專利名稱：用于診斷和治療的血管緊張素肽類似物和螯合劑的綴合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及適合用于治療心衰、心律失常及其它纖維化突出的疾病以及適合用于診斷心衰和其它纖維化突出的疾病的新型藥物。更明確地講，本發(fā)明涉及用于治療和診斷與血管緊張素II受體、AT1和血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(ACE)上調(diào)有關(guān)的疾病的藥物。本發(fā)明的藥物通過在體內(nèi)被ACE裂解轉(zhuǎn)化為其活性形式(即AT1靶形式)。
通過應(yīng)用成像劑靶向AT1受體可檢測的疾病為充血性心衰(CHF)、動脈硬化和其它纖維化過程突出的疾病和癥狀。
所述藥物包含帶有ACE裂解位點的肽血管緊張素I(Ang I)類似物，所述藥物還包含可攜帶診斷上可成像部分和任選接頭的基團(tuán)。被ACE裂解后，形成包含血管緊張素II(Ang II)類似物、可攜帶診斷上可成像部分和一個任選接頭的基團(tuán)的活性藥物。所述成像劑對血管緊張素受體特別是對血管緊張素II 1型(AT1)受體具有親和力。
背景技術(shù)：
血管緊張素II(Ang II)-八肽化合物(Asp-Arg-Val-Tyr-Ile-His-Pro-Phe)-為多效的血管活性肽，其可與兩種不同的受體結(jié)合Ang II 1型(AT1)和2型(AT2)受體。腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)(RAAS)的活化會導(dǎo)致血管肥大、血管收縮、鹽和水潴留以及高血壓。這些作用主要由AT1受體介導(dǎo)。其它Ang II-介導(dǎo)的作用，包括細(xì)胞死亡、血管舒張及尿鈉排泄是由AT2受體活化介導(dǎo)的。對于Ang II信號傳導(dǎo)機(jī)理仍未完全了解。AT1受體活化引發(fā)多種細(xì)胞內(nèi)系統(tǒng)，包括酪氨酸激酶-誘導(dǎo)的蛋白磷酸化作用、花生四烯酸代謝物的產(chǎn)生、反應(yīng)活性氧化劑中間體活性變化以及細(xì)胞內(nèi)Ca+濃度波動。AT2受體活化導(dǎo)致緩激肽的興奮、氮氧化物產(chǎn)生以及前列腺素代謝，而這些在很大部分上是與AT1受體作用是相反的。(見BerryC.Touyz R，DominiczakAF，Webb RC，Johns DG.Am J Heart Circ Physio.2001 Dec；281(6)H2337-65.血管緊張素受體信號傳輸、血管病理生理學(xué)以及與神經(jīng)酰胺的相互作用(Angiotensin receptorssignalling，vascularpathophysiology，and interactions with ceramide))。
Ang II是腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)(RAAS)的活性成分。它在調(diào)節(jié)血壓、血漿體積、交感神經(jīng)活性以及口渴反應(yīng)中具有重要的生理作用。Ang II還在心臟肥大、心肌梗塞、高血壓、慢性阻塞性肺病、肝臟纖維化及動脈粥樣硬化中具有病理生理學(xué)作用。它通過經(jīng)典的RAAS產(chǎn)生全身作用并且通過組織RAAS產(chǎn)生局部作用。在經(jīng)典的RAAS中，循環(huán)腎源性腎素將肝源性血管緊張肽原裂解形成十肽(decapeptide)Ang I，其可以通過血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(ACE)在肺中轉(zhuǎn)化為活性的Ang II。Ang I還可以被組織內(nèi)肽酶加工成七肽Ang-(1-7)。
所述RAAS系統(tǒng)在此如

圖1圖示，其是以Foote等人在Ann.Pharmacother.271495-1503(1993)中所著文獻(xiàn)中的圖1為基礎(chǔ)的。
RAAS除了在正常心血管內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定中具有重要作用外，RAAS的過度活化還牽扯到在多種心血管疾病如高血壓、充血性心衰、冠狀動脈缺血以及腎功能不全的發(fā)展。心肌梗塞(MI)后，RAAS被激活。尤其是AT1受體似乎在MI后改造中扮演主要角色，因為在MI和左心室機(jī)能障礙后AT1受體的表達(dá)增加。因此，那些干涉RAAS的藥物，如ACE抑制劑和AT1受體拮抗劑，均已顯示出在此類心血管疾病中具有強大的治療作用。
ACE和AT1受體表達(dá)與膠原形成的正常和病理性表達(dá)之間的解剖學(xué)一致性是顯而易見的。高密度ACE及Ang II受體結(jié)合為活性膠原更新(turnover)的標(biāo)記。
在瓣葉、外膜和各種纖維組織生成位點中發(fā)現(xiàn)了含有α-SMA的成纖維細(xì)胞樣的細(xì)胞，該細(xì)胞表達(dá)編碼ACE、AT1受體和纖維狀膠原(fibrillar collagens)的基因。因此，肌成纖維細(xì)胞(Myofibroblasts)、MyoFbs可被認(rèn)為是調(diào)節(jié)它們自身膠原更新的“代謝實體”。
ACE結(jié)合密度主要與myoFbs的存在有關(guān)。ACE-陽性細(xì)胞的消失或其絕對數(shù)量的減少將會降低纖維化位點的ACE結(jié)合密度。這是老年結(jié)節(jié)病肉芽瘤(old sarcoid granulomas)的癥狀。在MI之后許多月，梗塞(infracted)大鼠心臟中的ACE及Ang II受體結(jié)合密度仍然較高，ACE活性也是如此。各自與梗塞位點的myoFbs的持久性相符。(Weber，K.T.Extracellular Matrix Remodelling in HeartFailureA Role for De Novo Angiotensin II Generation.Circulation，Volume 96(11)，December 2，1997，4065-4082.)對于心臟、腎、肺及肝臟等，纖維化是所述器官衰竭的共同途徑。因此人們對了解涉及器官纖維化的病理生理學(xué)機(jī)理具有相當(dāng)大的興趣，尤其是在使保護(hù)性藥理學(xué)戰(zhàn)略有可能實現(xiàn)的方面。組織修復(fù)涉及炎癥細(xì)胞，包括單核細(xì)胞/巨噬細(xì)胞系成員，整體啟動修復(fù)過程；以及肌成纖維細(xì)胞(myofibroblasts)、表型轉(zhuǎn)換間質(zhì)成纖維細(xì)胞，負(fù)責(zé)膠原更新以及纖維性組織形成。每個在修復(fù)微環(huán)境中出現(xiàn)的這些細(xì)胞事件都與導(dǎo)致Ang II的重新生成的分子事件有關(guān)。在自分泌/旁分泌方式中，這些肽通過血管緊張素(AT1)受體配體結(jié)合調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)化生長因子-β1，TGF-β1的表達(dá)。是該細(xì)胞因子使得成纖維細(xì)胞表型轉(zhuǎn)變?yōu)榧〕衫w維細(xì)胞(myoFb)并且調(diào)節(jié)肌成纖維細(xì)胞對膠原的更新。ACE抑制作用或AT1受體拮抗作用各自阻止了許多此類導(dǎo)致纖維化的分子和細(xì)胞反應(yīng)，因此已被認(rèn)為是保護(hù)性干預(yù)。(見Weber KT.Fibrosis，a common to organ failureangiotensin II and tissue repair.Semin Nephrol.1997 Sep；17(5)467-91 and references therein)。
Ang II可以通過激活間質(zhì)細(xì)胞調(diào)節(jié)組織纖維化。例如，Ang II在體外通過激活A(yù)T1刺激心成纖維細(xì)胞的增殖。在體外心成纖維細(xì)胞上已顯示了AT1受體的存在。Ang II的大部分前纖維(profibrotic)作用表現(xiàn)為通過該受體介導(dǎo)；然而，在肥大的人心臟上已檢測到AT2在心成纖維細(xì)胞上表達(dá)增加，并且這兩種亞型表達(dá)之間的平衡對于判定Ang II的應(yīng)答可能是關(guān)鍵的。(見Am.J.Respir.Crit.Care Med.，Volume June 2000，1999-2004Angiotensin II is Mitogenic for HumanLung Fibroblasts via Activation of the Type 1 Receptor RICHARD P.MARSHALL，ROBIN J.MCANULTY，and GEOFFREY J.LAURENTand references therein)。
所述的Ang II受體可根據(jù)特定拮抗劑的抑制作用進(jìn)行區(qū)分。AT1受體可被聯(lián)苯咪唑類(biphenylimidazoles)選擇性地拮抗，如氯沙坦(Losartan)，而四氫咪唑并吡啶類(tetrahydroimidazopyridines)特異性地抑制AT2受體。AT2受體還可以被CGP-42112A(這是一個Ang II的六肽類似物，其也可抑制AT2受體，取決于濃度)選擇性地激活。兩種其它的血管緊張素受體已被描述AT3和AT4亞型。
在嚙齒類動物中，AT1受體具有兩種功能相異的亞型，AT1A和AT1B’具有＞95％的氨基酸序列同源性。
第二種主要的血管緊張素同種型(isoform)是AT2受體。它與AT1A或AT1B受體具有較低的氨基酸序列同源性(～34％)。盡管AT2受體準(zhǔn)確的信號傳導(dǎo)途徑以及功能角色仍不清楚，但這些受體在生理學(xué)條件下可能通過抑制細(xì)胞生長和通過減少細(xì)胞凋亡和血管舒張來拮抗AT1-介導(dǎo)的作用。AT2受體在心血管疾病中的準(zhǔn)確角色仍有待明確。
除了AT1和AT2外，已知還有其它的Ang II受體并且通常稱為AT非典型(見Kang等，Am.Heart J.1271388-1401(1994))。
所述Ang II作用的抑制已用于醫(yī)療，例如在高血壓和心衰的控制上。這已在多種途徑上達(dá)成通過使用阻斷血管緊張素原向AngI(Ang II的前體)轉(zhuǎn)變的腎素抑制劑；通過使用阻斷Ang I向Ang II轉(zhuǎn)化(并且還阻斷緩激肽和前列腺素的生物轉(zhuǎn)化)的血管緊張素酶(ACE-1)抑制劑；通過使用抗-Ang II-抗體；以及通過使用Ang II-受體拮抗劑。
β阻滯劑在抗心律失常治療中最常用?？剐穆墒СＫ幬锞哂杏邢薜娜娉晒Σ⑶意}通道阻滯劑有時可引起心律失常。除胺碘酮有可能外，沒有單獨的藥物顯示出優(yōu)越性。短期的抗心律失常益處，取決于特定的藥物，已發(fā)現(xiàn)被其在死亡率上的中性或負(fù)性的作用所抵消。(Sanguinetti MC和Bennett，PB抗心律失常藥物靶向選擇及篩選(Anti-arrhythmic drug target choices and screening)。Circulation2003，93(6)491-9257-263)。顯然需要更好的抗心律失常藥物。
Lancet公開的文章(Llindholm，LH等。氯沙坦在糖尿病患者突發(fā)性心臟死亡的作用LIFE研究所得數(shù)據(jù)(Effect of Losartan onsudden cardiac death in people with diabetesdata from the LIFE study)，The Lancet，2003，362619-620)揭示了AT1受體拮抗劑除了對患有CHF的患者是通常有利的以外，還減少突發(fā)性心臟死亡的發(fā)生率。有一些研究表明AT1受體拮抗劑對于由心肌梗塞或在LAD結(jié)扎后的再灌注中所引起的心律失常具有抗心律失常作用(Harada K等。血管緊張素II 1a型受體與再灌注心律失常發(fā)生有關(guān)(Angiotensin II Type 1aReceptor is involved in the occurrence of reperfusion arrhythmias)，Circulation，1998，97315-317，Ozer MK等，卡托普利和氯沙坦在小鼠心肌缺血性-再灌注所致的心律失常和壞疽中的作用(Captopril andLosartan on myocardial ischemia-reperfusion induced arrhythmias andnecrosis in rats)，Pharmacological research，2002，45(4)，257-263，LynchJJ等，EXP3174，氯沙坦的全拮抗人代謝物，但既非氯沙坦也非血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑卡托普利，避免了在近期心肌梗塞犬模型上的致死性缺血性心律失常(The all antagonist human metabolite ofLosartan，but not Losartan nor the Angiotensin-converting enzymeinhibitor captopril，prevents the development of lethal ischemicarrhythmias in a canine model of recent myocardial infarction)，JACC，1999，34 876-884)。
通過改變Ang II的氨基酸組成，可將其轉(zhuǎn)化為有效的拮抗劑或部分拮抗劑。例如，用異亮氨酸取代8位的苯丙氨酸并用肌氨酸取代1位的天冬氨酸，將肽轉(zhuǎn)變?yōu)橛行У霓卓箘?br> 可通過3位和5位的氨基酸環(huán)化或成橋而增強對AT1受體的特異性。同樣地，在1位導(dǎo)入肌氨酸并在8位導(dǎo)入甘氨酸可使所述肽變?yōu)锳T1選擇性拮抗劑(See RC Speth.sarcosine 11，glycine 8angiotensin II is an AT1angiotensin II receptor subtype selectiveanatagonist).Regulator peptides 115(2003)203-209)。
如上所述，AT1受體的天然配體為八肽化合物Ang II，Asp-Arg-Val-Tyr-Ile-His-Pro-Phe，其在納摩爾范圍與AT1受體結(jié)合。
當(dāng)通過結(jié)合部分對受體的天然配體進(jìn)行修飾時，特別是相對較大和相對龐大的部分，所述肽載體的親和力經(jīng)常會受妨礙(compromised)。
相關(guān)領(lǐng)域描述WO 98/18496(Nycomed Imaging AS)公開了包含載體-接頭-指示器(vector-linker-reporter)構(gòu)造的造影劑，其中所述載體包含血管緊張素或肽血管緊張素衍生物。
美國專利4411881(New England Nuclear Corporation)描述了放射性-標(biāo)記的化合物的穩(wěn)定作用。放射性-標(biāo)記的化合物的實例包括如血管緊張素II(5-L-異亮氨酸)[酪氨酰-125I]-(單碘化的)。
發(fā)明概述本發(fā)明提供了有效治療心衰、心律失常及其它纖維化突出的疾病，如COPD、肝纖維化和動脈硬化的藥物，該藥物包含肽部分，AngI或其衍生物，其可被ACE轉(zhuǎn)化為治療疾病的靶向成像劑和靶向藥物，其顯示出對AT1受體比天然八肽化合物Ang II具有更高的親和力。所述藥物應(yīng)該顯示出拮抗活性。
本發(fā)明還提供了在診斷心衰和其它纖維化突出的疾病，如在COPD、肝纖維化及動脈硬化中有效的藥物，所述藥物包含結(jié)合可成像部分的靶向部分。所述可成像部分可以是任何可成像部分，當(dāng)給予患者該部分時，會在所述患者身上至少在部分所述藥物分布的地方生成一份影像，如通過放射成像、SPECT、PET、MRI、X-射線、光學(xué)成像(OI)、超聲(US)、電子阻抗或磁力成像模式。本發(fā)明藥物的所述肽部分為Ang I或其衍生物，其在體內(nèi)可被ACE轉(zhuǎn)化為Ang II或其衍生物。所述藥物被ACE裂解后為治療疾病的靶向成像劑和/或靶向藥物。結(jié)合了可成像部分的靶向部分顯示出比Ang II對AT1受體更高的親和性，盡管有微弱的激動活性，其還是可以被接受并且優(yōu)選用作拮抗劑。
當(dāng)所述新型藥物帶有用于診斷成像的合適可成像部分時，則可以被相繼或同時作為治療劑使用。
本發(fā)明的實施方案還包括提供治療高血壓、纖維化、COPD及相關(guān)疾病的方法，對于心衰和纖維化的成像方法以及對于此類疾病和病癥和相關(guān)的心血管疾病和病癥治療進(jìn)程進(jìn)行監(jiān)控的方法。本發(fā)明還提供了制備診斷劑的新型的藥用組合物和前體。還提供了診斷試劑盒，尤其是制備放射性藥用診斷劑的試劑盒。
本發(fā)明的藥物包含肽V，任選接頭L和Z部分，如式(I)所示Z-L-V (I)其中V表示具有結(jié)合序列-X1-X2-Val-Tyr-Ile-His-Pro-X8-X9-X10的肽，L表示鍵或接頭，Z表示任選可帶有成像部分M的基團(tuán)，X1表示氨基酸，X2表示Arg、N-烷基化Arg或Arg模擬物，X8表示含有芳香或脂肪族側(cè)鏈的Gly或Phe或氨基酸，X9和X10相互獨立，表示Pro、Arg、His、Ala、Phe、Glu、Leu、Val、Ile、Met、Trp、Asp或Lys，且其中X8、X9和X10一起構(gòu)成ACE裂解位點，其中在3位和5位的Val和Ile殘基各自可任選被能形成橋的氨基酸置換，
Z任選通過接頭L與氨基酸X1成鍵，并且M存在時表示可成像部分，其可以在診斷成像程序中被直接或間接檢測。
在膠原形成的區(qū)域，無論是正常還是病理性膠原形成，ACE和AT1受體表達(dá)都增加。本發(fā)明的藥物包含包括ACE裂解位點的Ang I的肽部分或其衍生物。該Ang I在體內(nèi)被ACE裂解轉(zhuǎn)化為Ang II。
我們驚訝地發(fā)現(xiàn)，由ACE裂解Ang I得到的且在肽的特定位置被取代的該Ang II不僅保留了其結(jié)合能力，還意外地增強了其與AngII受體，特別是AT1受體的親和力。
本發(fā)明的藥物通過ACE在其中AT1受體密度提高的位點轉(zhuǎn)化為其其中肽部分為Ang II類似物的活性形式。在纖維組織形成位點增加的ACE和AT1受體密度的共區(qū)域化使本發(fā)明的藥物具有這樣的優(yōu)點在其中AT1受體密度高的位點形成活性靶向形式。這防止了身體其它部位的不必要的全身反應(yīng)，因為活性Ang II類似物變成結(jié)合在形成位點的AT1受體并不再循環(huán)。
本發(fā)明的藥物在成像中顯示出較好的信號噪音水平，即心臟對肝臟比率(heart to liver ratio)。
發(fā)明詳述在本專利權(quán)利要求書中描述了本發(fā)明。在下面的詳述及實施例中列出了本發(fā)明的具體特征。
在式(I)的靶向部分中，上述的V表示肽序列-X1-X2-Val-Tyr-Ile-His-Pro-X8-X9-X10。
除另有說明外，在式(I)的肽V中的氨基酸為天然Ang I中的L-氨基酸。
用于氨基酸的三個字母縮寫具有下列意義Arg-精氨酸Asp-天冬氨酸Cys-半胱氨酸
Hcy-高半胱氨酸Gly-甘氨酸Sar-肌氨酸Val-纈氨酸Tyr-酪氨酸Ile-異亮氨酸Glu-谷氨酸Lys-賴氨酸His-組氨酸Ala-丙氨酸Leu-亮氨酸Ile-異亮氨酸Met-蛋氨酸Trp-色氨酸Pro-脯氨酸Phe-苯丙氨酸Abu-2-氨基-丁酸Nva-2-氨基-戊酸Nle-2-氨基-己酸Phg-2-氨基-2-苯乙酸Hph-2-氨基-4-苯基丁酸Bip-2-氨基-3-聯(lián)苯基丙酸Nal-2-氨基-3-萘基丙酸Cha-2-氨基-3-環(huán)己基丙酸V的氨基酸優(yōu)選為獨立選擇，使得X1表示-NY1-(CH2)m-CO-，其中m為1-10的整數(shù)，并且Y1為H或含有取代基的烷基或芳基，最優(yōu)選GlyX2表示Arg或N-甲基-Arg或者Arg模擬物Phe[4-胍基]和Gly-4-哌啶基[N-脒基]，X8表示具有芳香或脂肪族側(cè)鏈的氨基酸；優(yōu)選Phe、Phg、Hph、Bip、Ala、Gly、Tyr、His、Trp或Nal；最優(yōu)選Phe，X9和X10相互獨立，表示Pro、Arg、His、Ala、Phe、Glu、Leu、Val、Ile、Met、Trp、Asp或Lys。
仍進(jìn)一步優(yōu)選其中X1表示Gly，X2表示Arg，且X8表示Phe，X9-表示Phe、Leu或Ala且X10-表示Phe、Ala或His的藥物。
如果3位和5位的氨基酸被選擇形成一個橋單元，則該橋優(yōu)選含有-CH2-CH2-、-S-CH2-、-S-CH2-S-、內(nèi)酰胺或-S-S-單元。更優(yōu)選共價鍵為由2個半胱氨酸或高半胱氨酸配對氧化所形成的二硫鍵。
在專利WO 98/18496和WO 01/77145(23-27頁)中描述了合適的接頭L的實例，其內(nèi)容通過引用一并結(jié)合到本文中。L可以優(yōu)選表示聚亞烷基二醇單元如聚乙二醇(PEG)和聚丙二醇(PPG)、糖類、葡聚糖、1-10氨基酸或1-5氨基酸。所述接頭還可以作為生物修飾劑，如在WO 03/006491中所述。
所述接頭L還可以從烷基胺或芳胺中衍生，優(yōu)選為式NH-(CH2)m-的化合物，該化合物任選與-CO-(CH2)m-CO-結(jié)合，其中m表示1-10的正整數(shù)。
所述接頭還可以包含一或多個如下文的式IV中所定義的PEG單元，其中n為1-10整數(shù)。
最優(yōu)選為由式(X)和式(VI)定義的接頭 式(X) 式(VI)Z部分包含分子量超過50D(道爾頓Dalton)的非肽部分，更優(yōu)選在100-1000D之間并且再更優(yōu)選在300-700D之間。只要被ACE裂解后所得的式(I)靶向部分顯示出對AT1受體比天然配體Ang II具有更高的親和力，則Z部分可以為任意藥學(xué)可接受的化學(xué)實體。更明確地講，Z表示具有合適官能團(tuán)的有機(jī)基團(tuán)，以便Z可以與接頭L或直接與肽V反應(yīng)形成穩(wěn)定的共價鍵。
Z可表示直鏈或支鏈的烴基，所述烴基任選包含一或多個雙鍵或三鍵并且任選被鹵素、氧、硫或磷原子取代或者任選包括如氧、氮或硫的雜原子。更明確地，烴基可表示取代或未取代的分子量至少為50D的烷基、烯基、炔基。
Z還可表示一或多個包含單環(huán)、雙環(huán)或三環(huán)系統(tǒng)的連接的碳環(huán)殘基，所述環(huán)系統(tǒng)可以是飽和的、部分不飽和或芳香的，可以是被取代或未取代的并且其分子量至少為50D。此類環(huán)系統(tǒng)的實例為芳基、芳烷基、環(huán)己基、金剛烷基和萘基。
Z可進(jìn)一步表示一個或多個連接的雜環(huán)化合物，如5、6、7、8、9或10-元環(huán)系統(tǒng)，其可以是單環(huán)、雙環(huán)或三環(huán)并且可以包含一個或多個N、O、S和P作為雜原子。此類環(huán)系統(tǒng)還可以與烴基和碳環(huán)基團(tuán)連接并且如上所定義或與碳環(huán)基團(tuán)稠合。此類基團(tuán)的實例如吖啶基、苯并呋喃基、吲哚基、吡啶基、哌啶基、morphoridinyl和噻吩基。
Z還可以表示聚亞烷基二醇，如聚乙二醇(PEG)和聚丙二醇(PPG)，所有分子量超過50D的糖類如單或多糖。聚亞烷基二醇類還可另外用作生物修飾劑。
特定的Z表示螯合劑，如在美國專利4,647,447(Schering AG)和WO 86/02841(Nycomed Saluta，Inc.)中所描述的非環(huán)狀或環(huán)狀聚氨基羧酸酯(如DTPA、DTPA-BMA、DOTA和DO3A)，在此通過引用結(jié)合到本文中。螯合劑還包括胺硫醇，如二胺二硫醇、胺化肟(amineoximes)和肼以及在專利WO 01/77145中所描述的相關(guān)試劑(見其中的表1)，在此通過引用結(jié)合到本文中。下文中的式(VIII)的螯合劑cPN216為特別優(yōu)選的。
對于治療有效的藥物，Z可以為如上所述的任意的實體。
對于在診斷中尤其是在體內(nèi)診斷中有效的藥物，所述的Z部分必須能帶有可成像部分或由M表示的部分。帶有指的是在Z和M部分之間的任何形式的連接，如化學(xué)健，如共價鍵或電價鍵或離子健或者通過吸附或任何其它類型的連接。
在一個優(yōu)選實施方案中，一個Z部分與X1直接共價鍵合形成N-烷基甘氨酸單元。
下文中的式(VII)和式(VIII)的螯合劑也為特別優(yōu)選的。
M可為可成像部分。M的性質(zhì)取決于診斷中所用的成像模式。M必須能夠在體內(nèi)診斷成像程序中可直接或間接被檢測，如發(fā)射或可引起發(fā)射可檢測輻射的部分(如通過放射性衰變、熒光激發(fā)、自旋共振激發(fā)等)、影響局部電磁場的部分(如順磁性的、超順磁性的、亞鐵磁性的(ferrimagnetic)或鐵磁性的(ferromagnetic)種類)、吸收或散射輻射能量的部分(如發(fā)色團(tuán)、顆粒(包括含有小囊泡的氣體或液體)、重元素及其化合物等)以及產(chǎn)生可檢測物質(zhì)的部分(如氣體微氣泡發(fā)生器(microbubble generators))。
大范圍的適合的可成像部分可從WO 98/18496中了解，所述內(nèi)容通過引用結(jié)合到本文中。
成像模式以及成像部分M在下文有更詳細(xì)的描述在第一個實施方案中，式(I)的藥物包含帶有一個或多個在Radio和SPECT成像模式中有效的可成像部分M的Z部分。優(yōu)選的M為具有低或無α-和β-發(fā)射的γ發(fā)射體，并且具有超過一個小時的半衰期。優(yōu)選的M基團(tuán)為放射性核素67Ga、111In、123I、125I、131I、81mKr、99Mo、99mTc、201Tl和133Xe。最優(yōu)選為99mTc。
當(dāng)M表示金屬放射性核素時，則Z表示適于與M形成穩(wěn)定螯合物的螯合劑。此類螯合劑為本領(lǐng)域所熟知并且在WO 01/77145的表1中描述了此類螯合劑的典型的實例。
特別優(yōu)選的為式(VII)螯合劑
其中每個R1、R2、R3和R4獨立為H或C1-10烷基、C3-10烷基芳基、C2-10烷氧基烷基、C1-10羥基烷基、C1-10烷基胺、C1-10氟烷基，或2個或多個R基，與連接它們的原子一起形成飽和的或不飽和的碳環(huán)或雜環(huán)。
更特別優(yōu)選的為式(VII)的螯合劑，其中R1、R2和R3為氫或者甲基并且R4為烷基胺基團(tuán)，最特別為式(VIII)化合物，在此以cPN216表示。
對Z而言最優(yōu)選的是當(dāng)螯合劑為cPN216時，成像部分M為99mTc。
非金屬放射性核素，如123I、125I和131I可以和Z部分通過本領(lǐng)域所熟知的取代或加成反應(yīng)共價連接。
在第二個實施方案中，式(I)的藥物包含在PET成像模式中有效的含有一個或多個可成像部分M的Z部分。M則表示具有正電子-發(fā)射特性的放射發(fā)射體。優(yōu)選的M基團(tuán)為放射性核素11C、18F、68Ga、13N、15O和82Rb。18F為特別優(yōu)選。
當(dāng)M表示金屬放射性核素時，則Z表示適于與M形成穩(wěn)定螯合物的螯合劑。此類螯合劑為本領(lǐng)域現(xiàn)階段所熟知的，在WO01/77145的表1中以及前文在Radio和SPECT成像部分中描述了此類螯合劑的典型實例。
在另一個優(yōu)選的實施方案中，Z為DOPT螯合劑并且M為68Ga，其可以采用微波化學(xué)容易地引入到螯合物中。
非金屬放射性核素如18F，可以通過本領(lǐng)域現(xiàn)階段已知的取代或加成反應(yīng)與Z部分共價連接，這些反應(yīng)在WO03/080544中也有描述，在此一并通過引用結(jié)合到本文中。
在第三實施方案中，式(I)的藥物包含帶有一個或多個在MR成像模式中有效的可成像部分M的Z部分。此處的M表示順磁性金屬，如美國專利4 647 447中所描述，Gd3+、Dy3+、Fe3+和Mn2+為特別優(yōu)選的并且Z表示螯合劑，特別是如在美國專利4 647 447和WO86/02841中所描述的非環(huán)狀或環(huán)狀聚氨基羧酸酯(如DTPA、DTPA-BMA、DOTA和DO3A)螯合劑。M還可以表示被Z吸附的金屬氧化物，如超順磁性的、亞鐵磁性的或鐵磁性的種類，因此Z用作金屬氧化物的涂料。美國專利6 223 777中描述了用作MR成像劑的金屬氧化物，在此通過引用結(jié)合到本文中。
在第四實施方案中，所述式(I)的藥物包含帶有一或多個在X-射線成像模式中有效的可成像M部分的Z部分。M在此表示一種重金屬，如W、Au和Bi，優(yōu)選為可以被Z吸附的氧化物形式。特別是碘化芳基衍生物，其為眾所周知的X-射線造影劑，如IopamironTM和OmnipaqueTM。這些試劑可以通過它們的酰胺或胺官能團(tuán)與肽V連接。
氣體填充的微泡形式的超聲成像劑可在受體成像中應(yīng)用，如當(dāng)它們用于結(jié)合WO98/18500中所述的本領(lǐng)域現(xiàn)有技術(shù)中肽時。
遵循本領(lǐng)域現(xiàn)有技術(shù)中如Schering AG在WO 96/17628中描述的操作，可使對生物靶具有親和力的用于光學(xué)成像的成像劑得以使用，在此通過引用結(jié)合到本文中。
式(I)的藥物可以通過連接一或多個生物修飾劑基團(tuán)進(jìn)行進(jìn)一步的修飾，如聚亞烷基二醇單元，如聚乙二醇(PEG)和聚丙二醇(PPG)。在WO 03/006491中描述了生物修飾劑基團(tuán)的實例，其內(nèi)容通過引用結(jié)合到本文中。所述的生物修飾劑基團(tuán)可以與式(I)中的V和L基團(tuán)中的任意位置相連，只要它對所述ACE裂解或裂解的化合物與靶受體的連接能力無明顯的消極作用。
所述的生物修飾劑優(yōu)選以單分散PEG構(gòu)件為基礎(chǔ)，包含1-10個所述構(gòu)件單元，所述生物修飾劑具有改變所述藥劑的藥代動力學(xué)和血漿清除率的功能。在本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案中，式IV化合物，表示一個由單分散PEG-樣結(jié)構(gòu)聚合組成的生物修飾劑單元，17-氨基-5-氧代-6-氮雜-3，9，12，15-四氧雜十七烷酸。
其中n等于1-10的整數(shù)，并且其中的C-端單元形成酰胺鍵。
式(I)藥物的實例由下列表示式(II)和式(III)化合物Z-CO-NH-(CH2)m-X1-X2-Val-Tyr-Ile-His-Pro-X8-X9-X10(II)Z-CO-(CH2)mCO-NH-(CH2)m-X1-X2-Val-Tyr-Ile-His-Pro-X8-X9-X10(III)其中m為1-5之間的整數(shù)，并且Z、X1、X2、X8、X9和X10如前文所定義。
式Xa和VIa定義的化合物
其中Z和V如前文所定義。
式(IX)化合物 其中Y2為烷基、芳基或包含短PEG的部分，Y2優(yōu)選為-CH2-CH2-CH2-，X8、X9和X10如上定義。
如上所注，出于在體內(nèi)診斷中使用的目的，帶有99mTc或18F的化合物的螯合物為特別優(yōu)選。
式(I)的藥物優(yōu)選作為包含式(I)藥物的藥用制劑以適合給予哺乳動物(如人類)的形式給藥。所述給藥是通過適于注射或輸注的制劑進(jìn)行的，如水性溶液。所述制劑可含有一種或多種藥學(xué)可接受添加劑和/或賦形劑，如緩沖劑；增溶劑如環(huán)糊精；或表面活性劑如普盧蘭尼克(Pluronic)、吐溫(Tween)或磷脂。另外還可加入穩(wěn)定劑或抗氧化劑如抗壞血酸、龍膽酸或?qū)Π被郊姿嵋约皟龈伤玫奶畛鋭┤缏然c或甘露醇。
式(I)的藥物可有效治療和診斷心衰、心律失常及其它纖維化突出的疾病，尤其是COPD、肝纖維化和動脈粥樣硬化。這些藥物還可有效用于治療的監(jiān)控。
本發(fā)明的另外方面為治療和體內(nèi)診斷心衰、心律失常及其它纖維化突出的疾病，尤其是COPD、肝纖維化和動脈粥樣硬化的方法。
治療患者心衰及其它纖維化突出的疾病，尤其是COPD、肝纖維化和動脈粥樣硬化的方法包括給予所述患者式(I)的藥物。
體內(nèi)診斷患者心衰及其它纖維化突出的疾病，尤其是COPD、肝纖維化和動脈粥樣硬化的方法包括給予所述患者式(I)的藥物并隨之對所述患者全身或局部生成影像。
監(jiān)控患者心衰及其它纖維化突出的疾病，尤其是COPD、肝纖維化和動脈粥樣硬化治療進(jìn)展的方法包括給予所述患者式(I)的藥物并隨之對所述患者全身或局部生成影像。
在再進(jìn)一步方面中提供了一種制備式(I)的放射性藥用組合物的試劑盒，該試劑盒包含一種肽-螯合物綴合物和一種還原劑。所述試劑盒的優(yōu)選的還原劑為亞錫鹽。所述試劑盒還可以包含一種或多種穩(wěn)定劑、抗氧化劑和用于凍干的填充劑和增溶劑。
制備藥物及其前體的通用程序所使用的縮寫具有下列意義Fmoc9-芴甲氧基羰基Boc叔-丁氧基羰基tBu叔-丁基Trt三苯甲基Pmc2，2，5，7，8-五甲基苯并二氫吡喃(chroman)-6-磺?；鵗FA三氟乙酸HBTUO-苯并三唑-1-基-N，N，N’，N’-四甲基脲六氟磷酸鹽DMF二甲基甲酰胺NMPN-甲基吡咯烷酮TIS三異丙基甲硅烷NHSN-羥基琥珀酰亞胺基NMMN-甲基嗎啉RP-HPLC反相高壓液相色譜法Wang resin對-苯甲氧基苯甲醇樹脂V的合成
本發(fā)明中所述的肽V可通過采用所有已知的化學(xué)合成方法合成，但特別有效的是應(yīng)用自動肽合成儀的Merrifield固相法(J.Am.Chem.Soc.，852149(1964))。通常，所需序列由固相肽合成裝配。本發(fā)明實例中采用的合成策略的標(biāo)準(zhǔn)程序如E.Atherton&R.C.Sheppard，“固相肽合成實用的方法(Solid phase peptide synthesisapractical approach)”，1989，IRL Press，Oxford中描述。
例如，使用帶有酸-不穩(wěn)定接頭基團(tuán)的樹脂，該樹脂中所需的氨基保護(hù)的C-端氨基酸殘基已被酯化。所述的氨基保護(hù)基團(tuán)隨后被除去并且在該序列中的第二氨基酸采用合適的縮合試劑進(jìn)行偶聯(lián)。使用功能性側(cè)鏈上帶有半-永久氨基保護(hù)基團(tuán)和帶有永久保護(hù)基團(tuán)的氨基酸。然后氨基-脫保護(hù)及偶聯(lián)循環(huán)以交替步驟方式重復(fù)進(jìn)行直至完成目的序列的裝配。
可選擇地，所述的肽V可以通過本領(lǐng)域內(nèi)已知的液相肽合成方法合成，以分步方式從羧基端和/或通過應(yīng)用片段縮合或連接方法，采用全面或最小保護(hù)策略進(jìn)行合成。也可以聯(lián)用液相-固相片段縮合方法。
通常，存在的反應(yīng)活性側(cè)鏈基團(tuán)(例如氨基、羥基、胍基和羧基基團(tuán))將會如上所述在整個合成中被保護(hù)。已知有許多氨基酸保護(hù)基團(tuán)可供選擇(見Grene，T.W.&Wuts，P.G.M(1991)在有機(jī)合成中的保護(hù)基團(tuán)(Protective groups in organic synthesis)，John Wiley&Sons，NewYork)?？梢圆捎玫陌被Ｗo(hù)基團(tuán)包括9-芴甲氧基羰基(Fmoc)和叔-丁氧基羰基(Boc)?？梢圆捎玫膫?cè)鏈保護(hù)基團(tuán)包括叔-丁基(tBu)、三苯甲基(Trt)、Boc和2，2，5，7，8-五甲基苯并二氫吡喃-6-磺酰基(Pmc)。應(yīng)該了解的是大范圍的其它此類基團(tuán)在本領(lǐng)域中是已知的。
最后，通常通過用合適的酸性試劑，如三氟醋酸(TFA)處理可同時將所述永久側(cè)鏈保護(hù)基團(tuán)除去并且將所述肽從樹脂上切下。
L與V的綴合可使用所有已知的化學(xué)合成方法使L與V綴合。特別有效的是親核取代反應(yīng)，其中在肽N-端的離去基團(tuán)被L上的親核基團(tuán)置換。此類離去基團(tuán)可以是在羰基α位上連接的溴，該親核試劑可以是氮。
Z與V或與L綴合采用如L與V綴合的相同方法，Z可以直接與V綴合。在Z與V通過L連接的情況下，任意化學(xué)合成方法都可以用于Z與L的綴合中。特別有效的是形成酰氨鍵。
實施例實施例1 用于99mTc標(biāo)記的Ang I類似物[SEQ ID NO 2]cPn216-Gly-Arg-Val-Tyr-Ile-His-Pro-Phe-His-Leu-OH Ang I肽類似物是從0.1mmol Fmoc-Leu-SASRIN樹脂開始，在應(yīng)用生物系統(tǒng)(Applied Biosystems)433A肽合成儀上合成的。在止于精氨酸的偶聯(lián)步驟中采用過量的1mmol預(yù)活化氨基酸(采用HBTU；O-苯并三唑-1-基-N，N，N’，N’-四甲基脲六氟磷酸鹽)。N-端采用0.5mmol溴乙酸酐的DMF溶液進(jìn)行溴乙?；?0分鐘。然后將溴乙酰化的樹脂用0.1mmol cPn216和0.2N-甲基嗎啉溶于二甲基甲酰胺的溶液處理60分鐘。
用含有2.5％三異丙基甲硅烷和2.5％水的5mL三氟乙酸(TFA)處理60分鐘，將肽從樹脂上切下并且同時去除側(cè)鏈保護(hù)基。真空除去TFA，在殘留物中加入乙醚并用乙醚洗滌沉淀的產(chǎn)物，風(fēng)干。
用制備RP-HPLC純化(20-35％B 40分鐘內(nèi)，其中A＝H2O/0.1％TFA和B＝CH3CN/0.1％TFA，流速為10mL/min，在Vydac C18 250×21.20mm柱子上)所述產(chǎn)物得到3mg純螯合肽綴合物。所得產(chǎn)物用分析HPLC分析(條件梯度20-35％B 20分鐘內(nèi)，其中A＝H2O/0.1％TFA和B＝CH3CN/0.1％TFA；流速1mL/min；柱子VydacC18 25×4.6mm；檢測UV 214nm；產(chǎn)物保留時間14.9min)。
用電噴霧質(zhì)譜進(jìn)行進(jìn)一步的產(chǎn)物鑒定(MH+計算值，1564.9；MH+實測值，1564.9)。
實施例1a ACE裂解ACE母液制備將0.34mg ACE(Sigma A-6778)溶于用KOH調(diào)至pH7.8的1mL 200mM HEPES。
將0.1mg Ang I肽類似物溶于100μL所述ACE母液中，所得溶液在室溫下孵育。將樣品(10μL)從溶液中分離出(withdrawn)，用H2O/0.1％TFA(400μL)稀釋，并用LC-MS分析。
Ang I肽類似物裂解速率
實施例2[SEQ ID NO 3]N-cPn216-Gly-Arg-Val-Tyr-Ile-His-Pro-Ile-His-Leu-OH結(jié)構(gòu)
合成用Fmoc化學(xué)作用，從0.25mmol Fmoc-Leu-SASRIN樹脂開始，在應(yīng)用生物系統(tǒng)433A肽合成儀上裝配肽基樹脂H-Arg(Pmc)-Val-Tyr(tBu)-Ile-His(Trt)-Pro-Ile-His(Trt)-Leu-R。在偶聯(lián)步驟中采用過量的1mmol預(yù)活化的氨基酸(用HBTU)。然后將樹脂轉(zhuǎn)移到氮氣起泡器(mtrogen bubbler apparatus)。
將溴乙酸(2mmol，278mg)和DCC(1mmol，206mg)溶于DCM(5mL)中。所得混合物攪拌15分鐘，濾去沉淀的DCCU，所得濾液真空蒸發(fā)至干，得到溴乙酸酐白色固體。將所述酸酐溶于DMF并加入到上面得到樹脂中。30分鐘后通過過濾除去所述酸酐溶液，用DMF洗滌樹脂。然后將溴乙酰化的樹脂(0.05mmol)用cPn216(NC-100676，游離胺)(0.1mmol，34mg)的DMF溶液處理2小時。最后用DMF和DCM洗滌樹脂并在氮氣流下干燥。用含有2.5％TIS和2.5％水的10mL三氟乙酸(TFA)處理90分鐘，將肽從樹脂上切下并且同時去除側(cè)鏈保護(hù)基。真空除去TFA，在殘留物中加入乙醚，用乙醚洗滌沉淀物，風(fēng)干得到70mg粗品AH-111232。
純化和鑒定用制備HPLC純化(梯度5-50％B 40分鐘內(nèi)，其中A＝H2O/0.1％TFA和B＝ACN/0.1％TFA；流速10mL/min；柱子Phenomenex Luna5μC18(2)250×21.20mm；檢測UV 214nm；產(chǎn)物保留時間27.2min)70mg粗品，得到7.4mg半純品AH-111232。用HCOOH代替TFA，進(jìn)行二次純化步驟(梯度0-30％B，其它條件與上述相同)得到5.4mg純AH-111232。
用分析HPLC分析純產(chǎn)物(梯度0-30％B10分鐘內(nèi)，其中A＝H2O/0.1％HCOOH和B＝ACN/0.1％HCOOH，流速0.3mL/min；柱子Phenomenex Luna 3μC18(2)50×2mm；檢測UV 214nm，產(chǎn)物保留時間7.03min)。用電噴霧質(zhì)譜進(jìn)行進(jìn)一步的產(chǎn)物鑒定(MH+計算值，1531.0；MH+實測值，1530.8)。
實施例3 Ang I類似物[SEQ ID NO 4]H-Arg-Val-Tyr-Ile-His-Pro-Bip-His-Leu-OH結(jié)構(gòu)
合成用Fmoc化學(xué)作用，從0.25mmol Fmoc-Leu-SASRIN樹脂開始，在應(yīng)用生物系統(tǒng)433A肽合成儀上裝配肽基樹脂H-Arg(Pmc)-Val-Tyr(tBu)-Ile-His(Trt)-Pro-Bip-His(Trt)-Leu-R。在偶聯(lián)步驟中采用過量的1mmol預(yù)活化的氨基酸(用HBTU)。然后將樹脂轉(zhuǎn)移到氮氣起泡器(nitrogen bubbler apparatus)。
用含有2.5％TIS和2.5％水的5mL三氟乙酸(TFA)處理60分鐘，將肽從樹脂上切下并且同時去除側(cè)鏈保護(hù)基。真空除去TFA，在殘留物中加入乙醚，用乙醚洗滌沉淀物，風(fēng)干得到粗品AH-111415。
鑒定用分析HPLC對粗產(chǎn)物進(jìn)行分析(梯度10-60％B 20分鐘內(nèi)，其中A＝H2O/0.1％TFA和B＝ACN/0.1％TFA；流速1mL/min；柱子Phenomenex Luna 3μC18(2)250×2mm；檢測UV 214nm；產(chǎn)物保留時間14.43min)。用質(zhì)譜進(jìn)行進(jìn)一步的產(chǎn)物鑒定((MH2)2+計算值，629.3；(MH2)2+實測值，629.4)。
實施例4[SEQ ID NO 5]N-cPn216-Gly-Arg-Val-Tyr-Ile-His-Pro-Bip-His-Leu-OH結(jié)構(gòu)
合成將上面得到的樹脂H-Arg(Pmc)-Val-Tyr(tBu)-Ile-His(Trt)-Pro-Bip-His(Trt)-Leu-R(0.25mmol)用溴乙酸酐(如上述制備)的DMF溶液處理30分鐘。然后將溴乙酰化的樹脂(0.05mmol)用cPn216(NC-100676，游離胺)(0.25mmol，86mg)的THF溶液處理60分鐘。最后用THF洗滌樹脂并在氮氣流下干燥。
用含有2.5％TIS和2.5％水的10mL三氟乙酸(TFA)處理90分鐘，將肽從樹脂上切下并且同時去除側(cè)鏈保護(hù)基。真空除去TFA，在殘留物中加入乙醚，用乙醚洗滌沉淀物，風(fēng)干得到90mg粗品AH-111453。
純化和鑒定用制備HPLC純化(梯度5-50％B 40分鐘內(nèi)，其中A＝H2O/0.1％TFA和B＝ACN/0.1％TFA；流速10mL/min；柱子Phenomenex Luna5μC18(2)250×21.20mm；檢測UV 214nm；產(chǎn)物保留時間32min)90mg粗品得到34mg半純品AH-111453。用HCOOH代替TFA，進(jìn)行二次純化步驟(梯度0-30％B，其它條件與上述相同)得到18mg純AH-111453。
純產(chǎn)物用分析HPLC分析(梯度0-30％B10分鐘內(nèi)，其中A＝H2O/0.1％HCOOH和B＝ACN/0.1％HCOOH；流速0.3mL/min；柱子Phenomenex Luna 3μC18(2)50×2mm；檢測UV 214nm；產(chǎn)物保留時間7.40min)。用電噴霧質(zhì)譜進(jìn)行進(jìn)一步的產(chǎn)物鑒定(MH+計算值，1641.0；MH+實測值，1640.7)。
實施例5[SEQ ID NO 6]N-cPn216-Gly-Arg-Val-Tyr-Ile-His-Pro-Hph-His-Leu-OH結(jié)構(gòu) 合成用Fmoc化學(xué)作用，從0.1mmol Tenta Gel Sac Leu-Fmoc樹脂開始，在應(yīng)用生物系統(tǒng)433A肽合成儀上裝配肽基樹脂H-Arg(Pmc)-Val-Tyr(tBu)-Ile-His(Trt)-Pro-Hph-His(Trt)-Leu-R。在偶聯(lián)步驟中采用過量的1mmol預(yù)活化的氨基酸(用HBTU)。然后將樹脂轉(zhuǎn)移到氮氣起泡器(nitrogen bubbler apparatus)。
將溴乙酸(1mmol，139mg)和DCC(0.5mmol，103mg)溶于DCM(5mL)中。所得混合物攪拌15分鐘，濾去沉淀的DCCU，所得濾液真空蒸發(fā)至干得到溴乙酸酐白色固體。將所得酸酐溶于DMF并加入到上面得到的樹脂中。
30分鐘后，通過過濾除去所述酸酐溶液，用DMF洗滌所得樹脂。然后將溴乙?；臉渲?0.05mmol)用cPn216(NC-100676)(0.25mmol，86mg)的DMF溶液處理2小時。最后用DMF和DCM洗滌樹脂。
用含有2.5％TIS和2.5％水的10mL三氟乙酸(TFA)處理90分鐘，將肽從樹脂上切下并且同時去除側(cè)鏈保護(hù)基。真空除去TFA，在殘留物中加入乙醚，用乙醚洗滌沉淀物，風(fēng)干得到24mg粗品AH-111454。
純化和鑒定用制備HPLC純化(梯度5-50％B 40分鐘內(nèi)，其中A＝H2O/0.1％TFA和B＝ACN/0.1％TFA；流速10mL/min；柱子Phenomenex Luna5μC18(2)250×21.20mm；檢測UV 214nm；產(chǎn)物保留時間15min)24mg粗品得到4.7mg半純品AH-111454。對2.6mg半純品進(jìn)行二次純化步驟(條件與上述相同)，得到0.5mg純AH-111454。
純產(chǎn)物用分析HPLC分析(梯度10-60％B 20分鐘內(nèi)，其中A＝H2O/0.1％TFA和B＝ACN/0.1％TFA；流速1mL/min；柱子Phenomenex Luna 3μC18(2)250×2mm；檢測UV 214nm；產(chǎn)物保留時間12.57min)。用質(zhì)譜進(jìn)行進(jìn)一步的產(chǎn)物鑒定((MH2)2+計算值，790.0；(MH2)2+實測值，790.0)。
實施例6[SEQ ID NO 7]N-cPn216-Gly-Arg-Val-Tyr-Ile-His-Pro-Phg-His-Leu-OH結(jié)構(gòu) 合成用Fmoc化學(xué)作用，從0.1mmol Tenta Gel Sac Leu-Fmoc樹脂開始，在應(yīng)用生物系統(tǒng)433A肽合成儀上裝配肽基樹脂H-Arg(Pmc)-Val-Tyr(tBu)-Ile-His(Trt)-Pro-Phg-His(Trt)-Leu-R。在偶聯(lián)步驟中采用過量的1mmol預(yù)活化的氨基酸(用HBTU)。然后將樹脂轉(zhuǎn)移到氮氣起泡器(nitrogen bubbler apparatus)。
將溴乙酸(1mmol，139mg)和DCC(0.5mmol，103mg)溶于DCM(5mL)中。所得混合物攪拌15分鐘，濾去沉淀的DCCU，所得濾液真空蒸發(fā)至干得到溴乙酸酐白色固體。將所得酸酐溶于DMF并加入到上面得到的樹脂中。
30分鐘后，通過過濾除去所述酸酐溶液，用DMF洗滌所得樹脂。然后將溴乙酰化的樹脂(0.05mmol)用cPn216(NC-100676)(0.25mmol，86mg)的THF(4ml)溶液處理60分鐘。最后用DMF和DCM洗滌樹脂。
用含有2.5％TIS和2.5％水的10mL三氟乙酸(TFA)處理90分鐘，將肽從樹脂上切下并且同時去除側(cè)鏈保護(hù)基。真空除去TFA，在殘留物中加入乙醚，用乙醚洗滌沉淀物，風(fēng)干得到55mg粗品AH-111519。
純化和鑒定用制備HPLC純化(梯度15-35％B 40分鐘內(nèi)，其中A＝H2O/0.1％TFA和B＝ACN/0.1％TFA；流速10mL/min；柱子Phenomenex Luna 5μC18(2)250×21.20mm；檢測UV 214nm；產(chǎn)物保留時間26.7min)30mg粗品得到7.4mg純AH-111519。
純產(chǎn)物用分析HPLC分析(梯度15-35％B 20分鐘內(nèi)，其中A＝H2O/0.1％TFA和B＝ACN/0.1％TFA；流速1mL/min；柱子Phenomenex Luna 3μC18(2)250×2mm；檢測UV 214nm；產(chǎn)物保留時間15.1min)。用質(zhì)譜進(jìn)行進(jìn)一步的產(chǎn)物鑒定((MH2)2+計算值，776.0；(MH2)2+實測值，775.9)。
序列表<110>Amersham Health AS<120>Pharmaceutical compounds<130>PN0411<150>NO 20040953<151>2004-03-04<160>7<170>PatentIn version 3.1<210>1<211>10<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>合成肽<220>
<221>Misc_feature<222>(1)..(1)<223>任何氨基酸<220>
<221>Misc_feature<222>(2)..(2)<223>Arg、N-烷基化Arg或其模擬物<220>
<221>Misc_feature<222>(8)..(8)<223>Gly、Phe或含芳香或脂肪族側(cè)鏈的氨基酸
<220>
<221>Misc_feature<222>(9)..(9)<223>Pro，Arg，His，Ala，Phe，Glu，Leu，Val，Ile，Met，Trp，Asp或Lys<220>
<221>Misc_feature<222>(10)..(10)<223>Pro，Arg，His，Ala，Phe，Glu，Leu，Val，Ile，Met，Trp，Asp或Lys<400>1Xaa Xaa Val Tyr Ile His Pro Xaa Xaa Xaa1 5 10<210>2<211>10<212>PRT<213>血管緊張素I序列<400>2Gly Arg Val Tyr Ile His Pro Phe His Leu1 5 10<210>3<211>10<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>合成肽<400>3Gly Arg Val Tyr Ile His Pro Ile His Leu1 5 10<210>4<211>9<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>合成肽<220>
<221>MISC_FEATURE<222>(7)..(7)<223>7位是Bip 2-氨基-3-聯(lián)苯丙酸的氨基酸<400>4Arg Val Tyr Ile His Pro Xaa His Leu1 5<210>5<211>10<212>PRT<213>人工序列
<220>
<223>合成肽<220>
<221>MISC_FEATURE<222>(8)..(8)<223>8位是Bip 2-氨基-3-聯(lián)苯丙酸的氨基酸<400>5Gly Arg Val Tyr Ile His Pro Xaa His Leu1 5 10<210>6<211>10<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>合成肽<220>
<221>MISC_FEATURE<222>(8)..(8)<223>8位是Hph 2-氨基-4-苯基丁酸的氨基酸<400>6Gly Arg Val Tyr Ile His Pro Xaa His Leu1 5 10
<210>7<211>10<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>合成肽<220>
<221>MISC_FEATURE<222>(8)..(8)<223>8位是Phg 2-氨基-2-苯乙酸的氨基酸<400>7Gly Arg Val Tyr Ile His Pro Xaa His Leu1 5 10
權(quán)利要求
1.一種藥物，其特征為式(I)Z-L-V (I)其中V表示具有結(jié)合序列-X1-X2-Val-Tyr-Ile-His-Pro-X8-X9-X10的肽，L表示鍵或接頭，Z表示任選可帶有成像部分M的基團(tuán)，n為0或1，X1表示氨基酸，X2表示Arg、N-烷基化Arg或Arg模擬物，X8表示Gly或Phe或含有芳香或脂肪族側(cè)鏈的氨基酸，X9和X10相互獨立，表示Pro、Arg、His、Ala、Phe、Glu、Leu、Val、Ile、Met、Trp、Asp或Lys，且其中X8、X9和X10一起構(gòu)成ACE裂解位點，其中在3位和5位的Val和Ile殘基各自可任選被能形成橋的氨基酸置換，Z任選通過接頭L與氨基酸X1成鍵，并且M存在時表示可成像部分，其可以在診斷成像程序中被直接或間接檢測。
2.權(quán)利要求8的藥物，其中X1、X2、X8、X9、X10的氨基酸獨立選自X1，表示Gly；X2，表示Arg或N-甲基-Arg；X8，表示Phe；X9，表示Pro、Arg、His、Ala、Phe、Glu、Leu、Val、Ile、Met、Trp、Asp或Lys和X10，表示Pro、Arg、His、Ala、Phe、Glu、Leu、Val、Ile、Met、Trp、Asp或Lys。
3.前述權(quán)利要求的藥物，還包含一個或多個與式(I)的V和L基團(tuán)的任何位置相連的生物修飾劑基團(tuán)。
4.前述權(quán)利要求的藥物，其中Z表示螯合劑。
5.權(quán)利要求4的藥物，其中Z表示式(VII)的螯合劑 其中每個R1、R2、R3和R4獨立為H或C1-10烷基、C3-10烷基芳基、C2-10烷氧基烷基、C1-10羥基烷基、C1-10烷基胺、C1-10氟烷基，或2個或多個R基，與連接它們的原子一起形成飽和或不飽和的碳環(huán)或雜環(huán)。
6.前述權(quán)利要求任一項的藥物，其中M代表用于診斷尤其是體內(nèi)診斷的可成像部分，包括發(fā)射或引起發(fā)射可檢測輻射的部分、影響局部電磁場的部分、吸收或散射輻射能的部分、重金屬及其化合物和產(chǎn)生可檢測物質(zhì)的部分。
7.權(quán)利要求6的藥物，其中M代表用于Radio或SPECT成像的γ發(fā)射部分，包含67Ga、111In、123I、125I、131I、81mKr、99Mo、99mTc、201Tl和133Xe。
8.權(quán)利要求6的藥物，其中M代表用于PET成像的具有正電子發(fā)射性質(zhì)的輻射發(fā)射器，包含11C、18F、68Ga、13N、15O和82Rb。
9.一種藥物制劑，其包含權(quán)利要求1的式(I)的藥物和一種或多種藥學(xué)可接受添加劑和/或賦形劑。
10.一種制備式(I)的放射性藥用組合物的試劑盒，所述試劑盒包含肽螯合綴合物和還原劑。
全文摘要
一種具通式Z－(L)
文檔編號A61K51/02GK1925876SQ200580006655
公開日2007年3月7日 申請日期2005年3月3日 優(yōu)先權(quán)日2004年3月4日
發(fā)明者D·洛夫豪格 申請人:通用電氣醫(yī)療集團(tuán)股份有限公司