)瘤的最常見形式。對于大部分頸動脈體副神經(jīng)節(jié)瘤，所選擇的治療方法是外科切除。但是，由于它位于重要血管和神經(jīng)附近，所以存在非常實際的發(fā)病率(主要是腦神經(jīng)X-XII缺乏和血管損傷)和死亡率風(fēng)險，后者被估計為3-9％。腫瘤大小很重要，因為直徑大于5cm的那些腫瘤具有顯著增高的并發(fā)癥發(fā)生率。手術(shù)期間須給予α和β腎上腺能阻斷劑(如果頸動脈副神經(jīng)節(jié)瘤分泌兒茶酚胺)，或者不太優(yōu)選地，在手術(shù)前進(jìn)行血管造影栓塞。單獨使用或與外科手術(shù)聯(lián)合使用的放射療法是第二考慮方案，并且該領(lǐng)域中還存在某些爭論。不幸的是，，包括頸動脈副神經(jīng)節(jié)瘤在內(nèi)的一些副神經(jīng)節(jié)瘤由于其位置和/或大小而不能進(jìn)行手術(shù)。
2.嗜鉻細(xì)胞瘤嗜鉻細(xì)胞瘤出現(xiàn)于腎上腺髓質(zhì)中，它可引起與過量的兒茶酚胺相關(guān)的臨床癥狀，包括突然的血壓升高(高血壓)、頭疼、心動過速、休息時大量出汗、從俯身體位突然立起時癥狀的加重和焦慮發(fā)作。腹部成像和兒茶酚胺的24小時尿液收集通常就足以確診。用酚芐明和甲酪氨酸阻斷兒茶酚胺通常可緩解癥狀，并且這是在外科手術(shù)(所選擇的現(xiàn)有療法)期間預(yù)防高血壓危象所必須的。標(biāo)準(zhǔn)的治療方法是腹腔鏡下腎上腺切除術(shù)，但是部分腎上腺切除術(shù)也通常用于家族型嗜鉻細(xì)胞瘤。惡性(癌性)嗜鉻細(xì)胞瘤是很少見的腫瘤。
據(jù)估計嗜鉻細(xì)胞瘤出現(xiàn)在約0.3％進(jìn)行高血壓輔助原因評估的患者中。如果未被診斷出或未被恰當(dāng)治療，嗜鉻細(xì)胞瘤是致命的。一系列尸體解剖表明許多嗜鉻細(xì)胞瘤在臨床上并不可疑，并且未診斷出的腫瘤與發(fā)病后果密切相關(guān)。
腎上腺髓質(zhì)中的變化可從正常腎上腺髓質(zhì)發(fā)展為腎上腺髓質(zhì)增生(腎上腺髓質(zhì)的細(xì)胞數(shù)和腎上腺髓質(zhì)的大小普遍增加，但是并沒有特別發(fā)展為腫瘤)再發(fā)展為腎上腺髓質(zhì)腫瘤(嗜鉻細(xì)胞瘤)。
嗜鉻細(xì)胞瘤的治療方法是外科手術(shù)除去一個或兩個腎上腺。是否必須除去兩個腎上腺將取決于疾病程度。兩個腎上腺均被除去的患者每天必須進(jìn)行皮質(zhì)醇和醛固酮替代療法。皮質(zhì)醇由氫化可的松、可的松或潑尼松替代并且必須每日服用。醛固酮可通過每日口服氟氫可的松(florineftm)替代。這類患者在包括發(fā)燒、感冒、流感、外科手術(shù)或麻醉在內(nèi)的應(yīng)激期間需要增加替代的氫化可的松或潑尼松的量。
3.血管球瘤血管球瘤(一類副神經(jīng)節(jié)瘤)通常是良性的新生物，并出現(xiàn)于存在于身體各部的神經(jīng)外胚層組織。血管球瘤是出現(xiàn)于顳骨中的最常見良性腫瘤，并且它們中有不到5％會成為惡性并轉(zhuǎn)移。血管球瘤出現(xiàn)于沿副交感神經(jīng)分布于顱底、胸部和頸部中的血管球體。一般在每個耳朵中有三個血管球體。血管球體通常與Jacobsen’s(CN IX)或Arnold’s(CNX)神經(jīng)相伴或存在于頸靜脈球外膜中。但是，其生理位置通常是鼓室岬(鼓室球)或頸靜脈體(頸靜脈球)的粘膜。
頸靜脈球腫瘤的發(fā)生率為約1∶1,300,000人口，并且流行病學(xué)最引人注目的部分在于女性中的顯著發(fā)生率(女性發(fā)生率∶男性發(fā)生率之比為至少4∶1)。分泌兒茶酚胺的(即功能性)腫瘤在約1％至3％的病例中出現(xiàn)。
血管球瘤具有分泌兒茶酚胺的潛力，與也出現(xiàn)于神經(jīng)嵴組織并且也能分泌兒茶酚胺的腎上腺髓質(zhì)相似。血管球瘤在腎上腺中的新生相似物為嗜鉻細(xì)胞瘤，因此血管球腫瘤被稱為腎上腺外嗜鉻細(xì)胞瘤。分泌兒茶酚胺的血管球腫瘤可引起心率失常、大汗、頭疼、惡心和蒼白。
血管球瘤可出現(xiàn)在顱底不同區(qū)域。當(dāng)被限定在中耳腔時，它們被稱為鼓室球。當(dāng)出現(xiàn)在頸靜脈孔區(qū)域時，不管其程度如何，它們被稱為頸靜脈球。當(dāng)它們大量出現(xiàn)于頸部、朝向頸靜脈孔延伸時，它們被稱為迷走神經(jīng)球(glomus vagale)。當(dāng)它們出現(xiàn)于頸動脈分叉區(qū)域時，它們被稱為頸動脈體腫瘤。血管球瘤的其它已知位置包括喉、眼眶、鼻和弓動脈。
頸靜脈球腫瘤是最常見的中耳腫瘤。這些腫瘤通常血管豐富，由頸外動脈的分支提供營養(yǎng)。頸靜脈球腫瘤的癥狀包括耳內(nèi)有脈沖式鳴響的失聰、頭暈以及間或耳疼?；颊呖苫加锌赡苡捎谥卸蛔钄嗨鸬氖?，但還存在有由于腫瘤體引發(fā)神經(jīng)損傷所引起的失聰?？刂仆萄?、作嘔、聳肩和舌運動的神經(jīng)的腦神經(jīng)麻痹均為頸靜脈球腫瘤的部分表現(xiàn)。當(dāng)檢查鼓膜時通?？梢姷郊t色/藍(lán)色搏動性物質(zhì)。癥狀在發(fā)作時并不明顯。由于腫瘤的位置及其血管性質(zhì)，最為常見的主訴是脈沖式耳鳴。在大部分情況下耳鳴被認(rèn)為是鼓膜頂點(umbo)上的機(jī)械創(chuàng)傷的結(jié)果。其它常見癥狀為耳脹和(傳導(dǎo)性)失聰。
分泌兒茶酚胺的血管球瘤的現(xiàn)有療法是在給予α和β阻斷劑之后進(jìn)行輻射和/或外科切除。頸靜脈球腫瘤的治療方法包括給予α和β阻斷劑。即便該腫瘤物質(zhì)依然存在，X-射線療法也可用于改進(jìn)癥狀。還能用阻斷腫瘤血液供給的物質(zhì)使其發(fā)生栓塞，但是該方法具有與引起腫瘤腫脹(會壓迫腦干和小腦)和從細(xì)胞(失去血液供給時它們會死亡)釋放兒茶酚胺相關(guān)的問題。外科手術(shù)可在小腫瘤的大概位置進(jìn)行。頸靜脈球腫瘤外科手術(shù)的并發(fā)癥為腦脊液從耳朵的持續(xù)泄漏，還有控制臉部運動、感覺或聽力的腦神經(jīng)之一的麻痹。
即便外科手術(shù)成功，頸靜脈球腫瘤還是會有些問題，因為它們具有高復(fù)發(fā)率，可能需要多次手術(shù)。外科切除具有發(fā)病風(fēng)險主要是由于醫(yī)源性的腦神經(jīng)缺失和CSF泄漏。腦神經(jīng)保護(hù)的缺乏可能是最重要的反對外科手術(shù)干預(yù)的原因，這是因為后組腦神經(jīng)(lower cranial nerve)缺失的相關(guān)發(fā)病率。放射療法也具有嚴(yán)重的并發(fā)癥，包括顳骨的射線性骨壞死、腦壞死、垂體-下丘腦機(jī)能不全和繼發(fā)性惡性腫瘤。其它術(shù)后并發(fā)癥包括CSF泄漏、呼吸綜合征、腦膜炎、肺炎和傷口感染。
因此需要一種用于有效治療各種癌癥的有效的、不需要外科切除、非放射治療的治療方法，所述癌癥包括乳腺癌、中樞神經(jīng)系統(tǒng)癌、血細(xì)胞癌、胃腸癌(如結(jié)腸癌或直腸癌)、皮膚癌和前列腺癌。


圖1用圖表示出A型肉毒毒素(BOTOX)對九種不同癌細(xì)胞系或類型的體外影響。圖1中的X軸代表用于九種不同癌細(xì)胞類型的BOTOX濃度(單位/毫升，U/ml)。圖1中的Y軸代表使用了不同的X軸濃度的BOTOX對九種不同癌細(xì)胞類型的細(xì)胞分裂抑制的百分比。
圖2-10為圖1所示九種不同癌細(xì)胞類型中每一種的九幅單獨的圖，以便更為清楚地闡述圖1所示內(nèi)容。圖2-10的X和Y軸與圖1所示U/ml和抑制百分率相同。
圖2示出A型肉毒毒素對轉(zhuǎn)移至腹部組織的乳腺導(dǎo)管癌細(xì)胞(細(xì)胞系ZR-75)的體外影響。X軸表示BOTOX的濃度(U/ml)，Y軸表示細(xì)胞分裂抑制百分比。
圖3示出A型肉毒毒素對轉(zhuǎn)移至肺組織的乳腺導(dǎo)管癌細(xì)胞(細(xì)胞系T-47D)的體外影響。X軸表示BOTOX的濃度(U/ml)，Y軸表示細(xì)胞分裂抑制百分比。
圖4示出A型肉毒毒素對轉(zhuǎn)移至骨髓的成神經(jīng)細(xì)胞瘤癌細(xì)胞(細(xì)胞系SK-N-SH)的體外影響。X軸表示BOTOX的濃度(U/ml)，Y軸表示細(xì)胞分裂抑制百分比。
圖5示出A型肉毒毒素對T細(xì)胞白血病癌細(xì)胞(細(xì)胞系Jurkat)的體外影響。X軸表示BOTOX的濃度(U/ml)，Y軸表示細(xì)胞分裂抑制百分比。
圖6示出A型肉毒毒素對轉(zhuǎn)移至腹部組織的成神經(jīng)細(xì)胞瘤癌細(xì)胞(細(xì)胞系IMR-32)的體外影響。X軸表示BOTOX的濃度(U/ml)，Y軸表示細(xì)胞分裂抑制百分比。
圖7示出A型肉毒毒素對轉(zhuǎn)移至眶上區(qū)的成神經(jīng)細(xì)胞瘤癌細(xì)胞(細(xì)胞系SK-N-MC)的體外影響。X軸表示BOTOX的濃度(U/ml)，Y軸表示細(xì)胞分裂抑制百分比。
圖8示出A型肉毒毒素對結(jié)腸直腸癌細(xì)胞(細(xì)胞系SKCO-1)的體外影響。X軸表示BOTOX的濃度(U/ml)，Y軸表示細(xì)胞分裂抑制百分比。
圖9示出A型肉毒毒素對無黑素性黑素瘤癌細(xì)胞(細(xì)胞系M14)的體外影響。X軸表示BOTOX的濃度(U/ml)，Y軸表示細(xì)胞分裂抑制百分比。
圖10示出A型肉毒毒素對前列腺癌細(xì)胞(細(xì)胞系LNCAP)的體外影響。X軸表示BOTOX的濃度(U/ml)，Y軸表示細(xì)胞分裂抑制百分比。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明滿足上述需要，提供用于治療各種癌前組織以及癌組織的有效的、非外科切除、非放射治療的治療方法。因此，本發(fā)明包括治療非典型組織如增生組織、囊腫和新生物(包括腫瘤和癌癥)的方法以及預(yù)防非典型組織、囊腫和新生物的發(fā)育或使其退化或緩解的方法。具體而言，本發(fā)明涉及治療包括良性和癌性在內(nèi)的特定腫瘤如乳腺囊腫和新生物的方法，以及通過將梭菌毒素局部給藥至患病腺體組織或其附近治療增生腺組織和/或高滲腺組織的方法。
本發(fā)明的一個實施方案為一種治療癌癥的方法，所述方法包括將肉毒神經(jīng)毒素給藥至癌細(xì)胞的步驟。優(yōu)選地，所述肉毒毒素以介于約10-2U/kg至約200U/kg之間的量給藥。更為優(yōu)選地，所述肉毒毒素以介于約10-1U/kg至約35U/kg之間的量給藥。所述肉毒毒素選自A、B、C、D、E、F和G型肉毒毒素，并且優(yōu)選的肉毒毒素為A型肉毒毒素。
本發(fā)明的一個更具體的實施方案為一種治療癌癥的方法，所述方法包括將將介于約10-2U/kg至約200U/kg之間的A型肉毒毒素局部給藥至癌組織或癌前組織附近，由此引起增生、高滲或新生組織的大小和/或活性的減小。
本發(fā)明的另一個實施方案為一種治療乳腺癌的方法，所述方法包括將肉毒神經(jīng)毒素給藥至乳腺的步驟。優(yōu)選地，所述肉毒毒素以介于約10-2U/kg至約200U/kg之間的量給藥。更為優(yōu)選地，所述肉毒毒素以介于約10-1U/kg至約35U/kg之間的量給藥。所述肉毒毒素選自A、B、C、D、E、F和G型肉毒毒素，并且優(yōu)選的肉毒毒素為A型肉毒毒素。所述乳腺癌為乳腺導(dǎo)管癌。
本發(fā)明的一個更具體的實施方案為一種治療乳腺癌的方法，所述方法包括將介于約10-2U/kg至約200U/kg之間的A型肉毒毒素局部給藥至乳腺或癌前乳腺組織附近，由此引起增生、高滲或新生乳腺組織的大小和/或活性的減小。
本發(fā)明第三個實施方案為一種治療中樞神經(jīng)系統(tǒng)癌的方法，所述方法包括將肉毒神經(jīng)毒素給藥至中樞神經(jīng)系統(tǒng)患病區(qū)的步驟。優(yōu)選地，所述肉毒毒素以介于約10-2U/kg至約200U/kg之間的量給藥。更為優(yōu)選地，所述肉毒毒素以介于約10-1U/kg至約35U/kg之間的量給藥。所述肉毒毒素選自A、B、C、D、E、F和G型肉毒毒素，并且優(yōu)選的肉毒毒素為A型肉毒毒素。所述中樞神經(jīng)系統(tǒng)癌為成神經(jīng)細(xì)胞瘤。
本發(fā)明的一個更具體的實施方案為一種治療中樞神經(jīng)系統(tǒng)癌的方法，所述方法包括將介于約10-2U/kg至約200U/kg之間的A型肉毒毒素局部給藥至中樞神經(jīng)系統(tǒng)的患病區(qū)或癌前中樞神經(jīng)系統(tǒng)組織附近，由此引起增生、高滲或新生中樞神經(jīng)系統(tǒng)組織的大小和/或活性的減小。
本發(fā)明的第四個實施方案為一種治療血細(xì)胞癌的方法，所述方法包括將肉毒神經(jīng)毒素給藥至血細(xì)胞的步驟。優(yōu)選地，所述肉毒毒素以介于約10-2U/kg至約200U/kg之間的量給藥。更為優(yōu)選地，所述肉毒毒素以介于約10-1U/kg至約35U/kg之間的量給藥。所述肉毒毒素選自A、B、C、D、E、F和G型肉毒毒素，并且優(yōu)選的肉毒毒素為A型肉毒毒素。所述血細(xì)胞癌為白血病。
本發(fā)明的具體實施方案為一種治療血細(xì)胞障礙的方法，所述方法包括將介于約10-2U/kg至約200U/kg之間的A型肉毒毒素局部給藥至血細(xì)胞，由此引起增生、高滲或新生血細(xì)胞的大小和/或活性的減小。
本發(fā)明的第五個實施方案為一種治療結(jié)腸癌的方法，所述方法包括將肉毒神經(jīng)毒素給藥至結(jié)腸的步驟。優(yōu)選地，所述肉毒毒素以介于約10-2U/kg至約200U/kg之間的量給藥。更為優(yōu)選地，所述肉毒毒素以介于約10-1U/kg至約35U/kg之間的量給藥。所述肉毒毒素選自A、B、C、D、E、F和G型肉毒毒素，并且優(yōu)選的肉毒毒素為A型肉毒毒素。
本發(fā)明的一個具體實施方案為一種治療結(jié)腸癌的方法，所述方法包括將介于約10-2U/kg至約200U/kg之間的A型肉毒毒素局部給藥至結(jié)腸或癌前結(jié)腸組織附近，由此引起增生、高滲或新生結(jié)腸組織的大小和/或活性的減小。
本發(fā)明的第六個實施方案為一種治療直腸癌的方法，所述方法包括將肉毒神經(jīng)毒素給藥至直腸的步驟。優(yōu)選地，所述肉毒毒素以介于約10-2U/kg至約200U/kg之間的量給藥。更為優(yōu)選地，所述肉毒毒素以介于約10-1U/kg至約35U/kg之間的量給藥。所述肉毒毒素選自A、B、C、D、E、F和G型肉毒毒素，并且優(yōu)選的肉毒毒素為A型肉毒毒素。
本發(fā)明的一個具體實施方案為一種治療直腸癌的方法，所述方法包括將介于約10-2U/kg至約200U/kg之間的A型肉毒毒素局部給藥至直腸或癌前直腸組織附近，由此引起增生、高滲或新生直腸組織的大小和/或活性的減小。
本發(fā)明的第七個實施方案為一種治療皮膚癌的方法，所述方法包括將肉毒神經(jīng)毒素給藥至皮膚的步驟。優(yōu)選地，所述肉毒毒素以介于約10-2U/kg至約200U/kg之間的量給藥。更優(yōu)選地，所述肉毒毒素以介于約10-1U/kg至約35U/kg之間的量給藥。所述肉毒毒素選自A、B、C、D、E、F和G型肉毒毒素，并且優(yōu)選的肉毒毒素為A型肉毒毒素。所述皮膚癌為黑素瘤。
本發(fā)明的一個具體實施方案為一種治療皮膚癌的方法，所述方法包括將介于約10-2U/kg至約200U/kg之間的A型肉毒毒素局部給藥至皮膚或癌前皮膚組織附近，由此引起增生、高滲或新生皮膚組織的大小和/或活性的減小。
本發(fā)明的第八個實施方案為一種治療前列腺癌的方法，所述方法包括將肉毒神經(jīng)毒素給藥至前列腺的步驟。一個相似發(fā)明公開于共同未決的申請中，該申請的系列號為10/778,948，題為“Us of neurotoxin therapyfor treatment of urological and related disorders related tourinary retention”。優(yōu)選地，所述肉毒毒素以介于約10-2U/kg至約200U/kg之間的量給藥。更優(yōu)選地，所述肉毒毒素以介于約10-1U/kg至約35U/kg之間的量給藥。所述肉毒毒素選自A、B、C、D、E、F和G型肉毒毒素，并且優(yōu)選的肉毒毒素為A型肉毒毒素。
本發(fā)明的一個具體實施方案為一種治療前列腺癌的方法，所述方法包括將介于約10-2U/kg至約200U/kg之間的A型肉毒毒素局部給藥至前列腺或癌前前列腺組織附近，由此引起增生、高滲或新生前列腺組織的大小和/或活性的減小。
所述肉毒毒素可為經(jīng)修飾的肉毒毒素，即與天然肉毒毒素相比，所述肉毒毒素中至少有一個氨基酸缺失、被修飾或置換。因此，所述肉毒毒素可為重組產(chǎn)生的肉毒毒素或其衍生物或片段。
本文使用下列定義術(shù)語“治療”、“治療中”或“治療方法”意為減少或解決或預(yù)防疾病、障礙或病癥如癌癥，或促進(jìn)損傷組織或損害組織的痊愈。
術(shù)語“治療有效量”意為治療疾病、障礙或病癥所需藥劑(即活性藥物成分，如肉毒毒素)的水平、量或濃度，或降低或預(yù)防疾病、障礙或病癥、且對所治療組織不引起顯著負(fù)面或有害副作用的藥劑的水平、量或濃度。
“局部給藥”意為將神經(jīng)毒素如肉毒毒素直接注射到靶組織或其局部區(qū)域。
具體實施例方式
本發(fā)明是以此發(fā)現(xiàn)為基礎(chǔ)增生、高滲、囊性和/或新生組織可用梭菌毒素治療，由此減少或消除增生、高滲壓、囊性和/或新生物病癥。所治療組織可為良性的或惡性的，增生包括高滲病癥。因此，本發(fā)明可用于治療各種病癥，包括乳腺癌、囊性乳腺疾病、肺癌、腺癌、卵巢癌、口腔癌和口咽癌、胰腺囊腫和胰腺癌、前列腺癌、腎癌、GI道癌、睪丸癌和囊腫、淋巴結(jié)癌、子宮內(nèi)膜癌、成神經(jīng)細(xì)胞瘤、黑素瘤、結(jié)腸直腸癌、白血病，還可用于治療這些器官和腺體的增生、組織轉(zhuǎn)化、非典型和發(fā)育異常癌前組織。
另外，分泌活性受一種或多種肉毒毒素底物控制或影響的過度分泌細(xì)胞(增生或高滲)可由本發(fā)明范圍內(nèi)的方法治療，由此預(yù)防增生或高滲分泌組織發(fā)展成為新生物。肉毒毒素的蛋白水解輕鏈進(jìn)入到靶組織。
在一個優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明是一種治療諸如癌前乳腺組織的乳腺疾病的方法。盡管本發(fā)明并不限定為任何具體機(jī)制，但是可推測將梭菌毒素(如肉毒毒素)局部給藥至患病組織如乳腺囊腫，可治療囊腫(即減小[或完全消除]囊腫大小、和/或頂泌細(xì)胞增生)，這是由于毒素對神經(jīng)支配頂泌細(xì)胞的刺激性膽堿能纖維的抑制作用或毒素(或至少為毒素輕鏈)進(jìn)入囊性細(xì)胞時毒素對囊腫的直接作用。
因此，本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案為一種治療例如如下癌前乳腺病的方法乳腺囊腫、硬化性腺病、乳頭狀瘤、纖維腺瘤(小葉增生)和鈍性導(dǎo)管腺病。雖然癌前意味著該患病乳腺組織并非惡性的(即并非癌性的)，但是患病乳腺組織可為增生的、肥大的或組織轉(zhuǎn)化的，并且癌前組織的存在對患者而言增加了發(fā)展成為乳腺癌的風(fēng)險。
因此，膽堿能神經(jīng)支配的靶組織可通過局部給予梭菌毒素如肉毒毒素治療。局部給藥意味著將神經(jīng)毒素直接給藥至靶組織(即癌前乳腺組織)或有待治療的局部組織區(qū)或其附近。局部給藥包括將神經(jīng)毒素直接注射至患病組織。非癌性(良性)、癌前、癌性(惡性)增生和/或高滲分泌組織可由本發(fā)明范圍內(nèi)的方法治療。腫瘤發(fā)育之前的結(jié)節(jié)性增生或擴(kuò)散性增生可由本發(fā)明方法治療。
已發(fā)現(xiàn)可使用具有顯著緩解作用的特定神經(jīng)毒素肉毒毒素，以治療各種癌前乳腺組織，由此有效替代現(xiàn)有外科手術(shù)、化學(xué)治療和放射治療的治療方法。有意義的是，單次局部給予肉毒毒素可用于成功治療乳腺疾病。
給藥途徑和所給予肉毒毒素的量隨所治療具體乳腺病癥以及不同患者的因素大有變化，該患者的因素包括體型、體重、年齡、疾病嚴(yán)重程度和對治療方法的反應(yīng)程度。確定合適的給藥途徑和劑量的方法通常由主治醫(yī)師逐個病例地確定。這種確定方法對本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員而言是常規(guī)的(參見例如Harrison′s Principles of Internal Medicine(1997)，Anthony Fauci等人編輯，第14版，由McGraw Hill出版)。進(jìn)行治療是為了基本避免毒素進(jìn)入至全身循環(huán)中(即通過使用與靜脈內(nèi)給藥相對的皮下注射或肌內(nèi)注射)。
適合給藥的具體劑量很容易由本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員根據(jù)上述因素確定。劑量還取決于待治療或待去除神經(jīng)分布的腫瘤大小以及該毒素的商品制劑。另外，人恰當(dāng)劑量的估計值可通過有效地使其它非新生物組織去除神經(jīng)分布所需的肉毒量的測定方法外推得知。因此，待注射肉毒A的量與待治療乳腺組織的質(zhì)量和活性水平成正比。一般而言，將神經(jīng)毒素給藥至乳腺靶組織或其附近時，可給予介于約0.01至2000單位/kg患者體重的肉毒毒素如A型肉毒毒素以有效完成毒素誘導(dǎo)的靶組織萎縮。小于約0.01U/kg的肉毒毒素并沒有顯著療效，而大于約2000U/kg或35U/kg的B或A型肉毒毒素分別達(dá)到了特定肉毒毒素的毒性劑量。小心放置注射針或使用小體積的神經(jīng)毒素以防止在全身出現(xiàn)顯著量的肉毒毒素。更為優(yōu)選的劑量范圍是介于約0.01U/kg至約25U/kg的肉毒毒素，如制備成BOTOX的肉毒毒素。待給藥肉毒毒素的U/kg實際量取決于諸如待治療增生乳腺組織的范圍(質(zhì)量)和活性水平以及所選擇的給藥途徑。A型肉毒毒素是用于本發(fā)明的方法的優(yōu)選肉毒毒素血清型。
肉毒毒素的主要作用位點是神經(jīng)肌肉接頭，在此該毒素快速結(jié)合并阻止乙酰膽堿的釋放。因此，盡管已知肉毒毒素對膽堿能突出前外周運動神經(jīng)元具有已知的親和力，但是我們發(fā)現(xiàn)該肉毒毒素還可與多種癌前乳腺組織結(jié)合并轉(zhuǎn)移至其中，然后肉毒毒素在此以已知方式對各自的分泌血管-膜?？康鞍灼鹬鴥?nèi)切蛋白酶作用。由于肉毒毒素對某些乳腺組織的較低親和力，肉毒毒素優(yōu)選被注射至分泌組織或腺組織以提供較高的毒素局部濃度。因此，本發(fā)明可用于治療具有少量或沒有膽堿能神經(jīng)分布的癌前乳腺組織。
優(yōu)選地，用于實施本發(fā)明范圍內(nèi)的方法的神經(jīng)毒素為肉毒毒素，如血清型為A、B、C、D、E、F或G型肉毒毒素之一。優(yōu)選地，所使用肉毒毒素為A型肉毒毒素，這是由于它對人體的高效力、易得性以及通過肌內(nèi)注射局部給藥時用于治療骨骼肌和平滑肌障礙的已知用途。
根據(jù)本發(fā)明公開的神經(jīng)毒素用于治療癌前乳腺組織的給藥途徑可基于例如所選擇神經(jīng)毒素的溶解性特征以及待給予神經(jīng)毒素的量的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行選擇。所給予神經(jīng)毒素的量隨所治療具體病癥、其嚴(yán)重程度和其它不同患者的因素大有變化，該患者的因素包括例如體型、體重、年齡和對治療方法的反應(yīng)程度。例如受影響的癌前乳腺組織的范圍與所注射神經(jīng)毒素的體積成正比，而對于大部分劑量范圍而言，去除神經(jīng)分布的量被認(rèn)為與所注射神經(jīng)毒素的濃度成正比。確定恰當(dāng)?shù)慕o藥途徑和劑量的方法一般由主治醫(yī)師逐個病例地確定。這種確定方法對本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員而言是常規(guī)的(參見例如Harrison′s Principles of InternalMedicine(1997)，Anthony Fauci等人編輯，第14版，由McGraw Hill出版)。
本發(fā)明包括任何神經(jīng)毒素在本發(fā)明范圍內(nèi)的使用，該神經(jīng)毒素局部用于患者的癌前乳腺組織時具有較長期間的治療效果。例如，由生產(chǎn)毒素的任何梭菌細(xì)菌菌種所生產(chǎn)的神經(jīng)毒素都可用于或適用于本發(fā)明的方法中，所述梭菌菌種例如肉毒梭菌(Clostridium botulinum)、丁酸梭菌(Clostridium butyricum)和巴氏梭菌(Clostridium beratti)。另外，如上所述，盡管A型是最為優(yōu)選的血清型，全部肉毒血清型A、B、C、D、E、F和G可優(yōu)先用于本發(fā)明的實施中。本發(fā)明的實施可使人的靶組織萎縮并緩解27個月或更久。
已知兒茶酚胺從透化處理的腎上腺髓質(zhì)細(xì)胞的釋放可被肉毒毒素所抑制。另外，已知胰島素從透化處理的(如通過電穿孔)胰島素分泌細(xì)胞的釋放可被肉毒毒素所抑制。在體外時，由于這些非神經(jīng)細(xì)胞表面缺乏肉毒毒素的受體，所以可對它們的細(xì)胞膜進(jìn)行透化處理以有助于將肉毒毒素導(dǎo)入細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中。因此，B型肉毒毒素通過切割存在于胰島素分泌細(xì)胞系HIT-15的突觸小泡蛋白明顯地抑制胰島素分泌。Boyd R.S.，et al The Effect of Botulinum Neurotoxin-B On Insulin ReleaseFrom a Beta Cell，Mov Disord 10(3)376(1995)。發(fā)明人的論點是只要肉毒毒素的輕鏈被轉(zhuǎn)移至胞內(nèi)介質(zhì)時，肉毒毒素便可阻斷調(diào)節(jié)胞吐作用的任何囊泡從任何分泌細(xì)胞(即神經(jīng)元細(xì)胞、腺細(xì)胞、分泌細(xì)胞、嗜鉻細(xì)胞)類型釋放。例如，胞內(nèi)蛋白SNAP-25廣泛分布于神經(jīng)元分泌細(xì)胞和非神經(jīng)元分泌細(xì)胞中，A型肉毒毒素是以SNAP-25為特定底物的內(nèi)肽酶。因此，雖然膽堿能神經(jīng)元具有對肉毒毒素和破傷風(fēng)毒素的高親和力受體(因此比其它神經(jīng)元和其它細(xì)胞對調(diào)節(jié)分泌化合物胞吐的囊泡的抑制作用更為敏感)，但在毒素濃度升高時，非膽堿能交感神經(jīng)元、嗜鉻細(xì)胞和其它細(xì)胞類型也可攝入肉毒毒素并表現(xiàn)出有所下降的胞吐作用。
因此，通過本發(fā)明公開的實施，非膽堿能神經(jīng)纖維以及沒有神經(jīng)分布或少量神經(jīng)分布的分泌新生物可通過恰當(dāng)較高濃度肉毒毒素的使用治療，藉此帶來分泌新生物(即功能性(兒茶酚胺分泌)副神經(jīng)節(jié)瘤的治療)和增生嗜鉻細(xì)胞的治療性萎縮。
在正常腎上腺髓質(zhì)中，兒茶酚胺分泌速率受控于刺激嗜鉻細(xì)胞的神經(jīng)的活性。通常的看法是嗜鉻細(xì)胞瘤并沒有神經(jīng)分布，并且兒茶酚胺從該腫瘤釋放并不受神經(jīng)控制，與此相反，有證據(jù)表明這類腫瘤中具有膽堿能神經(jīng)分布。例如，電子顯微鏡已證實具有小突觸囊泡的神經(jīng)與含有兒茶酚胺囊泡的細(xì)胞相接觸。另外，由情緒失常、高血壓或通氣過度促成的兒茶酚胺從嗜鉻細(xì)胞瘤突然分泌至循環(huán)中表明神經(jīng)系統(tǒng)對分泌具有影響。另外，將嗜鉻細(xì)胞瘤患者從水平位置傾斜至直立位置已表明會引起尿液去甲腎上腺素大大增加，這在具有這類腫瘤的受試者中并不能觀察到，所述影響可能是由于(a)機(jī)械作用(即富含兒茶酚胺的腫瘤的壓迫作用)；(b)交感系統(tǒng)的反射激活，在該腎上腺能系統(tǒng)中兒茶酚胺的增加量可在嗜鉻細(xì)胞瘤患者的神經(jīng)末梢累積；和/或(c)已有嗜鉻細(xì)胞瘤神經(jīng)分布的激活。
另外，本發(fā)明范圍內(nèi)的方法可使患者的功能改善?！盎颊叩墓δ芨纳啤笨杀欢x為以諸如下列因素為量度的改進(jìn)疼痛減輕、臥床時間減少、離床活動增加、姿態(tài)更為健康、生活方式更為多樣化和/或正常肌緊張所允許的愈合?；颊叩墓δ芨纳剖巧|(zhì)量(Quality of life，QOL)改善的同義詞。QOL可使用例如已知的SF-12或SF-36健康調(diào)查評分方法進(jìn)行評估。SF-36在以下八個感覺方面對患者的身體健康和心理健康進(jìn)行了評估身體生理功能(physical functioning)、因生理功能角色受限(role limitations due to physical problem)、社交功能(social functioning)、身體疼痛(bodily pain)、總體心理健康(general mental health)、因情緒角色受限(role limitation due toemotional problem)、活力(vitality)和總體健康(general health)。所得的評分可與不同普通人群和病患人群可獲得的已出版數(shù)值進(jìn)行比較。
如上所述，我們已發(fā)現(xiàn)通過將神經(jīng)毒素局部給藥至病人的癌前乳腺組織可獲得驚人地有效且持久的治療效果。在本發(fā)明的最優(yōu)選實施方案中，本發(fā)明通過將A型肉毒毒素直接注射至靶組織或其局部區(qū)域?qū)嵤?。已報道在神?jīng)腺接頭處，肉毒毒素如A型肉毒毒素的化學(xué)去除神經(jīng)分布的作用持續(xù)相當(dāng)長的作用期間，即27個月對3個月。
本發(fā)明在其范圍內(nèi)包括(a)通過細(xì)菌培養(yǎng)、毒素提取、濃縮、保存、冷凍干燥和/或重溶獲得或加工得到的神經(jīng)毒素復(fù)合物以及純的神經(jīng)毒素以及；(b)修飾或重組神經(jīng)毒素及其衍生物或片段，該神經(jīng)毒素為一個或多個氨基酸或氨基酸序列被有意地敲除、修飾或置換的神經(jīng)毒素，這通過已知的化學(xué)/生物化學(xué)氨基酸修飾方法或已知的宿主細(xì)胞/重組載體重組技術(shù)的使用進(jìn)行，并且包括具有一個或多個嗜鉻細(xì)胞和新生物細(xì)胞類型的附著靶向部分的神經(jīng)毒素。
根據(jù)本發(fā)明所使用的肉毒毒素可以凍干形式或真空干燥形式在真空壓力條件的容器中保存。凍干之前，可將肉毒毒素與可藥用賦形劑、穩(wěn)定劑和/或載體如白蛋白混合。凍干或真空干燥物質(zhì)可用鹽水或水重溶。
在每一如下實施例中，所給予肉毒毒素的具體量取決于主治醫(yī)師所決定的有待權(quán)衡或考慮的多種因素，并且在每個實施例中，沒有顯著量的肉毒毒素進(jìn)入全身，且沒有顯著的副作用。下文中的肉毒毒素單位每千克(U/kg)為每千克患者總重。例如，對于70kg患者而言，3U/kg需要注射210單位肉毒毒素。
實施例以下實施例為本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員提供了本發(fā)明范圍內(nèi)完成本發(fā)明的特別優(yōu)選的方法，并且無意于限制發(fā)明人所認(rèn)定的發(fā)明范圍。
在每一如下實施例中，所給予肉毒毒素(如BOTOX)的具體量取決于主治醫(yī)師所決定的有待權(quán)衡和考慮的多種因素，并且在每個實施例中，可能在全身存在沒有顯著量的肉毒毒素，且沒有顯著的有毒作用。
實施例1肉毒毒素治療癌前乳腺病的用途1.對囊腫的治療一位46歲女性在其它方面正常的乳腺中出現(xiàn)慢性囊性疾病。纖維囊性變化以多個良性實體的混合物形式出現(xiàn)，該良性實體總大小為直徑1.2cm，含有硬的纖維脂肪組織區(qū)和大小不同的多囊腫。超聲和成像檢查發(fā)現(xiàn)了囊腫形成和微鈣化。組織學(xué)檢測發(fā)現(xiàn)存在頂泌不典型細(xì)胞(包括增生和組織轉(zhuǎn)化)，因此確定患者有發(fā)展大汗腺癌或髓樣癌的風(fēng)險。
自1930年來在癌癥診斷中就已使用可觸及乳腺的細(xì)針抽吸術(shù)(fine needle aspiration，F(xiàn)NA)來檢測乳腺細(xì)胞的細(xì)胞病理學(xué)。立體定向細(xì)針抽吸術(shù)以及由超聲和乳房造影指導(dǎo)的細(xì)針抽吸術(shù)也被用于不可觸及病灶。使用常規(guī)乳房造影設(shè)備和壓縮接骨板可進(jìn)行立體X線照相術(shù)以實現(xiàn)細(xì)針沿1mm病灶內(nèi)的x和y坐標(biāo)精確定位。超聲指導(dǎo)在確定病灶是否為單純囊腫、混合型或?qū)嶓w上非常有用。一般使用22號注射針。與用于FNA的相同方法學(xué)可用于將肉毒毒素注射至靶組織中。因此，為了注射，可將注射針連接至單手緊握特定把手有無均可的注射器。用抗菌劑擦拭皮膚。固定住乳腺腫塊，并將覆蓋其上的皮膚緊拉至方便手術(shù)者用另一只手插入注射針的位置。將該注射針插入腫塊中，并將含有肉毒毒素溶液的注射器的注射器內(nèi)芯往前推進(jìn)，而該注射針通過病灶直線前進(jìn)?；蛘撸瑸檠娱L治療效果，可如美國專利No.6,306,423和6,312,708所述，將控釋植入物插入皮下和/或注射含有肉毒毒素懸液的微球。
將10單位至100單位的A型肉毒毒素如BOTOX局部給藥(注射)至囊腫腫塊。此后28天里，囊腫顯著退化(囊腫直徑減小了至少80％)并在此后2至24個月里保持這種狀態(tài)?；蛘?，可給予B、C、D、E、F或G型肉毒毒素，給藥量被調(diào)整為與A型毒素相比可反映出不同的效力。因此，例如，由于已知B型肉毒毒素的效力比A型肉毒毒素低約50倍，所以局部給予500至5000單位B型毒素。
2.對硬化性腺病的治療對一名主訴乳腺疼痛的59歲絕經(jīng)后女性進(jìn)行了檢查。乳房造影術(shù)發(fā)現(xiàn)增生性病變，該增生性病變出現(xiàn)在末端導(dǎo)管小葉單位，包含直徑為1.3cm、未呈特殊顏色的臨床可觸及腫塊。該腫塊沒有明確界限，并有幾分疼痛和敏感。從組織學(xué)上看，一組小葉的正常構(gòu)造被腺泡和小葉內(nèi)基質(zhì)細(xì)胞的無序增生所扭曲。將10單位至100單位A型肉毒毒素如BOTOX局部給藥至腫塊。此后28天里，腫塊顯著退化(直徑減小了至少80％)并在此后2至24個月里保持這種狀態(tài)?；蛘?，可給予B、C、D、E、F或G型肉毒毒素，給藥量被調(diào)整為與A型毒素相比可反映出不同的效力。因此，例如，由于已知B型肉毒毒素的效力比A型肉毒毒素低約50倍，所以局部給予500至5000單位B型毒素。
3.對導(dǎo)管乳頭狀瘤的治療對一名具有從一個乳頭排出帶血排出物史的50歲女性進(jìn)行了檢查。盡管沒有可觸及腫塊，但是發(fā)現(xiàn)了乳腺的導(dǎo)管上皮的良性新生物。進(jìn)行了10單位至100單位A型肉毒毒素如BOTOX的局部給藥。此后28天里，解決了該排出物問題，該患者不再具有該癥狀，且在此后2至24個月里保持這種狀態(tài)。或者，可給予B、C、D、E、F或G型肉毒毒素，給藥量被調(diào)整為與A型毒素相比可反映出不同的效力。因此，例如，由于已知B型肉毒毒素的效力比A型肉毒毒素低約50倍，所以局部給予500至5000單位B型毒素。
4.對纖維腺瘤的治療一名36歲女性的乳腺中有腫塊。臨床檢查、成像(乳房造影術(shù))和細(xì)針抽吸術(shù)細(xì)胞學(xué)檢查發(fā)現(xiàn)了一塊堅硬的、可移動的、界限清楚的、無疼痛感的橡膠樣腫塊，直徑為1.5cm。由于該病灶是良性的，所以在征得患者同意的情況下，對患者局部注射肉毒毒素以作為切除術(shù)的。進(jìn)行了10單位至100單位A型肉毒毒素如BOTOX的局部給藥。此后28天里，腫塊顯著退化(直徑減小了至少80％)并在此后2至24個月里保持這種狀態(tài)?；蛘?，可給予B、C、D、E、F或G型肉毒毒素，給藥量被調(diào)整為與A型毒素相比可反映出不同效力。因此，例如，由于已知B型肉毒毒素的效力比A型肉毒毒素低約50倍，所以局部給予500至5000單位B型毒素。
5.對鈍性導(dǎo)管腺病的治療一名具有咖啡因攝入史(在之前約10年的時間內(nèi)每天4-6杯咖啡)的54歲女性的小葉發(fā)生了柱狀變化，檢測發(fā)現(xiàn)具有單個末端導(dǎo)管小葉單位的界限不清的小囊區(qū)域的形成，表現(xiàn)為正常內(nèi)腔上皮層被基底置換的細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)頂突(apical snout)的單層較高柱狀上皮細(xì)胞所替代。進(jìn)行了10單位至100單位A型肉毒毒素如BOTOX的局部給藥。此后28天里，所述乳腺病得以消退并在此后2至24個月里保持這種狀態(tài)?；蛘?，可給予B、C、D、E、F或G型肉毒毒素，給藥量被調(diào)整為與A型毒素相比可反映出不同的效力。因此，例如，由于已知B型肉毒毒素的效力比A型肉毒毒素低約50倍，所以局部給予500至5000單位B型毒素。
6.增殖性乳腺疾病的治療方法對一名64歲女性的生物活檢樣本的組織學(xué)檢查發(fā)現(xiàn)上皮增生(非典型增殖)，表現(xiàn)為正常內(nèi)腔上皮細(xì)胞和肌上皮細(xì)胞的正常雙層上細(xì)胞數(shù)目的增加。進(jìn)行了10單位至100單位A型肉毒毒素如BOTOX的局部給藥。此后28天里，生物活檢樣本的組織學(xué)檢查發(fā)現(xiàn)患者已沒有非典型細(xì)胞，并在此后2至24個月里保持這種狀態(tài)。或者，可給予B、C、D、E、F或G型肉毒毒素，給藥量被調(diào)整為與A型毒素相比可反映出不同效力。因此，例如，由于已知B型肉毒毒素的效力比A型肉毒毒素低約50倍，所以局部給予500至5000單位B型毒素。
實施例2采用肉毒毒素對高滲或增生組織的治療將肉毒毒素直接局部給藥至高滲或增生靶組織或其附近可通過幾種方法完成。如上所述，皮膚或皮下靶組織如乳腺組織可通過直接注射或放置毒素植入物治療。內(nèi)臟位置如內(nèi)臟成神經(jīng)細(xì)胞瘤也易于達(dá)到。例如，診斷和治療目的的內(nèi)窺鏡檢查術(shù)已被熟知。
(1)以治療為目的的胰腺內(nèi)窺鏡檢查技術(shù)包括胰腺括約肌切除術(shù)、狹窄擴(kuò)張術(shù)(stricture dilation)、支架術(shù)、假囊腫引流術(shù)(pseudocystdrainage)和內(nèi)窺鏡逆行胰膽管造影術(shù)(endoscopic retrogradecholangiopancreatography，ERCP)，這為胰腺膽管系統(tǒng)的可視化和治療提供了可能?？蓪τ糜谝认僦委煹膬?nèi)窺鏡進(jìn)行改良以為其用于將神經(jīng)毒素如肉毒毒素直接注射至胰腺組織提供可能。參見例如美國專利No.5,674,205。就本發(fā)明的目的而言，內(nèi)窺鏡從口咽通過胃、十二指腸移動并最后進(jìn)入胰管中，如果需要，可先對該胰管進(jìn)行導(dǎo)管減壓(例如通過擴(kuò)張術(shù)或支架術(shù))，以將內(nèi)窺鏡置于導(dǎo)管中。在如此放置后，可將一個中空注射針尖從內(nèi)窺鏡延長至胰腺組織，通過該注射針肉毒毒素可被注射至胰腺組織。
如果胰管不可接近或不能減壓，由成像指導(dǎo)的(即通過超聲或計算機(jī)斷層成像術(shù))經(jīng)皮注射針也可用于將神經(jīng)毒素經(jīng)腹直接注射至胰腺組織。因此，用于胰腺生物活檢的經(jīng)皮注射針抽吸術(shù)是已知的技術(shù)，將抽吸術(shù)逆向使用就能完成所需的毒素注射。因此，可通過將從1500單位的肉毒毒素局部給藥至胰腺靶組織的方式治療胰島素瘤或高滲或增生胰腺組織。新生或增生肺、小腸和卵巢靶組織可以相同方式治療，(2)垂體立體定向法可用于顱內(nèi)精確給予水溶液形式或植入物形式的神經(jīng)毒素，以治療增生或下丘腦或垂體靶組織。腦成神經(jīng)細(xì)胞瘤也可以該方式治療。因此，顱內(nèi)給予肉毒毒素可如下進(jìn)行。
可對患者進(jìn)行初步MRI掃描以獲得前聯(lián)合-后聯(lián)合連線的長度及其在外部骨性標(biāo)記的定位。然后，將將框架的基線與前聯(lián)合-后聯(lián)合連線平面相比對。使用CT指導(dǎo)并輔以腦室造影術(shù)。后聯(lián)合可在2-mm CT切片上觀察到，并可用作參照點。
靶組織定位的生理學(xué)確認(rèn)可使用通過電極的低頻和高頻刺激進(jìn)行，所述電極伴隨或裝入所使用長注射針注射器。可使用直徑為1.6mm、具有2mm暴露尖的熱敏電阻式電極(Radionics，Burlington，Massachusetts)。在使用Radionics病灶生成器(RadionicsRadiofrequency Lesion Generator Model RFG3AV)進(jìn)行電極高頻刺激(75Hz)下，可在0.5-1.0V處在前臂和手引發(fā)感覺異常反應(yīng)。對患病肢體震顫的低頻(5Hz)激活或干擾在2-3V處出現(xiàn)。通過本發(fā)明的方法，可使用不形成病灶的電極。確定靶組織定位之后，可注射神經(jīng)毒素，由此引起可逆的下丘腦化學(xué)切除(chemical hypothalamectomy)。典型的注射為在約0.01ml至約0.1ml水或鹽水中的所需幾個單位(即約0.1至約5單位)A型肉毒毒素復(fù)合物。較小注射體積可用于最小化毒素從靶標(biāo)的擴(kuò)散。一般而言，下丘腦釋放因子或垂體激素釋放抑制作用有望在約2-4小時內(nèi)逐漸減弱。因此，另一種神經(jīng)毒素形式——摻入聚合植入物中的神經(jīng)毒素——可用于在較長一段時間里(即約1年至約6年)在所需位置提供治療量毒素的可控連續(xù)的釋放，由此避免對反復(fù)毒素注射的需要。
幾種方法可用于在立體定向指導(dǎo)下將神經(jīng)毒素注射至不同腦內(nèi)靶標(biāo)如弓狀核(arcuate nucleus，AN)以治療肢端肥大癥。因此，可使用立體定向磁共振(magnetic resonance，MRI)方法，該方法有賴于以外科手術(shù)計劃為目的的三維(three-dimensional，3D)T1權(quán)重成像和以對AN進(jìn)行直接可視化為目的的多平面T2權(quán)重成像，并可與用于AN注射的電生理學(xué)記錄和注射指導(dǎo)相聯(lián)合。參見例如Bejjani，B.P.，et al.，Bilateral Subthalamic Stimulation for Parkinson′sDisease by Using Three-Dimensional Stereotactic MagneticResonance Imaging and Electrophysiological Guidance，J Neurosurg92(4)；615-252000。AN中心的坐標(biāo)可參照患者的前聯(lián)合-后聯(lián)合連線和腦圖譜確定。
通過幾個平行軌道(parallel track)的電生理檢測可同時進(jìn)行以準(zhǔn)確確定功能性靶標(biāo)。中心軌道(central track)通過MRI成像指向預(yù)定靶標(biāo)，可將其選用于神經(jīng)毒素注射。期望沒有外科并發(fā)癥出現(xiàn)。
以圖譜為基礎(chǔ)的計算機(jī)輔助功能性神經(jīng)外科方法學(xué)可用作準(zhǔn)確和精確注射所需植入物或植入物(神經(jīng)毒素控釋植入物)。該方法學(xué)為對下丘腦結(jié)構(gòu)的三維顯示和實時操作提供了可能。因此，能在所有三個正交方向中進(jìn)行在共同預(yù)先登記的多個腦圖譜輔助下的神經(jīng)外科計劃，能提高神經(jīng)毒素注射或植入的靶標(biāo)限定的精確性，能通過降低導(dǎo)管數(shù)目減少外科手術(shù)過程的時間，并且有助于制定更為復(fù)雜軌跡的計劃。參見例如Nowinski W.L.et al.，Computer-Aided Stereotactic FunctionalNeurosurgery Enhanced by the Use of the Multiple Bra in AtlasDatabase，IEEE Trans Med Imaging 19(1)；62-692000。因此，可通過將1至500單位肉毒毒素局部給藥至垂體靶組織治療垂體腫瘤或高滲或增生垂體組織。
實施例3使用肉毒毒素治療不同癌癥引言進(jìn)行試驗以測定肉毒毒素對各種不同癌癥的抗癌效果。使用Oncotech EDRAssay(Oncotech，Inc.，Tustin，California)進(jìn)行試驗。該分析可用于評估藥劑的抗癌活性，這通過藥劑阻止癌細(xì)胞分裂和生長的可測得活性(若有的情況下)確定。因此，Oncotech EDRAssay是用于測量多種癌細(xì)胞系對所研究藥劑的體外抗性的體外藥物抗性分析。
Oncotech EDRAssay使用癌細(xì)胞并將該癌細(xì)胞暴露于培養(yǎng)基中具有特定潛能的癌癥化學(xué)治療劑(即藥劑)。培養(yǎng)期間，加入具有放射活性的胸苷。氚標(biāo)記的胸苷很容易穿過癌細(xì)胞膜，并且由胸苷酸激酶和核苷二磷酸激酶以逐步方式轉(zhuǎn)化為3H-dTMP。然后氚標(biāo)記的dTMP在細(xì)胞周期的S期被摻入DNA中。受到抗癌藥物影響的細(xì)胞不分裂、或分裂更為緩慢，因此摻入較少量具有放射活性的胸苷。相反，治療后繼續(xù)分裂并摻入具有放射活性的胸苷的細(xì)胞對該藥物有抗性。通過測量樣本中的放射活性的量，該分析可確定癌癥對具體藥物的相對抗性。然后可對實驗數(shù)據(jù)使用算法以確定在本分析中患者將對所測試藥劑有反應(yīng)的概率。
在本實驗中，九類不同癌細(xì)胞被用于顯示肉毒毒素對九類不同細(xì)胞中每一種的細(xì)胞分裂的影響。這些細(xì)胞系代表六類不同癌細(xì)胞成神經(jīng)細(xì)胞瘤、急性成淋巴細(xì)胞性白血病、前列腺癌、乳腺癌、皮膚癌和結(jié)腸癌。該實驗測得肉毒毒素可抑制很多不同癌細(xì)胞類型的細(xì)胞分裂。
方法和材料1.癌細(xì)胞系在本研究中使用從美國典型培養(yǎng)物保藏中心(American TypeCulture Collection，ATCC，P.O.Box 1549，Manassas，VA 20108)獲得的八種不同細(xì)胞系和來自加州大學(xué)洛杉磯分校的一種細(xì)胞系。所研究的這九種癌細(xì)胞類型是1)IMR-32，源自一名13月齡高加索男嬰腹部組織塊的成神經(jīng)細(xì)胞瘤細(xì)胞系；(2)Jurkat，源自一名14歲男孩外周血的T細(xì)胞白血病細(xì)胞系；(3)LNCAP，轉(zhuǎn)移至左側(cè)鎖骨上的淋巴結(jié)的前列腺癌細(xì)胞系；(4)SK-CO-1，源自一名65歲高加索男性的、轉(zhuǎn)移至腹水的直腸結(jié)腸腺癌細(xì)胞系；(5)SK-N-MC，源自一名14歲高加索女孩的、轉(zhuǎn)移至眶上區(qū)的成神經(jīng)細(xì)胞瘤細(xì)胞系；(6)SK-N-SH，源自一名4歲女孩的、轉(zhuǎn)移至骨髓的成神經(jīng)細(xì)胞瘤；(7)T-47D，源自一名54歲女性的、轉(zhuǎn)移至胸腔積液的乳腺導(dǎo)管癌細(xì)胞系；(8)ZR-75，源自一名63歲高加索女性的、轉(zhuǎn)移至腹水的乳腺導(dǎo)管癌細(xì)胞系，以及；(9)M14，由加州大學(xué)洛杉磯分校提供的無黑素性黑素瘤細(xì)胞系。
2.測試物品BOTOX的工作液(210U/mL)通過如下方法制備得到使用21或22號注射針用0.475mL 0.9％非防腐處理無菌鹽水將100 UBOTOX重溶，緩慢攪拌，并在緊閉冰箱中于2℃至8℃之間保存最長4小時。BOTOX總是在重溶4小時內(nèi)使用。使用了七小瓶人血白蛋白(批次#684×022)。每小瓶人血白蛋白(人白蛋白)含有25％白蛋白，USP，50mL。將白蛋白的工作液(1.05mg/mL)制備為與每種濃度中BOTOX的白蛋白的量相當(dāng)。用0.9％非防腐處理無菌鹽水將儲存濃度人血白蛋白(12.5g/50mL或0.25g/mL)稀釋至1.05mg/ml。
3.測試物品滴定用于測定恰當(dāng)?shù)腎C50的被測試BOTOX濃度范圍介于0.001U/mL至20U/mL之間，白蛋白濃度范圍介于0.000005mg/mL至0.1mg/mL之間。將所制備的除20U/mL BOTOX和0.1mg/mL白蛋白之外的工作液以1∶21稀釋(將50uL藥物溶于1mL培養(yǎng)基+細(xì)胞中)至孔中，上述除外的兩種工作液使用1∶10稀釋(將100uL化合物溶于0.9mL培養(yǎng)基+細(xì)胞中)。
4.細(xì)胞系制備根據(jù)Oncotech標(biāo)準(zhǔn)操作程序進(jìn)行EDR分析。將在DMSO中冷凍保存的細(xì)胞系以保持存活率的方式解凍。在將腫瘤細(xì)胞在含有BOTOX或白蛋白的軟瓊脂上涂板前，使用臺盼藍(lán)不相容法就活力并使用細(xì)胞離心涂片標(biāo)本就細(xì)胞密度對該腫瘤細(xì)胞進(jìn)行了評估。在EDR組織培養(yǎng)基中進(jìn)行活細(xì)胞的稀釋，以產(chǎn)生約2-10×104細(xì)胞/每孔。
5.對照將順鉑的細(xì)胞毒性劑量作為陽性對照一式兩份進(jìn)行分析，未處理細(xì)胞作為參照和陰性對照。若陽性對照的每分鐘計數(shù)(count per minute，CPM)超過未處理對照的30％，就放棄該次分析結(jié)果。未處理半細(xì)胞對照孔是用所述細(xì)胞密度的一半涂板，以防止過度鋪滿板。若半細(xì)胞對照的生長百分率超過未處理陰性對照的生長的85％，則將該板劃分為生長過度的板，并且不被包括在該分析中。每種藥物和每種對照制備兩份并將該數(shù)值進(jìn)行平均用于計算。
6.EDR分析在24孔成簇培養(yǎng)板中培養(yǎng)腫瘤細(xì)胞。首先，培養(yǎng)板的每個孔中的底層瓊脂通過移液操作將0.5mL含有0.4％純化低熔點瓊脂糖的EDR組織培養(yǎng)基加入每個孔中制備得到。使瓊脂糖短暫固定使其變硬。然后，將50μL 21×恰當(dāng)濃度的BOTOX或白蛋白工作液加入每個孔中(除了20U/mL BOTOX和0.1mg/mL白蛋白，對這兩種溶液是每孔加入100uL21×溶液)。將根據(jù)2c部分制備得到的腫瘤細(xì)胞懸浮在含有0.2％瓊脂糖的EDR培養(yǎng)基中?；旌霞?xì)胞懸浮液，并將懸浮于含0.2％瓊脂糖的EDR組織培養(yǎng)基的等份0.5mL腫瘤細(xì)胞加至每孔底層之上，并將該板不受干擾地維持在4℃以使該瓊脂糖固定。然后將板置于設(shè)定為37℃和5％CO2的培養(yǎng)箱之中。將板培養(yǎng)72小時，之后將100μL含5.0μCi3H胸苷的EDR組織培養(yǎng)基加入每個孔中。然后將板放回培養(yǎng)箱中再培養(yǎng)48小時。培養(yǎng)結(jié)束后，通過將0.5ml去離子水加入每個孔中并加熱至95℃破壞腫瘤細(xì)胞膜。使用Brandel自動細(xì)胞收集器將細(xì)胞DNA收集于Reeve Angel 934AH濾紙之上。用濾紙將Cytoscint閃爍液加入液閃小瓶中，將小瓶蓋緊。然后在Beckman LS-6500閃爍計數(shù)儀上對小瓶進(jìn)行分析，并就3H記錄每分鐘計數(shù)(count per minute，CPM)。
7.對結(jié)果的解釋對每個處理樣本的兩個孔、用細(xì)胞毒性劑量的順鉑(20×CP)孵育的孔和兩個未處理對照樣本記錄了氚標(biāo)記胸苷計數(shù)。通過用處理樣本的校正計數(shù)的平均值除以未處理對照樣本的校正平均計數(shù)計算抑制百分率。對一些細(xì)胞系分析了兩個陰性對照。在第二個對照小于第一對照的10％的情況下，第二對照用于計算抑制百分率。
8.數(shù)據(jù)分析使用Microsoft Excel 2000(9.0.2720)由數(shù)據(jù)計算平均值和標(biāo)準(zhǔn)差。函數(shù)“＝average(…)”用于計算平均值，“＝STDEV(…)”用于計算標(biāo)準(zhǔn)差，“＝TTEST(…)”用于計算具有相同變量的雙樣本雙尾t-test。
結(jié)果滴定分析在濃度范圍為0.001U/mL至20U/mL之間測試BOTOX以確定九種癌細(xì)胞系的恰當(dāng)IC50。BOTOX單位濃度的變化在圖1中示出。
本實驗表明不同肉毒毒素濃度能抑制至少九種細(xì)胞系的細(xì)胞分裂。具體而言，在特定肉毒毒素濃度下，轉(zhuǎn)移至腹部組織的乳腺導(dǎo)管癌細(xì)胞、轉(zhuǎn)移至肺組織的乳腺導(dǎo)管癌細(xì)胞和轉(zhuǎn)移至骨髓的成神經(jīng)細(xì)胞瘤分別表現(xiàn)出28％、25％和20％的癌細(xì)胞增殖的抑制。
如圖1所示，BOTOX抑制了所有九種不同癌細(xì)胞系的細(xì)胞分裂。劑量-反應(yīng)分析表明最大抑制作用最常出現(xiàn)在0.1U/ml BOTOX。另外，0.1U/ml BOTOX為在每一種所測試癌細(xì)胞類型中引發(fā)反應(yīng)的劑量。
如圖2所示，BOTOX抑制了轉(zhuǎn)移至腹部組織的乳腺導(dǎo)管細(xì)胞的細(xì)胞分裂。對BOTOX的首次反應(yīng)出現(xiàn)在0.1U/ml，引起了對細(xì)胞分裂的27.7％抑制。第二次反應(yīng)出現(xiàn)在5U/ml BOTOX，這引起了對細(xì)胞分裂的15.9％抑制。
如圖3所示，BOTOX抑制了轉(zhuǎn)移至肺組織的乳腺導(dǎo)管癌細(xì)胞的細(xì)胞分裂。25.3％的抑制峰值出現(xiàn)在0.1U/ml BOTOX。
如圖4所示，BOTOX抑制了轉(zhuǎn)移至骨髓的成神經(jīng)細(xì)胞瘤細(xì)胞的細(xì)胞分裂。每一測試劑量的BOTOX均抑制細(xì)胞分裂。20.4％和19.6％抑制的兩個反應(yīng)峰值分別出現(xiàn)在1和0.01U/ml BOTOX。
如圖5所示，BOTOX抑制了源自外周血中的T細(xì)胞白血病的細(xì)胞分裂。17.9％的抑制峰值出現(xiàn)在2.5U/ml BOTOX，并具有由于BOTOX的濃度下降所引起的劑量依賴性的抑制活性降低。
如圖6所示，BOTOX抑制了源自腹部組織的成神經(jīng)細(xì)胞瘤細(xì)胞的細(xì)胞分裂。每個測試濃度的BOTOX均抑制細(xì)胞分裂，15.0％的抑制峰值出現(xiàn)在0.001U/ml。
如圖7所示，BOTOX抑制了轉(zhuǎn)移至眶上區(qū)的成神經(jīng)細(xì)胞瘤細(xì)胞的細(xì)胞分裂。在0.1U/ml BOTOX時觀察到14.7％的最大抑制。
如圖8所示，BOTOX有效抑制了轉(zhuǎn)移至腹部組織的直腸結(jié)腸癌細(xì)胞的細(xì)胞分裂。12.4％的抑制單峰值出現(xiàn)在0.1U/ml BOTOX。
如圖9所示，BOTOX抑制了無黑素性黑素瘤細(xì)胞的細(xì)胞分裂。9.8％的抑制峰值出現(xiàn)在1U/ml BOTOX，并具有由于BOTOX的濃度下降之后所引起的劑量依賴性的抑制活性降低。
如圖10所示，BOTOX有效抑制了轉(zhuǎn)移至左側(cè)鎖骨上的淋巴結(jié)的前列腺細(xì)胞的細(xì)胞分裂。在0.1U/ml BOTOX時出現(xiàn)了約6.0％的抑制單峰值。
結(jié)論本實驗使用Oncotech EDRAssay比較了BOTOX對九種不同癌細(xì)胞系的影響。在向存在BOTOX的軟瓊脂上涂板前，就活力和細(xì)胞密度對腫瘤細(xì)胞進(jìn)行了評估。將細(xì)胞培養(yǎng)72小時，并用氚標(biāo)記胸苷脈沖，然后再培養(yǎng)48小時，之后收集細(xì)胞并對氚標(biāo)記胸苷的摻入進(jìn)行定量。通過將BOTOX處理孔與培養(yǎng)基處理的相同數(shù)目的對照細(xì)胞進(jìn)行比較計算生長抑制百分比。該實驗示出不同濃度的抑制情況，抑制峰值最常出現(xiàn)在0.1U/ml BOTOX。抑制作用的最高水平出現(xiàn)在兩種乳腺導(dǎo)管癌細(xì)胞中，它們表現(xiàn)出對細(xì)胞分裂的28％和25％抑制。對在所有九種癌細(xì)胞系中所分析的BOTOX劑量反應(yīng)的回顧表明個別細(xì)胞系對BOTOX表現(xiàn)出不同的敏感性，生長抑制百分比高達(dá)28％。
本文所公開發(fā)明的方法具有很多優(yōu)點，包括如下(1)本發(fā)明使得有效地治療不同癌癥不需要外科手術(shù)，這些癌癥包括乳腺癌、中樞神經(jīng)系統(tǒng)癌、血細(xì)胞癌、胃腸癌(如結(jié)腸癌或直腸癌)、皮膚癌和前列腺癌。
(2)根據(jù)本發(fā)明，全身性的藥物影響可通過神經(jīng)毒素如肉毒毒素的直接局部給藥避免。
(3)如本文所示，本發(fā)明的緩解作用可從單次局部給予神經(jīng)毒素如肉毒毒素之后持續(xù)兩年或更長。
盡管本發(fā)明已就某些優(yōu)選方法得以詳細(xì)描述，但是本發(fā)明范圍內(nèi)的其它實施方案、形式和改進(jìn)也是可能的。例如，可將多種神經(jīng)毒素有效地用于本發(fā)明的方法中。此外，本發(fā)明包括局部給藥方法，其中兩種或多種神經(jīng)毒素如兩種或多種肉毒毒素可同時或連續(xù)給藥。例如，可給予A型肉毒毒素，一直到臨床反應(yīng)減弱或出現(xiàn)中和抗體，然后給予E型肉毒毒素?；蛘?，可局部給予任何兩種或多種血清型A-G肉毒的組合物以控制所需療效的出現(xiàn)和持續(xù)時間。另外，可在給予神經(jīng)毒素之前、同時或之后給予非神經(jīng)毒素化合物以提供輔助作用，例如在神經(jīng)毒素如肉毒毒素開始發(fā)揮其療效前使去除神經(jīng)分布的效果更好或使其出現(xiàn)得更為快速。
本發(fā)明在其范圍內(nèi)還包括神經(jīng)毒素如肉毒毒素在制備用于治療癌癥的藥劑中的用途，所述治療是通過神經(jīng)毒素如肉毒毒素的局部給藥。
因此，下述權(quán)利要求的精神和范圍不應(yīng)該被限制于上述優(yōu)選實施方案的描述之中。
權(quán)利要求
1.肉毒神經(jīng)毒素在制備用于治療癌癥的藥劑中的用途，所述治療是通過將肉毒神經(jīng)毒素給藥至癌細(xì)胞，由此治療所述癌癥。
2.權(quán)利要求1的用途，其中所述肉毒毒素以介于約10-2U/kg至約200U/kg之間的量給藥。
3.權(quán)利要求1的用途，其中所述肉毒毒素以介于約10-1U/kg至約35U/kg之間的量給藥。
4.權(quán)利要求1的用途，其中所述肉毒毒素選自A、B、C、D、E、F和G型肉毒毒素。
5.權(quán)利要求1的用途，其中所述肉毒毒素為A型肉毒毒素。
6.肉毒神經(jīng)毒素在制備用于治療癌癥的藥劑中的用途，所述治療是通過將介于約10-2U/kg至約200U/kg之間的A型肉毒毒素局部給藥至癌或癌組織附近，由此引起所述癌的大小和/或活性的減小。
7.肉毒神經(jīng)毒素在制備用于治療乳腺癌的藥劑中的用途，所述治療是通過將所述肉毒神經(jīng)毒素給藥至乳腺，由此治療所述乳腺癌。
8.權(quán)利要求7的用途，其中所述肉毒毒素以介于約10-2U/kg至約200U/kg之間的量給藥。
9.權(quán)利要求7的用途，其中所述肉毒毒素以介于約10-1U/kg至約35U/kg之間的量給藥。
10.權(quán)利要求7的用途，其中所述肉毒毒素選自A、B、C、D、E、F和G型肉毒毒素。
11.權(quán)利要求7的用途，其中所述肉毒毒素為A型肉毒毒素。
12.權(quán)利要求7的用途，其中所述乳腺癌為乳腺導(dǎo)管癌。
13.A型肉毒神經(jīng)毒素在制備用于治療乳腺癌的藥劑中的用途，其中所述治療是通過將介于約10-2U/kg至約200U/kg之間的A型肉毒毒素給藥至乳腺或癌前乳腺組織附近，由此引起增生、高滲或新生乳腺組織的大小和/或活性減小。
14.肉毒神經(jīng)毒素在制備用于治療中樞神經(jīng)系統(tǒng)癌的藥劑中的用途，所述治療是通過將肉毒神經(jīng)毒素給藥至中樞神經(jīng)系統(tǒng)的患病區(qū)，由此治療所述中樞神系統(tǒng)障礙。
15.權(quán)利要求14的用途，其中所述肉毒毒素以介于約10-2U/kg至約200U/kg之間的量給藥。
16.權(quán)利要求14的用途，其中所述肉毒毒素以介于約10-1U/kg至約35U/kg之間的量給藥。
17.權(quán)利要求14的用途，其中所述肉毒毒素選自A、B、C、D、E、F和G型肉毒毒素。
18.權(quán)利要求14的用途，其中所述肉毒毒素為A型肉毒毒素。
19.權(quán)利要求14的用途，其中所述中樞神經(jīng)系統(tǒng)癌為成神經(jīng)細(xì)胞瘤。
20.A型肉毒神經(jīng)毒素在制備用于治療中樞神經(jīng)系統(tǒng)癌的藥劑中的用途，所述治療是通過將介于約10-2U/kg至約200U/kg之間的A型肉毒毒素局部給藥至中樞神經(jīng)系統(tǒng)的患病區(qū)或癌前中樞神經(jīng)系統(tǒng)組織附近，由此引起增生、高滲或新生中樞神經(jīng)系統(tǒng)組織的大小和/或活性減小。
21.肉毒神經(jīng)毒素在制備用于治療血細(xì)胞癌的藥劑中的用途，所述治療是通過將肉毒神經(jīng)毒素給藥至血細(xì)胞，由此治療所述血細(xì)胞癌。
22.權(quán)利要求21的用途，其中所述肉毒毒素以介于約10-2U/kg至約200U/kg之間的量給藥。
23.權(quán)利要求21的用途，其中所述肉毒毒素以介于約10-1U/kg至約35U/kg之間的量給藥。
24.權(quán)利要求21的用途，其中所述肉毒毒素選自A、B、C、D、E、F和G型肉毒毒素。
25.權(quán)利要求21的用途，其中所述肉毒毒素為A型肉毒毒素。
26.權(quán)利要求21的用途，其中所述血細(xì)胞癌為白血病。
27.A型肉毒神經(jīng)毒素在制備用于治療血細(xì)胞障礙的藥劑中的用途，所述治療是通過將介于約10-2U/kg至約200U/kg之間的A型肉毒毒素局部給藥至血細(xì)胞，由此引起增生、高滲或新生血細(xì)胞的大小和/或活性減小。
28.肉毒神經(jīng)毒素在制備用于治療結(jié)腸癌的藥劑中的用途，所述治療是通過將肉毒神經(jīng)毒素給藥至結(jié)腸，由此治療所述結(jié)腸癌。
29.權(quán)利要求28的用途，其中所述肉毒毒素以介于約10-2U/kg至約200U/kg之間的量給藥。
30.權(quán)利要求28的用途，其中所述肉毒毒素以介于約10-1U/kg至約35U/kg之間的量給藥。
31.權(quán)利要求28的用途，其中所述肉毒毒素選自A、B、C、D、E、F和G型肉毒毒素。
32.權(quán)利要求28的用途，其中所述肉毒毒素為A型肉毒毒素。
33.A型肉毒神經(jīng)毒素在制備用于治療結(jié)腸癌的藥劑中的用途，所述治療是通過將介于約10-2U/kg至約200U/kg之間的A型肉毒毒素局部給藥至結(jié)腸或癌前結(jié)腸組織附近，由此引起增生、高滲或新生結(jié)腸組織的大小和/或活性減小。
34.肉毒神經(jīng)毒素在制備用于治療直腸癌的藥劑中的用途，所述治療是通過將肉毒神經(jīng)毒素給藥至直腸，由此治療直腸癌。
35.權(quán)利要求34的用途，其中所述肉毒毒素以介于約10-2U/kg至約200U/kg之間的量給藥。
36.權(quán)利要求34的用途，其中所述肉毒毒素以介于約10-1U/kg至約35U/kg之間的量給藥。
37.權(quán)利要求34的用途，其中所述肉毒毒素選自A、B、C、D、E、F和G型肉毒毒素。
38.權(quán)利要求34的用途，其中所述肉毒毒素為A型肉毒毒素。
39.A型肉毒神經(jīng)毒素在制備用于治療直腸癌的藥劑中的用途，所述治療是通過將介于約10-2U/kg至約200U/kg之間的A型肉毒毒素局部給藥至直腸或癌前直腸組織附近，由此引起增生、高滲或新生直腸組織的大小和/或活性減小。
40.肉毒神經(jīng)毒素在制備用于治療皮膚癌的藥劑中的用途，所述治療是通過將肉毒神經(jīng)毒素給藥至皮膚，由此治療所述皮膚癌。
41.權(quán)利要求40的用途，其中所述肉毒毒素以介于約10-2U/kg至約200U/kg之間的量給藥。
42.權(quán)利要求40的用途，其中所述肉毒毒素以介于約10-1U/kg至約35U/kg之間的量給藥。
43.權(quán)利要求40的用途，其中所述肉毒毒素選自A、B、C、D、E、F和G型肉毒毒素。
44.權(quán)利要求40的用途，其中所述肉毒毒素為A型肉毒毒素。
45.權(quán)利要求40的用途，其中所述皮膚癌為黑素瘤。
46.A型肉毒神經(jīng)毒素在制備用于治療皮膚癌的藥劑中的用途，其中所述治療是通過將介于約10-2U/kg至約200U/kg之間的A型肉毒毒素局部給藥至皮膚或癌前皮膚組織附近，由此引起增生、高滲或新生皮膚組織的大小和/或活性減小。
47.肉毒神經(jīng)毒素在制備用于治療前列腺癌的藥劑中的用途，所述治療是通過將肉毒神經(jīng)毒素給藥至前列腺，由此治療所述前列腺癌。
48.權(quán)利要求47的用途，其中所述肉毒毒素以介于約10-2U/kg至約200U/kg之間的量給藥。
49.權(quán)利要求47的用途，其中所述肉毒毒素以介于約10-1U/kg至約35U/kg之間的量給藥。
50.權(quán)利要求47的用途，其中所述肉毒毒素選自A、B、C、D、E、F和G型肉毒毒素。
51.權(quán)利要求47的用途，其中所述肉毒毒素為A型肉毒毒素。
52.A型肉毒神經(jīng)毒素在制備用于治療前列腺癌的藥劑中的用途，所述治療是通過將介于約10-2U/kg至約200U/kg之間的A型肉毒毒素給藥至前列腺或癌前前列腺組織附近，由此引起增生、高滲或新生前列腺組織的大小和/或活性減小。
全文摘要
通過將肉毒毒素局部給藥至癌部位或癌部位附近治療各種癌癥的方法。
文檔編號A61K38/12GK101031317SQ200580028758
公開日2007年9月5日 申請日期2005年7月21日 優(yōu)先權(quán)日2004年8月27日
發(fā)明者M·F·布林, S·多諾萬 申請人:阿勒根公司