專利名稱：緩釋制劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及新型緩釋制劑，含有長(zhǎng)期緩釋GnRH激動(dòng)劑或其鹽的微囊和短期緩釋GnRH激動(dòng)劑或其鹽的微囊的組合。
背景技術(shù)：
被稱為GnRH(或LHRH)的促黃體激素-釋放激素由下丘腦釋放，并與腦垂體受體結(jié)合。由此釋放的LH(促黃體激素)和FSH(促卵泡激素)作用于生殖腺以合成甾體激素。
但是，已揭示，當(dāng)持續(xù)給予具有強(qiáng)烈促黃體激素-釋放激素活性的化合物時(shí)，可用的受體數(shù)目下降且抑制了來(lái)源生殖腺的甾體激素的形成。利用此事實(shí)，具有GnRH活性的化合物在臨床上被用作性激素依賴疾病的治療劑，這些疾病比如前列腺癌、前列腺肥大、子宮內(nèi)膜異位、子宮肌瘤、子宮纖維瘤、性早熟和乳腺癌。
具有GnRH活性的此類化合物具體包括醋酸亮丙瑞林、醋酸布舍瑞林與醋酸戈舍瑞林瑞林，包含它們的緩釋制劑作為上述疾病的治療劑出售。包含這些化合物的制劑最初用作每天給藥一次的制劑，其后，它們被配制為緩釋制劑。目前，它們作為一月、三月或四月的緩釋制劑出售。這些緩釋制劑公開(kāi)于EP190833和EP442671中。
如前所述，具有GnRH活性的化合物被廣泛地用作前列腺癌治療劑。在進(jìn)程緩慢的疾病中，特別是前列腺癌中，延長(zhǎng)制劑的釋放是優(yōu)選的，不僅是因?yàn)榭紤]改善療效和提高患者的QOL(生活質(zhì)量)，還因?yàn)榭紤]因減少門診患者的治療時(shí)間而導(dǎo)致的醫(yī)學(xué)經(jīng)濟(jì)學(xué)。
發(fā)明目的但是，難以生產(chǎn)長(zhǎng)期穩(wěn)定釋放的緩釋制劑。尤其是，當(dāng)強(qiáng)調(diào)長(zhǎng)期緩釋時(shí)，給藥早期的藥物釋放量不足且有時(shí)延遲了給藥早期的效果表征。此外，當(dāng)給藥早期的藥物釋放量過(guò)高時(shí)，緩釋末期的藥物釋放量就會(huì)不足，有時(shí)難以長(zhǎng)期維持穩(wěn)定的緩釋。

發(fā)明內(nèi)容
為了實(shí)現(xiàn)前述目的，本發(fā)明人進(jìn)行了深入的研究。出乎預(yù)料地，他們發(fā)現(xiàn)組合具有不同緩釋期的GnRH激動(dòng)劑緩釋制劑可提高給藥早期的釋放量并長(zhǎng)期提供穩(wěn)定緩釋。本發(fā)明人基于這些發(fā)現(xiàn)繼續(xù)進(jìn)行研究，從而完成了本發(fā)明。
即，本發(fā)明涉及[1]緩釋制劑，含有長(zhǎng)期緩釋GnRH激動(dòng)劑或其鹽的微囊和短期緩釋GnRH激動(dòng)劑或其鹽的微囊的組合；[2]根據(jù)[1]的制劑，其中GnRH激動(dòng)劑或其鹽是由下式代表的肽5-氧代-Pro-His-Trp-Ser-Tyr-Y-Leu-Arg-Pro-Z[其中Y代表選自Dleu、Dala、DTrp、DSer(tBu)、D2Nal和DHis(ImBzl)的殘基，以及Z代表NH-C2H5或Gly-NH2]或其鹽；[3]根據(jù)[1]的制劑，其中GnRH激動(dòng)劑或其鹽是由下式代表的肽的乙酸鹽5-氧代-Pro-His-Trp-Ser-Tyr-DLeu-Leu-Arg-Pro-NH-C2H5；[4]根據(jù)[1]的制劑，其中長(zhǎng)期是指5個(gè)月或更長(zhǎng)，短期是指少于5個(gè)月；[5]根據(jù)[1]的制劑，其中長(zhǎng)期是指5個(gè)月或更長(zhǎng)且8個(gè)月或更短，短期是指1周或更長(zhǎng)且短于5個(gè)月；[6]根據(jù)[1]的制劑，其中微囊是包含乳酸聚合物或乳酸-羥基乙酸聚合物作為基質(zhì)的微囊；[7]根據(jù)[1]的制劑，其中短期緩釋GnRH激動(dòng)劑或其鹽的微囊和長(zhǎng)期緩釋GnRH激動(dòng)劑或其鹽的微囊的組合比為1∶約5至1∶約20，以各微囊中包含的GnRH激動(dòng)劑或其鹽的重量比表示；[8]根據(jù)[1]的制劑，其中長(zhǎng)期緩釋GnRH激動(dòng)劑或其鹽的微囊是包含(i)GnRH激動(dòng)劑或其鹽以及(ii)重均分子量約為18,000-約30,000的乳酸聚合物的微囊；以及短期緩釋GnRH激動(dòng)劑或其鹽的微囊是
(1)包含(i)GnRH激動(dòng)劑或其鹽以及(ii)重均分子量約為8,000-約12,000的乳酸-羥基乙酸聚合物(75/25(mol％))的微囊；或(2)包含(i)GnRH激動(dòng)劑或其鹽以及(ii)重均分子量約為13,000-約18,000的乳酸聚合物的微囊；[9]根據(jù)[1]的制劑，其中長(zhǎng)期緩釋GnRH激動(dòng)劑或其鹽的微囊是包含(i)GnRH激動(dòng)劑或其鹽以及(ii)重均分子量約為15000-約50000且其中重均分子量為5000或更低的聚合物的量約為5重量％或更低的乳酸聚合物的微囊；以及短期緩釋GnRH激動(dòng)劑或其鹽的微囊是(1)包含(i)GnRH激動(dòng)劑或其鹽以及(ii)重均分子量(Mw)約為8,000-約11,500、重均分子量(Mw)與數(shù)均分子量(Mn)的比值大于1.9、且乳酸與羥基乙酸的組合摩爾比為99.9/0.1-60/40的乳酸-羥基乙酸聚合物的微囊，且其中不包含藥物保持物質(zhì)(drug retaining substance)，或(2)零級(jí)釋放GnRH激動(dòng)劑或其鹽2個(gè)月以上的微囊，其微囊化W/O乳劑而制備，該乳劑由包含約20-70重量％的GnRH激動(dòng)劑或其鹽的內(nèi)水相溶液和包含作為釋放控制物質(zhì)的共聚物或均聚物的油相溶液制得，聚合物中乳酸/羥基乙酸的組成比為80/20-100/0，重均分子量為約7,000-約30,000；[10]根據(jù)[1]至[9]任一項(xiàng)的緩釋制劑，其長(zhǎng)期緩釋GnRH激動(dòng)劑或其鹽；[11]根據(jù)[10]的緩釋制劑，其中長(zhǎng)期是指5個(gè)月或更長(zhǎng)；[12]預(yù)防或治療前列腺癌、前列腺肥大、子宮內(nèi)膜異位、子宮肌瘤、子宮纖維瘤、早熟癥、痛經(jīng)或者乳腺癌的藥物或避孕藥，其含有如[1]定義的緩釋制劑；[13]制備如[1]定義的緩釋制劑的方法，其包括混合長(zhǎng)期緩釋GnRH激動(dòng)劑或其鹽的微囊和短期緩釋GnRH激動(dòng)劑或其鹽的微囊；[14]預(yù)防或治療前列腺癌、前列腺肥大(prostatomegaly)、子宮內(nèi)膜異位(endometriosis)、子宮肌瘤(hysteromyoma)、子宮纖維瘤(metrofibroma)、早熟癥(precocious puberty)、痛經(jīng)(dysmenorrhea)或者乳腺癌的方法或避孕的方法，其包括給予哺乳動(dòng)物有效量的如[1]定義的緩釋制劑；以及[15]如[1]定義的緩釋制劑用于制備預(yù)防或治療前列腺癌、前列腺肥大、子宮內(nèi)膜異位、子宮肌瘤、子宮纖維瘤、早熟癥、痛經(jīng)或者乳腺癌的藥物或避孕藥的用途。
通過(guò)混合具有不同緩釋期的緩釋GnRH激動(dòng)劑或其鹽的微囊，可得到在給藥早期提高藥物釋放量并長(zhǎng)期表現(xiàn)出穩(wěn)定緩釋的制劑。
附圖簡(jiǎn)介

圖1表明了試驗(yàn)例1的結(jié)果?！癖硎窘o予組合B時(shí)肽A的血中濃度，以及○表示給予MC#2時(shí)肽A的血中濃度。
圖2表明了試驗(yàn)例2的結(jié)果。●表示給予組合A時(shí)肽A的血中濃度，以及○表示給予MC#2時(shí)肽A的血中濃度。
圖3表明了試驗(yàn)例3的結(jié)果?！癖硎窘o予組合D時(shí)肽A的血中濃度，以及○表示給予MC#2時(shí)肽A的血中濃度。
本發(fā)明的最佳實(shí)施方式下面將詳細(xì)說(shuō)明本發(fā)明。
GnRH激動(dòng)劑例如包括對(duì)于激素依賴性疾病有效的GnRH激動(dòng)劑，特別是性激素依賴型癌(例如前列腺癌，子宮癌，乳腺癌，腦下垂體瘤等等)，性激素依賴性疾病比如前列腺肥大，子宮內(nèi)膜異位，子宮肌瘤，性早熟，痛經(jīng)，閉經(jīng)，經(jīng)前期綜合征，多室卵巢綜合征，手術(shù)后再發(fā)生的所述癌，侏儒癥，阿爾茨海默病，絕經(jīng)擾亂，不確切的疾病，所述癌癥的轉(zhuǎn)移，以及鈣·磷新陳代謝性骨擾亂，以及避孕(或不孕，當(dāng)停藥后其發(fā)生反跳效應(yīng)時(shí))。其它實(shí)例包括對(duì)于不依賴性激素但對(duì)GnRH敏感的良性或惡性腫瘤有效的GnRH激動(dòng)劑。
該GnRH激動(dòng)劑的實(shí)例包括肽和在Treatment with GnRH analogs，Controversies and perspectives[由The Parthenon Publishing Group Ltd.發(fā)表，1996]、JP-A-03-503165、JP-A-03-101695、JP-A-07-97334和JP-A-08-259460中所述的類似物。
作為GnRH激動(dòng)劑的具體實(shí)例，使用了通式[I]所代表的生理活性肽或其鹽5-氧代-Pro-His-Trp-Ser-Tyr-Y-Leu-Arg-Pro-Z[I][其中Y代表選自DLeu、DAla、DTrp、DSer(tBu)、D2Nal和DHis(ImBzl)的殘基，Z代表NH-C2H5或Gly-NH2]特別地，優(yōu)選其中Y是DLeu且Z是NH-C2H5的肽或其鹽(即，由5-氧代-Pro-His-Trp-Ser-Tyr-DLeu-Leu-Arg-Pro-NH-C2H5代表的肽或其鹽，特別是其乙酸鹽(醋酸亮丙瑞林由Takeda Chemical Industries，Ltd.制造))。
被舉例作為GnRH激動(dòng)劑的肽可以是藥學(xué)上可接受的鹽。當(dāng)該肽具有堿性基團(tuán)比如氨基時(shí)，該鹽的實(shí)例包括與無(wú)機(jī)酸(如鹽酸、硫酸、硝酸、硼酸等)、以及與有機(jī)酸(如碳酸、碳酸氫酸、琥珀酸、乙酸、丙酸、三氟乙酸等)形成的鹽。
當(dāng)肽具有酸性基團(tuán)比如羧基時(shí)，實(shí)例包括與無(wú)機(jī)堿(如堿金屬比如鈉、鉀等，堿土金屬比如鈣、鎂等)以及與有機(jī)堿(如有機(jī)胺比如三乙胺等，堿性氨基酸比如精氨酸等)形成的鹽。這些肽可形成金屬絡(luò)合化合物(如銅絡(luò)合物、鋅絡(luò)合物等)。
這些肽或其鹽可通過(guò)前述公開(kāi)或期刊的描述或基于它們的方法制備。
除了前述亮丙瑞林(醋酸亮丙瑞林)外，優(yōu)選的GnRH激動(dòng)劑實(shí)例包括，(1)戈舍瑞林 (US-A-4100274，JP-A-52-136172)，(2)布舍瑞林 (USP No.4,024,248,德國(guó)專利號(hào)2438352，JP-A-51-41359)，(3)曲普瑞林
(US-A-4010125，JP-A-52-31073)，(4)那法瑞林 (US-A-4234571，JP-A-55-164663，JP-A-63-264498，JP-A-64-25794)，(5)組氨瑞林 (6)地洛瑞林 (US-A-4569967，US-A-4218439)，(7)美替瑞林 (PCT WO 91/18016)，
(8)戈那瑞林(Gonadrelin) (德國(guó)專利號(hào)2213737)及其鹽。
作為短期緩釋GnRH激動(dòng)劑或其鹽的微囊(此后，有時(shí)簡(jiǎn)稱為“短期緩釋微囊”)，使用在短于5個(gè)月時(shí)期內(nèi)緩釋GnRH激動(dòng)劑或其鹽的微囊，優(yōu)選使用在約1周或更長(zhǎng)至短于約5個(gè)月的時(shí)期內(nèi)緩釋GnRH激動(dòng)劑或其鹽的微囊，更優(yōu)選在約2周或更長(zhǎng)至約4個(gè)月或更短的時(shí)期內(nèi)緩釋GnRH激動(dòng)劑或其鹽的微囊，更加優(yōu)選在約3周或更長(zhǎng)至約4個(gè)月或更短的時(shí)期內(nèi)緩釋GnRH激動(dòng)劑或其鹽的微囊，更加優(yōu)選在約1個(gè)月或更長(zhǎng)至約3個(gè)月或更短的時(shí)期內(nèi)緩釋GnRH激動(dòng)劑或其鹽的微囊，特別優(yōu)選約1個(gè)月或更長(zhǎng)至約2個(gè)月或更短，或約2個(gè)月或更長(zhǎng)至約4個(gè)月或更短，最優(yōu)選約1個(gè)月至約3個(gè)月。
作為長(zhǎng)期緩釋GnRH激動(dòng)劑或其鹽的微囊(此后，有時(shí)簡(jiǎn)稱為“長(zhǎng)期緩釋微囊”)，使用在5個(gè)月或更長(zhǎng)時(shí)期內(nèi)緩釋GnRH激動(dòng)劑或其鹽的微囊，優(yōu)選使用5個(gè)月或更長(zhǎng)至短于2年的時(shí)期內(nèi)緩釋GnRH激動(dòng)劑或其鹽的微囊，更優(yōu)選5個(gè)月或更長(zhǎng)至一年零六個(gè)月或更短的時(shí)期，更加優(yōu)選5個(gè)月或更長(zhǎng)至1年或更短的時(shí)期，更加優(yōu)選5個(gè)月或更長(zhǎng)至8個(gè)月或更短的時(shí)期，特別優(yōu)選5個(gè)月或更長(zhǎng)至6個(gè)月或更短的時(shí)期，最優(yōu)選約6個(gè)月的時(shí)期。
在本發(fā)明中，作為“短期緩釋GnRH激動(dòng)劑或其鹽的微囊”和“長(zhǎng)期緩釋GnRH激動(dòng)劑或其鹽的微囊”，具有各自緩釋期的前述微囊可通過(guò)組合它們而使用。例如，可組合使用(i)在約1個(gè)月或約3個(gè)月內(nèi)緩釋GnRH激動(dòng)劑或其鹽的微囊以及(ii)在6個(gè)月內(nèi)緩釋GnRH激動(dòng)劑或其鹽的微囊。具體地，可組合使用(i)描述于EP190833或EP442671中的緩釋微囊以及(ii)描述于WO03/002092中的緩釋微囊。
如本文所用，“組合使用”可以相繼給予包含短期緩釋微囊的制劑(此后，有時(shí)簡(jiǎn)稱為“短期緩釋制劑”)和包含長(zhǎng)期緩釋微囊的制劑(此后，有時(shí)簡(jiǎn)稱為“長(zhǎng)期緩釋制劑”)，或在混合該短期緩釋制劑和長(zhǎng)期緩釋制劑后同時(shí)給藥(此種情況包括在混合短期緩釋微囊和長(zhǎng)期緩釋微囊后配制成制劑)。還包括給予在給予短期緩釋制劑一段時(shí)間(如若干小時(shí)或若干天)后給予長(zhǎng)期緩釋制劑。但是，此處是指給藥以使得短期緩釋制劑和長(zhǎng)期緩釋制劑的緩釋期相重疊，在一種制劑的緩釋期之后給予另一種制劑不包括在本文的“組合使用”內(nèi)。例如，當(dāng)組合使用一個(gè)月的緩釋制劑和三個(gè)月的緩釋制劑時(shí)，不包括在給予一個(gè)月的緩釋制劑一個(gè)月后給予三個(gè)月的緩釋制劑的情形。
短期緩釋制劑與長(zhǎng)期緩釋制劑的組合比，由GnRH激動(dòng)劑的重量比表示，通常為1-40長(zhǎng)期緩釋制劑每短期緩釋制劑，優(yōu)選5-20長(zhǎng)期緩釋制劑每短期緩釋制劑，更優(yōu)選7-18(特別是9-16)長(zhǎng)期緩釋制劑每短期緩釋制劑，更加優(yōu)選7-15長(zhǎng)期緩釋制劑每短期緩釋制劑，更加優(yōu)選9-12長(zhǎng)期緩釋制劑每短期緩釋制劑(當(dāng)短期緩釋微囊和長(zhǎng)期緩釋微囊相混合并配制成制劑時(shí)，通過(guò)“短期緩釋微囊”替換“短期緩釋制劑”以及“長(zhǎng)期緩釋微囊”替換“長(zhǎng)期緩釋制劑”可確定組合比例)。
含有長(zhǎng)期緩釋微囊和短期緩釋微囊的組合的本發(fā)明的緩釋制劑可長(zhǎng)期緩釋GnRH激動(dòng)劑或其鹽。
長(zhǎng)期是指例如5個(gè)月或更長(zhǎng)，優(yōu)選5個(gè)月或更長(zhǎng)至短于2年，更優(yōu)選5個(gè)月或更長(zhǎng)至一年零六個(gè)月或更短，更加優(yōu)選5個(gè)月或更長(zhǎng)至1年或更短，更加優(yōu)選5個(gè)月或更長(zhǎng)至8個(gè)月或更短，特別優(yōu)選5個(gè)月或更長(zhǎng)至6個(gè)月或更短，最優(yōu)選約6個(gè)月。
GnRH激動(dòng)劑，優(yōu)選由式5-氧代-Pro-His-Trp-Ser-Tyr-DLeu-Leu-Arg-Pro-NH-C2H5代表的肽或其鹽(此后，有時(shí)簡(jiǎn)稱為“亮丙瑞林或其鹽”)，更優(yōu)選醋酸亮丙瑞林作為緩釋微囊給藥，更優(yōu)選作為含有緩釋微囊的可注射液。
該制劑可通過(guò)在藥學(xué)實(shí)踐所需的通常可接受的單位劑型中混合亮丙瑞林或其鹽更優(yōu)選醋酸亮丙瑞林與生理學(xué)上可接受的已知載體、香料、賦形劑、媒介物、抗菌劑、穩(wěn)定劑和粘合劑而制備。作為注射用的水溶液，例如使用包含生理鹽水、葡萄糖和其它助劑(如D-山梨醇、D-甘露醇、氯化鈉)的等滲溶液?？陕?lián)合使用適當(dāng)?shù)脑鋈軇┍热绱?如乙醇)、多元醇(如，丙二醇、聚乙二醇)以及非離子型表面活性劑(如聚山梨酯80(TM)、HCO-50)。作為油性溶液，例如使用芝麻油與豆油，并可聯(lián)合使用增溶劑比如苯甲酸芐酯和芐醇。所述制劑可以與例如緩沖劑(如磷酸緩沖劑、乙酸鈉緩沖劑)、緩和劑(如，苯扎氯銨、普魯卡因氯化物等)、穩(wěn)定劑(如人血清白蛋白、聚乙二醇等)、防腐劑(如芐醇、苯酚等)和抗氧化劑。所制備注射液通常裝入適當(dāng)密封的容器比如安瓿和小瓶中。
特別地，包含GnRH激動(dòng)劑(優(yōu)選亮丙瑞林或其鹽，更優(yōu)選醋酸亮丙瑞林)的緩釋制劑可根據(jù)本身已知的方法制備，例如根據(jù)EP190833、EP442671和WO03/002091中描述的短期緩釋制劑(或短期緩釋微囊)或根據(jù)WO03/002092中描述長(zhǎng)期緩釋制劑(或長(zhǎng)期緩釋微囊)的制備方法。
本發(fā)明的制劑可通過(guò)混合長(zhǎng)期緩釋GnRH激動(dòng)劑或其鹽的微囊與短期緩釋GnRH激動(dòng)劑或其鹽的微囊而制備。即，含有長(zhǎng)期緩釋GnRH激動(dòng)劑或其鹽的微囊和短期緩釋GnRH激動(dòng)劑或其鹽的微囊的組合的本發(fā)明緩釋制劑可如下制備分別制備長(zhǎng)期緩釋GnRH激動(dòng)劑或其鹽的微囊和短期緩釋GnRH激動(dòng)劑或其鹽的微囊，使其以適宜的混合比例適當(dāng)混合，配制混合物。可在后面描述的初步干燥步驟和二次干燥步驟之前或之后混合長(zhǎng)期緩釋微囊和短期緩釋微囊。
但是，當(dāng)以一定間隔分別給藥時(shí)，無(wú)需混合長(zhǎng)期緩釋GnRH激動(dòng)劑或其鹽的微囊與短期緩釋GnRH激動(dòng)劑或其鹽的微囊，且各微囊可在其使用之前被配制成給藥制劑。或者，分別含有短期和長(zhǎng)期緩釋微囊的兩種緩釋制劑可混合給藥。
下面將描述該緩釋微囊制備方法的一種實(shí)例。
首先，將GnRH激動(dòng)劑(優(yōu)選亮丙瑞林或其鹽，更優(yōu)選醋酸亮丙瑞林)以約20-70％(W/W)、優(yōu)選25-65％(W/W)、更優(yōu)選35-60％(W/W)溶解于水中，必要時(shí)，向其中溶解或懸浮藥物保持物質(zhì)比如明膠或堿性氨基酸，得到內(nèi)水相溶液。
向該內(nèi)水相溶液中可加入碳酸、乙酸、草酸、檸檬酸、磷酸、鹽酸、氫氧化鈉、精氨酸、賴氨酸或其鹽作為pH調(diào)節(jié)劑以保持GnRH激動(dòng)劑(優(yōu)選亮丙瑞林或其鹽，更優(yōu)選醋酸亮丙瑞林)的穩(wěn)定性或溶解性。此外，可加入白蛋白、明膠、檸檬酸、乙二胺四乙酸鈉、糊精、亞硫酸氫鈉以及多元醇化合物比如聚乙二醇作為GnRH激動(dòng)劑(優(yōu)選亮丙瑞林或其鹽，更優(yōu)選醋酸亮丙瑞林)的穩(wěn)定劑或通常用作防腐劑的對(duì)羥基苯甲酸酯(對(duì)羥基苯甲酸甲酯，對(duì)羥基苯甲酸丙酯等等)或苯甲醇，氯代丁醇與硫柳汞。
將由此得到的內(nèi)水相溶液加入包含高分子聚合物(聚合物)的溶液中(油相)，進(jìn)行乳化以形成W/O-型乳劑。作為乳化步驟，可使用已知的分散方法，例如間歇振動(dòng)法，使用混合器比如推進(jìn)器-型攪拌器與渦輪-型攪拌器的方法，膠體磨方法，均質(zhì)器方法以及超聲輻射方法。然后使得由此制備的W/O-型乳劑進(jìn)行微囊化步驟，其中可施用水中干燥法或相分離法。當(dāng)通過(guò)水中干燥法產(chǎn)生微囊時(shí)，將該W/O乳劑加入第三水相中以形成W/O/W型三相乳劑，然后蒸發(fā)油相中的溶劑以制備微囊。
可向外水相中加入乳化劑。例如，通?？墒褂媚苄纬煞€(wěn)定的O/W-型乳劑的任何乳化劑，例如包括陰離子表面活性劑(油酸鈉、硬脂酸鈉、十二烷基硫酸鈉等)，非離子型表面活性劑(聚氧化乙烯山梨聚糖脂肪酸酯[吐溫80、吐溫60、Atras Powder]，聚氧化乙烯蓖麻油衍生物[HCO-60，HCO-50，NikkoChemicals Co.，Ltd.])，以及聚乙烯吡咯烷酮，聚乙烯醇，羧甲基纖維素，卵磷脂和明膠。它們可以單獨(dú)使用，或若干種合用。乳化劑的使用濃度可適當(dāng)?shù)剡x自約0.01％-20％，更優(yōu)選約0.05-10％。
為了蒸發(fā)油相溶劑，采用通常使用的方法。在該方法中，通過(guò)在推進(jìn)器-型磁力攪拌器的攪拌下逐步抽空，或通過(guò)使用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀調(diào)節(jié)真空度而進(jìn)行蒸發(fā)。此時(shí)，當(dāng)高分子聚合物的固化進(jìn)行至一定程度時(shí)，為了溶劑解吸附更加完全的目的而逐步加熱W/O/W-型乳劑可縮短所需時(shí)間。
通過(guò)離心或過(guò)濾收集由此得到的微囊，粘附于微囊表面的游離GnRH激動(dòng)劑(優(yōu)選亮丙瑞林或其鹽，更優(yōu)選醋酸亮丙瑞林)、藥物保持物質(zhì)和乳化劑可經(jīng)蒸餾水洗滌若干次，再次分散于蒸餾水中并冷凍干燥。隨即，可加入防聚集劑比如糖。如有必要，微囊中的水與有機(jī)溶劑經(jīng)減壓加熱以更完全地解吸。
在冷凍干燥中，具體地，向這樣得到的微囊中加入相對(duì)于微囊重量約2-約60％的糖，隨后冷凍干燥。該步驟被稱為初干步驟。然后，在聚合物的玻璃化轉(zhuǎn)化溫度至較該玻璃化轉(zhuǎn)化溫度高約40℃的范圍內(nèi)適當(dāng)加熱該物質(zhì)。該步驟被稱為二次干燥步驟。
所用糖的實(shí)例包括D-甘露糖醇，海藻酸鈉，果糖，右旋糖酐，糊精，蔗糖，D-山梨糖醇，乳糖，葡萄糖，麥芽糖，淀粉以及海藻糖。這些糖可單獨(dú)使用或可通過(guò)混合適當(dāng)?shù)厥褂?。其中，D-甘露糖醇由于易于冷凍干燥且毒性很小而特別優(yōu)選。加入糖的方法包括但不限于，將微囊分散于糖水溶液井中，將糖簡(jiǎn)單地加入微囊后在混合器中一起混合，等等。所加的糖量相對(duì)于微囊重量?jī)?yōu)選約5-約40％。當(dāng)微囊與糖混合后，例如，在脫水干燥或噴霧干燥期間或之前使用糖然后混合，加入糖時(shí)需考慮其量以使得總量在上述范圍內(nèi)。
根據(jù)已知的方法可進(jìn)行冷凍干燥。
二次干燥步驟的加熱溫度優(yōu)選在聚合物的玻璃態(tài)轉(zhuǎn)化溫度至高于該玻璃態(tài)轉(zhuǎn)化溫度20℃范圍內(nèi)。選擇加熱溫度以使得產(chǎn)品溫度通常在約30-約60℃范圍內(nèi)。此處，玻璃態(tài)轉(zhuǎn)化溫度是指當(dāng)使用差示掃描量熱計(jì)(DSC)以10或20℃每分鐘升高溫度時(shí)所得的中點(diǎn)玻璃態(tài)轉(zhuǎn)化溫度。
并不具體限制二次干燥步驟的加熱時(shí)間，但通常為約1-約240小時(shí)，優(yōu)選約10-120小時(shí)，更優(yōu)選約20-約72小時(shí)。
加熱溫度、加熱時(shí)間、干燥程度以及加熱方法由顆粒直徑、穩(wěn)定性、玻璃態(tài)轉(zhuǎn)化溫度、熔點(diǎn)、熔融粘著(fusion)、以及微囊變形的難易、其中所含藥物的穩(wěn)定性、向其中加入的糖的種類和數(shù)量、微囊的分散性所決定。通過(guò)這樣的加熱，可更完全地除去微囊內(nèi)的水和有機(jī)溶劑。
當(dāng)通過(guò)相分離方法產(chǎn)生微囊時(shí)，于攪拌下向該W/O乳劑中逐步加入凝聚劑以沉淀并固化高分子聚合物。
該凝聚劑可以是聚合物-型、礦油-型或植物油-型化合物，其與用于高分子聚合物的溶劑相容且不溶解包囊聚合物。這樣的凝聚劑包括硅油，芝麻油，豆油，玉米油，棉子油，椰子油，亞麻子油，礦物油，正己烷和正庚烷?？苫旌鲜褂脙煞N或多種。
通過(guò)過(guò)濾收集由此得到的膠囊，使用庚烷重復(fù)洗滌以除去凝聚劑。然后，通過(guò)與水中干燥法相同的方法除去游離藥物并解吸附溶劑。為了避免洗滌過(guò)程中的顆粒聚集，可加入防聚集劑。
必要時(shí)輕微地磨上面獲得的微囊并使其過(guò)篩以除去過(guò)大的微囊部分。微囊的顆粒直徑約為0.5-1000μm，更優(yōu)選期望其顆粒直徑約為2-500μm。當(dāng)用作可注射懸浮液時(shí)，顆粒直徑的分散性和通針性應(yīng)得以滿足，且合意的顆粒直徑例如為約2-約100μm。
作為高分子聚合物，使用可生物降解的聚合物，例如聚合物、共聚物或其混合物，其由一種或多種α-羥基羧酸比如α-羥基單羧酸(如羥基乙酸、乳酸，等)、α-羥基二羧酸(如蘋果酸)和α-羥基三羧酸(如檸檬酸)合成且具有游離羧基；聚(α-氰基丙烯酸酯)；聚氨基酸(如聚(γ-芐基-L-谷氨酸)等)；馬來(lái)酸酐共聚物(如苯乙烯-馬來(lái)酸共聚物，等)。
單體的鍵合方式可以是無(wú)規(guī)、嵌段和接枝。當(dāng)α-羥基單羧酸、α-羥基二羧酸或α-羥基三羧酸在分子中具有光學(xué)活性中心時(shí)，可使用任何D-、L-和DL-異構(gòu)體。其中乳酸-羥基乙酸聚合物(此后，有時(shí)是指聚(丙交酯-共-乙交酯)，聚(乳酸-共-羥基乙酸)或乳酸-羥基乙酸共聚物，以及除非另有說(shuō)明，總稱為乳酸和羥基乙酸均聚物(聚合物)和共聚物。此外，乳酸均聚物有時(shí)被稱為乳酸聚合物、聚乳酸或聚交酯，乙二醇酸均聚物被稱為羥基乙酸聚合物、聚羥基乙酸或聚乙交酯)，和聚(α-氰基丙烯酸酯)是優(yōu)選的。進(jìn)一步優(yōu)選乳酸-羥基乙酸聚合物，且更加優(yōu)選在末端具有游離羧基的乳酸-羥基乙酸聚合物。
可生物降解的聚合物可以是鹽。例如包括與無(wú)機(jī)堿(如堿金屬比如鈉和鉀，堿土金屬比如鈣和鎂)和有機(jī)堿(如有機(jī)胺比如三乙胺，堿性氨基酸比如精氨酸)形成的鹽，以及與過(guò)渡金屬(如鋅、鐵、銅，等等)形成的鹽或絡(luò)合物鹽。
當(dāng)乳酸-羥基乙酸聚合物用作可生物降解的聚合物時(shí)，其組成比例(摩爾％)優(yōu)選約100/0-約40/60，更優(yōu)選約100/0-約50/50。零級(jí)釋放GnRH激動(dòng)劑2個(gè)月以上的緩釋微囊時(shí)，也優(yōu)選使用組成比為100/0的乳酸單聚物均聚物(乳酸聚合物)。
“乳酸-羥基乙酸聚合物”的最小重復(fù)單元之一——乳酸的光學(xué)異構(gòu)體的比例優(yōu)選D-異構(gòu)體/L-異構(gòu)體(摩爾/摩爾％)為約75/25-約25/75。對(duì)于該D-異構(gòu)體/L-異構(gòu)體(摩爾/摩爾％)，特別地，通常使用約60/40-約30/70的聚合物。
“乳酸-羥基乙酸聚合物”或“乳酸聚合物”的重均分子量通常為約3,000-約100,000，優(yōu)選約3,000-約60,000，更優(yōu)選約3,000-約50,000。
在本發(fā)明中，可合并例如使用重均分子量為8,000-12,000的乳酸-羥基乙酸聚合物(75/25 (mole％))或重均分子量為13,000-18,000的乳酸聚合物作為短期緩釋微囊基質(zhì)的制劑和使用重均分子量為18,000-30,000的乳酸聚合物作為長(zhǎng)期緩釋微囊基質(zhì)的制劑。
通常優(yōu)選分散性(重均分子量/數(shù)均分子量)為約1.2-約4.0，特別優(yōu)選約1.5-約3.5。
“乳酸-羥基乙酸聚合物”或“乳酸聚合物”的游離羧基的量通常優(yōu)選約20-約1000μmol(微摩)，特別優(yōu)選約40-約1000μmol(微摩爾)每聚合物的單位重量(克)。
上述重量平均分子量、數(shù)均分子量與分散性是依據(jù)聚苯乙烯通過(guò)凝膠滲透色譜法(GPC)使用分子量已知的聚苯乙烯作為標(biāo)準(zhǔn)品所測(cè)量的分子量和所計(jì)算的分散性。標(biāo)準(zhǔn)品例如包括下面的組合(1)具有已知重均分子量約500、約1,000、約3,000、約5,000、約10,000、約20,000、約50,000以及約100,000的聚苯乙烯(此后，標(biāo)準(zhǔn)品A)(2)具有已知重均分子量約500、約1,000、約2,500、約5,000、約10,000、約20,000、約50,000、約100,000、約200,000以及約400,000的10種聚苯乙烯(此后，標(biāo)準(zhǔn)品B)(3)具有已知重均分子量98900、37200、17100、9490、5870、2500、1051和495的8種聚苯乙烯(此后，標(biāo)準(zhǔn)品C)。
使用GPC儀(由Tosoh Corporation制造的HLC-8120GPC；檢測(cè)器為差示折光計(jì))和GPC柱(由Tosoh Corporation制造，其中TSK凝膠G4000HHR，TSK凝膠G3000HHR，TSK凝膠G2000HHR和TSK凝膠G1000HHR以大排阻限的順序從樣品進(jìn)口通連)進(jìn)行測(cè)量，并使用四氫呋喃作為流動(dòng)相。流速為1.0mL/min。
上面游離羧基的量是指通過(guò)標(biāo)記法所得的量(此后，被稱為“標(biāo)記法的羧基量”)。具體地，聚乳酸的情形如下將Wmg的聚乳酸溶解于2mL的5N鹽酸/乙腈(v/v＝4/96)、2mL的0.01M鄰硝基苯腈鹽酸鹽(ONPH)溶液(5N鹽酸/乙腈/乙醇＝1.02/35/15)的混合溶液，加入2mL的0.15M1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)-碳二亞胺鹽酸鹽溶液(吡啶/乙醇＝4v/96v)并于40℃反應(yīng)30分鐘，蒸除溶劑。殘留物用水洗滌(4×)，溶解于2mL乙腈中，加入1mL的0.5mol/L乙醇?xì)溲趸浫芤翰⒂?0℃反應(yīng)30分鐘。反應(yīng)溶液經(jīng)1.5N氫氧化鈉水溶液稀釋至YmL，使用1.5N氫氧化鈉水溶液作為對(duì)照測(cè)量544nm的吸收度A(/cm)。另一方面，當(dāng)使用DL-乳酸水溶液作為標(biāo)準(zhǔn)品時(shí)，通過(guò)堿式滴定獲得游離羧基的量Cmol/L，在ONPH標(biāo)記法中DL-乳酸酰肼的544nm吸收度為B(/cm)，通過(guò)下面的等式可獲得每單位質(zhì)量(克)聚合物的游離羧基的摩爾量[COOH](mol/g)＝(AYC)/(WB)或者，盡管通過(guò)在甲苯-丙酮-甲醇混合溶劑中溶解可生物降解的聚合物，并使用氫氧化鉀醇溶液以酚酞作為指示劑滴定該溶液中的羧基，也可獲得“羧基量”(此后，由該方法獲得的值被稱為“堿式滴定法的羧基量”)，但是，在滴定過(guò)程中，該反應(yīng)與聚酯主鏈的水解相競(jìng)爭(zhēng)，結(jié)果，滴定終點(diǎn)可能變得模糊，因此，通過(guò)標(biāo)記法進(jìn)行測(cè)定是更加合意的。
“乳酸-羥基乙酸聚合物”或“乳酸聚合物”的制備例如可通過(guò)乳酸和羥基乙酸或由乙酸不使用催化劑進(jìn)行脫水聚縮合(JP-A-61-28251)或通過(guò)環(huán)狀二酯化合物比如丙交酯和乙交酯或丙交酯使用催化劑進(jìn)行開(kāi)環(huán)聚合(Encyclopedic Handbook of Biomaterials and Bioengineering Part AMaterials，Volume 2，Marcel Dekker，Inc.，1995)。通過(guò)上述已知的開(kāi)環(huán)聚合法獲得的聚合物在所得聚合物的末端不必含有游離羧基，但經(jīng)過(guò)EP-A-0839525中描述的水解反應(yīng)，其可被修飾為每單位質(zhì)量具有相當(dāng)量羧基的聚合物，也可使用該聚合物。
上述“在末端含有游離羧基的乳酸-羥基乙酸聚合物” 或“在末端含有游離羧基的乳酸聚合物”可通過(guò)已知的方法或類似的方法制備(例如，參見(jiàn)JP-A-61-28521、JP-A-10-182496、JP-A-2000-234016中不需催化劑的脫水聚縮合法)。
更具體地，作為長(zhǎng)期緩釋微囊，使用例如WO 03/002092中描述的微囊(A)，包含(i)GnRH激動(dòng)劑或其鹽以及(ii)重均分子量約15000-約50000的乳酸聚合物，其中重均分子量不超過(guò)5000的聚合物含量不超過(guò)約5％。
在微囊(A)中，相對(duì)整個(gè)制劑，GnRH激動(dòng)劑或其鹽例如約為0.001-約50％(w/w)，優(yōu)選約0.02-約40％(w/w)，進(jìn)一步優(yōu)選約0.1-約30％(w/w)，更優(yōu)選約0.1-約24％(w/w)，特別優(yōu)選約3-約24％(w/w)，最優(yōu)選約14-約24％(w/w)。
在優(yōu)選的乳酸聚合物中，分子量不超過(guò)5000的聚合物的含量不超過(guò)5重量％且分子量不超過(guò)3000的聚合物的含量不超過(guò)1.5重量％，在更優(yōu)選的聚合物中，分子量不超過(guò)5000的聚合物的含量不超過(guò)5重量％、分子量不超過(guò)3000的聚合物的含量不超過(guò)1.5重量％且分子量不超過(guò)1000的聚合物的含量不超過(guò)0.1重量％。
乳酸聚合物的重均分子量?jī)?yōu)選是15000-40000，更優(yōu)選約15000-約30000，更加優(yōu)選約17000-約30000。
此時(shí)，重均分子量可使用例如所述的標(biāo)準(zhǔn)品B測(cè)定。
所用的短期緩釋微囊例如是(1)微囊(B)包含(i)GnRH激動(dòng)劑或其鹽(ii)其中重均分子量(Mw)為約8,000-約11,500、重均分子量(Mw)與數(shù)均分子量(Mn)的比例大于1.9、且乳酸與羥基乙酸的組成摩爾比為99.9/0.1-60/40的乳酸-羥基乙酸聚合物，且不包含藥物保持物質(zhì)，或者(2)如EP442671中所述的微囊(C)，其零級(jí)釋放GnRH激動(dòng)劑2個(gè)月以上，通過(guò)微囊化W/O乳劑而制備，該乳劑由包含約20-70重量％的GnRH激動(dòng)劑或其鹽的內(nèi)水相溶液和包含作為釋放控制物質(zhì)的共聚物或均聚物的油相溶液制得，聚合物中乳酸/羥基乙酸的組成比為80/20-100/0，重均分子量為約7,000-約30,000。
微囊(B)是新型微囊，制備其時(shí)優(yōu)選混合(i)包含GnRH激動(dòng)劑或其鹽且不合藥物保持物質(zhì)的溶液和(ii)調(diào)節(jié)于約25-約35℃、包含乳酸-羥基乙酸聚合物或其鹽的溶液，其中重均分子量(Mw)為約8,000-約11,500、重均分子量(Mw)與數(shù)均分子量(Mn)的比例大于1.9、且乳酸與羥基乙酸的組成摩爾比為99.9/0.1-60/40，以在約25-約35℃生成W/O-型乳劑，冷卻該乳劑至約15-約20℃，在水相中分散該W/O-型乳劑以生成W/O/W-型乳劑，并使得該W/O/W-型乳劑進(jìn)行水中干燥(in water drying)。
用于微囊(B)的乳酸-羥基乙酸聚合物或其鹽的重均分子量(Mw)為約8,000-約11,500，乳酸-羥基乙酸聚合物的重均分子量(Mw)與乳酸-羥基乙酸聚合物的數(shù)均分子量(Mn)的比值超過(guò)1.9，乳酸與羥基乙酸的相對(duì)摩爾比為99.9/0.1-60/40。
乳酸-羥基乙酸聚合物的鹽的實(shí)例包括與無(wú)機(jī)堿(如堿金屬比如鈉和鉀，堿土金屬比如鈣和鎂)或有機(jī)堿(如，有機(jī)胺比如三乙胺，堿性氨基酸比如精氨酸)形成的鹽，以及與過(guò)渡金屬(如鋅、鐵、銅等)形成的鹽或絡(luò)合物鹽。
乳酸-羥基乙酸聚合物的重均分子量(Mw)與乳酸-羥基乙酸聚合物的數(shù)均分子量(Mn)的比值(Mw/Mn)優(yōu)選為約1.95-約4.0，約2.0-約3.5，更加優(yōu)選約2.3-約3.1。
乳酸-羥基乙酸聚合物的組成比(mole％)優(yōu)選為99/1-60/40，更優(yōu)選90/10-60/40，進(jìn)一步優(yōu)選80/20-60/40，特別優(yōu)選80/20-70/30，以及尤其優(yōu)選75/25。
乳酸-羥基乙酸聚合物的重均分子量通常為約8,000-約11,500，優(yōu)選約9,000-約11,500，進(jìn)一步優(yōu)選約9,500-約11,000。
如本文所用，重均分子量、數(shù)均分子量和分散性是指依據(jù)聚苯乙烯通過(guò)凝膠滲透色譜法(GPC)使用幾種特定分子量的聚苯乙烯作為標(biāo)準(zhǔn)品所測(cè)量的分子量(重均和數(shù)均)和所計(jì)算的分散性?？蛇m當(dāng)?shù)剡x擇用于測(cè)量的柱和流動(dòng)相。將乳酸-羥基乙酸共聚物溶于二氯甲烷中，加入水并分配。通過(guò)使用氫氧化鉀乙醇溶液經(jīng)自動(dòng)滴定儀滴定二氯甲烷層并計(jì)算末端羧酸的量可計(jì)算數(shù)均分子量。此后，其被表示為通過(guò)末端基團(tuán)定量的數(shù)均分子量。通過(guò)末端基團(tuán)定量的數(shù)均分子量是絕對(duì)值，而通過(guò)GPC測(cè)量的數(shù)均分子量是相對(duì)值，取決于測(cè)定或分析條件(如，流動(dòng)相的類型、柱的類型、標(biāo)準(zhǔn)品、限幅寬度的選擇、基線的選擇等)而改變，因此，難以基本數(shù)字化。但是，例如在由乳酸和羥基乙酸通過(guò)脫氫聚縮合法而不使用催化劑所合成的且在末端具有游離羧基的聚合物中，通過(guò)GPC測(cè)量的數(shù)均分子量與通過(guò)末端基團(tuán)定量的數(shù)均分子量大體一致。在該乳酸-羥基乙酸聚合物的情形中，大體一致是指通過(guò)末端基團(tuán)定量的數(shù)均分子量大約是通過(guò)GPC測(cè)量的數(shù)均分子量的約0.2-約1.5-倍，優(yōu)選約0.3-約1.2-倍。
參考例5的GPC法使用了8種聚苯乙烯標(biāo)準(zhǔn)品(標(biāo)準(zhǔn)品C)，其重均分子量(Mw)通過(guò)GPC法評(píng)價(jià)為98900、37200、17100、9490、5870、2500、1051和495。
例如使用參考例5的GPC法可測(cè)量用于微囊(B)中的所述乳酸-羥基乙酸聚合物或其鹽的重均分子量和數(shù)均分子量。
更具體地，優(yōu)選使用下面的乳酸-羥基乙酸聚合物(1)乳酸-羥基乙酸共聚物(乳酸/羥基乙酸＝75/25，Mw＝約10300，Mn＝約4000，Mw/Mn比＝2.6(由參考例5的GPC法(舊法)測(cè)定值))(2)乳酸-羥基乙酸共聚物(乳酸/羥基乙酸＝75/25，Mw＝約10400，Mn＝約4100，Mw/Mn比＝2.5(由參考例5的GPC法(舊法)測(cè)定值))盡管乳酸-羥基乙酸聚合物的降解和/或消除速率取決于聚合物的組成或分子量而具有很大不同。但通常，羥基乙酸部分越低，降解和/或消除越慢，因此，通過(guò)減少羥基乙酸部分或增加分子量可延長(zhǎng)釋放期。反之，通過(guò)增加羥基乙酸部分或降低分子量可縮短釋放期。為了獲得長(zhǎng)期(如，1-12個(gè)月，優(yōu)選1-6個(gè)月)型緩釋制劑，優(yōu)選具有前述范圍的組成比和重均分子量的乳酸-羥基乙酸聚合物。當(dāng)選擇較具有前述范圍的組成比和重均分子量的乳酸-羥基乙酸聚合物更快降解的乳酸-羥基乙酸聚合物時(shí)，則難以控制早期釋放。反之，當(dāng)選擇較具有前述范圍的組成比和重均分子量的乳酸-羥基乙酸聚合物更慢降解的乳酸-羥基乙酸聚合物時(shí)，易于導(dǎo)致在期限內(nèi)未釋放有效量藥物。
乳酸-羥基乙酸聚合物的制備例如可通過(guò)乳酸和羥基乙酸非催化脫水聚縮合(JP-A-61-28521)或由環(huán)狀形式比如丙交酯和乙交酯經(jīng)催化劑開(kāi)環(huán)聚合(Encyclopedic Handbook of Biomaterials and Bioengineering Part AMaterials，Volume 2，Marcel Dekker，Inc.，1995)。
盡管通過(guò)開(kāi)環(huán)聚合所合成的聚合物不含羧基，但是也可使用末端經(jīng)化學(xué)處理而轉(zhuǎn)化為游離羧基的聚合物(J.Controlled-Release，vol.41，p.249-257，1996)。
末端具有游離羧基的乳酸-羥基乙酸聚合物毫無(wú)疑問(wèn)可通過(guò)已知方法制備(例如，無(wú)催化劑的脫水聚縮合方法，參見(jiàn)JP-A-61-28521)，此外，可通過(guò)已知方法(例如參見(jiàn)WO94/15587)制備游離羧基不限于在末端處的聚合物。
作為在開(kāi)環(huán)聚合后經(jīng)化學(xué)處理已將末端轉(zhuǎn)化為游離羧基的乳酸-羥基乙酸聚合物，可使用市售的例如來(lái)自Boehringer IngelheimKG的聚合物。
此外，根據(jù)已知方法在酸或堿存在下水解通過(guò)開(kāi)環(huán)聚合而制備的乳酸-羥基乙酸聚合物。此外，水解是在水存在下進(jìn)行的。
此處，酸包括無(wú)機(jī)酸比如鹽酸、硝酸、硫酸與磷酸，和有機(jī)酸比如乳酸、乙酸、酒石酸、檸檬酸與琥珀酸。堿包括堿金屬氫氧化物比如氫氧化鈉與氫氧化鉀，和堿金屬碳酸鹽比如碳酸鈉與碳酸鉀。當(dāng)在堿存在下進(jìn)行水解時(shí)，由緩釋微囊釋放GnRH或其鹽受到殘留堿量的影響。因此，優(yōu)選在酸存在下進(jìn)行水解。
水解通常在對(duì)反應(yīng)無(wú)不利影響的溶劑中進(jìn)行。這樣的溶劑包括醇比如甲醇、乙醇與丙醇，醚比如四氫呋喃、二烷、乙醚和二異丙醚、水及其混合溶劑。可供選擇地，可使用過(guò)量的酸或堿作為溶劑。
水解的溫度例如是約0-約100℃，優(yōu)選約10-約100℃。
由于水解所需的時(shí)間取決于通過(guò)開(kāi)環(huán)聚合所制備的聚乳酸的重均分子量、酸或堿的種類、溶劑的種類以及溫度而不同，該時(shí)間可通過(guò)收集水解過(guò)程的部分乳酸-羥基乙酸聚合物并測(cè)量所收集的乳酸-羥基乙酸聚合物的重均分子量而確定。并不特別限制水解所需的時(shí)間，但例如是約1小時(shí)-約10天，優(yōu)選約10小時(shí)-約5天。
通過(guò)開(kāi)環(huán)聚合所制備的乳酸-羥基乙酸聚合物僅可制備具有較大初始釋藥量的緩釋微囊，但經(jīng)水解的乳酸-羥基乙酸聚合物，即，用于本發(fā)明的乳酸-羥基乙酸聚合物可制備具有較小初始釋藥量的緩釋微囊。
優(yōu)選該經(jīng)水解的乳酸-羥基乙酸聚合物經(jīng)進(jìn)一步的純化步驟。進(jìn)行純化步驟時(shí)，溶解經(jīng)水解的乳酸-羥基乙酸聚合物，將所得溶液傾入水或水與水溶性有機(jī)溶劑的混合溶劑中并分離沉淀的乳酸-羥基乙酸聚合物。
有機(jī)溶劑例如包括鹵代烴(例如二氯甲烷、氯仿、氯乙烷、二氯乙烷、三氯乙烷、四氯化碳等)、酮(例如丙酮等)、醚(例如四氫呋喃、乙醚、異丙醚等)、酯(例如乙酸乙酯、醋酸丁酯等)，以及芳香族烴(例如苯、甲苯、二甲苯等)。所用的有機(jī)溶劑的量例如為相對(duì)于經(jīng)水解的聚乳酸的約3-約20-倍(w/v)。
該水溶性有機(jī)溶劑例如包括丙酮、甲醇、乙醇、四氫呋喃和乙腈。并不特別限制所用的水或水與水溶性有機(jī)溶劑的混合溶劑的量，但其通常相對(duì)于經(jīng)水解的聚乳酸大大過(guò)量。
純化步驟的溫度通常為約0-約90℃，優(yōu)選約20-約70℃。
通過(guò)上述的純化步驟，可除去水溶性低分子化合物(例如重均分子量為約1,000或更低的化合物)。當(dāng)使用經(jīng)由該純化步驟所得的乳酸-羥基乙酸聚合物時(shí)，可提高GnRH激動(dòng)劑或其鹽在制備緩釋微囊時(shí)的攝取速率(俘獲速率)，并可制備初始釋藥量降低的緩釋制劑。
此外，使通過(guò)開(kāi)環(huán)聚合制備的乳酸-羥基乙酸聚合物經(jīng)歷水解和純化步驟，可制備基本上不含開(kāi)環(huán)聚合時(shí)所用的有害催化劑(如鋅化合物比如氧化鋅和錫化合物比如辛酸亞錫)的乳酸-羥基乙酸聚合物。
藥物保持物質(zhì)的特性在于其是水溶性的且難以溶于油相中有機(jī)溶劑中，當(dāng)溶于水中時(shí)粘度非常高從而形成半固體，或由于某些外因比如溫度、pH、金屬離子(如Cu2+，Al3+，Zn2+等)、有機(jī)酸(如酒石酸、檸檬酸、鞣酸等)或其鹽以及化學(xué)縮合劑(例如戊二醛，乙醛等)粘度顯著增加從而變?yōu)榘牍腆w或固體基質(zhì)。
作為藥物保持物質(zhì)的實(shí)例，使用天然或合成的膠或高分子化合物。
天然膠包括金合歡膠、阿拉伯樹(shù)膠、愛(ài)爾蘭蘚、刺梧桐樹(shù)膠、黃蓍膠、愈瘡樹(shù)膠、黃原膠和槐豆膠。天然高分子化合物包括蛋白比如酪蛋白、明膠、膠原、白蛋白(如人血清白蛋白)、球蛋白和纖維蛋白，以及碳水化合物比如纖維素、糊精、果膠、淀粉、瓊脂和甘露聚糖。這些可以是其原型或可以是部分經(jīng)化學(xué)修飾的合成樹(shù)膠，例如經(jīng)酯化或醚化(如，甲基纖維素、乙基纖維素、羧甲基纖維素、明膠琥珀酸酯等)或經(jīng)水解(如藻酸鈉、果膠酸鈉(pectinate))的前述天然膠或其鹽。
合成的高分子化合物例如包括聚乙烯化合物(如聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯醇、聚乙烯甲基醚、聚乙烯醚等)、聚羧酸(如聚丙烯酸、聚甲基丙烯酸、Carbopol(Goodrich)等)、聚亞乙基化合物(例如聚乙二醇等)、多糖(如聚蔗糖、聚葡聚糖、聚乳糖等)及其鹽。
此外，還包括可通過(guò)前述外因進(jìn)行縮合或交聯(lián)而形成高分子化合物的物質(zhì)。
在這些化合物之中，尤其是明膠、白蛋白、果膠或者瓊脂，特別是明膠。
微囊(B)可包含微粒(即，微球)，其包含GnRH激動(dòng)劑或其鹽和乳酸-羥基乙酸聚合物或其鹽。微粒的實(shí)例包括在一個(gè)顆粒內(nèi)包含一個(gè)GnRH激動(dòng)劑或其鹽的核心的微囊，在一個(gè)顆粒內(nèi)的包含許多GnRH激動(dòng)劑或其鹽的核心的多核微囊，以及其中的分子樣GnRH激動(dòng)劑或其鹽溶解于或分散于原乳酸-羥基乙酸聚合物作為固體溶液的微粒。
GnRH激動(dòng)劑或其鹽在微囊(B)中的含量取決于GnRH激動(dòng)劑或其鹽的種類、所需的藥效和效果的時(shí)間長(zhǎng)短而不同，例如為約0.1-約50％(w/w)、優(yōu)選約0.1-約30％(w/w)、優(yōu)選約5-約24％(w/w)。
將在下面詳細(xì)描述微囊(B)的制備方法。
制備微囊(B)時(shí)，混合(i)包含GnRH激動(dòng)劑或其鹽且不含藥物保持物質(zhì)的溶液和(ii)調(diào)節(jié)于約25-約35℃、包含乳酸-羥基乙酸聚合物或其鹽(此后，簡(jiǎn)稱為可生物降解的聚合物)的溶液，其中重均分子量(Mw)為約8,000-約11,500、重均分子量(Mw)與數(shù)均分子量(Mn)的比例大于1.9、且乳酸與羥基乙酸的組成摩爾比為99.9/0.1-60/40，以在約25-約35℃生成W/O-型乳劑(初步乳化)，冷卻該乳劑至約15-約20℃，在水相中分散該W/O-型乳劑以生成W/O/W-型乳劑(二次乳化)，并使得該W/O/W-型乳劑水中干燥。
如下可制備W/O-型乳劑，其包含包含GnRH激動(dòng)劑或其鹽且不含藥物保持物質(zhì)的溶液作為內(nèi)水相，和調(diào)節(jié)于約25-約35℃、包含可生物降解的聚合物的溶液作為油相。
首先將GnRH激動(dòng)劑或其鹽溶解于水中(優(yōu)選注射用蒸餾水)達(dá)到約0.001-約90％(w/w)、優(yōu)選約0.01-約80％(w/w)、更優(yōu)選約1-約70％(w/w)、特別優(yōu)選約50％的濃度，從而形成內(nèi)水相。
向該內(nèi)水相中可加入碳酸，乙酸，草酸，檸檬酸，磷酸，鹽酸，氫氧化鈉，精氨酸，賴氨酸及其鹽作為pH調(diào)節(jié)劑以維持GnRH激動(dòng)劑或其鹽的穩(wěn)定性和可溶性。此外，可加入白蛋白，明膠，海藻糖，檸檬酸，乙二胺鈉四乙酸鈉，糊精，環(huán)糊精(α-，β-，γ-)及其衍生物(例如麥芽糖基(maltosyl)β-環(huán)糊精，β-環(huán)糊精磺丁基(sulfobutyl)醚，等)，亞硫酸氫鈉，多元醇化合物比如聚乙二醇，聚氧化乙烯山梨聚糖脂肪酸酯[例如吐溫80，吐溫60(Kao Corporation，Japan)]，表面活性劑比如聚氧化乙烯蓖麻油衍生物[例如HCO-60，HCO-70(Nikko ChemicalsCo.Ltd.)]，對(duì)羥基苯甲酸酯(例如對(duì)羥基苯甲酸甲酯，對(duì)羥基苯甲酸丙酯等)，苯甲醇，氯代丁醇和硫柳汞作為GnRH激動(dòng)劑或其鹽的穩(wěn)定劑。
混合由此所得的內(nèi)水相和調(diào)節(jié)至約25-約35℃且包含可生物降解聚合物的溶液(油相)，并使所得混合物經(jīng)乳化步驟制備成W/O-型乳劑。
作為包含可生物降解的聚合物的溶液(油相)，使用其中在有機(jī)溶劑中溶解有可生物降解的聚合物的溶液。有機(jī)溶劑的沸點(diǎn)可以約為120℃或更低，是疏水的且溶解可生物降解的聚合物。所述溶劑包括鹵代烴(例如二氯甲烷(二氯甲烷)，氯仿，氯乙烷，二氯乙烷，三氯乙烷，四氯化碳等)，脂肪酸酯(例如乙酸乙酯，醋酸丁酯等)，醚(例如乙醚，異丙醚等)和芳香族烴(例如苯，甲苯，二甲苯等)?？晒┻x擇地，兩種或多種這些有機(jī)溶劑可通過(guò)適當(dāng)比例地混合而使用。有機(jī)溶劑優(yōu)選是二氯甲烷。
在有機(jī)溶劑中可生物降解的聚合物的濃度取決于可生物降解的聚合物的種類和分子量以及有機(jī)溶劑的種類而不同，且通常為約0.01-約90％(w/w)、優(yōu)選約0.1-約80％(w/w)、更優(yōu)選約1-約70％(w/w)、特別優(yōu)選約35％。
為了改變與內(nèi)水相的相容性、將有機(jī)溶劑分配入外水相以及揮發(fā)有機(jī)溶劑，可向油相中加入部分親水有機(jī)溶劑比如乙醇、乙腈、丙酮和四氫呋喃。此外，為了溶解或穩(wěn)定內(nèi)部的GnRH激動(dòng)劑或其鹽，可加入表面活性劑比如脂肪酸糖酯。
通常在用過(guò)濾器過(guò)濾除去細(xì)菌和灰塵后使用由此獲得的油相。此外，取決于可生物降解聚合物的穩(wěn)定性，包含可生物降解的溶液可室溫或冷凍儲(chǔ)存于密封容器中。
包含GnRH激動(dòng)劑或其鹽且不含藥物保持物質(zhì)的溶液與可生物降解的聚合物溶液的混合比例為前者為1重量份時(shí)，后者為約0.1-約1000重量份，優(yōu)選約1-約100重量份，更優(yōu)選約1-約20重量份，特別優(yōu)選約10重量份。
由于取決于GnRH激動(dòng)劑或其鹽的種類、所需的藥效和起效的時(shí)間長(zhǎng)短而有所不同，可進(jìn)行混合以使得GnRH激動(dòng)劑或其鹽相對(duì)于可生物降解的聚合物的比例為約0.01-約50％(w/w)，優(yōu)選約0.5-約40％(w/w)，更優(yōu)選約0.1-約30％(w/w)，特別優(yōu)選約10％。
根據(jù)已知的分散法進(jìn)行乳化步驟，例如間歇振動(dòng)法，使用攪拌器比如推進(jìn)型攪拌器和渦輪型攪拌器的方法，膠體研磨法，均質(zhì)器法以及超聲輻射方法。
包含GnRH激動(dòng)劑或其鹽且不含藥物保持物質(zhì)的溶液與可生物降解的聚合物溶液在約25-約35℃、優(yōu)選約27-約33℃下混合。通過(guò)此溫度調(diào)節(jié)，可制備具有較好球形性質(zhì)和/或通針性的緩釋微囊。
描述乳化步驟的優(yōu)選方面。例如，首先，將包含可生物降解聚合物溶液加入含有了包含GnRH激動(dòng)劑或其鹽且不含藥物保持物質(zhì)的溶液的容器中，然后振動(dòng)或擺動(dòng)該容器，由此進(jìn)行粗乳化。在粗乳化中，優(yōu)選將包含GnRH激動(dòng)劑或其鹽且不含藥物保持物質(zhì)的溶液與可生物降解的聚合物溶液的混合物的溫度調(diào)節(jié)至約25-約35℃，優(yōu)選約27-33℃。
因?yàn)榇秩榛哪康耐ǔＪ欠奖阆乱徊降娜榛襟E(精乳化)，攪拌時(shí)間以及振動(dòng)和擺動(dòng)數(shù)目沒(méi)有特別限定。由此，當(dāng)可均勻地進(jìn)行精乳化時(shí)，可省略粗乳化步驟。
然后，對(duì)于粗乳化后的混合物使用推進(jìn)型攪拌器進(jìn)行乳化步驟(精乳化)。在精乳化中，優(yōu)選將包含GnRH激動(dòng)劑或其鹽且不含藥物保持物質(zhì)的溶液與可生物降解的聚合物溶液的混合物的溫度調(diào)節(jié)至約25-約35℃，優(yōu)選約27-33℃。通過(guò)此溫度調(diào)節(jié)，可制備具有較好球形性質(zhì)和/或通針性的緩釋微囊。取決于GnRH激動(dòng)劑或其鹽以及可生物降解的聚合物的性質(zhì)可選擇精乳化的乳化時(shí)間，通常，乳化進(jìn)行約0.1-約60分鐘。
相對(duì)于內(nèi)水相的體積，所混合的油相體積為約1-約1000-倍，優(yōu)選約2-約100-倍，更優(yōu)選約3-約10-倍。
所得W/O乳劑的粘度范圍在約12-約25℃下通常為約10-約10,000cp，優(yōu)選約100-約5,000cp特別優(yōu)選約500-約2,000cp。
優(yōu)選將通過(guò)精乳化所得的W/O-型乳劑在水浴等中于約0-約18℃下冷卻，并將該W/O-型乳劑的溫度調(diào)節(jié)至約0-約30℃，優(yōu)選約10-約25℃，更優(yōu)選約15-約20℃。
然后，將所得的W/O-型乳劑分散于水相(此后，簡(jiǎn)稱為外水相)中以生成W/O/W-型乳劑，且使該W/O/W-型進(jìn)行水中干燥以生成緩釋微囊。
可向外水相中加入乳化劑。作為乳化劑，可使用任何乳化劑，只要其通常形成穩(wěn)定的O/W乳劑，例如包括陰離子表面活性劑(例如油酸鈉、硬脂酸鈉、十二烷基硫酸鈉等)，非離子型表面活性劑(例如吐溫80、吐溫60、HCO-60、HCO-50等)，聚乙烯醇，聚乙烯吡咯烷酮和明膠。可以以適當(dāng)比例混合使用兩種或多種這些乳化劑。在本發(fā)明的方法中，優(yōu)選使用聚乙烯醇作為乳化劑。
外水相中乳化劑的濃度例如為約0.001-約20％，優(yōu)選約0.01-約1 0％，更優(yōu)選約0.05-約5％，特別優(yōu)選約0.1％。
可向外水相中加入滲透壓調(diào)節(jié)劑。作為滲透壓調(diào)節(jié)劑，可使用當(dāng)置于水溶液中時(shí)顯示滲透壓的任何試劑。
滲透壓調(diào)節(jié)劑的實(shí)例包括多元醇、一元醇、單糖、二糖、寡糖、氨基酸或其衍生物以及氯化鈉。
作為多元醇，例如使用三元醇比如甘油，五元醇比如阿糖醇，木糖醇，核糖醇，以及六元醇比如甘露糖醇，山梨糖醇和衛(wèi)矛醇。尤其優(yōu)選六元醇特別適當(dāng)?shù)氖歉事短谴肌?br> 一元醇例如包括甲醇、乙醇與異丙醇，其中，優(yōu)選乙醇。
作為單糖，例如使用五碳糖比如阿拉伯糖、木糖、核糖與2-脫氧核糖、以及六碳糖比如葡萄糖、果糖、半乳糖、甘露糖、山梨糖、鼠李糖、巖藻糖，其中，優(yōu)選丁糖。
作為寡糖，例如使用三糖比如麥芽三糖與棉子糖以及四糖比如水蘇糖，其中，優(yōu)選三糖。
作為單糖、二糖與寡糖的衍生物，例如使用葡糖胺、軟骨糖胺、葡糖醛酸和半乳糖醛酸。
作為氨基酸，可使用任何L-型異構(gòu)體的氨基酸，例如包括甘氨酸、白氨酸與精氨酸。其中，優(yōu)選L-精氨酸。
這些滲透壓調(diào)節(jié)劑可以單獨(dú)使用或可以混合使用。
這些滲透壓調(diào)節(jié)劑的使用濃度應(yīng)使得外水相的滲透壓成為生理鹽水滲透壓的約1/50-約5-倍，優(yōu)選約1/25-約3-倍，更優(yōu)選約1/12-約2-倍。
具體地，當(dāng)滲透壓調(diào)節(jié)劑是非離子性物質(zhì)時(shí)，該滲透壓調(diào)節(jié)劑在外水相中的濃度為約0.01-約60％(w/w)，優(yōu)選約0.01-約40％(w/w)，更優(yōu)選約0.05-約30％(w/w)，特別優(yōu)選約0.5-約1.5％(w/w)。當(dāng)滲透壓調(diào)節(jié)劑是離子性物質(zhì)時(shí)，使用通過(guò)上述濃度除以整體離子價(jià)而得的濃度。所加入的滲透壓調(diào)節(jié)劑的濃度不一定不得高于溶解度，部分調(diào)節(jié)劑可以為分散狀態(tài)。
通過(guò)向外水相中加入滲透壓調(diào)節(jié)劑，可改善所得微囊的分散性。并不特別限定其程度，但例如，優(yōu)選約400-700mg的微囊可在不到2分鐘內(nèi)分散于1.5mL的注射用分散媒介中。
根據(jù)已知方法可除去有機(jī)溶劑。這樣的方法例如包括使用推進(jìn)型攪拌器或磁力攪拌器攪拌的同時(shí)在常壓或逐步減壓下除去溶劑的方法，以及使用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀在調(diào)節(jié)真空度和溫度的同時(shí)除去溶劑的方法。
通過(guò)離心、過(guò)濾或濕式旋風(fēng)分離器等收集由此得到的緩釋微囊，經(jīng)蒸餾水重復(fù)洗滌若干次以除去粘附在微囊表面的游離的GnRH激動(dòng)劑或其鹽、藥物保留物和乳化劑。然后，減壓干燥洗滌過(guò)的微囊，或在蒸餾水中再分散后冷凍干燥以除去有機(jī)溶劑。
在制備步驟中，為了防止顆粒聚集，可加入防聚集劑。作為防聚集劑，例如使用水溶性多糖比如甘露醇、乳糖、葡萄糖和淀粉(如玉米淀粉)，氨基酸比如甘氨酸，以及蛋白比如纖維蛋白和膠原。其中，優(yōu)選甘露醇。
加入的防聚集劑比如甘露醇通常為整個(gè)微囊的約0-約24重量％。
優(yōu)選本發(fā)明的緩釋微囊包含賦形劑。預(yù)期該賦形劑給予活體時(shí)的毒性很低，易于干燥比如通過(guò)冷凍干燥，給予活體時(shí)迅速溶解，或在使用時(shí)溶解。這樣的賦形劑例如包括糖、纖維素衍生物、氨基酸、蛋白、聚丙烯酸衍生物、有機(jī)鹽和無(wú)機(jī)鹽?？梢砸赃m當(dāng)比例混合兩種或多種這些賦形劑。
此處，糖的實(shí)例包括D-甘露醇、藻酸鈉、果糖、右旋糖酐、糊精、白糖、D-山梨糖醇、乳糖、葡萄糖、麥芽糖、淀粉和海藻糖。
纖維素衍生物的實(shí)例包括羧甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素、乙基纖維素、羥甲基纖維素、羥丙基纖維素、醋酞纖維素、酞酸羥丙基甲基纖維素和乙酸琥珀酸羥甲基纖維素。
氨基酸的實(shí)例包括甘氨酸、丙氨酸、酪氨酸、精氨酸和賴氨酸。
蛋白質(zhì)的實(shí)例包括纖維蛋白、膠原與白蛋白。
聚丙烯酸衍生物例如包括聚丙烯酸鈉和甲基丙烯酸/丙烯酸共聚物(Eudragit由Rohm Pharma，German制造)。
有機(jī)鹽例如包括檸檬酸鈉、酒石酸鈉、碳酸鈉和碳酸鉀。
無(wú)機(jī)鹽例如包括氯化鈉、氯化鉀、磷酸鈉和磷酸鉀。
作為賦形劑，使用其中作為緩釋微囊基質(zhì)的聚合物不溶解的水溶性聚合物，例如聚乙烯吡咯烷酮和聚乙烯醇。
優(yōu)選的賦形劑是糖，尤其優(yōu)選D-甘露醇，其易于冷凍干燥并幾乎沒(méi)有毒性。
賦形劑的用量根據(jù)賦形劑的溶解性、溶解賦形劑所得溶液的張度、粘度、分散性和穩(wěn)定性而決定。賦形劑的用量為，當(dāng)緩釋微囊經(jīng)干燥后，賦形劑在緩釋微囊中的含量例如為約0.5-約99％(w/w)，優(yōu)選約1-約90％(w/w)，更優(yōu)選約2-約60％(w/w)。當(dāng)D-甘露醇用作賦形劑時(shí)，優(yōu)選干燥的緩釋微囊中賦形劑的含量為約2-約40％(w/w)，優(yōu)選約15％(w/w)。
通過(guò)加入這些賦形劑，可獲得如下出色的性質(zhì)1)減少了干燥緩釋微囊過(guò)程中或之后顆粒接觸和碰撞的機(jī)率，并由此保留了冷凍干燥時(shí)顆粒的均一性，2)使得可以在玻璃態(tài)轉(zhuǎn)變點(diǎn)或更高溫度下干燥緩釋微囊，并由此更加完全地除去了水或有機(jī)溶劑，3)提高了緩釋微囊隨時(shí)間的穩(wěn)定性，并由此獲得具有更好分散性、不限于冷凍儲(chǔ)存例如在室溫具有長(zhǎng)期的使用期限的緩釋微囊。
例如通過(guò)混合水中干燥法(in water drying method)所得的微囊與賦形劑可制備包含賦形劑的微囊(B)。該微囊在洗滌后可減壓干燥，或在洗滌后可再分散于蒸餾水中并冷凍干燥。并不特別限定混合方法，例如使用混合器進(jìn)行混合。
此外，在制備用于水中干燥法的W/O/W-型乳劑時(shí)，通過(guò)在外水相中使用賦形劑水溶液也可制備包含賦形劑的微囊(B)。
包含賦形劑的微囊(B)的制備優(yōu)選為洗滌由水中干燥法所得的微囊，在溶解或懸浮有賦形劑的蒸餾水中分散經(jīng)洗滌的微囊，并使分散液進(jìn)行冷凍干燥或減壓干燥?？晒┻x擇地，將經(jīng)洗滌的微囊分散于蒸餾水中，賦形劑可溶液或懸浮于所得分散液中，隨后冷凍干燥或減壓干燥。尤其，通過(guò)在溶解有賦形劑的蒸餾水中分散經(jīng)洗滌的微囊，或?qū)①x形劑溶解于通過(guò)在蒸餾水中分散經(jīng)洗滌的微囊而獲得的分散液中，然后經(jīng)冷凍干燥而獲得均一混合物。
此外，需要時(shí)，通過(guò)加熱前述水中干燥法所獲得的微囊至用作基質(zhì)的聚合物的玻璃態(tài)轉(zhuǎn)化溫度(Tg)或更高且微囊內(nèi)各顆粒不相互粘連的溫度，可更加徹底地除去微囊內(nèi)的水和有機(jī)溶劑，同時(shí)，可改善緩釋。此時(shí)，優(yōu)選清除有機(jī)溶劑至低于約1000ppm，優(yōu)選低于約500ppm，更優(yōu)選低于約100ppm。
玻璃態(tài)轉(zhuǎn)化溫度是指當(dāng)使用差示掃描量熱計(jì)(DSC)以每分鐘10或20℃的升溫率升溫時(shí)所獲得的中間點(diǎn)玻璃態(tài)轉(zhuǎn)化溫度。
加熱的時(shí)間優(yōu)選在任選加入賦形劑之后以及在冷凍干燥或減壓干燥微囊之后，沒(méi)有限制。例如，可在分裝(subdivision)后進(jìn)行加熱。
當(dāng)加熱溫度低于用作基質(zhì)的聚合物的玻璃態(tài)轉(zhuǎn)化溫度時(shí)，有時(shí)水或有機(jī)溶劑的清除不充分。在另一方面，當(dāng)加熱溫度過(guò)高時(shí)，因?yàn)槲⒛胰诤虾妥冃蔚奈ｋU(xiǎn)，增加了GnRH或其鹽的降解和劣化。由此，加熱溫度不能無(wú)條件地限定，但可以基于用作基質(zhì)的聚合物物理性質(zhì)(如分子量、穩(wěn)定性等)、GnRH或其鹽和微囊的平均顆粒直徑和加熱時(shí)間。干燥程度以及微囊的加熱法等進(jìn)行適當(dāng)?shù)南薅ā?br> 加熱溫度優(yōu)選為用作基質(zhì)的聚合物的玻璃態(tài)轉(zhuǎn)化溫度至高于該玻璃態(tài)轉(zhuǎn)化溫度約40℃的溫度，優(yōu)選聚合物的玻璃態(tài)轉(zhuǎn)化溫度至高于該玻璃態(tài)轉(zhuǎn)化溫度約35℃的溫度，更優(yōu)選聚合物的玻璃態(tài)轉(zhuǎn)化溫度至高于該玻璃態(tài)轉(zhuǎn)化溫度約25℃的溫度，特別聚合物的玻璃態(tài)轉(zhuǎn)化溫度至高于該玻璃態(tài)轉(zhuǎn)化溫度約20℃的溫度。
加熱時(shí)間取決于加熱溫度和所處理的微囊量而不同，通常為微囊自身達(dá)到預(yù)定溫度后約6-約120小時(shí)，更優(yōu)選約12-約96小時(shí)。此外，加熱時(shí)間的上限沒(méi)有特別限定，只要?dú)埩舻挠袡C(jī)溶劑量和濕度變?yōu)榭山邮艿闹祷蚋图纯?。但是，在玻璃態(tài)轉(zhuǎn)化溫度或更高的條件下，微囊軟化并由于微囊的物理接觸或微囊層的負(fù)載而變形。由此，優(yōu)選當(dāng)殘留的有機(jī)溶劑和濕度變?yōu)榭山邮艿闹岛透蜁r(shí)迅速結(jié)束加熱。
加熱方法沒(méi)有特別限制，可以使用任何可均勻加熱微囊的方法。加熱方法的優(yōu)選實(shí)例包括進(jìn)行加熱并使用冷凍干燥儀或在減壓下使用減壓恒溫儀干燥。
只要滿足了分散性和通針性，微囊(B)的顆粒直徑范圍就已足夠，例如平均直徑表示為約0.1-約1000μm，優(yōu)選約1-約300μm，更優(yōu)選約5-約150μm。
此外，微囊(B)的脫溶劑性質(zhì)出色，因?yàn)橹苽渲械拿撊軇┧俾屎芨撸?，水中干燥步驟結(jié)束后(如3小時(shí)后)制劑中殘留的二氯甲烷濃度通常為約2,000ppm-約20,000ppm。
此外，微囊(B)具有沉降速率緩慢的出色特性?？赏ㄟ^(guò)以下來(lái)測(cè)定沉降速率，例如，在小瓶中填充50mg微囊(B)粉末，懸浮于5ml分散媒介中，在5ml分散媒介中分散約40μl所得的懸浮液，使用濁度計(jì)測(cè)量NTU。微囊(B)的特征在于混懸后的立即濁度為100％，經(jīng)過(guò)很長(zhǎng)時(shí)間濁度才降至50％。
在微囊(C)中，乳酸/羥基乙酸的組成比優(yōu)選是90/10-100/0，特別優(yōu)選100/0。
當(dāng)乳酸/羥基乙酸的組成比為100/0時(shí)，共聚物或均聚物的重均分子量?jī)?yōu)選為約7,000-約25,000，當(dāng)組成比為90/10時(shí)約7,000-約30,000，當(dāng)組成比為80/20時(shí)約12,000-約30,000。
此時(shí)，例如可以使用上述標(biāo)準(zhǔn)品A測(cè)定重均分子量。
GnRH激動(dòng)劑或其鹽在內(nèi)水相中的濃度通常為約20-70％(w/w)，優(yōu)選約25-65％(w/w)，更優(yōu)選約35-60％(w/w)。
在油相溶液中共聚物或均聚物的濃度通常為約0.5-90％(w/w)，優(yōu)選約2-60％(w/w)。
GnRH激動(dòng)劑或其鹽以零級(jí)釋放的時(shí)間優(yōu)選為2個(gè)月或更長(zhǎng)且4個(gè)月或更短，更優(yōu)選約3個(gè)月。
作為長(zhǎng)期緩釋微囊(A)，具體使用下述參考例2中制備的微囊(MC)#2。
作為短期緩釋微囊(B)，具體使用下述參考例1中制備的微囊(MC)#1。
作為短期緩釋微囊(C)，具體使用下述參考例3中制備的微囊(MC)#3。
為了將微囊配制成注射液，通過(guò)將微囊與分散劑(如，吐溫80、HCO-60、羧甲基纖維素、藻酸鈉等)、防腐劑(如對(duì)羥基苯甲酸甲酯、對(duì)羥基苯甲酸丙酯等)和等滲劑(如氯化鈉、甘露醇、山梨糖醇、葡萄糖等)一起配制成含水懸浮液中，或一起懸浮微囊與植物油比如芝麻油和玉米油以獲得油性懸浮液而獲得實(shí)際使用的緩釋注射液。
作為本發(fā)明的緩釋制劑，可使用通過(guò)將長(zhǎng)期緩釋GnRH激動(dòng)劑或其鹽的微囊配制成緩釋制劑而獲得的制劑尤其是上述的緩釋注射制劑與通過(guò)將短期緩釋GnRH激動(dòng)劑或其鹽的微囊配制成緩釋制劑尤其是上述的緩釋注射制劑而獲得的制劑的組合。此外，通過(guò)混合長(zhǎng)期緩釋GnRH激動(dòng)劑或其鹽的微囊和短期緩釋GnRH激動(dòng)劑或其鹽的微囊可獲得微囊，將該微囊配制成如上緩釋制劑特別是上述的緩釋注射制劑可獲得一種制劑，也可使用該制劑。
包含GnRH激動(dòng)劑(優(yōu)選亮丙瑞林或其鹽，其中更優(yōu)選醋酸亮丙瑞林)或其鹽的所述制劑(優(yōu)選，包含含有亮丙瑞林或其鹽(優(yōu)選醋酸亮丙瑞林)的緩釋微囊的制劑)作為注射劑可直接地、容易地皮下、肌內(nèi)或靜脈內(nèi)等(優(yōu)選皮下和肌內(nèi))給藥。
相似地，本發(fā)明的緩釋制劑作為注射劑可直接地、容易地皮下、肌內(nèi)或靜脈內(nèi)等(優(yōu)選皮下和肌內(nèi))給藥。在本發(fā)明中，當(dāng)給藥通過(guò)將短期緩釋微囊與長(zhǎng)期緩釋微囊的混合物配制成制劑而獲得的制劑或通過(guò)將短期緩釋制劑與長(zhǎng)期緩釋制劑混合而獲得的制劑時(shí)，其作為注射劑可直接地、容易地皮下、肌內(nèi)或靜脈內(nèi)等(優(yōu)選皮下和肌內(nèi))給藥。此外，當(dāng)分開(kāi)給藥短期緩釋制劑和長(zhǎng)期緩釋制劑時(shí)，它們可直接地、容易地皮下、肌內(nèi)或靜脈內(nèi)等(優(yōu)選皮下和肌內(nèi))給藥。通常，選擇相同的給藥途徑，但有時(shí)也可通過(guò)不同的途徑比如皮下和肌內(nèi)途徑給藥短期緩釋制劑和長(zhǎng)期緩釋制劑。
取決于GnRH激動(dòng)劑(優(yōu)選亮丙瑞林或其鹽，其中更優(yōu)選醋酸亮丙瑞林)的含量和劑型、GnRH激動(dòng)劑(優(yōu)選亮丙瑞林或其鹽，其中更優(yōu)選醋酸亮丙瑞林)的作用時(shí)間和所給藥的動(dòng)物[如溫血?jiǎng)游?如人、小鼠、大鼠、兔、羊、豬、牛、馬等)]，制劑的劑量有很大不同，可以是作為GnRH激動(dòng)劑(優(yōu)選亮丙瑞林或其鹽，其中更優(yōu)選醋酸亮丙瑞林)藥物的有效量。例如，溫血哺乳動(dòng)物的日劑量可適當(dāng)選自約0.01mg-100mg/kg體重，優(yōu)選約0.02mg-50mg/kg體重，更優(yōu)選0.05mg-20mg/kg體重。
當(dāng)該制劑作為注射劑給藥時(shí)，通常每天可皮下或肌內(nèi)給予成年人前列腺癌患者(體重為60kg)約0.01-50mg，優(yōu)選約0.1-20mg，更優(yōu)選約0.1-15mg的GnRH激動(dòng)劑(優(yōu)選亮丙瑞林或其鹽，其中更優(yōu)選醋酸亮丙瑞林)。此外，當(dāng)作為包含含有GnRH激動(dòng)劑(優(yōu)選亮丙瑞林或其鹽，其中更優(yōu)選醋酸亮丙瑞林)的緩釋微囊的注射劑給藥時(shí)，劑量取決于緩釋微囊的藥物釋放期而不同。例如，當(dāng)每月給藥約一次時(shí)，通常每次可皮下或肌內(nèi)給予成年人前列腺癌患者(體重為60kg)約0.01-25mg，優(yōu)選約0.1-15mg，更優(yōu)選約0.1-10mg的GnRH激動(dòng)劑(優(yōu)選亮丙瑞林或其鹽，其中更優(yōu)選醋酸亮丙瑞林)。例如，當(dāng)約每3個(gè)月給藥一次時(shí)，通常每次可皮下或肌內(nèi)給予成年人前列腺癌患者(體重為60kg)約0.1-75mg，優(yōu)選約0.1-45mg，更優(yōu)選約1-30mg的GnRH激動(dòng)劑(優(yōu)選亮丙瑞林或其鹽，其中更優(yōu)選醋酸亮丙瑞林)。例如，當(dāng)每約6個(gè)月給藥一次時(shí)，通常每次可皮下或肌內(nèi)給予成年人前列腺癌患者(體重為60kg)約0.2-150mg，優(yōu)選約0.2-90mg，更優(yōu)選約2-60mg的GnRH激動(dòng)劑(優(yōu)選亮丙瑞林或其鹽，其中更優(yōu)選醋酸亮丙瑞林)。
對(duì)其它動(dòng)物給藥時(shí)，可以施用通過(guò)轉(zhuǎn)化為每60kg體重所獲得的量，并可取決于緩釋期適當(dāng)增加或降低前述給藥劑量。
本發(fā)明所涉及的長(zhǎng)期緩釋微囊和短期緩釋微囊組合的制劑，可由上述長(zhǎng)期緩釋微囊的緩釋期換算GnRH激動(dòng)劑的給藥量，并適當(dāng)?shù)姆峙涑啥唐诰忈屛⒛液烷L(zhǎng)期緩釋微囊而給藥。
當(dāng)本文所述的氨基酸、肽和多肽保護(hù)基以縮寫(xiě)表示時(shí)，其基于IUPAC-IUB委員會(huì)對(duì)于生物化學(xué)命名的縮寫(xiě)以及本領(lǐng)域常規(guī)的縮寫(xiě)。此外，當(dāng)氨基酸具有光學(xué)異構(gòu)體時(shí)，除非另有說(shuō)明，為L(zhǎng)-異構(gòu)體。
縮寫(xiě)的實(shí)例如下所示Abu氨基丁酸Aibu2-氨基丁酸Ala丙氨酸Arg精氨酸Gly甘氨酸His組氨酸Ile異亮氨酸Leu亮氨酸Met蛋氨酸Nle正亮氨酸Nval正纈氨酸Phe苯丙氨酸Phg苯基甘氨酸Pro脯氨酸(Pyr)Glu焦谷氨酸
Ser絲氨酸Thr蘇氨酸Trp色氨酸Tyr酪氨酸Val纈氨酸D2NalD-3-(2-萘基)丙氨酸殘基DSer(tBu)O-叔-丁基-D-絲氨酸DHis(ImBzl)Nim-芐基-D-組氨酸PAM苯乙酰胺基甲基Boc叔丁基氧基羰基Fmoc9-芴基甲基氧基羰基Cl-Z2-氯-芐基氧基羰基Br-Z2-溴-芐基氧基羰基Bzl芐基Cl2-Bzl2,6-二氯芐基Tos對(duì)-甲苯磺?；鵋ONbN-羥基-5-降冰片烯-2,3-二羧亞胺HOBt1-羥基苯并三唑HOOBt3-羥基-3，4-二氫-4-氧代-1，2，3-苯并三嗪MeBzl4-甲基芐基Bom芐氧基甲基Bumt-叔丁氧基甲基Trt三苯甲基DNP二硝基苯基DCCN，N’-二環(huán)己基碳二亞胺實(shí)施例下面列舉的試驗(yàn)例、實(shí)施例將更加具體地說(shuō)明本發(fā)明。
參考例1 微囊(B)的制備在茄型燒瓶(コルベン)中稱量119.1g的5-氧代-Pro-His-Trp-Ser-Tyr-Dleu-Leu-Arg-Pro-NH-C2H5(此后簡(jiǎn)稱為肽A)乙酸鹽，加入120g注射用水使其完全溶解。向其中加入溶解于1600g二氯甲烷中的975g乳酸-羥基乙酸共聚物(乳酸·羥基乙酸組成比＝75∶25，Mw＝約10,400，Mn＝約4,100，Mw/Mn＝2.5(數(shù)值是通過(guò)參考例5中的GPC方法測(cè)量的值(使用標(biāo)準(zhǔn)品C組測(cè)量的數(shù)值)))，使用自動(dòng)微混合器于約5800rpm、10分鐘攪拌乳化以得到W/O乳劑。將該W/O乳劑冷至約19℃后，傾至0.1％(w/w)聚乙烯醇(EG-40，由日本合成化學(xué)制造)水溶液200L中，該水溶液預(yù)先被調(diào)節(jié)至約19℃，使用HOMOMIC LINE FLOW(由特殊機(jī)化制造)于約7000rpm、攪拌并乳化得到W/O/W乳劑。室溫于約2500rpm、3小時(shí)的條件下攪拌該W/O/W乳劑，二氯甲烷經(jīng)揮發(fā)或擴(kuò)散進(jìn)入外部水相而固化油相。用目開(kāi)口為75μm的篩子篩過(guò)后，使用離心機(jī)于約2000rpm、條件下持續(xù)沉降微囊并收集微囊。將收集的微囊分散于小量蒸餾水中，以目開(kāi)口為90μm的篩子篩過(guò)后，加入174.5g甘露醇溶解。其經(jīng)冷凍干燥得到微囊粉末(此后，MC#1)。肽A的含量為8.5％。
參考例2微囊(A)的制備在茄型燒瓶中稱量123.3g肽A乙酸鹽，加入129.4g 2wt％乙酸水溶液以使其完全溶解。向其中加入溶解于1890g二氯甲烷中的1080g DL-乳酸聚合物(Mw＝約21,400，用標(biāo)準(zhǔn)品B組測(cè)量的數(shù)值)，粗分散約2分鐘后，經(jīng)自動(dòng)微混合器于約5800rpm、4分鐘攪拌乳化得到W/O乳劑。該W/O乳劑冷卻至約18℃，傾入含有1wt％甘露醇的0.1wt％聚乙烯醇(EG-40，由日本合成化學(xué)制造)水溶液200L內(nèi)，該水溶液預(yù)先被調(diào)節(jié)至約18℃，使用HOMOMIC LINE FLOW(由特殊機(jī)化制造)于約7000rpm、攪拌并乳化以獲得W/O/W乳劑。室溫下于約2500rpm、3小時(shí)的條件下攪拌該W/O/W乳劑，二氯甲烷揮發(fā)或擴(kuò)散進(jìn)入外水相從而固化油相。用目開(kāi)口為75μm的篩子篩過(guò)后，使用離心機(jī)于約2000rpm、條件下持續(xù)沉降微囊并進(jìn)行收集。將收集的微囊分散于小量蒸餾水中，用目開(kāi)口為90μm的篩子篩過(guò)后，加入169.7g甘露醇溶解。其經(jīng)冷凍干燥得到微囊粉末(此后，MC#2)。肽A的含量為7.5％。
參考例3微囊(C)的制備在茄型燒瓶中稱量86.7g的肽A乙酸鹽，加入100g注射用水使其完全溶解。向其中加入溶解于1280g二氯甲烷中的765gDL-乳酸聚合物(Mw＝約14,200，用標(biāo)準(zhǔn)品A組測(cè)量的數(shù)值)，使用自動(dòng)微混合器于約5800rpm、13.5分鐘的條件下攪拌乳化以獲得W/O溶劑。將該W/O乳劑冷卻至約15℃，傾入0.1％(w/w)聚乙烯醇(EG-40，由日本合成化學(xué)制造)水溶液200L中，該水溶液預(yù)先被調(diào)節(jié)至15℃，使用HOMOMIC LINE FLOW(由特殊機(jī)化制造)于約7000rpm、攪拌并乳化得到W/O/W乳劑。室溫于約2500rpm、3小時(shí)的條件下攪拌該W/O/W乳劑，二氯甲烷經(jīng)揮發(fā)或擴(kuò)散進(jìn)入外部水相而固化油相。用目開(kāi)口為75μm的篩子篩過(guò)后，使用離心機(jī)于約2000rpm、的條件下持續(xù)沉降微囊并收集微囊。將收集的微囊分散于小量蒸餾水中，用目開(kāi)口為90μm的篩子篩過(guò)后，加入130g甘露醇溶解。其在50℃、48小時(shí)的二次干燥條件下通過(guò)冷凍干燥得到微囊粉末(此后，MC#3)。肽A的含量為7.8％。
參考例4 微囊(C)的制備在茄型燒瓶中稱量14.5g的肽A乙酸鹽，加入15.9g注射用水使其完全溶解。向其中加入溶解于204g二氯甲烷中的123g DL-乳酸聚合物(Mw＝約14,100，用標(biāo)準(zhǔn)品A組測(cè)量的數(shù)值)，粗乳化1分鐘，使用自動(dòng)微混合器于約10000rpm、3分鐘的條件下攪拌乳化以獲得W/O溶劑。將該W/O乳劑冷卻至約16℃，傾入0.1％(w/w)聚乙烯醇(EG-40，由日本合成化學(xué)制造)水溶液25L中，該水溶液預(yù)先被調(diào)節(jié)至16℃，使用HOMOMIC LINE FLOW(由特殊機(jī)化制造)于約7000rpm攪拌并乳化得到W/O/W乳劑。室溫于約2000rpm、3小時(shí)的條件下攪拌該W/O/W乳劑，二氯甲烷經(jīng)揮發(fā)或擴(kuò)散進(jìn)入外部水相而固化油相。用目開(kāi)口為75μm的篩子篩過(guò)后，使用離心機(jī)于約2000rpm的條件下持續(xù)沉降微囊并收集微囊。將收集的微囊分散于小量蒸餾水中，用目開(kāi)口為90μm的篩子篩過(guò)后，加入17.5g甘露醇溶解。其在50℃的二次干燥溫度條件下以0小時(shí)、20小時(shí)、22小時(shí)、24小時(shí)、26小時(shí)和48小時(shí)的二次干燥時(shí)間冷凍干燥，分別收集各微囊粉末。
參考例5聚合物的重均分子量(Mw)的測(cè)量(GPC法)稱量約0.05g本品，加入四氫呋喃(THF)溶解得到5mL樣品溶液。另外稱量具有已知分子量的各聚苯乙烯標(biāo)準(zhǔn)品(F-10，F(xiàn)-2，A-5000和A-1000)各約0.1g，加入THF溶解得到40mL標(biāo)準(zhǔn)溶液A。此外，稱量具有已知分子量的各聚苯乙烯標(biāo)準(zhǔn)品(F-4，F(xiàn)-1，A-2500和A-500)各約0.1g，加入THF溶解得到40mL標(biāo)準(zhǔn)溶液B。
在下面條件下通過(guò)凝膠滲透色譜法試驗(yàn)100μL各樣品溶液和標(biāo)準(zhǔn)溶液A和B。根據(jù)各聚苯乙烯標(biāo)準(zhǔn)品的分子量及其保留時(shí)間，形成分子量標(biāo)準(zhǔn)曲線。然后，測(cè)量樣品溶液的洗脫成分的峰高(Hi)，通過(guò)其保留時(shí)間和標(biāo)準(zhǔn)曲線得到其分子量(Mi)。根據(jù)下面的式子得到本品的重均分子量(Mw)[計(jì)算式]Mw＝∑(Hi×Mi)/∑Hi[試驗(yàn)條件]檢測(cè)器差示折光計(jì)(具有與HLC-8120GPC系統(tǒng)等同的性能的儀器)柱TSK保護(hù)柱HHR-L(40×6.0mm i.d.)TSK凝膠G4000HHR(300×7.8mm i.d.)TSK凝膠G3000HHR(300×7.8mm i.d.)TSK凝膠G2000HHR(300×7.8mm i.d.)，TSK凝膠G1000HHR(300×7.8mm i.d.)以填料孔徑遞減的順序相繼連接(或具有與這些同等的性能的柱)。
柱溫50℃附近的一定溫度流動(dòng)相THF流速1.0mL/min[系統(tǒng)適應(yīng)性](1)系統(tǒng)的性能當(dāng)在前述條件下該系統(tǒng)針對(duì)100μL標(biāo)準(zhǔn)溶液A進(jìn)行操作時(shí)，F(xiàn)-10的峰和F-2的峰之間的分離度為2.0或更高，兩峰的理論板數(shù)和對(duì)稱系數(shù)分別為8000或更高以及1.5或更低。
(2)試驗(yàn)的重現(xiàn)性當(dāng)以100μL標(biāo)準(zhǔn)溶液A在前述條件下重復(fù)兩次該試驗(yàn)時(shí)，各峰保留時(shí)間的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為3.3％或更低。
標(biāo)準(zhǔn)溶液該溶液在制備后于室溫(約25℃)至少在24小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定。此外，該溶液在制備后于冰箱中(約-18℃)在至少7個(gè)月內(nèi)穩(wěn)定。
樣品溶液該溶液在制備后于室溫(約25℃)至少在24小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定。
面積測(cè)量的范圍48分鐘(但，注入間歇為50分鐘)分子量標(biāo)準(zhǔn)曲線由曲線生成。
除重均分子量(Mw)外，還可使用數(shù)均分子量[Mn＝ΣHi/Σ(Hi/Mi)]測(cè)定。
(1)針對(duì)標(biāo)準(zhǔn)溶液A重復(fù)試驗(yàn)兩次，確證了第一次試驗(yàn)適合該系統(tǒng)性能的規(guī)定。求得各峰的保留時(shí)間并確證其適于試驗(yàn)的重現(xiàn)性規(guī)定(各峰保留時(shí)間之間的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為3.3％或更低)。
(2)注入標(biāo)準(zhǔn)溶液B并獲得各峰的保留時(shí)間。
(3)注入流動(dòng)相，檢驗(yàn)(2)中所注入的標(biāo)準(zhǔn)溶液B的所有峰的攜帶污染，確認(rèn)峰面積值合乎規(guī)定(10％或更低)。
(4)測(cè)量樣品溶液(最大12支)(5)注入流動(dòng)相，檢驗(yàn)(4)中最終所注入的樣品溶液的所有峰的攜帶污染，確認(rèn)峰面積值合乎規(guī)定(10％或更低)。
(6)注入標(biāo)準(zhǔn)溶液A和B，獲得各分子量的保留時(shí)間。
(7)由(1)中最終所注入的標(biāo)準(zhǔn)溶液A、(2)中所注入的標(biāo)準(zhǔn)溶液B以及(6)中所注入的標(biāo)準(zhǔn)溶液A和B的保留時(shí)間生成分子量標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算樣品的重均分子量(Mw)。但是，(1)中最終所注入的標(biāo)準(zhǔn)溶液A與(6)中所注入的標(biāo)準(zhǔn)溶液A的保留時(shí)間的相對(duì)偏差[RD相對(duì)于平均值，任一保留時(shí)間偏離平均值差異(絕對(duì)值)的％]確認(rèn)為3.3％或更低。當(dāng)其不適用時(shí)，系統(tǒng)檢測(cè)之間的所有數(shù)據(jù)均認(rèn)為無(wú)效，并再次從(1)進(jìn)行試驗(yàn)(但是，可以不必檢查體系的性能)。
聚苯乙烯標(biāo)準(zhǔn)品TSK標(biāo)準(zhǔn)聚苯乙烯/由東ソ一社制造聚苯乙烯標(biāo)準(zhǔn)品的Mw使用通過(guò)GPC所測(cè)定的值。
類型 MwF-10 98900F-4 37200F-2 17100F-1 9490A-50005870A-25002500
A-10001051A-500 495四氫呋喃液相色譜用，由和光純藥制造。
實(shí)施例1向參考例1中制備的0.141g MC#1(肽A乙酸鹽的含量為8.5％)加入?yún)⒖祭?中制備的1.920g MC#2(肽A乙酸鹽的含量為7.5％)，混合這些物質(zhì)以制備兩種混合型微囊粉末(此后，組合A)。此時(shí)的組合比為1∶12(以肽A乙酸鹽的重量比計(jì))。
實(shí)施例2向參考例3中制備的0.184g MC#3(肽A乙酸鹽的含量為7.8％)加入?yún)⒖祭?中制備的1.720g MC#2(肽A乙酸鹽的含量為7.5％)，混合這些物質(zhì)以制備兩種混合型微囊粉末(此后，組合B)。此時(shí)的組合比為1∶9(以肽A乙酸鹽的重量比計(jì))。
實(shí)施例3向參考例3中制備的0.154g MC#3(肽A乙酸鹽的含量為7.8％)加入?yún)⒖祭?中制備的1.920g MC#2(肽A乙酸鹽的含量為7.5％)，混合這些物質(zhì)以制備兩種混合型微囊粉末(此后，組合C)。此時(shí)的組合比為1∶12(以肽A乙酸鹽的重量比計(jì))。
實(shí)施例4向參考例1中制備的0.141g MC#1(肽A乙酸鹽的含量為8.5％)加入?yún)⒖祭?中制備的2.560g MC#2(肽A乙酸鹽的含量為7.5％)，混合這些物質(zhì)以制備兩種混合型微囊粉末(此后，組合D)。此時(shí)的組合比為1∶16(以肽A乙酸鹽的重量比計(jì))。
試驗(yàn)例1將實(shí)施例2中制備的兩種混合型微囊粉末組合B120mg(作為肽A乙酸鹽是9mg)懸浮于約0.3mL懸浮媒介中，將該懸浮液注射入大鼠皮下，測(cè)量肽A的血清濃度。在約0.3mL懸浮媒介中懸浮120mg MC#2(作為肽A乙酸鹽是9mg)，用大鼠進(jìn)行同樣試驗(yàn)，與用單獨(dú)一種時(shí)的血中濃度推移進(jìn)行比較。給藥后直至5周的血中濃度變化示于圖1中。當(dāng)比較給藥后一周內(nèi)的血中濃度時(shí)，組合B相比于MC#2有更高值，二者的緩釋速度不同，確認(rèn)了兩種混合型微囊對(duì)緩釋性的效果。
試驗(yàn)例2將實(shí)施例1中制備的兩種混合型微囊粉末組合A129mg(作為肽A乙酸鹽是9.75mg)懸浮于約0.3mL懸浮媒介中，將該懸浮液注射入大鼠皮下，測(cè)量肽A的血清濃度。在約0.3mL懸浮媒介中懸浮120mg MC#2 (作為肽A乙酸鹽是9mg)，用大鼠進(jìn)行同樣試驗(yàn)，與用單獨(dú)一種時(shí)的血中濃度推移進(jìn)行比較。給藥后直至6周的血中濃度變化示于圖2中。當(dāng)比較給藥后3周內(nèi)的血中濃度時(shí)，組合A相比于MC#2有更高值，二者的緩釋速度不同，確認(rèn)了兩種混合型微囊對(duì)緩釋性的效果。
試驗(yàn)例3將實(shí)施例4中制備的兩種混合型微囊粉末組合D169mg (作為肽A乙酸鹽是12.75mg)懸浮于約0.3mL懸浮媒介中，將該懸浮液注射入大鼠皮下，測(cè)量肽A的血清濃度。在約0.3mL懸浮媒介中懸浮120mg MC#2(作為肽A乙酸鹽是9mg)，用大鼠進(jìn)行同樣試驗(yàn)，與用單獨(dú)一種時(shí)的血中濃度推移進(jìn)行比較。給藥后直至6周的血中濃度變化示于圖3中。當(dāng)比較給藥后3周內(nèi)的血中濃度時(shí)，組合D相比于MC#2有更高值，二者的緩釋速度不同，確認(rèn)了兩種混合型微囊對(duì)緩釋性的效果。
工業(yè)實(shí)用性通過(guò)組合緩釋時(shí)間不同的緩釋GnRH激動(dòng)劑或其鹽的微囊，可得到緩釋性能出色的制劑，其提高了給藥早期的藥物釋放量，并長(zhǎng)期釋放一定藥物量。
權(quán)利要求
1.緩釋制劑，其含有長(zhǎng)期緩釋GnRH激動(dòng)劑或其鹽的微囊與短期緩釋GnRH激動(dòng)劑或其鹽的微囊的組合。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的制劑，其中GnRH激動(dòng)劑或其鹽是由下式代表的肽或其鹽5-氧代-Pro-His-Trp-Ser-Tyr-Y-Leu-Arg-Pro-Z[其中Y代表選自DLeu、DAla、DTrp、DSer(tBu)、D2Nal和DHis(ImBzl)的殘基，以及Z代表NH-C2H5或Gly-NH2]。
3.根據(jù)權(quán)利要求1的制劑，其中GnRH激動(dòng)劑或其鹽是由下式代表的肽的乙酸鹽5-氧代-Pro-His-Trp-Ser-Tyr-DLeu-Leu-Arg-Pro-NH-C2H5。
4.根據(jù)權(quán)利要求1的制劑，其中長(zhǎng)期是指5個(gè)月或更長(zhǎng)，短期是指短于5個(gè)月。
5.根據(jù)權(quán)利要求1的制劑，其中長(zhǎng)期是指5個(gè)月或更長(zhǎng)且8個(gè)月或更短，短期是指1周或更長(zhǎng)且短于5個(gè)月。
6.根據(jù)權(quán)利要求1的制劑，其中微囊是包含乳酸聚合物或乳酸-羥基乙酸聚合物作為基質(zhì)的微囊。
7.根據(jù)權(quán)利要求1的制劑，其中短期緩釋GnRH激動(dòng)劑或其鹽的微囊和長(zhǎng)期緩釋GnRH激動(dòng)劑或其鹽的微囊的組合比為1∶約5至1∶約20，以各微囊中包含的GnRH激動(dòng)劑或其鹽的重量比表示。
8.根據(jù)權(quán)利要求1的制劑，其中長(zhǎng)期緩釋GnRH激動(dòng)劑或其鹽的微囊是包含(i)GnRH激動(dòng)劑或其鹽以及(ii)重均分子量約為18,000-約30,000的乳酸聚合物的微囊；以及短期緩釋GnRH激動(dòng)劑或其鹽的微囊是(1)包含(i)GnRH激動(dòng)劑或其鹽以及(ii)重均分子量約為8,000-約12,000的乳酸-羥基乙酸聚合物(75/25(mol％))的微囊；或(2)包含(i)GnRH激動(dòng)劑或其鹽以及(ii)重均分子量約為13,000-約18,000的乳酸聚合物的微囊。
9.根據(jù)權(quán)利要求1的制劑，其中長(zhǎng)期緩釋GnRH激動(dòng)劑或其鹽的微囊是包含(i)GnRH激動(dòng)劑或其鹽以及(ii)重均分子量約為15000-約50000、且其中重均分子量為5000或更低的聚合物的量約為5重量％或更低的乳酸聚合物的微囊；以及短期緩釋GnRH激動(dòng)劑或其鹽的微囊是(1)包含(i)GnRH激動(dòng)劑或其鹽以及(ii)重均分子量(Mw)約為8,000-約11,500、重均分子量(Mw)與數(shù)均分子量(Mn)的比值大于1.9、且乳酸與羥基乙酸的組合摩爾比為99.9/0.1-60/40的乳酸-羥基乙酸聚合物的微囊，且其中不包含藥物保持物質(zhì)，或(2)零級(jí)釋放GnRH激動(dòng)劑或其鹽2個(gè)月以上的微囊，其通過(guò)微囊化W/O乳劑而制備，該乳劑由包含約20-70重量％的GnRH激動(dòng)劑或其鹽的內(nèi)水相溶液和包含作為釋放控制物質(zhì)的共聚物或均聚物的油相溶液制得，聚合物中乳酸/羥基乙酸的組成比為80/20-100/0，重均分子量為約7,000-約30,000。
10.根據(jù)權(quán)利要求1至9任一項(xiàng)的緩釋制劑，其長(zhǎng)期緩釋GnRH激動(dòng)劑或其鹽。
11.根據(jù)權(quán)利要求10的緩釋制劑，其中長(zhǎng)期是指5個(gè)月或更長(zhǎng)。
12.預(yù)防或治療前列腺癌、前列腺肥大、子宮內(nèi)膜異位、子宮肌瘤、子宮纖維瘤、早熟癥、痛經(jīng)或者乳腺癌的藥物或避孕藥，其含有根據(jù)權(quán)利要求1定義的緩釋制劑。
13.根據(jù)權(quán)利要求1定義的緩釋制劑的制備方法，其包括混合長(zhǎng)期緩釋GnRH激動(dòng)劑或其鹽的微囊和短期緩釋GnRH激動(dòng)劑或其鹽的微囊。
14.預(yù)防或治療前列腺癌、前列腺肥大、子宮內(nèi)膜異位、子宮肌瘤、子宮纖維瘤、早熟癥、痛經(jīng)或者乳腺癌或避孕的方法，其包括給予哺乳動(dòng)物有效量的根據(jù)權(quán)利要求1定義的緩釋制劑。
15.根據(jù)權(quán)利要求1定義的緩釋制劑用于制備預(yù)防或治療前列腺癌、前列腺肥大、子宮內(nèi)膜異位、子宮肌瘤、子宮纖維瘤、早熟癥、痛經(jīng)或者乳腺癌的藥物或避孕藥的用途。
全文摘要
一種緩釋制劑，含有長(zhǎng)期緩釋GnRH激動(dòng)劑或其鹽的微囊和短期緩釋GnRH激動(dòng)劑或其鹽的微囊的組合。
文檔編號(hào)A61P35/00GK1938008SQ20058001038
公開(kāi)日2007年3月28日 申請(qǐng)日期2005年2月9日 優(yōu)先權(quán)日2004年2月10日
發(fā)明者齋藤和宏, 布藤智康, 星野哲夫 申請(qǐng)人:武田藥品工業(yè)株式會(huì)社